ES2861450T3 - Uso del virus del herpes simple oncolítico en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunitario, en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Uso del virus del herpes simple oncolítico en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunitario, en el tratamiento del cáncer Download PDF

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Abstract

Un virus del herpes simple oncolítico que codifica un gen funcional ICP47 o ICP6 para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano, comprendiendo el método administrar por vía intravenosa, intraarterial, intracavidad o intratumoral más de una dosis del virus del herpes simple oncolítico al sujeto en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de una cepa 17 del HSV-1, y comprende además administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.

Description

DESCRIPCIÓN
Uso del virus del herpes simple oncolítico en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunitario, en el tratamiento del cáncer
Campo de la invención
La presente invención se refiere al uso de un virus del herpes simple oncolítico y, opcionalmente, a un inhibidor del punto de control inmunitario, en el tratamiento del cáncer.
Antecedentes de la invención
La viroterapia oncolítica se refiere al uso de virus líticos que infectan y destruyen selectivamente las células cancerosas. Algunos virus oncolíticos son terapias prometedoras, ya que muestran una selección exquisita para la replicación en las células cancerosas y su propagación autolimitada dentro de los tumores produce menos efectos secundarios tóxicos. Varios virus oncolíticos se han mostrado muy prometedores en la clínica (Bell, J., Oncolytic Viruses: An Approved Product on the Horizon? Mol Then 2010; 18(2): 233-234).
Las células cancerosas normalmente adquieren una antigenicidad que el sistema inmunitario adaptativo puede reconocer como no propias y lleva a la generación de una respuesta inmunitaria que implica la proliferación de linfocitos específicos de antígeno. Los tumores ahora están establecidos para cooptar ciertas vías de puntos de control inmunitario como un mecanismo de resistencia inmunológica contra los linfocitos T específicos para los antígenos tumorales (Drew M. Pardoll., The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nature Reviews Cancer Vol. 12 abril de 2012 252-264).
La infiltración tumoral con macrófagos de fenotipo M2 y células supresoras derivadas de mieloides (MDSC, por sus siglas en inglés) promueve la progresión tumoral, mientras que la infiltración de linfocitos T citotóxicos de memoria y linfocitos T colaboradores 1 (Th1) a menudo se asocia con un buen resultado clínico y una buena respuesta a la inmunoterapia. Por lo tanto, uno de los objetivos de las inmunoterapias es modificar el contexto de inmunidad, los elementos inflamatorios y angiogénicos para favorecer un fuerte microambiente del Th1 citotóxico (Giraldo et al., The immune contexture of primary and metastatic human tumors. Current Opinion in Immunology 2014, 27:8-15).
Haabeth et al (Inflammation driven by tumor-specific Th1 cells protects against B-cell cancer. Nature Communications.
2:240 15 Mar 2011 [DOI:10.1038/ncomms1239]) también documentan que la inmunovigilancia exitosa del cáncer mediada por los linfocitos T CD4+ específicos del tumor se asocian consistentemente con niveles elevados de citocinas proinflamatorias (IL-1 a, IL-1 p e IL-6) y asociadas a Th1 (interferón-Y (IFN-y), IL-2 e IL-12). Describen la erradicación del cáncer como una colaboración entre los linfocitos Th1 específicos del tumor y macrófagos infiltrantes en tumor, presentadores de antígenos en la que los linfocitos Th1 inducen la secreción de IL-1 p e IL-6 por los macrófagos y el IFN-y asociado a Th1 hace que los macrófagos sean directamente citotóxicos para las células cancerosas y provoquen que secreten las quimiocinas angiostáticas CXCL9/MIG (monocina inducida por IFN-y) y CXCL10/IP-10 (proteína 10 inducible por IFN-y), y concluyen que la inflamación provocada por linfocitos Th1 específicos del tumor puede prevenir más que promover el cáncer. Haabeth et al también documentan un panel de nueve citocinas asociadas consistentemente con una inmunovigilancia exitosa del cáncer, incluyendo citocinas proinflamatorias (IL-1 a, IL-1 p e IL-6) y asociadas a Th1 (IL-2, IL-3, IL-12, IFN-y, CXCL9 y CXCL10).
Si bien el patrón de producción de citocinas que caracteriza las respuestas de linfocitos T colaboradores de tipo 1 (Th1) y de tipo 2 (Th2) se comprende razonablemente bien, está mucho menos claro cómo se decide la dirección de diferenciación hacia Th1 o Th2.
El virus del herpes simple de tipo 1 ha desarrollado varias estrategias para evadir la producción y función de los interferones (IFN) y las citocinas generadas por el sistema inmunitario innato (que desempeña un papel en la activación de la respuesta inmunitaria adaptativa). El HSV contrarresta la producción de IFN, disminuye la señalización de IFN y bloquea las acciones de PKR y la activación del sistema 2'-5 'A a través de varios productos víricos, incluido ICPO, ICP27, ICP34.5 y vhs (Melchjorsen et al., Activation and Evasion of Innate Antiviral Immunity by Herpes Simplex Virus. Viruses 2009, 1, 737-759; doi:10.3390/v1030737; L. Aurelian., Herpes Simplex Virus Type 2 Vaccines: New Ground for Optimism? Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, Mayo de 2004, págs. 437-445).
Young J Kim (Subverting the adaptive immune resistance mechanism to improve clinical responses to immune checkpoint blockade therapy. Oncolmmunology 3:12 e954868; Diciembre de 2014) describe una justificación mecánica y clínica para combinar vacunas contra el cáncer inductoras de IFN-y de Th1 con el bloqueo de la proteína del punto de control inmunitario Muerte celular programada 1 (PD-1, también llamado CD279), e indica que las estrategias para aumentar las actividades anticancerígenas de los linfocitos T citotóxicos infiltrantes de tumores con inhibidores de puntos de control inmunitarios pueden convertir a los no respondedores al bloqueo anti-PD-1 en respondedores, evitando así la evasión inmunitaria.
Sagiv-Barfi et al documentaron que ibrutinib, un inhibidor de ITK, una enzima esencial en los linfocitos T Th2 puede cambiar el equilibrio entre los linfocitos T Th1 y Th2 hacia Th1 y, por lo tanto, mejorar las respuestas antitumorales. Describen la combinación de anticuerpo anti-PD-L1 e ibrutinib para suprimir el crecimiento tumoral en modelos de linfoma de ratón que son intrínsecamente insensibles al tbrufinib, así como en modelos de cáncer de mama y colon (Sagiv-Barfi et al., Therapeutic antitumor immunity by checkpoint blockade is enhanced by ibrutinib, an inhibitor of both BTK and ITK. PNAS E966-972 Publicado en línea el 17 de febrero de 2015).
Oreja-Guevara et al (TH1/TH2 Cytokine profile in relapsing-remitting multiple sclerosis patients treated with Glatiramer acetate or Natalizumab. Serie BMC abierta, inclusiva y fiable de 2012 12:95 DOI: 10.1186/1471-2377-12-95) documenta que el equilibrio entre los linfocitos T colaboradores, las citocinas relacionadas con Th2 y Th1 desempeñan un papel clave en la esclerosis múltiple y que un cambio de un perfil de citocinas de Th1 a Th2 podría tener un efecto beneficioso sobre el trascurso clínico de la enfermedad.
Sredni et al (Journal of National Cancer Institute, Vol. 88, n.° 18, 18 de septiembre de 1996) documentan que la respuesta inmunitaria a los crecimientos malignos está regulada por patrones distintos de producción de citocinas de Th2, e investigó la capacidad del tricloro[dioxetileno O,O’]telurato de amonio (AS101) como un agente capaz de redirigir la respuesta hacia Th1.
Por consiguiente, existen ventajas para el tratamiento de tumores asociados con la promoción de una respuesta de Th1 en el microambiente tumoral, y se requieren otras formas de establecer dicho entorno favorable al tratamiento. Cuando se trata de desarrollar tratamientos para pacientes humanos que impliquen la estimulación dirigida de partes del sistema inmunitario humano, los estudios del efecto del virus oncolítico en la respuesta inmunitaria en ratones deben tratarse con precaución debido a las diferencias reconocidas en la respuesta inmunitaria entre modelos de ratón y humanos (Mestas y Hughes., J Immunol 2004; 172:2731-2738).
Saha Dipongkor et al. (2015) Molecular Therapy, vol. 23, supl. N.° 1, página s248 y 18° Congreso anual de la Sociedad Estadounidense de Terapia Génica y Celular; Nueva Orleans, EE.UU.; 13-16 de mayo describen la inmunoviroterapia combinada con inhibidores de puntos de control inmunitarios para el tratamiento del glioblastoma.
El documento WO2014/047350 describe virus oncolíticos que codifican agentes de unión a PD-1 y usos de los mismos. Timothy P et al. (2013), NIH RAC, Congreso del 11 de junio de 2013, describe HSV1716 (Seprehvir).
NIH: NCT02272855, 27 de abril de 2015 describe un estudio de tratamiento combinado con HF10 e ipilimumab en pacientes con melanoma no extirpable o metastásico.
Li H et al. (2007) Clinical Cancer Research, vol. 13, n.° 1, páginas 316-322 describe viroterapia con un virus oncolítico que proviene del virus del herpes simple de tipo 2 contra el neuroblastoma.
Wang Jiani et al. (2012) International Journal o f Oncology, vol. 40, n.° 3, páginas 757-763 describe el tratamiento del cáncer de mama metastásico con el virus del herpes simple oncolítico.
Johnson Douglas B et al. (2015) Immunotherapy, vol. 7, n.° 6, páginas 611-619 describe el talimogén laherparepvec (T-VEC) para el tratamiento del melanoma avanzado.
NIH: NCT02263508, 22 de junio de 2015, describe pembrolizumab (MK-3475) con o sin talimogén laherparepvec en melanoma no extirpado.
El documento WO2016/100364 describe una formulación congelada estable de virus del herpes simple.
Benencia et al. (2005) Molecular The, Academic Press, vol. 12, n.° 5, páginas 789-802, describe la terapia oncolítica del VHS en el tratamiento del cáncer de ovario.
Eissa Ibrahim Ragab et al. (2017) Frontiers in Oncology, vol. 7, página 149 describe la firma genómica del virus del herpes simple HF10 y su función terapéutica en ensayos clínicos y preclínicos.
El documento WO2014/036412 describe el tratamiento de melanoma en estadio IIIb a estadio IV mediante un método que comprende administrar a un paciente con melanoma en estadio IIIb a IV una cantidad eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario y un virus del herpes simple, en donde el virus del herpes simple carece de genes ICP34.5 funcionales, carece de un gen ICP47 funcional y comprende un gen que codifica el GM-CSF humano.
Compendio de la invención
Los aspectos y realizaciones de la presente invención se establecen en las reivindicaciones.
Monoterapia con virus del herpes simple oncolítico
En algunos aspectos, la presente descripción se refiere al uso de un virus del herpes simple oncolítico para tratar el cáncer, en donde el sujeto recibe el virus del herpes simple oncolítico y no recibe un inhibidor del punto de control inmunitario como parte del programa de tratamiento.
La presente descripción se refiere a métodos para tratar o prevenir el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo los métodos administrar el virus del herpes simple oncolítico para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
La presente descripción también se refiere a métodos para evitar la metástasis del cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo los métodos inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
Los inventores han identificado que la inducción de una respuesta de Th1 mediante la administración de una cantidad eficaz de virus del herpes simple oncolítico es eficaz para desencadenar una respuesta antitumoral de Th1 en el sujeto. También han identificado que la respuesta antitumoral de Th1 tiene un efecto de memoria y se puede usar para vacunar al sujeto contra la recaída del cáncer en sitios tanto primarios como distales.
En aspectos y realizaciones de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar un virus del herpes simple (VHS) oncolítico en cantidad suficiente y durante un período de tiempo suficiente para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto, contribuyendo así a (i) el tratamiento del cáncer en el sitio de administración, y/o (ii) el tratamiento del cáncer en ubicaciones distales, y/o (iii) la prevención o reducción de la metástasis del cáncer, y/o (iv) evitar o reducir la recaída del cáncer.
Una sola administración del HSV oncolítico puede ser insuficiente para generar una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida. Puede ser necesario un trascurso de tratamiento que implique la administración de múltiples dosis de HSV oncolítico para generar y/o mantener una respuesta de Th1 sostenida. La respuesta de Th1 sostenida es preferiblemente capaz de tratar el cáncer y/o evitar la metástasis y/o evitar la recaída del cáncer. La respuesta de Th1 sostenida produce preferiblemente una respuesta de Th1 de memoria en el sujeto con respecto a las células cancerosas específicas contra las que se induce la respuesta de Th1.
En el contexto del tratamiento de un cáncer metastásico, el tratamiento puede ser de cánceres o tumores de un tipo celular determinado. El tratamiento puede implicar provocar una respuesta inmunitaria antitumoral sistémica de Th1 en el sujeto, que puede estar en riesgo de desarrollar cánceres metastásicos únicos o múltiples o tumores del tipo celular dado. Por lo tanto, la administración del virus del herpes simple oncolítico puede inducir una respuesta inmunitaria de Th1 que es específica para el tipo de célula tumoral y que destruye las células del tumor inoculado y de los tumores no inoculados.
No todos los sujetos responden a la administración del HSV oncolítico mediante la inducción de una respuesta de Th1 y, por lo tanto, se puede controlar a los sujetos para determinar su respuesta al tratamiento con e1HSV oncolítico. Los sujetos que responden pueden continuar el tratamiento con HSV oncolítico a una dosis y/o régimen de dosificación diseñado para mantener la respuesta de Th1 sostenida. Los sujetos que no responden al tratamiento mediante la generación de una respuesta de Th1 pueden interrumpir el tratamiento con e1HSV oncolítico o pueden pasar a un tratamiento combinado con HSV oncolítico y uno o más agentes quimioterapéuticos adicionales.
En realizaciones preferidas, el HSV oncolítico es un HSV que se modifica con respecto al de tipo silvestre para inactivar al menos una copia del gen Y134.5, lo más preferiblemente ambas copias del gen Y134.5. E1HSV oncolítico preferiblemente no se modifica para inactivar otros genes del HSV. El HSV oncolítico preferiblemente no se modifica para expresar ningún gen que no sea del HSV. En algunas realizaciones preferidas, e1HSV oncolítico es HSV1716.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar al sujeto una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar al sujeto una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar al sujeto una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método para tratar el cáncer en un sujeto y evitar la recaída del cáncer, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto y evitar la recaída del cáncer, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método para tratar el cáncer en un sujeto y evitar la recaída del cáncer, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método para evitar la recaída de un cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer o que se ha curado de un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para evitar la recaída de un cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer o que se ha curado de un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método para evitar la recaída de un cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer o que se ha curado de un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método para evitar la metástasis de un cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para evitar la metástasis de un cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método para evitar la metástasis de un cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar a un sujeto que tiene un cáncer una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
El método puede comprender administrar más de una dosis de virus del herpes simple oncolítico.
El método puede comprender la administración de 2, 3 o 4 dosis de virus del herpes simple oncolítico al sujeto a intervalos regulares. El sujeto puede recibir una dosis semanal o quincenal de virus del herpes simple oncolítico para uno de al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, semanas o 1,2, 3, 4, 5 o 6 meses.
El método puede comprender la administración de un virus del herpes simple durante un período de tiempo suficiente para inducir una respuesta de Th1 sostenida en el sujeto.
El método puede comprender la administración de un virus del herpes simple oncolítico durante un período de tiempo suficiente para inducir una respuesta de Th1 sostenida en el sujeto, en cuyo período de tiempo el sujeto no recibe un inhibidor del punto de control inmunitario.
El método puede comprender la administración del virus del herpes simple oncolítico por infusión a la sangre.
El método puede comprender además la etapa de determinar la presencia de una respuesta de Th1 en el sujeto. Tal determinación se puede realizar a intervalos deseados analizando el nivel de expresión de citocinas en una muestra tomada de un sujeto. Como tal, el monitoreo de la existencia y/o el estado de una respuesta de Th1 se puede llevar a cabo diariamente, semanalmente, quincenalmente, mensualmente o anualmente, según se desee y/o lo considere apropiado un médico.
Determinar la presencia de una respuesta de Th1 puede comprender medir el nivel de IFNy, IL-2 y/o IL-12 en una muestra obtenida de un sujeto. En algunas realizaciones preferidas, determinar la presencia de una respuesta de Th1 puede comprender medir el nivel de IL-2 y/o IL-12 en una muestra obtenida de un sujeto.
El sujeto puede ser un ser humano y, opcionalmente, un niño humano. Los sujetos que se van a tratar pueden haber sido diagnosticados con cáncer, ser considerados en riesgo de desarrollar un cáncer, han sido curados de cáncer y se consideran en riesgo de recaída.
En algunas realizaciones preferidas, el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de la cepa 17 de1HSV-1 o es HSV1716. Opcionalmente, el virus del herpes simple oncolítico no expresa GMCSF y/o codifica un gen funcional ICP47 y/o ICP6.
En algunas realizaciones, el cáncer es un tumor sólido, opcionalmente, no un melanoma.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple no expresa GMCSF y/o el virus del herpes simple codifica un gen funcional ICP47 y/o ICP6, y/o el cáncer no es un melanoma.
En algunas realizaciones, el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico y es, o ha sido, seleccionado por tener una respuesta inmunitaria de Th1.
En algunas realizaciones, el método puede comprender administrar una o más dosis del virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1.
Por consiguiente, En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, en donde el método de tratamiento comprende administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
En algunas realizaciones, el método puede comprender administrar una o más dosis del virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1.
En algunas realizaciones, el método puede comprender la etapa de determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
En algunas realizaciones, el método puede comprender la etapa de seleccionar un sujeto en el que el virus oncolítico del herpes simple induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1.
Por consiguiente, En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, y determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, y determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, y determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, y determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
En algunas realizaciones, la administración del virus del herpes simple oncolítico es durante un período de tiempo suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1 en el sujeto.
En algunas realizaciones, todas las copias del gen ICP34.5 en el genoma del virus del herpes simple oncolítico se modifican de modo que el gen ICP34.5 es incapaz de expresar un producto génico ICP34.5 funcional. Como tal, el virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante nulo de ICP34.5.
En algunas realizaciones, uno o ambos genes ICP34.5 en el genoma del virus del herpes simple oncolítico se modifican de manera que el gen ICP34.5 es incapaz de expresar un producto del gen ICP34.5 funcional.
En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de la cepa 17 de1HSV-1. En realizaciones preferidas, el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716 (número de registro de ECACC V92012803). E1HSV1716 también se llama SEPREHVIR®. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple es un mutante de la cepa 17 del HSV-1, mutante 1716.
En algunas realizaciones, un inhibidor de puntos de control inmunitario es un inhibidor de al menos uno de CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no expresa GMCSF. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen ICP47 funcional. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen ICP6 funcional. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no es un virus del herpes simple que carece de genes ICP34.5 funcionales y carece de un gen ICP47 funcional y comprende un gen que codifica el g M-CSF humano.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma primario. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma metastásico (secundario). Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no se encuentra en la etapa IIIb al melanoma en etapa IV.
La dosis de virus del herpes simple oncolítico administrada puede ser de al menos 1x106 ui. En algunas realizaciones, se administra una dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de 3 horas o menos. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico administrado se formula como aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 5 ml de una suspensión de virus en aproximadamente 200 ml a aproximadamente 300 ml de solución de Ringer lactado. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico administrado se formula como aproximadamente 1,0 ml de una suspensión de virus en aproximadamente 250 ml de solución de Ringer lactado.
En otro aspecto de la presente descripción, se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar al sujeto humano al menos un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico, en donde un ciclo de tratamiento comprende o consiste en:
(i) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente cuatro semanas, una dosis administrada por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui; o
(ii) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente dos semanas, dos dosis administradas por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui,
en donde la administración de virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En otro aspecto de la presente descripción, se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico para el uso en la fabricación de un medicamento para el uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano, comprendiendo el método administrar al sujeto humano al menos un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico, en donde un ciclo de tratamiento comprende, o consiste, de:
(i) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente cuatro semanas, una dosis administrada por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui; o
(ii) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente dos semanas, dos dosis administradas por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui,
en donde la administración de virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En otro aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto humano que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar al sujeto humano al menos un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico, en donde un ciclo de tratamiento comprende, o consiste, de:
(i) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente cuatro semanas, una dosis administrada por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui; o
(ii) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente dos semanas, dos dosis administradas por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui,
en donde la administración de virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En algunas realizaciones, la administración de cada dosis semanal de virus del herpes simple oncolítico en (i) está separada por 7±1 o 7±2 días.
En algunas realizaciones, la administración de cada dosis dos veces por semana de virus del herpes simple oncolítico en (ii) está separada por 4±1 o 4±2 días
En algunas realizaciones, el sujeto recibe dos o más ciclos de tratamiento. En algunas realizaciones, el sujeto recibe dos o más ciclos de tratamiento consecutivamente. En algunas realizaciones, el sujeto recibe dos o más ciclos de tratamiento, cada ciclo de tratamiento separado por una pausa del tratamiento. La interrupción del tratamiento puede ser de aproximadamente 1, 2, 3 o 4 semanas.
En algunas realizaciones, los primeros 1, 2 o 3 ciclos de tratamiento comprenden la administración de una dosis de virus del herpes simple oncolítico que es menor que la dosis administrada en ciclos de tratamiento posteriores.
En algunas realizaciones, el método comprende determinar la presencia de una respuesta de Th1 en el sujeto. El método puede comprender medir el nivel de IFNy, IL-2 y/o IL-12 en una muestra obtenida de un sujeto. El nivel de IL-2 y/o IL-12 y/o IFN-y en la sangre del sujeto se puede regular positivamente durante más de 7 días después de uno o más ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico.
El virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante de la cepa 17 de1HSV-1 o es HSV1716. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no codifica (o no se modifica más para contener el ácido nucleico que codifica) una citocina o quimiocina, una interleucina, un interferón, un factor de necrosis tumoral, un factor estimulante de colonias, un inmunomodulador, un miembro de la familia CC, un miembro de la familia CXC o un miembro de la familia CXC. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no expresa GMCSF. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen funcional ICP47 y/o ICP6.
El cáncer puede ser un tumor sólido. El cáncer puede ser un tumor sólido recurrente o metastásico. El cáncer puede estar en un niño. En algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma.
Terapia conjunta con el virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario
En algunos otros aspectos, la presente descripción se refiere al uso de un virus del herpes simple oncolítico para tratar el cáncer, en donde el sujeto recibe el virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor del punto de control inmunitario como parte del programa de tratamiento.
El virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario se administran como parte de un método para tratar el cáncer en el sujeto. Se pueden administrar de manera simultánea, p. ej., tal como una preparación combinada o como preparaciones separadas, una administrada inmediatamente después de la otra. Como alternativa, se pueden administrar por separado y de manera secuencial, en donde se administra un agente y luego se administra el otro después de un intervalo de tiempo predeterminado.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario a un sujeto que necesita tratamiento en donde el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario a un sujeto que necesita tratamiento en donde el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario a un sujeto que necesita tratamiento en donde el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario a un sujeto que necesita tratamiento en donde el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico.
Se proporciona el uso de un inhibidor del punto de control inmunitario en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario a un sujeto que necesita tratamiento en donde el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple no expresa GMCSF y/o el virus del herpes simple codifica un gen funcional ICP47 y/o ICP6, y/o el cáncer no es un melanoma.
En algunas realizaciones, el sujeto ha sido tratado con un virus del herpes simple oncolítico y es, o ha sido, seleccionado para el tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario por tener una respuesta inmunitaria de Th1.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer, comprendiendo el método la administración simultánea o secuencial de un virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método la administración simultánea o secuencial de un virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método la administración simultánea o secuencial de un inhibidor del punto de control inmunitario y un virus del herpes simple oncolítico.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método la administración simultánea o secuencial de un inhibidor del punto de control inmunitario al sujeto que necesita tratamiento.
Se proporciona el uso de un inhibidor del punto de control inmunitario en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método la administración simultánea o secuencial de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto que necesita tratamiento.
En algunas realizaciones, el método puede comprender administrar una o más dosis del virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1.
Por consiguiente, En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, en donde el método de tratamiento comprende administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un inhibidor del punto de control inmunitario en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, en donde el método de tratamiento comprende administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
En algunas realizaciones, el método puede comprender administrar una o más dosis del virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico a un sujeto, y administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico a un sujeto, y administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico a un sujeto, y administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico a un sujeto, y administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un inhibidor del punto de control inmunitario en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico a un sujeto, y administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
En algunas realizaciones, el método puede comprender la etapa de determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, opcionalmente antes de la administración del inhibidor del punto de control inmunitario. Tal determinación se puede realizar a intervalos deseados analizando el nivel de expresión de citocinas en una muestra tomada de un sujeto. Como tal, el monitoreo de la existencia y/o el estado de una respuesta de Th1 se puede llevar a cabo diariamente, semanalmente, quincenalmente, mensualmente o anualmente, según se desee y/o lo considere apropiado un médico.
Determinar la presencia de una respuesta de Th1 puede comprender medir el nivel de IFNy, IL-2 y/o IL-12 en una muestra obtenida de un sujeto. En algunas realizaciones preferidas, la determinación de la presencia de una respuesta de Th1 puede comprender medir el nivel de IL-2 y/o IL-12 en una muestra obtenida de un sujeto.
En algunas realizaciones, el método puede comprender la etapa de seleccionar un sujeto en el que el virus del herpes simple oncolítico induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario, haciendo dicha selección preferiblemente antes de la administración del inhibidor del punto de control inmunitario.
Por consiguiente, En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un inhibidor del punto de control inmunitario en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, administrar a un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, seleccionar un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, y administrar a un sujeto seleccionado una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, seleccionar un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, y administrar a un sujeto seleccionado una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, seleccionar un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, y administrar a un sujeto seleccionado una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, seleccionar un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, y administrar a un sujeto seleccionado una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Se proporciona el uso de un inhibidor del punto de control inmunitario en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico al sujeto, seleccionar un sujeto en el que se induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, y administrar a un sujeto seleccionado una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
En algunas realizaciones, el método comprende seleccionar un sujeto en el que el virus del herpes simple oncolítico induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario. En algunas realizaciones, la administración del virus del herpes simple oncolítico es durante un período de tiempo suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1 en el sujeto.
En algunas realizaciones, la administración del virus del herpes simple oncolítico es durante un período de tiempo antes del tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario en cuyo período se administra al sujeto el virus del herpes simple oncolítico pero no se le administra un inhibidor del punto de control inmunitario.
En algunas realizaciones, todas las copias del gen ICP34.5 en el genoma del virus del herpes simple oncolítico se modifican de modo que el gen ICP34.5 es incapaz de expresar un producto génico ICP34.5 funcional. Como tal, el virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante nulo de ICP34.5.
En algunas realizaciones, uno o ambos genes ICP34.5 en el genoma del virus del herpes simple oncolítico se modifican de manera que el gen ICP34.5 es incapaz de expresar un producto del gen ICP34.5 funcional.
En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de la cepa 17 de1HSV-1.
En realizaciones preferidas, el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716 (número de registro de ECACC V92012803). El HSV1716 también se llama SEPREHVIR®. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple es un mutante de la cepa 17 del HSV-1, mutante 1716.
En algunas realizaciones, el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de al menos uno de CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
En un aspecto de la presente descripción, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor del punto de control inmunitario. El virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante de la cepa 17 del HSV-1. En realizaciones preferidas, el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716. En un aspecto de la presente descripción se proporciona un kit, comprendiendo el kit una cantidad predeterminada de virus del herpes simple oncolítico y una cantidad predeterminada de un inhibidor del punto de control inmunitario. El virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante de la cepa 17 del HSV-1. En realizaciones preferidas, el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716. El kit se puede proporcionar junto con instrucciones para la administración del virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario de manera secuencial o simultánea con el fin de proporcionar un tratamiento para el cáncer.
En un aspecto de la presente descripción, se proporcionan productos que contienen cantidades terapéuticamente eficaces de:
(i) HSV1716, y
(ii) un inhibidor del punto de control inmunitario
para uso simultáneo o secuencial en un método de tratamiento médico, preferiblemente, tratamiento de cáncer. Los productos pueden ser formulaciones farmacéuticamente aceptables y, opcionalmente, se pueden formular como una preparación combinada para coadministración.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no expresa GMCSF. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen ICP47 funcional. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen ICP6 funcional. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no es un virus del herpes simple que carece de genes ICP34.5 funcionales y carece de un gen ICP47 funcional y comprende un gen que codifica el GM-GSF humano.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma. Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma primario, Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma metastásico (secundario). Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no es melanoma en etapa IIIb a etapa IV.
La dosis de virus del herpes simple oncolítico administrada puede ser de al menos 1x106 ui. En algunas realizaciones, se administra una dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de 3 horas o menos. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico administrado se formula como aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 5 ml de una suspensión de virus en aproximadamente 200 ml a aproximadamente 300 ml de solución de Ringer lactado. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico administrado se formula como aproximadamente 1,0 ml de una suspensión de virus en aproximadamente 250 ml de solución de Ringer lactado.
En otro aspecto de la presente descripción, se proporciona un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano, comprendiendo el método administrar al sujeto humano un virus del herpes simple oncolítico y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario, en donde el método comprende al menos un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico que comprende, o consiste en:
(i) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente cuatro semanas, una dosis administrada por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui; o
(ii) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente dos semanas, dos dosis administradas por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui,
en donde la administración de virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En otro aspecto de la presente descripción, se proporciona el uso de un virus del herpes simple oncolítico para su uso en la fabricación de un medicamento para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano, comprendiendo el método administrar al sujeto humano un virus del herpes simple oncolítico y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario, en donde el método comprende al menos un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico que comprende, o consiste en:
(i) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente cuatro semanas, una dosis administrada por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui; o
(ii) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente dos semanas, dos dosis administradas por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui,
en donde la administración de virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En otro aspecto de la presente descripción se proporciona un método para tratar el cáncer en un sujeto humano que necesita tratamiento, comprendiendo el método administrar al sujeto humano un virus del herpes simple oncolítico y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario, en donde el método comprende al menos un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico que comprende, o consiste en:
(i) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente cuatro semanas, una dosis administrada por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui; o
(ii) cuatro dosis de virus del herpes simple oncolítico durante un período de aproximadamente dos semanas, dos dosis administradas por semana por infusión en la sangre, cada dosis de virus del herpes simple oncolítico está en el intervalo de aproximadamente 1 x 107 ui a aproximadamente 1 x 108 ui,
en donde la administración de virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 sostenida en el sujeto.
En algunas realizaciones, el método comprende administrar un inhibidor del punto de control inmunitario de acuerdo con al menos un ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario, en donde los períodos de tiempo del ciclo de tratamiento del herpes simple oncolítico y el ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario se superponen.
En algunas realizaciones, el método comprende al menos un ciclo de tratamiento de un inhibidor del punto de control inmunitario que comprende, o consiste en 1 o 2 dosis de inhibidor de punto de control inmunitario administradas en un período de aproximadamente 3 o 4 semanas.
En algunas realizaciones, el método comprende al menos un ciclo de tratamiento de un inhibidor del punto de control inmunitario que comprende, o consiste en un período de aproximadamente 3 semanas en el que se administra 1 dosis de inhibidor de punto de control inmunitario. El método puede comprender al menos un ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario que comprende, o consiste en 1 dosis de inhibidor del punto de control inmunitario administrada aproximadamente cada 3 semanas. El método puede comprender al menos dos ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con (i) y al menos dos ciclos de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario, cada uno de los cuales comprende, o consiste, en un período de aproximadamente 3 semanas en el que se administra 1 dosis de inhibidor de punto de control inmunitario, en donde los períodos de tiempo del primer ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico y el primer ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario se superponen. El método puede incluir administrar al menos dos ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con (ii) y un ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario que comprende, o consiste en un período de aproximadamente 3 semanas en el que se administra 1 dosis de inhibidor del punto de control inmunitario, en el que los períodos de tiempo de los ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico y el ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario se superponen.
En algunas realizaciones, la administración de cada dosis semanal de virus del herpes simple oncolítico en (i) está separada por 7±1 o 7±2 días.
En algunas realizaciones, la administración de cada dosis dos veces por semana de virus del herpes simple oncolítico en (ii) está separada por 4±1 o 4±2 días
En algunas realizaciones, el sujeto recibe dos o más ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico y dos o más ciclos de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario. En algunas realizaciones, el sujeto recibe dos o más ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico y dos o más ciclos de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario, siendo los ciclos de tratamiento consecutivos.
En algunas realizaciones, los primeros 1,2 o 3 ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico comprenden la administración de una dosis de virus del herpes simple oncolítico que es menor que la dosis administrada en ciclos de tratamiento posteriores.
En algunas realizaciones, el método comprende determinar la presencia de una respuesta de Th1 en el sujeto. El método puede comprender medir el nivel de IFNy, IL-2 y/o IL-12 en una muestra obtenida de un sujeto. El nivel de IL-2 y/o IL-12 y/o IFN-y en la sangre del sujeto se puede regular positivamente durante más de 7 días después de uno o más ciclos de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico.
El virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante de la cepa 17 de1HSV-1 o es HSV1716. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no codifica (o no se modifica más para contener el ácido nucleico que codifica) una citocina o quimiocina, una interleucina, un interferón, un factor de necrosis tumoral, un factor estimulante de colonias, un inmunomodulador, un miembro de la familia CC, un miembro de la familia CXC o un miembro de la familia CXC. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no expresa GMCSF. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen funcional ICP47 y/o ICP6.
El inhibidor del punto de control inmunitario puede ser un inhibidor de al menos uno de CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
El cáncer puede ser un tumor sólido. El cáncer puede ser un tumor sólido recurrente o metastásico. El cáncer puede estar en un niño. En algunas realizaciones, el cáncer no es un melanoma.
Los siguientes párrafos numerados contienen declaraciones de amplias combinaciones de las características técnicas de la invención desvelada en el presente documento:-
1. Un virus del herpes simple oncolítico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
2. Un inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer, comprendiendo el método administrar una o más dosis de un virus del herpes simple oncolítico eficaz para inducir una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto, y administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
3. El virus del herpes simple oncolítico o el inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer según el párrafo 1 o 2, en donde el método comprende determinar la presencia de una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
4. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de los párrafos 1 a 3 en donde el método comprende seleccionar un sujeto en donde el virus del herpes simple oncolítico induce o provoca una respuesta inmunitario de Th1 para el tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario.
5. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de los párrafos 1 a 4, en donde la administración del virus del herpes simple oncolítico es durante un período de tiempo suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1 en el sujeto.
6. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de los párrafos 1 a 5 en donde la administración del virus del herpes simple oncolítico es durante un período de tiempo antes del tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario en donde durante un período de tiempo, se administra al sujeto el virus del herpes simple oncolítico, pero no se administra un inhibidor del punto de control inmunitario.
7. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de los párrafos 1 a 6 en donde:
(i) el virus del herpes simple oncolítico no expresa GMCSF, y/o
(ii) el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen funcional ICP47, y/o
(iii) el cáncer no es un melanoma.
8. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer de acuerdo con cualquiera de los párrafos 1 a 7, en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de la cepa 17 del HSV-1.
9. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para uso en un método de tratamiento del cáncer según cualquiera de los párrafos 1 a 6, en donde el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716.
10. El virus del herpes simple oncolítico o inhibidor del punto de control inmunitario para su uso en un método de tratamiento del cáncer según cualquiera de los párrafos 1 a 9, en donde el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de al menos uno de CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
11. Una composición farmacéutica que comprende un virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor de puntos de control inmunitario, en donde el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen ICP47 funcional y/o no expresa GMCSF.
12. Una composición farmacéutica que comprende un virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor de puntos de control inmunitario, en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de la cepa 17 de1HSV-1 o es HSV1716.
13. La composición farmacéutica del párrafo 11 o 12 en donde el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de al menos uno de CTLA4, Pd -1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
14. Un kit que comprende una cantidad predeterminada de virus del herpes simple oncolítico y una cantidad predeterminada de un inhibidor de puntos de control inmunitario, en donde el virus del herpes simple oncolítico codifica un gen ICP47 funcional y/o no expresa GMCSF.
15. Un kit que comprende una cantidad predeterminada de virus del herpes simple oncolítico y una cantidad predeterminada de un inhibidor de puntos de control inmunitario, en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de la cepa 17 del HSV-1 o es HSV1716.
16. El kit del párrafo 14 o 15 en donde el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de al menos uno de CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
17. Productos que contienen cantidades terapéuticamente eficaces de (i) HSV1716, y (ii) un inhibidor del punto de control inmunitario, para uso simultáneo o secuencial en un método de tratamiento médico, preferiblemente, tratamiento de cáncer.
18. Productos de acuerdo con el párrafo 17 en donde el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de al menos uno de CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 o LAG-3.
Descripción
Los linfocitos T colaboradores (Th) juegan un papel importante en el sistema inmunitario adaptativo, regulando la actividad de otras células inmunitarias mediante la liberación de ciertas citocinas. Son esenciales en la activación y proliferación de los linfocitos T citotóxicos y en la optimización de la actividad de los macrófagos. Los linfocitos Th maduros expresan CD4 (es decir, son linfocitos T CD4+). Los linfocitos Th en proliferación se diferencian de un estado Th0 en linfocitos T efectores de dos subtipos principales: Tipo 1 (Th1) y Tipo 2 (Th2) (Kidd P. Altern Med Rev. 2003; 8 (3): 223-46; Sallusto et al., Trends in Immunology. Volumen 19, número 12, p568-574, 1 de diciembre de 1998).
La diferenciación hacia Th1 es provocada principalmente por IL-12 e IL-2. La citocina efectora principal de la respuesta de Th1 es IFN-y, aunque las citocinas secretadas por los linfocitos Th1 incluyen el factor de necrosis tumoral (TNF-a), IFN-y y las interleucinas (IL) 2, 12 y 18. IFN-y promueve la producción de IL-12 a partir de células dendríticas y macrófagos, lo que promueve aún más la producción de IFN-y en los linfocitos Th mediante un mecanismo de retroalimentación positiva. La producción de IFN-y también inhibe la producción de IL-4 y, por lo tanto, inhibe la respuesta de Th2. La inmunidad de Th1 se efectúa principalmente a través de macrófagos, linfocitos T CD8+, linfocitos B, IgG y linfocitos T CD4+ IFN-y- Las citocinas de Th1 tienden a producir citocinas proinflamatorias tales como IL-6.
La diferenciación hacia Th2 se desencadena principalmente por IL-4 y las citocinas efectoras de la respuesta de Th2 incluyen IL-4, IL-5, IL-9, IL-10 e IL-13. La inmunidad de Th2 se efectúa principalmente a través de eosinófilos, basófilos y mastocitos, así como linfocitos B e y linfocitos T CD4+ de IL-4/IL-5. IL-10 actúa para suprimir la diferenciación de linfocitos Th1 inhibiendo IL-2 e I FN-y en linfocitos Th e IL-12 en células dendríticas y macrófagos.
Los datos presentados en el presente documento de un ensayo en pacientes humanos muestran que la administración no intratumoral de una sola dosis del virus del herpes simple oncolítico puede ser suficiente para inducir una respuesta de IFNy (p. ej., Figuras 1 y 22), pero la respuesta no se traduce de manera sólida en una regulación positiva de IL-2 e IL-12 (Figuras 5, 9 y 23). El IFNy es pleiotrópico (Trincheri y Perussia., Immune interferon: a pleiotropic lymphokine with multiple effects. Immunology Today, Volumen 6, Número 4,131-136), y la regulación de IFNy solo, sin inducción de niveles umbral de IL-2 y/o IL-12, no es un indicador fiable de la inducción de una respuesta de Th1 fuerte o sostenida.
Se ha demostrado que la administración de múltiples dosis de virus del herpes simple oncolítico regula positivamente aún más el IFNy y lleva a la regulación positiva de IL-2 e IL-12 (Figura 23) y la expansión de los linfocitos T asociados con una respuesta de Th1 (Figura 49). La regulación positiva de IL-2 e IL-12 conduce a la expansión de una población de linfocitos Th1 mediante un mecanismo de retroalimentación positiva (Busse etal., Competing feedback loops shape IL-2 signaling between helper and regulatory T lymphocytes in cellular microenvironments. PNAS 2010 107 (7) 3058­ 3063; Vignali y Kuchroo., IL-12 family cytokines: immunological playmakers. Nature Immunology 13, 722-728 (2012)) que está modulada por IL-10 regulada positivamente (Taga y Tosato., IL-10 inhibits human T cell proliferation and IL-2 production. J Immunol. 15 de febrero de 1992; 148(4):1143-8).
Los datos obtenidos (Figuras 23 y 49) muestran que la administración de dosis múltiples de virus del herpes simple oncolítico conduce a la regulación positiva de IFNy, IL-2, IL-12, IL-10 en sujetos humanos y una población de linfocitos T apropiada, lo que indica claramente el establecimiento de una respuesta de Th1 sostenida.
Los inventores han identificado que la administración del virus del herpes simple oncolítico a pacientes humanos que tienen cáncer induce una fuerte respuesta inmunitaria de Th1. La respuesta parece madurar y sostenerse con el tiempo y ser más fuerte en pacientes que reciben más de una dosis del virus. El virus del herpes simple oncolítico transfectado en células tumorales se replicará y lisará selectivamente las células tumorales provocando la necrosis de las células tumorales y la liberación de antígenos tumorales, que desencadenan una respuesta inmunitaria de Th1. De hecho, los inventores han observado que el virus del herpes simple oncolítico remodela el microambiente del tumor alejándolo de la inmunosupresión al interactuar directamente con las células inmunitarias que se infiltran en el tumor.
Por consiguiente, los pacientes humanos pueden ser tratados con un virus del herpes simple oncolítico para estimular y establecer una respuesta inmunitaria de Th1.
Por lo tanto, los pacientes humanos tratados con el virus del herpes simple oncolítico también son adecuados para el tratamiento con un inhibidor de puntos de control inmunitario para proporcionar un efecto de tratamiento mejorado y/o convertir a los pacientes que no tienen una respuesta o una respuesta subóptima a la terapia con inhibidores de puntos de control inmunitarios en respondedores a dicha terapia.
Por consiguiente, los pacientes humanos pueden ser tratados con un virus del herpes simple oncolítico para estimular y establecer una respuesta inmunitaria de Th1 preparando así al sujeto para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario.
Sin desear ceñirse a la teoría de la invención, El tratamiento con un virus del herpes simple oncolítico se puede usar para establecer una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto. El establecimiento de una respuesta de Th1 puede ayudar a aumentar la magnitud de las respuestas de linfocitos T específicos del tumor. La inducción de una respuesta de Th1 en un sujeto que no responde o responde mal puede convertir al sujeto en un respondedor.
Tener establecido un tratamiento de respuesta de Th1 con un inhibidor del punto de control inmunitario puede aumentar la magnitud de las respuestas de linfocitos T específicos del tumor en comparación con el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario solo. En particular, la respuesta de un sujeto al tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario puede mejorarse mediante el uso de un virus del herpes simple oncolíti establecer una respuesta de Th1. Los sujetos que no responden o responden mal al tratamiento con inhibidores de puntos de control inmunitarios pueden convertirse en respondedores.
En general, el tratamiento con un virus del herpes simple oncolítico (con o sin inhibidor del punto de control inmunitario) puede mejorar la activación sistémica de los linfocitos T y la respuesta antitumoral a los antígenos tumorales después de la replicación lítica del virus del herpes simple oncolítico en las células del cáncer. Esto puede conducir a una mayor destrucción de los tumores a los que se les ha administrado el virus, p. ej., por inyección directa, pero también puede potenciar la destrucción de tumores a los que no se les ha administrado el virus y/o están distantes del sitio de administración, p. ej., tumores secundarios/metastásicos. Esto puede mejorar la tasa de respuesta general del tumor y la duración de la respuesta. En general, estos efectos pueden proporcionar una extensión en la supervivencia general, particularmente cuando se compara con el tratamiento que usa un inhibidor de puntos de control inmunitario solo.
Los inventores han observado que los ratones que recibieron el virus del herpes simple oncolítico mostraron más reclutamiento de linfocitos T en el tumor y mostraron respuestas inflamatorias inmunitarias más altas y un microambiente menos inmunosupresor, medido por las proporciones aumentadas de linfocitos T CD4+ y CD8+ en relación con los linfocitos Treg CD4+/CD25+/Fox3P+ y las citocinas inmunosupresoras.
Los inventores han observado que los ratones que reciben terapia de combinación con el virus del herpes simple oncolítico y un inhibidor del punto de control inmunitario mostraron más reclutamiento de linfocitos T en el tumor y mostraron respuestas inmunoinflamatorias más altas y un microambiente menos inmunosupresor, medido por las proporciones aumentadas de linfocitos T CD4+ y CD8+ en relación con los linfocitos Treg CD4+/CD25+/Fox3P+ y las citocinas inmunosupresoras. La terapia de combinación no dio como resultado un mayor reclutamiento de linfocitos citolíticos naturales, linfocitos T citolíticos naturales o linfocitos B o afecta a la actividad del virus in vivo, pero indujo más respuestas inflamatorias con menos respuestas inmunitarias reguladoras/supresoras.
