ES2868180T3

ES2868180T3 - Derivados de pirido-imidazo rifamicina como agentes antibacterianos

Info

Publication number: ES2868180T3
Application number: ES18755539T
Authority: ES
Inventors: Egidio Marchi; Sacchetti Alessandro Lapini; Claudia Ori; Lisa Preti
Original assignee: Biofer SpA
Current assignee: Biofer SpA
Priority date: 2017-06-26
Filing date: 2018-06-25
Publication date: 2021-10-21
Anticipated expiration: 2038-06-25
Also published as: US20200157104A1; US20210363143A1; RU2020102511A; PL3645539T3; WO2019003076A1; MX2019015681A; EP3645539A1; US11028086B2; RU2020102511A3; DK3645539T3; CN110770244A; EP3645539B1; HUE054832T2

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I) o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo **(Ver fórmula)** donde R y R1 pueden ser H, **(Ver fórmula)** con la condición de que: cuando R = **(Ver fórmula)**, entonces R1 = H y R2 = CH3CO- o H; cuando R1 = **(Ver fórmula)**, entonces R = H y R2 = CH3CO- o H; cuando R = **(Ver fórmula)**, entonces R1 = H y R2 = CH3CO- o H; y cuando R1 = **(Ver fórmula)**, entonces R = H y R2 = CH3CO- o H; donde R3 y R4 son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que comprende hidrógeno alquilo C1-C10 lineal o ramificado, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados entre aminoalquilo, alcoxi, fenoxi o sulfo, y arilo opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C1-C4, halógeno, amino, nitro;o R3 y R4 considerados junto con dos átomos de carbono consecutivos del núcleo de piridina pueden formar un anillo fenilo, opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, o un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, R5 se selecciona del grupo que comprende hidrógeno, hidroxi, alquilo C1-C10 lineal o ramificado, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre aminoalquilo, alcoxi, fenoxi o sulfo, y arilo opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C1-C4, halógeno, amino, nitro.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de pirido-imidazo rifamicina como agentes antibacterianos

La presente invención se refiere a nuevas pirido-imidazo rifamicinas, que se caracterizan por una actividad antibacteriana altamente selectiva y por una baja absorción por ruta oral.

Estado de la técnica

Las pirido(1’,2’:1,2)imidazo(5,4-c)rifamicinas son antibióticos obtenidos sintéticamente a partir de rifamicina S o rifamicina O, que se caracterizan, por un lado, por una baja absorción oral y, por otro lado, por una buena actividad antibacteriana contra bacterias tanto Gram-positivas como Gram-negativas. El progenitor de esta clase de antibióticos en las Rifaximina, que fue sintetizada por Marchi et al. a finales de los años setenta (US4341785A).

Actualmente, este antibiótico se encuentra disponible en los mercados europeo y americano, donde ha sido particularmente útil para el tratamiento de muchas enfermedades del tracto gastrointestinal en humanos, tal como la enfermedad de Chron, la diverticulitis, el intestino irritable, la amoniemia porto-sistémica, etc., y especialmente en los EE.UU. en la prevención de la diarrea del viajero.

El antibiótico también está disponible en el mercado veterinario para enfermedades bacterianas del aparato genital y para enfermedades de mastitis en vacas.

Desde 1988, el año en que la Rifaximina apareció en el mercado italiano, se ha continuado con el estudio de este antibiótico tanto desde un punto biológico como desde un punto de vista químico. Por un lado, existen muchas patentes de tecnologías de formulación y, por otro lado, patentes que reivindican polimorfos o pseudopolimorfos, también denominados solvatos, a los que se ha conferido una importancia fundamental debido a la atribución de una solubilidad diferente a los polimorfos y solvatos, para los cuales parece corresponder una biodisponibilidad una toxicidad diferentes: en las patentes US7045620 y WO2006094662, se reivindican respectivamente las formas polimórficas a, p, y, £ y S. Es muy difícil establecer si los diversos productos reivindicados son efectivamente polimórficos en base a las medidas refractométricas de rayos X parciales de los polvos cristalinos. De hecho, no se proporcionan datos tales como el punto de fusión de los compuestos, que podría resaltar las diferencias entre formas polimórficas y posiblemente entre derivados en una forma solvatada. Dichas formas polimórficas parecen poseer una solubilidad diferente, a la cual se asocia una diferente biodisponibilidad y una diferente toxicidad (WO2006094662). Todo esto resulta muy confuso y, si se quiere, contradictorio. De hecho, para llevar a cabo su actividad, el antibiótico debe disolverse en el medio, en este caso en el fluido intestinal, por lo que si fuera más soluble debería ser más activo y, por tanto, sería suficiente con dosis más bajas. Adicionalmente, la presencia de ácidos biliares (“Bile acids improve the antimicrobial effect of Rifaximin”, Darkoh., et al., Antimicrob. Agents Chemother.: 2010; 54 (9), 3618 - 3624) aumenta la actividad solo porque aumenta la cantidad de antibiótico disuelto. Sin embargo, en este caso los ácidos biliares aumentan la biodisponibilidad de todas las formas polimórficas y, por tanto, también la posible toxicidad de la forma usada en terapia, si la absorción se relacionara con la cantidad de fármaco disuelto. Además, en un entorno acuoso, es difícil entender cuál es la forma polimórfica estable, ya que las diversas formas descritas, a, p, y, £ y S, pueden transformarse unas en otras por absorción de humedad, incluso en estado sólido (WO2006094662).

Como puede observarse, uno de los puntos cruciales de la Rifaximina está relacionado, efectivamente, con su biodisponibilidad (“Rifaximin therapy and hepatic encephalopathy: pros and cons”, Zullo A., et al., Word Gastrointest. Pharmacol. Ther.: 2012; 3(4): 62 - 67; “Chronic Exposure to Rifaximin Causes Hepatic Steatosis in Pregnane X Receptor-Humanized Mice”, Jie Cheng, Kristopher W. Krausz, Naoki Tanaka, y Frank, J. González, Toxicol. Sciences: 2012; 129(2), 456-468), que debería estar limitada por su insolubilidad, pero que en su lugar depende de las formas pseudopolimórficas o solvatadas usadas, o de la presencia de ácidos biliares en el fluido intestina, y del estado inflamatorio intestina, tal como se describe en el trabajo citado sobre encefalopatía porto-sistémica.

También es interesante la actividad que presenta el antibiótico en la flora bacteriana eucariótica, p.ej., en la macrobiota. La Rifaximina presenta una actividad cuantificable sobre las especies bacterianas que constituyen la flora eucariótica intestinal de los humanos. Por ejemplo, la Rifaximina presenta una actividad antibacteriana destacable sobre cepas de lactobacilos, bifidobacterias, enterococos, enterobacterias, etc., incluso si no todas las especies son inhibidas del mismo modo.

Claramente, el ser capaces de disponer de un antibiótico que ha sido desprovisto o, en cualquier caso, que presenta una elevada selectividad por la especie bacteriana de la macrobiota intestinal sería una innovación adicional importante que, en combinación con una baja biodisponibilidad oral, representaría una mejora terapéutica fundamental del producto. De hecho, hoy día el uso terapéutico de la Rifaximina como de todos los demás antibióticos, tanto tópico como no, está asociado a la suplementación con suplementos de cepas eucarióticas, ya que el uso de antibióticos por un lado elimina y/o reduce la presencia intestinal de cepas patógenas, pero al mismo tiempo da como resultado una reducción y alteración significativas del mix de células eucarióticas que conforman la macrobiota. Por lo tanto, el disponer de un antibiótico que muestre una buena selectividad hacia las cepas eucarióticas que reduce, por ejemplo, la presencia intestinal de las especies por un factor único de 10, o como mucho de 100, podría considerarse una innovación terapéutica fundamental, considerando que el uso de dichos antibióticos es principalmente crónico, excepto para el uso ocasional en la diarrea del viajero.

