CN109152855A - 包含无气味微生物的气味防止用组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种气味防止用组合物，其包含选自弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)和分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)中的一种以上无气味微生物或其培养液。并且，本发明涉及一种气味防止方法，其包括涂覆上述气味防止用组合物的步骤。利用本发明的气味防止用组合物对引发恶臭的微生物可栖息的对象进行涂覆而形成生物膜时，能够显著地阻断具有引发恶臭的可能性的外部微生物的流入和栖息，从而有效防止气味。

Description

包含无气味微生物的气味防止用组合物
技术领域
本发明涉及包含选自弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumdaqingense)和分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)中的一种以上无气味微生物或其培养液的气味防止用组合物和利用其的气味防止方法。
背景技术
干净的空气被认为是人类健康和高质量生活(well-bing)的基本条件，引发令人不适的气味的空气或被污染的空气成为妨碍舒适环境的主要因素。例如，在密闭条件下，令人不满的室内空气质量由如下两种重要因素导致。一种是由构成密封环境的构成物质本身(建筑物、车辆等)直接产生的室内空气污染物质，另一种重要因素是由于人类活动而产生或因从外部流入的物质而产生的气味。
空调系统以调控建筑物、车辆、铁道、船舶、航空器等中的空气的温度、湿度、气流和清洁度的空气调控为目的，是降低室内温度、实现室内环境的最佳化的系统。因生活水平的提高，这种空调系统的普及率越发增加。虽然由于空调系统的普及率的增加，其基本功能有较大发展，但在用于改善室内空气品质的环境方面而言，还有很多需要解决的问题。
空调系统中，特别是空调(air-conditionor)气味的原因被认为起因于霉和细菌的代谢物质，但是目前尚没有有关该霉和细菌的种类以及上述微生物具体分泌多少量的哪些代谢物质的具体资料。
由于空调装置的结构上的原因，通过鼓风机的所有空气会通过蒸发器芯，而在低温的冷媒和空气进行热交换时，在蒸发器芯表面发生由温度差导致的冷凝液冷凝现象，当持续地发生该冷凝液冷凝时，在蒸发器芯表面可提供适合霉和细菌栖息和繁殖的环境。在暴露于外部空气的蒸发器芯上增殖有霉和细菌的状态下，作为在蒸发器芯表面增殖的细菌的代谢物质，产生微生物的挥发性有机化合物(mVOCs)，如果通过蒸发器芯的空气被送风至室内，则因由微生物产生的挥发性有机化合物，长期使用时室内将会暴露于因霉和细菌引起的恶臭当中。
产生恶臭的蒸发器芯表面因长期使用而被生物膜覆盖，其由细菌、细胞群(cellclusters)、EPS构成，EPS包含蛋白质(Protein)、多糖、多糖醛酸(Polyuronic acid)、核酸(Nucletic)、脂质(Lipid)等各种成分，从而在蒸发器芯表面，各种细菌和霉将生物膜作为营养成分而增殖，并且作为代谢物质排出由微生物产生的有机化合物(mVOCs)，并且已知这是空调恶臭的各种重要因素中的腐败臭味。
为了除去上述恶臭市面上出售有多种多样的芳香剂，但这些不能从根本上除去栖息于上述蒸发器芯的霉和细菌，大多情况下仅仅发挥暂时稀释令人不适的气味的作用。另外，目前市售的抗菌剂实际上也不存在以特异性地作用于栖息在蒸发器芯的特定霉或细菌的方式进行开发的案例，而仅仅以对普遍的病原菌具有抗菌能力为由进行市售。
于是，本发明的发明人在韩国公开专利第10-2012-0020309号中已公开了如下的蒸发器芯的制造方法，其中，为了能够防止成为蒸发器芯表面的恶臭的原因的细菌和霉的附着和繁殖，在蒸发器芯表面涂覆由无气味或产生香气的特定微生物形成的生物膜。
然而，上述发明没有公开哪些细菌是无气味微生物，并对于将其涂覆时能否在蒸发器芯上存活以及能否实际上防止引发恶臭等气味的微生物的栖息、及防止气味的效果的验证上存在不足。
发明内容
[发明要解决的技术问题]
本发明的发明人致力于寻找能够利用无气味微生物有效抑制引发恶臭的微生物的方法。其结果，成功地分离了在空调装置内不引发恶臭的4种微生物，并且确认到了利用它们或它们的组合来形成生物膜时能够阻断引发恶臭的微生物的生育，最终能够防止恶臭，从而完成了本发明。
由此，本发明的目的在于，提供一种气味防止用组合物，其包含选自弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)和分枝甲基杆菌(Methylobacteriumbrachiatum)中的一种以上的无气味微生物或其培养液。
本发明的别的目的在于，提供一种蒸发器芯，其涂覆有上述气味防止用组合物。
本发明的另一目的在于，提供一种不引发空调装置内气味的无气味蒸发器芯的制造方法，其包括将上述气味防止用组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
本发明的另一目的在于，提供一种空调装置的气味防止方法，其包括将上述气味防止用组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
本发明的另一目的在于，提供一种空调装置的气味确认方法，其包括将上述气味防止用组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
本发明的另一目的在于，提供无气味微生物，其用于为了上述空调装置的气味防止而涂覆于蒸发器芯的用途。
[用于解决技术问题的技术方案]
根据本发明的一种方式，提供包含无气味微生物或其培养液的气味防止用组合物。
本发明的发明人致力于寻找能够利用无气味微生物有效抑制引发恶臭的微生物的方法，特别是致力于从根本上阻断在空调装置中引发恶臭的原因。其结果，成功地分离了在空调装置内不引发恶臭的4种微生物，并且确认到了利用它们或它们的组合来形成生物膜时能够阻断引发恶臭的微生物的生育，其结果能够防止恶臭。
本说明书中，术语“空调装置”，是对在一部分或全部与外部环境隔离的空间中舒适地维持温度、湿度、空气的清洁度、流动等的系统的统称，并以此含义使用。作为上述隔离空间的优选示例，可以列举建筑物内部或车辆、铁道、船舶、航空器(aircraft)等的内部这样的一部分或全部与外部隔离的内部空间。作为上述空调装置的优选示例，可以列举空调(air conditionor)。
由于空调装置的结构上的原因，通过鼓风机的所有空气会通过蒸发器芯，在上述蒸发器芯表面持续发生由温度差导致的冷凝液冷凝现象，从而成为适合微生物生育的环境，经过长期的时间时形成生物膜(biofilm)。此时，微生物将空气中存在的室内和室外的各种物质作为营养成分进行代谢，因代谢结果产生的挥发性有机化合物(mVOCs)而产生恶臭。
生物膜是微生物以集群的形式生存的一种菌落形态，其是由一个膜包围的层状结构，上述膜保护微生物免受外部环境的影响并供给营养成分。作为构成膜的成分有EPS(胞外聚合物，exopolymeric substances)，其包含蛋白质、多糖、多糖醛酸、核酸、脂质等各种成分，各种微生物在蒸发器芯表面将其作为营养成分而进行增殖，并作为代谢物质排出恶臭。