Los inventores han identificado que la inducción de una respuesta de Th1 mediante la administración de una cantidad eficaz de virus del herpes simple oncolítico es eficaz para desencadenar una respuesta antitumoral de Th1 en el sujeto. También han identificado que la respuesta antitumoral de Th1 tiene un efecto de memoria y se puede usar para vacunar al sujeto contra la recaída del cáncer en sitios primarios y distales
Administración del virus del herpes simple oncolítico
La administración del virus del herpes simple oncolítico es preferiblemente durante un período de tiempo suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1 duradera en el sujeto. La respuesta de Th1 es preferiblemente una respuesta antitumoral de Th1.
Esto puede implicar la administración a intervalos regulares, p. ej., semanalmente o quincenalmente, de dosis de virus del herpes simple oncolítico suficientes para inducir una respuesta de Th1 sostenida durante un período de tiempo. Por ejemplo, las dosis se pueden administrar a intervalos regulares definidos durante un período de al menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, semanas o 1,2, 3, 4, 5 o 6 meses.
Como tal, se pueden administrar múltiples dosis de virus del herpes simple oncolítico. Por ejemplo, se pueden administrar 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más dosis de virus del herpes simple oncolítico a un sujeto como parte de un curso de tratamiento diseñado para inducir o provocar una respuesta de Th1. En algunas realizaciones preferidas se administra al sujeto una de al menos 2, 3 o 4 dosis de virus del herpes simple oncolítico, preferiblemente a intervalos regulares (p. ej., semanalmente), para establecer una respuesta de Th1 en el sujeto. Establecer la respuesta de Th1 puede prepararlos para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario.
Las dosis de virus del herpes simple oncolítico pueden estar separadas por un intervalo de tiempo predeterminado, que se puede seleccionar entre 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o 31 días, o 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses. A modo de ejemplo, las dosis se pueden administrar una vez cada 7, 14, 21 o 28 días (más o menos 3, 2 o 1 días). La dosis de virus del herpes simple oncolítico administrada en cada punto de dosificación puede ser la misma, pero esto no es esencial. Por ejemplo, puede ser apropiado administrar una primera dosis alta en el primer, segundo y/o tercer punto de dosificación.
La administración del virus del herpes simple oncolítico puede ser de uno o más ciclos de tratamiento, p. ej., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más ciclos de tratamiento. Un sujeto que recibe múltiples ciclos de tratamiento puede recibir ciclos de tratamiento posteriores consecutivamente, sin una interrupción del tratamiento, o puede separar todos los ciclos de tratamiento o algunos seleccionados mediante una interrupción del tratamiento, p. ej., una interrupción de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 días o aproximadamente 1, 2, 3 o 4 semanas.
En algunas realizaciones, un ciclo de tratamiento puede comprender, o consistir en, 4 dosis de virus del herpes simple oncolítico, una dosis por semana durante un período de 4 semanas. En algunas realizaciones, un ciclo de tratamiento puede comprender, o consistir en, 8 dosis de virus del herpes simple oncolítico, una dosis por semana durante un período de 8 semanas. Las dosis semanales pueden estar separadas por 7 ± 1 o 7 ± 2 días. Por ejemplo, se pueden administrar dosis semanales los días 1,8, 15 y 22.
En algunas realizaciones, un ciclo de tratamiento puede comprender, o consistir en, 4 dosis de virus del herpes simple oncolítico, dos dosis por semana durante un período de 2 semanas. En algunas realizaciones, un ciclo de tratamiento puede comprender, o consistir en, 8 dosis de virus del herpes simple oncolítico, dos dosis por semana durante un período de 4 semanas. Las dosis dos veces por semana pueden estar separadas por 4 ± 1 o 4 ± 2 días. Por ejemplo, se pueden administrar dosis semanales los días 1,5, 8, 13 o 1,5, 8, 12.
Los sujetos pueden recibir la misma dosis en cada administración dentro de un ciclo de tratamiento dado, p. ej., una dosis de 1 x 107 ui o 1 x 108 ui, o entre 1 x 107 ui y 1 x 108 ui. En algunas realizaciones, los primeros 1,2 o 3 ciclos de tratamiento pueden comprender la administración de una cantidad de dosis menor en cada administración, p. ej., 1 x 107 ui, y los ciclos de tratamiento posteriores pueden comprender la administración de una cantidad de dosis mayor en cada administración, p. ej., 1 x 108 ui.
La administración del virus del herpes simple oncolítico puede ser por infusión a la sangre (intravenosa o intraarterial) y los sujetos acudirán preferiblemente a la clínica en los días de administración programados para la administración del virus del herpes simple oncolítico. La administración del virus del herpes simple oncolítico puede continuar hasta que se desarrolle una toxicidad grave o se retire el consentimiento.
Se puede tomar una biopsia del tumor en el período que comienza 14 días antes de la primera dosis del virus del herpes simple oncolítico (día 1). Se puede tomar una biopsia de tumor o una muestra de extracción quirúrgica después de completar un ciclo de tratamiento, p. ej., dentro de los 14 días posteriores a la última dosis de virus del herpes simple oncolítico en un ciclo de tratamiento determinado. Las muestras obtenidas de la biopsia del tumor o la extracción quirúrgica se pueden usar para determinar la presencia y/o el mantenimiento de una respuesta de Th1.
Se pueden tomar muestras de sangre o suero en la etapa de evaluación inicial del sujeto (antes del tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico) y durante uno o cada ciclo de tratamiento, p. ej., los días 1, 8, 15, 22, para administración semanal, los días 1, 5, 8, 13 o los días 1, 5, 8, 12 para la administración dos veces por semana. Se pueden usar muestras de sangre o suero para determinar la presencia y/o el mantenimiento de una respuesta de Th1.
Una vez que se ha inducido en el sujeto una respuesta de Th1, preferiblemente una respuesta de Th1 sostenida, puede continuar con la dosificación del virus del herpes simple oncolítico en la misma pauta de dosificación para mantener la respuesta. Como alternativa, la frecuencia de administración se puede reducir y el sujeto puede no recibir más dosis de virus del herpes simple oncolítico, p. ej., en los casos en los que la respuesta de Th1 es autosostenida después de la inducción, o el estado de la respuesta de Th1 en el sujeto puede ser monitoreada y el sujeto puede recibir administraciones de refuerzo cuando se considere apropiado, p. ej., por un médico, para mantener la respuesta de Th1 sostenida.
Las cantidades de dosificación adecuadas de virus del herpes simple oncolítico pueden estar en el intervalo de 106 a 109 ui o 2x106 a 109 ui. Las dosis pueden estar en un intervalo seleccionado del grupo que consiste en: 2x106 a 9x106 ui, 2x106 a 5x106 ui, 5x106 a 9x106 ui, 2x106 a 1x107 ui, 2x106 a 5x107 ui, 2x106 a 1x108 ui, 2x106 a 5x108 ui, 2x106 a 1x109 ui, 5x106 a 1x107 ui, 5x106 a 5x107 ui, 5x106 a 1x108 ui, 5x106 a 5x108 ui, 5x106 a 1x109 ui, 5x106 a 5x109 ui, 1x107 a 9x107 ui, 1x107 a 5x107 ui, 1x108 a 9x108 ui, 1x108 a 5x108 ui. En algunas realizaciones, las dosis adecuadas pueden estar en el intervalo de 2x106 a 9x106 ui, 1x107 a 9x107 ui, o 1x108 a 9x108 ui. En algunas realizaciones, las dosis adecuadas pueden ser de aproximadamente 1 x 107 ui o alrededor de 1x108 ui, o en el intervalo de aproximadamente 1x107 ui a aproximadamente 1x108 ui. Las cifras de dosis pueden ser opcionalmente /- la mitad del valor logarítmico.
La expresión 'unidades infecciosas' se usa para referirse a las concentraciones de virus que se obtienen usando el método DICT50 y las 'unidades formadoras de placa (ufp)' para referirse a los resultados del ensayo basado en placa. Como 1 ui formará una sola placa en un ensayo de titulación, 1 ui es equivalente a 1 ufp.
En general, la administración es preferiblemente en una "cantidad eficaz", siendo esto suficiente para inducir una respuesta de Th1 en el individuo y/o para que el virus tenga un efecto de tratamiento independiente sobre el cáncer. La cantidad real administrada y la velocidad y el trascurso de la administración, dependerán de la naturaleza y de la gravedad de la enfermedad que se esté tratando. La prescripción del tratamiento, p. ej., las decisiones sobre dosis, etc, es responsabilidad de los médicos generales y de otros médicos, y normalmente tienen en cuenta el trastorno que se va a tratar, la condición de un paciente concreto, el sitio de administración, el método de administración y otros factores conocidos por los médicos. Se pueden encontrar ejemplos de las técnicas y protocolos mencionados anteriormente en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición, 2000, pub, Lippincott, Williams y Wilkins.
El tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico es preferiblemente durante un período de tiempo adecuado o suficiente, para inducir o provocar una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto.
La administración del virus del herpes simple oncolítico se puede realizar preferiblemente durante un período de tiempo, p. ej., antes del tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, en cuyo período el sujeto recibe el virus del herpes simple oncolítico pero no recibe un inhibidor del punto de control inmunitario, El tratamiento es preferiblemente por un período de tiempo adecuado o suficiente, para inducir o provocar una respuesta inmunitaria de Th1 en el sujeto. Esto puede denominarse "pretratamiento" con el virus del herpes simple oncolítico.
En algunas realizaciones preferidas, el pretratamiento puede implicar un período de tiempo en el que al sujeto se le administra el virus del herpes simple oncolítico pero no se le administra un inhibidor del punto de control inmunitario (denominado en el presente documento "monoterapia del virus del herpes simple oncolítico"). El período de monoterapia con el virus del herpes simple oncolítico puede ser suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1 en el sujeto. Durante un período de monoterapia con el virus del herpes simple oncolítico, el sujeto también puede recibir tratamiento en forma de administración simultánea, secuencial o separada de otra quimioterapia o radioterapia, p. ej., que puede ser parte del tratamiento habitual para el cáncer que se está tratando, pero en ese período de tiempo el paciente no recibirá una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
Como tal, los métodos pueden comprender la administración de un virus del herpes simple oncolítico durante un período de tiempo en el que el sujeto recibe el virus del herpes simple oncolítico pero no recibe un inhibidor del punto de control inmunitario. El período de tiempo es preferiblemente adecuado o suficiente, para inducir una respuesta de Th1 en el sujeto.
Durante o después del pretratamiento, se puede hacer una determinación de si se ha inducido o provocado una respuesta de Th1 en el sujeto y/o se puede hacer una selección de sujetos en los que se ha inducido o provocado una respuesta de Th1. Los sujetos seleccionados pueden considerarse adecuados para el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario.
Entonces, un sujeto puede comenzar el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario. Es decir, el método puede comprender además la administración de un inhibidor del punto de control inmunitario al sujeto. El tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario no es obligatorio y, en algunas realizaciones, los sujetos no recibirán dicho tratamiento.
Por consiguiente, en un punto de tiempo seleccionado, el período de pretratamiento puede terminar y luego al sujeto se le puede administrar un inhibidor del punto de control inmunitario. Opcionalmente, se continuará administrando al sujeto simultáneamente el virus del herpes simple oncolítico, de manera secuencial o por separado, de modo que el sujeto reciba coterapia con inhibidor del punto de control inmunitario y virus del herpes simple oncolítico. El sujeto también puede recibir, o continuar recibiendo, tratamiento en forma de administración simultánea, secuencial o separada de otra quimioterapia o radioterapia, p. ej., que puede ser parte del tratamiento habitual para el cáncer que se está tratando.
Por ejemplo, el pretratamiento puede tener lugar durante una de al menos 1,2, 3, 4 o 5 semanas en las que el sujeto recibe el virus del herpes simple oncolítico pero no recibe un inhibidor del punto de control inmunitario. preferiblemente, el período de tiempo es suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1 en el sujeto. A modo de ejemplo, un sujeto puede recibir monoterapia con el virus del herpes simple oncolítico en forma de dosis semanales del virus del herpes simple oncolítico para uno de al menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, semanas o 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses.
En otras realizaciones, un sujeto puede recibir monoterapia con el virus del herpes simple oncolítico tal como se describió anteriormente y puede interrumpir el tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico y comenzar a recibir el tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario. En tales realizaciones, puede que no haya ningún día en el que un sujeto esté recibiendo coterapia, es decir, ningún día en el que se superponga un programa de tratamiento pautado en curso con el virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario.
En otras realizaciones, puede haber una superposición sustancial de tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico. En una disposición, la coterapia con el virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario puede comenzar al inicio del tratamiento, o durante un período en el que el sujeto está recibiendo un virus del herpes simple oncolítico para inducir o provocar una respuesta de Th1, preferiblemente una respuesta de Th1 sostenida. En otros casos, se puede proporcionar un período corto de monoterapia con el virus del herpes simple oncolítico, no necesariamente adecuado o suficiente para inducir o provocar una respuesta de Th1, preferiblemente una respuesta de Th1 sostenida, después de lo cual el sujeto también comienza a recibir tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario, es decir, coterapia. Durante la coterapia, el virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario se pueden administrar el mismo día o en días diferentes.
La coterapia puede comprender la administración simultánea o secuencial del virus del herpes simple oncolítico y del inhibidor del punto de control inmunitario.
La administración simultánea se refiere a la administración conjunta del virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario, por ejemplo como una composición farmacéutica que contiene ambos agentes, o inmediatamente uno después del otro y opcionalmente a través de la misma vía de administración, p. ej. a la misma arteria, vena u otro vaso sanguíneo.
La administración secuencial se refiere a la administración de uno de los virus del herpes simple oncolítico o un inhibidor del punto de control inmunitario seguida después de un intervalo de tiempo dado por la administración separada del otro agente. No es necesario que los dos agentes se administren por la misma vía, aunque este es el caso en algunas realizaciones. El intervalo de tiempo puede ser cualquier intervalo de tiempo.
Si bien la administración simultánea o secuencial puede estar destinada a que tanto el virus del herpes simple oncolítico como el inhibidor del punto de control inmunitario se administren al mismo tejido tumoral para efectuar el tratamiento, no es esencial que ambos agentes estén presentes en el tejido tumoral en forma activa al mismo tiempo.
Sin embargo, en algunas realizaciones de administración secuencial, el intervalo de tiempo se selecciona de modo que se espera que el virus del herpes simple oncolítico y el inhibidor del punto de control inmunitario estén presentes en el tejido tumoral en forma activa al mismo tiempo, permitiendo así un efecto combinado, aditivo o sinérgico de los dos agentes en el tratamiento del tumor. En tales realizaciones, el intervalo de tiempo seleccionado puede ser cualquiera de 5 minutos o menos, 10 minutos o menos, 15 minutos o menos, 20 minutos o menos, 25 minutos o menos, 30 minutos o menos, 45 minutos o menos, 60 minutos o menos, 90 minutos o menos, 120 minutos o menos, 180 minutos o menos, 240 minutos o menos, 300 minutos o menos, 360 minutos o menos, 720 minutos o menos, 1 día o menos, 2 días o menos.
Un sujeto puede recibir virus del herpes simple oncolítico antes del tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario que está pensado para aprovechar la respuesta de Th1 que el virus del herpes simple oncolítico puede inducir o provocar cuando proporciona un efecto de tratamiento.
Cuando se produce la coterapia con un virus del herpes oncolítico, puede continuar durante el tiempo que se desee o se prescriba. En algunas realizaciones, el tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico se puede interrumpir a favor de continuar el tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario.
Las dosis de inhibidor del punto de control inmunitario también pueden estar separadas por un intervalo de tiempo predeterminado, que se puede seleccionar entre 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, l2 , 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 2 l, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o 31 días, o 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses. La administración es preferiblemente en una "cantidad terapéuticamente eficaz", esto es suficiente para demostrar beneficio al individuo. La cantidad real administrada y la velocidad y el trascurso de la administración, dependerán de la naturaleza y de la gravedad de la enfermedad que se esté tratando. La prescripción del tratamiento, p. ej., las decisiones sobre dosis, etc, es responsabilidad de los médicos generales y de otros médicos, y normalmente tienen en cuenta el trastorno que se va a tratar, la condición de un paciente concreto, el sitio de administración, el método de administración y otros factores conocidos por los médicos. Se pueden encontrar ejemplos de las técnicas y protocolos mencionados anteriormente en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición, 2000, pub. Lippincott, Williams y Wilkins.
Durante la coterapia, el sujeto también puede recibir, o continuar recibiendo, tratamiento en forma de administración simultánea, secuencial o separada de otra quimioterapia o radioterapia, p. ej., que puede ser parte del tratamiento habitual para el cáncer que se está tratando.
Una respuesta de Th1 es preferiblemente una respuesta de Th1 sostenida. Por "respuesta Th1 sostenida" los presentes inventores quieren decir que el nivel de una o más citocinas relevantes (p. ej., IL-2 y/o IL-12 y/o IFN-y) y/o la población de linfocitos T relevante (p. ej., linfocitos Th1) está regulada positivamente durante más de 7 días, y preferiblemente durante al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 semanas, o durante al menos 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses.
Detección de una respuesta inmunitaria de Th1
Una respuesta inmunitaria de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de una o más citocinas relevantes seleccionadas del grupo que consiste en IFN-y, IL-2, lL-12, IP-10, MIG, TNF-a, IL-18, IL-27, TNF-p. En algunas realizaciones, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por una regulación positiva de IFN-y, IL-2 o IL-12.
No todos los sujetos responden a la administración del HSV oncolítico mediante la inducción de una respuesta de Th1 y, por lo tanto, se puede controlar a los sujetos para determinar su respuesta al tratamiento con e1HSV oncolítico. Los sujetos que responden pueden continuar el tratamiento con HSV oncolítico a una dosis y/o régimen de dosificación diseñado para mantener la respuesta de Th1 sostenida. Los sujetos que no responden al tratamiento mediante la generación de una respuesta de Th1 pueden interrumpir el tratamiento con e1HSV oncolítico o pueden pasar a un tratamiento combinado con HSV oncolítico y uno o más agentes quimioterapéuticos adicionales.
Por consiguiente, la presencia de una respuesta de Th1 se puede determinar midiendo el nivel de una citocina de Th1 en una muestra obtenida de un sujeto.
Además de las citocinas secretadas por los linfocitos Th1, la expresión de proteínas o receptores específicos de la superficie celular, incluyendo IL-12 R beta 2, IL-27 R alfa/WSX-1, IFN-gamma R2, CCR5 e CXCR3, se puede utilizar para distinguir los linfocitos Th1 de otros subtipos de linfocitos T. Los linfocitos T asociados con una respuesta de Th1 también se pueden caracterizar parcialmente como CD4+o CD8+. Por consiguiente, la presencia de una respuesta de Th1 también se puede determinar o determinar parcialmente midiendo la expresión de las proteínas o receptores de la superficie celular de Th1 por los linfocitos T en una muestra obtenida de un sujeto y/o midiendo la proporción de linfocitos T que son CD4+ o CD8+ en una muestra obtenida de un sujeto.
En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por una regulación positiva de IFN-y. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-2. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-12. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IFN-y y la determinación del estado de los linfocitos T CD8+.
En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-2 y la determinación del estado de los linfocitos T CD8+. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-12 y la determinación del estado de los linfocitos T CD8+. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IFN-y y una o ambas de IL-2 e IL-12, y opcionalmente la determinación del estado de los linfocitos T CD8+. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-2 y uno o ambos de IFN-y e IL-12, y opcionalmente la determinación del estado de los linfocitos T CD8+. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-12 y uno o ambos de IFN-y e IL-2, y opcionalmente la determinación del estado de los linfocitos T CD8+. En algunas realizaciones preferidas, una respuesta de Th1 se puede caracterizar por la regulación positiva de IL-2 y/o IL-12.
La detección y caracterización de una respuesta inmunitaria de Th1 es un procedimiento habitual para un experto en la técnica. Se encuentran disponibles numerosos ensayos de detección de citocinas y células, incluidos ELISA simples y multiplexados, PCR con transcripción inversa, PCR en tiempo real de Taqman, inmunohistoquímica y citometría de flujo (p. ej., véase Whiteside TL. Cytokine assays. Biotechniques 2002; Supl:4 - 8, 10, 12-5; Pala P, Hussell T, Openshaw PJ. Flow cytometric measurement of intracellular cytokines. J Immunol Methods 2000; 243:107 - 24; Jason J, Lamed J. Single-cell cytokine profiles in normal humans: comparison of flow cytometric reagents and stimulation protocols. J Immunol Methods 1997; 207:13 - 22; Farrell AM et al. A rapid flow cytometric assay to detect CD4+ and CD8+ T-helper (Th) 0, Th1 and Th2 cells in whole blood and its application to study cytokine levels in atopic dermatitis before and after cyclosporin therapy. Br J Dermatol. enero de 2001; 144(1):24-33).
Por lo tanto, la inducción de una respuesta de Th1 y el mantenimiento de la respuesta en el tiempo se pueden controlar a intervalos deseados analizando el nivel de expresión de citocinas en una muestra tomada de un sujeto. Dicho seguimiento se puede llevar a cabo, diariamente, semanalmente, quincenalmente, mensualmente o anualmente según lo desee y/o considere apropiado un médico.
En algunas realizaciones, la detección de una respuesta de Th1 implica la detección de una regulación positiva de una población de linfocitos Th1 o de citocinas de Th1.
La regulación positiva se puede determinar comparando el nivel de una población celular o citocina antes y después de un tratamiento, p. ej., antes y después de un período de tratamiento (opcionalmente pretratamiento) con un virus del herpes simple oncolítico. Los niveles de una población celular o de una citocina se pueden cuantificar para una comparación absoluta, o se pueden realizar comparaciones relativas.
En algunas realizaciones, se puede considerar que la regulación positiva está presente cuando el nivel de una población celular o citocina en la muestra de prueba es al menos 1,1 veces mayor que en la muestra de control (p. ej., una muestra obtenida antes del tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico). Más preferiblemente, el nivel se puede seleccionar entre uno de al menos 1,2, al menos 1,3, al menos 1,4, al menos 1,5, al menos 1,6, al menos 1,7, al menos 1,8, al menos 1,9, al menos 2,0, al menos 2,1, al menos 2,2, al menos 2,3, al menos 2,4 al menos 2,5, al menos 2,6, al menos 2,7, al menos 2,8, al menos 2,9, al menos 3,0, al menos 3,5, al menos 4,0, al menos 5,0, al menos 6,0, al menos 7,0, al menos 8,0, al menos 9,0, al menos 10,0, al menos 11,0, al menos 12,0, al menos 13,0, al menos 14,0, o al menos 15,0 veces mayor que en la muestra de control.