Precisamente para destacar la importancia de una selectividad hacia las cepas eucarióticas, se recuerda que una característica importante de esta clase de antibióticos es la posibilidad de repetir la terapia tres o cuatro semanas después del tratamiento previo, ya que la selección de cepas resistentes se ve enormemente dificultada por el mecanismo particular de acción de las rifamicinas. Éstas, de hecho, son activas en la ARN polimerasa bacteriana dependiente de ADN, así que las cepas que pueden seleccionarse como resistentes durante el tratamiento están, de hecho, controladas fácilmente por las cepas no resistentes, ya que presentan una capacidad de replicación limitada. Adicionalmente, al contrario de lo que ocurre para otros antibióticos, tal como las penicilinas, etc., la resistencia a las rifamicinas no es transmisible a través de plásmidos. Obviamente, estas características, junto con el hecho de que las pirido-imidazo-rifamicinas, tal como la Rifaximina, son mal absorbidas por ruta oral, hacen que esta clase de antibióticos sea particularmente importante para las enfermedades del tracto gastroentérico, que a menudo son enfermedades crónicas. Por lo tanto, es muy clara la importancia de disponer de un antibiótico que sea activo con las cepas patógenas posiblemente implicadas en la colonización intestinal, que tenga una buena selectividad hacia las cepas eucarióticas que conforman la microbiota y, igual de importante, que muestra una absorción muy baja.

Considerando todo lo descrito anteriormente, la Rifaximina muestra una absorción variable, dependiendo también del solvato usado, que puede oscilar entre 0,5% a más de 1%, con una excreción renal de aproximadamente 0,36% (Bajaj J.S., Riggio O, “Drug therapy: rifaximin”, Hepatology 2010; 52: 1484-148). Esta absorción está relacionada con la solubilidad del propio solvato, de tal modo que las formas con el menor contenido de agua son las más absorbidas. La forma amorfa también es muy soluble, y por tanto se demuestra que se absorbe 5-6 veces más que la Rifaximina a en el voluntario sano (Marzo A., Ismaili S., Dig. Liv. Dis. 2010; 42(s2): s191-s192), y por lo tanto se considera en riesgo para la posible selección de bacterias resistentes a un nivel sistémico. Es evidente que el riesgo, ligado a la solubilidad/absorción, está ciertamente presente también para la Rifaximina a, ya que se ha demostrado (Darkoh C, LichtenbergerL.M., AjamiN., etal. Antimicrob. Agents Chemother. 2010; 54: 3618-24) que la Rifaximina, en presencia de ácidos biliares, pasa de una solubilidad de 0,6% en agua a una solubilidad de 72,6%, es decir más de cien veces superior, en presencia de tan solo 20 mM de ácidos biliares. Dado que la Rifaximina se administra en dosis elevadas, que oscilan entre un mínimo de 400 mg/día en la diarrea del viajero, a 800 mg/día en la diverticulitis, a 2400 mg/día en la amoniemia porto-sistémica, incluso sin considerar la solubilidad en presencia de ácidos biliares, es evidente que incluso una absorción limitada, tal como la de la Rifaximina, podría representar un problema tanto para el potencial de selección de cepas bacterianas resistentes a un nivel sistémico, que incluye también la micobacteria de la tuberculosis, como para la posible interacción con fármacos, tal como estatinas, que comparten mediadores enzimáticos comunes, a nivel hepático. Por ejemplo, se reportó un aumento de las concentraciones en sangre de sodio y potasio para la Rifaximina durante el tratamiento terapéutico para amoniemia porto-sistémica. Adicionalmente, la Rifaximina presenta una actividad apreciable, tal como se ha ilustrado anteriormente, también sobre cepas bacterianas que constituyen la macrobiota intestinal, por tanto es necesario intervenir con una suplementación de cepas bacterianas eucarióticas a fin de restaurar el complejo probiótico intestinal después de cada periodo de administración del antibiótico.

Adicionalmente, al tener la Rifaximina una actividad de agonista sobre el receptor PXR hepático, del cual deriva su acción intestinal anti-inflamatoria, se ha destacado cómo provoca la Rifaximina, aunque no muy absorbido, una esteatosis masiva en ratones con dicho receptor humanizado (Cheng, Kristopher W. Krausz, Naoki Tanaka, y Frank, J. Gonzalez, Toxicological Sciences, 129(2), 456-468 (2012)).

En vista de estos resultados, se percibe la necesidad por tanto de nuevos derivados de rifamicina con una estructura de pirido-imidazo que se caractericen por una actividad antibacteriana altamente selectiva y por una baja absorción por ruta oral, por ejemplo, de un 50% menos que la Rifaximina. Los documentos WO 2010/122436 y J. Med. Chem.

1985, 28, 960-963 describen derivados de Rifamicina y sus actividades antibacterianas.

Descripción general de la invención

Los productos activos como antibióticos en el campo de la rifamicinas deben cumplir con los requerimientos conformacionales y químicos y deben poseer un equilibrio adecuado entre lipofilia e hidrofilia (L. Cellai, S. Cerrini, A. Segre, C. Battistoni, G. Cossu, G. Mattogno, M. Brufaniy E. Marchi. Mol. Pharm. 1985, 27: 103-108).

Por lo tanto, en la presente invención, para mantener la estructura de pirido-imidazo en la Rifamicina SV, se introdujo un grupo fácilmente funcionalizable en el núcleo de piridina, de tal modo que fue posible posteriormente obtener nuevos derivados con características químicas y físico-químicas muy diferentes. De esta manera, los inventores han descubierto de forma sorprendente moléculas con características adecuadas, a saber: una absorción intestinal al menos un 50% menor que la de la Rifaximina, una buena actividad antibacteriana sobre las cepas patógenas, y una actividad despreciable sobre las cepas bacterianas que constituyen la macrobiota intestinal, y en cualquier caso inferiores a la Rifaximina. Entre las diferentes posibles estructuras químicas, los inventores han observado experimentalmente que la introducción de un grupo formilo en la posición 4’- o 5’- del núcleo de piridina proporciona un derivado de 4’- o 5’-formil-4-desoxi-pirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV que está completamente desprovisto de actividad por sí mismo, pero que al mismo tiempo es susceptible de ser transformado fácilmente en una hidrazona, o una oxima, o una imina. El grupo aldehído de las dos posiciones 4’- o 5’- aumenta significativamente la disociación del grupo hidroxi en la posición 8- que, siendo un grupo fuertemente atractor de electrones, da como resultado por tanto en la ausencia de actividad antibacteriana, dado que su capacidad para cruzar la pared bacteriana se ve impedida (P. Bellomo, E. Marchi, G. Mascellani, J. Med. Chem, 1981, 24 (11),1310-1314; M.F. Dampier, H. W. Whitlock, Jr. J. Am. Chem. Soc. 1975, 97:21,6254-6256). Sin embargo, de forma sorprendente, su contribución electrónica puede ser modificada de forma favorable transformando el grupo carbonilo en una hidrazona, oxima o imina. Estos derivados, que se caracterizan por un efecto inductivo/mesomérico diferente, generalmente positivo, han demostrado de forma sorprendente que presentan características biológicas más modulables y adecuadas.

