ES2903108T3

ES2903108T3 - Composiciones y métodos de estimulación de células madre

Info

Publication number: ES2903108T3
Application number: ES19190130T
Authority: ES
Inventors: Nikolay Turovets; William B Adams
Original assignee: Medicell Technologies LLC
Current assignee: Medicell Technologies LLC
Priority date: 2014-06-18
Filing date: 2015-06-16
Publication date: 2022-03-31
Anticipated expiration: 2035-06-16
Also published as: EP3586821A1; HRP20191935T1; DK3586821T3; PL3157504T3; US20170157015A1; EP3157504A4; LT3157504T; US20230000751A1; PT3586821T; US11491096B2; WO2015195677A1; RS62981B1; EP3157504A1; WO2015195677A4; HRP20211983T1; EP3157504B1; EP3586821B1; CY1122333T1; HUE057737T2; ES2754523T3

Abstract

Uso de una combinación de una primera defensina y una segunda defensina en el reclutamiento de células madre LGR6+ hacia un espacio intracelular para reducir uno o más de: la profundidad de las arrugas, la longitud de las arrugas, el ancho de las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de una superficie de la piel, la oleaginosidad, las manchas pardas y las manchas rojas en la piel no lesionada, en donde la combinación de la primera y segunda defensinas es una combinación de alfa-defensina 5 y beta-defensina 3.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y métodos de estimulación de células madre

Campo de la invención

El campo de la invención es formulaciones cosméticas tópicas que usan defensinas para reducir la apariencia de arrugas, poros, irregularidad en la textura de la superficie de la piel, grasa, manchas pardas y manchas rojas en la piel no lesionada.

Antecedentes

El análisis siguiente sobre los antecedentes incluye información que puede ser útil para comprender la presente invención. No se admite que ninguna de la información proporcionada en este documento sea técnica anterior o relevante para la invención reivindicada actualmente, o que cualquier publicación a la que se haga referencia específica o implícita es técnica anterior.

Desde su descubrimiento inicial en la década de 1960, ha existido mucha investigación acerca de la función de las defensinas. Las defensinas son proteínas pequeñas ricas en cisteína, normalmente de solo 14-85 aminoácidos de longitud. Las defensinas pueden encontrarse en invertebrados, vertebrados y plantas, y han demostrado ser activas contra muchas bacterias, hongos y virus. De hecho, gran parte del conjunto de estudios de investigación se ha centrado en las propiedades antimicrobianas de las defensinas. Sin embargo, en los últimos años, algunas investigaciones han explorado otras funciones que pueden desempeñar las defensinas en la piel humana, tales como la cicatrización de heridas o el crecimiento del pelo.

La solicitud de patente PCT WO 2014/004339 A2 por el solicitante ELC Management LLC enseña el uso de una composición cosmética que contiene resveratrol para estimular la producción endógena de beta defensinas celulares en células de la piel. Para ilustrar este efecto, los inventores probaron la composición en queratinocitos epidérmicos humanos normales ("NHEK") in vitro y midieron la presencia de beta defensina en NHEK. Las cantidades estimuladas resultantes de defensina fueron muy pequeñas (aproximadamente 0,001 ng/ml). Los inventores especularon que la estimulación de beta defensinas en queratinocitos por medio de composiciones que contienen resveratrol sería eficaz para tratar el acné, inhibir el crecimiento microbiano en la piel y mejorar la reparación de la barrera cutánea. Debido a las cantidades bajas estimuladas de beta defensina, y debido a que las composiciones en realidad no contienen defensinas, es cuestionable que estas composiciones produzcan resultados significativos desde el punto de vista cosmético.

Cuando una definición o el uso de un término en una referencia incorporada es inconsistente o contrario a la definición de ese término proporcionada en la presente descripción, se aplica la definición de ese término proporcionada en la presente descripción y la definición de ese término en la referencia no se aplica.

Por otra parte, se ha demostrado que las defensinas desempeñan una función significativa en la cicatrización de heridas. En el artículo de revista titulado "Stimulation of the follicular bulge LGR5+ and LGR6+ stem cells with the gut-derived human alpha defensin 5 results in decreased bacterial presence, enhanced wound healing, and hair growth from tissues devoid of adnexal structures" (Plast. Reconstr. Surg. 2013;132(5): 1159-71), Lough y otros informan una formulación que contiene alfa defensina 5 humana que en condiciones experimentales demostró el reclutamiento de células madre LGR5+ y LGR6+ hacia quemaduras de tercer grado en ratones, lo que aceleró la cicatrización de la herida. Sin embargo, estos hallazgos dejan muchas interrogantes. Por ejemplo, en las condiciones experimentales descritas por Lough y otros, no está claro si LGR5+ y LGR6+ se activaron por condiciones proinflamatorias y otros factores ya presentes en la herida o debido a la aplicación tópica de defensinas. Además, la formulación para la cicatrización de heridas usada por Lough y otros contenía concentraciones de defensinas a concentraciones con actividad antimicrobiana (por ejemplo, aproximadamente 105 ng/ml). Sin embargo, esta concentración alta de defensina puede hacer que cualquier composición cosmética resultante sea más alergénica y más costosa.

Por lo tanto, aunque se conocen composiciones que contienen defensinas y estimulantes de defensinas, existe la necesidad de una formulación cosmética tópica para el uso en la piel sana que haga uso de las defensinas para reducir la apariencia visual de la edad en la piel.

