ES2913982T3 - Nuevo compuesto S-triazina 2,4,6-trisustituido, método de preparación y uso del mismo - Google Patents

Nuevo compuesto S-triazina 2,4,6-trisustituido, método de preparación y uso del mismo Download PDF

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Abstract

Compuesto representado por la fórmula general I: **(Ver fórmula)** o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los que: R1 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C12, alcoxilo C1-C6, alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, hidroximetilo o aminometilo; R2 es -NR4R5, en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6; o R4, R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6, en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo, alquilo C1-C6 o haloalquilo C1-C6; R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C12, alcoxilo C1-C6, alquilamino C1-C6, di- alquilamino C1-C6, hidroximetilo, aminometilo o -CORa; Ra es OH o NR7R8, en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7, R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6; R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6; o R9, R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y X es NH o O, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.

Description

DESCRIPCIÓN
Nuevo compuesto S-triazina 2,4,6-trisustituido, método de preparación y uso del mismo
Campo técnico
La presente exposición se refiere a un género de compuestos de 1,3,5-triazina 2,4,6-trisustituida (también denominada triazina simétrica, o sym-triazina, o s-triazina) o sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, a métodos de preparación y a usos de los mismos. Los profármacos y métodos de preparación no son parte de la invención reivindicada.
Antecedentes de la técnica
Además de las formas bien conocidas de muerte celular, tales como la apoptosis, la necrosis, la autofagia, en los últimos años se ha revelado una nueva forma de muerte celular: la metuosis. El sello distintivo de dicha forma de muerte es un desplazamiento del citoplasma normal por grandes vacuolas llenas de líquido generadas por vesículas macropinocíticas o macropinosomas dentro de la célula. En consecuencia, la célula pierde su capacidad metabólica y la integridad de la membrana sin el encogimiento celular y fragmentación nuclear asociadas a la apoptosis, lo que también es significativamente diferente de la necrosis y la autofagia (Maltese et al., Methuosis: nonapoptotic cell death associated with vacuolization of macropinosome and endosome compartments. Am. J. Pathol. 2014; 184 (6):1630-42). Debido a que la metuosis sigue mecanismos diferentes a los de la apoptosis celular, un fármaco que cause la muerte celular por metuosis podría superar la resistencia de las células tumorales a los fármacos antiapoptóticos o a los fármacos que actúan mediante otros mecanismos, y por lo tanto, abrir un nuevo camino para el desarrollo de terapias contra el cáncer (Robinson et al., Synthesis and evaluation of indole-based chalcones as inducers of methuosis, a novel type of nonapoptotic cell death. J. Med. Chem. 2012; 55 (5):1940-56; Kitambi et al. Vulnerability of glioblastoma cells to catastrophic vacuolization and death induced by a small molecule. Cell. 2014; 157(2):313-28; Trabbic et al. Synthesis and biological evaluation of indolyl-pyridinyl- propenones having either methuosis or microtubule disruption activity. J. Med. Chem. 2015; 58 (5):2489-512).
La vimentina es una proteína de filamento intermediaria importante que se expresa en células mesenquimales, incluidas las células del tejido conectivo, músculo, endotelio vascular y sangre. La evolución y expresión dinámica altamente conservadoras durante los diferentes estadios del desarrollo sugieren que la vimentina es fisiológicamente importante. Junto con los microtúbulos y microfilamentos de actina, los filamentos intermediarios forman un citoesqueleto. Además de la función de mejora de la resistencia mecánica de las células, de manera que puede sostener la forma celular, la integridad citoesquelética y la distribución espacial ordenada de las estructuras subcelulares, la vimentina también puede regular el funcionamiento de la integrina, de manera que afecta a la adhesión y migración celular; colabora con la dineína, tal como en los microtúbulos, microfilamentos que afectan al transporte membranal de vesículas, y actuar como un andamiaje para receptores y proteínas quinasa, de manera que afecta a la transducción de señales, etc. (Ivaska et al., Novel functions of vimentin in cell adhesion, migration, and signaling. Exp. Cell Res. 2007; 313 (10):2050-62).
La vimentina está estrechamente relacionada con el metabolismo de los lípidos, al controlar el transporte del colesterol derivado de lipoproteína de baja densidad (LDL) desde lisosomas hasta localizaciones en las que se esterifica el mismo (Sarria et al., A functional role for vimentin intermediate filaments in the metabolism of lipoprotein-derived cholesterol in human SW-13 cells. J. Biol. Chem. 1992 sept. 25; 267 (27):19455-63). En vista del elevado nivel de expresión de la vimentina en las células del endotelio vascular y el músculo liso, el uso de la vimentina como diana podría ser una estrategia valiosa para el desarrollo de nuevos fármacos para el tratamiento o la prevención de enfermedades cardiovasculares, tales como la ateroesclerosis. La expresión de la vimentina es un marcador de la transición epitelial-mesenquimal (TEM). La TEM no solo es un mecanismo esencial en procesos fisiológicos normales, tales como el desarrollo embrionario y la reparación de tejidos, sino también una ruta indispensable en procesos patológicos, tales como la fibrosis de órganos, y la formación y progresión tumoral (González et al., Signaling mechanisms of the epithelial-mesenchymal transition. Sci. Signal. 2014; 7 (344): re8). Por lo tanto, mediante la utilización de vimentina como diana para intervenir en el proceso TEm, resulta posible desarrollar un nuevo fármaco para estimular la regeneración de tejidos, inhibir la degeneración de órganos, tratar la fibrosis de tejidos, evitar la metástasis tumoral, etc. (Davis et al., Targeting EMT in cancer: opportunities for pharmacological intervention. Trends Pharmacol. Sci. 2014; 35(9): 479-88).
El documento n° US-A-2014/322128 se refiere a materiales y a métodos para inducir la metuosis.
El documento n° CN-A-102250065 se refiere a derivados triazina-fenilurea sustituidos y a la aplicación de los mismos.
El documento n° US-A-2012/178758 se refiere a derivados estiril-triazina y a sus aplicaciones terapéuticas.
Descripción resumida
Como resultado de un estudio sobre la relación estructura-actividad, la presente exposición proporciona un tipo específico de compuestos que son altamente eficaces en causar la muerte celular mediante metuosis. Sobre esta base, se utiliza un método eficaz y fiable para el anclaje de una proteína diana con una sonda a fin de separar e identificar la proteína diana del compuesto que causa la muerte celular por metuosis, en donde se ha verificado que la proteína diana es la vimentina.
Por lo tanto, la presente exposición proporciona un género de compuestos s-triazina 2,4,6-trisustituidos, un método para la preparación de los mismos y la utilización de estos compuestos para la regulación de la proteína quinasa y la vimentina, y la inducción de metuosis celular.
Según la presente exposición, el compuesto s-triazina 2,4,6-trisustituido está representado por la fórmula (I):
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en la que:
R1 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C12, alcoxilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , di-alquilamino C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo;
R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo, alquilo C1-C6 o haloalquilo C1-C6 ;
R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C12, alcoxilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , dialquilamino C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa;
en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de un grupo que consiste en N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ;
en el que R9 y R10 se seleccionados independientemente de un grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y
X es NH o O, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
La presente exposición se refiere además a sales, profármacos (no reivindicados) o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto representado por la fórmula (I).
En una o más realizaciones, R1 es hidrógeno, halógeno o nitro.
En una o más realizaciones, R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo o alquilo C1-C6.
En una o más realizaciones, R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6.
En una o más realizaciones, R2 es -NR4R5 , en el que R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6 y O, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con un sustituyente seleccionado de entre hidroxilo y alquilo C1-C6, en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6.
En una o más realizaciones, R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-d¡az¡r¡din¡lo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ; en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S.
En una o más realizaciones, R3 es halógeno, alcoxilo C1-C6 o -CORa; en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y Rs se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ; en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O.
En una o más realizaciones, X es NH, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
En una o más realizaciones, en la fórmula (I):
R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 , haloalquilo C1-C6 ; o R4, R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 ; en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo o alquilo C1-C6 ; y
R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa; en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y Rs se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ; en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S.
En una o más realizaciones, en la fórmula (I):
R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
R2 es -NR4R5 , en el que R4, R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6 y O, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con un sustituyente seleccionado de entre hidroxilo y alquilo C1-C6 ; en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6 ;
R3 es halógeno o -CORa; en el que Ra es OH o NR7Rs, en el que R7 y Rs se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ; en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y
X es NH, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
En algunas realizaciones, preferentemente:
R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 ; en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo o alquilo C1-C6 ;
R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CONR7Rs, en el que R7 y Rs se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N, O o S; en el que el alquilo C1-C6 puede sustituirse opcionalmente con uno o más de entre halógeno, alquilamino C1-C6 , y dialquilamino C1-C6 ; X es un NH o O para o meta.
En algunas realizaciones, más preferentemente:
R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 ; en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6;
R3 es hidrógeno, halógeno o -CONR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N, O o S; en el que el alquilo C1-C6 puede sustituirse opcionalmente con uno o más de entre alquilamino C1-C6 y dialquilamino C1-C6 ;
X es un NH o O para o meta.
Preferentemente, el compuesto de fórmula (I) anteriormente indicado incluye:
(£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L1),
(£)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L2),
(£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L3),
(£)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (l4),
(£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L5),
(£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L6 ),
(£)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (l7),
(£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L8 ), (£)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (l9), (£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L10),
(£)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L11),
(£)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L12),
(£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L13), (£)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L14), (£)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L15), (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolm-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L1 6 ),
(E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L17),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L18), (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L19), (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-dimetilamino-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L20),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(pirrolidín-1 -il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L21),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L22), (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L23),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L24),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L25),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L26), (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L27),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L28), (E)-W,W-dimetil-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L29),
(E)-1-(4-((4-metilpiperidín-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L30), (E)-1-(4-((4-metilpiperazín-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L31), (E)-N-(2-(dimetilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L32), (E)-W-(2-(dietilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L33), (E)-W-(3-(dimetilamino)propil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L34),
(E)-W-(2-(pirrolidín-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L35), (E)-W-(2-(piperidín-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L36), (E)-W-(2-(morfolín-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida (L37), (E)-1-(4-metoxifenil)-3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea (L38),
(E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-((4-(morfolín-1 -il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea (L39),
(E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea (L40),
(E)-W-(2-(3-(1-butín-4-il)-3H-diaziridín-3-il)etil)-4-(3-(4-((4-(morpholi-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)amino)fenil)urea)benzamida (79) y
(E)-1-(4-carboxifenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (14).
Descripción de los dibujos
Fig. 1 Efecto de inhibición in vitro de compuestos sobre diversos tipos de células tumorales. Se seleccionaron ocho compuestos con diferentes características estructurales (n° 38 a n° 45, que son L20, L21, L16, L18, L14, L10, L13 y L11, respectivamente). Para las células tumorales originadas en 11 tipos diferentes de fuentes celulares, se determinó la actividad del mismo compuesto sobre diferentes células tumorales y la sensibilidad del mismo tumor frente a compuestos de características estructurales diferentes. Para cada compuesto, las columnas de izquierda a derecha se refieren a H522, HCT15, Hela, HepG2, HT1080, KG1, LNCap, MCF7, OVCAR3, SK-meI28 y U87, respectivamente. Los datos proceden de tres grupos independientes de experimentos, y se expresan como media ± error estándar.
Fig. 2. Vacuolización de células tumorales. Se sembraron 100 microlitros de medio de cultivo (RPMI1640, glutamina 2 mmoles, suero de feto bovino al 10 %) que contenía 103 células de adenocarcinoma de colon humano (HCT15) o células de glioma cerebral humano (U87) y un control de solvente DMSO o compuesto n° 40 100 nM (L16), en una placa de cultivo celular de 96 pocillos, y se obtuvo la imagen de las morfologías celulares bajo un microscopio de contraste de fases tras el cultivo con 5 % de CO2 y a 37°C durante 96 horas. Tanto las células HCT5 (parte superior derecha) como las células U87 (parte inferior derecha) tratadas con compuesto n° 40 100 nM mostraron una vacuolización significativa.
Fig. 3. La capacidad de los compuestos sometidos a ensayo de inhibir el crecimiento celular no está correlacionada con su capacidad de causar vacuolización celular. Se sometieron a ensayo 37 compuestos (L1 a L37) para su capacidad de inhibir el crecimiento e inducir la vacuolización de las células de glioma humano (U87). El compuesto n° 50 (L1) mostró la capacidad más fuerte de causar vacuolización celular.
Fig. 4. Vista esquemática de un diagrama de flujo para el anclaje de una proteína diana con una sonda. El procedimiento de anclaje con la sonda comprende la unión específica in situ del compuesto sonda a una proteína de una célula viva; el entrecruzamiento covalente in situ entre el grupo fotosensible del compuesto sonda y su proteína diana bajo radiación UV; la unión específica del grupo alquinilo del compuesto sonda al grupo azido del compuesto de aislamiento mediante una reacción click; y el aislamiento de la proteína diana unida específicamente al compuesto sonda con ayuda de la unión del grupo de biotina del compuesto de aislamiento a una perla de estreptavidina-agarosa.
Fig. 5. Compuesto herramienta para el anclaje de una proteína diana con una sonda. De entre los compuestos sometidos a ensayo, el compuesto n° 50 mostró la capacidad más fuerte de causar vacuolización celular. Basándose en el análisis de la relación estructura-actividad, el enlace de un grupo fotosensible al compuesto n° 50 en la posición mostrada en la figura para obtener el compuesto sonda n° 79 podría no afectar a la bioactividad del compuesto n° 50. Mediante experimentación también se verificó que el compuesto n° 79 y el compuesto n° 50 pueden resultar en el mismo fenotipo celular. Con el fin de facilitar la separación de la fase sólida y reducir la no especificidad, el compuesto n° 80 de diseño presenta una cadena larga que une una biotina a un grupo azido para una reacción click.