Dado que la reacción entre Rifamicina O y 2-aminopiridina que porta un grupo formilo en posición 4 o en posición 5 es difícil, debido a la reactividad del grupo formilo, los inventores intentaron usar 2-amino-4-formilpiridina protegida como acetal. La reacción es posible, pero, en cualquier caso, difícil, ya que obtener la 2-amino-4-formilpiridina protegida no es fácil y conduce a un reactivo particularmente sucio. Por lo tanto, los inventores plantearon la hipótesis de obtener el grupo formilo en el núcleo de piridina condensado después de haber introducido un grupo pirido-imidazo en la rifamicina SV que presentaba un grupo funcionalizable adicional. Sorprendentemente, después de haber obtenido 4’-metilol-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4c]rifamicina SV con un buen rendimiento, por reacción de Rifamicina O con 2-amino-4-metilol-piridina, fue posible obtener 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV, por oxidación del grupo metilol con dióxido de manganeso en un disolvente adecuado, y posterior reducción con ácido ascórbico. Por tanto, los inventores fueron capaces de verificar que el producto así obtenido es estable y funcionalizable para dar una hidrazona, oxima o imina. Posteriormente, los inventores fueron capaces de verificar que, sorprendentemente, existían otras formas de obtener hidrazonas, oximas o iminas de 4'-formil-4-desoxipirido[1',2'-1.2] imidazo[5.4-c]rifamicina SV, haciendo reaccionar Rifamicina O o 3-yodo o 3-bromorifamicina S con un derivado adecuado de 2-amino-4/5-formilpiridina. Usando estas rutas sintéticas, fueron capaces de sintetizar varias hidrazonas, entre ellas las de las posiciones 4’- y 5’-, que se demostró que presentaban una buena actividad antibacteriana. Entre estos productos, en particular la 4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (aquí Ejemplo 3) presentó una buena actividad antibacteriana sobre cepas Gram-positivas y Gram-negativas, y sorprendentemente mostró una absorción intestinal 7-8 veces más baja, es decir, aproximadamente el 15%, en comparación con la mostrada y confirmada en bibliografía para la Rifaximina. Adicionalmente, una característica incluso más sorprendente de este derivado viene dada por la elevada selectividad mostrada hacia las cepas eucarióticas evaluadas, que son componentes esenciales de la macrobiota intestinal.

Breve descripción de las figuras

- Figura 1: muestra una comparación de los niveles en sangre de Rifaximina (RFX) después de administración IV y oral.

- Figura 2: muestra una comparación de los niveles en sangre del compuesto del Ejemplo 3 después de administración IV y oral.

- Figura 3: muestra el efecto del compuesto del Ejemplo 3 y de Rifaximina sobre las cepas bacterianas eucarióticas evaluadas. Encima de las barras se incluyen los análisis estadísticos entre los tratamientos (*P<0,1; **P<0,05).

- Figura 4: muestra el espectro I.R. del compuesto 4'-metilol-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 1.

- Figura 5: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCl3 del compuesto 4'-metilol-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 1.

- Figura 6: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 4'-metilol-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 1.

- Figura 7: muestra el espectro I.R. del compuesto 4'-formil-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S obtenido en el Ejemplo 2.

- Figura 8: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 4'-formil-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S obtenido en el Ejemplo 2.

- Figura 9: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 4'-formil-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S obtenido en el Ejemplo 2.

- Figura 10: muestra el espectro I.R. del compuesto 4'-formil-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 2.

- Figura 11: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 4'-formil-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 2.

- Figura 12: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 4'-formil-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 2.

- Figura 13: muestra el espectro I.R. del compuesto 4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1',2'-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 3.

- Figura 14: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c ]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 3.

- Figura 15: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCI³del compuesto 4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c ]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 3.

- Figura 16: muestra el espectro I.R. del compuesto 4'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 4.

- Figura 17: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 4'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 4.

- Figura 18: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 4'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 4.

- Figura 19: muestra el espectro I.R. del compuesto 4'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 5.

- Figura 20: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 4'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 5.

- Figura 21: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 4'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 5.

- Figura 22: muestra el espectro de RMN de 1H en MeOD del compuesto 4'-[(4-carboxiamidopiridil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 6.

- Figura 23: muestra el espectro de RMN de 13C en MeOD del compuesto 4'-[(4-carboxiamidopiridil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 6.

- Figura 24: muestra el espectro I.R. del compuesto 5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 7.

- Figura 25: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 7.

- Figura 26: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCl3 del compuesto 5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 7.

- Figura 27: muestra el espectro I.R. del compuesto 5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 8.

- Figura 28: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 8.

- Figura 29: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 8.

- Figura 30: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 9.

- Figura 31: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCh del compuesto 5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 9.

- Figura 32: muestra el espectro de RMN de 1H en CDCh del compuesto 4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c ]rifamicina S obtenido en el Ejemplo 10.

- Figura 33: muestra el espectro de RMN de 13C en CDCl3 del compuesto 4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c ]rifamicina S obtenido en el Ejemplo 10.

- Figura 34: muestra el espectro I.R. del compuesto 25-desacetil-5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 11.

- Figura 35: muestra el espectro de RMN de 1H en MeOD del compuesto 25-desacetil-5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 11.

- Figura 36: muestra el espectro de RMN de 13C en MeOD del compuesto 25-desacetil-5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 11.

- Figura 37: muestra el espectro de RMN de 1H en MeOD del compuesto 25-desacetil-5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 12.

- Figura 38: muestra el espectro de RMN de 13C en MeOD del compuesto 25-desacetil-5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV obtenido en el Ejemplo 12.

Definiciones

A menos que se defina de otro modo, todos los términos de la técnica, las anotaciones, y otros términos científicos usados en la presente memoria se pretende que tengan los significados habituales para los especialistas en la técnica a la que pertenece esta descripción. En algunos casos, en la presente memoria se definen términos con significados que son entendidos habitualmente por claridad y/o para facilitar la referencia; por tanto, la inclusión de tales definiciones en la presente descripción no debería interpretarse como representativa de una diferencia sustancial con respecto a lo que es entendido de forma general en la técnica.

El término “halógeno” en la presente memoria se refiere a flúor (F), cloro (Cl), bromo (Br) o yodo (I).

El término “alquilo C¹-C¹⁰” en la presente memoria se refiere a un hidrocarburo ramificado o lineal que contiene de 1 a 10 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo C¹-C¹⁰incluyen, aunque sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo.

El término “arilo” en la presente memoria se refiere a sistemas de anillo aromáticos mono y policarbocíclicos, donde los anillos carbocíclicos individuales de los sistemas de anillo policarbocíclicos pueden estar condensados o unidos unos a otros mediante un enlace sencillo. Los grupos arilo adecuados comprenden, aunque sin limitación, fenilo, naftilo y bifenilo.

El término “ariloxi” en la presente memoria se refiere a un grupo O-arilo, donde “arilo” se ha definido anteriormente.

El término “alcoxi” en la presente memoria se refiere a un grupo O-alquilo, donde “alquilo” se ha definido anteriormente.

El término “heterociclo” en la presente memoria se refiere a un anillo monocíclico de 4, 5, 6, 7 u 8 miembros, que está saturado o insaturado, y que consiste en átomos de carbono y uno o más heteroátomos seleccionados entre N, O y S, y donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre opcionalmente pueden estar oxidados, y el heteroátomo de nitrógeno opcionalmente puede estar cuaternizado. El anillo heterocíclico puede estar unido a cualquier heteroátomo o átomo de carbono, siempre que la unión se traduzca en la creación de una estructura estable. El término también comprende cualesquier sistemas bicíclicos donde cualquiera de los anteriores anillos heterocíclicos está condensado a un arilo o a otro heterociclo. Cuando el anillo heterocíclico es un anillo heterocíclico aromático, puede definirse como “anillo heteroaromático”.

El término “anillo insaturado” en la presente memoria se refiere a un anillo que está parcial o completamente insaturado. Por ejemplo, un anillo monocíclico C6 se refiere a ciclohexeno, ciclohexadieno y benceno.

El término “sustituido” en la presente memoria se refiere a una mono- o poli-sustitución con un sustituyente definido (o no definido) en un grado tal que se permite la sustitución sencilla o múltiple.

El término “excipiente fisiológicamente aceptable” se refiere a una sustancia desprovista de cualquier efecto farmacológico por sí misma, y que no produce reacciones adversas cuando se administra a un mamífero, preferiblemente a un ser humano. Los excipientes fisiológicamente aceptables son bien conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en “Handbook of Pharmaceutical Excipients", sexta edición 2009, incorporado a la presente memoria a modo de referencia.