Resumen de la invención

La invención se define en las reivindicaciones adjuntas. Cualesquiera modalidades, aspectos o ejemplos que caigan fuera del alcance de dichas reivindicaciones se incluyen únicamente con fines ilustrativos y no forma parte de la presente invención. Se proporciona el uso de una combinación de una primera defensina y una segunda defensina para reclutar células madre LGR6+ en un espacio intracelular para reducir uno o más de los siguientes aspectos: la profundidad de las arrugas, la longitud de las arrugas, el ancho de las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de una superficie de la piel, oleaginosidad, manchas pardas y manchas rojas en la piel no lesionada, en donde la combinación de la primera y segunda defensinas es una combinación de alfa-defensina 5 y beta-defensina 3.

En un ejemplo, una formulación cosmética tópica incluye una defensina en un portador aceptable para el uso cosmético. Las formulaciones cosméticas tópicas que se prefieren están listas para usar y contienen la defensina a una concentración con eficacia subantimicrobiana, en donde la concentración es ineficaz para inhibir el crecimiento de un patógeno microbiano de manera terapéuticamente eficaz. Las formulaciones tópicas aún más preferidas pueden comprender además una mezcla de dos o más defensinas diferentes, en donde la concentración combinada de defensinas en la formulación es una concentración con eficacia subantimicrobiana.

Los inventores contemplan métodos para usar defensinas en concentraciones subantimicrobianas con eficacia en formulaciones tópicas para reclutar células madre LGR6+ en un espacio interfolicular en piel no lesionada. Se apreciará que los métodos para reclutar células madre LGR6+ pueden incluir una etapa de proporcionar una formulación tópica que contiene una concentración subantimicrobiana de al menos una defensina y una etapa adicional de aplicar la formulación a piel no lesionada para reducir al menos uno de los siguientes aspectos: profundidad de las arrugas, longitud de las arrugas, ancho de las arrugas, tamaño de los poros, irregularidad en la textura de una superficie de la piel, oleaginosidad, manchas pardas y manchas rojas.

El uso inventivo emplea alfa-defensina 5 y beta-defensina 3. En las composiciones tópicas y métodos de la invención se emplean alfa-defensina 5 y beta-defensina 3. Debe apreciarse que la defensina puede comprender una defensina sintética, una defensina humana, una defensina recombinante, una defensina de mono, una defensina de ratón, una defensina de rata, una defensina bovina, una defensina de oveja, una defensina de caballo, una defensina de conejo, una defensina de cerdo, una defensina de perro y/o una defensina de gato.

Con respecto a la concentración con eficacia subantimicrobiana de la primera defensina en la formulación cosmética tópica lista para usar, las concentraciones contempladas pueden estar entre 0,01 y 100 ng/ml, o entre 1 y 30 ng/ml, incluidos los puntos finales de cada intervalo. Además, las modalidades especialmente preferidas de la materia de la invención emplean concentraciones de defensinas de aproximadamente 22 ng/ml y aproximadamente 4,4 ng/ml en formulaciones listas para usar.

En dependencia de la naturaleza de la formulación tópica, debe reconocerse que las defensinas pueden encapsularse en liposomas u otras nanopartículas. En las formulaciones preferidas, las defensinas también pueden asociarse con un portador, en particular una proteína portadora tal como albúmina (por ejemplo, albúmina sérica humana, albúmina sérica bovina, albúmina de huevo y albúmina recombinante producida por arroz, otras plantas, bacterias o levaduras), además encapsularse en liposomas cuando sea conveniente.

Los inventores contemplan además que las formulaciones cosméticas tópicas también pueden incluir suplementos para proporcionar nutrición y soporte a las células madre LGR6+. Los suplementos típicos incluyen albúmina sérica humana, albúmina sérica bovina, albúmina de huevo, albúmina recombinante producida por arroz, otras plantas, bacterias o levaduras, hidrolizado vegetal, beta-ciclodextrina, glutamina, fosfolípidos, fibronectina, hialuronato, ácido hialurónico, hidrolizado vegetal, L-alanil-L-glutamina, gelatina, gelatina recombinante, Factor de Crecimiento Epidérmico (EGF), vitamina E, Nicotinato de Tocoferilo y ubiquinona, coenzima Q10, antioxidantes.

Los inventores han apreciado que las formulaciones cosméticas tópicas de la materia de la invención pueden incluirse en kits con mascarillas exfoliantes. Los kits especialmente preferidos incluyen una mascarilla, una formulación de tratamiento en crema y una formulación de tratamiento en suero.

Aspectos adicionales de la materia de la invención proporcionan métodos para tratar cicatrices, quemaduras solares, hematomas y otros trastornos de la piel en los que las capas epidérmicas de la piel están en gran parte intactas. Los métodos ilustrativos incluyen las etapas de proporcionar una formulación tópica que tiene al menos una defensina a una concentración con eficacia subantimicrobiana y aplicar la formulación a la piel no lesionada bajo un protocolo eficaz para reducir sustancialmente la apariencia de cicatrices, quemaduras solares, hematomas, etc.

Varios objetos, características, aspectos y ventajas de la materia de la invención se harán más evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de las modalidades preferidas, junto con las figuras de dibujo adjuntas en las que los números similares representan componentes similares.

Breve descripción del dibujo

La Figura 1 muestra fotografías lado a lado que muestran la reducción de las arrugas.

La Figura 2 muestra fotografías lado a lado que muestran una reducción de la apariencia de las manchas pardas.