本发明的发明人从上述蒸发器芯分离了不引发恶臭的微生物，将它们进行培养的结果，在形成菌落的微生物中分离培养了优势菌株。关于分离和培养优势菌株的方法，可以采用本领域公知的各种方法，例如，能够从稀释比率、菌落的颜色、大小、形状等的形态学的角度筛选优势微生物。
上述优势微生物包含柄杆菌属、慢生根瘤菌属或甲基杆菌属微生物，优选包含弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobiumdiazoefficiens)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)或分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)。
上述微生物在2015年4月17日保藏于韩国微生物保藏中心并被赋予下述保藏号：弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)HKMC-14(保藏号：KCCM 11685P)；高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)HKMC-15(保藏号：KCCM 11686P)；大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense HKMC-16)(保藏号：KCCM11687P)；以及，分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)HKMC-17(保藏号：KCCM 11688P)。
上述微生物可以以单独方式或以组合不同微生物的方式包含在上述气味防止用组合物中。
本发明的气味防止用组合物可以以阻断引发恶臭的微生物的栖息和/或由它们导致的恶臭为目的使用。即，本发明的组合物可以被涂覆或喷射在产生恶臭的装置(例如，空调装置、废水处理装置等)、物品(例如，垃圾桶、便器等)、动物(例如，被污染的家畜等)、人体(例如，口腔内、糖尿病足等)的全体或特定部分上，从而用于阻断产生恶臭的原因即微生物的栖息的用途。
本发明的气味防止用组合物中，为了相应于上述涂覆对象的差异而提高生物膜形成能力，可以进一步包含本领域公知的各种培养基成分。作为上述可包含的培养基，可以举出例如琼脂、明胶、海藻酸盐、卡拉胶或果胶培养基，应用于空调装置内的蒸发器芯时，优选为PTYG培养基、R2A培养基或LB培养基。
另外，本发明的气味防止用组合物中，为了阻断恶臭、预防或除去引起恶臭的菌，除了包含上述无气味微生物以外，可以进一步包含芳香剂、杀菌剂、抗菌剂等。
根据本发明的优选具体例，本发明的组合物用于防止空调装置产生的气味。
能够应用本发明的组合物的空调装置为能够设置于建筑物、车辆、铁道、船舶、航空器等的装置，包括以调控空气的温度、湿度、气流或清洁度为目的而使用的装置。
能够涂覆本发明的生物膜的对象为空调装置，空调装置包括压缩机、鼓风机、蒸发器芯等，能够涂覆本申请发明的生物膜的特别优选的对象为蒸发器芯(evaporator core)。
具体而言，上述空调装置内的蒸发器芯(evaporator core)表面由于空气的热交换导致的冷凝液冷凝现象而成为适合细菌栖息和繁殖的环境，所附着的细菌在经过一定时间的情况下形成生物膜，从而以难以除去的稳定的集群的形式存活。即，预先使无气味微生物繁殖从而能够抑制恶臭微生物的繁殖。
利用上述特性，本发明发现：如果预先在上述空调装置或蒸发器芯涂覆优势菌种或存活力优异的无气味微生物，则能够仅由它们的集群而在蒸发器芯上形成生物膜，并且能够显著地抑制恶臭和能引发恶臭的其他微生物的附着和繁殖(实施例8、9)。
另一方面，本说明书中，无气味微生物等术语中所使用的“无气味”，是指通过感官评价方法测定时评价人“以嗅觉什么都感知不到的状态”的含义。这样的无气味与否的判断基准在“恶臭工程试验方法(告示第2007-17号，国立环境科学院)”中也有公开。
根据本发明另一方式，本发明提供一种涂覆有上述气味防止用组合物的蒸发器芯(evaporator core)及其制造方法。
蒸发器芯的翅片(fin)的材质为铝或铝合金，蒸发器芯中，利用实施抗菌处理后的铝或未实施抗菌处理的合金材质来制造蒸发器芯。蒸发器芯的材质不限定于铝或铝合金，一般而言，蒸发器芯中，除了铝以外，铜等热导率好且耐蚀性优异的金属均能够用作材质，并且可以以合金制造并使用。电动汽车等中，能够将珀尔帖(PELTIER)元件与热交换器连接起来使用，并且只要是以如此方式能够使得热交换变得容易的相同或类似的结构，则均能够用作为材质。
对于上述利用包含无气味微生物或其培养液的气味防止用组合物来涂覆蒸发器芯的方法而言，可以利用本领域公知的各种方法(例如，喷射、涂布、浸渍)，优选将蒸发器芯浸渍在无气味微生物的培养液中以使得组合物能够均匀地涂覆于蒸发器芯内翅片上，从而能够将组合物均匀地涂覆于蒸发器芯的整体。上述涂覆可以实施一次至多次。
作为上述无气味微生物的培养液，优选利用O.D.(光密度，optical density)值为0.3至0.9的微生物培养液，更优选为0.4至0.8的值。
在利用O.D.值为0.3至0.9的微生物培养液的情况下，能够附着的微生物的浓度为104cfu/g至108cfu/g；在利用O.D.值为0.4至0.8的微生物培养液的情况下，能够附着的微生物的浓度为105cfu/g至107cfu/g。考虑到在实际的二手车中包括的蒸发器芯中所存在的微生物的浓度为106cfu/g左右时，从实际应用于车辆的方面考虑，最优选利用O.D.值为0.4至0.8的微生物培养液以105cfu/g至107cfu/g的浓度附着微生物。
通过上述方式涂覆的无气味微生物均匀地分布并栖息在蒸发器芯表面，并且能够形成长期(30天以上)稳定的生物膜(实施例9)。
根据本发明的另一方式，本发明提供一种空调装置的气味防止方法，其包括将上述气味防止用组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
由此，在利用本发明的包含无气味微生物或它们的组合的气味防止用组合物进行涂覆并形成生物膜的情况下，能够显著地阻断具有引发恶臭的可能性的外部微生物的流入和栖息，从而能够有效地防止空调装置的气味。
根据本发明的另一方式，本发明提供空调装置的气味确认方法，其包括将上述气味防止用组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
上述气味防止用组合物所包含的微生物是否实际上产生气味，根据这些微生物作为食物而进行代谢的营养供给源的成分而不同，因此，在投入应用上述微生物的实际产业中的营养供给源时也不产生气味也会是重要的。
在空调装置的情况下，微生物以空气中存在的室内和室外的各种物质作为营养成分进行代谢，室内和室外的空气污染物质、废气成分(汽油、轻油、LPG等石油类)成为这些微生物的营养供给源，因此，通过将这些营养供给源投入到涂覆有上述微生物的蒸发器芯，从而能够预先确认应用于实际产业时空调装置是否会产生气味。