El término “sales o derivados farmacéuticamente aceptables” se refiere a aquellas y derivados que poseen la eficacia biológica y las propiedades del compuesto salificado, y que no producen reacciones adversas cuando se administran a un mamífero, preferiblemente a un ser humano. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden incluir sales inorgánicas y orgánicas; los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitación: carbonato, hidrocloruro, hidrobromuro, sulfato, hidrógeno sulfato, citrato, maleato, fumarato, trifluoroacetato, 2-naftalenosulfonato y para-toluenosulfonato. Se puede encontrar información adicional sobre sales farmacéuticamente aceptables en “Handbook of pharmaceutical salts", P. Stahl, C. Wermuth, WILEY-CH, 127-133, 2008, incorporado a la presente memoria a modo de referencia.

Los términos “que comprende”, “que presenta”, “que incluye” y “que contiene” deben ser considerados como términos abiertos (es decir, que significan “que comprende, aunque sin limitación”), y deben considerarse como un soporte también para términos tales como “consiste esencialmente en”, “que consiste esencialmente en” o “que consiste en”.

Los términos “consiste esencialmente en”, “que consiste esencialmente en” deben ser considerados como términos semi-cerrados, lo que significa que no se incluyen otros ingredientes que afecten materialmente a las características novedosas de la invención.

Los términos “consiste en”, “que consiste en” deben considerarse como términos cerrados.

Descripción detallada de la invención

Los inventores han observado experimentalmente que las hidrazonas de Rifamicina SV con una estructura de piridoimidazo presentan una actividad antibacteriana altamente selectiva y que son poco absorbidas por ruta oral.

Según un primer aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) o a sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

con la condición de que:

cuando

, entonces Ri = H y R²= CH3CO- o H;

cuando

entonces R = H y R²= CH3CO- o H;

cuando entonces R¹= H y R²= CH3CO- o H;

^y N R5

cuando R¹= — & , entonces R = H y R²= CH3CO- o H;

donde R³y R⁴son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que comprende hidrógeno alquilo C¹-C¹⁰lineal o ramificado sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados entre aminoalquilo, alcoxi, fenoxi o sulfo, y arilo opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C¹-C⁴, halógeno, amino, nitro; o

R³y R⁴considerados junto con dos átomos de carbono consecutivos del núcleo de piridina pueden formar un anillo fenilo, opcionalmente sustituido con alquilo C¹-C⁴, o un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con alquilo C¹-C⁴,

R⁵se selecciona del grupo que comprende hidrógeno, hidroxi, alquilo C¹-C¹⁰lineal o ramificado opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre aminoalquilo, alcoxi, fenoxi o sulfo, y arilo opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C¹-C⁴, halógeno, amino, nitro.

Una clase de compuestos preferidos comprende compuestos de Fórmula (I)

, R S

__ . N -N

^{^} '

donde R y R¹pueden ser H o Ri ,

donde el arilo, opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C¹-C⁴, halógeno, amino, nitro, se selecciona entre fenilo y bencilo.

Una clase adicional de compuestos más preferidos comprende compuestos de Fórmula (I)

, R S

__ . N -N

^{^} '

donde R y R¹pueden ser H o Ri

donde el anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros se selecciona del grupo que comprende pirrolidina, piperidina, piperazina y morfolina.

Son particularmente preferidos los siguientes compuestos de Fórmula (I), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos:

4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 3);

4'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 4);

4'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 5);

4'-[(4-carboxiamidopiridil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 6);

5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 7);

5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 8);

5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 9);

4’-[(-4-metil-1 -piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S (Ejemplo 10);

25-desacetil-5'-[(1 -piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 11);

25-desacetil-5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (Ejemplo 12); 4'-[(N-morpholinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(N-morpholinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-4'-[(N-morpholinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-5'-[(N-morpholinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4’-[(N-propil,N-butil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5’-[(N-propil,N-butil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-4’-[(N-propil,N-butil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-5’-[(N-propil,N-butil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(N,N-dipentil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(N,N-dipentil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-4’-[(N,N-dipentil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-5’-[(N,N-dipentil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(4-etil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(4-etil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-4’-[(4-etil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-5’-[(4-etil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(4-propil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(4-propil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-4’-[(4-propil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV; y

25-desacetil-5’-[(4-propil-1 -piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

Según un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un primer proceso para producir un compuesto de Fórmula (I), que comprende las etapas de:

- hacer reaccionar Rifamicina O con 2-amino-4-hidroximetilpiridina para obtener 4’-hidroximetil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV;

- oxidar en fase líquida, preferiblemente en un disolvente aprótico, la 4'-hidroximetil-4-desoxipirido[1',2'-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV con un oxidante adecuado, preferiblemente dióxido de manganeso, para obtener 4'-formil-4-desoxipirido[1',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV;

- hacer reaccionar la 4'-formil-4-desoxipirido[1 ',2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV con una hidracina de Fórmula (II) NH2-N(R3)(R4), donde R³y R⁴son como se define en la Fórmula (I), para obtener la correspondiente hidrazona.

En una realización preferida del primer proceso según la invención, se usan entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 equivalentes molares de 2-amino-4-hidroximetilpiridina por mol de Rifamicina O y/o entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 equivalentes molares de hidracina por mol de 4'-formil-4-desoxipirido[1',2'-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV.

Según un tercer aspecto, la presente invención se refiere a un segundo proceso para producir un compuesto de Fórmula (I), que comprende las etapas de:

- hacer reaccionar una hidracina de Fórmula (II) NH2-N(R3)(R4), donde R³y R⁴son como se define en la Fórmula (I), con 2-amino-4-formilpiridina o con 2-amino-5-formilpiridina para obtener la correspondiente hidrazona;

- hacer reaccionar la hidrazona obtenida con Rifamicina O, 3-yodorifamicina S, 3-bromorifamicina S o 25-desacetil-25-hidroxirifamicina S.

En una realización preferida del segundo proceso según la invención, se usan entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 equivalentes molares de la hidrazona obtenida por mol de Rifamicina O o de 3-yodo/bromo rifamicina S.

Preferiblemente, en los procesos según la invención, el disolvente usado es un disolvente orgánico seleccionado entre alcanol alifático que contiene de 1 a 4 átomos de carbono, solo o mezclado con agua, o con DMF, o en un disolvente halogenado de cadena corta, preferiblemente diclorometano.

Preferiblemente, en los procesos según la invención, la temperatura de reacción puede variar entre la temperatura de 10°C y el punto de ebullición del disolvente, preferiblemente no por encima de 802C, y/o el tiempo de reacción puede variar entre unos pocos minutos y 24h.

Según una realización preferida, los compuestos de Fórmula (I) pueden oxidarse mediante tratamiento en un oxidante adecuado, preferiblemente dióxido de manganeso.

Según un cuarto aspecto, la presente invención se refiere al producto 4’-hidroximetil-4-desoxipirido[1’,2’-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV, utilizable como intermedio para obtener 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV.

El producto preferiblemente se obtiene por reacción de 1 mol de Rifamicina O con de 1 a 5 moles de 2-amino-4-hidroximetilpiridina.

Según un quinto aspecto, la presente invención se refiere al producto 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV, como intermedio para obtener compuestos de Fórmula (I).

Preferiblemente, el producto se obtiene partiendo del producto 4’-hidroximetil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV por oxidación en fase líquida con, p.ej., dióxido de manganeso.

Según un sexto aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) para uso como medicamento. En una realización preferida, los compuestos de Fórmula (I) se usan en el tratamiento y/o la prevención de enfermedades del tracto gastrointestinal, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende enfermedades debidas a dismicrobismo bacteriano, IBD, enfermedad de Chron, diverticulitis y diarrea del viajero, o en infecciones cutáneas, oculares, vaginales o dentales, preferiblemente en el tratamiento de enfermedades que requieren un tratamiento crónico.

En una realización preferida adicional, los compuestos de Fórmula (I) se usan en el tratamiento y/o la prevención de la mastitis seca, en enfermedades vaginales en vacas, en enfermedades intestinales en mascotas, o como terapia auxínica en cría de animales, preferiblemente para pollos, pavos, patos o conejos.

Según un séptimo aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de Fórmula (I), junto con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Preferiblemente, la formulación anterior es adecuada para ser administrada tópicamente, preferiblemente en la forma de sólidos, líquidos o geles, de liberación inmediata o de liberación programada.