Descripción Detallada

Los inventores descubrieron inesperadamente que las concentraciones subantimicrobianas de defensinas pueden lograr numerosos efectos convenientes en la piel no lesionada cuando se aplican en formulaciones tópicas listas para usar. Entre otras cosas, tales formulaciones tópicas proporcionaron 1) reducción significativa de las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de la piel, la grasa, las manchas pardas y las manchas rojas, 2) mejora del brillo de la piel, 3) aclarado de la piel, y/o 4) corrección de marcadores de envejecimiento de la piel tales como firmeza de la piel, contornos flácidos, líneas, arrugas, dilatación de los poros, impurezas, brillo o tono disparejo de la piel, imperfecciones de la superficie, lisura, claridad general, manchas de la edad, hidratación, sequedad, textura suave, luminosidad y enrojecimiento.

Como se usa en la presente descripción, el término "lista para usar" indica que la formulación tópica que contiene defensinas está en una forma que se presenta para la venta y aplicación. Se contempla que las formulaciones listas para usar pueden comprender una solución completamente combinada, crema, gel, suero, loción, etc. Alternativamente, la defensina puede envasarse en un contenedor separado (por ejemplo, en un frasco que bombea una solución de defensina con una crema que el usuario mezcla antes de aplicar a la piel intacta) y combinarse con otra formulación tópica en el momento del uso/aplicación.

Como también se usa en la presente descripción, la frase "concentración con eficacia subantimicrobiana" significa concentración o concentraciones de defensinas que se caracterizan por una incapacidad para inhibir la proliferación de microbios en una infección establecida. Típicamente, las formulaciones tópicas listas para usar no incluyen concentraciones mayores que 1 mg/ml. En modalidades preferidas, la concentración de defensinas cae entre 0,01 y 100 ng/ml, y aún más típicamente entre 1 y 30 ng/ml, en donde las concentraciones contempladas incluyen los puntos finales de cada intervalo. En modalidades aún más preferidas, las formulaciones cosméticas tópicas tienen concentraciones de defensinas de aproximadamente 22 ng/ml y 4,4 ng/ml. Como se usa en la presente descripción, cuando el término "aproximadamente" se usa junto con un número, "aproximadamente" significa un intervalo de más o menos diez por ciento del valor numérico proporcionado, incluidos los puntos finales. La mención de intervalos de valores en la presente descripción se destina simplemente a servir como método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que cae dentro del intervalo. A menos que se indique lo contrario en este documento, cada valor individual se incorpora a la especificación como si se mencionara individualmente en este documento.

Las formulaciones tópicas generales pueden incluir todas y cada una de las formulaciones adecuadas para el uso tópico cosmético, especialmente en la piel no lesionada. Como se usa en la presente descripción, el término piel "no lesionada" se refiere a la piel en la que la dermis y la hipodermis están sustancialmente intactas. Por lo tanto, visto desde una perspectiva diferente, la piel no lesionada parecerá intacta a simple vista, sin ninguna ruptura suficientemente grande o profunda para producir hemorragias. Por lo tanto, la piel no lesionada (o "sana") incluye piel envejecida y piel con quemaduras solares de primer grado, exposición ambiental, hematomas o estrato córneo parcialmente destruido. La piel no lesionada (o sana) también excluye la piel que muestra una infección persistente con patógenos que dan como resultado síntomas y signos visibles de infección.

Con respecto a la fuente de las defensinas, los inventores contemplan que las defensinas tanto de fuentes naturales como sintéticas pueden ser adecuadas para la incorporación en formulaciones tópicas. Por ejemplo, las defensinas pueden obtenerse a partir de plantas (por ejemplo, Arabidopsis, guisantes, tabaco y abeto falso), mamíferos u otros animales. Las defensinas ilustrativas derivadas de fuentes naturales pueden incluir defensinas humanas, defensinas de mono, defensinas de ratón, defensinas de rata, defensinas bovinas, defensinas de oveja, defensinas de caballo, defensinas de conejo, defensinas de cerdo, defensinas de perro y/o defensinas de gato.

Debido a sus cantidades relativamente bajas en un organismo vivo y al peso molecular bajo, generalmente se prefiere, sin embargo, que las defensinas sean defensinas sintéticas. Las defensinas sintéticas incluyen las defensinas producidas por síntesis química (por ejemplo, síntesis en fase sólida) o por tecnologías recombinantes (por ejemplo, producidas por bacterias, levaduras, cultivos de tejidos, plantas o animales recombinantes). Los inventores contemplan además que los análogos de defensinas tales como hapivirinas y diprovirinas pueden usarse en algunas modalidades de la materia de la invención. Aún más, los inventores contemplan además que las defensinas también pueden modificarse para aumentar su actividad y especificidad para mejoras estéticas de la apariencia de la piel. Por ejemplo, las defensinas pueden desplegarse y replegarse en condiciones controladas para determinar la formación adecuada de enlaces disulfuro (que puede supervisarse por análisis MS y/o espectroscopía CD). Alternativamente, se contemplan modificaciones químicas (por ejemplo, el uso de aminoácidos no naturales para aumentar el tiempo de semivida o aminoácidos proteinogénicos derivatizados para aumentar la lipofilicidad) para adaptar las defensinas a una necesidad particular.