根据本发明的另一方式，本发明提供为了防止空调装置气味而用于涂覆于蒸发器芯的微生物，该微生物为：弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)HKMC-14(保藏号：KCCM11685P)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)HKMC-15(保藏号：KCCM11686P)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)HKMC-16(保藏号：KCCM11687P)和分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)HKMC-17(保藏号：KCCM11688P)。
上述微生物可以以单独方式或以组合方式用于涂覆于蒸发器芯以防止空调装置的气味。
[发明效果]
本发明提供一种气味防止用组合物，其包含选自弧形柄杆菌(Caulobactervibrioides)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)和分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)中的一种以上无气味微生物或其培养液。另外，本发明提供涂覆有上述气味防止用组合物的蒸发器芯及其制造方法。此外，本发明提供一种气味防止方法，其包括将上述气味防止用组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
而且，在利用本发明的气味防止用组合物对引发恶臭的微生物可栖息的对象进行涂覆来形成生物膜的情况下，能够显著地阻断具有引发恶臭的可能性的外部微生物的流入和栖息，从而能够有效防止气味。
附图说明
图1表示用于将铝翅片灭菌并浸渍在营养培养基中之后接种无气味微生物的皮氏培养皿。
图2表示出租车分离微生物的30天存活评价组合(实施例9)的各菌落颜色的个体数。
图3表示出租车分离微生物的30天存活评价组合(实施例9)的根据REP-PCR的菌株比率。
具体实施方式
以下，通过实施例进一步详细地说明本发明。这些实施例仅用于更具体地说明本发明，根据本发明的要点，本发明的范围不受这些实施例的限制，这一点对于本领域技术人员而言是不言自明的。
实施例1：确保恶臭气味的长途行驶出租车
本发明的发明人确保了散发恶臭的长途行驶出租车5台(表1)，拆除分别安装在车种A至车种E的蒸发器芯，取样蒸发器芯试验片。
[表1]
NO. 长途车辆 行驶距离(KM)
1 车种A 753,300
2 车种B 760,000
3 车种C 770,000
4 车种D 857600
5 车种E 482800
实施例2：蒸发器芯试验片的取样
将从上述恶臭长途行驶出租车A至E确保的蒸发器芯样品密封在聚乙烯袋(polyethylene bag)中，并在使用前在4℃冷藏保管。为了分离培养微生物，使用灭菌的尖嘴钳(long nose plier)从各蒸发器芯的包括正面部和背面部的任意部位采取翅片试样各5g，之后混合使用。
实施例3：从蒸发器芯分离微生物的过程
通过下述过程对从蒸发器芯分离微生物的步骤和方法进行叙述。
①将从蒸发器芯提取的试样混合并放入混合器中。
②将灭菌的1×磷酸盐缓冲液(PBS，Phosphate buffed Saline)加入到200mL混合器中。
③将混合试样和PBS混合30秒钟。
④将混合器置于冰上1分钟。
⑤将步骤③-④再重复2遍。
⑥将悬浮液在4℃以13000rpm进行离心分离3分钟。
⑦仅取上清液并转移到新管中。
⑧将灭菌的棉棒用上清液浸湿后，在采取样品的蒸发器芯的表面擦拭几遍。
⑨仅将擦拭后的棉棒的头部放入上清液中并使之涡旋。
⑩将在步骤⑥中获得的沉淀物和⑨中得到的混合物进行混合并用作接种原液。
经上述①至⑩的步骤而对安装在车种A至车种E的蒸发器芯分别进行物理分离，从而分离微生物。
实施例4：微生物的分离培养
空调的细菌分离是通过对通常称为一般细菌的好氧异养细菌进行异养平板培养来进行分离。用于一般细菌的分离的复合营养培养基使用PTYG琼脂培养基、R2A琼脂培养基这两种。PTYG琼脂培养基是，将蛋白胨0.25g(Difco)、胰胨0.25g(Difco)、酵母提取物0.5g(Difco)、葡萄糖0.5g(Difco)、MgSO4 30mg(Sigma)、CaCl2 3mg(Sigma)、Bacto琼脂15g(Difco)放入蒸馏水980mL中并将pH调整到7.0后，在121℃高压灭菌15分钟。R2A琼脂培养基是，将酵母提取物0.5g(Difco)、蛋白胨(proteose peptone)No.3 0.5g(Difco)、酪蛋白氨基酸0.5g(Difco)、右旋糖(Dextrose)0.5g(Difco)、可溶性淀粉0.5g(Difco)、丙酮酸钠0.3g(Difco)、硫酸二钾0.3g(Difco)、硫酸镁0.05g(Difco)、Bacto琼脂15g(Difco)放入蒸馏水980mL中并将pH调至7.2后，在121℃高压灭菌15分钟。为了非优势一般细菌的分离而使用3种抗生素(表2)，对于各抗生素以100ppm的浓度在过滤灭菌后当培养基温度达到50℃左右时进行接种，从而制作抗生素培养基。
[表2]
No. 抗生素 种类 制造公司
1 卡那霉素(Kanamycin) 氨基糖苷类 Sigma
2 氨苄西林(Ampicillin) β-内酰胺类 Sigma
3 氯霉素(Chloramphenicol) 氯霉素类 Sigma
实施例5：在培养蒸发器芯微生物的全部培养基中分离培养优势菌株
为了分离培养优势菌株，首先要从稀释比率和菌落的颜色、大小、形状等的形态学的角度筛选各种优势菌株，因此根据下述步骤分离培养优势菌株。
①从分离培养的培养基中分离细菌。
②将形态不同的各种细菌使用接种环在复合培养基接种并进行纯种分离。
③从接种的培养基中选出生长得最好的培养基并进行传代培养。
实施例6：对蒸发器芯优势细菌的遗传特性的分析
通过REP-PCR图谱分析来进行指纹(Fingerprints)图谱调查
REP-PCR是用于分析细菌染色体的结构的分子生物学方法，是能够将各细菌菌株与其他细菌区分识别的指纹分析方法。为了执行REP-PCR，按照下述各步骤分析遗传特性。
(1)细胞裂解步骤
①将Lyse-N-Go PCR试剂(Thermo)2.5μL装入PCR管中。
②在净化台(clean bench)，利用移液管取菌落放入上述管中并进行移液。此时，注意所采取的量应不使溶液变得稍微浑浊。
③根据制造商的说明书，在PCR仪上进行培养。
④重复根据下述表3中记载的Lysis程序的循环，在第9个循环中成为80℃时不关闭而以原样放置。
[表3]
循环 温度(℃) 时间(秒)
1 65 30
2 8 30
3 65 90
4 97 180
5 8 60
6 65 180
7 97 60
8 65 60
9 80 保持
(2)PCR反应
将下述表4中记载的PCR反应所需的成分按照所需的量进行混合而制造反应混合物，利用其按表5的记载，在94℃进行7分钟预变性步骤(pre-denaturation)，在92℃进行1分钟变性步骤(denaturation)，在51.5℃进行1分钟冷却步骤(annealing)，在65℃进行8分钟延长(extension)步骤，并将变性、冷却、延长的步骤重复33次，以执行PCR扩增过程。
[表4]
[表5]
(3)凝胶电泳
