ES2870478T3 - Composición para prevenir el olor que contiene microorganismos inodoros - Google Patents
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Abstract
Una composición para prevenir olores que contiene microorganismos inodoros de Caulobacter vibrioides HKMC-14 (Número de acceso: KCCM 11685P), Bradyrhizobium diazoefficiens HKMC-15 (Número de acceso: KCCM 11686P) y Bradyrhizobium daqingense HKMC-16 (Número de acceso: KCCM 11687P), o una solución de cultivo de los mismos.
Description
DESCRIPCIÓN
Composición para prevenir el olor que contiene microorganismos inodoros
[Campo técnico]
[0001] La presente descripción se refiere a una composición para prevenir olores que contienen microorganismos inodoros de Caulobacter vibrioides, Bradyrhizobium diazoefficiens y Bradyrhizobium daqingense, o una solución de cultivo de los mismos y un procedimiento para prevenir olores que los usan.
[Antecedentes de la técnica]
[0002] El aire limpio es reconocido como esencial para la salud y el bienestar de los humanos, y el aire que induce olores desagradables o el aire contaminado es un culpable principal que altera el ambiente agradable. Por ejemplo, la calidad del aire interior insatisfactorio en condiciones cerradas es causada por los siguientes dos factores importantes: uno es la contaminación del aire interior que se genera directamente a partir del propio material (edificio, vehículo, etc.) que constituye el entorno cerrado (edificio, vehículo, etc.) y el otro factor es el olor causado por la actividad humana o una sustancia alimentada desde el exterior.
[0003] Los sistemas de aire acondicionado son sistemas que reducen la temperatura interior y optimizan el ambiente interior, a fin de acondicionar el aire, que incluyen acondicionar la temperatura, la humedad, el flujo de aire y la limpieza del aire en edificios, vehículos, trenes, barcos, aeronaves y similares. Estos sistemas de aire acondicionado son cada vez más populares con la mejora de los estándares de vida. Sin embargo, aunque la prevalencia de los sistemas de aire acondicionado ha dado lugar a un gran desarrollo de las funciones básicas, muchas cuestiones ambientales para mejorar la calidad del aire interior siguen sin resolverse.
[0004] Aunque se sabe que la causa del olor de los aires acondicionados entre los sistemas de aire acondicionado son metabolitos de hongos y bacterias, no hay datos específicos con respecto a los tipos de hongos y bacterias, y las cantidades de metabolitos secretados por los microorganismos correspondientes.
[0005] Debido a la estructura del sistema de aire acondicionado, todo el aire que pasa a través del soplador pasa a través del núcleo del evaporador (núcleo de eva). Cuando se lleva a cabo un intercambio de calor entre refrigerante frío y aire, el agua condensada se condensa sobre la superficie del núcleo del evaporador debido a la diferencia de temperatura. La condensación continua del agua condensada proporciona un ambiente beneficioso para la propagación de hongos y bacterias. Cuando proliferan hongos y bacterias en el núcleo del evaporador expuesto al aire exterior, se producen compuestos orgánicos volátiles (mVOC) de microorganismos a partir de metabolitos de bacterias perforadas sobre la superficie del núcleo de evaporador. Cuando el aire que pasa a través del núcleo del evaporador es soplado dentro de la habitación, la habitación puede estar expuesta al olor de hongos y bacterias tras su uso durante mucho tiempo debido a los compuestos orgánicos volátiles producidos por los microorganismos.
[0006] La superficie del núcleo del evaporador donde se emiten olores está cubierta con una biopelícula, ya que el sistema de aire acondicionado se usa durante un largo período de tiempo. Las biopelículas están compuestas por bacterias, cúmulos celulares y EPS. El EPS contiene una variedad de ingredientes que incluyen proteínas, polisacáridos, ácidos poliurónicos, ácidos nucleicos, lípidos y similares. Sobre la superficie del núcleo del evaporador, una variedad de bacterias y hongos proliferan usando biopelículas como nutrientes para liberar compuestos orgánicos (mVOC) como metabolitos mediante los microorganismos. En este momento, el olor emitido por los compuestos orgánicos (mVOC) se conoce como rancidez entre varios factores de olor desagradable de los aires acondicionados.
[0007] Aunque varios tipos de fragancias para eliminar el olor desagradable están disponibles comercialmente, no pueden eliminar fundamentalmente hongos y bacterias que crecen en el núcleo del evaporador, y simplemente sirven para aliviar temporalmente el olor desagradable. Actualmente, los agentes antimicrobianos disponibles comercialmente se venden debido a las actividades antimicrobianas contra patógenos comunes, aun cuando no han sido desarrollados para atacar ciertos hongos o bacterias.
[0008] En consecuencia, la patente coreana abierta No. 10-2012-0020309 presentada por los presentes inventores describe un procedimiento para fabricar un núcleo de evaporador que incluye recubrir la superficie del núcleo de evaporador con una biopelícula hecha de un determinado microorganismo inodoro o fragante con el fin de prevenir la deposición o proliferación de bacterias u hongos que emiten un olor sobre la superficie del núcleo del evaporador.
[0009] Sin embargo, la descripción no sugiere qué bacterias son microorganismos inodoros, y no logra demostrar suficientemente los efectos relacionados con el hecho de si las bacterias pueden sobrevivir o no en el núcleo del evaporador cuando se recubre el núcleo del evaporador con la misma, y si se puede prevenir o no el crecimiento de microorganismos que inducen olores tales como hedores u olores desagradables.
[0010] El documento EP-A-2937414 describe una composición que comprende un Methylobacterium brachiatum HKMC-2 inodora.
[0011] El documento US-A-2015353399 describe composiciones que comprenden Bradyrhizobium diazoefficiens.