Independientemente de la fuente de las defensinas, debe apreciarse que la actividad específica de las defensinas depende de varios factores, incluidos la forma isomérica y la estructura terciaria de la proteína final. Por lo tanto, y especialmente cuando la defensina es sintética, los grupos protectores ortogonales pueden usarse para proteger residuos de cisteína seleccionados, que después pueden desprotegerse individualmente y enlazarse con el residuo de cisteína objetivo correspondiente, lo que conduce a la formación coordinada de enlaces disulfuro no aleatorios. El uso de tales grupos protectores en la estrategia de síntesis puede dar lugar a defensinas con una actividad específica comparable a la actividad específica de la defensina nativa. Puede emplearse cualquier medida adecuada de caracterización y control de la calidad. Típicamente, la actividad específica de las defensinas incorporadas en las formulaciones tópicas de la invención se mide mediante la pureza determinada por HPLC. En modalidades ilustrativas, la defensina es entre 80 % y 100 % pura, más típicamente la defensina es al menos 90 % pura, o al menos 95 % pura, o al menos 99 % pura, o al menos 99,9 % pura. Además, la secuencia de aminoácidos y la formación de enlaces disulfuro adecuadas pueden confirmarse por MS/MS en tándem, por ejemplo.

Con respecto a la concentración adecuada de defensinas en las formulaciones cosméticas presentadas en la presente descripción, se contempla que todas las concentraciones se consideran adecuadas siempre que tales concentraciones tengan eficacia cosmética (es decir, mejora la apariencia visual de la piel sana y especialmente 1) reduce las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de la piel, la grasa, las manchas pardas y/o las manchas rojas, 2) mejora el brillo de la piel, 3) aclara la piel, y/o 4) corrige marcadores de envejecimiento de la piel tales como firmeza de la piel, contornos flácidos, brillo o tono disparejo de la piel, imperfecciones de la superficie, lisura, claridad general, manchas de la edad, hidratación, sequedad, textura suave, luminosidad y enrojecimiento). Por lo tanto, debe tenerse en cuenta que la formulación cosmética se destina al uso en la mejora de la apariencia visual de la piel sana envejecida. En otras palabras, las concentraciones empleadas en la materia de la invención no se destinan a ser terapias para el tratamiento de cortes, quemaduras de tercer grado u otras lesiones en las que haya una pérdida de la integridad en las capas de la epidermis y la dermis (típicamente asociadas con hemorragias y/o formación de postillas). Por consiguiente, la concentración total de defensinas (un solo tipo o combinación de distintas defensinas) en la formulación cosmética final aplicada a la piel estará entre 0,01 ng/ml y 100 ng/ml, o entre 0,1 ng/ml y 100 ng/ml, o entre 1 ng/ml y 100 ng/ml, o entre 2 ng/ml y 80 ng/ml, o entre 4 ng/ml y 60 ng/ml, o entre 1 ng/ml y 30 ng/ml. Por lo tanto, las composiciones preferidas incluyen defensinas a una concentración de al menos 0,01 ng/ml, al menos 0,1 ng/ml, al menos 1 ng/ml, o al menos 4 ng/ml, pero no más de 200 ng/ml, no más de 100 ng/ml, no más de 75 ng/ml o no más de 50 ng/ml.

En la mayoría de los casos la defensina se asocia con una proteína aceptable para el uso cosméti

estabilidad y/o las características de suministro. En este contexto, se debe señalar que la asociación es preferentemente no covalente (por ejemplo, electrostática, iónica, hidrófoba, etc.), sin embargo, no se excluye la unión covalente a un grupo lateral de la proteína. Las proteínas ilustrativas incluyen lactoferrina, transferrina y albúmina (por ejemplo, albúmina sérica humana, albúmina sérica bovina y albúmina de huevo, albúmina recombinante). Las defensinas y proteínas portadoras pueden estar en varias relaciones, incluidas las relaciones equimolares, submolares y supramolares. Además, pueden usarse combinaciones de dos o más proteínas portadoras. Por ejemplo, en una formulación en la que se usan dos defensinas, una defensina puede asociarse con un portador, y la otra defensina puede asociarse con un portador diferente. Por lo tanto, se contemplará cualquier combinación de defensinas y portadores.

Aún en aspectos contemplados adicionales, las defensinas (y las proteínas portadoras) pueden encapsularse en formulaciones aceptables para el uso cosmético y especialmente formulaciones que usan una membrana lipídica. Por ejemplo, se contemplan especialmente los liposomas, microcápsulas, nanocápsulas, micropartículas, nanopartículas, sistemas de suministro de micropartículas. Una descripción de algunos sistemas de suministro cosmético aceptables para el uso cosmético puede encontrarse en Maherani y otros, "Liposomes: A Review of Manufacturing Techniques and Targeting Strategy", Current Nanoscience; 7:436-452 (2011). Un método preferido de fabricación de liposomas es el método de cizallamiento. Los sistemas de suministro cosmético preferidos se asemejan a las membranas de origen natural, son flexibles y pueden penetrar en los espacios intersticiales entre las células. Se contempla además que los sistemas de suministro cosmético pueden tener estructuras de monocapa, bicapa (por ejemplo vesícula unilamelar o ULV) o multicapa (por ejemplo vesícula multilamelar o MLV). Además, los liposomas multicapa, microcápsulas, microsomas y nanocápsulas pueden tener estructuras anidadas (por ejemplo vesícula multivesicular o MVV). Los sistemas de suministro cosmético usados en las formulaciones tópicas pueden variar en tamaño de 500 nm a 10 micras. En la preparación de los sistemas de suministro cosmético, se contemplan todas las composiciones lipídicas aceptables para el uso cosmético, especialmente los lípidos aceptables para el uso farmacéutico. En la mayoría de los casos los sistemas de suministro cosmético preferidos comprenden moléculas anfipáticas o anfifílicas tales como fosfolípidos o combinaciones de fosfolípidos (por ejemplo, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, ácido fosfatídico, fosfatidilserina y fosfoinosítidos). Además, en algunos casos los sistemas de suministro cosmético contemplados pueden contener aditivo(s) tales como esteroles, polietilenglicol, colesterol, dicetilfosfato, estearilamina, etc. Con respecto a la cantidad de sistemas de suministro incorporados en cada formulación lista para usar, el contenido del sistema de suministro cosmético se ajustará típicamente para lograr una concentración subantimicrobiana de defensinas dentro de un intervalo preferido. Las vesículas/liposomas unilamelares pueden producirse con el uso de técnicas de cizallamiento alto. Estas vesículas tienen un potencial Zeta mayor que el liposoma típico, lo que permite un tamaño de partícula más pequeño y uniforme con mayor estabilidad. El potencial Zeta es un indicador de la carga electrónica en la superficie de cualquier material macroscópico que está en contacto con un líquido. Este puede usarse para predecir y controlar la estabilidad de las suspensiones; cuanto más alto sea el potencial Zeta, mayor será la estabilidad de la molécula debido a que las partículas cargadas son capaces de repelerse y superar su afinidad innata a la asociación.