取各PCR扩增的DNA片段，使用添加有EtBr的1.2-1.5％琼脂糖凝胶，将6x染料与样品以1﹕5比率混合，加载尽可能多的量。大部分PCR产物在100～1000bp之间，因此将100bp的DNA梯状条带(ladder)一同加载，尽可能缓慢地(50V)进行电泳，从而使溴酚蓝和二甲苯蓝染料的中间达到整个凝胶的中间。将凝胶上的DNA图案相同的菌株视为相同菌株。
(4)通过16S rRNA基因分析来鉴定空调优势细菌
16S rRNA(核糖体核糖核酸，ribosomal Ribonucleic acid)基因用于细菌的遗传学分类鉴定，能够将通过REP-PCR分类的细菌在属(genus)和种(species)的水平上进行鉴定。16S rRNA为与各种蛋白质相互作用而构成核糖体(Ribosome)的RNA，由于其完整的序列或对于寡核苷酸(Oligonucleotide)列表的碱基序列在2000种以上的细菌中已知，因此能够根据16S rRNA的基因类似性将细菌分为几种主要的组。上述16S rRNA基因的碱基序列的变化率远小于大部分基因组中的其他基因的碱基序列，因此，16S rRNA碱基序列类似度的程度被认为反映生物之间的系统学差距。上述的分析16S rRNA基因切片的碱基序列并根据其类似度鉴定微生物的方法，与上述脂肪酸分析和碳水化合物同化能力分析法一同，被用作鉴定微生物、特别是工业上有用的微生物的代表性的鉴定方法。
＜16S rRNA PCR＞
PCR条件(共50μL)：将除DNA和Taq以外的剩余溶液按照下述表6中所示方式混合所需量，并将其向上述lysis溶液加入44.5μL。此后，如表7中所述，在94℃进行5分钟预变性步骤(pre-denaturation)，在94℃进行1分钟变性步骤(denaturation)，在55℃进行1分钟冷却步骤(annealing)，在72℃进行1分30秒延长步骤(extension)，并将变性、冷却和延长步骤执行29次，以执行PCR扩增过程。
[表6]
高压灭菌3° D.W. 22μL
10x缓冲液(Roche) 5μL
dNTP(Roche，2.5mM) 5μL
DMSO 5μL
BSA(10mg/mL) 2.5μL
27mf(20皮摩尔/μL) 2.5μL
1492r(20皮摩尔/μL) 2.5μL
DNA 5μL
Taq(Roche) 0.5μL
[表7]
(5)PCR纯化
对通过16S-rRNA PCR扩增的产物，利用Qiaquick PCR纯化试剂盒，按照下述步骤进行纯化。
①投入PCR产物的5倍的PB缓冲液。
②将混合后的液体分注到QIA快速柱中。
③为了DNA结合，进行1分钟离心后，除去所通过的混合液。
④为了清洗，将750μL的PE缓冲液投入到QIA快速柱中并进行1分钟离心后，除去所通过的混合液。
⑤再进行1分钟离心。
⑥移至QIA快速柱新管。
⑦为了提取DNA，投入30μL的EB缓冲液放置1分钟。
⑧进行1分钟离心，使溶解于EB的DNA集中在管中。
(6)所分离的各微生物的名称和微生物的特性
＜微生物1＞
1.微生物的名称：HKMC-14
属名：柄细菌属(Caulobacter)
种名：弧形菌(vibrioides)
保藏号：KCCM 11685P(2015.04.17)
2.重构条件
甲.重构剂
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g、酵母提取物0.5g、葡萄糖0.5g、MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
乙.温度(℃)：在28℃培养7天
3.培养基
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g、酵母提取物0.5g、葡萄糖0.5g、MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
4.培养条件
甲.好氧性、厌氧性：好氧性
乙.温度：28℃
丙.振荡和静置(液体、固体)均可以使用
5.保存条件
温度(℃)：-70℃
＜微生物2＞
1.微生物的名称：HKMC-15
属名：慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)
种名：diazoefficiens
保藏号：KCCM 11686P(2015.04。17)
2.重构条件
甲.重构剂
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g，酵母提取物0.5g，葡萄糖0.5g，MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
乙.温度(℃)：在28℃培养7天
3.培养基
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g，酵母提取物0.5g，葡萄糖0.5g，MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
4.培养条件
甲.好氧性、厌氧性：好氧性
乙.温度：28℃
丙.振荡和静置(液体、固体)均可以使用
5.保存条件
温度(℃)：-70℃
＜微生物3＞
1.微生物的名称：HKMC-16
属名：慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)
种名：daqingense
保藏号：KCCM 11687P(2015.04.17)
2.重构条件
甲.重构剂
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Tripto me)0.25g，酵母提取物0.5g，葡萄糖0.5g，MgSO4 30mg、CaCl23mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
乙.温度(℃)：在28℃培养7天
3.培养基
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g，酵母提取物0.5g，葡萄糖0.5g，MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
4.培养条件
甲.好氧性、厌氧性：好氧性
乙.温度：28℃
丙.振荡和静置(液体、固体)均可以使用
5.保存条件
温度(℃)：-70℃
＜微生物4＞
1.微生物的名称：HKMC-17
属名：甲基杆菌属(Methylobacterium)
种名：brachiatum
保藏号：KCCM 11688P(2015.04.17)
2.重构条件
甲.重构剂
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g，酵母提取物0.5g，葡萄糖0.5g，MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
乙.温度(℃)：在28℃培养7天
3.培养基
(1)组成：PTYG培养基(每1L中蛋白胨0.25g、胰胨(Triptome)0.25g，酵母提取物0.5g，葡萄糖0.5g，MgSO4 30mg、CaCl2 3mg)或R2A培养基。
(2)pH：7.0
(3)杀菌条件：在121℃进行20分钟
4.培养条件
甲.好氧性、厌氧性：好氧性
乙.温度：28℃
丙.振荡和静置(液体、固体)均可以使用
5.保存条件
温度(℃)：-70℃
实施例7：所分离的微生物在铝翅片中的感官评价