Fig. 6. Separación e identificación de una proteína diana. El compuesto n° 79 utilizado como sonda se unió in situ a una proteína diana dentro de una célula en la que se había formado un enlace covalente fotoinducido y después se hizo reaccionar con el compuesto n° 80 para conseguir la separación de la fase sólida y la purificación de la proteína diana. A. Izquierda: proteínas capaces de unión específica al compuesto n° 79 según detección mediante inmunotransferencia western (indicadas mediante las flechas); derecha: proteínas diana específicas separadas mediante electroforesis en gel PAGE, tal como indica la tinción con azul de Coomassie. B. Tal como muestra el mapeado de segmentos peptídicos de MALDI-espectro de masas y el análisis de secuencias (MALDI-EM/EM), las proteínas diana presentan secuencias que se corresponden con las secuencias de proteínas conocidas en el banco de datos. Las partes en negrita subrayadas son las secuencias correspondientes. Las dos proteínas aisladas de aproximadamente 60 kD y aproximadamente 200 kD se corresponden con la misma secuencia de proteína conocida. C. La información de correspondencia de proteínas muestra que la proteína diana del compuesto es la vimentina.
Fig. 7. Resultados del acoplamiento entre el compuesto n° 50 y la proteína diana. A: 3KLT (número de sistema de la proteína; la parte esférica en el centro es la zona activa de la proteína) de tetrámero de vimentina de origen en el PDB (banco de datos de proteínas); B: compuesto n° 50 para el acoplamiento; C: puntuaciones de las 10 mejores configuraciones del compuesto n° 50 que resultan del acoplamiento entre 3KLT y el compuesto n° 50 utilizando el programa Discovery Studio 3.0 y el método de acoplamiento LibDock en el mismo; D: una vista que muestra la interacción entre la configuración del compuesto n° 50 que presenta la puntuación más alta (indicada por el color violeta) y la vimentina; E: aminoácidos que forman enlaces de hidrógeno con el compuesto n° 50 después de la desproteinización, en la que los dos aminoácidos Arg273 y Tyr276 forman enlaces de hidrógeno con el anillo triazina en el compuesto n° 50.
Descripción detallada
Debe apreciarse que, dentro del alcance de la presente exposición, las diversas características técnicas (p.ej., los diversos alcances de los diversos grupos) definidas en las realizaciones indicadas anteriormente y las diversas características técnicas que se describen específicamente a continuación (p.ej., en los Ejemplos) pueden combinarse entre sí de manera que formen soluciones técnicas preferentes.
Tal como se utiliza en la presente memoria, "alquilo" se refiere a alquilo C1-C12, por ejemplo, alquilo C1-C6 , tal como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-amilo, etc.
"Anillo heterocíclico" se refiere a un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en N, O y S. El anillo heterocíclico puede ser un anillo heterocíclico saturado o insaturado. Entre los anillos heterocíclicos ejemplares se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, por ejemplo, morfolinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, piperidinilo, azetidinilo, pirazolilo, etc.
"Halógeno" incluye F, Cl, Br e I. "Carboxilo" se refiere a -COOH.
En "3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo", el alquinilo del alquinilo C2-C6 se encuentra localizado generalmente en la posición 1. En algunas realizaciones, el "3-(alquinilo C2-C6)-3H-diaziridinilo" es "3-(1-butín-4-il)-3H-diaziridín-3-ilo".
Tal como se utiliza en la presente memoria, NR7R8 y NR9R10 pueden ser monoalquilamino C1-C6 o dialquilamino C1-C6, en los que el alquilo C1-C6 puede sustituirse opcionalmente, por ejemplo, con uno o más átomos de halógeno, monoalquilamino C1-C6 o dialquilamino C1-C6 , o con un anillo heterocíclico saturado de 4 a 6 elementos que contiene N y opcionalmente N o O adicional. Entre dichos anillos heterocíclicos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, morfolinilo, etc. El anillo heterocíclico también puede sustituirse opcionalmente, por ejemplo, con alquilo C1-C6.
En la presente exposición, en el caso de que se sustituya un grupo, el número de sustituyentes puede ser, por ejemplo, 1, 2, 3 o 4. Generalmente, a menos que se especifique lo contrario, los sustituyentes pueden seleccionarse de entre halógeno, alquilo C1-C6 , hidroxilo, carboxilo, amino, monoalquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6 , nitro, 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo, grupo heterocíclico (p.ej., morfolinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, piperidinilo, azetidinilo, pirazolilo, etc.) y arilo C6-C14 (p.ej., fenilo).
Además, términos relacionados, tales como "isómero", "racemato", "profármaco" y "solvato", utilizados en la presente memoria, no presentan significados evidentemente diferentes de los significados generalmente de dichos términos en la técnica. El experto en la materia debería conocer los significados de dichos términos. Por ejemplo, el término "isómero" se refiere a uno de entre dos o más compuestos que presentan la misma composición molecular, aunque diferentes estructuras y propiedades. El término "racemato" se refiere a una mezcla equimolar de una molécula quiral ópticamente activa y su enantiómero. El término "profármaco", también denominado profármaco, fármaco precursor, precursor de fármaco y similares, se refiere a un compuesto que muestra una actividad farmacológica solo después de la conversión in vivo. El término "solvato" se refiere a una mezcla que consiste en un solvente y un compuesto.
A la luz de la plasticidad y heterogeneidad de los tumores, mediante la utilización como diana de una pluralidad de rutas de transducción de señales claramente relacionadas con la proliferación y muerte de células tumorales, e integrando farmacóforos que actúan sobre las moléculas diana de dichas rutas de señalización, la presente exposición propone un nuevo género de compuestos, es decir, los compuestos s-triazina, formados mediante la sustitución con diarilurea, arilvinilo y anillo heterocíclico de nitrógeno (oxígeno) saturado, en el que dicho género de compuestos presenta la estructura de Fórmula (I), tal como se muestra a continuación:
Figure imgf000007_0001
en la que R1, R2 , R3 y X son tal como se ha indicado anteriormente.
En algunas realizaciones, R1 es hidrógeno, halógeno o nitro, más preferentemente H, F, Cl o nitro.
En diversas formas de la estructura en la presente memoria, en el caso de que R1 sea un grupo diferente de hidrógeno, generalmente se encuentra localizado en una posición meta o para del anillo de fenilo.
En algunas realizaciones, R4 y R5 en R2 se seleccionados independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo o alquilo C1-C6. En algunas realizaciones, R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6. En algunas realizaciones, R2 es -NR4R5 , en el que R4, R5 y el átomo de nitrógeno unido a ellos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6 y O, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con un sustituyente seleccionado de entre hidroxilo y alquilo C1-C6, en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6. En algunas realizaciones, entre los anillos heterocíclicos de 4 a 6 elementos saturados se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, morfolinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, piperidinilo y azetidinilo.
En algunas realizaciones, R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo, o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forma un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 , o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S. En algunas realizaciones, R3 es halógeno, alcoxilo C1-C6 o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo, o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 , o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N u O. En algunas realizaciones, el anillo heterocíclico formado por R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos, y el anillo heterocíclico formado por R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos, incluyen, aunque sin limitación, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo y morfolinilo.
En diversas formas de la estructura en la presente memoria, en el caso de que R3 sea un grupo diferente de H, generalmente se encuentra localizado en una posición meta o para del anillo de fenilo.
En algunas realizaciones, X es NH, unido al grupo fenilo en una posición para o meta. En algunas realizaciones, X es O, unido al grupo fenilo en una posición para.
Tal como se ha indicado anteriormente, los diversos sustituyentes o características técnicas en las diversas realizaciones en la presente memoria pueden combinarse arbitrariamente dentro del alcance de la estructura de fórmula (I). De esta manera, por ejemplo, en algunas realizaciones, en la fórmula (I), R1 es hidrógeno, halógeno o nitro; R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forma un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo o alquilo C1-C6 y R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7, R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forma un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forma un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S. En otras realizaciones, en la fórmula (I), R1 es hidrógeno, halógeno o nitro; R2 es -NR4R5 , en el que R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6 y O, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con un sustituyente seleccionado de entre hidroxilo y alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6 ; R3 es halógeno o -CORa, en el que R1 es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y X es NH, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) en la presente memoria presenta la estructura mostrada en la fórmula (I-1) o en la fórmula (I-2), tal como se muestra a continuación:
Figure imgf000009_0001
en la que:
Ri se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno o nitro,
R2 se selecciona del grupo que consiste en morfolinilo, pirrolidinilo, piperazinilo y azetidinilo sustituido opcionalmente con hidroxilo o alquilo C1-C6, y
R3 es halógeno o -CORa; en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ; en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10, y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O.
En algunas realizaciones de la fórmula (I-2), anteriormente, R3 es halógeno.
En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula (I) en la presente memoria presenta la estructura mostrada en la fórmula (I-3), tal como se muestra a continuación:
Figure imgf000009_0002
en la que:
R1 es H,
R2 es morfolinilo,
Ra es OH o NR7R8 , en la que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6, en el que R9 y R10 se selecciona independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátom oadicional seleccionado de entre N o O.
En algunas realizaciones de fórmula (I-1), R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno y nitro; R2 es morfolinilo; R3 es halógeno o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7, R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O. En algunas realizaciones, en dichos compuestos, R1 (en el caso de un sustituyente diferente de hidrógeno) y R3 se encuentran localizados independientemente en una posición meta o para, respectivamente, del grupo fenilo. En algunas realizaciones, en dichos compuestos, en el caso de que R1 sea un sustituyente diferente de hidrógeno, se encuentra localizado en una posición meta del anillo fenilo, y R3 se encuentra localizado en una posición para del grupo fenilo. En algunas realizaciones, en dichos compuestos, el anillo heterocíclico saturado incluye, aunque sin limitación, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo y morfolinilo. En algunas realizaciones, dichos compuestos pueden utilizarse particularmente para inducir la agregación de vesículas en las células tumorales, conduciendo de esta manera a la muerte celular por metuosis.
Pueden sintetizarse compuestos s-triazina 2,4,6-trisustituidos de la exposición mediante la utilización de los métodos siguientes:
Esquema sintético n° 1: Se utiliza metafenilén-diamina o parafenilén-diamina (1) como un material de partida, del que se protege un grupo amino con (Boc)2Ü, a fin de obtener el intermediario 2, que reacciona con uno de entre diversos tipos de fenilisocianatos sustituidos, obteniendo el intermediario 3, del que se elimina el grupo protector Boc (tbutiloxicarbonilo) utilizando ácido trifluoroacético a fin de obtener el intermediario 4; se hace reaccionar cloruro cianúrico (5) con bromuro de metilmagnesio (CH3MgBr) para preparar el intermediario 6, que reacciona con uno de entre diversos tipos de benzaldehídos sustituidos bajo reflujo de ácido clorhídrico concentrado, obteniendo el intermediario 7, que se clora con oxicloruro de fósforo a fin de obtener el intermediario (; y el intermediario 8 y el intermediario 4 experimentan una reacción catalizada por diisopropiletilamina para obtener el intermediario 9, que reacciona con una amina heterocíclica, tal como morfolina o metilpiperazina en presencia de diisopropiletilamina, obteniendo el compuesto diana.
Las fórmulas de reacción en el Esquema sintético n° 1 son las siguientes:
Figure imgf000010_0001
en las que R1, R2 y R3 son tal como se ha indicado anteriormente.
Reactivos en las fórmulas de reacción en el esquema sintético anteriormente indicado: (a) una base, preferentemente carbonato de potasio, (Boc)2Ü, agua, tetrahidrofurano y DMF, (b) fenilisocianato sustituido y dicloruro de metileno; (c) ácido trifluoroacético y dicloruro de metileno; (d) una solución de bromuro de metilmagnesio en tetrahidrofurano, (e) benzaldehído sustituido y ácido clorhídrico concentrado, (f) oxicloruro de fósforo, (g) diisopropiletilamina y tetrahidrofurano; (h) amina heterocíclica, diisopropiletilamina y tetrahidrofurano.
Las fórmulas estructurales del compuesto diana del Esquema sintético n° 1 pueden incluir:
Figure imgf000010_0002
Figure imgf000010_0003
(continuación)
Figure imgf000011_0001
(continuación)
Figure imgf000012_0002
Figure imgf000012_0001
Esquema sintético n° 2: se utilizó metafenilén-diamina o parafenilén-diamina (1) como un material de partida, del que se protegió un grupo amino con (Boc)2O, obteniendo el intermediario 2 que reacciona con p-aminobenzoato de metilo en presencia de trifosgeno para obtener el intermediario 10, del que se elimina el grupo protector Boc utilizando ácido trifluoroacético para obtener el intermediario 11; se hace reaccionar cloruro cianúrico (5) con bromuro de metilmagnesio para preparar el intermediario 6, que reacciona con uno de entre diversos tipos de benzaldehídos sustituidos bajo reflujo de ácido clorhídrico concentrado, obteniendo el intermediario 7, que se clora con oxicloruro de fósforo para obtener el intermediario 8; y el intermediario 8 y el intermediario 11 se someten a una reacción catalizada por diisopropiletilamina para obtener el intermediario 12, que reacciona adicionalmente con una amina heterocíclica, tal como morfolina o metilpiperazina, en presencia de diisopropiletilamina, obteniendo el compuesto 13; el compuesto 13 se hidroliza en presencia de monohidrato de hidróxido de litio, se acidifica con ácido clorhídrico para obtener el intermediario 14, que finalmente se somete a una reacción de condensación con una de entre diversas aminas en presencia de los catalizadores HOBt (1-hidroxibenzotriazol)EDCl [hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida], obteniendo un compuesto diana.