[Descripción]
[Problema técnico]
[0012] Los presentes inventores hicieron intentos de encontrar procedimientos para controlar de manera efectiva los microorganismos que generan olor usando microorganismos inodoros. Como resultado, aislaron con éxito cuatro especies de microorganismos que no generan olores en un sistema de aire acondicionado y completaron la presente descripción, basándose en el hallazgo de que, al formar una biopelícula con estos microorganismos o una combinación de los mismos, se puede prevenir el crecimiento de microorganismos que emiten un olor desagradable y, como resultado, se puede prevenir la generación de un olor desagradable.
[0013] Por lo tanto, la presente descripción se ha realizado en vista de los problemas anteriores, y uno de los objetos de la presente descripción es proporcionar una composición para prevenir olores que contiene microorganismos inodoros de Caulobacter vibrioides HKMC-14 (Número de acceso: KCCM11685P), Bradyrhizobium diazoefficiens HKMC-15 (Número de acceso: KCCM 11686P) y Bradyrhizobium daqingense HKMC-16 (Número de acceso: KCCM 11687P), o una solución de cultivo de las mismas.
[0014] Otro objeto de la presente descripción es proporcionar un núcleo de evaporador recubierto con la composición para prevenir olores.
[0015] Otro objeto de la presente descripción es proporcionar un procedimiento para fabricar un núcleo de evaporador inodoro que no genere olores en un aire acondicionado, que incluye recubrir un núcleo de evaporador con la composición para prevenir olores.
[0016] Otro objeto de la presente descripción es proporcionar un procedimiento para prevenir olores en un aire acondicionado, que incluye recubrir un núcleo de evaporador con la composición para prevenir olores.
[Solución técnica]
[0017] En un aspecto, la presente descripción proporciona una composición para prevenir olores que contiene un microorganismo inodoro o una solución de cultivo del mismo.
[0018] Los presentes inventores intentaron encontrar procedimientos capaces de controlar efectivamente los microorganismos que inducen olores usando microorganismos, en particular para eliminar fundamentalmente la causa de los olores generados desde un sistema de aire acondicionado. Como resultado, aislaron con éxito cuatro especies de microorganismos que no generan olores en un sistema de aire acondicionado e identificaron que, al formar una biopelícula usando estos microorganismos o una combinación de los mismos, se puede prevenir el crecimiento de microorganismos que emiten olores y, como resultado, se puede prevenir la generación de olores.
[0019] Tal como se usa en esta invención, el término "sistema de aire acondicionado" se refiere genéricamente a un sistema que puede mantener la temperatura, la humedad, la limpieza, el flujo o similares, del aire agradable en un área, de la cual una parte o su totalidad está aislada de un entorno al aire libre. Preferentemente, por ejemplo, el área aislada puede ser un área interior, de la cual una parte o su totalidad está aislada de un entorno al aire libre, como el interior de un edificio o el interior de un vehículo, tren, barco, aeronave o similar. Preferentemente, el sistema de aire acondicionado es, por ejemplo, un aire acondicionado.
[0020] Con base en la estructura del sistema de aire acondicionado, todo el aire que ha pasado a través de un soplador pasa a través del núcleo del evaporador, el agua condensada se condensa continuamente sobre la superficie del núcleo del evaporador debido a la diferencia de temperatura, proporcionando un entorno que es beneficioso para el crecimiento de microorganismos. Después de mucho tiempo, se forma una biopelícula. En este momento, los microorganismos metabolizan varios materiales interiores y exteriores como nutrientes presentes en el aire, generando olores derivados de compuestos orgánicos volátiles (mVOC) producidos como resultado del metabolismo.
[0021] Las biopelículas son una forma de comunidades microbianas en las que los microorganismos viven en racimos, tienen una estructura en la que una capa está rodeada por una membrana y sirven para proteger a los microorganismos del entorno exterior y proporcionar nutrientes. Las sustancias exopoliméricas (EPS) están presentes como un ingrediente que constituye la película y contienen una variedad de ingredientes tales como proteínas, polisacáridos, ácidos poliurónicos, ácidos nucleicos y lípidos. Sobre la superficie del núcleo del evaporador, varios microorganismos proliferan a partir de las sustancias como nutrientes y emiten olores desagradables de los
metabolitos.
[0022] Los presentes inventores aislaron microorganismos que no generan olores a partir del núcleo del evaporador y, como resultado del cultivo de los microorganismos, separaron y cultivaron cepas dominantes entre microorganismos que forman colonias. El procedimiento para separar y cultivar cepas dominantes se puede llevar a cabo usando una variedad de procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, los microorganismos dominantes se pueden seleccionar a través de enfoques morfológicos, tales como velocidad de dilución y color, tamaño o forma de las colonias.
[0023] El microorganismo dominante incluye el microorganismo Caulobacter, Bradyrhizobium o Methylobacterium, preferentemente Caulobacter vibrioides, Bradyrhizobium diazoefficiens, Bradyrhizobium daqingense o Methylobacterium brachiatum.
[0024] Los microorganismos en la presente invención se depositaron en el Centro de cultivo de microorganismos de Corea el 17 de abril de 2015 y proporcionaron los siguientes números de acceso: Caulobacter vibrioides HKMC-14 (Número de acceso: KCCM 11685P), Bradyrhizobium diazoefficiens HKMC-15 (Número de acceso: KCCM 11686P) y Bradyrhizobium daqingense HKMC-16 (Número de acceso: KCCM 11687P). El Methylobacterium brachiatum HKMC-17 (Número de acceso: KCCM 11688P) se describe y no se reivindica per se.
[0025] El microorganismo puede incorporarse solo o según la presente invención como una combinación de los mismos en la composición para prevenir olores.
[0026] La composición para prevenir olores según la presente descripción se puede usar para prevenir la habitabilidad de microorganismos inductores de olores y/o bloquear olores de los mismos. Es decir, la composición de la presente descripción puede recubrirse o rociarse sobre la totalidad o una determinada parte de los dispositivos generadores de olor (por ejemplo, sistemas de aire acondicionado, sistemas de eliminación de aguas residuales o similares), objetos (por ejemplo, cubos de basura, inodoros o similares), animales (por ejemplo, ganado contaminado o similares) o el cuerpo humano (por ejemplo, uso oral, pie diabético o similares) de modo que pueda usarse para prevenir la proliferación de microorganismos que causan olor.