(1)在营养培养基进行培养
为了对在上述实施例6中鉴定的微生物中的26种进行感官特性分析，将微生物在分离的营养培养基中在28℃培养7天后实施评价。下面记载在营养培养基中培养细菌的过程。
①将纯种分离培养的微生物接种在液体营养培养基中。
②将接种后的培养基在28℃培养5-7天。
③取在液体培养基中培养的菌体100μL接种在固体营养培养基。
④利用摊开器(spreader)使所接种的菌体均匀地分布。
⑤密封皮氏培养皿(petri dish)并在28℃培养10天。
(2)从长途行驶出租车微生物分离的26种优势微生物在铝翅片上的感官评价
对四边形大小的铝翅片进行灭菌处理，将其浸在尘埃和营养培养基中。之后接种细菌，将其在与上述营养培养基中的步骤②-④所记载的条件相同地进行培养，之后实施评价，将其在下述表8(1次)和表9(2次)中记载感官评价结果。根据微生物生长速度差异而按1次、2次进行感官评价。
-经抗菌剂处理后的铝翅片：在作为蒸发器芯的主要材料的铝上进一步进行了抗菌涂覆的产品，其是量产的且完全能够在市场上购买的蒸发器芯完成品的涂层。
在铝抗菌剂翅片总共接种上述26种微生物进行培养的结果，如下所述，4种为无气味。
[表10]
本发明中评价为“无气味”，是指“按照一定基准选拔的人以嗅觉什么都感觉不到的状态”。
关于气味评价，根据现行法规定，通过利用人类的嗅觉的感官评价方式进行评价。目前在全球尚没有除了利用嗅觉评价以外的气味评价。如上述实施例中也可看出，“无气味”的基准根据按照感官评价方法人类以嗅觉感知的基准而定。
这样的无气味与否的判断基准记载于恶臭工程试验方法(告示第2007-17号，国立环境科学院)。恶臭工程试验方法的65页恶臭判定图中，对于“无气味”记载为“以平时的嗅觉什么都感知不到的状态”。
而且，由对能够闻到气味并进行评价的人的选定基准也做了规定的恶臭工程试验方法的65、66页内容可知，上述基准是更为明确的基准。
另外，从日本恶臭防止法第2章规则第4条规则基准的2页可见，在等级表中对应于“0”的部分记载为“无气味”。
如此，关于感官评价中的“无气味”的基准，正如上述韩国国内和日本的规定中明确规定的那样，是指“通过按照一定基准选拔的人的嗅觉什么都感知不到的状态”。
实施例8：无气味微生物的最佳附着条件的评价
(1)无气味微生物的翅片附着最佳浓度的分析
为了用上述11种无气味微生物涂覆蒸发器芯，如2012年研究结果(优先申请)所示，确认了用于以106cfu/g水平接种的最佳附着浓度。浓度确认试验中使用共同菌株(common strain)之一的水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)，在28℃培养至晚对数生长期(late log phase)后，利用灭菌后的0.85％盐水清洗，之后在4℃培养18小时。在4℃培养后，将O.D.(光密度，optical density)值调整为0.749、0.588、0.55、0.5、0.45后，浸泡2g的u字型翅片，在室温以一定rpm振荡1小时，使其附着。通过混合器将以上述方式附着各浓度的微生物的翅片分离之后，通过连续稀释将其涂覆在R2A琼脂平板上。
这样的平板涂覆的结果，能够确认到：根据O.D.数值，附着在翅片上的微生物的浓度发生了变化。O.D.值为0.749时，显示出1.53×108±1.52×107cfu/g翅片的附着程度；O.D.值为0.588和0.55时，分别显示出4.00×107±1.00×107cfu/g翅片、1.03×107±8.50×105cfu/g翅片的附着程度。此外，O.D.值为0.5和O.D 0.45时，显示出6.00×106±7.00×105cfu/g翅片的附着度、2.53×106±3.51×105cfu/g翅片的附着度。能够确认到，根据O.D.值的附着程度示出比例关系。使用O.D.值0.5来涂覆其它10种无气味微生物，该O.D.值0.5是在上述附着浓度中允许涂覆分离了微生物的蒸发器芯所具有的106cfu/g水平的微生物的O.D.值。
(2)无气味微生物在蒸发器芯和翅片上的附着性的确认
上述翅片附着实验结果，确认到：与属无关，11种无气味微生物在相同O.D.显示出相同的附着程度。因此，使用菌株之一的水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)并使用与翅片相同的O.D.的培养液来确认附着在蒸发器芯的微生物的量。
O.D.被调整为0.5的水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)在蒸发器芯上的附着程度为8.95×106±5.51×105cfu/g翅片。使用相同的培养液使其附着的蒸发器芯的情况下，附着程度为2.55×106±3.51×105cfu/g翅片。通过这样的结果能够确认到，使用相同的O.D.的培养液时会附着相同水平的微生物。
实施例9：4个组合的30天存活评价
利用下述组合执行30天的存活评价。用于涂覆组合的微生物的组合号和微生物列表如下(表11)。
[表11]
组合
1 水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum) PR1016A
2 弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides) TX0632
3 分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum) TX0642
4 高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens) TX0618
为了评价从出租车分离的无气味微生物组合的30天的短期影响，构成了上述组合，对该组合执行30天的短期评价。
上述组合是由水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)PR1016A、弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)TX0632、分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)TX0642、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)TX0618这4个菌株构成的组合，在时间为0时确认到3.99×106±2.82×106cfu/g翅片水平的总细菌，检测到红色和白色的菌落分别为3.62×106±2.79×106cfu/g翅片、3.67×105±3.06×104cfu/g翅片水平。经过30天后，没有检测到白色菌落，检测到红色菌落为2.14×106±1.25×105cfu/g翅片水平，其与总细菌相同(图2)。
通过REP-PCR确认了个体数，其结果：时间0的组合中，在111个代表样品中，确认到43个为水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)PR1016A，弧形柄杆菌(Caulobactervibrioides)TX0632为6个样品，分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)TX0642为52个样品，高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)TX0618为10个。根据这些结果能够确认到，甲基杆菌属sp.2种占全部组合的85.6％(图3)。