Las fórmulas de reacción en el Esquema sintético n° 2 son las siguientes:
Figure imgf000013_0001
en las que R1, R2 y R3 son tal como se ha indicado anteriormente.
Los reactivos en las fórmulas de reacción en el esquema sintético anterior: (a) una base, preferentemente carbonato de potasio, (Boc)2O, agua, tetrahidrofurano, DMF; (b) trifosgeno, trietilamina, p-aminobenzoato de metilo, dicloruro de metileno; (c) ácido trifluoroacético, dicloruro de metileno; (d) una solución de bromuro de metilmagnesio en tetrahidrofurano; (e) benzaldehído sustituido, ácido clorhídrico concentrado, reflujo durante 12 horas; (f) oxicloruro de fósforo, reflujo durante 16 horas; (g) diisopropiletilamina, tetrahidrofurano; (h) amina heterocíclica, diisopropiletilamina, tetrahidrofurano; (i) monohidrato de hidróxido de litio, tetrahidrofurano, agua, ácido clorhídrico concentrado; (j) HOBt, EDCl, trietilamina, amina sustituida, DMF.
La fórmula estructura del compuesto diana del Esquema sintético n° 2 se muestra en el ejemplo siguiente:
Figure imgf000013_0002
(continuación)
Figure imgf000014_0002
Esquema sintético n° 3: se hace reaccionar cloruro cianúrico (5) con bromuro de metilmagnesio para preparar el intermediario 6, que reacciona con uno de entre diversos tipos de benzaldehídos sustituidos bajo reflujo de ácido clorhídrico concentrado, obteniendo el intermediario 7, que se clora con oxicloruro de fósforo para obtener el intermediario 8; el intermediario 8 reacciona con p-nitrofenol sódico para obtener el intermediario 15; el intermediario 15 reacciona con una amina heterocíclica, tal como morfolina o metilpiperazina, en presencia del catalizador diisopropiletilamina, obteniendo el compuesto 16. El compuesto 16 se reduce en un sistema de polvos de hierro y cloruro amónico para obtener el intermediario 17, que reacciona con uno de entre diversos tipos de isocianatos de fenilo sustituidos, obteniendo un compuesto diana.
Las fórmulas de reacción en el Esquema sintético n° 3 son las siguientes:
Figure imgf000014_0001
en las que R1, R2 y R3 son tal como se ha indicado anteriormente. En algunas realizaciones, R1 es hidrógeno, grupos aceptores de electrones, tales como halógeno, nitro, etc.; grupos donantes de electrones, tales como alquilo, amino, hidroxilo, hidroximetilo, aminometilo, aminoformilo, etc.; R2 es amino, alquilamino, arilamino, heteroarilamino; R3 es hidrógeno; grupos aceptores de electrones, tales como halógeno, nitro, etc.; grupos donantes de electrones, tales como alquilo, amino, hidroxilo, hidroximetilo y aminometilo.
Reactivos en las fórmulas de reacción en el esquema sintético anterior: (a) una solución de bromuro de metilmagnesio en tetrahidrofurano; (b) benzaldehído sustituido, ácido clorhídrico concentrado, reflujo durante 12 horas; (c) oxicloruro de fósforo, reflujo durante 16 horas; (d) agua, tetrahidrofurano, p-nitrofenol sódico; (e) amina heterocíclica, diisopropiletilamina, tetrahidrofurano; (f) polvos de hierro, cloruro amónico, etanol, agua, reflujo durante 3 horas; (g) fenilisocianato sustituido y dicloruro de metileno.
La fórmula estructura del compuesto diana del Esquema sintético n° 3 se muestra en el ejemplo siguiente:
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
Las etapas de procedimiento específicas para los compuestos se describen en detalle en los Ejemplos.
Las etapas anteriores pueden ser modificadas por el experto en la materia para incrementar los rendimientos. Pueden determinar un esquema sintético basándose en conocimientos básicos de la técnica, por ejemplo, mediante la selección de reactivos, solventes y temperaturas, utilizando diversos grupos protectores convencionales para evitar reacciones secundarias a fin de incrementar los rendimientos.
La presente exposición incluye además sales, profármacos (no reivindicados) o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto representado mediante la fórmula (I). Entre los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se incluyen sales inorgánicas y orgánicas, tales como sales hidrocloruro, sales hidrobromuro, sales fosfato, sales sulfato, sales citrato, sales lactato, sales tartrato, sales maleato, sales fumarato, sales mandelato y sales oxalato; y sales inorgánicas y orgánicas formadas con bases, tales como hidróxido sódico, tri(hidroximetil)aminometano (TRIS, trometamol) y N-metilglucosamina. Entre los ejemplos de profármacos, los cuales no están reivindicados, se incluyen ésteres simples de compuestos que contienen carboxilo; ésteres de compuestos que contienen hidroxilo; iminas de compuestos que contienen amino; uretanos de compuestos que contienen amino; acetales o cetales de compuestos que contienen alcohol.
La presente exposición incluye además composiciones farmacéuticas de sales, profármacos (no reivindicados) o solvatos farmacéuticamente aceptables del compuesto representado por la fórmula (I). Las composiciones farmacéuticas pueden comprender además diversos portadores farmacéuticamente aceptables utilizados convencionalmente para la preparación de composiciones farmacéuticas. Tal como se utiliza en la presente memoria, "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un componente inactivo, tal como un relleno sólido, semisólido o líquido, un diluyente, un material de recubrimiento, un agente auxiliar de formulación o un excipiente, utilizado junto con el compuesto de la exposición para formar una "composición farmacéutica" para la administración en un sujeto. El portador farmacéuticamente aceptable es no tóxico para el sujeto de administración a la dosis y concentración utilizadas, y es compatible con los demás componentes en la formulación. El portador farmacéuticamente aceptable resulta apropiado para la formulación utilizada. Por ejemplo, en el caso de que deba administrarse un agente terapéutico por vía oral, el portador puede ser una cápsula de gel. En el caso de que el agente terapéutico deba administrarse por vía subcutánea, el portador es deseablemente no irritante de la piel y no provoca una reacción en el punto de inyección. La composición farmacéutica puede ser cualquier forma adecuada de una formulación, tal como una tableta, pastilla y cápsula.
Generalmente, la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéutica o preventivamente eficaz de una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I) en la presente exposición. Tal como se utiliza en la presente memoria, "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad del compuesto, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento o prevención eficaz en el procedimiento de tratamiento o prevención de una enfermedad. La "cantidad eficaz" puede modificarse según el ingrediente activo administrado, el método de administración, la enfermedad y gravedad de la misma, la condición de salud, la edad, el peso corporal, la historia familiar, la constitución genética, el estadio del desarrollo patológico, el tipo de tratamiento realizado antes de la administración y concurrentemente con la misma, y otras características individuales del sujeto que debe tratarse.
Los compuestos dados a conocer en la presente memoria muestran un fuerte efecto inhibidor de una pluralidad de células tumorales de diversos tipos. Por lo tanto, los compuestos de fórmula (I) y los compuestos de fórmulas (I-1), (I-2) e (I-3) pueden utilizarse para prevenir y tratar diversos tumores sólidos y tumores hemáticos, incluyendo, aunque sin limitación, el cáncer de pulmón (p.ej., el cáncer pulmonar no microcítico), el cáncer de colon, el cáncer de cuello uterino, el cáncer hepático, el fibrosarcoma, la eritroleucemia, el cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer pancreático, el cáncer ovárico, el melanoma y el glioma cerebral.
Algunos de los compuestos de la exposición pueden causar la muerte no apoptótica de las células tumorales: la metuosis. Dicha forma de muerte se atribuye a la unión específica de dicho género de compuestos a un filamento intermediario celular, es decir, la vimentina. Por lo tanto, la exposición se refiere además a la utilización de los compuestos dados a conocer por la exposición para intervenir en procesos fisiopatológicos relacionados con la vimentina y tratar las enfermedades asociadas a los mismos, incluyendo, aunque sin limitación, la transición epitelialmesenquimal, la diferenciación de las células madre, el crecimiento infiltrante, la metástasis, la resistencia farmacológica y recaída de tumores; la fibrosis tisular, enfermedades infecciosas y enfermedades cardiovasculares (p.ej., ateroesclerosis), etc. En algunas realizaciones, la exposición proporciona la utilización de los compuestos indicados en la presente memoria en la preparación de fármacos para prevenir o tratar enfermedades en los mamíferos asociadas a la desregulación de la vimentina; la formación, transporte y secreción de vesículas, y/o la vacuolización celular. Además, entre las enfermedades de mamíferos asociadas a la desregulación de la vimentina; a la formación, transporte y secreción de vesículas; y/o a la vacuolización celular se incluyen cánceres, enfermedades neurodegenerativas, fibrosis tisular y ateroesclerosis. Todavía adicionalmente, entre las enfermedades de mamíferos asociadas a la desregulación de la vimentina; a la formación, transporte y secreción de vesículas, y/o a la vacuolización celular se incluyen diversos tumores sólidos, tales como el cáncer de colon, el cáncer pancreático, el cáncer ovárico, el cáncer gástrico, el cáncer de mama, el cáncer de tiroides, el cáncer hepático, el cáncer renal, el cáncer pulmonar, el cáncer de próstata, el sarcoma, el glioma, etc., y la leucemia y el mieloma múltiple. En algunas realizaciones, entre las enfermedades infecciosas indicadas en la presente memoria se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, las enfermedades causadas por la infección vírica, tales como enfermedades causadas por la infección por el virus de la hepatitis C, el virus SARS, el virus VIH y el virus de la fiebre dengue, etc.
Por lo tanto, en algunas realizaciones, la exposición proporciona usos de los compuestos mostrados mediante la fórmula 8I), las sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de fármacos para el tratamiento o la prevención de tumores. En algunas realizaciones, la exposición proporciona los compuestos mostrados mediante la fórmula (I), las sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, para el tratamiento o la prevención de tumores. Los tumores se han indicado anteriormente.
En algunas realizaciones, la exposición proporciona usos de los compuestos mostrados mediante la fórmula (I), las sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la preparación de fármacos para intervenir en el transporte de las vesículas celulares y la liberación de las mismas al exterior de las células, o en la preparación de fármacos para fomentar la muerte celular por metuosis, o la preparación de fármacos para el tratamiento o la prevención de enfermedades mediadas por la vimentina. Alternativamente, en algunas realizaciones, la exposición proporciona los compuestos mostrados mediante la fórmula (I) en la presente memoria, las sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos, para intervenir en el transporte de las vesículas celulares y la liberación de las mismas al exterior de las células, fomentando la muerte celular por metuosis, para el tratamiento o la prevención de enfermedades mediadas por la vimentina. En particular, entre las enfermedades mediadas por la vimentina se incluyen las asociadas a la transición epitelial-mesenquimal, la diferenciación de las células madre, la metástasis, la resistencia a fármacos y la recaída de tumores; la fibrosis tisular y enfermedades cardiovasculares (p.ej., la ateroesclerosis). Todavía adicionalmente, entre los tumores se incluyen diversos tumores sólidos, tales como el cáncer de colon, el cáncer pancreático, el cáncer ovárico, el cáncer gástrico, el cáncer de mama, el cáncer de tiroides, el cáncer hepático, el cáncer renal, el cáncer pulmonar, el cáncer de próstata, el sarcoma, el glioma y tumores hemáticos, tales como la leucemia y el mieloma múltiple.
En algunas realizaciones, la exposición proporciona además un método para el tratamiento o la prevención de tumores, incluidos los tumores sólidos y los tumores hemáticos, en el que el método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto mostrado mediante la fórmula (I) en la presente memoria o una composición farmacéutica del mismo. La exposición proporciona además un método para intervenir en el transporte de las vesículas celulares y la liberación de las mismas al exterior de la célula, fomentando la muerte celular por metuosis, para tratar o prevenir enfermedades mediadas por la vimentina, en el que el método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto mostrado mediante la fórmula (I) en la presente memoria o una composición farmacéutica del mismo. Los fármacos pueden administrarse mediante una vía adecuada para conseguir el objetivo previsto. Por ejemplo, los fármacos pueden administrarse por vía parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, bucal, intratecal, encefálica, nasal o externa. Puede determinarse la dosis de fármaco a la luz de la edad, la condición de salud, el peso corporal, los tratamientos paralelos, la frecuencia del tratamiento del paciente y la eficiencia deseada del tratamiento.
Con el fin de mostrar mejor el contenido técnico de la exposición, esta se ilustrará adicionalmente en referencia a los ejemplos específicos siguiente, a los que la exposición no se encuentra limitada. Debe entenderse que los compuestos de fórmula (I), al ser mencionados, incluyen los compuestos presentados mediante las fórmulas (I-1), (I-2) y (I-3) en la presente memoria. A menos que se indique lo contrario, los métodos y reactivos utilizados en los ejemplos son métodos y reactivos convencionales de la técnica.
En los ejemplos siguientes en los que se sintetizaron compuestos, un procedimiento de trabajo convencional es la adición de una cantidad apropiada de agua a un líquido de reacción tras completarse la reacción, seguido de la separación de una fase orgánica y una fase acuosa, y la combinación de fases orgánicas procedentes de varias operaciones de separación. En caso necesario, el secado se lleva a cabo utilizando una solución de HCl al 5 % y/o NaSO4 saturado en serie, seguido de la filtración y secado al vacío con el fin de obtener un producto en bruto que se separa y se purifica mediante cromatografía de columna a fin de obtener un producto final.