La detección de una respuesta de Th1 se puede confirmar adicionalmente mediante la detección de una respuesta de IgG antitumoral. Esto se puede determinar, por ejemplo, mediante inmunoensayo para detectar la presencia de IgG en una muestra de un sujeto que ha recibido tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico. Se puede comparar la ausencia de tal respuesta en un paciente que no ha recibido tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico.
Además de la detección de una respuesta de Th1, la presencia de ADN del HSV se puede detectar en una muestra. El ADN del HSV se puede detectar mediante técnicas habituales tales como qPCR o PCR en tiempo real (p. ej., véase Kessler et al., J Clin Microbiol. julio de 2000; 38(7):2638-2642; Pandori et al BMC Infectious Diseases 2006 6:104; Hong et al., BioMed Research International Vol 2014 (2014) ID de artículo 261947, 5 páginas).
Se puede obtener una muestra de un sujeto. Las muestras se pueden obtener antes, durante y/o después del tratamiento con un virus del herpes simple oncolítico. Una muestra obtenida antes de que haya comenzado el tratamiento puede proporcionar valores de referencia para los niveles de citocinas, proteínas o receptores de la superficie celular o proporción de linfocitos T CD4+ o CD8+ que pueden permitir la comparación con los niveles determinados durante o después del tratamiento, permitiendo la comparación determinar si se ha inducido o provocado una respuesta de Th1 en el sujeto.
Se puede tomar una muestra que proviene de cualquier tejido, p. ej., tejido tumoral o fluido corporal, y se puede procesar para aislar una población celular de interés, p. ej., glóbulos blancos, linfocitos o células T.
Una muestra puede comprender o provenir de: una cantidad de sangre; una cantidad de suero que proviene de la sangre del individuo que puede comprender la porción fluida de la sangre obtenida después de la eliminación del coágulo de fibrina y las células sanguíneas; otros fluidos corporales, líquido pleural, líquido de derrame, ascitis o un líquido producido por un cáncer.
En disposiciones preferidas, la muestra se toma de un fluido corporal, más preferiblemente uno que circule por el cuerpo. Por consiguiente, la muestra puede ser una muestra de sangre o una muestra de linfa.
En algunas realizaciones, la muestra es una muestra de sangre o una muestra que proviene de sangre. La muestra que proviene de sangre puede ser una fracción seleccionada de la sangre de un paciente, p. ej., una fracción seleccionada que contiene células o una fracción de plasma o de suero. Una fracción seleccionada que contiene células puede contener tipos de células de interés que pueden incluir glóbulos blancos (GB), linfocitos, células mononucleares de sangre periférica (PBC) y/o granulocitos y/o glóbulos rojos (GR).
En algunas realizaciones, la muestra es una biopsia o proviene de una biopsia. En algunas realizaciones, la muestra se puede obtener durante la extracción quirúrgica de un tumor. Los tumores sólidos son especialmente adecuados para la obtención de muestras mediante biopsia o durante la extracción quirúrgica. Los tumores sólidos son especialmente adecuados para la obtención de muestras mediante biopsia o durante la extracción quirúrgica.
Los sujetos seleccionados para el tratamiento con el virus del herpes simple pueden estar indicados para la extirpación quirúrgica del tejido tumoral (denominado en el presente documento "extracción del tumor"). Por ejemplo, pueden tener un cáncer considerado, por un médico, operable para extirpar parte o todo el tejido tumoral. El tratamiento con el virus del herpes simple puede comenzar antes de la extracción del tumor.
El tejido tumoral extirpado durante la extracción del tumor se puede analizar para determinar si el virus del herpes simple ha llegado al tumor, p. ej., detectando in vitro la presencia de ADN de1HSV en tejido tumoral extirpado y/o la expresión de antígenos de HSV por inmunohistoquímica y/o para determinar si una respuesta de Th1 está presente en el cáncer, p. ej., detectando in vitro la presencia de una respuesta de Th1 en tejido tumoral extirpado.
En algunas realizaciones, la muestra es una muestra de líquido de derrame, p. ej., líquido pleural o ascitis. El líquido de derrame se refiere a un exceso de líquido producido por un sujeto en respuesta directa o indirecta a la presencia de un cáncer en el sujeto. El líquido de derrame se puede acumular en una cavidad corporal de modo que se puede producir una acumulación de líquido de derrame donde la velocidad de producción del líquido de derrame excede la velocidad de reabsorción. Los derrames pleurales (a veces llamados derrames pleurales malignos) llevan a la acumulación de líquido en la cavidad pleural y tienen lugar en algunos cánceres de pulmón, p. ej., mesotelioma. El líquido de derrame que se acumula en la cavidad peritoneal se denomina comúnmente ascitis y puede ser un síntoma de varios tipos de cáncer, incluido el cáncer de mama, de pulmón, de colon, de estómago, de páncreas, de ovario, de endometrio, así como linfoma. El derrame pericárdico es la acumulación anómala de líquido en la cavidad pericárdica. El líquido de derrame es preferiblemente exudativo.
El líquido de derrame se puede drenar de una cavidad corporal respectiva mediante procedimientos asépticos bien conocidos (p. ej., véase Warren et al. Ann Thorac Surg 2008; 85:1049-55; Warren et al. European Journal of Cardiothoracic Surgery 33 (2008) 89-94). En algunos casos, se inserta un tubo o catéter en la cavidad corporal para drenar el líquido de derrame. El drenaje del líquido de derrame es una parte común del diagnóstico, del tratamiento y del manejo de muchas formas de cáncer. El drenaje del líquido de derrame proporciona un medio para obtener una muestra del líquido de derrame de un sujeto para su análisis.
Virus del herpes simple oncolítico
Un virus oncolítico es un virus que lisará las células cancerosas (oncólisis), preferiblemente de manera preferencial o selectiva. Los virus que se replican selectivamente en células en división sobre células que no se dividen a menudo son oncolíticos. Los virus oncolíticos son bien conocidos en la técnica y se revisan en Molecular Therapy vol. 18 N.° 2 de febrero de 2010 págs. 233-234.
El genoma del virus del herpes simple (VHS) comprende dos segmentos unidos covalentemente, designados largo (L) y corto (S, por su sigla en inglés). Cada segmento contiene una secuencia única flanqueada por un par de secuencias repetidas terminales invertidas. La repetición larga (RL o Rl) y la repetición corta (RS o Rs) son distintas.
El gen ICP34.5 del HSV (también llamado y34.5), que ha sido ampliamente estudiado, se ha secuenciado en las cepas F y syn17+ del HSV-1 y en la cepa HG52 del HSV-2. Una copia del gen ICP34.5 se encuentra dentro de cada una de las regiones de repetición RL. Se sabe que los mutantes que inactivan una o ambas copias del gen ICP34.5 carecen de neurovirulencia, es decir, son avirulentos/no neurovirulentos (la no neurovirulencia se define por la capacidad de introducir un título alto de virus (aproximadamente 106 unidades formadoras de placa (ufp)) a un animal o paciente sin causar una encefalitis letal de tal manera que la DL50 en animales, p. ej., ratones o pacientes humanos está en el intervalo aproximado de >106 ufp) y son oncolíticos.
El virus oncolítico del herpes simple (oHSV) preferido es el virus competente en replicación, que es competente en replicación al menos en las células tumorales/cancerosas diana.
El HSV oncolítico que se puede usar en la presente invención incluye el HSV en el que uno o ambos genes y34.5 (también llamado ICP34.5) están modificados (p. ej., por mutación que puede ser una deleción, inserción, adición o sustitución) de manera que el gen respectivo sea incapaz de expresar, p. ej., codificar, una proteína funcional ICP34.5. preferiblemente, en HSV de acuerdo con la descripción ambas copias del gen y34.5 están modificadas de manera que el HSV modificado no es capaz de expresar, p. ej., producir, una proteína funcional ICP34.5.
En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico puede ser un mutante nulo de ICP34.5 en el que todas las copias del gen ICP34.5 presentes en el genoma del virus del herpes simple (normalmente hay dos copias) se alteran de manera que el virus del herpes simple es incapaz de producir un producto génico funcional de ICP34.5. En otras realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico puede carecer de al menos un gen ICP34.5 expresable. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple puede carecer de un solo gen ICP34.5 expresable. En otras realizaciones, el virus del herpes simple puede carecer de ambos genes ICP34..5 expresables. En otras realizaciones más, cada gen ICP34.5 presente en el virus del herpes simple puede no ser expresable. La falta de un gen expresable ICP34.5 significa, por ejemplo, que la expresión del gen ICP34.5 no da como resultado un producto génico de ICP34.5 funcional.
El virus del herpes simple oncolítico puede provenir de cualquier HSV, incluida cualquier cepa de laboratorio o aislado clínico (cepa no de laboratorio) del HSV. En algunas realizaciones preferidas, e1HSV es un mutante de1HSV-1 o del HSV-2. Como alternativa, el HSV puede ser un recombinante intertípico del HSV-1 y de1HSV-2. El mutante puede ser de una de las cepas de laboratorio del HSV-1 cepa 17, cepa F de del HSV-1 o cepa HG52 de1HSV-2. El mutante puede ser de la cepa no de laboratorio JS-1. preferiblemente, el mutante es un mutante de la cepa 17 de1HSV-1. El virus del herpes simple puede ser uno de los mutantes 1716 de la cepa 17 de1HSV-1, mutante R3616 de la cepa F del HSV-1, mutante G207 de la cepa F del HSV-1, mutante NV1020 del HSV-1, o un mutante adicional del mismo en el que el genoma del HSV contiene mutaciones adicionales y/o una o más secuencias de nucleótidos heterólogas. Las mutaciones adicionales pueden incluir mutaciones incapacitantes, lo que puede afectar la virulencia del virus o su capacidad de replicarse. Por ejemplo, se pueden producir mutaciones en cualquiera o más de ICP6, ICP0, ICP4, ICP27. preferiblemente, una mutación en uno de estos genes (opcionalmente en ambas copias del gen cuando sea apropiado) lleva a una incapacidad (o reducción de la capacidad) del HSV para expresar el correspondiente polipéptido funcional. A modo de ejemplo, la mutación adicional del genoma del HSV se puede lograr mediante adición, deleción, inserción o sustitución de nucleótidos. En algunas realizaciones, el genoma de1HSV no tiene una mutación en 1CP6 o en ICP0, ICP4, 1CP27.
Se conocen en la técnica varios virus oncolíticos del herpes simple. Los ejemplos incluyen HSV1716, R3616 (p. ej., véase Chou y Roizman, Proc. Natl. Acad. Sci. Vol.89, págs.3266-3270, abril de 1992), g 207 (Toda et al, Human Gene Therapy 9:2177-2185, 10 de octubre de 1995), NV1020 (Geevarghese et al, Human Gene Therapy, septiembre de 2010; 21 (9):1119-28), RE6 (Thompson et al, Virology 131,. 171-179 (1983)), y Oncovex™ (Simpson et al, Cancer Res 2008; 66:(9) 4835-4842 1 de mayo de 2006; Liu et al, Gene Therapy (2003): 10, 292-303), dlsptk, hrR3,R4009, MGH-1, MGH-2, G47A, Myb34.5, DF3y34.5, HF10, NV1042, RAMBO, rQNestin34.5, R5111, R-LM113, CEAICP4, CEAy34.5, DF3y34.5, KeM34.5 (Manservigt et al, The Open Virology Journal 2010; 4:123-156), rRp450, M032 (Campadelli-Fiume et al, Rev Med. Virol 2011; 21:213-226), Bacol (Fuetal, Int. J. Cancer 2011; 129(6):1503-10) y M032 y C134 (Cassady et al. The Open Virology Journal 2010; 4:103-108).
En algunas realizaciones preferidas, el virus del herpes simple es el mutante 1716 de la cepa 17 de1HSV-1 (HSV1716). HSV 1716 es un HSV oncolítico, no neurovirulento y se describe en el documento EP 0571410, WO 92/13943, Brown et al (Journal of General Virology (1994), 75, 2367-2377) y MacLean et al (Journal of General Virology (1991), 72, 631 -639). HSV 1716 ha sido depositado el 28 de enero de 1992 en la Colección Europea de Cultivos de Células Animales, Laboratorios de investigación y producción de vacunas, Servicios de laboratorio de salud pública, Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP40JG, Reino Unido con el número de referencia V92012803 de acuerdo con las disposiciones del Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos para los Fines del Procedimiento de Patentes (en el presente documento denominado "Tratado de Budapest").
En algunas realizaciones, el virus del herpes simple es un mutante de la cepa 17 de1HSV-1 modificado de manera que ambos genes ICP34.5 no expresan un producto génico funcional, p. ej., por mutación (p. ej., inserción, deleción, adición, sustitución) del gen ICP34.5, pero por lo demás se asemeja o se parece sustancialmente al genoma de la cepa 17+ del virus originario de tipo silvestre HSV-1. Es decir, el virus puede ser una variante de1HSV1716, que tiene un genoma mutado para inactivar ambas copias del gen ICP34.5 de la cepa 17+ de1HSV-1 pero no alterado de otra manera para insertar o delecionar/modificar otras secuencias codificantes de proteínas.
En algunas realizaciones, el genoma de un virus del herpes simple oncolítico de acuerdo con la presente descripción se puede modificar adicionalmente para que contenga ácido nucleico que codifique al menos una copia de un polipéptido que es heterólogo del virus (es decir, que normalmente no se encuentra en virus de tipo silvestre) de tal manera que el polipéptido se puede expresar a partir del ácido nucleico. Como tal, el virus oncolítico también puede ser un vector de expresión a partir del cual se puede expresar el polipéptido. En los documentos WO2005/049846 y WO2005/049845 se describen ejemplos de tales virus.
Para efectuar la expresión del polipéptido, el ácido nucleico que codifica el polipéptido está preferiblemente unido operativamente a una secuencia reguladora, p. ej., un promotor, capaz de efectuar la transcripción del ácido nucleico que codifica el polipéptido. Una secuencia reguladora (p. ej., un promotor) que está operativamente unida a una secuencia de nucleótidos se puede localizar adyacente a esa secuencia o muy próxima de modo que la secuencia reguladora pueda efectuar y/o controlar la expresión de un producto de la secuencia de nucleótidos. Por tanto, el producto codificado de la secuencia de nucleótidos se puede expresar a partir de esa secuencia reguladora.
En algunas realizaciones preferidas, el virus oncolítico del herpes simple no se modifica para contener ácido nucleico que codifica al menos una copia de un polipéptido (u otro producto codificado por ácido nucleico) que es heterólogo del virus. Es decir, el virus no es un vector de expresión a partir del cual se pueda expresar un polipéptido heterólogo u otro producto codificado por ácido nucleico. Dichos oHSV no son adecuados ni útiles en los métodos de terapia génica y el método de tratamiento médico para el que se emplean puede ser opcionalmente uno que no implique terapia génica.
En algunas realizaciones, el genoma de un herpes simple oncolítico. El virus de acuerdo con la presente descripción no codifica (o no se modifica más para contener ácido nucleico que codifica) una citocina o quimiocina, p. ej., una citocina o quimiocina de mamífero o humano.
Por ejemplo, el genoma de un virus del herpes simple oncolítico según la presente descripción no codifica una interleucina, p. ej., IL-2 y/o IL-12, un interferón, p. ej., IFN-y, un factor de necrosis tumoral, un factor estimulante de colonias (p. ej., GM-CSF, G-CSF), un inmunomodulador, un miembro de la familia CC, p. ej., CCL5, un miembro de la familia CXC o un miembro de la familia CXC.
En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico tiene un gen ICP0 intacto, capaz de expresar ICP0 funcional. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico tiene un gen ICP27 intacto, capaz de expresar ICP27 funcional. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico tiene un gen vhs intacto, capaz de expresar vhs funcional.
En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico tiene un gen ICP47 intacto, capaz de expresar ICP47 funcional. En algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico tiene un gen ICP6 intacto, capaz de expresar ICP6 funcional.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no codifica ni expresa (factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos) GMCSF.
Opcionalmente, en algunas realizaciones, el virus del herpes simple oncolítico no es un virus del herpes simple que carece de genes ICP34.5 funcionales y carece de un gen ICP47 funcional y comprende un gen que codifica el GM-CSF humano.
En algunas realizaciones opcionales, el virus del herpes simple oncolítico no es Talimogene laherparepvec, HSV-1 [cepa JS1] ICP34.5-/ICP47-/hGM-CSF también conocido como OncoVEX GM-CSF (Lui etal., Gene Therapy, 10:292-303, 2003; Patente de Estados Unidos N.° 7.223.593 y Patente de Estados Unidos N.° 7.537.924)]. En talimogene laherparepvec, los genes víricos del HSV-1 que codifican ICP34.5 están funcionalmente delecionados, el ICP47 está funcionalmente delecionado, la secuencia codificante del GM-CSF humano se inserta en el genoma vírico de manera que reemplaza casi todo el gen ICP34.5 y el gen de la timidina quinasa (TK) de1HSV permanece intacto.
En algunas realizaciones opcionales, el virus del herpes simple no es un virus del herpes simple que carece solo de una de las dos copias funcionales del gen Y134.5. Por ejemplo, en algunas realizaciones opcionales, el virus del herpes simple no es NV1020.
Los virus oncolíticos del herpes simple se pueden formular como medicamentos y composiciones farmacéuticas para uso clínico y en tales formulaciones se pueden combinar con un vehículo farmacéuticamente aceptable, diluyente o adyuvante. La composición se puede formular para la vía de administración tópica, parenteral, sistémica, intracavitaria, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intratecal, intraocular, intratumoral, subcutánea, oral o transdérmica que pueden incluir inyección. Las formulaciones adecuadas pueden comprender el virus en un medio estéril o isotónico. Los medicamentos y las composiciones farmacéuticas se pueden formular en forma líquida (incluido el gel) o sólida (p. ej., comprimido). Las formulaciones fluidas se pueden formular para la administración mediante inyección o mediante catéter en una región seleccionada del cuerpo humano o animal.
La administración es preferiblemente en una "cantidad terapéuticamente eficaz", esto es suficiente para demostrar beneficio al individuo. La cantidad real administrada y la velocidad y el trascurso de la administración, dependerán de la naturaleza y de la gravedad de la enfermedad que se esté tratando. La prescripción del tratamiento, p. ej., las decisiones sobre dosis, etc, es responsabilidad de los médicos generales y de otros médicos, y normalmente tienen en cuenta el trastorno que se va a tratar, la condición de un paciente concreto, el sitio de administración, el método de administración y otros factores conocidos por los médicos. Se pueden encontrar ejemplos de las técnicas y protocolos mencionados anteriormente en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición, 2000, pub. Lippincott, Williams y Wilkins.
Se pueden usar terapias dirigidas para administrar el virus oncolítico a ciertos tipos de células, p. ej., mediante el uso de sistemas de direccionamiento tales como anticuerpos o ligandos específicos de células. El direccionamiento puede ser deseable por una variedad de razones; por ejemplo, si el virus es inaceptablemente tóxico en dosis altas, o si de otro modo requeriría una dosis demasiado alta, o si de otro modo no podría entrar en las células diana.
El HVS capaz de dirigirse a células y tejidos se describe en (PCT/GB2003/000603; WO 03/068809).
Un virus oncolítico se puede administrar solo o en combinación con otros tratamientos, ya sea simultánea o secuencialmente dependiendo de la afección a tratar. Dichos otros tratamientos pueden incluir quimioterapia (incluido el tratamiento sistémico con un agente quimioterapéutico o la terapia dirigida con agentes basados en moléculas pequeñas o biológicas (p. ej., anticuerpos) que se dirigen a vías clave en el desarrollo, el mantenimiento o la progresión de tumores) o radioterapia proporcionada al sujeto como un tratamiento habitual para el tratamiento del cáncer.
Además de la acción directa del virus del herpes simple oncolítico (oHSV) sobre los tumores, existe una creciente evidencia de que la respuesta inmunitaria del hospedador juega un papel importante en el establecimiento de la eficacia de la respuesta antitumoral a través de efectores inmunitarios innatos, respuestas inmunitarias antivíricas adaptativas y respuestas inmunitarias antitumorales adaptativas (p. ej., véase Prestwich et al., Oncolytic viruses: a novel form of immunotherapy. Expert Rev Anticancer Ther. octubre de 2008; 8(10); 1581-1588).
Varios estudios han demostrado que el oHSV es capaz de inducir una respuesta inmunitaria antitumoral. Esto se puede manifestar como una reducción del crecimiento tumoral en lesiones tratadas con oHSV y en lesiones no tratadas en el mismo animal, requiriendo la eficacia del OHSV una respuesta inmunitaria intacta, inducción de la respuesta de citocinas antitumorales, reversión de la disfunción inmunitaria tumoral y facilitación de la presentación del antígeno tumoral. La inducción de una respuesta inmunitaria antitumoral puede reducir el establecimiento de metástasis o contribuir a su eliminación y proteger de la reaparición del tumor.
Por ejemplo, en Benencia et al., ((2008) Herpes virus oncolytic therapy reverses tumor immune dysfunction and facilitates tumor antigen presentation. Cancer Biol.Ther. 7, 1194-1205) se documentó la reducción del crecimiento en lesiones tratadas y no tratadas. En Miller y Fraser ((2003) Requirement of an integrated immune response for successful neuroattenuated HSV-1 therapy in an intracranial metastatic melanoma model. Mol. Ther. 7 (6): 741-747) la eficacia de HSV176 requirió una respuesta inmunitaria intacta que fue mediada por una respuesta de linfocitos T proliferativos específicos de tumor.
Proteínas e inhibidores del punto de control inmunitario
La expresión "inhibidor del punto de control inmunitario" se refiere a moléculas que reducen, inhibe, interferir con o modulan total o parcialmente una o más proteínas del punto de control inmunitario. Un inhibidor puede inhibir o bloquear la interacción de una proteína del punto de control inmunitario con uno de sus ligandos o receptores.
Las proteínas del punto de control inmunitario regulan negativamente la activación o función de los linfocitos T. Se conocen numerosas proteínas del punto de control inmunitario, tales como CTLA-4 (proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos) y sus ligandos CD80 y CD86; y PD-1 (Muerte programada 1) con sus ligandos PD-L1 y PD-L2 (Pardoll, Nature Reviews Cancer 12: 252-264, 2012), TIM-3 (dominio de inmunoglobulina de linfocitos T y dominio de mucina 3), LAG-3 (Gen-3 de activación de linfocitos), BTLA (CD272 o atenuador de linfocitos B y T), KIR (receptor similar a la inmunoglobulina de células citolíticas), VISTA (supresor de inmunoglobulina de dominio V de la activación de linfocitos T) y A2aR (receptor de adenosina A2A). Estas proteínas son responsables de regular negativamente las respuestas de los linfocitos T. Las proteínas del punto de control inmunitario regulan y mantienen la autotolerancia y la duración y amplitud de las respuestas inmunitarias fisiológicas. Los inhibidores del punto de control inmunitario incluyen anticuerpos e inhibidores de moléculas pequeñas.