Debe tenerse en cuenta que las defensinas, las proteínas portadoras, los liposomas u otras estructuras membranosas tienen un peso molecular que supera el suministro transmembrana e incluso el suministro a través del estrato córneo. Sin embargo, como se analiza en más detalle, las defensinas tienen un efecto profundo sobre la actividad de las células madre en las capas dérmica e hipodérmica. Aunque sin desear estar obligados por ninguna teoría o hipótesis, los inventores contemplan que las formulaciones liposómicas tienen la capacidad de transportar las defensinas a través de una ruta intersticial y/o invadir el folículo piloso a una profundidad y concentración suficientes para activar células LGR6+. Visto desde otra perspectiva, se cree que el uso de sistemas de suministro cosmético ayuda al suministro de defensinas dado que no se espera que las defensinas per se penetren en el estrato córneo de la piel (que actúa como una barrera para moléculas con pesos moleculares mayores que 500 Da). Por otra parte, cuando se asocia con albúmina (65-70 kDa) y/o liposomas es, al menos conceptualmente, aún más difícil que la composición de defensinas penetre la piel intacta. Por lo tanto, los inventores plantean la hipótesis de que el mecanismo de suministro de defensinas es diferente en la piel intacta en comparación con la piel dañada o lesionada.

En otro aspecto, los inventores proporcionan ventajosamente ingredientes adicionales que nutren y brindan soporte a las células madre reclutadas en la piel sana. Por ejemplo, la albúmina (por ejemplo, albúmina sérica humana, albúmina sérica bovina), albúmina de huevo (clara de huevo), albúmina recombinante, hidrolizado vegetal y p-ciclodextrina, glutamina, fosfolípidos (liposomas), fibronectina, hialuronato, hidrolizado vegetal, L-alanil-L-glutamina, gelatina, vitamina E (nicotinato de tocoferilo), ubiquinona (coenzima Q¹⁰), gelatina, gelatina recombinante, ácido hialurónico, Factor de Crecimiento Epidérmico pueden proporcionar nutrición y soporte a las células madre.

Aún en aspectos contemplados adicionales, el tratamiento cosmético de la piel sana puede asistirse además por medio de procedimientos complementarios, y los procedimientos contemplados especialmente incluyen la exfoliación química y/o mecánica. Por ejemplo, la exfoliación química puede realizarse mediante el uso de una o más proteasas (por ejemplo, papaína, Extracto de Fermento de Lactobacillus/Calabaza

Extracto de Fermento de Lactobacillus/fruto de Punica Granatum), alfa-hidroxi ácidos, etc. mientras que la exfoliación mecánica puede realizarse mediante el uso de cristales de azúcar, materia vegetal celulósica, decapado con cinta, CO²congelado, microesferas poliméricas y gránulos de sílice.

Mediante el uso de las composiciones presentadas en la presente descripción, los inventores descubrieron que las formulaciones cosméticas que incluían las defensinas de acuerdo con la reivindicación 1 reducen al menos uno de los siguientes aspectos: la profundidad de las arrugas, la longitud de las arrugas, el ancho de las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de una superficie de la piel, oleaginosidad, manchas pardas. y manchas rojas en la piel no lesionada.

Ejemplos

Aunque las formulaciones cosméticas pueden prepararse mediante el uso de cualquier cantidad de ingredientes y formulaciones conocidos en la técnica, las formulaciones tópicas preferidas incluyen aquellas listas para usar y que pueden aplicarse por un usuario. Por lo tanto, con respecto a los portadores aceptables para el uso cosmético, se contemplan todos los portadores aceptables para el uso cosmético e incluyen cremas, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en aceite, espumas, mousses, pomadas, lociones, suspensiones, suero, geles, etc.