Ejemplo 1: síntesis de L16
1) Preparación de 4-((t-butiloxicarbonil)amino)anilina (2)
Se disolvió p-fenilendiamina (3,24 g, 30,0 mmol) y carbonato potásico (1,52 g, 11,0 mmol) en 10 ml de DMF y 5 ml de agua. A temperatura ambiente, se añadió gota a gota lentamente una solución de (Boc)2O (2,18 g, 10,0 mmoles) en tetrahidrofurano (30 ml). Tras la adición, la solución se sometió a agitación a temperatura ambiente para la reacción durante 4 horas. El líquido de reacción se vertió en 100 ml de agua helada, se extrajo con dicloruro de metileno (200 ml) y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se lavó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente, seguido de cromatografía de columna de gel de sílice, obteniendo 1,79 g de sólido blanco con un rendimiento de 86 %.
2) Preparación de 1-(4-clorofenil)-3-(4-((t-butiloxicarbonil)amino)fenil)urea (3)
A temperatura ambiente se añadió gota a gota lentamente una solución de isocianato de p-clorofenilo (461 mg, 3,0 mmoles) en dicloruro de metileno (5 ml) a una solución de intermediario 2 (625 mg, 3,0 mmoles) en dicloruro de metileno (10 ml), seguido de la agitación a temperatura ambiente durante 5 horas hasta completar la adición. El líquido de reacción se filtró por succión directamente y la torta de filtración se secó, obteniendo 977 mg de sólido blanco con un rendimiento de 90 %.
3) Preparación de 1-(4-clorofenil)-3-(4-aminofenil)urea (4)
A temperatura ambiente, se añadió gota a gota lentamente una solución de ácido trifluoroacético (47 mg, 4,16 mmoles) en dicloruro de metileno (5 ml) a una solución de intermediario 3 (188 mg, 0,52 mmoles) en dicloruro de metileno (10 ml), seguido de la agitación a temperatura ambiente durante 3 horas hasta completar la adición. El líquido de reacción se secó mediante evaporación rotatoria directamente y se ajustó el pH con carbonato sódico saturado hasta una basicidad débil. Lo resultante se extrajo con acetato de etilo, seguido del lavado en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente, obteniendo 129 mg de sólido blanco con un rendimiento de 95 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO): 58,63 (s,1H,NH); 8,16 (s,1H,NH); 7,45 (d,2H,J=8,8Hz); 7,29 (d,2H, J=8,8Hz); 7,06 (d,2H,J=8,6Hz); 6,50 (d,2H,J=8,6Hz); 4,80 (s,2H,-NH2).
4) 2-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina (6)
Bajo la protección de gas nitrógeno a -20°C, se añadió gota a gota lentamente una solución de bromuro de metilmagnesio en éter dietílico (3 ml, 9 mmoles) a una solución de cloruro cianúrico (1,38 g, 7,5 mmoles) en 8 ml de tetrahidrofurano; tras la adición, la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente para la reacción durante 2 horas y después se detuvo la reacción y se desactivó mediante la adición de 20 ml de cloruro amónico saturado. El líquido de reacción se extrajo dos veces con 20 ml de acetato de etilo y 20 ml de cloruro sódico saturado, y la fase orgánica se secó con sulfato sódico anhidro. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 615 mg de sólido blanco con un rendimiento de 50 %. RMN 1H (CDCb) 5: 2,71 (s,3H,CH3).
5) 2, 4-dihidroxi-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (7)
Se disolvió intermediario 6 (1,60 g, 9,76 mmoles) y 3-nitrobenzaldehído (1,47 g, 9,76 mmoles) en 30 ml de ácido clorhídrico concentrado, se calentó a 100°C y se dejó reaccionar durante 12 h bajo agitación. Se detuvo la reacción. El líquido de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vertió en 60 ml de agua helada, se filtró por succión y se lavó en serie con 10 ml de acetato de etilo y 10 ml de agua-éter de petróleo. La torta de filtración se secó, obteniendo 2,01 g de producto en bruto blanco con un rendimiento de 79,2 %.
6) 2, 4-dicloro-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (8)
Una mezcla líquida de intermediario 7 (960 mg, 3,69 mmoles) y oxicloruro de fósforo (10 ml) se calentó a 140°C y se dejó reaccionar durante 19 horas bajo agitación. Se detuvo la reacción. El líquido de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se secó mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 60 ml de agua helada, se extrajo con 60 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 660mg de sólido blanco con un rendimiento de 60,2%.
7) 1-(4-clorofenil)-3-(4-cloro-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (9)
Bajo la protección de gas nitrógeno, se disolvió intermediario 4 (342 mg, 1,15 mmoles), intermediario 8 (300 mg, 1,15 mmoles) y diisopropiletilamina (149 mg, 1,15 mmoles) en 50 ml de tetrahidrofurano, y se dejó que reaccionasen durante 5 horas a temperatura ambiente bajo agitación. Tras completarse la reacción, se eliminó la mitad del solvente mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 60 ml de agua, se extrajo con 120 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro; el solvente se evaporó por completo; se añadieron 2 ml de etanol anhidro, seguido de ultrasonicación durante 30 segundos y filtración por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 522 mg de producto en bruto con un rendimiento de 86,9 %.
8) 1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L16)
Bajo la protección de gas nitrógeno, se disolvió intermediario 9 (270 mg, 0,52 mmoles), morfolina (181mg, 2,08 mmoles) y diisopropiletilamina (202 mg, 1,56 mmoles) en 60 ml de tetrahidrofurano, y se dejó que reaccionasen durante 4 horas a temperatura ambiente bajo agitación. Tras completarse la reacción, se eliminó la mitad del solvente mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 100 ml de agua, se extrajo con 100 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro; el solvente se evaporó por completo; se añadió 1 ml de etanol anhidro, seguido de ultrasonicación durante 30 segundos y filtración por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 206 mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 69,0 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 59,46 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,10 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,95 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,53 -7,58 (m, 1H), 7,39 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,6Hz, 2H), 6,95 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,73 (m, 4H),3,59 (m, 4H) ppm. HRMS calc. para C28H26ClNsO4[M+H]+, 573,1760, observado: 573,1750.
Ejemplo 2: síntesis de L31
1) Preparación de 4-((t-butiloxicarbonil)amino)anilina (2)
Se disolvió p-fenilendiamina (3,24 g, 30,0 mmoles) y carbonato potásico (1,52 g, 11,0 mmoles) en 10 ml de DMF y 5 ml de agua. A temperatura ambiente, se añadió gota a gota lentamente una solución de (Boc)2O (2,18 g, 10,0 mmoles) en tetrahidrofurano (30 ml). Tras la adición, la solución se sometió a agitación a temperatura ambiente para la reacción durante 4 horas. El líquido de reacción se vertió en 100 ml de agua helada, se extrajo con dicloruro de metileno (200 ml) y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 1,79g de sólido blanco con un rendimiento de 86%.
2) Preparación de 4-(3-(4-((t-butiloxicarbonil)amino)fenil)urea)benzoato de metilo (10)
En un baño de hielo se añadió gota a gota lentamente una solución de p-aminobenzoato de metilo (500 mg, 3,3 mmoles) en dicloruro de metileno (5 ml) a una solución de trifosgeno (980,1 mg, 3,3 mmoles) en dicloruro de metileno (10 ml). Tras la adición, se añadió gota a gota una solución de trietilamina (667 mg, 6,6 mmoles) en dicloruro de metileno (5 ml). Tras la adición, el solvente en el líquido de reacción se secó mediante evaporación rotatoria. Se añadió nuevamente dicloruro de metileno (20 ml) y se añadió intermediario 2 (618 mg, 2,97 mmoles), seguido de la agitación a temperatura ambiente durante 5 horas. Se añadió carbonato sódico saturado al líquido de reacción para ajustar el pH a basicidad débil. El líquido de reacción se extrajo con acetato de etilo, seguido del lavado en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro. El solvente se evaporó por completo. Lo resultante se lavó con acetato de etilo/éter de petróleo en una proporción volumétrica de 1/4 y se filtró por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 600 mg de sólido blanco con un rendimiento de 52,4 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO) ó 9,20 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,88 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,41­ 7,30 (m, 4H), 3,82 (s, 3H), 1,47 (s, 9H) ppm.
3) Preparación de 4-(3-(4-aminofenil)urea)benzoato de metilo (11)
A temperatura ambiente, se añadió gota a gota lentamente una solución de ácido trifluoroacético (474 mg, 4,16 mmoles) en dicloruro de metileno (5 ml) a una solución de intermediario 10 (200 mg, 0,52 mmoles) en dicloruro de metileno (10 ml), seguido de la agitación a temperatura ambiente durante 3 horas hasta completar la adición. El líquido de reacción se secó mediante evaporación rotatoria directamente y se ajustó el pH con carbonato sódico saturado hasta una basicidad débil. Lo resultante se extrajo con acetato de etilo, seguido del lavado en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente, obteniendo 141mg de sólido blanco con un rendimiento de 95 %. RMN 1H (300 MHz, d Ms O): 5 8,63 (s,1H); 8 , 16 (s,1H); 7,45 (d, J=8 ,8 Hz, 2H,); 7,29 (d, J=8 ,8 Hz, 2H); 7,06 (d, 8 ,6 Hz, 2H); 6,50 (d, J=8 ,6 Hz, 2H); 4,80 (s, 2H), 3,82 (s, 3H).
4) 2-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina (6 )
Bajo la protección de gas nitrógeno a -20°C, se añadió gota a gota lentamente una solución de bromuro de metilmagnesio en éter dietílico (3 ml, 9 mmoles) a una solución de cloruro cianúrico (1,38 g, 7,5 mmoles) en 8 ml de tetrahidrofurano; tras la adición, la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente para la reacción durante 2 horas y después se detuvo la reacción y se desactivó mediante la adición de 20 ml de cloruro amónico saturado. El líquido de reacción se extrajo dos veces con 2 0 ml de acetato de etilo y 20 ml de cloruro sódico saturado, y la fase orgánica se secó con sulfato sódico anhidro. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 615 mg de sólido blanco con un rendimiento de 50%. RMN 1H (CDCb) 6:2.71 (s,3H, CH3).
5) 2,4-dihidroxi-6-estirenil-1,3,5-triazina (7)
Se disolvió intermediario 6 (1,60 g, 9,76 mmoles) y benzaldehído (1,04 g, 9,76 mmoles) en 30 ml de ácido clorhídrico concentrado, se calentó a 100°C y se dejó reaccionar durante 12 h bajo agitación. Se detuvo la reacción. El líquido de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vertió en 60 ml de agua helada, se filtró por succión y se lavó en serie con 10 ml de acetato de etilo y 10 ml de agua-éter de petróleo. La torta de filtración se secó, obteniendo 1,66 g de producto en bruto blanco con un rendimiento de 79,2 %.
6 ) 2,4-dicloro-6-estirenil-1,3,5-triazina (8 )
Una mezcla líquida de intermediario 7 (794 mg, 3,69 mmoles) y oxicloruro de fósforo (10 ml) se calentó a 140°C y se dejó reaccionar durante 19 horas bajo agitación. Se detuvo la reacción. El líquido de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se secó mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 60 ml de agua helada, se extrajo con 60 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 560mg de sólido blanco con un rendimiento de 60,2%.
7) 1-(4-(metoxicarbonil)fenil)-3-(4-cloro-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (12)
Bajo la protección de gas nitrógeno, se disolvió intermediario 11 (441 mg, 1,75 mmoles), intermediario 8 (500 mg, 1,75 mmoles) y diisopropiletilamina (226 mg, 1,75 mmoles) en 50 ml de tetrahidrofurano, y se dejó que reaccionasen durante 5 horas a temperatura ambiente bajo agitación. Tras completarse la reacción, se eliminó la mitad del solvente mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 60 ml de agua, se extrajo con 120 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro; el solvente se evaporó por completo; se añadieron 2 ml de etanol anhidro, seguido de ultrasonicación durante 30 segundos y filtración por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 762mg de producto en bruto con un rendimiento de 86,9 %.
8 ) 1-(4-(metoxicarbonil)fenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il))-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (13)
Bajo la protección de gas nitrógeno, se disolvió intermediario 12 (840 mg, 1,68 mmoles), morfolina (584 mg, 6,72 mmoles) y diisopropiletilamina (651 mg, 5,04 mmoles) en 60 ml de tetrahidrofurano, y se dejó que reaccionasen durante 4 horas a temperatura ambiente bajo agitación. Tras completarse la reacción, se eliminó la mitad del solvente mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 100 ml de agua, se extrajo con 100 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro; el solvente se evaporó por completo; se añadió 1 ml de etanol anhidro, seguido de ultrasonicación durante 30 segundos y filtración por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 639mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 69,0%. RMN 1H (300 MHz, DMSO) 6 9,61(s, 1H), 9,37(s, 1H), 8,98(s, 1H), 7,95(d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,89(d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,75 - 7,64(m, 4H), 7,60(d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,42(t, J = 7,6 Hz, 5H), 6,89(d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82(s, 7H), 3,69(s, 4H) ppm.
9) Preparación de ácido 4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzoico (14)
A temperatura ambiente, se disolvió intermediario 13 (300 mg, 0,54 mmoles) y monohidrato de hidróxido de litio (68,5 mg, 1,63 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml), metanol (5 ml) y agua (1 ml), se calentaron bajo reflujo y se sometieron a agitación para la reacción durante 12 horas. Tras completar la reacción, el líquido de reacción se filtró por succión. Se ajustó el ph de la torta de filtración a 4 con ácido clorhídrico 2 M, seguido de filtración por succión. La torta de filtración se secó y se añadió 1 ml de etanol anhidro. Tras la ultrasonicación durante 30 segundos, la torta de filtración se filtró por succión y se secó para obtener 171 mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 59,0 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO) ó 12,33(s, 1H), 9,59(s, 1H), 9,41(s, 1H), 9,09(s, 1H), 7,94(d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,88(d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,77 - 7,63(m, 4H), 7,59(d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,51 - 7,36(m, 5H), 6,89(d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83(s, 4H), 3,69(s, 4H) ppm.