El antígeno 4 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) es una proteína de punto de control inmunitario que regula negativamente las vías de activación de los linfocitos T (Fong et al., Cancer Res. 69(2):609-5615, 2009; Weber Cancer Immunol. Immunother, 58:823-830, 2009). CTLA-4 es un regulador negativo de la activación de los linfocitos T. Se ha demostrado que el bloqueo de CTLA-4 aumenta la activación y proliferación de linfocitos T. Los inhibidores de CTLA-4 incluyen anticuerpos anti-CTLA-4. Los anticuerpos anti-CTLA-4 se unen a CTLA-4 y bloquean la interacción de CTLA-4 con sus ligandos CD80/CD86 expresados en células presentadoras de antígeno y, por lo tanto, bloquean la regulación negativa de las respuestas inmunitarias provocadas por la interacción de estas moléculas. Los ejemplos de anticuerpos anti-CTLA-4 se describen en las patentes de EE. Uu . N.°: 5.811.097; 5.811.097; 5.855.887; 6.051.227; 6.207.157; 6.682.736; 6.984.720; y 7.605.238.
Los anticuerpos anti-CDLA-4 incluyen tremelimumab, (ticilimumab, CP-675,206), ipilimumab (también conocido como IODI, MDX-DOIO; comercializado con el nombre Yervoy™ y) un anticuerpo IgG monoclonal completamente humano que se une a CTLA-4 aprobado para el tratamiento del melanoma no extirpable o metastásico.
Otra proteína del punto de control inmunitario es la muerte celular programada 1 (PD-1). PD-1, también llamada CD279, es una proteína de membrana de tipo I codificada en humanos por el gen PDCD1. Tiene dos ligandos, PD-L1 y PD-L2. La vía de PD-1 es un mediador inmunoinhibidor clave del agotamiento de los linfocitos T. El bloqueo de esta vía puede llevar a la activación de los linfocitos T, la expansión y funciones efectoras mejoradas. Como tal, PD-1 regula negativamente las respuestas de los linfocitos T. PD-1 se ha identificado como un marcador de linfocitos T agotados en patologías crónicas, y se ha demostrado que el bloqueo de las interacciones PD-1 :PD-1 L restaura parcialmente la función de los linfocitos T. (Sakuishi et al., JEMVol. 207, 27 de septiembre de 2010, págs 2187-2194). PD-1 limita la actividad de los linfocitos T en los tejidos periféricos en el momento de una respuesta inflamatoria a la infección y limita la autoinmunidad. El bloque in vitro de PD-1 mejora la proliferación de linfocitos T y la producción de citocinas en respuesta a una exposición por dianas de antígenos específicos o por células alogénicas en reacciones de linfocitos mixtos. Se demostró una fuerte correlación entre la expresión y la respuesta de PD-1 con el bloqueo de PD-1 (Pardoll, Nature Reviews Cancer, 12: 252-264, 2012). El bloqueo de PD-1 se puede lograr mediante una variedad de mecanismos que incluyen anticuerpos que se unen a PD-1 o su ligando, PD-L1, o receptores de señuelo de PD-1 solubles (p. ej., sPD-1, véase Pan et al., Oncology Letters 5: 90-96, 2013).. Se describen ejemplos de bloqueadores de PD-1 y PD-L1 en las Patentes de Estados Unidos N27.488.802; 7.943.743; 8.008.449; 8.168.757; 8.217.149, y en las solicitudes de patente publicadas de PCT n.2: WO03042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400 y WO2011161699.
Los bloqueadores de PD-1 incluyen anticuerpos anti-PD-L1 y agentes de unión proteicos. Nivolumab (BMS-936558) es un anticuerpo anti-PD-1 que fue aprobado para el tratamiento del melanoma en Japón en julio de 2014. Es un anticuerpo IgG4 completamente humano que se une y bloquea la activación de PD-1 por sus ligandos PD-L1 y PD-L2. Otros anticuerpos anti-PD-L1 incluyen lambrolizumab (pembrolizumab; MK-3475 o SCH 900475), un anticuerpo IgG4 monoclonal humanizado contra PD-1; CT-011 un anticuerpo humanizado que se une a PD-1. AMP-224 es una proteína de fusión de B7-DC; una porción Fc de anticuerpo; BMS-936559 (MDX-1105-01) para bloqueo de PD-L1 (B7-HI). Otros anticuerpos anti-PD-1 se describen en los documentos WO 2010/077634, Wo 2006/121168, WO2008/156712 y WO2012/135408. AUNP-12 (Aurigene) es un péptido antagonista ramificado de 29 aminoácidos de la interacción de PD-1 con PD-L1 o PD-L2 y se ha demostrado que inhibe el crecimiento tumoral y la metástasis en modelos preclínicos de cáncer.
La mucina de inmunoglobulina de linfocitos T 3 (TIM-3) es un regulador inmunitario identificado como que regula positivamente o agota los linfocitos T CD8+ (Sakuishi etal., JEM Vol. 207, 27 de septiembre de 2010, págs. 2187-2194 y Fourcade et al., 2010, J. Exp. Med. 207:2175-86). TIM-3 se identificó originalmente como expresado selectivamente en linfocitos Th1 y Tc1 secretores de IFN-y. La interacción de TIM-3 con su ligando, galectina-9, desencadena la muerte celular en linfocitos T TIM-3+. Los anticuerpos anti-TIM-3 se describen en Ngiow et al (Cancer Res. 15 de mayo de 2011 ;71 (10):3540-51), y en el documento US 8.552.156. Otros inhibidores del punto de control inmunitario incluyen inhibidores del gen 3 de activación de linfocitos (LAG-3), tal como IMP321, una proteína de fusión de Ig soluble (Brignone et al., 2007, J. Immunol.179:4202-4211). Otros inhibidores del punto de control inmunitario incluyen inhibidores B7, tales como inhibidores B7-H3 y B7-H4. En particular, el anticuerpo anti-B7-H3 MGA271 (Loo et al., 2012, 5 Clin. Cancer Res. 15 de julio (18) 3834).
La referencia a un "anticuerpo" incluye un fragmento o derivado del mismo, o un anticuerpo sintético o un fragmento de anticuerpo sintético. Los anticuerpos se pueden proporcionar en forma aislada o se pueden formular como un medicamento o una composición farmacéutica, p. ej. combinado con un adyuvante farmacéuticamente aceptable, vehículo, diluyente o excipiente.
En vista de las técnicas actuales en relación con la tecnología de anticuerpos monoclonales, se pueden preparar anticuerpos para la mayoría de los antígenos. La porción de unión al antígeno puede ser parte de un anticuerpo (por ejemplo, un fragmento Fab) o un fragmento de anticuerpo sintético (p. ej., un fragmento Fv de cadena simple [ScFv]). Se pueden preparar anticuerpos monoclonales adecuados para antígenos seleccionados mediante técnicas conocidas, por ejemplo, las descritas en "Monoclonal Antibodies: A manual of techniques ", H Zola (CRC Press, 1988) y en "Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications ", J G R Hurrell (CRC Press, 1982). Los anticuerpos quiméricos son discutidos por Neuberger et al (1988, 8° Simposio Internacional de Biotecnología, Parte 2, 792-799).
Los anticuerpos monoclonales (mAb) son útiles en los métodos de la invención y son una población homogénea de anticuerpos que se dirigen específicamente a un solo epítopo en un antígeno.
Los anticuerpos policlonales también pueden ser útiles en los métodos de la invención. Se prefieren los anticuerpos policlonales monoespecíficos. Se pueden preparar anticuerpos policlonales adecuados usando métodos bien conocidos en la técnica.
También se pueden proporcionar fragmentos de anticuerpos, tales como fragmentos Fab y Fab2, así como anticuerpos y fragmentos de anticuerpos modificados genéticamente. Los dominios variables de cadena pesada (Vh) y variables de cadena ligera (Vl) del anticuerpo están implicados en el reconocimiento de antígenos, un hecho reconocido por primera vez por los primeros experimentos de digestión de proteasas. Se descubrió una confirmación adicional mediante la "humanización" de los anticuerpos de roedores. Los dominios variables de origen roedor se pueden fusionar con dominios constantes de origen humano de modo que el anticuerpo resultante conserve la especificidad antigénica del anticuerpo originario de roedor (Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sd. EE.UU. 81,6851 -6855).
Que la especificidad antigénica es conferida por dominios variables y es independiente de los dominios constantes se sabe a partir de experimentos que involucran la expresión bacteriana de fragmentos de anticuerpos, conteniendo todos uno o más dominios variables. Estas moléculas incluyen moléculas de tipo Fab (Better et al (1988) Science 240, 1041); Moléculas de Fv (Skerra et al (1988) Science 240, 1038); moléculas de Fv de cadena simple (ScFv) en donde los dominios Vh y Vl asociados se enlazan mediante un oligopéptido flexible (Bird et al (1988) Science 242, 423; Huston et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sd. EE.UU. 85, 5879) y anticuerpos de dominio único (dAbs) que comprenden dominios V aislados (Ward et al (1989) Nature 341, 544). Una revisión general de las técnicas implicadas en la síntesis de fragmentos de anticuerpos que conservan sus sitios de unión específicos se encuentra en Winter y Milstein (1991) Nature 349, 293-299.
Por "moléculas de ScFv" los presentes inventores se refieren a moléculas en donde los dominios de miembros de Vh y Vl están enlazados de forma covalente, p. ej., por un oligopéptido flexible.
Los fragmentos de anticuerpos Fab, Fv, ScFv y dAb se pueden expresar y secretar a partir de E. coli, permitiendo así la fácil producción de grandes cantidades de dichos fragmentos.
Los anticuerpos completos y los fragmentos F(ab')2 son "bivalentes". Por "bivalente", los presentes inventores quieren decir que dichos anticuerpos y fragmentos F(ab')2 tienen dos sitios de combinación de antígenos. Por el contrario, los fragmentos Fab, Fv, ScFv y dAb son monovalentes, teniendo solo un sitio de combinación de antígenos. Los anticuerpos sintéticos que se unen a una proteína del punto de control inmunitario también se pueden preparar usando tecnología de presentación en fagos como es bien conocido en la técnica.
Administración del inhibidor del punto de control inmunitario
La administración del inhibidor del punto de control inmunitario puede implicar la administración a intervalos regulares, p. ej., semanalmente, quincenalmente, o una vez cada tres o cuatro semanas. Por ejemplo, las dosis se pueden administrar a intervalos regulares definidos durante un período de al menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, semanas o 1,2, 3, 4, 5 o 6 meses.
Como tal, se pueden administrar múltiples dosis de inhibidor del punto de control inmunitario. Por ejemplo, se pueden administrar 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más dosis del inhibidor del punto de control inmunitario a un sujeto como parte de un curso de tratamiento. En algunas realizaciones preferidas 1 o 2 dosis, opcionalmente 3 o más dosis, de inhibidor del punto de control inmunitario se administran al sujeto, preferiblemente a intervalos regulares (p. ej., semanalmente, quincenalmente, o una vez cada tres o cuatro semanas). Cada dosis se administra preferiblemente en un solo día, p. ej., durante un período de 1,2, 3, 4, 5 o 6 horas y, opcionalmente, al mismo tiempo que una dosis de virus del herpes simple oncolítico.
Las dosis del inhibidor del punto de control inmunitario pueden estar separadas por un intervalo de tiempo predeterminado, que se puede seleccionar entre 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o 31 días, o 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses. A modo de ejemplo, las dosis se pueden administrar una vez cada 7, 14, 21 o 28 días (más o menos 3, 2 o 1 días). La dosis del inhibidor del punto de control inmunitario administrada en cada punto de dosificación puede ser la misma, pero esto no es esencial. Por ejemplo, puede ser apropiado administrar una primera dosis más alta en el primer, segundo y/o tercer punto de dosificación.
La administración del inhibidor del punto de control inmunitario puede ser de uno o más ciclos de tratamiento, p. ej., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más ciclos de tratamiento. Un sujeto que recibe múltiples ciclos de tratamiento puede recibir ciclos de tratamiento posteriores consecutivamente, sin una interrupción del tratamiento, o puede separar todos los ciclos de tratamiento o algunos seleccionados mediante una interrupción del tratamiento, p. ej., una interrupción de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 días o aproximadamente 1,2, 3 o 4 semanas.
En algunas realizaciones, un ciclo de tratamiento puede comprender, o consistir en, 1 o 2 dosis del inhibidor del punto de control inmunitario administradas por período de aproximadamente 3 o aproximadamente 4 semanas. En algunas realizaciones, un ciclo de tratamiento puede comprender, o consistir en, una dosis del inhibidor del punto de control inmunitario administrada por período de tres semanas. Las dosis pueden estar separadas por 21 ± 3, 21 ± 2 o 21 ± 1 días. Por ejemplo, las dosis se pueden administrar los días 1, 22, 43, etc.
Se puede administrar un ciclo de tratamiento con un inhibidor del punto de control inmunitario junto con un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico para proporcionar un tratamiento combinado. No es necesario que los ciclos de tratamiento comiencen el mismo día, aunque pueden. Por ejemplo, un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico puede comenzar el día 1 y un ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario puede comenzar el día 8, o en cualquiera de los días 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14. Como tal, un ciclo de tratamiento del inhibidor del punto de control inmunitario puede comenzar después de un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico (p. ej., aproximadamente una semana después) o antes de un ciclo de tratamiento del virus del herpes simple oncolítico (p. ej., aproximadamente una semana antes). preferiblemente, ambos ciclos de tratamiento tendrán una duración que haga que se superpongan, p. ej., en al menos un día o más preferiblemente en aproximadamente una o aproximadamente dos semanas.
Los sujetos pueden recibir la misma dosis del inhibidor del punto de control inmunitario en cada administración dentro de un ciclo de tratamiento dado, p. ej., una dosis de 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg o 400 mg. En algunas realizaciones, los primeros 1,2 o 3 ciclos de tratamiento pueden comprender la administración de una cantidad de dosis menor en cada administración, p. ej., 150 mg, y los ciclos de tratamiento posteriores pueden comprender la administración de una cantidad de dosis mayor en cada administración, p. ej., 200 mg.
La administración del inhibidor del punto de control inmunitario puede ser por infusión a la sangre (intravenosa o intraarterial) y los sujetos acudirán preferiblemente a la clínica en los días de administración pautados para la administración del inhibidor del punto de control inmunitario. La administración del inhibidor del punto de control inmunitario puede continuar hasta que se desarrolle una toxicidad grave o se retire el consentimiento.
En general, la administración es preferiblemente en una "cantidad eficaz", esto es suficiente para inducir un efecto de tratamiento en el individuo. La cantidad real administrada y la velocidad y el trascurso de la administración, dependerán de la naturaleza y de la gravedad de la enfermedad que se esté tratando. La prescripción del tratamiento, p. ej., las decisiones sobre dosis, etc, es responsabilidad de los médicos generales y de otros médicos, y normalmente tienen en cuenta el trastorno que se va a tratar, la condición de un paciente concreto, el sitio de administración, el método de administración y otros factores conocidos por los médicos. Se pueden encontrar ejemplos de las técnicas y protocolos mencionados anteriormente en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición, 2000, pub. Lippincott, Williams y Wilkins.
Cáncer
Un cáncer puede ser cualquier proliferación celular no deseada (o cualquier enfermedad que se manifieste por una proliferación celular no deseada), neoplasia o tumor o aumento del riesgo o predisposición a la proliferación celular no deseada, neoplasia o tumor. El cáncer puede ser benigno o maligno y puede ser primario o secundario (metastásico). Una neoplasia o tumor puede ser cualquier crecimiento o proliferación anómala de células y se puede localizar en cualquier tejido. Los ejemplos de tejidos incluyen la glándula suprarrenal, la médula suprarrenal, el ano, el apéndice, la vejiga, la sangre, el hueso, la médula ósea, el cerebro, la mama, el ciego, el sistema nervioso central (incluido o excluido el cerebro), el cerebelo, el cuello uterino, el colon, el duodeno, el endometrio, las células epiteliales (p. ej., epitelio renal), la vesícula biliar, el esófago, las células de la glía, el corazón, el íleon, el yeyuno, el riñón, la glándula lagrimal, la laringe, el hígado, el pulmón, la linfa, el ganglio linfático, el linfoblasto, el maxilar superior, el mediastino, el mesenterio, el miometrio, la nasofaringe, el epiplón, la cavidad oral, el ovario, el páncreas, la glándula parótida, el sistema nervioso periférico, el peritoneo, la pleura, la próstata, la glándula salival, el colon sigmoide, la piel, el intestino delgado, los tejidos blandos, el bazo, el estómago, el testículo, el timo, la glándula tiroides, la lengua, la amígdala, la tráquea, el útero, la vulva, los glóbulos blancos de la sangre.
Los tumores a tratar pueden ser tumores del sistema nervioso o no del sistema nervioso. Los tumores del sistema nervioso se pueden originar en el sistema nervioso central o periférico, p. ej., glioma, meduloblastoma, meningioma, neurofibroma, ependimoma, Schwannoma, neurofibrosarcoma, astrocitoma y oligodendroglioma. Los cánceres/tumores no relacionados con el sistema nervioso se pueden originar en cualquier otro tejido no nervioso, los ejemplos incluyen melanoma, mesotelioma, linfoma, mieloma, leucemia, linfoma no de Hodgkin (NHL), linfoma de Hodgkin, leucemia mielógena crónica (LMC), leucemia mieloide aguda (LMA), síndrome mielodisplásico (SMD), linfoma cutáneo de células T (LCCT), leucemia linfocítica crónica (LLC), hepatoma, carcinoma epidermoide, carcinoma de próstata, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, carcinoma tímico, NSCLC, cáncer hematológico y sarcoma.
En el contexto del tratamiento de un cáncer metastásico, el tratamiento puede ser de cánceres o tumores de un tipo celular determinado. El tratamiento puede implicar provocar una respuesta inmunitaria antitumoral sistémica de Th1 en el sujeto, que puede estar en riesgo de desarrollar cánceres metastásicos únicos o múltiples o tumores del tipo celular dado. Por lo tanto, la administración del virus del herpes simple oncolítico puede inducir una respuesta inmunitaria de Th1 que es específica para el tipo de célula tumoral y que destruye las células del tumor inoculado y de los tumores no inoculados.
En algunas realizaciones, el cáncer puede ser un tumor sólido. Los tumores sólidos pueden, por ejemplo, estar en la vejiga, el hueso, la mama, el ojo, el estómago, la cabeza y el cuello, la célula germinal, el riñón, el hígado, el pulmón, el tejido nervioso, el ovario, el páncreas, la próstata, la piel, los tejidos blandos, la glándula suprarrenal, la nasofaringe, la tiroides, la retina y el útero. Los tumores sólidos pueden incluir melanoma, rabdomiosarcoma, sarcoma de Ewing y neuroblastoma.
El cáncer puede ser un tumor sólido pediátrico, es decir, tumor sólido en un niño, por ejemplo osteosarcoma, condroblastoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, tumor maligno de células germinales, tumor de Wilms, tumor rabdoide maligno, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, neuroblastoma, melanoma, carcinoma de adrenocorticoides, carcinoma nasofaríngeo, carcinoma de tiroides, retinoblastoma, sarcoma de tejidos blandos, rabdomiosarcoma, tumor desmoide, fibrosarcoma, liposarcoma, histiocitoma fibroso maligno, neurofibrosarcoma.
En algunas realizaciones preferidas, el cáncer puede ser un mesotelioma, p. ej., un mesotelioma pleural maligno.
El cáncer puede estar asociado con un líquido de derrame. Tal asociación puede implicar la producción de líquido de derrame por el tejido canceroso, p. ej., por células cancerosas o por células normales cercanas o contenidas en el tejido canceroso, o puede implicar la sobreproducción de líquido de derrame por otros tejidos (p. ej., el sistema linfático) como respuesta directa o indirecta a la presencia del cáncer en el sujeto.
El cáncer se puede caracterizar por la acumulación de líquido de derrame en uno o más lugares del cuerpo del sujeto. Tales ubicaciones pueden incluir una o más cavidades corporales o espacios de tejido. Las cavidades corporales (o cavidades serosas) pueden estar formadas por una membrana serosa que rodea un órgano o tejido y forma un saco en el que se puede acumular líquido.
Por ejemplo, el líquido de derrame se puede acumular en una o cada cavidad pleural (derecha o izquierda) (el espacio entre la pleura visceral y parietal). En otro ejemplo, el líquido de derrame se puede acumular en la cavidad peritoneal (el espacio entre el peritoneo parietal y el peritoneo visceral). En otro ejemplo, el líquido se puede acumular en la cavidad pericárdica que rodea al corazón (formada por el pericardio parietal y visceral). En otro ejemplo, se puede acumular líquido en el perimetrio que rodea el útero.
Por tanto, en algunas realizaciones, el cáncer es uno en el que el derrame pleural, el derrame peritoneal (ascitis), el derrame pericárdico o el derrame perimetrial tienen lugar.
Todos los tipos de cáncer pueden estar asociados con la producción de líquido de derrame, en parte porque todos los tipos de cáncer pueden hacer metástasis en cualquiera de las cavidades serosas del cuerpo y provocar un derrame maligno (Olopade CA-A Cancer Journal For Clinicians Vol.41, N.° 3 de mayo/junio de 1991). Los cánceres en los que se sabe que se produce la producción de líquido de derrame incluyen cánceres de los siguientes tipos o tejidos: cánceres de pulmón, cánceres pleurales, mesotelioma, mesotelioma pleural maligno, cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC), cáncer de pulmón microcítico (SCLC), cánceres de ovario, carcinoma de ovario, cáncer de útero, cáncer de endometrio, cáncer de corazón, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de estómago, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer linfático (p. ej., linfoma, linfoma no de Hodgkin), sarcoma de tejidos blandos, osteosarcoma, adenocarcinoma, cáncer de parótida (p. ej., adenocarcinoma de parótida), carcinoma tímico, cánceres del tracto reproductivo (incluidos los de cuello uterino, de trompa de Falopio, de endometrio), tracto gastrointestinal o tracto genitourinario, leucemia, la laringe, la próstata, de conducto biliar, hipernefroma, carcinoma del seno piriforme, cáncer de tiroides, melanoma y cánceres de origen primario desconocido (CUP).