Esquema sintético general

Los compuestos descritos en la presente invención pueden prepararse usando los siguientes métodos.

1er Método

Un primer método consiste en hacer reaccionar Rifamicina O en un disolvente prótico, tal como alcohol metílico, etílico, propílico, etc., solo o mezclado con otros disolventes, tal como acetonitrilo, dioxano, etc., con 2-amino-4-metilolpiridina para obtener 2-amino-4-metilolpiridina para obtener 4'-metilol-pirido[1',2'-1,2]imidazo(5,4-c)rifamicina SV. Este compuesto es oxidado al correspondiente derivado de carbonilo 4'-formilpirido[1 ',2'-1,2]imidazo(5,4-c)rifamicina S con dióxido de manganeso en un disolvente aprótico, tal como acetonitrilo o diclorometano, y posteriormente es reducido con ácido ascórbico a la forma SV, y a continuación se hace reaccionar con una hidracina, hidroxilamina o amina adecuada según el Esquema 1:

donde R³y R⁴tienen el mismo significado indicado para la Fórmula (I).

Con este método, también es posible obtener iminas y oximas, usando los reactivos adecuados.

Con el Esquema 1, también es posible obtener derivados 5’ partiendo, por ejemplo, de (2-amino-5-piridin)metanol.

2° Método

Un segundo método consiste en hacer reaccionar 2-amino-4/5-carbonilpiridina con la amina, hidracina o hidroxilamina apropiada, obteniendo el producto de adición que se hace reaccionar a continuación con 3-yodo/bromorifamicina S (obtenida según la patente US4179438) o con Rifamicina O según el Esquema 2:

Usando este esquema de síntesis, partiendo de 3-yodo/bromorifamicina S o de Rifamicina O y una hidrazona de 2-amino-4/5-formilpiridina, se obtuvieron los derivados de hidrazona 4’/5’-formil-4-desoxi-pirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

En particular, se usa entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 moles de una hidrazona, obtenida mediante condensación de 2-amino-4-formilpiridina o 2-amino-5-formilpiridina con una hidracina sustituida adecuada donde los sustituyentes R³y R⁴son como se ha definido anteriormente, por cada mol de Rifamicina O o de 3-yodo/bromo rifamicina S.

Los productos finales obtenidos están todos en forma reducida, es decir la forma SV; sin embargo, es posible obtener también derivados en la forma S, es decir la forma oxidada, usando un agente oxidante adecuado, normalmente con dióxido de manganeso que es fácilmente eliminado por filtración (ver el Esquema 3).

donde R³y R⁴tienen el mismo significado indicado para el esquema 1.

Del mismo modo, partiendo de 25-desacetilrifamicina S, es posible obtener todos los derivados considerados en la presente invención, desacilados en la posición 25-, siguiendo, por ejemplo, el esquema de síntesis incluido a continuación (Esquema 4). Partiendo de 3-halo-25-desacetilrifamicina S, se hace reaccionar con la hidrazona deseada de 2-amino-4/5-formilpiridina, o con 2-amino-4-metilolrifamicina S, el producto de condensación es oxidado con un oxidante adecuado a 25-desacetil-4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV, y se condensa con la hidracina deseada (Esquema 4).

R³y R⁴tienen el mismo significado indicado para el esquema 1.

En los Esquemas 1-4, se usan disolventes orgánicos seleccionados entre un alcanol alifático que contiene de 1 a 4 átomos de carbono, solo o mezclado con agua, o con DMF, o en un disolvente halogenado de cadena corta, tal como diclorometano.

Preferiblemente, la temperatura de reacción puede variar entre una temperatura de 10°C y el punto de ebullición del disolvente, sin embargo no por encima de 80°C, mientras que el tiempo de reacción puede variar entre unos pocos minutos y 24h.

Ejemplos

A) Productos obtenidos siguiendo el método ilustrado en el Esquema 1.

Ejemplo 1. Obtención de 4’-metilol-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

Se suspenden 5,03 g de Rifamicina O (6,67 mmol) en 38 mL de etanol a 70°C; se añaden 2,48 g de 2-amino-4-hidroximetilpiridina (19,97 mmol), y se deja agitar la mezcla a 70°C durante 4h.

La disolución se lleva a temperatura ambiente y se diluye con 190 mL de diclorometano, la capa orgánica se lava dos veces con ácido ascórbico al 10%, y una vez con disolución saturada de cloruro sódico, y finalmente con agua destilada. La capa orgánica seca es filtrada y evaporada, el residuo sin purificar es cristalizado con una mezcla 1:5,5 de etanol/dietil éter obteniendo 3,60 g de producto en forma de sólido rojo-naranja.

Ejemplo 2. Obtención de 4’-formil-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

4,52 g de 4’-metilol-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (5,64 mmol) se disuelven en 32 mL de diclorometano, y se añaden 22,6 g de dióxido de manganeso a la disolución a 40°C durante 1 h. Después de volver a llevar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se elimina el dióxido de manganeso por filtración y se procesa en diclorometano. Se obtienen 3,73 g de 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S por evaporación del disolvente. A continuación, se disuelven 3,73 g de 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV en 45 mL de acetonitrilo y se agita vigorosamente con 10 mL de ácido ascórbico al 15% durante 30’.

La mezcla de reacción se diluye con 200 mL de diclorometano y se lava varias veces con agua destilada, después se seca y, tras evaporación del disolvente, la reacción sin purificar se lava con dietil éter, obteniendo 3,03 g de producto en la forma de un sólido purpúreo.

Ejemplo 2A. Método general para la obtención de 4’-[(alquiloxi-iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

Se disuelven 0,79 g de 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (1 mMol, 1 eq), obtenida según el Ejemplo 2, al 10% (p/v) en acetonitrilo. Se añade una O-alquil-hidroxilamina (1,5-4 eq) y se deja agitando durante un tiempo de entre 60-120’, siguiendo la reacción mediante TLC. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo (3 volúmenes) y se lava varias veces con agua. La capa orgánica se evapora hasta sequedad, y el residuo se purifica mediante cristalización desde isopropanol para obtener la correspondiente 4’-alquiloxi-iminometil rifamicina (55-80%).

Con este método se obtienen preferiblemente las O-metil, -etil, -propil, -isopropil, -butil, -pentilhidroxilamina oximas.

Ejemplo 2B. Método general para la obtención de 4’-[alquiliminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

Se disuelven 0,79 g de 4’-formil-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (1 mMol, 1 eq), obtenida según el Ejemplo 2, al 20% (p/v) en diclorometano y ácido trifluoroacético catalítico (5 gotas). Se añade N-alquil-amina (4-10 eq.) y se deja agitar durante un tiempo entre 2-6h, siguiendo la reacción mediante TLC. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo (5 volúmenes) y se lava varias veces con HCl 0,1N, y finalmente con agua. La capa orgánica se evapora hasta sequedad, y el residuo se purifica mediante cromatografía en columna para obtener la correspondiente 4’-N-alquiliminometil rifamicina (30-70% de rendimiento).

Con este método se obtienen preferiblemente las metil-, etil-, propil-, isopropil-, butil-, pentil- y hexil-amina iminas.

Ejemplo 3. Obtención de 4’-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

A 3,03 g (3,79 mmol) de 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV, obtenida según el Ejemplo 2 y disuelta en 30 mL de acetonitrilo, se añaden 2,5 equivalentes de 1-amino-4-metil-piperazina. La disolución se deja agitando durante aproximadamente 1 h a temperatura ambiente, después se diluye con 250 mL de diclorometano, y se lava con una disolución de ácido ascórbico al 10%, y varias veces con agua destilada; se obtienen 3,38 g de producto sin purificar por evaporación del disolvente, que se purifica en gel de sílice usando una mezcla 95:5 de diclorometano/metanol, y obteniendo 1,06 g de producto.