10) 1-(4-((4-metilpiperazín-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea (L31)
A temperatura ambiente, se añadió intermediario 14 (100 mg, 0,186 mmoles), HOBt (32,7 mg, 0,242 mmoles), DMF (2 ml), EDCl (53,5 mg, 0,279 mmoles), 4-metilpiperazina (24,2 mg, 0,242 mmoles) y trietilamina (37,6 mg, 0,372 mmoles) en serie a un matraz de reacción de 25 ml y se sometieron a agitación para la reacción durante 8 horas. Tras completar la reacción, el líquido de reacción se vertió en 10 ml de agua helada, se extrajo con dicloruro de metileno (20 ml) y se lavó con agua y solución hipersalina saturada en serie. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente, seguido de cromatografía de columna de gel de sílice, obteniendo 87,6 mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 76 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 59,60(s, 1H), 8,91(s, 1H), 8,67(s, 1H), 7,95(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,65 -7,72(m, 4H) , 7,52(d, J = 8,5Hz, 2H), 7,41 -7,43(m, 5H), 7,34(d, J = 8,5Hz, 2H), 6,89(d, J = 15,9Hz, 1H)3,83(m, 4H ),3,69(m, 4H), 3,50(m, 4H),2,33(m, 4H), 2,21(s, 3H)ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-Ó6) 5: 169,98, 168,92, 164,41, 152,41, 141,17, 138,65, 135,20, 134,18, 134,09, 129,45, 128,91, 128,55, 128,18, 127,76, 127,14, 120,57, 118,71, 117,30, 65,96, 54,78, 53,58, 47,60, 45,50, 43,38. HRMS calc. para C34H38N9O3 [M+H]+,620,3092, observado: 620,3105.
Ejemplo 3: síntesis de L39
1) 2-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina (6)
Bajo la protección de gas nitrógeno a -20°C, se añadió gota a gota lentamente una solución de bromuro de metilmagnesio en éter dietílico (3 ml, 9 mmoles) a una solución de cloruro cianúrico (1,38 g, 7,5 mmoles) en 8 ml de tetrahidrofurano; tras la adición, la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente para la reacción durante 2 horas y después se detuvo la reacción y se desactivó mediante la adición de 20 ml de cloruro amónico saturado. El líquido de reacción se extrajo dos veces con 20 ml de acetato de etilo y 20 ml de cloruro sódico saturado, y la fase orgánica se secó con sulfato sódico anhidro. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 615 mg de sólido blanco con un rendimiento de 50%. RMN 1H (CDCb) ó:2.71 (s,3H,CH3).
2) 2, 4-dihidroxi-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (7)
Se disolvió intermediario 6 (1,60 g, 9,76 mmoles) y 3-nitrobenzaldehído (1,47 g, 9,76 mmoles) en 30 ml de ácido clorhídrico concentrado, se calentó a 100°C y se dejó reaccionar durante 12 h bajo agitación. Se detuvo la reacción. El líquido de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se vertió en 60 ml de agua helada, se filtró por succión y se lavó en serie con 10 ml de acetato de etilo y 10 ml de agua-éter de petróleo. La torta de filtración se secó, obteniendo 2,01 g de producto en bruto blanco con un rendimiento de 79,2 %.
3) 2, 4-dicloro-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (8)
Una mezcla líquida de intermediario 7 (960 mg, 3,69 mmoles) y oxicloruro de fósforo (10 ml) se calentó a 140°C y se dejó reaccionar durante 19 horas bajo agitación. Se detuvo la reacción. El líquido de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se secó mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 60 ml de agua helada, se extrajo con 60 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó por completo el solvente. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 660mg de sólido blanco con un rendimiento de 60,2%.
4) 2-cloro-4-(4-nitrofenoxi)-6-(estirenil)-1,3,5-triazina (15)
Bajo la protección de gas nitrógeno, se disolvió intermediario 8 (78 mg, 0,31 mmoles) en 5 ml de tetrahidrofurano y se disolvió p-nitrofenol sódico (50 mg, 0,31 mmoles) en 5 ml de agua. La solución acuosa de p-nitrofenol sódico se añadió gota a gota lentamente al líquido mixto de intermediario 8 y se dejó reaccionar a temperatura ambiente durante 3 horas bajo agitación. Tras completar la reacción, se eliminó la mitad del solvente mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 20 ml de agua, se extrajo con 50 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro; el solvente se evaporó por completo; se añadieron 0,5 ml de etanol anhidro, seguido de ultrasonicación durante 30 segundos y filtración por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 84mg de producto en bruto con un rendimiento de 76,9%.
5) 2-(morfolín-1 -il)-4-(4-nitrofenoxi)-6-(estirenil)-1,3,5-triazina (16)
Bajo la protección de gas nitrógeno, se disolvió intermediario 15 (84 mg, 0,24 mmoles), morfolina (63 mg, 0,72 mmoles) y diisopropiletilamina (93 mg, 0,72 mmoles) en 15 ml de tetrahidrofurano, y se dejó que reaccionasen durante 4 horas a temperatura ambiente bajo agitación. Tras completarse la reacción, se eliminó la mitad del solvente mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 30 ml de agua, se extrajo con 30 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro; el solvente se evaporó por completo; se añadieron 0,5 ml de etanol anhidro, seguido de ultrasonicación durante 30 segundos y filtración por succión. La torta de filtración se secó, obteniendo 84mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 86,0%.
6) 4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-oxo)anilina (17)
Se disolvieron polvos de hierro (100 mg, 1,79 mmoles) y cloruro amónico (40 mg, 0,74 mmoles) en 10 ml de solución acuosa de etanol (proporción volumétrica de etanol a agua: 8:2) y se calentaron bajo reflujo. Se añadió rápidamente intermediario 16 (100 mg, 0,247 mmoles) al líquido de reacción anteriormente indicado y se continuó la reacción bajo reflujo durante 2 horas. Tras completar la reacción, se llevó a cabo la filtración por succión y el etanol en el filtrado se eliminó mediante evaporación rotatoria. La parte restante se vertió en 30 ml de agua, se extrajo con 30 ml de acetato de etilo y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. Se recogió la fase orgánica y se secó con sulfato sódico anhidro. Se realizó la preparación de la arena, seguido de cromatografía, en la que el eluyente era éter de petróleo:acetato de etilo=3:1. Se obtuvieron 85 mg de producto puro con un rendimiento de 91,5 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO): ó 7,95(d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,73(d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,43 - 7,41(m, 3H), 6,92(d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,87(d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,58(d, J = 8,7 Hz, 2H), 5,04(s, 2H), 3,87(s, 2H), 3,66-3,60(m, 4H) ppm.
7) (£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea (L39)
A temperatura ambiente se añadió gota a gota lentamente una solución de isocianato de p-clorofenilo (37,8 mg, 0,346 mmoles) en dicloruro de metileno (3 ml) a una solución de intermediario 17 (92,5 mg, 0,246 mmoles) en dicloruro de metileno (5 ml), seguido de la agitación a temperatura ambiente durante 5 horas hasta completar la adición. El líquido de reacción se filtró por succión directamente y la torta de filtración se secó, obteniendo 117mg de sólido blanco con un rendimiento de 90 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 5 8,86(s, 1H), 8,80(s, 1H), 7,96(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,73-7,11(m, 2H), 7,52-7,45(m, 4H), 7,42 -7,40(m, 3H), 7,34(d, J = 8,7Hz, 2H), 7,17(d, J = 8,7Hz, 2H), 6,93(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,89(s, 2H), 3,67(s, 2H), 3,60(s, 4H) ppm.
Ejemplo 4: preparación de los compuestos L1-L15, L17-L30, L32-L38 y L40
Se prepararon los compuestos L1-L15 y L17-L28 utilizando el mismo método y materiales correspondientes que en el Ejemplo 1; se prepararon los compuestos L29-30 y L32-L37 utilizando el mismo método y materiales correspondientes que en el Ejemplo 2, y los compuestos L38 y L40 se prepararon utilizando el mismo método y materiales correspondientes que en el Ejemplo 3. Se muestran los datos relacionados para los compuestos resultantes a continuación:
L1 (n° 50):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,57 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,59(s, 1H), 7,93(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,65 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,43 - 7,38(m, 5H), 7,32 (d, J = 8,7Hz, 2H), 6,88(d, J = 15,9Hz, 1H),3,82 (m, 4H),3,68 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5 :169,99, 164,43, 163,80, 152,46, 138,83, 138,63, 135,22, 134,17, 134,11, 129,44, 128,90, 128,55, 127,76, 127,16, 125,13, 120,58, 119,58, 118,75, 65,96, 43,37. HRMS calc. para C28H27ClNyO2 [M+H]+, 528,1909; observado: 528,1918.
L2 (n° 52):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,65 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,66(s, 1H), 7,95(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,71 (d, J = 6,6Hz, 2H), 7,62 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,48 -7,38(m, 7H), 7,11 (t, J = 8,5Hz, 2H), 6,90(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,82 (m, 4H),3,69 (m, 4H) ppm. HRMS calc. para C28H27FN7O2 [M+H]+, 512,2205, observado: 512,2215.
L3 (n° 51)
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,53 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,61(s, 1H), 7,93(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,66 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,44 - 7,39(m, 5H), 7,32 (d, J = 8,7Hz, 2H), 6,88(d, J = 15,9Hz, 1H),3,83 (m, 4H ), 2,39 (m, 4H), 2,23(s, 3H) ppm. RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6) 5 : 169,99, 164,28, 163,80, 152,47, 138,83, 138,51, 135,24, 134,25, 134,05, 129,40, 128,89, 128,55, 127,75, 127,27, 125,12, 120,52, 119,57, 118,76, 54,34, 45,74, 42,73. HRMS calc. para C29H30ClN8O [M+H]+, 541,2175, observado: 541,2190.
L4 (n° 53):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,55 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,56(s, 1H), 7,92(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,70 (d, J = 6,6Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,48 -7,38(m, 7H), 7,12 (t, J = 8,5Hz, 2H), 6,88(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,83 (m, 4H), 2,39 (m, 4H), 2,23(s,3H) ppm. HRMS calc. para C29H30FN8O[M+H]+, 525,2521, observado: 525,2534.
L5 (n° 57):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,56 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,68(s, 1H), 8,50(s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,98(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,74 -7,69(m, 3H), 7,49 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,08(d, J = 15,9Hz, 1H), 5,78 (d, J = 6,6Hz, 1H), 4,61-4,59 (m, 1H ), 4,37-4,32 (m, 2H ), 3,90-3,86 (m, 2H ) ppm. RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6) 5 : 169,8, 165,4, 163,5, 152,5, 138,6, 135,2, 134,4, 133,9, 129,4, 128,9, 128,6, 127,8, 127,2, 125,1, 120,3, 119,5, 118,7, 60,9, 59,2. HRMS calc. para C27H25ClNyO2 [M+H]+, 514,1753, observado: 514,1765.
L6 (n° 54):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,56 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7.66 (d, J = 9,0 Hz, 3H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (dd, J = 13,2, 6,6 Hz, 4H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H),3,69 (m, 4H) ppm. HRMS calc. para C2sH26CbN7O2 [M+H]+, 562,1520, observado: 562,1505.
L7 (n° 60):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,56 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,70(s, 1H), 7,91(d, J = 15,9Hz, 1H) 7, 81 (s, 1H), 7,63 -7,69(m, 3H), 7,44 -7,49(m, 4H) ,7,40 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,12 (t, J = 8,8Hz, 2H), 6,95(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,82(m, 4H),3,69(m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 5: 169,74, 164,37, 163,83, 158,75, 155,60,152,72, 137.54.137.07, 136,23, 134,43, 133,91, 133,72, 130,63, 129,00, 127,36, 126,32, 120,67, 119,72, 119,62,118,55, 115.33, 115,03, 65,95, 43,35. HRMS calc. para C28H26CI FN7O2 [M+H]+, 546,1815, observado: 546,1821.
L8 (n° 55):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)6: 9,56 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7.66 (d, J = 9,0 Hz, 3H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (dd, J = 13,2, 6,6 Hz, 4H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H). RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6) 6:169,75, 164,23, 163,84, 152,47, 138,83, 137,57, 136,96, 134,19, 134,10, 133,71, 130,63, 128,98, 128,55, 127,37, 127,31, 125,13, 120,59, 119,59, 118,78, 54,34, 45,73, 42,74. HRMS calc. para C29H29CbNaO[M+H]+, 575,1836, observado: 575,1840.
L9 (n° 61):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,50 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8, 55 (s, 1H), 7,89(d, J = 15,9Hz, 1H) 7, 82 (s, 1H), 7,63 -7,69(m, 3H), 7,44 -7,49(m, 4H) ,7,39 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,12 (t, J = 8,8Hz, 2H), 6,95(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,84(m, 4H),2,39 (m, 4H), 2,23(s, 3H) ppm. RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6) 6: 169,7, 164,2, 163,8, 158,8, 155,6, 152.8, 137,5, 136,9, 134,3, 133,7, 130,6, 129,0, 127,4, 126,3, 120,6, 119,8, 119,7, 118,6, 115,4, 115,1, 54,3, 45,7, 42.7. HRMS calc. para C29H29CI FNsO[M+H]+, 559,2131, observado: 559,2144.