El desarrollo de un derrame pleural maligno es una complicación común de las neoplasias malignas avanzadas de muchos tipos de cáncer, especialmente de mama, de pulmón (incluidos NSCLC y SCLC) y carcinoma de ovario (Warren et al. European Journal of Cardio-thoracic Surgery 33 (2008) 89-94). Se sabe, al menos, que los derrames pleurales están asociados con cánceres del siguiente tipo o tejido: el pulmón, la mama, linfoma, el útero, ovárico, del tracto reproductivo femenino (p. ej., cuello uterino, de trompa de Falopio, de endometrio), leucemia, el páncreas, el riñón, el colon, de estómago (gástrico), mesotelioma, sarcoma, la laringe, la próstata, de conducto biliar, hipernefroma, carcinoma del seno piriforme, cáncer de tiroides, linfoma no de Hodgkin, melanoma maligno, tracto reproductor, tracto gastrointestinal, tracto genitourinario, (Warren et al. Ann Thorac Surg 2008;85:1049-55; Warren et al. European Journal of Cardio-thoracic Surgery 33 (2008) 89-94; Schulze et al. Ann Thorac Surg 2001 ;71:1809-12; Olopade Ca -A Cancer Journal For Clinicians Vol.41, N.° 3 de mayo/junio de 1991).
Se sabe que los derrames peritoneales (ascitis) están asociados con los cánceres del siguiente tipo o tejido: ovárico, ovario relacionado con el epitelio, el útero, la mama, el colon, gástrico, pancreático, hepático, el colon, linfoma, mesotelioma y cánceres de origen primario desconocido (CUP) (Olopade CA-A Cancer Journal For Clinicians Vol.41, N.° 3 de mayo/junio de 1991)
Se sabe, al menos, que los derrames pericárdicos están asociados con cánceres del siguiente tipo o tejido: el pulmón, la mama, leucemia, linfoma, sarcoma, melanoma (Olopade CA-A Cancer Journal For Clinicians Vol.41, N.° 3 de mayo/junio de 1991).
Opcionalmente, en algunas realizaciones preferidas, el cáncer no es un melanoma. Opcionalmente, en algunas realizaciones preferidas, el cáncer no es un cáncer que se produzca en la piel. Opcionalmente, en algunas realizaciones preferidas, el cáncer no es un melanoma primario. Opcionalmente, en algunas realizaciones preferidas, el cáncer no es metastásico (melanoma secundario). Opcionalmente, en algunas realizaciones, el cáncer no se encuentra en estadio IlIb al melanoma en estadio IV.
Sujetos
El sujeto a tratar puede ser cualquier animal o humano. El sujeto es preferiblemente mamífero, más preferiblemente humano. El sujeto puede ser un mamífero no humano, pero es más preferiblemente humano. El sujeto puede ser hombre o mujer. El sujeto puede ser un paciente. Un sujeto puede haber sido diagnosticado con cáncer, ser sospechoso de tener cáncer, ser considerado en riesgo de desarrollar un cáncer, o haber sido curado de cáncer y considerado en riesgo de recaída. Preferiblemente, dicho diagnóstico o evaluación la realiza un médico debidamente cualificado. Un sujeto que se ha curado de cáncer puede ser un sujeto en remisión o un sujeto que no tiene cáncer después del tratamiento.
El sujeto puede ser un niño, es decir, un sujeto humano de menos de 18 años, o de menos de 16 años, o de menos de 14 años, o de menos de 12 años. La edad se puede determinar en el momento de la primera dosis con el virus del herpes simple oncolítico.
Los sujetos se pueden seleccionar para el tratamiento como sujetos que no han presentado una respuesta clínica al tratamiento previo con un inhibidor del punto de control inmunitario como monoterapia.
Un sujeto puede ser inmunocompetente o inmunodeprimido.
Otros agentes quimioterapéuticos
Además de tratar un cáncer mediante el uso de un virus del herpes simple oncolítico con o sin un inhibidor del punto de control inmunitario, los sujetos que están siendo tratados también pueden recibir tratamiento con otros agentes quimioterapéuticos. Por ejemplo, otros agentes quimioterapéuticos se pueden seleccionar de:
(i) agentes alquilantes tales como cisplatino, carboplatino, mecloretamina, ciclofosfamida, clorambucilo, ifosfamida;
(ii) antimetabolitos de purina o pirimidina tales como azatiopurina o mercaptopurina;
(iii) alcaloides y terpenoides, tales como los alcaloides de la vinca (p. ej., vincristina, vinblastina, vinorelbina, vindesina), podofilotoxina, etopósido, tenipósido, taxanos tales como paclitaxel (Taxol™), docetaxel;
(iv) inhibidores de la topoisomerasa tales como los inhibidores de la topoisomerasa tipo I camptotecinas irinotecán y topotecán, o los inhibidores de la topoisomerasa tipo II amsacrina, etopósido, fosfato de etopósido, tenipósido; (v) antibióticos antitumorales (p. ej., antibióticos de antracilina) tales como dactinomicina, doxorrubicina (Adriamycin™), epirrubicina, bleomicina, rapamicina;
(vi) agentes basados en anticuerpos, tales como anti-VEGF, anti-TNFa, anti-IL-2, antiGpllb/llla, anti-CD-52, anti-CD20, anti-RSV, anti-HER2/neu (erbB2), receptor anti-TNF, anticuerpos anti-EGFR, anticuerpos monoclonales o fragmentos de anticuerpos, los ejemplos incluyen: cetuximab, panitumumab, infliximab, basiliximab, bevacizumab (Avastin®), abciximab, daclizumab, gemtuzumab, alemtuzumab, rituximab (Mabthera®), palivizumab, trastuzumab, etanercept, adalimumab, nimotuzumab,
(vii) inhibidores de EGFR tales como erlotinib, cetuximab y gefitinib
(viii) agentes anti-angiogénicos tales como bevacizumab (Avastin®).
Vías de administración
Los virus, los inhibidores del punto de control inmunitario, los agentes quimioterapéuticos, los medicamentos y las composiciones farmacéuticas de acuerdo con los aspectos de la presente invención se pueden formular para su administración por varias vías, incluyendo pero sin limitación, parenteral, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intratumoral y oral. Los virus, los inhibidores del punto de control inmunitario, los agentes quimioterapéuticos, los medicamentos y las composiciones farmacéuticas se pueden formular en forma líquida o sólida. Se pueden formular formulaciones fluidas para la administración mediante inyección en una región seleccionada del cuerpo humano o animal.
En algunas realizaciones, el tratamiento con el virus del herpes simple oncolítico puede implicar la administración del virus a una cavidad corporal en la que se acumula líquido de derrame en el sujeto (administración intracavitaria, p. ej., intrapleural o intraperitoneal); por ejemplo, tal como se describe en (Kelly et al. Novel Oncolytic Agent GLV-1h68 Is Effective Against Malignant Pleural Mesothelioma. Human Gene Therapy 19:744-782 (agosto de 2008)). Dicha administración puede implicar la administración a través de un drenaje existente o un catéter insertado en el paciente con el fin de drenar el líquido de derrame. El virus se puede administrar como una formulación líquida. La administración del virus puede seguir al drenaje completo o parcial del líquido de derrame de la cavidad corporal. La administración a la cavidad corporal permite que el virus oncolítico se disperse por toda la cavidad corporal.
En algunas realizaciones, la administración del virus del herpes simple oncolítico no es intratumoral.
La administración del virus del herpes simple oncolítico puede ser por infusión a la sangre, p. ej., infusión intravenosa o intraarterial, y el virus se puede formular para tal administración.
En realizaciones preferidas, el inhibidor del punto de control inmunitario se administra a la sangre, p. ej., por administración intravenosa (infusión intravenosa), y está formulado para tal administración.
El virus del herpes simple se puede formular como una suspensión del virus en solución de Ringer lactato o de Hartmann. Un litro de solución de Ringer lactato contiene típicamente alrededor de 130 mEq de iones de sodio (130 mmol/l), 109 mEq de ion cloruro (109 mmol/l), 28 mEq de lactato (28 mmol/l), 4 mEq de ión potasio (4 mmol/l) y 3 mEq de ión calcio (1,5 mmol/l). Un litro de solución de Hartmann contiene típicamente alrededor de 131 mEq de ion sodio (131 mmol/l), 111 mEq de ion cloruro (111 mmol/l), 29 mEq de lactato (29 mmol/l), 5 mEq de ión potasio (5 mmol/l) y 4 mEq de ión calcio (2 mmol/l).
El virus se puede formular para su administración en la clínica mezclando una pequeña alícuota de virus con un volumen específico del vehículo líquido elegido, p. ej., solución de lactato de Ringer o Hartmann. El virus se suministra en suspensión líquida a la concentración de dosis especificada, p. ej., 1x107 ui/ml y una pequeña alícuota en el intervalo de 0,5 a 5 ml, p. ej., una de aproximadamente 0,5 ml, aproximadamente 1 ml, aproximadamente 2 ml, aproximadamente 3 ml, aproximadamente 4 ml o aproximadamente ml, preferiblemente alrededor de 1 ml del virus, se mezcla con el vehículo líquido. El volumen de vehículo líquido al que se añade la alícuota del virus puede ser de aproximadamente 100 ml, aproximadamente 150 ml, aproximadamente 200 ml, aproximadamente 250 ml, aproximadamente 300 ml, aproximadamente 350 ml, aproximadamente 400 ml, aproximadamente 450 ml, aproximadamente 500 ml. En algunas realizaciones preferidas, el volumen de vehículo líquido es de aproximadamente 250 ml. El vehículo líquido se puede proporcionar en una bolsa adecuada para su uso en infusión intravenosa o intraarterial. La suspensión vírica, el vehículo líquido y la bolsa son todos preferiblemente estériles y la formulación del virus se prepara en condiciones estériles.
La infusión de la composición vírica formulada a la sangre puede tardar entre aproximadamente 30 minutos y aproximadamente 3 horas, por ejemplo, aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas o aproximadamente 3 horas.
La administración intravenosa puede comprender la infusión en el sistema venoso muy cerca de la ubicación o ubicaciones del cáncer, p. ej., cáncer de cabeza y cuello.
La infusión a la sangre se realiza preferiblemente en un sitio periférico, p. ej., a una vena o arteria cerca de la superficie de la piel y no dentro del tejido profundo. Los ejemplos de ubicaciones periféricas adecuadas son las venas del brazo o la pierna. En algunas realizaciones relacionadas, la administración puede ser a través de una vía venosa central. La administración es preferiblemente no invasiva, p. ej., no requiere un procedimiento radiológico, quirúrgico, invasivo o intervencionista para localizar una vena o arteria específica dentro del tejido profundo o proximal a los órganos internos. Por ejemplo, opcionalmente, la administración no se realiza en la arteria hepática. El sujeto puede tener un dispositivo venoso periférico, catéter o cánula adaptados para facilitar la administración. Como tal, la administración se puede realizar en un entorno ambulatorio en el que el paciente está conectado a un goteo.
La administración del virus del herpes simple oncolítico puede ser una administración locorregional, p. ej., a una región localizada del cuerpo en la que está presente el tumor. La administración locorregional se puede lograr mediante el uso de quimioembolización en la que la administración de un virus del herpes simple oncolítico se puede combinar con otra embolización (p. ej., embolización química) del tumor.
Por ejemplo, una técnica desarrollada para la infusión intraarterial adecuada en el contexto del tratamiento del cáncer de hígado primario es la quimioembolización transarterial (TACE).
La TACE normalmente la realiza un radiólogo intervencionista e implica acceder a la arteria hepática con un catéter, lo cual es posible perforando la arteria femoral común en la ingle derecha y pasando un catéter a través de la aorta abdominal, a través del tronco celíaco y la arteria hepática común, en la arteria hepática adecuada.
Se realiza un arteriograma para identificar las ramas de la arteria hepática que irrigan los tumores. A continuación, se pueden enhebrar catéteres más pequeños en estas ramas (lo que se denomina posicionamiento superselectivo). Esto permite la administración precisa de los agentes activos al tejido tumoral.
Una vez que el catéter esté en posición, se inyectan dosis del agente activo (p. ej., virus del herpes simple oncolítico y/o agente quimioterapéutico y/o agente de embolización y/o agente de contraste) a través del catéter. La dosis total se puede administrar a un solo vaso o, si hay varios focos tumorales, se puede dividir entre varios vasos que irrigan los tumores.
Debido a que la mayoría de los tumores hepáticos son irrigados por la arteria hepática, la embolización arterial interrumpe el suministro de sangre al tumor y retrasa el crecimiento del tumor. La naturaleza enfocada de la administración de agentes activos permite la administración de una dosis terapéutica alta al tejido que requiere tratamiento mientras se reduce la exposición sistémica y por lo tanto la toxicidad. La embolización del vaso ayuda a este proceso porque el agente o agentes activos no se eliminan por lavado del lecho tumoral y el suministro de nutrientes al tumor se reduce promoviendo así la necrosis tumoral.
TACE se usa ampliamente como tratamiento paliativo para tumores de CHC primarios o metastásicos no extirpables quirúrgicamente.
Kits
En algunos aspectos de la presente descripción se proporciona un kit de partes. En algunas realizaciones, el kit puede tener al menos un recipiente que tenga una cantidad predeterminada de virus del herpes simple oncolítico, p. ej., una dosis vírica predeterminada o número/cantidad/concentración de partículas víricas. El virus del herpes simple oncolítico se puede formular para que sea adecuado para inyección o infusión en un tumor o en la sangre. En algunas realizaciones, el kit puede comprender además al menos un recipiente que tiene una cantidad predeterminada de inhibidor del punto de control inmunitario. El inhibidor del punto de control inmunitario también se puede formular para que sea adecuado para inyección o infusión en el tumor o en la sangre o, como alternativa se puede formular para administración oral. En algunas realizaciones, se proporciona un recipiente que tiene una mezcla de una cantidad predeterminada de virus del herpes simple oncolítico y una cantidad predeterminada de inhibidor del punto de control inmunitario, que se puede formular opcionalmente para que sea adecuado para inyección o infusión en el tumor o en la sangre.
En algunas realizaciones, el kit también puede contener un aparato adecuado para administrar una o más dosis del virus del herpes simple oncolítico y/o inhibidor del punto de control inmunitario. Tal aparato puede incluir uno o más de un catéter y/o aguja y/o jeringa, estando dicho aparato proporcionado preferiblemente en forma estéril.
El kit puede comprender además instrucciones para la administración de una dosis terapéuticamente eficaz del virus del herpes simple oncolítico y/o inhibidor del punto de control inmunitario.
A continuación se ilustrarán aspectos y realizaciones de la presente invención, a modo de ejemplo, con referencia a las figuras adjuntas. Otros aspectos y realizaciones resultarán evidentes para los expertos en la técnica.
A lo largo de la presente memoria descriptiva, incluidas las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera lo contrario, la palabra "comprender", y variaciones como "comprende" y "que comprende", se entenderá que implica la inclusión de un elemento o etapa o grupo de elementos o etapas indicados, pero no la exclusión de cualquier otro elemento o etapa o grupo de elementos o etapas.
Cabe señalar que, como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un" "una", y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto claramente indique otra cosa. Los intervalos pueden expresarse en el presente documento como "aproximadamente" un valor particular y/o "aproximadamente" otro valor particular. Cuando se expresa tal intervalo, otra realización incluye desde un valor particular y/o hasta el otro valor particular. De manera similar, cuando los valores se expresan como aproximaciones, por el uso del antecedente "aproximadamente", se entenderá que el valor particular forma otra realización.
Breve descripción de las figuras
Las realizaciones y experimentos que ilustran los principios de la invención se tratarán a continuación con referencia a las figuras adjuntas en las que:
Figura 1. Tabla que muestra los cambios en la producción de citocinas en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. Los cambios son relativos a los niveles de producción de citocinas del paciente antes del tratamiento con SEPREHVIR®. * No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l = reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 2. Tabla que muestra los cambios en la producción de IFN-y en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l = reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 3. Tabla que muestra los cambios en la producción de IFN-a en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l = reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 4. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-1 a en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 5. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-2 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos que tienen mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 6. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-4 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 7. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-6 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l = reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 8. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-10 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 9. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-12 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; l= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 10. Tabla que muestra los cambios en la producción de IL-21 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; 1= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 11. Tabla que muestra los cambios en la producción de TNF-a en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; J= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 12. Tabla que muestra los cambios en la producción de IP-10 en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; 1= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 13. Tabla que muestra los cambios en la producción de MIG en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; |= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 14. Tabla que muestra los cambios en la producción de VEGF en muestras de líquido pleural en pacientes humanos con mesotelioma pleural maligno en respuesta al tratamiento con 1, 2 o 4 dosis (cada una de 1x107 ui) de SEPREHVIR® administrado a intervalos semanales. No hubo muestras disponibles para la prueba del paciente 06. ^ ++++ = aumento de pequeño a grande sobre el nivel inicial; - = sin cambios; |= reducción; apa = muestra aún por analizar.
Figura 15. Diagrama que ilustra el procedimiento de análisis por transferencia de Western utilizado para sondar extractos de células para la respuesta de IgG antitumoral inducida por la administración intrapleural de SEPREHVIR®.
Figura 16. Análisis por transferencia de Western que muestra los resultados de los sueros tomados de los pacientes 01,02, 03, 04 y 05 contra células MSTO-211H. Las flechas indican una nueva respuesta antitumoral de IgG.
Figura 17. Análisis por transferencia de Western que muestra los resultados de los sueros tomados de los pacientes 06 y 07 contra células MSTO-211H. Las flechas indican una nueva respuesta antitumoral de IgG.
Figura 18. Análisis por transferencia de Western que muestra los resultados de los sueros tomados de los pacientes 08 y 09 contra células MSTO-211H. Las flechas indican una nueva respuesta antitumoral de IgG.
Figura 19. Tabla que muestra la respuesta de Th1 y la supervivencia del paciente durante un año o menos o durante más de un año. La mediana de supervivencia es de 12 meses desde el diagnóstico. *Solo se evaluaron 7/9 pacientes. No hay muestras disponibles del paciente 06 y el paciente 09 aún no ha cumplido los 12 meses desde el tratamiento. #10 pacientes, **pacientes 08 y 09 aún vivos, *** El paciente tratado de mayor edad tenía 84 años. La mediana histórica de supervivencia de todos los pacientes con mesotelioma pleural maligno es de 9,5 meses desde el diagnóstico (Beckett et al (2015) Lung Cancer 88, 344).
Figura 20. Tabla que muestra citocinas y quimiocinas detectadas en muestras de líquido pleural en niveles altos (ng/ml) y niveles bajos (pg/ml) y citocinas y quimiocinas no detectadas.
Figura 21. El seprehvir se replica y persiste, pero el paciente 02 no logra generar una respuesta de Th1. Los gráficos muestran: ADN del HSV detectable en muestras de líquido pleural tomadas del paciente 02 a intervalos posteriores a la administración de Seprehvir; Respuesta de IFNy, respuesta de MIG (CXCL9) y respuesta de IL-12.
Figura 22. El seprehvir es indetectable, pero el paciente 03 presenta una sólida respuesta de IFNy. Los gráficos muestran: ADN del HSV detectable en muestras de líquido pleural tomadas del paciente 03 a intervalos posteriores a la administración de Seprehvir; Respuesta de IFNy, respuesta de MIG (CXCL9) y respuesta de IL-12.
Figura 23. Tabla que muestra la expresión de citocinas y quimiocinas del líquido pleural en nueve pacientes humanos en respuesta al tratamiento con Seprehvir.
Figura 24. Tabla que muestra citocinas y quimiocinas que muestran una respuesta baja o nula al tratamiento con Seprehvir en muestras de líquido pleural de nueve pacientes humanos.
Figura 25. Tabla que muestra un compendio de las respuestas de citocinas y quimiocinas de Th1 de los pacientes en nueve pacientes humanos.
Figura 26. Gráficos que muestran el reclutamiento de células inmunitarias posterior a Seprehvir, se asocia con la respuesta de citocinas de Th1 en dos pacientes que recibieron dos dosis de Seprehvir (los días 1 y 8) y tres pacientes que recibieron cuatro dosis de Seprehvir (los días 1,8, 15 y 22). El punto de datos del día 0 representa el recuento de células antes del tratamiento con Seprehvir. Se observaron respuestas de Th1 en los pacientes 04, 07, 08 y 09. Pac = paciente.
Figura 27. Gráficos que muestran que Granzima B está asociada con la respuesta de citocinas de Th1 después del tratamiento con Seprehvir en tres pacientes que recibieron una dosis de Seprehvir, dos pacientes que recibieron dos dosis de Seprehvir y tres pacientes que recibieron cuatro dosis de Seprehvir. Se observaron respuestas de Th1 en los pacientes 01, 03, 04, 07, 08 y 09. Pac = paciente. Se ha demostrado que la granzima B y la perforina inducen la fragmentación y la apoptosis del ADN de las células diana mediadas por CTL. (Lord etal., Granzyme B: a natural born killer. Immun Rev. Junio de 2003 193:31-8).
Figura 28. Se inyectaron ratones C57BL/6 con 5x106 células M3-9-M por vía subcutánea. Los tumores se trataron intratumoralmente (i.tu.) con Seprehvir cuando los tamaños alcanzaron los 200-400 mm3. Se administró una inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 dos veces por semana después de la última dosis del tratamiento con el virus. El crecimiento del tumor se controló dos veces por semana. Los ratones fueron sacrificados cuando los tumores alcanzaron los 2500 mm.3 de volumen o crecieron más de 2 cm de longitud. ufp = Unidad formadora de placa.
Figura 29. La combinación de Seprehvir con anticuerpo anti-PD-1 prolonga significativamente la supervivencia con varias respuestas completas en el modelo de tumor de rabdomiosarcoma M3-9-M masculino a femenino. Se inyectaron ratones hembra C57BL/6 con 5x106 células M3-9-M por vía subcutánea. Los efectos de Seprehvir más el bloqueo anti-PD-1 sobre la eficacia antitumoral se evaluaron midiendo los volúmenes tumorales a lo largo del tiempo. Se evaluó la significación estadística de los datos de supervivencia con la prueba Log-rank (Mantel-Cox).
Figura 30. La combinación de Seprehvir con anticuerpo anti-PD-1 prolonga significativamente la supervivencia en el modelo de tumor M3-9-M de macho a macho menos inmunogénico. Se inyectaron ratones macho C57BL/6 con 5x106 células M3-9-M por vía subcutánea. Los efectos de Seprehvir más el bloqueo anti-PD-1 sobre la eficacia antitumoral se evaluaron midiendo los volúmenes tumorales a lo largo del tiempo. Se evaluó la significación estadística de los datos de supervivencia con la prueba Log-rank (Mantel-Cox). Gráfico superior izquierdo: PBS/Ab de control (n = 7) y PBS/anticuerpo anti-PD-1 (n = 6); Gráfico medio superior: PBS/Ab de control (n = 7) y Seprehvir/Control (n = 6); Gráfico superior derecho: PBS/Ab de control (n=7) y anticuerpo Seprehvir/Anti-PD-1 (n=7). Gráfico inferior: PBS/Ab de control (n=7) - línea de puntos, lado izquierdo; PBS/anticuerpo anti-PD-1 (n=6) - línea discontinua y punteada; Seprehvir/Control (n = 6) - línea discontinua; Seprehvir/Anticuerpo anti-PD-1 (n=7) - línea continua, lado derecho.