Ejemplo 4. Obtención de 4’-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

A 0,40 g (0,5 mmol) del producto reducido obtenido en el Ejemplo 2, disuelto en 10 mL de acetonitrilo, se añaden 0,25 g de 1-amino-piperidina (2,5 mmol). La disolución se deja a temperatura ambiente durante 3,5 h, después se diluye con 100 mL de acetato de etilo, y se lava con una disolución de ácido ascórbico al 10%, entonces con cloruro de amonio a pH 5,2-5,3, disolución saturada de cloruro sódico y agua destilada. La capa orgánica se lava y, tras evaporación del disolvente, el producto sin purificar se purifica en gel de sílice usando una mezcla 95:5 de diclorometano/metanol, obteniendo 0,15 g de producto.

Ejemplo 5. Obtención de 4’-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

A 0,55 g (0,675 mmol) del producto reducido obtenido en el Ejemplo 2, disuelto en 20 mL de acetonitrilo, se añaden 0,203 g de dimetilhidracina (3,38 mmol), y la disolución se deja agitar a temperatura ambiente durante 3,5 h. La mezcla de reacción se diluye con 80 mL de acetato de etilo, y la capa orgánica se lava dos veces con ácido ascórbico al 10%, una vez con disolución saturada de cloruro sódico y dos veces con agua destilada. La capa orgánica es evaporada, y el residuo se purifica en gel de sílice usando una mezcla 95:5 de diclorometano/metanol, obteniendo 0,25 g de producto.

Ejemplo 6. Obtención de 4’-[(4-carboxiamidopiridil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

A 0,35 g (0,44 mmol) del producto reducido obtenido del Ejemplo 2, disuelto en 7 mL de acetonitrilo, se añaden 0,30 g de isoniazid (2,19 mmol). La disolución se deja agitando a temperatura ambiente durante 18 h, después se diluye con 80 mL de acetato de etilo y se lava una vez con una disolución saturada de cloruro de amonio, y tres veces con agua. La capa orgánica se evapora, y el residuo se purifica en gel de sílice usando una mezcla 1:3:1 de diclorometano/acetato de etilo/metanol. Se obtienen 0,11 g de producto.

B) Productos obtenidos siguiendo el método mostrado en el Esquema 2.

Ejemplo 7. Obtención de 5’-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV partiendo de 3-yodo-rifamicina S.

0,20 g de 3-yodo-rifamicina S (0,26 mmol), obtenida según la patente US4179438, se hacen reaccionar con 1,5 equivalentes de 5-(N,N-dimetilamino)-iminometil-2-amino-piridina en diclorometano (disolución al 5%) a temperatura ambiente. Se deja reaccionar durante 20 h, se diluye con 2 volúmenes de diclorometano, y se llevan a cabo dos lavados con ácido ascórbico al 10%, dos lavados con ácido clorhídrico 0,1 M, un lavado con disolución saturada de cloruro sódico y dos lavados con agua destilada. La capa orgánica es evaporada, y el residuo se purifica en gel de sílice usando una mezcla 9:1 de diclorometano/metanol, obteniendo 0,15 g de producto.

Ejemplo 8. Obtención de 5’-[(1 -piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV partiendo de 3-yodo-rifamicina S.

Se hacen reaccionar 0,35 g de 3-yodo-rifamicina S (0,45 mmol), obtenida según la patente US4179438, con 1,5 equivalentes de 5-(1-piperidinil)-iminometil-2-amino-piridina a temperatura ambiente en diclorometano (disolución al 5%). Se deja reaccionar durante 20 h, se diluye con 2 volúmenes de diclorometano y se llevan a cabo dos lavados con ácido ascórbico al 10%, dos lavados con ácido clorhídrico 0,1 M, un lavado con disolución saturada de cloruro sódico y dos lavados con agua destilada. La capa orgánica es evaporada, y el residuo se purifica en gel de sílice usando una mezcla 9:1 de diclorometano/metanol, obteniendo 0,13 g de producto.

Ejemplo 9. Obtención de 5’-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV partiendo de Rifamicina O.

Se disuelven 0,30 g de Rifamicina O (0,40 mmol) en 30 mL de etanol y se hacen reaccionar con 2 equivalentes de 5-(N,N-dimetilamino)-iminometil-2-amino-piridina. Se deja reaccionar durante aproximadamente 10 h, a continuación se añaden 80 mL de diclorometano y se llevan a cabo varios lavados con ácido ascórbico al 10%, ácido clorhídrico 0,1 N y agua destilada, entonces se seca y se evapora hasta sequedad. El residuo se purifica en gel de sílice usando una mezcla 9:1 de diclorometano/metanol, obteniendo 0,13 g de producto.

Operando del mismo modo que en el Ejemplo 9, también se pueden obtener todos los derivados sustituidos en las posiciones 4 y 5, partiendo de la correspondiente 2-aminopiridina.

C) Productos obtenidos siguiendo el método mostrado en el Esquema 3.

Ejemplo 10. Obtención de 4’-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S.

Se disuelven 0,50 g del producto 4’-[(-4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV (0,56 mmol), obtenido del Ejemplo 3, en 32 mL de diclorometano; se añaden 1,3 g de dióxido de manganeso a la disolución; se deja reaccionar durante 30 minutos a temperatura ambiente, a continuación se retira el dióxido de manganeso por filtración y se procesa con diclorometano. Se obtienen 0,45 g de producto por evaporación del disolvente.

Con el método usado en el Ejemplo 10, es posible obtener la forma oxidada de todos los productos sintetizados en forma reducida.

D) Productos obtenidos siguiendo el método mostrado en el Esquema 4.

Ejemplo 11. Obtención de 25-desacetil-5’-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

Se hacen reaccionar 0,050 g de 3-yodo-25-desacetilrifamicina S (0,066 mmol), obtenida según la patente US4179438, a temperatura ambiente con 2,5 equivalentes de 5-(1-piperidinil)-iminometil-2-amino-piridina en diclorometano (disolución al 1,25%). La reacción se deja agitando durante 12 h y el producto cristaliza en el mismo disolvente. Se llevan a cabo lavados con acetato de etilo para eliminar cualquier impureza y se obtienen 0,055 g de producto.

Ejemplo 12. Obtención de 25-desacetil-5’-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV.

Se hacen reaccionar 0,20 g de 3-yodo-25-desacetilrifamicina S (0,26 mmol), obtenida según la patente US4179438, a temperatura ambiente con 2,5 equivalentes de 5-(N,N-dimetilamino)-iminometil-2-amino-piridina en diclorometano (disolución al 3%). La reacción se deja agitando durante 18 h y el producto cristaliza en el mismo disolvente, dando lugar, por filtración, a 0,09 g de producto.

Ejemplo 13. Resultados del test biológico.

La Tabla 1 muestra las concentraciones inhibidoras mínimas (MIC) en pg/mL de los diversos compuestos enumerados en los ejemplos en comparación con la Rifaximina (RFX). Las MICs se calcularon usando el método de dilución en serie, y se expresan como el rango entre la última concentración a la que crece la cepa bacteriana y la primera concentración a la que la cepa evaluada ya no crece.

Tabla 1

Como puede observarse en la Tabla 1, el Ejemplo 3 mostró una actividad antibacteriana completamente comparable a la de la RFX, mientras que otros ejemplos, a pesar de la ratio hidrofilicidad/lipofilicidad no óptima, sin embargo fueron microbiológicamente activas.

Ejemplo 14. Resultados del test farmacocinético.

Los estudios farmacocinéticos se fijaron con la administración de compuesto 3 (4’-[(4-metil-1 -piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV) y Rifaximina (RFX), tanto oral como parenteralmente, en la rata a la misma dosis. El estudio farmacocinético del derivado 3 en comparación con la RFX se planeó administrando los dos compuestos intravenosa y oralmente, y calculando los parámetros cinéticos AUC, Cmax, Tmax y la biodisponibilidad oral en comparación con la parenteral.

- Administración intravenosa de RFX y el Derivado 3: los dos productos fueron disueltos, de forma independiente, en DMSO obteniendo una disolución de reserva de 4 mg/mL. A 0,250 mL de esta disolución se añadieron 4,750 mL de disolución salina, obteniendo una disolución final de 0,2 mg/mL (5% DMSO, 95% salino). Se administra un volumen de 5 mL/Kg a 3 ratas de cada grupo para tener una dosis de 1 mg/Kg para cada uno de los dos productos.