[0027] La composición para prevenir olores según la presente descripción puede incluir además una variedad de ingredientes del medio de cultivo conocidos en la técnica para mejorar la capacidad de formar una biopelícula dependiendo del sujeto del recubrimiento. El medio que se puede incluir en la composición es, por ejemplo, un medio de agar, gelatina, alginato, carragenina o pectina, y es preferentemente un medio PTYG, R2A o LB cuando se aplica al núcleo del evaporador en el sistema de aire acondicionado.
[0028] Además, la composición para prevenir olores según la presente descripción puede incluir además una fragancia, un desinfectante o un agente antimicrobiano, además del microorganismo inodoro, a fin de bloquear olores desagradables, prevenir o eliminar bacterias que causan olores.
[0029] En una realización preferida de la presente descripción, la composición de la presente descripción está destinada a prevenir la emisión de olores desde un sistema de aire acondicionado.
[0030] Los sistemas de aire acondicionado que pueden aplicar la composición de la presente descripción incluyen sistemas que se pueden instalar en edificios, vehículos, trenes, barcos, aeronaves y similares, y se pueden usar para controlar la temperatura, humedad, flujo de aire o limpieza del aire.
[0031] El sujeto que se recubre con la biopelícula de la presente descripción es un sistema de aire acondicionado, y el sistema de aire acondicionado incluye un extrusor, un soplador, un núcleo de evaporador o similares, y en particular, un sujeto preferido que se recubre con la biopelícula de la presente descripción es un núcleo de evaporador.
[0032] Específicamente, la superficie del núcleo de evaporador en el sistema de aire acondicionado proporciona un entorno adecuado para el crecimiento y la proliferación de bacterias debido a la condensación del agua condensada derivada del intercambio de calor del aire. Después de un tiempo predeterminado, las bacterias adheridas crean una biopelícula y sobreviven como comunidades estables que son difíciles de eliminar. Es decir que los microorganismos inodoros se pueden hacer proliferar previamente para prevenir la proliferación de microorganismos con mal olor.
[0033] Con base en esta propiedad, los inventores de la presente invención descubrieron que, cuando previamente recubren el sistema de aire acondicionado o el núcleo del evaporador con cepas dominantes o microorganismos inodoros con excelente viabilidad, se puede formar una biopelícula en el núcleo del evaporador solo con comunidades de microorganismos, y la deposición y proliferación de olores y microorganismos inductores de olores se pueden inhibir significativamente (ejemplos comparativos 8 y 9, no según esta invención).
[0034] Mientras tanto, como se usa en esta invención, el término "inodoro" usado en relación con términos tales como microorganismos inodoros significa una condición en la que un sujeto no puede percibir nada mediante su órgano olfativo. El criterio de ausencia de olor también se muestra en el procedimiento de prueba del procedimiento de olor (Aviso No. 2007-17, Instituto Nacional de Investigación Ambiental).
[0035] En otro aspecto, la presente descripción proporciona un núcleo de evaporador recubierto con la composición para prevenir olores y un procedimiento para fabricarlo.
[0036] La aleta del núcleo del evaporador está hecha de aluminio o una aleación de aluminio y el núcleo del evaporador se produce usando aluminio tratado con antibacterianos o un material de aleación no tratado con antibacterianos. El material para el núcleo del evaporador no se limita al aluminio o una aleación de aluminio y es posible usar como material, además del aluminio, un metal con excelente conductividad térmica y resistencia a la corrosión superior, como el cobre, que también se puede usar para fabricar una aleación. En un automóvil eléctrico o similar, se conecta un intercambiador de calor a un elemento Peltier y se puede usar cualquier material que tenga una estructura similar o igual a la estructura que facilita el intercambio de calor.
[0037] El procedimiento para recubrir el núcleo de evaporador con la composición para prevenir olores que contienen los microorganismos inodoros o una solución de cultivo de los mismos se puede seleccionar de entre un procedimiento bien conocido en la técnica (por ejemplo, pulverización, aplicación o inmersión). Preferentemente, el núcleo de evaporador se sumerge en una solución de cultivo del microorganismo inodoro para permitir el recubrimiento de las aletas en el núcleo de evaporador, de modo que recubran de manera uniforme y exhaustiva toda la superficie del núcleo de evaporador. El recubrimiento puede llevarse a cabo al menos una vez.
[0038] La solución de cultivo del microorganismo inodoro es preferentemente una solución de cultivo de microorganismos que tiene una densidad óptica (D.O.) de 0,3 a 0,9, más preferentemente de 0,4 a 0,8.
[0039] Cuando se usa una solución de cultivo de microorganismos que tiene una D.O. de 0,3 a 0,9, la concentración de microorganismos que se puede adherir es de 104 ufc/g a 108 ufc/g, y cuando se usa una solución de cultivo de microorganismos que tiene una D.O. de 0,4 a 0,8, la concentración de microorganismos que se puede adherir es de 105 ufc/g a 107 ufc/g. Cuando se tiene en cuenta el hecho de que la concentración de microorganismos presentes en el núcleo de evaporador en un automóvil de segunda mano es de aproximadamente 106 ufc/g, en términos de la aplicación de vehículos, es más preferible unir los microorganismos en una concentración de 105 ufc/g a 107 ufc/g usando una solución de cultivo de microorganismos que tiene una O.D. de 0,4 a 0,8.
[0040] El microorganismo inodoro recubierto mediante el procedimiento descrito anteriormente se distribuyó uniformemente y creció sobre la superficie del núcleo de evaporador y pudo formar una biopelícula estabilizada sobre la misma durante un largo tiempo (30 días o más) (ejemplo comparativo 9, no según esta invención).
[0041] En otro aspecto, esta descripción proporciona un procedimiento para prevenir olores en un aire acondicionado, que incluye recubrir un núcleo de evaporador con la composición para prevenir olores.