Lista de ingredientes de formulación de crema cosmética tópica ilustrativa:

Agua (Aqua), Oleosomas de Carthamus Tinctorius (Cártamo), Manteca de Butyrospermum Parkii (Karité), Aceite de Semilla de Macadamia Integrifolia, Niacinamida, Extracto de Levadura, Acriloildimetiltaurato de Amonio/Copolímero VP, Aceite de Semilla de Helianthus Annuus (Girasol), Fosfolípidos, Alfa-Defensina 5, Beta-Defensina 3, Ácido Hialurónico, Extracto de Raíz de Ophiopogon Japonicus, Extracto Hidrolizado de Candida Saitoana, Extracto de coral blando, Extracto de Frutas de Lycium Chinense, Extracto de Frutas de Vaccinium Angustifolium, Extracto de Frutas de Vaccinium Marcrocarpon (Arándano), Extracto de Hojas de Rosmarinus Officinalis (Romero), Pantenol, Albúmina, Acetato de Tocoferilo, Ubiquinona, L-Alanil-L-Glutamina, Fermento Filtrado de Leuconostoc/Raíz de Rábano, Gelatina, SH Oligopéptido-1, Goma Xantana, Ácido Fítico, Polisorbato 20, Triglicérido Caprílico/Cáprico, Fenoxietanol, Caprilil Glicol, Etilhexilglicerina, Hexilen Glicol, Sorbato de Potasio, Cloruro de Sodio, Fragancia.

Lista de ingredientes de formulación de suero cosmético tópico ilustrativo:

Agua (Aqua), Ciclopentasiloxano, Glicerina, Niacinamida, Filtrado de Fermento de Sinorhizobium Meliloti, Dimeticona, Polisorbato 20, Polímero reticulado de Dimeticona/Vinil Dimeticona, Lauril PEG-9 Polidimetilsiloxietil Dimeticona, Copolímero de Acriloildimetiltaurato de Amonio/VP, Fosfolípidos, Alfa-Defensina 5, Beta-Defensina 3, Palmitoil Tripéptido-38, Hialuronato de Sodio, Extracto de Arabidopsis, Extracto de Thaliana, Extracto de coral blando, Ergotioneína, Aceite de Semilla de Helianthus Annuus (Girasol), Extracto de Hojas de Rosmarinus Officinalis (Romero), SH Oligopéptido-1, Acetato de Tocoferilo, Ubiquinona, Filtrado de Fermento de Leuconostoc/Raíz de Rábano, Albúmina, Gelatina, L-Alanil-L-Glutamina, Triglicérido Caprílico/Cáprico, Ceti1 Hidroxietilcelulosa, Lecitina, Hidroxipropil Ciclodextrina, Ácido Fítico, Fenoxietanol, Caprilil Glicol, Etilhexilglicerina, Hexilen Glicol, Cloruro de Sodio.

Formulación de liposomas ilustrativa:

La Tabla 1 a continuación muestra una formulación de liposomas de suministro cosmético ilustrativa que incluye dos tipos de defensinas. Estos liposomas se incorporan típicamente en una formulación cosmética a una fracción de aproximadamente 1,0 % en peso a 10,0 % en peso para la mayoría de las aplicaciones de cuidado de la piel.

Tabla 1. Formulación de liposomas ilustrativa

Componente Concentración

Agua (libre de proteasas) hasta 100 %

Albúmina 0,1-1,0 mg/ml

L-alanil-L-glutamina 0,1-1,0 mg/ml

Gelatina 2-200 mg/ml

Proteínas de matriz 1-100 ng/ml

Alfa-defensina 5 humana 1-200 ng/ml

Beta-defensina 3 humana 1-200 ng/ml

Factores de crecimiento (por ejemplo, EGF, FGF-2) 0,1-100 ng/ml

Fosfolípidos 2-20 % en peso

Antioxidantes 0,3-3 % en peso

Aún en un aspecto adicional de la materia de la invención, las formulaciones cosméticas tópicas pueden ofrecerse juntas como un kit. Los kits preferidos incluyen una formulación de mascarilla y una formulación de tratamiento en crema o suero que contiene defensinas. Los kits aún más preferidos incluyen una formulación de mascarilla y ambas formulaciones de tratamiento en crema y suero que contienen defensinas.

En la fabricación de formulaciones de defensinas cosméticas, se contempla que las preparaciones de defensinas concentradas pueden añadirse a formulaciones cosméticas de base de manera que la concentración de la defensina en el producto listo para usar esté a una concentración con eficacia subantimicrobiana objetivo. En dependencia de la formulación deseada, las defensinas pueden incorporarse en preparaciones concentradas como soluciones, asociadas con proteínas portadoras, y más típicamente como formulaciones liposómicas. Tales preparaciones de defensinas concentradas pueden añadirse a las formulaciones cosméticas de base en proporciones como se proporciona a continuación:

Loción corporal (aceite en agua)

a) Aceite de ricino hidrogenado con PEG-7 2,00 %

Laurato de glicerilo PEG-20 1,00 %

Cocoglicéridos 3,00 %

alcohol cetearílico al 1,00 %

isononanoato de cetearilo 4,00 %

estearato de octilo al 4,00 %

fenoxietanol, metilparabeno 0,30 %

etilparabeno, butilparabeno,

propilparabeno, isobutilparabeno

b) agua, destilada 73,40 %

fenoxietanol, metilparabeno, 0,30 %

etilparabeno, butilparabeno,

propilparabeno,

isobutilparabeno, 3,00 %

glicerina

c) Preparación de defensina concentrada 5,00 %

d) copolímero de acrilamidas, aceite mineral 3,00%

C13-C14 Isoparafina, polisorbato 85

La mezcla a) se funde a aproximadamente 70 °C y la mezcla b) se calienta a aproximadamente 70 °C y se añade a la mezcla a) mientras se agita. La agitación continúa hasta que la loción se haya enfriado a aproximadamente 30 °C. Después se añaden c) y d) mientras se agita y la loción se homogeniza.