Figura 31. La inhibición del punto de control no altera significativamente la cinética vírica intratumoral. Se trataron ratones hembra portadores de tumores M3-9-M con tres dosis de 108 ufp de Seprehvir por vía intratumoral (i.tu.) seguido de inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 o de control. Los tumores se recogieron 3, 24, 72 y 168 horas después de la inyección de anticuerpo intraperitoneal para el ensayo de placa. Los datos se expresan como unidades formadoras de placa totales (ufp) por tumor.
Figura 32. La terapia combinada induce más linfocitos T CD4+ y CD8+ (A), pero el aumento de linfocitos T CD4+ tanto en hembras (izquierda) como en machos (derecha) no se debe a un mayor número de linfocitos Treg CD25+CD4+ (B). Los ratones hembras y machos con tumores M3-9-M recibieron tres dosis de intratumoral (i.tu.) Inyección de seprehvir seguida de inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 o de control. Los infiltrados de células inmunitarias en los tumores se evaluaron mediante análisis de citometría de flujo 72 horas después de la inyección de anticuerpo intraperitoneal. En cada gráfico, las columnas de izquierda a derecha son PBS/anticuerpo de control, PBS/anticuerpo anti-PD-1, Seprehvir/Anticuerpo de control y Seprehvir/Anticuerpo anti-PD-1.
Figura 33. La terapia de combinación induce una mayor expresión de genes inflamatorios y una menor expresión de genes inmunosupresores. Los ratones hembras con tumor M3-9-M recibieron tres dosis de intratumoral (i.tu.) Inyección de seprehvir seguida de inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 o de control. Los tumores se recogieron 72 horas después de la inyección de anticuerpo intraperitoneal. T-bet (gen relacionado con Th-1), Foxp3 (gen relacionado con Treg), IFNy, IL-10, iNOS (gen relacionado con macrófagos M1) y MRC-1 (gen relacionado con macrófagos M2) se cuantificaron en tiempo real. Los datos se representan como expresión relativa de ARN para gapdh. En cada gráfico, las columnas de izquierda a derecha son PBS/anticuerpo de control, PBS/anticuerpo anti-PD-1, Seprehvir/Anticuerpo de control y Seprehvir/Anticuerpo anti-PD-1.
Figura 34. El microambiente tumoral es remodelado a Th1 lejos de Th2 por Seprehvir y combinación con anti-PD-1. IFNy e iNOS se utilizan como marcadores de Th1 y su proporción, con respecto a los marcadores Th2, IL-10 y MRC-1 aumentan significativamente con Seprehvir anti-PD-1.
Figura 35. Gráficos que muestran los resultados del experimento de reexposición en el que los ratones curados del tumor de xenoinjerto se vacunan contra la reexposición al tumor mediante el desarrollo de inmunidad antitumoral de memoria. Los ratones curados de la Figura 30 (n=1 para anti-PD-1 solo, n=2 para Seprehvir solo y n= 3 para la combinación) se reexpusieron mediante la implantación subcutánea de células M3-9-M. Los tumores no se formaron en ningún animal, pero se desarrollaron en 5/5 ratones sin exposición previa de la misma edad.
Figura 36. Seprehvir interactúa directamente y activa las PBMC humanas. Gráficos que muestran fenotipos de linfocitos citolíticos naturales y CD4+ después del tratamiento con reovirus (reo), HSV1716, esteroides o inhibidores de Braf o radiación de rayos X. Se aislaron PBMC de conos de leucoféresis, se sembraron a 2 x 106 células/ml y se trataron ± reovirus o HSV1716 (MOI 1); dexametasona (0,2 mM); PLX4720 (2 pM); 2 Gy XRT; 8 Gy XRT. Después de 24 o 48 h de cultivo, se recolectaron las células, se tiñeron para los marcadores indicados y se analizaron por FACS. Para cada entrada de datos de 24 h, la barra izquierda muestra datos de 24 h y la barra derecha muestra datos de 48 h.
Figura 37. Seprehvir interactúa directamente y activa las PBMC humanas. Gráficos que muestran fenotipos de células CD8+ después del tratamiento con reovirus (reo), HSV1716, esteroides o inhibidores de Braf o radiación de rayos X. Se aislaron PBMC de conos de leucoféresis, se sembraron a 2 x 106 células/ml y se trataron ± reovirus o HSV1716 (MOI 1); dexametasona (0,2 mM); PLX4720 (2 pM); 2 Gy XRT; 8 Gy XRT. Después de 24 o 48 h de cultivo, se recolectaron las células, se tiñeron para los marcadores indicados y se analizaron por FACS. Para cada entrada de datos de 24 h, la barra izquierda muestra datos de 24 h y la barra derecha muestra datos de 48 h.
Figura 38. Seprehvir interactúa directamente y activa las PBMC humanas. Gráficos que muestran fenotipos de células CD14+ después del tratamiento con reovirus (reo), HSV1716, esteroides o inhibidores de Braf o radiación de rayos X. Se aislaron PBMC de conos de leucoféresis, se sembraron a 2 x 106 células/ml y se trataron ± reovirus o HSV1716 (MOI 1); dexametasona (0,2 mM); PLX4720 (2 pM); 2 Gy XRT; 8 Gy XRT. Después de 24 o 48 h de cultivo, se recolectaron las células, se tiñeron para los marcadores indicados y se analizaron por FACS. Para cada entrada de datos de 24 h, la barra izquierda muestra datos de 24 h y la barra derecha muestra datos de 48 h.
Figura 39. Gráficos que muestran la expresión de citocinas en PBMC después del tratamiento con reovirus (reo), HSV1716, esteroides o inhibidores de Braf o radiación de rayos X. Se aislaron PBMC de conos de leucoféresis, se sembraron a 2 x 106 células/ml y se trataron ± reovirus o HSV1716 (MOI 1); dexametasona (0,2 mM); PLX4720 (2 pM); 2 Gy XRT; 8 Gy XRT. Después de 24 o 48 h de cultivo, se recolectaron las células, se tiñeron para los marcadores indicados y se analizaron por FACS. (A) IL-6, IL-10, IFNa, IFNy ; (B) TNFa.
Figura 40. Gráfico que muestra el análisis de FAC y una tabla que muestra la expresión de GFP en las líneas celulares tumorales One58 (mesotelioma humano), Ovcar3 (cáncer de ovario humano), T98 (glioblastoma multiforme humano), Ln229 (glioma humano). Las líneas celulares de cáncer humano se infectaron con HSV1716gfp (HSV1716 modificado para expresar GFP) a una mdi de 0,5 y se cultivaron durante 24 horas antes de la adición de 106 PBMC humanas. Después de 24 horas de cultivo, las PBMC se decantaron y cultivaron durante 24-48 horas antes de analizarlas para determinar la expresión de GFP. Se descubrió que HSV1716 infectaba y se transfiere a un subconjunto rico en monocitos/macrófagos de PBMC.
Figura 41. Las líneas celulares de cáncer humano infectadas con HSV1716 estimulan el crecimiento de PBMC y de células mononucleares del líquido pleural (PFMC). Se muestran dos experimentos separados y se decantaron y cultivaron PBMC/PFMC durante 48 horas antes del ensayo MTS. Gráfico de la izquierda, el experimento 1 muestra el resultado del ensayo MTS de PBMC/PFMC cuando se añade a líneas celulares de cáncer humano infectadas con HSV1716; en cada entrada de las barras de izquierda a derecha indican las células T98, células One58 y células Ovcar3 /- infección por virus. El gráfico de la derecha muestra el resultado del experimento 2 del ensayo MTS después del tratamiento de las líneas de células tumorales Ln229, Ovcar3, T98 y One58 con HSV1716 seguido de la adición de PBMC/PFMC; en cada entrada, de izquierda a derecha, las barras indican PBMC solo, PBMC+HSV1716, células mononucleares del líquido pleural, células mononucleares del líquido pleural HSV1716.
Figura 42. Seprehvir infecta preferiblemente a los monocitos en PBMC humanas. Gráficos de los resultados del análisis de FAC para monocitos y linfocitos humanos infectados con HSV1716gfp.
Figura 43. El Seprehvir infecta y polariza los macrófagos humanos. Los gráficos muestran la infección de macrófagos con HSV1716gfp, muerte de células de macrófagos, expresión de genes víricos en macrófagos: ICP0, ICP8, gB. Todos los datos se normalizaron al gen constitutivo GAPDH y se realizaron 6 experimentos independientes (n=6). Eje X 0 = macrófagos (sin virus).
Figura 44. Gráficos que muestran la expresión de FasL, Bcl-2, LC3B y Atg5 en macrófagos 24 horas después de la infección con HSV1716 a una mdi de 5. Todos los datos se normalizaron al gen constitutivo GAPDH y se realizaron 6 experimentos independientes (n=6). Eje X 0 = macrófagos (sin virus).
Figura 45. Gráficos que muestran la expresión de ARNm de marcadores de inflamación en macrófagos derivados de monocitos humanos 24 horas después de la infección. Todos los datos se normalizaron al gen constitutivo GAPDH y se realizaron 6 experimentos independientes (n=6). Eje X 0 = macrófagos (sin virus).
Figura 46. Gráficos que muestran la expresión de ARNm de los marcadores de macrófagos M1 (NOS2, CXCL10) y el marcador de macrófagos M2 (MRC1) en macrófagos derivados de monocitos humanos 24 horas después de la infección. Todos los datos se normalizaron al gen constitutivo GAPDH y se realizaron 6 experimentos independientes (n=6).
Figura 47. El gráfico que muestra la infección por HSV1716 de macrófagos derivados de monocitos humanos de 7 días induce significativamente la expresión de PCNA. Todos los datos se normalizaron al gen constitutivo GAPDH y se realizaron 4 experimentos independientes (n=4).
Figura 48. El gráfico que muestra la terapia oncolítica contra el HSV retrasa significativamente el crecimiento del tumor de mNB 975A2 (neuroblastoma murino).
Figura 49. La terapia oncolítica por HSV recluta más linfocitos T en el tumor 975A2 mNB. Los gráficos muestran el infiltrado celular en el tumor de diferentes tipos de células. En todos los gráficos se muestran pares de puntos de datos para el tratamiento con PBS (izquierda) y Seprehvir (derecha) para la administración de 1 (1x) o 3 (3x) dosis.
Figura 50. Los gráficos de análisis FACS muestran la expresión de PD-L1 en células 975A2 mNB.
Figura 51. La terapia oncolítica del HSV induce la expresión de PD-L1 en las células mieloides. Los gráficos muestran la expresión de PD-L1 en células de macrófagos F4/80+, células supresoras derivadas mieloides (MDSC) y neutrófilos. Para gráficos de barras, barra izquierda = PBS, barra derecha = Seprehvir.
Figura 52. Los gráficos que muestran los volúmenes tumorales medios de los datos mostrados para ratones individuales en la Figura 29 (izquierda) demuestran que la combinación de Seprehvir anti-PD-1 es sinérgica ya que el efecto de combinación real sobre el crecimiento tumoral es mayor que el efecto aditivo predicho (derecha).
Figura 53. Ilustración esquemática de ciclos de tratamiento: semanalmente y dos veces por semana (uno y dos ciclos). Figura 54. Gráficos que muestran la proliferación de células inmunes y los niveles de IFNy en el paciente 09 (Ejemplo 1).
Figura 55. Gráfico que muestra la persistencia de Seprehvir en los líquidos pleurales (Ejemplo 1).
Figura 56. Tabla que muestra el compendio de las respuestas de células inmunitarias y citocinas de Th1 del paciente (Ejemplo 1).
Figura 57. Tabla que muestra un compendio de las respuestas de IgG anti-tumorales del paciente.
Figura 58. Tabla que muestra la detección de ADN de HSV-1 en muestras de sangre de pacientes. "Pos" = positivo para el ADN del h Sv -1, "Neg" = negativo para el ADN del HSV-1.
Figura 59. Tabla que muestra la detección de ADN del HSV-1 en muestras de sangre de pacientes de 8 pacientes inscritos en NCT00931931. IV = administración intravenosa de Seprehvir, ITu = administración intratumoral de Seprehvir, "Pos" = positivo para el ADN de HSV-1, "Neg" = negativo para el ADN del VHS-1, nh = no hecho.
Figura 60. Imágenes digitales de PET/CT para el paciente HSV13 inscrito en NCT00931931 el día 14 y el día 28 después de la administración intravenosa de Seprehvir. La lesión está encerrada en un círculo y se indica el VCE. Figura 61. Imágenes digitales de PET/CT para el paciente HSV13 inscrito en NCT00931931 el día 14 y el día 28 después de la administración intravenosa de Seprehvir. Imagen transversal a través del cuerpo. La lesión está encerrada en un círculo y se indica el VCE.
Figura 62. Imagen digital de PET/CT para el paciente HSV07 inscrito en NCT00931931 que muestra regiones del tumor.
Figura 63. Imágenes digitales de PET/CT para el paciente HSV07 inscrito en NCT00931931 antes de la administración intratumoral de Seprehvir (arriba a la izquierda), el día 14 después de la administración intratumoral de Seprehvir (arriba en el medio) dos días antes de la segunda inyección intratumoral del virus el 6.27.14 (arriba a la derecha) y después de la segunda inyección intratumoral (fila inferior).
Los detalles de una o más realizaciones de la invención se establecen en la descripción adjunta a continuación, incluyendo detalles específicos del mejor modo contemplado por los inventores para llevar a cabo la invención, a modo de ejemplo. Será evidente para un experto en la técnica que la presente invención se puede poner en práctica sin limitación a estos detalles específicos.
Ejemplos
El mesotelioma pleural maligno (MPM) sigue siendo un gran desafío, con opciones terapéuticas limitadas. La enfermedad intrapleural multifocal puede causar síntomas incapacitantes de dolor y disnea, en ausencia de metástasis a distancia, por lo que un enfoque de tratamiento intrapleural es atractivo.
SEPREHVIR® (HSV1716) es un virus del herpes simple de tipo 1 oncolítico mutante eliminado en el gen RL1 que codifica la proteína ICP34.5, un determinante específico de la virulencia. Los mutantes que carecen del gen RL1 son capaces de replicación específica en células cancerosas y de inducir respuestas inmunitarias antitumorales. Se han completado estudios clínicos con SEPREHVIR en glioma de adultos, melanoma, cáncer de cabeza y cuello de células escamosas, y se están realizando estudios en tumores sólidos que no son del SNC y MPM. En total, 98 pacientes han recibido SEPREHVIR y el virus se tolera bien sin diseminación al tejido normal circundante o sin diseminación en los pacientes. Se ha demostrado la selectividad de SEPREHVIR para la replicación solo en células tumorales y se han demostrado indicios de eficacia y potencial inmunoestimulador.
Las citocinas son moléculas de señalización intercelulares secretadas que regulan muchos procesos diferentes, incluida la inflamación, defensa del hospedador y diferenciación celular. Los perfiles de citocinas pueden ayudar a comprender los cambios en las muestras de líquido pleural en pacientes después de la administración de SEPREHVIR®.
Tras la activación, los linfocitos T CD4+ colaboradores sin exposición previa se diferencian en distintos subconjuntos. El desarrollo de los subconjuntos está promovido en parte por el medio de las citocinas. Los linfocitos de tipo 1 (Th1) ayudan a promover la inmunidad celular contra los patógenos intracelulares. IL-12 e IFNy inducen el desarrollo de linfocitos Th1. Los linfocitos Th1 producen IFN-y e IL-2, que proporcionaron un bucle de retroalimentación positiva para mejorar la diferenciación de los linfocitos Th1 y la actividad citolítica de los linfocitos citolíticos naturales, NK, y los linfocitos T CD8+.
Los linfocitos Th2 juegan un papel crucial en la respuesta humoral contra patógenos extracelulares. IL-4 promueve el desarrollo de linfocitos Th2, que posteriormente producen IL-4, IL-5 e IL-13. Estas citocinas inducen la proliferación de linfocitos B, la producción de anticuerpos, el cambio de clase de IgE y activan los eosinófilos, respectivamente.
Otro linaje distinto de linfocitos T colaboradores, Th17, es importante para la inmunidad de las mucosas. La desregulación de Th17 puede contribuir significativamente al desarrollo de autoinmunidad. La IL-17 producida por los linfocitos Th17 induce la secreción de citocinas proinflamatorias IL-6, IL-8, GM-CSF y TNFa. Muchas de estas moléculas vinculan la inmunidad innata y adaptativa a través del reclutamiento y la activación de células inmunitarias innatas.
Las respuestas inmunitarias eficaces requieren una coordinación finamente ajustada entre señales proinflamatorias y antiinflamatorias. Las moléculas proinflamatorias desempeñan un papel importante en la activación de agentes inmunitarios clave para combatir las infecciones. IL-8 induce la migración de granulocitos y activa la actividad fagocítica de los neutrófilos. GM-CSF moviliza monocitos hacia el tejido infectado y activa macrófagos y neutrófilos. El TNFa es una citocina proinflamatoria multifuncional involucrada en una serie de procesos que incluyen la proliferación celular, la diferenciación y la apoptosis.
La inflamación incontrolada puede dañar el tejido circundante del hospedador. IL-10 es una citocina antiinflamatoria prototípica que sirve para terminar la respuesta inflamatoria aguda inhibiendo la función de los linfocitos Th1 y la producción de citocinas proinflamatorias.
Ejemplo 1 - Respuestas de citocinas después de la administración intrapleural de SEPREHVIR® de1HSV oncolítico en pacientes con mesotelioma pleural maligno
Actualmente, los presentes inventores están llevando a cabo un ensayo de fase l/lla en el Centro de Ensayos Clínicos del Cáncer, Hospital Weston Park, Hospital Universitario Sheffield y Queen Elizabeth, Glasgow, Reino Unido para determinar la seguridad y el potencial de eficacia de SEPREHVIR® administrado por vía intrapleural a pacientes con mesotelioma pleural maligno (MPM). Los pacientes reciben 1x107 ui de SEPREHVIR® a través de su catéter pleural en uno, dos o cuatro veces cada dosis administrada con una semana de diferencia, en tres cohortes de pacientes independientes. Hasta la fecha se han tratado 11 pacientes, 3 en cada cohorte de 1 y 2 dosis y 5 en la cohorte de 4 dosis y SEPREHVIR® ha sido bien tolerado con pocos eventos adversos en cualquier paciente. Un objetivo exploratorio, para evaluar las respuestas tumorales por CT utilizando criterios RECIST modificados, ha demostrado estabilización de la enfermedad en 6/10 pacientes evaluables.
Se recolectaron muestras de plasma y líquido pleural antes y después del tratamiento y se analizaron para evaluar las respuestas del paciente a la administración de SEPREHVIR®.
1.1 ADN del HSV
El ADN del HSV se detectó en los líquidos pleurales de la mayoría de los pacientes y en algunos persistió durante al menos dos o cuatro semanas después de la administración (Figura 55).
1.2 Análisis de citocinas
Se recolectaron muestras de líquido pleural de pacientes después de la administración intrapleural de SEPREHVIR® y se analizaron los cambios en los niveles de las siguientes citocinas o posibles biomarcadores: IFN-y (interferóngamma), IFN-a (interferón alfa), las siguientes interleucinas (IL): IL-1 a, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-21, IP-10 (proteína 10 inducible por IFN-y), MIG (monoquina inducida por IFN-y), TNF-a (factor de necrosis tumoral alfa) y VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular).
Los cambios en los niveles de citocinas y quimiocinas pueden ser indicativos de una respuesta inmunitaria en desarrollo en el espacio pleural y los cambios en los niveles de biomarcadores potenciales pueden ser indicativos de las respuestas del paciente al tratamiento.
1.2.1 Materiales y métodos
Se utilizaron kits de ELISA disponibles comercialmente para medir las concentraciones de estas citocinas y biomarcadores potenciales en fluidos biológicos. Se utilizaron kits de ELISA para cuantificar citocinas, quimiocinas y biomarcadores potenciales en fluidos biológicos exactamente tal como se especifica en las instrucciones del fabricante. Por ejemplo, los kits de ELISA Novex® (Thermo Fisher) permiten mediciones cuantitativas específicas de citocinas, quimiocinas y proteínas relacionadas con enfermedades en varios fluidos biológicos. Los kits de ELISA se seleccionaron basándose en que son compatibles con fluidos biológicos tales como suero o plasma.
Para la detección de interferón-Y humano se usó el kit de ELISA con n.° de Cat. KHC4021,4022, 4021C (Invitrogen, Camarillo, CA, EE.UU.). Para la detección de VEGF humano se usó el kit de ELISA con n.° de Cat. KHG0112, 0111 (Invitrogen, Camarillo, CA, EE.UU.).
Las muestras de líquido pleural de los pacientes se entregaron en hielo seco, se descongelaron y se procesaron para su posterior análisis. Se almacenaron 5-10 ml de cada líquido pleural a -70 °C en tubos de centrífuga de 15 ml para el análisis de citocinas y biomarcadores potenciales.
Antes de usar un kit ELISA, se probó su compatibilidad con los líquidos pleurales y su intervalo de dilución útil. Se utilizan dos líquidos pleurales para esta prueba, una muestra antes y una después de la administración de SEPREHVIR® se diluyeron a 1:10, 1:100 y 1:1000 usando el tampón de dilución provisto con el kit. Se extrajo del kit una tira de ocho pocillos y se añadieron a los pocillos individuales las diluciones 1:10, 1:100 y 1:1000 y sin diluir de cada muestra. A continuación, se siguió el protocolo de ELISA exactamente según lo especificado por el fabricante y las lecturas de DO450 nm resultantes identifican las diluciones de muestra más adecuadas para su uso en el ELISA. Las diluciones más apropiadas deben generar una DO450 nm de entre 0,5-1,5 en 15-30 minutos. A continuación, se analizaron muestras de líquido pleural a esta dilución apropiada.
1.2.2 Resultados
Detección de cambios en los niveles de citocinas y biomarcadores (véase las Figuras 1 a 14).
Citocinas asociadas a Th1
IL-2: Los pacientes que recibieron 4 dosis de SEPREHVIR® mostraron un aumento en la producción de IL-2 (Figura 5).
IL-12: Los pacientes que recibieron 4 dosis de SEPREHVIR® mostraron un aumento en la producción de IL-12 (Figura 9).
IL-12, producido por células dendríticas, macrófagos y células linfoblastoides B humanas, se conoce como factor estimulante de los linfocitos T e interviene en la diferenciación de los linfocitos T sin exposición previa en linfocitos Th1. La IL-12 es importante dentro de la respuesta inmunitaria con diversas actividades, incluida la mediación de la mejora de la actividad citotóxica de los linfocitos citolíticos naturales y los linfocitos citotóxicos CD8+, que estimulan la producción de IFN-y, TNF-a de linfocitos T y reduce la supresión de IFN-y mediada por IL-4.