[0042] En consecuencia, cuando se forma una biopelícula mediante recubrimiento con la composición para prevenir olores que contienen microorganismos inodoros o una combinación de los mismos según la presente descripción, la permeación y el crecimiento de microorganismos exteriores que pueden causar olores pueden prevenirse significativamente y los olores del sistema de aire acondicionado pueden prevenirse de manera efectiva.
[0043] Se describe y no se reivindica per se un procedimiento para detectar olores en un aire acondicionado que incluye recubrir un núcleo de evaporador con la composición para prevenir olores.
[0044] El hecho de que los microorganismos incluidos en la composición para prevenir olores emitan olores puede depender de los ingredientes de nutrientes de los que estos microorganismos se alimentan y los cuales metabolizan. Puede ser importante que no se genere un olor, aunque se alimente la fuente de nutrientes de la industria real a la que se aplican los microorganismos.
[0045] En el caso de un sistema de aire acondicionado, los microorganismos metabolizan diversos materiales de interiores o exteriores presentes en el aire, como nutrientes, y los contaminantes del aire interiores o exteriores, o ingredientes de escape (petróleo, como gasolina, aceite ligero o GLP) se convierten en fuentes de nutrientes de los mismos microorganismos. El hecho de que el sistema de aire acondicionado emita olores se puede detectar previamente cuando estas fuentes de nutrientes se introducen en el núcleo del evaporador recubierto con los microorganismos y se aplican a la industria.
[0046] Además, se describen y no se reivindican per se los microorganismos para recubrir un núcleo de evaporador para prevenir olores en un sistema de aire acondicionado, Caulobacter vibrioides HKMC-14 (Número de acceso: kCc M 11685P), Bradyrhizobium diazoefficiens HKMC-15 (Número de acceso: KCCM 11686P), Bradyrhizobium daqingense HKm C-16 (Número de acceso: KCCM 11687P) y Methylobacterium brachiatum HKMC
17 (Número de acceso: KCCM 11688P).
[0047] Los microorganismos se pueden usar solos (no según esta invención) o como una combinación de los mismos para recubrir un núcleo de evaporador a fin de prevenir olores en un sistema de aire acondicionado.
[Efectos ventajosos]
[0048] La presente descripción proporciona una composición para prevenir olores que contienen microorganismos inodoros de Caulobacter vibrioides HKMC-14 (Número de acceso: KCCM 11685P), Bradyrhizobium diazoefficiens HKMC-15 (Número de acceso: KCCM 11686P) y Bradyrhizobium daqingense HKm C-16 (Número de acceso: KCCM 11687P), o una solución de cultivo de las mismas. Además, esta descripción proporciona un núcleo de evaporador recubierto con la composición para prevenir olores y un procedimiento para fabricarlo. Además, la presente descripción proporciona un procedimiento para fabricar un núcleo de evaporador inodoro que no genera olores en un aire acondicionado, que incluye recubrir un núcleo de evaporador con la composición para prevenir olores.
[0049] Además, cuando se forma una biopelícula mediante el recubrimiento de un sujeto sobre el que se pueden cultivar microorganismos que causan olores con la composición para prevenir olores, la permeabilidad y el crecimiento de microorganismos exteriores que pueden causar olores se pueden prevenir significativamente y los olores se pueden prevenir de manera efectiva.
[Descripción de los dibujos]
[0050]
La FIG. 1 muestra una placa de petri para sembrar microorganismos inodoros después de esterilizar las aletas de aluminio y sumergirlas en un medio nutritivo;
la FIG. 2 muestra el número de microorganismos dependiendo del color de colonia para la combinación de prueba de supervivencia de 30 días (ejemplo comparativo 9, no según esta invención) de microorganismos aislados en taxi; y
la FIG. 3 muestra la relación de cepas analizadas por REP-PCR para la combinación de prueba de supervivencia de 30 días (ejemplo comparativo 9, no según esta invención) de microorganismos aislados en taxi.
[Mejor modo]
[0051] En lo sucesivo, la presente descripción se describirá de manera más detallada y con referencia a los ejemplos. Estos ejemplos se proporcionan solo para ilustrar la presente descripción y sería obvio para los expertos en la materia que el alcance de la presente descripción no está limitado por los ejemplos dependiendo del objeto de la presente descripción.
Ejemplo 1: Establecimiento de taxis olorosos de larga distancia
[0052] Los presentes inventores obtuvieron cinco taxis de larga distancia olorosos (Tabla 1), núcleos de evaporador separados, montados en modelos de vehículo A a E, y especímenes de núcleo de evaporador muestreados.
Ejemplo 2: Muestreo de especímenes del núcleo de evaporador
[0053] Las muestras de núcleo del evaporador adquiridas de los taxis de larga distancia A a E se sellaron en una bolsa de polietileno y se refrigeraron a 4 °C antes de su uso. Con el fin de aislar y cultivar los microorganismos, se recolectaron especímenes de aletas de 5 g de cualquier mancha, incluidas las partes delantera y trasera, en los respectivos núcleos del evaporador usando un alicate nasal largo esterilizado y, a continuación, se mezclaron antes
de su uso.
Ejemplo 3: Separación de microorganismos del núcleo de evaporador
[0054] Los microorganismos se separaron de los núcleos de evaporador según los siguientes procedimientos. ©Los especímenes extraídos de los núcleos de evaporador se mezclaron y se alimentaron a un mezclador. @ Se alimentó 1 x solución salina tamponada con fosfato (PBS) esterilizada en un mezclador de 200 ml.
@ El espécimen mezclado se mezcló con PBS durante 30 segundos.
© El mezclador se colocó sobre hielo durante un minuto.
© Las etapas @ y © se repitieron dos veces.
© La suspensión se centrifugó a 4 °C y 13.000 rpm durante 3 minutos.
@ Solo se recolectó el sobrenadante, el cual fue transferido a un tubo nuevo.