Loción en gel

a) copolímero de acrilamidas, aceite mineral, 5,00 %

C13-14 isoparafina, polisorbato 85

miristato de mireth-3 4,00 %

b) agua, destilada 85,00 %

fenoxietanol (y) metilparabeno (y) 0.50 %

etilparabeno (y) butilparabeno (y)

propilparabeno (e) isobutilparabeno

goma xantana 0,50 %

c) Preparación de defensina concentrada 5,00 %

La mezcla a) se disuelve a aproximadamente 50 °C. La mezcla b) se dispersa a temperatura ambiente y se añade a a) mientras se agita. Después, se añade la composición c) mientras se agita.

Crema de aceite en agua

a) alcohol cetearílico (y) cetearet-20 8,00 %

cocoglicéridos 2,00 %

alcohol cetearílico 2.00 %

dicaprilil éter 8.00 %

erucato de oleilo 7,00 %

fenoxietanol, metilparabeno, 0,30 %

etilparabeno, butilparabeno,

propilparabeno, isobutilparabeno

b) agua, destilada 62.40 %

fenoxietanol, metilparabeno, 0,30 %

etilparabeno, butilparabeno,

propilparabeno, isobutilparabeno

glicerina al 5,00 %

c) Preparación de defensina concentrada 5,00 %

La mezcla a) se funde a aproximadamente 70 °C y la mezcla b) se calienta a aproximadamente 70 °C y se añade a la mezcla a) mientras se agita. La agitación continúa hasta que la crema se haya enfriado a aproximadamente 30 °C. Después, se añade la composición c) mientras se agita y la crema se homogeniza.

Crema de agua en aceite

a) dilinoleato de diisostearoil poligliceril-3 dimérico 3,00 %

cera de abejas 0,60 %

aceite de ricino, hidratado 0,40 %

parafina sublíquida 5,00 %

isohexadecano 10,00 %

Éter estearílico PPG-15 2,00 %

dimeticona 0,50 %

fenoxietanol, metilparabeno, 0,30 %

etilparabeno, butilparabeno,

propilparabeno, isobutiparabeno

b) agua, destilada 68,40 %

fenoxietanol, metilparabeno, 0,30 %

etilparabeno, butilparabeno,

propilparabeno, isobutilparabeno

glicerina 3,00 %

MgSO4 * ⁷H²O 1,00 %

c) Preparación de defensina concentrada 5,00 %

d) dimetil sililato de sílice 0,50 %

La mezcla a) se calienta a aproximadamente 80 °C, la mezcla b) se lleva a 80 °C y se añade a a) mientras se agita. La agitación continúa hasta que la crema se haya enfriado a aproximadamente 30 °C, después se añaden c) y d) y la crema se homogeniza.

Champú

Polioxietileno de sodio lauril éter sulfato 15,0 %

Poliglucósido de alquilo 4,0 %

Amida de ácido N-etanol-N-metil dodecanoico 3,0 %

EDTA-Na²0,3 %

Ácido málico para ajustar el pH a 6,0 q.s.

Preservante 0,5 %

Preparación de defensina concentrada 10,0 %

Agua purificada equilibrio

Total 100,0 %

Todos los ingredientes se mezclan entre sí y el volumen se lleva a aproximadamente 90 ml. Luego se ajusta el pH y el volumen se ajusta finalmente a 100 ml (todos los porcentajes son % en peso).

Jabón corporal

Polioxietileno de sodio lauril éter sulfato 16,0 %

Polioxietileno de sodio 5,0 %

Amida de ácidos grasos de N-etanol-N-metilo del aceite de grano de palma 2,5 %

Glicerina 3,0 %

Celulosa cationizada 0,1 %

Diestearato de etilenglicol 3,0 %

EDTA-Na²0,3 %

Ácido cítrico para ajustar el pH a 5,7 q.s

Preservante 0,5 %

Preparación de defensina concentrada 7.5 %

Agua purificada equilibrio

Total 100,0

Todos los ingredientes se mezclan entre sí y el volumen se lleva a aproximadamente 90 ml. Después se ajusta el pH y el volumen se ajusta finalmente a 100 ml (todos los porcentajes son en % en peso).

Limpiador facial

Polioxietileno de sodio lauril éter sulfato 20,0 %

Amida de ácido N-etanol-N-metil dodecanoico 4,8 %

Glicerina 3,0 %

Hidroxietilcelulosa 0,3 %

Diestearato de etilenglicol 1,5 %

EDTA-Na²0,3 %

Ácido cítrico para ajustar el pH a 6,0 q.s.

Preservante 0,5 %

Preparación de defensina concentrada 10,0 %

Agua purificada equilibrio

Total 100,0

Los inventores probaron una formulación preferida de la materia de la invención en dos estudios clínicos, el Estudio Clínico 1 y el Estudio Clínico 2 (estudio con enmascaramiento doble). Ambos estudios se realizaron bajo la supervisión del Dr. Gregory Keller, M.D, F.A.C.S en la Clínica de Cirugía Plástica de Santa Bárbara, California. El diseño de ambos estudios fue sustancialmente similar. Ambos estudios clínicos examinaron a 10 sujetos durante 6 semanas. Cada sujeto recibió una crema, un suero y una máscara. La mitad de los sujetos (Estudio 2) recibió formulaciones de la crema, suero y máscaras que contienen defensinas. La otra mitad de los sujetos recibió formulaciones de placebo de la crema, suero y máscara que eran idénticas en composición al grupo experimental, excepto que las formulaciones no contenían defensinas.