经过30天后，REP-PCR图谱的分析结果表明，在89个代表性微生物中，检测到水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)PR1016A为26个，分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)TX0642为63个，这表示甲基杆菌属sp.与时间经过无关地在蒸发器芯环境下占优势并存活。另外，未检测到外部微生物的栖息。
结论是，为了评价从长途行驶出租车分离的无气味微生物组合的30天的短期影响而构成了上述组合，确认到水生甲基杆菌(Methylobacterium aquaticum)PR1016A和分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)TX0642在经过30天后依然存活着。由这两种所形成的生物膜维持无气味的无气味状态，能够确认到外部微生物的栖息受到了抑制。
如上所述，对本发明的特定部分进行了详细说明，本领域技术人员能够明确地知晓，这样的具体说明仅为优选的具体例，并且本发明的范围不限定于此。因此，本发明的实质范围由请求保护的范围及其等同物所定义。
<110> 现代自动车株式会社
<120> 包含无气味微生物弧形柄杆菌的气味防止用组合物
<160> 4
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1422
<212> DNA
<213> 弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides) HKMC-14
<220>
<221> rRNA
<222> (1)..(1422)
<223> 16s rRNA
<400> 1
ggctcagagc gaacgctggc ggcaggccta acacatgcaa gtcgaacgga tccttcggga 60
ttagtggcgg acgggtgagt aacacgtggg aacgtgccct ttggttcgga acaactcagg 120
gaaacttgag ctaataccgg atgtgccctt cgggggaaag atttatcgcc attggagcgg 180
cccgcgtcgg attagctagt tggtggggta aaggcccacc aaggcgacga tccgtagctg 240
gtctgagagg atgatcagcc acattgggac tgagacacgg cccaaactcc tacgggaggc 300
agcagtgggg aatcttgcgc aatgggcgaa agcctgacgc agccatgccg cgtgaatgat 360
gaaggtctta ggattgtaaa attctttcac cggggacgat aatgacggta cccggagaag 420
aagccccggc taacttcgtg ccagcagccg cggtaatacg aagggggcta gcgttgctcg 480
gaattactgg gcgtaaaggg agcgtaggcg gactgtttag tcagaggtga aagcccaggg 540
ctcaaccttg gaattgcctt tgatactggc agtcttgagt acggaagagg tatgtggaac 600
tccgagtgta gaggtgaaat tcgtagatat tcggaagaac accagtggcg aaggcgacat 660
actggtccgt tactgacgct gaggctcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 720
tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct agttgtcggc atgcatgcat gtcggtgacg 780
cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa actcaaagga 840
attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgcagaa 900
ccttaccacc ttttgacatg cctggaccgc cacagagatg tggttttccc ttcggggact 960
gggacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc 1020
gcaacgagcg caaccctcgt gattagttgc catcaggttt ggctgggcac tctaatcata 1080
ctgccggagt taatccggag gaaggcgggg atgacgtcaa gtcctcatgg cccttacaag 1140
gtgggctaca cacgtgctac aatggcgact acagagggct gcaatcccgc gagggggagc 1200
caatccctaa aagtcgtctc agttcggatt gttctctgca actcgagagc atgaagttgg 1260
aatcgctagt aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1320
ccgcccgtca caccatggga gttggcttta cccgaaggcg ctgcgctaac cgcaaggagg 1380
caggcgacca cggtagggtc agcgactggg gtgaagtcgt aa 1422
<210> 2
<211> 1424
<212> DNA
<213> 高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens) HKMC-15
<220>
<221> rRNA
<222> (1)..(1424)
<223> 16s rRNA
<400> 2
tcagagcgaa cgctggcggc aggcttaaca catgcaagtc gagcgggcgt agcaatacgt 60
cagcggcaga cgggtgagta acgcgtggga acgtaccttt tggttcggaa caacacaggg 120
aaacttgtgc taataccgga taagccctta cggggaaaga tttatcgccg aaagatcggc 180
ccgcgtctga ttagctagtt ggtagggtaa cggcctacca aggcgacgat cagtagctgg 240
tctgagagga tgatcagcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca 300
gcagtgggga atattggaca atgggggcaa ccctgatcca gccatgccgc gtgagtgatg 360