L10 (n° 43):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 10,46 (s, 1H), 10,22 (s, 1H), 9,52(s, 1H), 7,90(d, J = 15,9Hz, 1H),7,75 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,53 -7,61(m, 4H), 7,44 -7,52(m, 4H), 7,28 (d, J = 8,8Hz, 1H), 6,89(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,83(m, 4H), 3,68 (m, 4H) ppm. HRMS calc. para C2sH26CbN7O2 [M+H]+, 562,152, observado: 562,1517.
L11 (n° 45):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,6(s, 1H), 8,66(s, 1H), 8,54(s, 1H), 7,88(d, J = 15,9Hz, 1H),7,75 (d, J = 8,4Hz, 2H), 7,63 (d, J = 8,4Hz, 1H) ,7,43-7,49(m, 4H), 7,38 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,11 (t, J = 8,8Hz, 1H) ,6,89(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,82(m, 4H), 3,68 (m, 4H) ppm. HRMS calc. para C2sH26Cl FN7O2 [M+H]+, 546,1815, observado: 546,1822. L12 (n° 49):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,60(s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,62(s, 1H), 7,91(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,53 -7,58(m, 1H), 7,39 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,6Hz, 2H), 6,95 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,73 (m, 4H),3,59 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 5: 169,8, 164,0, 152,4, 141,8, 141,6, 137,3, 134,2, 134,0, 133,9, 130,3, 130,2, 129,5, 128,9, 120,6, 118,8, 113,7, 108,0, 107,8, 104,8, 104,5, 65,9, 43,3. HRMS calc. para C28H26CFN 7O2 [M+H]+, 546,1815, observado: 546,1823.
L13 (n° 44):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,50 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,89(d, J = 15,9Hz, 1H),7,75 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,46 -7,50(m, 4H), 7,39 (d, J = 8,9Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,9Hz, 1H), 6,91(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,83(m, 4H), 2,38 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 6: 169,9, 164,5, 163,8, 152,5, 138.9, 137,1, 134,2, 133,8, 129,5, 128,9, 128,6, 128,1, 125,1, 120,5, 119,5, 118,7, 54,3, 45,7, 42,7. HRMS calc. para C29H29CbNaO [M+H]+, 575,1836, observado: 575,1837.
L14 (n° 42):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,51 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,89(d, J = 15,9Hz, 1H),7,78 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,6Hz, 2H), 7,51 -7,47(m, 4H), 7,39 (d, J = 8,9Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,9Hz, 1H), 6,91(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,85(m, 4H), 2,38 (m, 4H), 2,25 (s, 3H) ppm. HRMS calc. para C29H29Cl FNaO [M+H]+, 559,2131, observado: 559,2134.
L15 (n° 48):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,61 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 7,95(d, J = 15,9Hz, 1H) ,7,89 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,66 -7,72(m, 4H), 7,60 (d, J = 8,8Hz, 2H),7,39 - 7,44(m, 4H), 6,89(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,82(m, 4H), 3,82(s, 3H),3,69 (m, 4H) ppm. RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6) 5: 164,2, 163,8, 160,8, 152,4, 141,7, 137,2, 134,2, 134,0, 133,8, 130,3, 130,2, 129,5, 118,7, 113,7, 107,7, 104,8, 104,4, 54,0, 45,3, 42,3. HRMS calc. para C29H29CFN 8O [M+H]+, 559,2131, observado: 559,2136.
L17 (n° 62):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,58 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8, 72 (s, 1H), 8, 52 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0Hz, 2H),8,06(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,74(d, J = 8,0Hz, 1H) , 7,63 -7,69(m, 2H) , 7,44 -7,49(m, 2H) ,7,40 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,8Hz, 2H),7,07 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,84(m, 4H ),3,70 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 5: 164.33, 163,86, 158,69, 152,79, 148,33, 137,14, 136,31, 134,58, 133,76, 133,56, 130,31, 130,13, 123,60, 122,39, 120,71, 119,57, 119,46, 118,39, 115,32, 115,03, 65,96, 43,36. HRMS calc. para C28H26FN8O4 [M+H]+. 557,2056, observado: 557,2060.
L18 (n° 41):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,53 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,66(s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,20 (d, J = 7,6Hz, 2H),8,03(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,73 -7,64(m, 3H), 7,50 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,05 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,84 (m, 4H ),2,39 (m, 4H), 2,23(s,3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 6: 169,53, 164,18, 163,86, 152,48, 148,31, 138,85, 137,15, 136,20, 134,16, 133,55, 130,28, 128,53, 125,09, 123,58, 122,37, 120,60, 119,56, 118,74, 54,33, 45,72, 42,72. HRMS calc. para C29H29CIN9O3 [M+H]+. 586,2076, observado: 586,2082.
L19 (n° 63):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,52 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8, 55 (s, 1H), 8, 51 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0Hz, 2H),8,04(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,73(d, J = 8,0Hz, 1H) , 7,64 -7,69(m, 2H) , 7,44 -7,49(m, 2H) ,7,40 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,8Hz, 2H),7,06 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,85(m, 4H ),2,40 (m, 4H), 2,24(s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 5: 169,6, 164,2, 158,8, 152,7, 148,3, 137,2, 136,2, 134,3, 134,0, 133,6, 130,3, 123,6, 122,4, 120,6, 119.8, 119,7, 118,7, 115,4, 115,1, 54,4, 45,7, 42,7. HRMS calc. para C29H29FN9O3 [M+H]+, 570,2372, observado: 570,2384.
L20 (n° 38):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)6:9,50 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,62(s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,21 (dd, J = 8,0Hz, J=1,8Hz, 2H),8,03(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,74 -7,69(m, 3H), 7,49 (d, J = 8,9Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,9Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,06 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,23-3,17 (m, 6H ) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5: 169,19, 164,90, 163,64, 152.48, 148,35, 138,86, 137,19, 135,97, 134,36, 133,98, 133,59, 130,32, 128,55, 125,09, 123,56, 122,29, 120,41, 119,56, 118,74, 35,86. HRMS calc. para C28H24CIN8O3 [M+H]+, 531,1654, observado: 531,1667.
L21 (n° 39):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)6: 9,49 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,59(s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,21 (dd, J = 8,0Hz, J=1,8Hz, 2H), 8,01(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,77 -7,69(m, 3H), 7,49 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,9Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,06 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,62-3,57 (m, 4H ), 1,96-1,94 (m, 4H ) ppm. RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6): 162,87, 152,47, 148,35, 138,85, 137,19, 134,55, 133,83, 133,61, 130,33, 128,55, 125,09, 123,55, 122,24, 120,21, 119,55, 118,75, 45,99, 24,76. HRMS calc. para C28H26CIN8O3 [M+H]+, 557,1811, observado: 557,1816.
L22 (n° 58):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6)6: 9,56 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,69(s, 1H), 8, 50 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0Hz, 2H),7,98(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,68 -7,74(m, 3H), 7,49 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,8Hz, 2H),7,08 (d, J = 15,9Hz, 1H), 5,78 (d, J = 6,6Hz, 1H),4,58-4,61(m, 1H ),4,32-4,37 (m, 2H), 3,86-3,90(m, 2H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)6: 169,36, 165,26, 163,55, 152,51, 148,31, 138,88, 137,09, 136,14, 134,29, 134,05, 133,65, 130,27, 128,54, 125,06, 123,57, 122,25, 120,42, 119,49, 118,67, 60,93, 59,23. HRMS calc. para C27H24ClN8O4 [M+H]+, 559,1604, observado: 559,1609.
L23 (n° 64):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,63 (s, 1H), 8,81(s, 1H), 8, 70 (s, 1H), 8, 32 (s, 1H) 8,01 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7.69 -7,71(m, 2H), 7,49 (d, J = 8,8Hz, 2H) ,7,39(m, 3H), 7,33 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,25 -7,16(m, 2H), 6,93(m, 1H), 6,89 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,87 (m, 4H ), 3,69(m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5: 170,09, 164,44, 163,90, 152,30, 140,28, 139,66, 138,92, 138,71, 135,25, 129,42, 128,85, 128,55, 127,77, 127,06, 125,28, 119,68, 113,68,112,19, 109,91, 66,03, 43,41. HRMS calc. para C28H2yClNyO2 [M+H]+, 528,1909, observado: 528,1916. L24 (n° 65):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,58 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8, 76 (s, 1H), 8, 34 (s, 1H) 8,00 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7.69 -7,71(m, 2H) 7,50 (d, J = 8,8Hz, 2H) 7,38 (m, 3H) 7,32 (d, J = 8,8Hz, 2H) 7,18 -7,21(m, 2H) ,6,94(m, 1H), 6,89 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,87 (m, 4H),2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6)6: 170,1, 164,3, 163.9, 152,3, 140,3, 139,7, 138,8, 135,3, 129,4, 128,8, 128,6, 128,5, 127,8, 127,1, 125,2, 119,6, 113,6, 112,1, 109.9, 54,5, 45,8, 42,8. HRMS calc. para C29H30ClN8O [M+H]+, 541,2226, observado: 541,2236.
L25 (n° 59):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,64 (s, 1H), 8,82(s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,31 (s, 1H) 7,98 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,68(d, J = 7,0Hz, 1H), 7,43 -7,50(m, 4H), 7,32 (d, J = 8,8Hz, 2H), 7,16 -7,26(m, 2H) , 6,96 (d, J = 15,9Hz, 1H), 6,94 (d, J = 7,0Hz, 1H), 3,88 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5: 169,84, 164,38, 163,91, 152,30, 140,20, 139,67, 138,72, 137,55, 137,36, 133,71, 130,57, 129,01, 128,76, 128,61, 128,53, 127,32, 126.37, 125,25, 119,62, 113,72, 112,23, 109,94, 66,02, 43,40. HRMS calc. para C28H26ChNyO2 [M+H]+, 562,1520, observado: 562,1530.
L26 (n° 56):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,62 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8, 72 (s, 1H), 8, 52(s, 1H) 8, 34 (s, 1H) 8,22 (d, J = 8,0Hz, 2H), 8,12 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,67(t, J = 7,0Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,0Hz, 2H), 7,17 -7,34(m, 4H), 7,06 (d, J = 15,9Hz, 1H), 6,94 (t, J = 7,0Hz, 1H), 3,91 (m, 4H ),2,41 (m, 4H), 2,25(s, 3H)ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 5: 169,8, 164,2, 163,9, 152,3, 140,3, 139,7, 138,7, 137,6, 137,2, 133,7, 130,6, 129,0, 128,9, 128,6, 127,3, 126,4, 125,3, 119,6, 113,7, 112,2, 109,9, 54,5, 45,8, 42,8. HRMS calc. para C29H29CbN8O [M+H]+, 575,1836, observado: 575,1842.
L27 (n° 66):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,62 (s, 1H), 8,83(s, 1H), 8, 72 (s, 1H), 8, 47 (s, 1H) 8, 30 (s, 1H) 8,18 (d, J = 8,0Hz, 2H), 8,11 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,65(t, J = 7,0Hz, 1H) 7,45 (d, J = 8,0Hz, 2H),7,14 -7,32(m, 4H), 7,05 (d, J = 15,9Hz, 1H), 6,93 (t, J = 7,0Hz, 1H), 3,87 (m, 4H ),3,67 (m, 4H) ppm, RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6) 6:169,63, 164.37, 163,94, 152,32, 148,28, 140,18, 139,95, 139,70, 138,72, 137,13, 136,59, 133,59, 130,21, 129,96, 128,60, 128.49, 125,24, 123,56, 122,31, 119,59, 113,72, 112,22, 109,91, 66,03, 43,42, 30,37. HRMS calc. para C28H26Cl2N8O4 [M+H]+, 573,1687, observado: 573,1760.
L28 (n° 67):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5: 9,60 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8, 70 (s, 1H), 8, 50 (s, 1H) 8, 33 (s, 1H) 8,20 (d, J = 8,0Hz, 2H), 8,12 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,67(t, J = 7,0Hz, 1H) 7,48 (d, J = 8,0Hz, 2H)7,17 -7,34(m, 4H) , 7,06 (d, J = 15,9Hz, 1H), 6,94 (t, J = 7,0Hz, 1H), 3,89 (m, 4H ),2,39 (m, 4H), 2,23(s, 3H)ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5: 169.6, 164,2, 163,9, 152,3, 148,3, 140,2, 139,7, 138,7, 137,1, 133,6, 130,2, 130,0, 128,6, 128,5, 123,6, 122,4, 119.6, 113,7, 112,1, 109,9, 54,5, 45,8, 42,8. HRMS calc. para C29H29CIN9O3 [M+H]+, 586,2076, observado: 586,2085.
L29 (n° 70):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,60 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,72 -7,65(m, 4H) , 7,51 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,46 -7,40(m, 5H), 7,36 (d, J = 8,5Hz, 2H), 6,89 (d, J = 15,9Hz, 1H),3,83 (m, 4H ),3,69 (m, 4H), 2,97(s, 6H) ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) 5 : 170,0, 164,4, 163,8, 152,4, 141,0, 138,7, 135,2, 134,1, 129,5, 129,2, 128,9, 128,2, 127,8, 120,6, 118,7, 117,2, 66,0, 43,4. HRMS calc. para C31H33N8O3 [M+H]+, 565,1670, observado: 565,2676.
L30 (n° 76):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,56 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,62(s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,71 -7,64(m, 4H) , 7,50 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,44 -7,39(m, 5H), 7,30 (d, J = 8,5Hz, 2H), 6,88 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ),3,69 (m, 4H), 3,33(m, 2H), 2,89(m, 1H), 2,73(m, 1H), 1,63-1,61(m, 3H), 1,12-1,01(m, 2H), 0,92(d, J=6,1Hz, 3H)ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5 : 168,85, 164,44, 163,81, 152,42, 140,92, 135,22, 134,18, 134,11, 129,25, 128,91, 128,08, 127,87, 127,76, 120,59, 118,72, 117,34, 65,96, 43,37, 30,47, 21,57. HRMS calc. para C35H39N8O3 [M+H]+, 619,3140, observado: 619,3151.