- Administración oral de RFX y el Derivado 3: los dos productos fueron disueltos en DMSO, obteniendo dos disoluciones que tienen una concentración de 60 mg/mL (disoluciones de reserva). A 0,5 mL de cada disolución, se añadieron 2,0 mL de PEG 400 y 7,5 mL de disolución salina con agitación, obteniendo una suspensión estable con una concentración nominal de 3 mg/mL. Se administra al animal un volumen igual a 30 mg/kg de dosis.

En el estudio se usaron ratas Sprague Dawley macho, que pesaban entre 250 y 300 g. Los animales fueron alojados y observados antes del experimento según un protocolo GMP aprobado de acuerdo a la legislación italiana.

Las ratas se dividieron en tres grupos:

- Grupo 1: tratamiento i.v.

- Grupo 2: tratamiento oral para toma de muestra de sangre.

- Grupo 3: tratamiento oral para recolección de orina y heces.

Grupo 1: muestras de sangre a: 5, 15, 30, 60, 120, 240, 480, 1440 min, de la vena caudal.

Grupo 2: muestras de sangre a: 30, 60, 120, 240, 360, 480, 1440 min, de la vena caudal.

Grupo 3: recolección de heces y orina en jaulas metabólicas a: 0-4 h, 4-8 h, 8-24 h, 24-48 h, 48-72 h. Al final del experimento, también se tomó una muestra de sangre a las 72 h de las ratas de este grupo como comprobación. El método analítico usado para analizar las diversas muestras de sangre, heces y orina fue desarrollado en:

UFLC Shimadzu AC20 acoplado a un Quadrupolo Triple API 3200 ABSciex. Volumen inyectado: 10 pL.

Columna: Gemini - Nx 5p C18 11 0A (50 x 2,00 mm), T de columna 35 °C.

Gradiente: Flujo 0,3 mL/min.

Fase móvil A: acetato amónico 15 mM en agua.

Fase móvil B: MeOH.

Rango de análisis: 1-1000 ng/mL para plasma. Orina: 1-500 ng/mL. Heces: 1-1000 ng/mL.

Tabla 2: Gradientes cromatográficos.

Se llevó a cabo un análisis de RMN en ESI positivo, monitorizando los fragmentos resultantes del pico principal según la Tabla 2.

Tabla 3: Resultados de MS ESI Positivo.

Preparación de muestras

Plasma: la curva de calibrado y las muestras QC se prepararon en plasma de rata sin tratar, añadiendo 5 |uL de cada disolución de reserva a 45 |uL de plasma de rata sin tratar. Los 50 |uL de plasma obtenidos fueron diluidos hasta 100 |uL con acetonitrilo frío que contenía el Patrón Interno (I.S.) a la concentración final de 50 ng/mL, y se centrifugó durante 5 minutos a 9000 rpm a 5°C. El sobrenadante se transfirió a una placa de 96 pocillos para análisis. Las muestras de los Grupos 1 y 2 fueron preparadas de forma similar usando 50 |uL de plasma de las ratas tratadas.

Orina: la curva de calibrado y las muestras QC se prepararon en orina de rata sin tratar, añadiendo 5 |uL de cada disolución de reserva a 45 |uL de orina de rata sin tratar. Los 50 |uL de orina obtenidos fueron diluidos hasta 100 |uL con acetonitrilo frío que contenía el I.S. a la concentración final de 50 ng/mL, y se centrifugó durante 5 minutos a 9000 rpm a 5°C. El sobrenadante se transfirió a una placa de 96 pocillos para análisis. Las muestras de los Grupos 1 y 2 fueron preparadas de forma similar usando 50 |uL de plasma de las ratas tratadas.

Heces: las muestras de heces fueron homogeneizadas suspendiendo 1 g de heces en 3 mL de tampón de acetato amónico 15 mM a pH 4,3. La curva de calibrado y las muestras QC se prepararon en heces de rata sin tratar, añadiendo 5 |uL de cada disolución de reserva a 45 |uL de heces de rata homogeneizados sin tratar. Los 50 |uL de heces homogeneizadas obtenidos fueron diluidos hasta 200 |uL con acetonitrilo frío que contenía el I.S. a la concentración final de 50 ng/mL, en una placa de 96 pocillos. Las muestras fueron centrifugadas durante 15 minutos a 3000 rpm y el sobrenadante se transfirió a una placa limpia para análisis.

Datos analíticos - Análisis farmacocinético

Se aplicó un análisis no compartimental, y se consideraron los siguientes parámetros farmacocinéticos para cada sujeto:

Cmax: concentración en plasma máxima.

Clast: concentración en plasma de último muestreo.

tmax: tiempo para la concentración en plasma máxima.

AUCü-last: AUC desde tü hasta el tiempo de la última concentración detectable.

AUCinf: AUC extrapolada desde tiempo 0 hasta tiempo infinito = / “ C dt

MRTinf: Tiempo de residencia medio =

t'/2: Tiempo de vida media = ^{ln (2)}

Los datos de concentración fueron extrapolados usando el software Analyst™ 6.1 (Applied Biosystems); las AUCs se calcularon usando un método lineal-trapezoidal, y como primera aproximación se llevó a cabo una uniformidad de pesos. Los gráficos de concentración/tiempo se realizaron después de transformación logarítmica de los resultados usando la aplicación de software PK Solver 2.0 de Microsoft Excel 2007.

Resultados

Tabla 4: Parámetros farmacocinéticos de 3 y Rifaximina (RFX) después de administración intravenosa (IV) y oral (PO) en ratas macho.

Tabla 5: Concentración de 3 y Rifaximina (RFX) en orina de rata después de administración oral a 30 mg/Kg.

Tabla 6: Concentración de 3 y Rifaximina (RFX) en heces de rata después de administración oral a 30 mg/Kg.

El Ejemplo 3 según la invención mostró una absorción intestinal 7-8 veces inferior, es decir, aproximadamente el 15%, en comparación con la mostrada y confirmada en la bibliografía por la Rifaximina.

Ejemplo 15. La actividad antibacteriana contra cepas bacterianas eucarióticas de especies de Bifidobacterium, Enterococcus, Enterobacteriacaee y Lactobacillus fue detectada tras administración oral del producto 3 y Rifaximina, a modo de comparación, en ratas Sprague Dawley.

Tratamiento

Se trataron dos grupos de 6 ratas Sprague Dawley que pesaban aproximadamente 250 g/rata, después del periodo de aclimatación, mediante una sonda gástrica, durante 5 días con una dosis de 50 mg/kg de 3 y de Rifaximina, a modo de comparación. Se recolectaron las heces a T0 y el día después del último tratamiento.

Los dos productos fueron disueltos primero en DMSO a una concentración de 100 mg/mL (disolución de reserva), después a 0,5 mL de cada disolución se añadieron 2,0 mL de PEG 400 y 7,5 mL de disolución salina, con agitación. Se obtiene una suspensión estable a la concentración nominal de 5 mg/mL. Se administra un volumen de 10 mL/kg, igual a 50 mg/kg.

Método

El método de detección se basa en el aislamiento del ADN genómico total de cada muestra de heces, usando un kit comercial específico. Después de la evaluación cuali-cuantitativa del ADN, las mismas muestras de ADN fueron almacenadas a -20°C. Se llevaron a cabo análisis cuantitativos usando qPCR en tiempo real con el uso de parejas de cebadores de ADN específicos para las especies de Bifidobacterium, Enterococcus, Enterobacter y Lactobacillus. Se llevó a cabo el aislamiento del ADN usando el kit comercial PowerFecal® DNA Isolation Kit (MO BIO Laboratories) en una muestra de 250 mg de heces, cada vez. T ras el aislamiento, las muestras de ADN fueron evaluadas mediante análisis espectrofotométrico. Cada muestra de ADN fue cuantificada en el rango de 60-100 ng/pL (elevado en proteínas y azúcares), como típico para ADN derivado de heces.