aaggccctag ggttgtaaag ctcttttgtg cgggaagata atgacggtac cgcaagaata 420
agccccggct aacttcgtgc cagcagccgc ggtaatacga agggggctag cgttgctcgg 480
aatcactggg cgtaaagggt gcgtaggcgg gtctttaagt caggggtgaa atcctggagc 540
tcaactccag aactgccttt gatactgaag atcttgagtt cgggagaggt gagtggaact 600
gcgagtgtag aggtgaaatt cgtagatatt cgcaagaaca ccagtggcga aggcggctca 660
ctggcccgat actgacgctg aggcacgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct 720
ggtagtccac gccgtaaacg atgaatgcca gccgttagtg ggtttactca ctagtggcgc 780
agctaacgct ttaagcattc cgcctgggga gtacggtcgc aagattaaaa ctcaaaggaa 840
ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgacgcaa cgcgcagaac 900
cttaccagcc cttgacatgt ccgggaccgg tcgcagagat gtgaccctct cttcggagcc 960
cggaacacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc 1020
cgcaacgagc gcaacccccg tccttagttg ctaccattta gttgagcact ctaaggagac 1080
tgccggtgat aagccgcgag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcctcatgg cccttacggg 1140
ctgggctaca cacgtgctac aatggcggtg acaatgggat gctaaggggc gacccctcgc 1200
aaatctcaaa aagccgtctc agttcggatt gggctctgca actcgagccc atgaagttgg 1260
aatcgctagt aatcgtggat cagcacgcca cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca 1320
ccgcccgtca caccatggga gttggtttta cctgaagacg gtgcgctaac cgcaaggagg 1380
cagccggcca cggtagggtc agcgactggg gtgaagtcgt aaca 1424
<210> 3
<211> 1430
<212> DNA
<213> 大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense) HKMC-16
<220>
<221> rRNA
<222> (1)..(1430)
<223> 16s rRNA
<400> 3
ttgatcatgg ctcagagcga acgctggcgg caggcttaac acatgcaagt cgagcgggcg 60
tagcaatacg tcagcggcag acgggtgagt aacgcgtggg aacgtacctt ttggttcgga 120
acaacacagg gaaacttgtg ctaataccgg ataagccctt acggggaaag atttatcgcc 180
gaaagatcgg cccgcgtctg attagctagt tggtgaggta acggctcacc aaggcgacga 240
tcagtagctg gtctgagagg atgatcagcc acattgggac tgagacacgg cccaaactcc 300
tacgggaggc agcagtgggg aatattggac aatgggcgca agcctgatcc agccatgccg 360
cgtgagtgat gaaggcccta gggttgtaaa gctcttttgt gcgggaagat aatgacggta 420
ccgcaagaat aagccccggc taacttcgtg ccagcagccg cggtaatacg aagggggcta 480
gcgttgctcg gaatcactgg gcgtaaaggg tgcgtaggcg ggtctttaag tcaggggtga 540
aatcctggag ctcaactcca gaactgcctt tgatactgaa gatcttgagt tcgggagagg 600
tgagtggaac tgcgagtgta gaggtgaaat tcgtagatat tcgcaagaac accagtggcg 660
aaggcggctc actggcccga tactgacgct gaggcacgaa agcgtgggga gcaaacagga 720
ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgaatgcc agccgttagt gggtttactc 780
actagtggcg cagctaacgc tttaagcatt ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa 840
actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgacgca 900
acgcgcagaa ccttaccagc ccttgacatg tccaggaccg gtcgcagaga tgtgaccttc 960
tcttcggagc ctggaacaca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt 1020
gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccccc gtccttagtt gctaccattt agttgagcac 1080
tctaaggaga ctgccggtga taagccgcga ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg 1140
gcccttacgg gctgggctac acacgtgcta caatggcggt gacaatggga tgctaagggg 1200
cgacccttcg caaatctcaa aaagccgtct cagttcggat tgggctctgc aactcgagcc 1260
catgaagttg gaatcgctag taatcgtgga tcagcacgcc acggtgaata cgttcccggg 1320
ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agttggtttt acctgaagac ggtgcgctaa 1380
ccgcaaggag gcagccggcc acggtagggt cagcgactgg ggtgaagtcg 1430
<210> 4
<211> 1418
<212> DNA
<213> 分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum) HKMC-17
<220>
<221> rRNA
<222> (1)..(1418)
<223> 16s rRNA
<400> 4
gctcagagcg aacgctggcg gcaggcttaa cacatgcaag tcgagcgggc ccttcggggt 60
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ccgcgtctga ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggcgacgat cagtagctgg 240
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aaggccttag ggttgtaaag ctcttttatc cgggacgata atgacggtac cggaggaata 420
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tcaaccacag aatggccttc gatactggga cgcttgagta tggtagaggt tggtggaact 600
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ggtagtccac gccgtaaacg atgaatgcca gctgttgggg tgcttgcacc tcagtagcgc 780
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gcacacaggt gctgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg 1020
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gcccgtcaca ccatgggagt tggtcttacc cgacggcgct gcgccaaccg caaggaggca 1380
ggcgaccacg gtagggtcag cgactggggt gaagtcgt 1418
PCT/RO/134表

Claims (20)

1.一种气味防止用组合物，其特征在于：
包含选自弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)、高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)、大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)和分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)中的一种以上无气味微生物或其培养液。
2.如权利要求1所述的气味防止用组合物，其特征在于：
所述组合物用于防止在空调装置中产生的气味。
3.如权利要求1所述的气味防止用组合物，其特征在于：
所述弧形柄杆菌为弧形柄杆菌(Caulobacter vibrioides)HKMC-14(保藏号：KCCM11685P)，
所述高效固氮慢生根瘤菌为高效固氮慢生根瘤菌(Bradyrhizobium diazoefficiens)HKMC-15(保藏号：KCCM 11686P)，
所述大庆大豆慢生根瘤菌为大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)HKMC-16(保藏号：KCCM 11687P)，
所述分枝甲基杆菌为分枝甲基杆菌(Methylobacterium brachiatum)HKMC-17(保藏号：KCCM 11688P)。
4.一种蒸发器芯，其特征在于：
涂覆有权利要求1所述的气味防止用组合物。
5.如权利要求4所述的蒸发器芯，其特征在于：
权利要求1～3中任一项所述的微生物以104cfu/g至108cfu/g的浓度附着于所述蒸发器芯。
6.如权利要求5所述的蒸发器芯，其特征在于：
利用光密度O.D.值为0.3至0.9的微生物培养液来进行所述微生物的附着。
7.如权利要求4所述的蒸发器芯，其特征在于：
所述组合物内的微生物在蒸发器芯表面形成生物膜。
8.一种空调装置，其特征在于：
包含权利要求4所述的蒸发器芯。
9.一种不引发空调装置内气味的无气味蒸发器芯的制造方法，其特征在于：
包括：将权利要求1～3中任一项所述的组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
10.如权利要求9所述的制造方法，其特征在于：
所述涂覆步骤包括将所述组合物所包含的微生物以104cfu/g至108cfu/g的浓度附着于蒸发器芯的过程。
11.如权利要求9所述的制造方法，其特征在于：
所述制造方法还包括使所涂覆的组合物内的微生物繁殖以形成生物膜的步骤。
12.一种空调装置的气味防止方法，其特征在于：
包括：将权利要求1～3中任一项所述的组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
13.如权利要求12所述的气味防止方法，其特征在于：
所述涂覆的步骤包括将所述组合物所包含的微生物以104cfu/g至108cfu/g的浓度附着于蒸发器芯的过程。
14.如权利要求12所述的气味防止方法，其特征在于：
所述气味防止方法还包括使所述组合物内所包含的微生物繁殖以形成生物膜的步骤。
15.一种空调装置的气味确认方法，其特征在于：
包括：将权利要求1～3中任一项所述的组合物涂覆于蒸发器芯的步骤。
16.如权利要求15所述的气味确认方法，其特征在于：
所述气味确认方法包括：投入成为所述涂覆的组合物内所包含的微生物的营养成分的石油类或空气污染物质来确认是否产生气味的步骤。
17.弧形柄杆菌HKMC-14(保藏号：KCCM 11685P)，其用于为了权利要求12所述的空调装置的气味防止而涂覆于蒸发器芯的用途。
18.高效固氮慢生根瘤菌HKMC-15(保藏号：KCCM 11686P)，其用于为了权利要求12所述的空调装置的气味防止而涂覆于蒸发器芯的用途。
19.大庆大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium daqingense)HKMC-16(保藏号：KCCM11687P)，其用于为了权利要求12所述的空调装置的气味防止而涂覆于蒸发器芯的用途。
20.分枝甲基杆菌HKMC-17(保藏号：KCCM 11688P)，其用于为了权利要求12所述的空调装置的气味防止而涂覆于蒸发器芯的用途。
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