L32 (n° 73):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,64 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,37(t, J=5,4Hz, 1H), 7,99 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,77 -7,70(m, 4H), 7,58 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,52 -7,45(m, 5H), 6,93 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,88 (m, 4H ),3,74 (m, 4H), 3,49-3,45(m,2H), 2,67(t, J=6,1Hz,2H), 2,41(s, 6H)ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5 : 165,83, 164,45, 163,81, 152,38, 142,63, 138,65, 134,21, 134,08, 129,44, 128,91, 128,13, 127,75, 127,19, 120,59, 118,70, 116,90, 65,96, 57,73, 44,50, 43,37, 36,55. HRMS calc. para C33H38N9O3 [M+H]+, 608,3092, observado: 608,3104.
L33 (n° 74):RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,61 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 5,8 Hz, 5H), 6,89 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 3,82 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 3,00 (dd, J = 14,2, 7,0 Hz, 4H), 2,85 (s, 4H), 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 6H). HRMS calc. para C35H42N9O3 [M+H]+,636,3405, observado: 636,3417.
L34 (n° 77):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,61 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,37(t, J=5,4Hz, 1H), 7,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,77 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,72 -7,64(m, 4H), 7,52 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,43 -7,41(m, 5H), 6,88 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ),3,69 (m, 4H), 3,29-3,24(m,2H), 2,27(t, J=6,9Hz,2H), 2,15(s, 6H), 1,69-1,62(m,2H)ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5 : 165,6, 164,4, 152,4, 142,5, 135,2, 134,2, 134,1, 129,5, 128,9, 128,0, 127,8, 127,5, 120,6, 118.7, 116,9, 65,9, 56,9, 45,1, 43,3, 37,6, 27,1. HRMS calc. para C34H40N9O8 [M+H]+, 662,3249, observado: 662,3255.
L35 (n° 75):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 6: 9,61 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,69 (dd, J = 17,5, 7,5 Hz, 4H), 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 4,6 Hz, 5H), 6,89 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 3,83 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 3,44 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,83 (d, J = 45,5 Hz, 6H), 1,76 (s, 4H), RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5 : 169,95, 165,83, 164,41, 163,77, 152,51, 142,80, 138,66, 135,21, 134,26, 134,05, 129.44, 128,91, 128,19, 127,76, 127,15, 126,95, 124,86, 120,59, 118,41, 116,69, 65,96, 54,46, 53,48, 45,44, 43,35, 37,46, 29,27, 29,00, 22,89. HRMS calc. para C35H40N9O3 [M+H]+, 634,3249, observado: 634,3264.
L36 (n° 72):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,66 (s, 1H), 9,50 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 8,52(s,1H), 7,99 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,77 -7,70(m, 4H) , 7,60 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,49 -7,43(m, 5H), 6,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,87 (m, 4H), 3,74 (m, 4H), 3,54 -3,52 (m, 2H), 2,80(m, 6H), 1,66(m, 4H), 1,49(m,2H)ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5 : 169,98, 165,91, 164,40, 163,76, 152,47, 142,80, 138,62, 135,19, 134,19, 134,10, 129,43, 128,91, 128,20, 127,75, 127,12,126,92, 120,58, 118,49, 116,76, 65,96, 56,77, 53,26, 43,35, 35,56,24,15, 22,77. HRMS calc. para C36H42N9O3 [M+H]+, 648,3405, observado: 648,3423.
L37 (n° 71):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 5 : 9,60 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,27(t,J=5,2Hz,1H),7,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,65 -7,72(m, 4H) , 7,52 (d, J = 8,5Hz, 2H), 7,40 -7,46(m, 5H), 7,34 (d, J = 8,5Hz, 2H), 6.89 (d, J = 15,9Hz, 1H),3,83 (m, 4H ),3,69 (m, 4H), 3,56 -3,59 (m, 4H),3,35(m, 2H), 2,43 -2,50(m, 6H)ppm, RMN-13C (75 MHz, DMSO-d6)6: 169,99, 165,67, 164,41, 163,78, 152,34, 142,49, 138,67, 135,19, 134,23, 134,01, 129.45, 128,91, 128,08, 127,76, 127,40, 127,12, 120,56, 118,77, 116,98, 66,15, 65,96, 57,44, 53,27, 43,35, 36,41. HRMS calc. para C35H40N9O4 [M+H]+, 650,3198, observado: 650,3212.
L38 (n° 84):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 5 8,67 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,96(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,74-7,72 (m, 2H), 7,49 (d, J = 8,9Hz, 2H), 7,42 -7,40(m, 2H), 7,36(d, J = 8,9Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,9Hz, 2H), 6,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,9Hz, 2H), 3,72(s,3H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm.
L39 (n° 85): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 58,86 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 7,96(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,73-7,11 (m, 2H), 7,52-7,45 (m, 4H), 7,42 -7,40(m, 3H), 7,34 (d, J = 8,7Hz, 2H), 7,17 (d, J = 8,7Hz, 2H), 6,93 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3.89 (s, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm;
L40 (n° 86):
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 5 8,76 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,70 (s, 1H),7,96(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,72-7,70 (m, 2H), 7,50-7,45 (m, 5H), 7,42 -7,40(m, 2H), 7,15 -7,10(m, 4H), 6,94 (d, J = 15,9Hz, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm.
Ejemplo 5: ensayos in vitro de compuestos para actividad antineoplásica (experimentos con MTT)
1) Materiales experimentales
Se obtuvo comercialmente MTT, medio de cultivo RPMI1640, suero de feto bovino, placa de 96 pocillos, incubador termostático de CO2 , lector de microplacas American BIO-RAD680, líneas celulares de cáncer pulmonar no microcítico humano (H522) y líneas celulares de glioma cerebral humano (U87).
2) Etapas experimentales
(1) Inoculación de células: Se preparó una suspensión de células individuales con medio de cultivo complementado con suero de feto bovino al 10 %, se sembró en una placa de 96 pocillos a razón de 5000 células por pocillo, en la que cada pocillo presentaba un volumen de 100 pl, y se cultivó durante la noche.
(2) Preparación de soluciones de compuesto: una solución madre en DMSO de un compuesto se diluyó sobre una poyata estéril con un medio de cultivo en 5 concentraciones para el ensayo, en donde se utilizó una doble dilución entre dos concentraciones contiguas.
(3) Las soluciones de compuesto de diversas concentraciones se añadieron a la placa de 96 pocillos cultivada durante la noche, añadiendo 100 pl a cada pocillo en pocillos por triplicado para cada concentración. Debido a que los pocillos periféricos pueden experimentar efectos de borde y son susceptibles a la contaminación, no se añadieron células o compuestos a las mismas; en su lugar, se añadieron 100 pl de solución de cultivo a modo de blanco. Además, se configuraron pocillos 100 % para que contuviesen las células y 100 pl de medio de cultivo sin ningún compuesto. Las placas se incubaron en un incubador termostático a 37°C durante 48 horas.
(4) Tinción: Se añadieron 10 pl de solución de MTT (5 mg/ml, preparada con PBS) en la placa de 96 pocillos para la tinción. Tras una incubación de 4 horas, se llevó a cabo la centrifugación a 2500 rpm durante 10 minutos. A continuación, se utilizó una pipeta múltiple para aspirar la solución de cultivo de los pocillos cuidadosamente sin aspirar las células, con la punta de pipeta orientada hacia abajo. Se añadieron 150 pl de DMSO y se sometieron a agitación en un agitador durante 5 a 10 minutos. Se dejó que los cristales se disolviesen por completo y se midió el valor de la DO de cada pocillo utilizando el lector de microplacas a 570 nm. Se calculó la tasa de inhibición de la manera siguiente:
Tasa de inhibición (%) = (valor medio de DO del 100 % de los pocillos - valor medio de DO de los pocillos con compuesto) / (valor medio de DO de 100 % de los pocillos - valor medio de DO de los pocillos de blanco) x 100%
Se proporcionan los resultados experimentales de los compuestos en la tabla a continuación:
Figure imgf000026_0001
Ejemplo 6: amplio espectro y selectividad de los compuestos en la inhibición de las células tumorales
Se seleccionaron 8 compuestos (n° 38, n° 45, L20, L21, L16, L18, L14, L10, L13 y L11 en secuencia) para someter a ensayo la capacidad de inhibir el crecimiento de 11 tipos de células tumorales humanas. El método era el mismo que en el Ejemplo 5. Las líneas celulares sometidas a ensayo fueron: línea celular de cáncer pulmonar no microcítico humano (H522), línea celular de adenocarcinoma de colon humano (HCT15), línea celular de cáncer de cuello uterino humano (HeLa), línea celular de cáncer hepático humano (HepG2), línea celular de fibrosarcoma humano (HT1080), línea celular de eritroleucemia humana (KG1), línea celular de cáncer prostático humano (LNCaP), línea celular de cáncer de mama humano (MCF7), línea celular de cáncer ovárico humano (OVAR3), línea celular de melanoma humano (SK-me128) y línea ce4lular de glioma cerebral humano (U87). Se muestran los resultados experimentales en la fig. 1.
Ejemplo 7: vacuolización de células tumorales y muerte por metuosis
Tras el tratamiento con determinados compuestos de estructuras particulares, se observaron que diversos tipos de células tumorales mostraban un grado elevado de acumulación de vesículas en el citoplasma; un fenotipo de vacuolización celular. Algunas células gradualmente adquirieron una forma redonda y finalmente estallaron. Estos cambios son consistentes con las características de la muerte celular por metuosis (fig. 2).
Con el fin de comparar la capacidad de diferentes compuestos de causar la vacuolización celular, se inocularon 100 pl de medio de cultivo (RPMI1640, glutamina 2 mmoles, suero de feto bovino al 10 %) que comprendía 103 células U87 de glioma humano y concentraciones finales de 0,01, 0,0316, 0,1, 0,316, 1,0, 3,160 pM, respectivamente, de los compuestos que debían someterse a ensayo, en una placa de cultivo de 96 pocillos. Tras el cultivo con 5 % de CO2 y a 37°C durante 96 horas, se observó la morfología celular bajo un microscopio de gran magnificación y se puntuó la capacidad de los compuestos de causar la vacuolización celular. Se proporcionaron 5 puntos en el caso de que se produjese una vacuolización evidente a 10 nM, 4 puntos a 31,6 nM, 3 puntos a 100 nM, 2 puntos a 316 nM, 1 punto a 1000 nM y 0 puntos si no se producía vacuolización a ninguna concentración.
La fig. 3 muestra la capacidad de los compuestos de diferentes estructuras de causar vacuolización celular y la capacidad de inhibir la proliferación celular. Se muestran los resultados específicos a continuación:
Figure imgf000027_0001
Además, se sometieron a ensayo los compuestos 79 y 14 indicados en el Ejemplo 8, según el método descrito en el presente Ejemplo, y recibieron 4,5 y 1,5 puntos, respectivamente, para vacuolización.
Ejemplo 8: anclaje de una proteína diana con una sonda
La fig. 4 resume el aislamiento e identificación de una proteína diana correspondiente a un compuesto que causa la vacuolización celular. Las etapas relacionadas se describen brevemente a continuación.
Síntesis de la sonda (fig. 5):
ruta sintética y síntesis del compuesto n° 79:
Figure imgf000028_0001
en el que se preparó la cadena lateral Cl en referencia al método descrito en el artículo (Li, Z., Hao P., Li L. et al., Design and synthesis of minimalist terminal alkyne-containing diazirine photo-crosslinkers and their incorporation into kinase inhibitors for cell- and tissue-based proteome profiling. Angew. Chem.Int. Ed.,2013, 52, 8551-8556).
Se preparó el compuesto 14 ((E)-1-(4-carboxifenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea) utilizando el método del Ejemplo 2 y materiales correspondientes, y los datos de espectros de masas del mismo son los siguientes:
RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) ó: 12,33 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,77-7,63 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,51 - 7,36 (m, 5H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (s, 4H), 3,69 (s, 4H)ppm.
(E)-N-(2-(3-(1 -butín-4-il)-3H-diaziridín-3-il)etM)-4-(3-(4-((4-(morfolín-1-M)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)amino)fenil)urea)benzamida (79)
A temperatura ambiente, se añadió secuencialmente intermediario 14 (100 mg, 0,186 mmoles), HOBt (32,7 mg, 0,242 mmoles), DMF (2 ml), EDCl (53,5 mg, 0,279 mmoles), Cl (33,0 mg, 0,242 mmoles) y trietilamina (37,6 mg, 0,372 mmoles) a un matraz de reacción de 25 ml y se sometieron a agitación para la reacción durante 8 horas. Tras completar la reacción, se vertió el líquido de reacción en 10 ml de agua helada, se extrajo con dicloruro de metileno (20 ml) y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó el solvente por completo. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 92,8 mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 76 %. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): 59,62(s, 1H), 8,94(s, 1H), 8,68(s, 1H), 8,34(t, J = 5,2Hz, 1H), 7,96(d, J = 15,9Hz, 1H), 7,80(d, J = 8,6Hz, 2H),7,67 -7,74(m, 4H), 7,55(d, J = 8,6Hz, 2H), 7,42 -7,48(m, 5H), 6,90(d, J = 15,9Hz, 1H), 3,84(m, 4H ), 3,71(m, 4H), 3,13-3,20(m, 2H), 2,87(d, J = 2,5Hz, 1H), 2,04(td, J = 7,4Hz , J = 2,5Hz, 2H), 1,62-1,69(m, 4H)ppm, RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6)5: 170,05, 165,66, 164,41, 163,87, 152,16, 142,45, 140,30, 139,59, 138,91, 135,22, 129,44, 128,87, 128,63, 128,07, 127,77, 127,40, 127,01, 117,02, 113,69, 112,13, 109,78, 83,13, 71,72, 66,05, 43,41, 34,27, 31,99, 31,30, 27,28, 12,67. ES-MSm/Z: 655,5 [M-H]-, C36H36N10Oa(PM=656,7).