Los inventores midieron las puntuaciones individuales de salud de la piel de cada participante antes y después del tratamiento mediante el uso del sistema QuantifiCare™ 3D LifeViz™ Imaging Clinical System y del protocolo desarrollado por QuantiFicare Inc. (www.quantifi- care.com). Los rostros de cada uno de los participantes se escanearon mediante el uso del sistema 3D LifeViz™ y se les asignó un valor para cada una de las categorías siguientes: profundidad, longitud y ancho de las arrugas; profundidad de los poros; lisura de la piel; oleaginosidad de la piel; manchas pardas de la piel y manchas rojas de la piel. Los valores resultantes de cada participante se compararon después contra una población con el mismo género, edad y tipo de piel, con el uso de la base de datos de poblaciones de referencia de QuantiFicare. La puntuación de salud de la piel resultante de cada participante fue una calificación en percentiles de la salud de la piel en comparación con una población de personas con la misma edad, género y tipo de piel.

Por ejemplo, la Tabla 2 (a continuación) muestra la edad promedio de cada grupo de estudio en comparación con una población con la edad, el género y el tipo de piel correspondientes. La edad se calculó con el uso del parámetro de arrugas, que es una combinación de profundidad, longitud y ancho de las arrugas en la frente y las mejillas.

Tabla 2. Calificación de la edad promedio del Estudio Clínico 2 antes y después del tratamiento

Calificación del promedio de edad

Grupo antes del tratamiento después de 6 semanas

Placebo 77% 74"%

Grupo de prueba 61 % 81 %

La Figura 1 muestra las imágenes antes (A) y después (B) adquiridas por un sistema 3D LifeViz™ del participante 3-PC (mujer de 63 años) del Estudio Clínico 1. El participante 3-PC recibió la formulación experimental. Las mediciones del sistema 3D LifeViz™ mostraron que el participante 3-PC tuvo una reducción en la estimación de la edad visible de la piel (en base al valor de lisura de la piel calculado por el sistema 3D LifeViz™) de 64 a 37 años. Las fotos no se han retocado.

La Figura 2 muestra las imágenes de antes (A) y después (B) adquiridas por un sistema 3D LifeViz™ con el filtro de manchas pardas del participante 8-IK (mujer) del Estudio Clínico 1. El participante 3-PC recibió la formulación experimental. Las imágenes muestran una reducción de las manchas pardas en el rostro como resultado del tratamiento. Las fotos no se han retocado.

Debería ser evidente para los expertos en la técnica que son posibles muchas más modificaciones además de las ya descritas sin apartarse de los conceptos inventivos del presente documento. Por lo tanto, la materia de la invención no debe restringirse excepto en el alcance de las reivindicaciones anexas. Además, al interpretar la descripción y las reivindicaciones, todos los términos deben interpretarse de la manera más amplia posible de acuerdo con el contexto. En particular, los términos "comprende" y "que comprende" deben interpretarse como que se refieren a los elementos, componentes o pasos de una manera no exclusiva, lo que indica que los elementos, componentes o pasos a los que se hace referencia pueden estar presentes, o utilizados, o combinados con otros elementos, componentes o etapas que no se mencionan expresamente. Cuando las reivindicaciones de la descripción se refieren a al menos uno de algo seleccionado del grupo que consiste en A, B, C y N, el texto debe interpretarse en el sentido de que requiere solo un elemento del grupo, no A más N, o B más N, etc. Además, como se usa en la presente descripción y a lo largo de las reivindicaciones que siguen, el significado de "un", "una" y "el/la" incluye la referencia en plural a menos que el contexto lo indique claramente de cualquier otra manera. Además, como se usa en la descripción de este documento, el significado de "en" incluye "en" y "sobre" a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de una combinación de una primera defensina y una segunda defensina en el reclutamiento de células madre LGR6+ hacia un espacio intracelular para reducir uno o más de: la profundidad de las arrugas, la longitud de las arrugas, el ancho de las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de una superficie de la piel, la oleaginosidad, las manchas pardas y las manchas rojas en la piel no lesionada, en donde la combinación de la primera y segunda defensinas es una combinación de alfa-defensina 5 y beta-defensina 3.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la primera defensina se selecciona del grupo que consiste en una defensina sintética, una defensina recombinante, una defensina humana, una defensina de mono, una defensina de ratón, una defensina de rata, una defensina bovina, una defensina de oveja, una defensina de caballo, una defensina de conejo, una defensina de cerdo, una defensina de perro y una defensina de gato.

3. El uso de una de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la primera defensina se proporciona a una concentración con eficacia subantimicrobiana de menos de 1 mg/mL.

4. El uso de una de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la primera defensina se proporciona a una concentración con eficacia subantimicrobiana de 0,01 ng/ml a 100 ng/ml.

5. El uso de una de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la primera defensina se aplica tópicamente a razón de 0,1 a 500 mg por cm2.

6. El uso de una de las reivindicaciones 1 a 3 y 5, cuando se aplica como un medicamento de uso tópico.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el medicamento es un champú, un limpiador facial, una loción corporal o una crema que comprende la primera defensina a una concentración de 1 ng/ml a 10 mg/ml.

8. El uso de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en donde el medicamento es una formulación de liposomas que comprende la primera y segunda defensinas, en donde la concentración de defensina es hasta 10 mg/mL.