© El hisopo esterilizado se remojó con el sobrenadante y la superficie del núcleo del evaporador, de la que se recolectó la muestra, se limpió con el hisopo varias veces.
© Solo el cabezal del hisopo limpio se sumergió en el sobrenadante y se realizó un vórtice.
@ El precipitado obtenido en la etapa © se mezcló con la mezcla de la etapa © y la mezcla resultante se usó como material de inoculación.
[0055] Después de las etapas © a @, los microorganismos se separaron por desprendimiento físico de los núcleos del evaporador montados en los modelos de vehículo A a E.
Ejemplo 4: Cultivo separado de microorganismos
[0056] La separación de bacterias del aire acondicionado generalmente se lleva a cabo mediante la realización de cultivos en placas heterotróficas en bacterias heterotróficas aeróbicas que se denominan bacterias generales. Dos medios nutritivos complejos generalmente usados para la separación de bacterias son un medio de agar PTYG y un medio de agar R2A. En el caso del medio de agar PTYG, se adicionó peptona 0,25 g (Difco), triptona 0,25 g (Difco), extracto de levadura 0,5 g (Difco), glucosa 0,5 g (Difco), MgSO430 mg (Sigma), CaCh 3 mg (Sigma) y Bactoagar 15 g (Difco) a 980 ml de agua destilada, se ajustó el pH a 7,0 y la mezcla resultante se autoclavó a 121 °C durante 15 minutos. En el caso del medio de agar R2A, se adicionó extracto de levadura 0,5 g (Difco), peptona proteosa No. 3 0,5 g (Difco), casaminoácidos 0,5 g (Difco), dextrosa 0,5 g (Difco), almidón soluble 0,5 g (Difco), piruvato de sodio 0,3 g (Difco), sulfato dipotásico 0,3 g (Difco), sulfato de magnesio 0,05 g (Difco) y agar bacto 15 g (Difco) a los 980 ml de agua destilada, se ajustó el pH a 7,2 y la mezcla resultante se autoclavó a 121 °C durante 15 minutos. Se usaron tres tipos de antibióticos para aislar bacterias generales no dominantes (Tabla 2) y los antibióticos se inocularon en una concentración de 100 ppm cuando la temperatura media alcanzó 50 °C después de la esterilización del filtro, para producir medios antibióticos.
TABLA 2
Ejemplo 5: Cultivo separado de cepas dominantes en un medio entero en el que se cultivan microorganismos del núcleo del evaporador
[0057] Para cultivar por separado cepas dominantes, en primer lugar, se deben seleccionar varias cepas dominantes a través de un enfoque morfológico de relación de dilución y color, tamaño y forma de colonias y similares. En consecuencia, las cepas dominantes se cultivaron por separado según el siguiente procedimiento.
© Las bacterias se aislaron del medio cultivado por separado.
© Una variedad de bacterias que tienen diferentes morfologías se inocularon en un medio complejo usando un bucle y simplemente se aislaron.
© El medio que más creció fue seleccionado de entre medios sembrados y se llevó a cabo el cultivo de pasaje.
Ejemplo 6: Análisis de las características genéticas de las bacterias dominantes del núcleo de evaporador Investigación de huellas dactilares mediante análisis de patrones REP-PCR
[0058] La REP-PCR es un procedimiento biológico molecular para analizar la estructura de los cromosomas bacterianos y es un procedimiento de huellas dactilares que es capaz de distinguir cepas bacterianas específicas de otras bacterias. Las características genéticas se analizaron según los procedimientos respectivos para realizar la REP-PCR.
(1) Procedimiento de lisis celular
[0059]
© Se colocaron 2,5 pl de un reactivo PCR Lyse-N-Go (Thermo) en un tubo de PCR.
© Las colonias se cosecharon con una pipeta en un banco limpio, se colocaron en el tubo y se realizó el pipeteo. La cantidad de colonias cosechadas debe determinarse para no hacer la solución ligeramente nebulosa.
© Según las instrucciones del fabricante, el cultivo se realizó en una máquina de PCR.
© Se repitieron los ciclos del programa de lisis enumerados en la siguiente Tabla 3 y se dejó que la máquina de PCR permaneciera a 80 °C durante los ciclos.
TABLA 3
(2) Reacción de PCR
[0060] Se mezclaron cantidades adecuadas de ingredientes necesarios para la reacción de PCR descrita en la siguiente Tabla 4 para preparar una mezcla de reacción y, como se muestra en la Tabla 5, se realizó una pre desnaturalización a 94 °C durante 7 minutos, una desnaturalización a 92 °C durante 1 minuto, un recocido a 51,5 °C durante 1 minuto y una extensión a 65 °C durante 8 minutos, y los procedimientos de desnaturalización, recocido y extensión se repitieron 33 veces para llevar a cabo la amplificación de PCR.
(continuación)
(3) Electroforesis en gel
[0061] Se recolectaron los fragmentos de ADN amplificados mediante PCR, se usó gel de agarosa al 1,2-1,5 % complementado con EtBr y se cargó una mezcla de tinte 6x y una muestra en una proporción de 1 a 5 en la mayor cantidad posible. Dado que la mayoría de los productos de PCR estaban entre 100 y 1.000 pb, se cargaron con una escalera de 100 pb y la electroforesis se llevó a cabo lo más lentamente posible, de modo que el medio (50 V) de los tintes de azul de bromofenol y cianol de xileno alcanzó la mitad de todo el gel. Las cepas que tienen patrones de ADN idénticos en gel se consideran como las mismas cepas.