Ruta sintética síntesis del compuesto n° 80:
en el que el reactivo N1 y la biotina son productos disponibles comercialmente.
N-(2-(2-(2-(2-az¡doetox¡)etox¡)etox¡)etán-1-il)b¡otín-am¡da (80)
A temperatura ambiente, se añadió secuencialmente biotina (94 mg, 0,385 mmoles, biotina), HOBt (74,5 mg, 0,551 mmoles), DMF (2 ml), EDCl (106 mg, 0,551 mmoles), N1 [80 mg, 0,367 mmoles, denominado 2-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)etán-1-amina] y trietilamina (55,7 mg, 0,551 mmoles) a un matraz de reacción de 25 ml y se sometieron a agitación para la reacción durante 8 horas. Tras completar la reacción, se vertió el líquido de reacción en 10 ml de agua helada, se extrajo con dicloruro de metileno (20 ml) y se lavó en serie con agua y solución hipersalina saturada. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se evaporó el solvente por completo. Tras la cromatografía de columna de gel de sílice, se obtuvieron 123mg de sólido amarillo pálido con un rendimiento de 72%. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) ó: 4,31(m, 1 H, CH-1-biotina), 4,14(m, 1 H, CH-4-biotina), 3,55-3,52(m, 8 H, O(CH2CH2O)-PEG), 3,40-3,38(m 4 H, CH2NH y CH2N3-PEG), 3,10(m, 1 H, CH-3-biotina), 2,83(dd, 1 H, J = 4,8, 12,3 Hz, CH-2a-biotina), 2,60-2,56(m, 1 H, CH-2b-biotina), 2,07(t, 2 H, J =7,2 Hz, CH2CO-biotina), 1,50-1,30(m, 6 H, (CH2)abiotina).
Cultivo celular: se sembró una cantidad de células de glioma humano U87 en una placa Petri de 150 cm2 y se cultivó durante 48 horas hasta alcanzar una confluencia de 75 % a 90 %. Se sustituyó el medio de cultivo por un medio precalentado que contenía sonda 0,5 pM (compuesto n° 79) o un volumen equivalente de DMSO de control. Las células continuaron en cultivo durante 3 horas.
Entrecruzamiento inducido por UV: las células se lavaron dos veces con una solución salina tamponada con fosfato (PBS) preenfriada. La placa de cultivo celular se dejó sobre hielo y las células se radiaron con luz ultravioleta (una lámpara de ultravioleta con una potencia de 100 W, longitud de onda de 350 nm o de 315 a 385 nm) a través de la tapa de la placa durante 1 hora. Alternativamente, se añadió una cantidad mínima de PBS preenfriado (10 ml/150 cm2) a la placa de cultivo celular, que seguidamente se introdujo en un radiador de ultravioleta. El fondo de la placa de cultivo celular recibió radiación durante 30 minutos (longitud de onda: 315 a 385 nm; se ajustó el tiempo de acuerdo con la potencia de la radiación ultravioleta).
Preparación de solución de lisis celular: se disociaron las células con tripsina, se precipitaron mediante centrifugación y se lavaron dos veces con PBS. Las células se resuspendieron en tampón de lisis HEPES (Hepes 25 mM, cloruro sódico 150 mM, cloruro de magnesio 2 mM, NP-40 al 0,1 % e inhibidor de proteasas, pH 7,5), se homogeneizaron mediante un periodo breve de ultrasonicación (dispensable), se mezclaron mediante rotación a 4°C durante 30 minutos y seguidamente se centrifugaron a 4°C durante 10 minutos a velocidad elevada. Se midió la concentración de proteínas del lisado celular mediante el método de Bradford.
Preclarificado: se añadió 1 ml de lisado celular (1 a 2 mg/ml) con perlas de estreptavidina-agarosa preequilibradas con tampón HEPES (Hepes 25 mM, cloruro sódico 150 mM, cloruro de magnesio 2 mM, pH 7,5) y mezcladas mediante rotación a 4°C durante 2 horas o durante la noche. Se reservó el sobrenadante después de la centrifugación.
Reacción click: se añadieron 940 pl del sobrenadante tal como se ha indicado anteriormente, con una mezcla de reacción recién preparada (20 pl de CuSO450 mM, 10 pl de TBTA 10 mM recién preparado, es decir, tris[(1 -bencil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil]amina, 20 pl de TCEP 50 mM, es decir, tris(2-carboxietil)fosfina y 10 pl de compuesto n° 80 1 mM) y se mezclaron suavemente a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió un doble volumen de acetona preenfriado a -20°C para detener la reacción. Lo resultante se centrifugó a 4°C durante 10 minutos a velocidad elevada (130000 rpm) para precipitar las proteínas. El pellet de proteínas se lavó dos veces con 500 pl de metanol preenfriado y se disolvió en 1 ml de SDS-PAGE al 0,1 % bajo ultrasonicación.
Purificación de la proteína diana: La solución de la proteína redisuelta tal como se ha indicado anteriormente se añadió a perlas de estreptavidina-agarosa (volumen del pellet: 200 pl) equilibradas con PBS, se mezcló mediante rotación a 4°C durante 2 horas o se centrifugó durante la noche para precipitar las perlas de agarosa. Las perlas se lavaron una vez con SDS-PBS al 0,1 % y cuatro veces con PBS; se añadió un volumen equivalente de perlas de 2xSDS de tampón de carga, y se sometió a ebullición durante 15 minutos. Tras la centrifugación, el sobrenadante se cargó en SDS-PAGE al 10 % para la separación de las proteínas. A continuación, el gel se tiñó con 20 ml de una solución de azul de Coomassie durante 1 hora; después, se destiñó con 2x500 ml de agua bidestilada durante 2x1 hora. Se recortaron las bandas de la proteína específica del gel desteñido (fig. 6A).
Identificación de la proteína: Se utilizó el mapeado de segmentos peptídicos de MALDI-espectro de masas y el análisis de la secuencia (MALDI-EM/EM) para identificar la proteína purificada. Las secuencias de los segmentos peptídicos de la proteína purificada se correspondían con la secuencia de la vimentina en el banco de datos (fig. 6, B, C).
Ejemplo 9: resultados del acoplamiento molecular entre el compuesto n° 50 y la proteína diana.
Se seleccionó el programa de software Discovery Studio 3.0 y se utilizó el método de acoplamiento LibDock en el mismo para acoplar 3KLT del tetrámero de vimentina originado en el PDB (banco de datos de proteínas) (ver A en la fig 7) y el compuesto n° 50 (B en la fig. 7). Se construyó una bolsa activa esférica rosa en vista del ligando transportado por 3KLT mismo, en el que se fijó el radio en 10 A; el número de puntos de la malla era 1000; el método utilizado para producir las configuraciones era Best; el número máximo de configuraciones de molécula pequeña generado se fijó en 255 y el resto de los parámetros eran los parámetros por defecto. Se obtuvieron las puntuaciones de las 10 configuraciones principales del compuesto n° 50 (ver C en la fig. 7). A continuación, se proporciona una imagen que muestra la interacción entre la vimentina y la configuración del compuesto n° 50 con la puntuación más alta (D en la fig. 7). También se muestran los aminoácidos que forman enlaces de hidrógeno con el compuesto n° 50 después de la desproteinización (E en la fig. 7). Tal como puede observarse, solo dos aminoácidos, Arg273 y Tyr276, formaron enlaces de hidrógeno con el anillo triazina en el compuesto n° 50.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    Compuesto representado por la fórmula general I:
    Figure imgf000031_0001
    o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los que:
    R1 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C12, alcoxilo C1-C6 , alquilamino C1-C6, dialquilamino C1-C6, hidroximetilo o aminometilo;
    R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 y haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo, alquilo C1-C6 o haloalquilo C1-C6 ;
    R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C12, alcoxilo C1-C6 , alquilamino C1-C6 , di­ alquilamino C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa;
    Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ;
    R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y X es NH o O, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
    Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en el que:
    R1 es hidrógeno, halógeno o nitro, y/o
    R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6, haloalquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado o insaturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico puede sustituirse con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 ; en el que R6 es hidrógeno, hidroxilo o alquilo C1-C6 ; y/o
    R3 es hidrógeno, halógeno, nitro, amino, hidroxilo, alquilo C1-C6 , hidroximetilo, aminometilo o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8, en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de entre halógeno o NR9R10, y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7, R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9, R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en N, O y S, y/o
    X es NH, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
    Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 2, en el que:
    R2 es -NR4R5 , en el que R4 y R5 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6, O y S, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con hidroxilo, halógeno, nitro, amino o alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6 ; preferentemente, R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6 y O, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste en hidroxilo y alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6 , y/o
    R3 es halógeno, alcoxilo C1-C6 o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 ; en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9, R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O.
    Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en el que:
    R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
    R2 es -NR4R5 , en el que R4 , R5 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado del grupo que consiste en NR6 y O, en el que el anillo heterocíclico se sustituye opcionalmente con un sustituyente seleccionado de entre hidroxilo y alquilo C1-C6 , en el que R6 es hidrógeno o alquilo C1-C6 , R3 es halógeno o -CORa, en el que Ra es OH o NR7R8, en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , R8 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y sustituido opcionalmente con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 , o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y X es NH, unido al grupo fenilo en una posición para o meta.
    Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en el que el compuesto presenta una estructura representada por la fórmula (I-1), (I-2) o (I-3):
    Figure imgf000032_0001
    (1-3)
    en la que, en la fórmula (I-1) o (I-2),
    R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
    R2 se selecciona del grupo que consiste en morfolinilo, pirrolidinilo, piperazinilo y azetidinilo que se sustituye opcionalmente con hidroxilo o alquilo C1-C6 , y
    R3 es halógeno o CORa, en el que Ra es OH o NR7R8, en el que R7 y R8 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6 )-3H-diaziridinilo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 , o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, en la fórmula (I-3),
    R1 es H,
    R2 es morfolinilo,
    Ra es OH o NR7R8 , en el que R7 y Rs se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6)-3H-diaziridinilo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 ; o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O.
    Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable según la reivindicación 5, en el que, en la fórmula (I-1),
    R1 es hidrógeno, halógeno o nitro;
    R2 es morfolinilo, y
    R3 es halógeno o CORa, en el que Ra es OH o NR7Rs, en el que R7 y Rs se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6 sustituido opcionalmente con NR9R10 y alquilo C1-C6 sustituido con 3-(alquinil C2-C6 )-3H-diaziridinilo; o R7 , Rs y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, y opcionalmente sustituido con alquilo C1-C6 , en el que R9 y R10 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-C6 , o R9 , R10 y el átomo de nitrógeno unido a los mismos forman un anillo heterocíclico de 4 a 6 elementos saturado que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de entre N o O, preferentemente, en el caso de que R1 sea un grupo diferente de hidrógeno, R1 y R3 se encuentran localizados, cada uno independientemente, en una posición meta o para del grupo fenilo; más preferentemente, en el caso de que R1 sea un grupo diferente de hidrógeno, R1 se encuentra localizado en una posición meta del grupo fenilo, y R3 se encuentra localizado en una posición para del grupo fenilo; el anillo heterocíclico saturado se selecciona del grupo que consiste en piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo y morfolinilo.
    Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1 -(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidín-1 -il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(4-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-dimetilamino-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1 -(4-clorofenil)-3-(4-(4-(pirrolidín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (£)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-cloroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (£)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (£)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazín-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea, (E)-W,A/-dimetil-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida, (£")-1 -(4-((4-metilpiperidín-1 -il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolín-1 -il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (£)-1-(4-((4-metilpiperazín-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea,
    (E)-N-(2-(dimetilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida,
    (E)-N-(2-(dietilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida,
    (E)-W-(3-(dimetilamino)propil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida,
    (E)-W-(2-(pirrolidín-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida,
    (E)-W-(2-(piperidín-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida,
    (E)-W-(2-(morfolín-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea)benzamida,
    (£)-1-(4-methoxyfenil)-3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea,
    (£)-1-(4-clorofenil)-3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea,
    (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)oxo)fenil)urea,
    (c)-W-(2-(3-(1-butyn-4-il)-3H-diazirin-3-il)etil)-4-(3-(4-((4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazín-2-il)amino)fenil)urea)benzamida y
    (É)-1-(4-carboxifenil)-3-(4-(4-(morfolín-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)urea.
    8. Composición farmacéutica, en la que la composición farmacéutica comprende el compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, y un portador farmacéuticamente aceptable.
    9. Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la utilización en el tratamiento o prevención de un tumor sólido o de un tumor hemático.
    10. Compuesto para la utilización según la reivindicación 9, en el que el tumor sólido se selecciona del grupo que consiste en cáncer de colon, cáncer pancreático, cáncer ovárico, cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer de tiroides, cáncer hepático, cáncer renal, cáncer pulmonar, cáncer prostático, sarcoma y glioma, y el tumor hemático se selecciona del grupo que consiste en leucemia y mieloma múltiple.
    11. Compuesto, sal o solvato farmacéuticamente aceptable, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la utilización en el diagnóstico, tratamiento o prevención de una enfermedad seleccionad del grupo que consiste en crecimiento infiltrante, metástasis, resistencia farmacológica y recaída de tumores, fibrosis tisular, enfermedades infecciosas y enfermedades cardiovasculares.
    12. Compuesto para la utilización según la reivindicación 11, en el que la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en infecciones víricas y ateroesclerosis.
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