Análisis cuantitativo de qPCR

Cada muestra se evaluó por triplicado. Para cada muestra de ADN y para cada pareja de cebadores de ADN específicos, el análisis proporción un valor CT que resultó estar correlacionado con la cantidad de ADN específico para la especie bacteriana, por tanto, estrechamente correlacionado con el número de células bacterianas de dicha especie presentes en la muestra de heces.

Para la cuantificación relativa, se aplicó un “modelo mixto lineal generalizado (GLMM) con error de Poisson-Lognormal”. Se usó el paquete MCMC.qPCR R para convertir los valores CT en números de células bacterianas. Para la conversión, se usó la fórmula: Número de células = E(Ct1 - Ct), donde E representa la eficacia de la amplificación, que en el presente caso asume el valor de 2. Ct1 representa el número de ciclos de qPCR necesarios para detectar una molécula diana individual (en este estudio Ct1 se supone que tiene un valor de 39).

Se usó el algoritmo de Markov Chain Monte Carlo (MCMC) para estimar el efecto del tiempo en los niveles de desarrollo de cada género microbiano. Se usó el método GLMM para verificar si los niveles de cada género bacteriano a T0 y T5 diferían. Adicionalmente, se llevó a cabo un análisis estadístico para evaluar la significancia de las diferencias entre los valores de T0 y T5.

Resultados

La Figura 3 representa la ratio entre el número de células bacterianas, para cada género, a T5/T0, para cada rata en los dos grupos. Las Tablas 7-9 presentadas a continuación muestran los valores Ct, los recuentos celulares por mg de heces obtenidos a partir de los valores Ct, respectivamente, y finalmente la Tabla 9 muestra los valores medios de recuento celular para cada género bacteriano, a T0 y T5, para cada producto.

Tabla 7: Ct medio para tres valores de análisis qPCR.

Tabla 8: Número de células por mg de heces, derivado de los valores Ct de la Tabla 7.

Tabla 9:

Como puede observarse en la Figura 3 y en las Tablas 7-8-9, el tratamiento oral a 5 días, con una dosis de 50 mg/kg, con el producto 3 induce una reducción en un factor de 10 en el recuento bacteriano para el género Bifidobacterium, mientras que no induce cambios significativos en los recuentos celulares de los otros géneros, es decir, Enterococcus, Enterobacter y Lactobacillus. Inversamente, el tratamiento a 5 días a la misma dosis oral con Rifaximina induce una caída significativa para el género Enterococcus (de aproximadamente 100 veces), una menor caída para el género Enterobacter (de aproximadamente 10 veces), mientras que no se producen diferencias significativas para Bifidobacterium y Lactobacillus, aunque para ambas especies se puede detectar una disminución. Es evidente que el producto 3 muestra una mayor selectividad que la Rifaximina hacia los géneros Enterococcus, Enterobacter y, en menor medida, Lactobacillus, mientras que la selectividad hacia Bifidobacterium es similar a la Rifaximina.

De forma ventajosa, debido a su absorción irrelevante y a su elevada selectividad para mantener inalterada la flora bacteriana eucariótica intestinal, el producto 3 puede usarse en la terapia de todas las enfermedades gastrointestinales debidas a dismicrobismo bacteriano, especialmente en enfermedades que requieren un tratamiento crónico.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula (I) o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo

con la condición de que:

cuando

, entonces R¹= H y R²= CH³CO- o H;

cuando

entonces R = H y R²= CH³CO- o H;

cuando

entonces R¹= H y R²= CH³CO- o H; y

cuando

, entonces R = H y R²= CH³CO- o H;

donde R³y R⁴son iguales o diferentes y se seleccionan del grupo que comprende hidrógeno alquilo C¹-C¹⁰lineal o ramificado, sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados entre aminoalquilo, alcoxi, fenoxi o sulfo, y arilo opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C¹-C⁴, halógeno, amino, nitro; o

R⁵se selecciona del grupo que comprende hidrógeno, hidroxi, alquilo C¹-C¹⁰lineal o ramificado, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre aminoalquilo, alcoxi, fenoxi o sulfo, y arilo opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C¹-C⁴, halógeno, amino, nitro.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, donde el arilo, opcionalmente mono- o di-sustituido con grupos alquilo o alcoxi C¹-C⁴, halógeno, amino, nitro, se selecciona entre fenilo y bencilo.34

3. Un compuesto según la reivindicación 1 o 2, donde cuando R³y R⁴se consideran junto con dos átomos de carbono consecutivos del núcleo de piridina para formar un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con alquilo C¹-C⁴, dicho anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros se selecciona del grupo que consiste en pirrolidina, piperidina, piperazina y morfolina.

4. Un compuesto según la reivindicación 1 o 3, seleccionado entre:

4'-[(4-metil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(4-carboxiamidopiridil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4’-[(4-metil-1 -piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S;

25-desacetil-5'-[(1-piperidinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-5'-[(N,N-dimetilamino)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(N-morpholinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(N-morpholinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(N,N-dipentil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(N,N-dipentil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2'-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

4'-[(4-propil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

5'-[(4-propil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-4’-[(4-propil-1 -piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV;

25-desacetil-5’-[(4-propil-1-piperazinil)iminometil]-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina SV; o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

5. Un proceso para producir un compuesto de Fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 cuando R y R¹pueden ser H,

R3

. N-N

__'

o R«, que comprende las etapas de:

- hacer reaccionar Rifamicina O con 2-amino-4-hidroximetilpiridina para obtener 4’-hidroximetil-4-desoxipirido[1 ’,2’-1.2] imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV;

6. El proceso según la reivindicación 5, donde se usan entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 equivalentes molares de 2-amino-4-hidroximetilpiridina por mol de Rifamicina O y/o se usan entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 equivalentes molares de hidracina por mol de 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV.

7. Un proceso para producir un compuesto de Fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 cuando R y R¹pueden ser H,

, R3

__# . N-N '

o Ra , que comprende las etapas de:

8. El proceso según la reivindicación 7, donde se usan entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 moles de la hidrazona obtenida por mol de Rifamicina O o de 3-yodo/bromo rifamicina S.

9. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, donde el disolvente usado es un disolvente orgánico seleccionado entre alcanol alifático que contiene de 1 a 4 átomos de carbono, solo o mezclado con agua, o con DMF, o en un disolvente halogenado de cadena corta, preferiblemente diclorometano.

10. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 5-9, donde la temperatura de reacción puede variar entre la temperatura de 10°C y el punto de ebullición del disolvente, preferiblemente no por encima de 80°C, y/o el tiempo de reacción puede variar entre unos pocos minutos y 24h.

11. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 5-10, donde el compuesto obtenido de Fórmula (I) es oxidado mediante tratamiento con un oxidante adecuado, preferiblemente dióxido de manganeso.

12. Un compuesto seleccionado entre: 4’-hidroximetil-4-desoxipirido[1 ’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV, 4’-formil-4-desoxipirido[1’,2’-1,2]imidazo[5,4-c]rifamicina S o SV, o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

13. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso como medicamento.

14. Un compuesto para uso según la reivindicación 13, en el tratamiento y/o la prevención de enfermedades del tracto gastrointestinal, preferiblemente seleccionadas del grupo que comprende enfermedades debidas a dismicrobismo, IBD, enfermedad de Chron, diverticulitis y diarrea del viajero, o en infecciones cutáneas, oculares, vaginales o dentales, preferiblemente en el tratamiento de enfermedades que requieren un tratamiento crónico.

15. Un compuesto para uso según la reivindicación 13, en el tratamiento y/o la prevención de la mastitis seca, en enfermedades vaginales en vacas, en enfermedades intestinales en mascotas, o como terapia auxínica en cría de animales, preferiblemente para pollos, pavos, patos o conejos.

16. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de Fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, junto con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, preferiblemente dicha composición farmacéutica es adecuada para ser administrada tópicamente, más preferiblemente en la forma de sólidos, líquidos o geles.