(4) Identificación de bacterias dominantes del aire acondicionado a través del análisis genético de ARNr 16S [0062] Los genes de ARNr 16S (ácido ribonucleico ribosómico) se usan para la identificación de clases genéticas de bacterias y se pueden identificar a nivel de género y especie de bacterias clasificadas por REP-PCR. Los ARNr 16S son ARN que interactúan con varias proteínas para constituir ribosomas. Dado que se encontraron secuencias completas de ARNr 16S o secuencias base de la lista de oligonucleótidos en 2.000 o más tipos de bacterias, las bacterias se pueden clasificar en varios grupos principales, en función de la similitud génica de los ARNr 16S. Se considera que el grado de similitud de la secuencia base de ARNr 16S refleja la distancia filogenética entre los organismos, ya que la variación de la secuencia base del gen ARNr 16S es mucho menor que la de otras secuencias de base génica presentes en la mayoría de los genomas. El procedimiento que analiza secuencias base de fragmentos del gen ARNr 16S e identifica microorganismos dependiendo de su similitud se ha usado como un procedimiento representativo para identificar microorganismos, en particular, microorganismos industrialmente útiles, además del análisis de ácidos grasos mencionado anteriormente y el análisis de capacidad de asimilación de carbohidratos.
<PCR de ARNr 16S>
[0063] Condiciones de PCR (Total 50 jl): los ingredientes para la solución excluyendo los ADN y Taq se mezclaron en cantidades predeterminadas, como se muestra en la siguiente Tabla 6 y la mezcla resultante se adicionó a 44,5 j l de una solución de lisis. A continuación, como se muestra en la siguiente Tabla 7, se llevó a cabo la pre desnaturalización a 94 °C durante 5 minutos, la desnaturalización a 94 °C durante 1 minuto, el recocido a 55 °C durante 1 minuto y la extensión a 72 °C durante 1 min 30 segundos, y las etapas de desnaturalización, recocido y extensión se llevaron a cabo 29 veces para realizar la amplificación de PCR.
(continuación)
(5) Purificación por PCR
[0064] Los productos amplificados por PCR de ARNr 16S se purificaron usando un kit de purificación Qiaquick PCR según el siguiente procedimiento.
© Se adicionó 5x el volumen de tampón PB del producto de PCR.
@ La solución mezclada se sembró en una columna de QIAquick.
@ Para la unión de los ADN, se llevó a cabo la centrifugación durante un minuto y se eliminó el sobrenadante. © Para el lavado, se colocaron 750 ml de tampón de PE en una columna QIAquick, se llevó a cabo la centrifugación durante un minuto y se eliminó el sobrenadante.
© La centrifugación se llevó a cabo de nuevo durante un minuto.
© La columna de QIAquick se transfirió a un nuevo tubo.
@ Para extraer los ADN, se adicionaron 30 pl de tampón EB a la misma y se permitió que repose durante un minuto.
© La centrifugación se llevó a cabo durante un minuto para permitir que los ADN disueltos en EB fuesen recolectados en el tubo.
(6) Nombres y características de los microorganismos respectivos aislados
Microorganismo 1>
[0065]
1. Nombre del microorganismo: HKMC-14
Nombre genérico: Caulobacter
Nombre específico: Vibrioides
Número de acceso: KCCM 11685P (2015.04.17)
2. Condiciones de remediación
A. Agente de remediación
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C durante 20 minutos
B. Temperatura (°C): cultivo a 28 °C durante 7 días
3. Medio
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1 L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C, 20 minutos
4. Condiciones de cultivo
A. Aeróbico o anaeróbico: aeróbico
B. Temperatura: 28 °C
C. Tanto agitación como reposo (líquido, sólido) son posibles
5. Condiciones de almacenamiento
Temperatura (°C): -70 °C
Microorganismo 2>
[0066]
1. Nombre del microorganismo: HKMC-15
Nombre genérico: Bradyrhizobium
Nombre específico: Diazoeficiens
Número de acceso: KCCM 11686P (2015.04.17)
2. Condiciones de remediación
A. Agente de remediación
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1 L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: a 121 °C durante 20 minutos
B. Temperatura (°C): cultivo a 28 °C durante 7 días
3. Medio
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C durante 20 minutos
4. Condiciones de cultivo
A. Aeróbico o anaeróbico: aeróbico
B. Temperatura: 28 °C
C. Tanto agitación como reposo (líquido, sólido) son posibles
5. Condiciones de almacenamiento
Temperatura (°C): -70 °C
Microorganismo 3>
[0067]
1. Nombre del microorganismo: HKMC-16
Nombre genérico: Bradyrhizobium
Nombre específico: Daqingense
Número de acceso: KCCM 11687P (2015.04.17)
2. Condiciones de remediación
A. Agente de remediación
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1 L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C durante 20 minutos
B. Temperatura (°C): cultivo a 28 °C durante 7 días
3. Medio
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C durante 20 minutos
4. Condiciones de cultivo
A. Aeróbico o anaeróbico: aeróbico
B. Temperatura: 28 °C
C. Tanto agitación como reposo (líquido, sólido) son posibles
5. Condiciones de almacenamiento Temperatura (°C): -70 °C
Microorganismo 4>
[0068]
1. Nombre del microorganismo: HKMC-17
Nombre genérico: Methylobacterium
Denominación específica: Brachiatum
Número de acceso: KCCM 11688P (2015.04.17)
2. Condiciones de remediación
A. Agente de remediación
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1 L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C durante 20 minutos
B. Temperatura (°C): 28 °C durante 7 días
3. Medio
(1) Composición: medio PTYG (por cada 1L, peptona 0,25 g, triptoma 0,25 g, extracto de levadura 0,5 g, glucosa 0,5 g, MgSO430 mg, CaCh 3 mg) o medio R2A.
(2) pH: 7,0
(3) Condiciones de esterilización: 121 °C durante 20 minutos
4. Condiciones de cultivo
A. Aeróbico o anaeróbico: aeróbico
B. Temperatura: 28 °C
C. Tanto agitación como reposo (líquido, sólido) son posibles
5. Condiciones de almacenamiento Temperatura (°C): -70 °C
Ejemplo 7: Evaluación sensorial de microorganismos aislados en una aleta de aluminio
(1) Cultivo en medio nutritivo
[0069] Para la evaluación sensorial de 26 tipos de microorganismos identificados a partir del ejemplo 6, los microorganismos se cultivaron a 28 °C en un medio nutritivo del cual se aislaron los microorganismos durante 7 días. El procedimiento de cultivo de bacterias en un medio nutritivo se describirá de la siguiente manera.
® Los microorganismos puros cultivados por separado se inocularon en un medio de nutrientes líquido.
@. El medio inoculado se cultivó a 28 °C durante 5 a 7 días.
@. Se inocularon 100 pl de las bacterias cultivadas en el medio líquido en un medio nutritivo sólido.
@. Las bacterias inoculadas se diseminaron uniformemente usando un esparcidor.
© . Se selló una placa de petri y se cultivó a 28 °C durante 10 días.
(2) Evaluación sensorial en una aleta de aluminio en 26 especies de microorganismos dominantes aislados de los microorganismos de taxi de larga distancia
[0070] Se esterilizó una aleta de aluminio rectangular y se sumergió en polvo y medios nutritivos. A continuación, las bacterias se inocularon y cultivaron en el medio nutritivo en las condiciones descritas en @ a @ y se evaluaron. Los resultados de la evaluación sensorial se muestran en la siguiente Tabla 8 (primaria) y Tabla 9 (secundaria). Según la diferencia en la tasa de crecimiento de microorganismos, se realizaron las evaluaciones sensoriales primaria y secundaria se realizaron.
[0071] Aleta de aluminio tratada con antimicrobianos: el aluminio, que es un ingrediente principal del núcleo de evaporador, está recubierto con antibacterianos. Recubrimiento del producto terminado del núcleo del evaporador que se produce en masa y está disponible comercialmente.
[0072] Como resultado de la inoculación y el cultivo de las 26 especies de microorganismos en aleta antimicrobiana de aluminio, los siguientes cuatro tipos de microorganismos eran inodoros.
[0073] Como se usa en esta invención, el término "inodoro" significa una condición en la que un sujeto no puede percibir nada mediante su órgano olfativo.
[0074] En relación con la evaluación de olores, la evaluación sensorial se realizó usando un órgano olfativo según la disposición actual. En todo el mundo no existen otros procedimientos de evaluación de olores que excluyan la evaluación olfativa. Como se puede observar en el ejemplo mencionado anteriormente, el criterio de "inodoro" se decide dependiendo del criterio sobre el cual el ser humano percibe con el órgano olfativo mediante un procedimiento de evaluación sensorial.
[0075] El criterio para determinar la ausencia de olor se muestra en el procedimiento de prueba del procedimiento de olor (Aviso No. 2007-17, Instituto Nacional de Investigación Ambiental). En la página 65 del procedimiento de prueba del procedimiento de olor, se establece que el término "inodoro" significa una condición en la que un sujeto no puede detectar nada mediante su órgano olfativo.
[0076] Además, como se describe en las páginas 65 y 66 del procedimiento de prueba del procedimiento de olor que también define el criterio para seleccionar a las personas que pueden evaluar un olor, el criterio de determinación se considera más claro.
[0077] Además, se puede observar que "inodoro" está escrito en la parte correspondiente a "0" en la tabla de calificaciones en la página 2, Capítulo 2, y, en el Artículo de reglamentación 4 de las Normas Regulatorias.
[0078] Como tal, el criterio de "inodoro" en la evaluación sensorial significa una condición en la que un sujeto seleccionado por un criterio predeterminado no puede percibir nada mediante su olfato, como se define con claridad en las regulaciones coreanas y japonesas.
Comparativo
Ejemplo 8: Evaluación de las condiciones óptimas de adhesión de microorganismos inodoros (no según esta invención)
(1) Análisis de la concentración óptima de adhesión a las aletas de los microorganismos inodoros [0079] Para recubrir el núcleo del evaporador con 11 especies de microorganismos inodoros, se determinó una concentración de adhesión óptima para inocular a un nivel de 106 ufc/g, como se muestra en el resultado de la investigación en 2012 (aplicación prioritaria). La prueba de determinación de concentración se llevó a cabo usando Methylobacterium aquaticum que es una de las cepas comunes, Methylobacterium aquaticum se cultivó a 28 °C hasta la fase de registro tardía, se lavó con solución salina esterilizada al 0,85 % y, a continuación, se cultivó a 4 °C durante 18 horas. Después del cultivo a 4 °C, la densidad óptica (D.O.) se ajustó a 0,749, 0,588, 0,55, 0,5 y 0,45, y se sumergieron y adhirieron 2 g de una aleta en forma de U mientras se agitaba a temperatura ambiente y a una velocidad predeterminada (rpm) durante una hora. La aleta a la que se adhirió cada concentración de microorganismo se separó usando un mezclador y se extendió en la placa de agar R2A mediante dilución en serie.
[0080] Como resultado del recubrimiento por propagación, se pudo observar que la concentración de microorganismos adheridos a la aleta cambia dependiendo del valor de la D.O. Cuando la D.O. fue de 0,749, el nivel de microorganismos adheridos a la aleta fue 1,53 X 108 ± 1,52 X 10-7 ufc/g de aleta, y cuando la D.O. fue de 0,588 y 0,55, los niveles de microorganismos adheridos a la aleta fueron de 4,00 X 10-7 ± 1,00 X 10-7 ufc/g de aleta, y 1,03 X 10-7 ± 8,50 X 105 ufc/g de aleta, respectivamente. Además, a una D.O. de 0,5 y 0,45, los niveles de microorganismos adheridos a la aleta fueron 6,00 X 106 ± 7,00 X 105 ufc/g de aleta, y 2,53 X 106 ± 3,51 X 105 ufc/g de aleta, respectivamente, lo que indica que el grado de adhesión fue proporcional a la D.O. Diez especies diferentes de microorganismos inodoros se recubrieron a 0,5, que es el valor de D.O. que permite recubrir 106 ufc/g de microorganismos presentes en el núcleo de evaporador, del que se aislaron los microorganismos, entre estas
concentraciones de adhesión.
(2) Confirmación de adhesión de microorganismos inodoros al núcleo y la aleta del evaporador
[0081] Como resultado de la prueba de adhesión a la aleta, independientemente del género, 11 tipos de microorganismos inodoros exhibieron un grado de adhesión idéntico a un valor de D.O. predeterminado. En consecuencia, la cantidad de microorganismos adheridos al núcleo de evaporador se verificó usando una solución de cultivo que tiene la misma D.O. que la aleta con Methylobacterium aquaticum, que es una cepa.
[0082] La cantidad de Methylobacterium aquaticum adherida al núcleo de evaporador ajustada a la D.O. de 0,5 fue de 8,95 X 106 ± 5,51 x 105 ufc/g de aleta. El núcleo de evaporador adherido usando la misma solución de cultivo exhibió un grado de adhesión de 2,55 X 106 ± 3,51 x 105 ufc/g de aleta. Este resultado indica que se adhirió el mismo nivel de microorganismos cuando se usó la solución de cultivo que tenía la misma D.O.
Comparativo
Ejemplo 9: Evaluación de la supervivencia a 30 días de cuatro combinaciones (no según esta invención) [0083] Se realizó una evaluación de supervivencia durante 30 días en las siguientes combinaciones. El número de combinación de microorganismos usados para las combinaciones de recubrimiento y la lista de microorganismos de los mismos se proporcionarán a continuación (Tabla 11).
[0084]
Tabla 11
[0085] Para evaluar los efectos a corto plazo de 30 días de combinaciones de microorganismos inodoros aislados de taxis, se organizaron las combinaciones y se llevó a cabo una evaluación a corto plazo de 30 días sobre las combinaciones.
[0086] La combinación que consiste en cuatro cepas de Methylobacterium aquaticum PR1016A, Caulobacter vibrioides TX0632, Methylobacterium brachiatum TX0642 y Bradyrhizobium diazoefficiens TX0618 se detectó en el momento de 0 en un nivel total de 3,99 X 106 ± 2,82 X 106 ufc/g de aleta, y se detectaron colonias rojas y blancas en niveles de 3,62 X 106 ± 2,79 X 106 ufc/g de aleta y 3,67 X 105 ± 3,06 X 104 ufc/g de aleta, respectivamente. Después de 30 días, la colonia blanca no se detectó y la colonia roja se detectó en un nivel de 2,14 X 106 ± 1,25 X 105 ufc/g de aleta, que fue igual al del número total de bacterias (FIG. 2).
[0087] Como resultado del recuento del número de microorganismos mediante REP-PCR, en el caso de la combinación en el tiempo 0, de 111 muestras representativas, se detectó que 43 muestras eran Methylobacterium aquaticum PR1016A, 6 muestras eran Caulobacter vibrioides TX0632, 52 muestras eran Methylobacterium brachiatum TX0642 y 10 muestras eran Bradyrhizobium diazoefficiens TX0618. Estos resultados mostraron que dos especies de Methylobacterium sp. 2 ocupaban el 85,6 % de la combinación (FIG. 3).
[0088] Después de 30 días, los resultados del análisis del patrón REP-PCR mostraron que, de 89 muestras representativas, se detectó que 26 muestras de Methylobacterium aquaticum PR1016A sobrevivieron, así como lo hicieron 63 muestras de Methylobacterium brachiatum TX0642, lo que significa que la Methylobacterium sp. fue dominante bajo el entorno central del evaporador, independientemente del paso del tiempo.
[0089] Además, no se observó el crecimiento de microorganismos externos.
[0090] En conclusión, para evaluar los efectos a corto plazo de 30 días de las combinaciones de microorganismos inodoros aislados del taxi, se organizaron las combinaciones y se detectó que tanto los Methylobacterium aquaticum PR1016A como los Methylobacterium brachiatum TX0642 sobrevivían después de 30 días. Las biopelículas hechas de estas dos especies se mantuvieron inodoras e inhibieron el crecimiento de microorganismos exteriores.
Claims (11)
1. Una composición para prevenir olores que contiene microorganismos inodoros de Caulobacter vibrioides HKMC-14 (Número de acceso: Kc c M 11685P), Bradyrhizobium diazoeffíciens HKMC-15 (Número de acceso: KCCM 11686P) y Bradyrhizobium daqingense HKMC-16 (Número de acceso: KCCM 11687P), o una solución de cultivo de los mismos.
2. Un núcleo de evaporador recubierto con la composición para prevenir olores según la reivindicación 1.
3. El núcleo del evaporador, según la reivindicación 2, en el que el microorganismo según la reivindicación 1 se adhiere en una concentración de 104 ufc/g a 108 ufc/g al núcleo de evaporador.
4. El núcleo del evaporador, según la reivindicación 3, en el que la adherencia del microorganismo se lleva a cabo usando una solución de cultivo de microorganismos que tiene una densidad óptica (D.O.) de 0,3 a 0,9.
5. El núcleo del evaporador, según la reivindicación 2, en el que el microorganismo en la composición forma una biopelícula sobre la superficie del núcleo del evaporador.
6. Un sistema de aire acondicionado que comprende el núcleo del evaporador según la reivindicación 2.
7. Un procedimiento para fabricar un núcleo del evaporador inodoro que comprende recubrir el núcleo de evaporador con la composición según la reivindicación 1.
8. El procedimiento, según la reivindicación 7, en el que el recubrimiento comprende adherir microorganismos incluidos en la composición en una concentración de 104 ufc/g a 108 ufc/g al núcleo del evaporador.
9. El procedimiento, según la reivindicación 7, que comprende además la proliferación de microorganismos en la composición recubierta para formar una biopelícula.
10. Un procedimiento para prevenir olores en un sistema de aire acondicionado que comprende recubrir el núcleo del evaporador con la composición según la reivindicación 1.
11. El procedimiento, según la reivindicación 10, en el que el recubrimiento comprende adherir microorganismos incluidos en la composición en una concentración de 104 ufc/g a 108 ufc/g al núcleo del evaporador.
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