Se ha demostrado que la IL-12 tiene capacidades anti-angiogénicas al aumentar la producción de IFN-y, lo que provoca el aumento de la producción de IP-10, que media un efecto anti-angiogénico.
IFN-y : Los niveles de IFN-y aumentaron notablemente desde los niveles iniciales bajos en pacientes que recibieron dosis únicas y múltiples de SEPREHVIR® (Figura 2).
Las funciones de IFN-y incluyen mejorar la actividad citotóxica, la activación, el crecimiento y la diferenciación de linfocitos T, macrófagos y linfocitos citolíticos naturales, NK. Así como la activación de otros tipos de células tales como los linfocitos B y los fibroblastos. La producción de IFN-y es una característica de la diferenciación de Th1 y promueve un fenotipo inmunitario de Th1 al hacer que las células CD4+ (Th0) sin exposición previa se diferencien en linfocitos Th1 mientras se suprime la diferenciación de los linfocitos Th2. El IFN-y mejora aún más la respuesta inmunitaria al estimular los macrófagos que regulan positivamente las vías de presentación y procesamiento de antígenos, promoviendo la activación de los linfocitos T CD4+ y la inmunidad mediada por células. A través de la regulación positiva de varias células, IFN-y dirige el flujo de células inmunes específicas al sitio de inflamación o infección (Boehm, U., Klamp, T., Groot, M., Floward, J. C. (1997) Cellular responses to interferon-gamma. Annu. Rev. Immunol. 15, 749-795).
El IFN-y producido por las CPA (células presentadoras de antígeno) que secretan IFN-y puede estimular la autoactivación y activación de las células cercanas. La producción de IFN-y está controlada por varias citocinas, de manera importante, IL-12 e IL-18 (Frucht, D. M., Fukao, T., Bogdan, C., Schindler, H., O’shea, J., Koyasu, S. (2001) IFN-gamma production by antigen-presenting cells: mechanisms emerge. Trends Immunol. 22, 556-560). Estas citocinas cumplen funciones dentro de la respuesta inmunitaria innata, la IL-12 es secretada por macrófagos que luego atraen linfocitos citolíticos naturales al sitio, mientras que IL-12 continúa promoviendo la síntesis de IFN-y. El IFN-y está regulado negativamente por IL-4 e IL-10.
IP-10: Los pacientes que recibieron dosis únicas y múltiples mostraron una fuerte regulación positiva de IP-10 (Figura 12).
La proteína 10 inducida por interferón gamma (IP-10) es una quimiocina secretada por varios tipos de células, incluidos los monocitos, células endoteliales y fibroblastos en respuesta al IFN-y. IP-10 tiene varias funciones dentro del sistema inmunitario, posiblemente el papel más importante es ser un potente quimioatrayente para monocitos/macrófagos, linfocitos T, linfocitos citolíticos naturales y células dendríticas, IP-10 promueve la actividad antitumoral y la inhibición de la angiogénesis (Dufour. J. H., Dziejman. M., Liu. M.T., Leung. J. H., Lane. T. E., Luster. A.D. (2002) IFN-Y-lnducible protein 10(IP-10) deficient mice reveal a role for IP-10 in effector T cell generation and trafficking. Jour Immunology.
168. 7. 3195-3204). IP-10 y otros miembros de la familia de las quimiocinas, incluido MIG, CXCL9, CXCL11 y CXCL4 se han propuesto como agentes terapéuticos en la lucha contra el cáncer, ya que inducen lesiones en la vasculatura asociada a tumores establecidos y promueven la necrosis tumoral (Homey, B., A. Muller y A. Zlotnik. 2002. Chemokines: agents for the immunotherapy of cancer? Nat. Rev. Immunol. 2:175-184).
MIG: El análisis de las citocinas del líquido pleural mediante AbCam ELISA indicó que los niveles iniciales de MIG (antes del tratamiento con SEPREHVIR®) eran altos. Las muestras se diluyeron a 1:100 antes del ensayo. Los pacientes que recibieron dosis únicas y múltiples mostraron una fuerte regulación positiva de MIG (Figura 13).
La monoquina inducida por interferón gamma (MIG), estrechamente relacionada con la quimiocina CXCL10, es un linfocito T y un linfocito citolítico natural que llevan el quimioatrayente del receptor de quimiocinas CXCR3 (Walser. C. T., Xinrong. M., Kundu. N., Dorsey. R., Goloubeva. W. O., Fulton. M. A. (2007) Immune-mediated Modulation of Breast Cancer Growth and Metastasis by the Chemokine Mig (CXCL9) in a Murine Model. J Immunother 2007;30:490-498). CXCR3 puede regular el tráfico de leucocitos, atrae a los linfocitos Th1 y promueve la maduración de los linfocitos Th1. Se ha demostrado que MIG tiene actividad antitumoral en varios modelos tumorales, además de estimular los linfocitos T en el sitio de la lesión y tener propiedades antiangiogénicas (Saudemont A, Jouy N, Hotuin D, et al. NK cells that are activated by CXCL10 can kill dormant tumor cells that resist CTL-mediated lysis and can express B7-H1 that stimulates T cells. Blood. 2005;105:2428-2435). Además, existe evidencia que sugiere que los linfocitos citolíticos naturales que han sido estimulados por MIG tienen el potencial de eliminar células tumorales inactivas que previamente han sido resistentes a la muerte celular (Saudemont. A., Jouy. N., Hetuin. D., Quesnel. B. (2005) NK cells that are activated by CXCL10 can kill dormant tumor cells that resist CTL-mediated lysis and can express B7-H1 that stimulates T cells. Blood. Vol 15. 6. 2428-2435).
TNF-a: Los pacientes mostraron un pequeño aumento en la producción de TNF-a (Figura 11).
El factor de necrosis tumoral alfa es una citocina inflamatoria multifuncional producida por macrófagos/monocitos durante la inflamación e implicada en eventos de señalización que llevan a necrosis celular y apoptosis (Idriss. H. T y Naismith. H. J. (2000) TNFa and the TNF receptor subfamily: Structure-function relationship(s). Microscopy research and technique. 50. 184-195). Aunque se desconoce el mecanismo exacto, el TNFa es fundamental en las respuestas inmunitarias eficaces de los linfocitos T, que afectan la primovacunación, la proliferación, el reclutamiento y la función de los linfocitos T. El vínculo entre las terapias anti-TNFa y el aumento de la incidencia de neoplasias malignas en pacientes con artritis reumatoide ha sugerido un vínculo entre el TNFa en el desarrollo, la progresión y la vigilancia inmunitaria de los tumores, así como poseer potencialmente propiedades antitumorales (Calzascia T, Pellegrini M, Hall H, et al. TNF-a is critical for antitumor but not antiviral T cell immunity in mice. The Journal o f Clinical Investigation 2007; 117(12):3833-3845. doi: 10.1172/JCI32567).
Citocinas proinflamatorias
IL-6: El análisis de las citocinas del líquido pleural mediante ELISA indicó que los niveles iniciales de IL-6 (antes del tratamiento con SEPREHVIR®) eran altos. Las muestras se diluyeron a 1:1000 antes del ensayo. En la mayoría de los pacientes, incluso en dosis múltiples, los niveles de IL-6 no aumentaron notablemente en comparación con los niveles iniciales (Figura 7).
La detección de niveles altos de IL-6 es consistente con informes previos de detección de IL-6 en pacientes con mesotelioma pleural maligno (T Nakano et al., Interleukin 6 and its relationship to clinical parameters in patients with malignant pleural mesothelioma. British Journal of Cancer (1998) 77(6), 907-912; Siti N. Abdul Rahim et al., The role of interleukin-6 in malignant mesothelioma Transí Lung Cancer Res 2015;4(1 ):55-66).
IL-6 es una citocina proinflamatoria y antiinflamatoria que es producida por una variedad de células tales como los linfocitos T, monocitos de linfocitos B, fibroblastos y queratinocitos y macrófagos. IL-6 estimula una amplia gama de respuestas celulares y físicas en caso de infección o trauma. Investigaciones recientes sugieren que IL-6 junto con TNFa e IL-1, son las principales citocinas proinflamatorias, la IL-6 es un modulador importante de las funciones efectoras de los linfocitos T CD4, por lo que afecta a la respuesta inmunitaria y contribuye a la inflamación (Dienz. O., Rincon. M. (2009). The effect of iL-6 on CD4 T cell responses. Clin Immunol. 130(1): 27-33). En respuesta a PAMPS (patrones moleculares asociados a patógenos), que se encuentran en la superficie celular y los compartimentos intracelulares, IL-6 es producida por macrófagos, provocando una cascada de señalización que produce una producción de citocinas inflamatorias. La IL-6 puede proteger a los linfocitos T CD4 de sufrir apoptosis y estimula la activación de los linfocitos T así como la migración de los linfocitos T. Una función principal de IL-6 es la inducción de anticuerpos (Akira. S., Hirano. T., Taga. T., Kishimoto. T. (1990) Biology of multifunctional cytokines: IL6 and related moplecules (IL1 and TNF). The FASEB Journal. 4. 11.2860-2867).
IL-1a: Los niveles de IL-1 a se mantuvieron esencialmente sin cambios en los pacientes que recibieron dosis únicas o múltiples de SEPREHVIR® en comparación con los niveles iniciales (Figura 4).
IL-1 a posee un fuerte efecto proinflamatorio. IL-1 a es multifuncional y es producida por macrófagos tisulares, monocitos, fibroblastos y células dendríticas. IL-1 a permite la transmigración de células inmunocompetentes a sitios de infección y se considera una citocina central en la regulación de las respuestas inmunitarias. La liberación de IL-1 a puede inducir la activación de NFkB que promoverá la supervivencia celular, la proliferación y la angiogénesis (Wolf. J. S., Chen. Z., Dong. G., Sunwoo. J. B., Bancroft. C. C., Capo. D. E., Yeh. N. T., Mukaida., Waes. C. V. (2001) IL (lnterleukin)-1a Promotes Nuclear Factor-kB and AP-1-induced IL-8 Expression, Cell Survival, and Proliferation in Head and Neck Squamous Cell Carcinomas. Clin Cancer Res. 7. 1812-1820).
Citocinas asociadas a Th2:
IL-4: Los niveles de IL-4 se mantuvieron esencialmente sin cambios en pacientes que recibieron dosis únicas o múltiples de SEPREHVIR® en comparación con los niveles iniciales (Figura 6).
IL-4 estimula la diferenciación de linfocitos T sin exposición previa (linfocitos Th0) a linfocitos T efectores (linfocitos Th2), posteriormente los linfocitos Th2 producen IL-4 adicional y tienen un papel en una respuesta de cambio de clase a los isótopos IgG1 e IgE de los linfocitos B (Kabsech. M., Schedel. M., Carr. D., Woitsch. B., Fritzsch. C., Weiland. S. K., Mutius. E. (2006) IL-4/IL-13 pathway genetics strongly influence serum IgE levels and childhood asthma. Journal of Allergy and Clinical Immuno. Vol 117. 2. 269-274). Una de las actividades biológicas de IL-4 es la estimulación de la proliferación de linfocitos T y B activados. La IL-4 se considera un regulador clave en la inmunidad humoral y adaptativa. Se sabe que la IL-4 disminuye la producción de linfocitos Th1, IFN gamma, macrófagos y células dendríticas IL-12.
IL-10: Los pacientes que recibieron 4 dosis de SEPREHVIR® mostraron un aumento en la producción de IL-10 (Figura 8). Aunque la IL-10 está asociada con los linfocitos Th2, actúa para regular la respuesta de Th1, evitando una respuesta de Th1 excesiva. Su regulación positiva en pacientes que presentan una respuesta de Th1 más pronunciada es consistente con esta función reguladora y confirma la autenticidad de la respuesta de Th1.
IL-10 es una citocina antiinflamatoria producida principalmente por monocitos y en menor medida por linfocitos Th2, mastocitos y en ciertos linfocitos T y B activados. IL-10 limita la producción de citocinas proinflamatorias (incluida IL-12, IL-6, IL-1 a, TNFa, IL-8 e IP-10), lo que da como resultado la inhibición indirecta de los linfocitos Th1 (Couper. K. N., Blount. D. G., Riley. E. M. (2008) IL-10: The master regulator of immunity to infection. Jour Immunol. 180. 5771­ 5777). Sin embargo, la IL-10 puede actuar directamente sobre los linfocitos T CD4+ provocando una inhibición de la proliferación y producción de IL-2, IFN-y, IL-4, IL-5 y TNF a, permitiendo que la IL-10 regule directamente las respuestas de Th1 y Th2 innatas y adaptativas limitando la activación de los linfocitos T mientras inhibe las respuestas proinflamatorias (Moore, K. W., R. de Waal Malefyt, R. L. Coffman, A. O’Garra. 2001. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor. Annu. Rev. Immunol. 19: 683-765).
Durante la infección, la IL-10 regula e inhibe las citocinas proinflamatorias para ayudar a prevenir el daño tisular que daría lugar a la producción excesiva de citocinas proinflamatorias.
Otras citocinas y biomarcadores:
IFN-a: Los niveles de IFN-a se mantuvieron esencialmente sin cambios en pacientes que recibieron dosis únicas o múltiples de SEPREHVIR® en comparación con los niveles iniciales (Figura 3).
Clasificados dentro de la familia de interferones IFN de tipo I, los IFN-a son producidos por células dendríticas en respuesta a una infección vírica y tienen funciones inmunomoduladoras que provocan la diferenciación de las células inmunitarias, la activación y la supervivencia (Padovan, E., Spagnoli. G., Ferrantini. M., Heberer. M. (2002) IFN-a2a induces IP-10/CXCL10 and MIG/CXCL9 production in monocyte-derived dendritic cells and enhances their capacity to attract and stimulate CD8+effector T cells. Journal of Leukocyte Biologyvol. 71 n.° 4669-676).
VEGF: Los niveles de VEGF aumentaron en algunos pacientes, pero fue notable que los niveles iniciales de VEGF en estos pacientes (antes del tratamiento con SEPREHVIR®) eran altos (Figura 14).
El factor de crecimiento endotelial vascular es una proteína señal que estimula la angiogénesis y la vasculogénesis, se considera que el VEGF es un factor importante en el crecimiento tumoral (Carmeliet. P. (2005) VEGF as a key mediator of angiogenesis in caner. Oncology. 69. 3. 4-10). La producción de VEGF se puede inducir en células que carecen de oxígeno, el VEGF liberado desencadena una vía de tirosina quinasa que lleva a la angiogénesis, lo que lleva al VEGF a ser una posible diana en el tratamiento del cáncer (Ohm, J., Gabrilovich. D., Sempowski. G., Kisseleva. E., Parman. K., Nadaf. S., Carbone. D. (2003) VEGF inhibits T-cell development and may contribute to tumor-induced immune suppression. Blood. 101. 12). Se ha demostrado que el VEGF promueve la migración de monocitos/macrófagos y aumenta la producción de linfocitos B, sin embargo, también se ha demostrado que el VEGF inhibe la producción de linfocitos T y, sobre todo, reduce la función de las células inmunitarias (Ferrara. N., Gerber H., LeCouter. J. (2003) The biology of V eGF and its receptors. Nature Medicine 9, 669 - 676).
IL-21: Algunos pacientes mostraron un pequeño aumento en los niveles de IL-21 (Figura 10).
La inducción de una respuesta de Th1 varía entre pacientes
En algunos pacientes, el Seprehvir se replicó y persistió en el líquido pleural pero no indujo una respuesta de Th1, p. ej., el paciente 02 (Figuras 21 y 27), el paciente 05 (Figuras 26 y 27).
En otros pacientes, el seprehvir fue indetectable en el líquido pleural pero indujo una fuerte respuesta de Th1, p. ej., el paciente 03 (Figuras 22 y 27). La ausencia de ADN del HSV detectable en el líquido pleural no es incompatible con un efecto de tratamiento mediado por HSV. Los niveles del virus en los fluidos pleurales podrían estar por debajo del límite de detección de 100 equivalentes de ufp/ml o podrían persistir y diseminarse intracelularmente. En otros estudios, los presentes inventores han observado adsorción vírica por células y tejidos dentro de 1 hora de la administración a los pacientes, de modo que el virus no fue detectable en la sangre durante un período de tiempo después del cual fue detectable el ADN del HSV. Esto concuerda con la adsorción del virus después de la administración y la reaparición más tarde en muestras de líquido después de la acumulación de infección productiva dentro del tejido tumoral.
Se midió la proliferación de células inmunitarias y la producción de IFNy en muestras de líquido pleural del paciente 09 el día 1 (pretratamiento) y los días 11, 17, 22 y 29 después de la administración de Seprehvir (el paciente 09 recibió cuatro dosis de Seprehvir los días 1, 11, 15 y 22). Las células se estimularon en presencia de anticuerpo anti-CD3 y el extracto de células completas de una línea celular de MPM (MSTO211H). Las células de control se incubaron con el anticuerpo anti-CD3+PBS. La proliferación se midió mediante el ensayo de MTS y la proliferación se calculó como MTS a 96 h/MTS a 0 h. Se midió IFNy en sobrenadantes de cultivo mediante ELISA a las 96 h. Los resultados se muestran en la Figura 54.
Comentarios
El análisis de las citocinas del líquido pleural mediante ELISA indicó que la administración de SEPREHVIR® se asoció con respuestas de tipo Th1 con niveles elevados de IFNy, IP-10 y TNFa y se acompaña de niveles elevados de IL-10 en la mayoría de los pacientes.
El análisis de las citocinas del líquido pleural mediante ELISA indicó que, en general, eran ricas en IL-6, MIG y VEGF. Los líquidos pleurales tenían niveles altos de IL-6 e IL-12 y, en la mayoría de los pacientes, hubo aumentos moderados de ambos después de la administración de SEPREHVIR®. Los líquidos pleurales también eran ricos en VEGF y los niveles aumentaron en 4/9 pacientes después de la administración de SEPREHVIR®.
IL-1 a, IL-4 e IFNa no se detectaron antes del tratamiento y no mostraron respuesta a la administración de SEPREHVIR®.
Después de la administración de SEPREHVIR hubo un aumento de los niveles de IFN-y, IP-10, MIG, TNFa e IL-6 en la mayoría de los pacientes, incluidos los pacientes que reciben solo una dosis de SEPREHVIR®. Los aumentos de IL-2 e IL-12 fueron más notables en pacientes que recibieron 4 dosis de SEPREHVIR®.
En general, estas respuestas son consistentes con el desarrollo de una respuesta de Th1.
IL-1 a, IL-4, IL-21 e IFNa no se detectaron antes del tratamiento y mostraron poca o ninguna respuesta a la administración de SEPREHVIR®, coherente con la falta de desarrollo de una respuesta de Th2.
Ejemplo 2 - Nueva respuesta antitumoral de IgG sérica
Se utilizaron muestras de suero de pacientes para sondear extractos de células con el fin de investigar la posibilidad de una respuesta de anticuerpos antitumorales al tratamiento con SEPREHVIR®. Se prepararon extractos celulares a partir de líneas celulares: m St O-211H (mesotelioma; ATCC CRL-2081), SPC111 (mesotelioma) y HuH7 (carcinoma hepático), y se puso en contacto con sueros de pacientes. Los complejos IgG:diana se detectaron usando un anticuerpo anti-IgG humana mediante procedimientos estándar de análisis por transferencia de Western (Figura 15).
El análisis de las muestras de plasma indicó una fuerte respuesta de IgG anti-HSV después de la administración de SEPREHVIR®, particularmente después de 2 y 4 dosis. Se descubrió que la administración intrapleural de SEPREHVIR® induce una nueva respuesta antitumoral de IgG contra un antígeno presente en las células MSTO-211H pero no en las células SPC111 o HuH7 (Figuras 16-18), más aún en pacientes que reciben 4 dosis de Seprehvir.
Por tanto, SEPREHVIR® tiene potencial inmunoterapéutico capaz de inducir nuevas respuestas inmunes antitumorales en pacientes. Este resultado es consistente con la inducción de linfocitos B de IgG dirigidas a antígenos tumorales liberados durante la oncólisis de Seprehvir y estimulados a través de una respuesta de Th1.
Ejemplo 3: el bloqueo del punto de control mejora la viroterapia del herpes oncolítico en modelos de sarcoma inmunosupresor
La mayoría de los tumores sólidos se caracterizan por un microambiente inmunosupresor, que limita la eficacia de los agentes inmunoterapéuticos antitumorales. La supresión de linfocitos T mediada por proteína de muerte celular programada (PD)-1 a través de la participación de su ligando, PD-L1, es de particular interés debido a los éxitos recientes en cánceres de adultos seleccionados. Se desconoce la utilidad de la terapia dirigida por PD1 para los cánceres pediátricos, especialmente dada la escasez de mutaciones y, por tanto, de neoantígenos poco frecuentes en muchos tipos de tumores infantiles. La viroterapia oncolítica induce la reducción del tumor a través de un proceso de varias etapas que incluye la lisis directa de las células tumorales, la inducción de citocinas citotóxicas o sensibilizadoras de apoptosis e inducción de respuestas de linfocitos T antitumorales. Los presentes inventores han demostrado que la inyección intratumoral de un virus del herpes oncolítico indujo retrasos en el crecimiento y, en algunos casos, remisiones duraderas en varios modelos de rabdomiosarcoma de ratón. Los efectos fueron mediados por linfocitos T, ya que los ratones supervivientes fueron resistentes a la reexposición tumoral y la eficacia se perdió en hospedadores desnudos atímicos. Los presentes inventores descubrieron que estos modelos tumorales expresan PD-L1, lo que sugiere que los puntos de control de los linfocitos T pueden limitar en parte la inmunidad antitumoral inducida por virus. En el presente documento, los presentes inventores muestran el modelo implantable de rabdomiosarcoma C57BL/6, M3-9-M, que mostró una respuesta moderada al Seprehvir como agente único (HSV1716), un virus que se encuentra actualmente en ensayos clínicos pediátricos (NCT00931931). El bloqueo de PD-1 como agente único también mostró un retraso en el crecimiento tumoral moderado pero significativo sin respuestas completas. La combinación de estas dos terapias juntas prolongó sustancialmente la supervivencia general con varias respuestas completas después de 60 días de tratamiento. De manera interesante, los ratones que recibieron terapia combinada mostraron más reclutamiento de linfocitos T CD4+/CD8+ en el tumor y mostraron respuestas inflamatorias inmunitarias más altas y un microambiente menos inmunosupresor, medido por la proporción reducida de Tregs CD4+/CD25+/Fox3P+ y citocinas supresoras. En general, los datos de los presentes inventores sugieren que la combinación de PD-1 y viroterapia de herpes oncolítico puede ser una estrategia de tratamiento eficaz para algunos cánceres. Los resultados se muestran en las Figuras 28-33.
Los presentes inventores observaron que: la combinación del tratamiento del oHSV con el inhibidor del punto de control inmunitario anti-PD-1 prolonga significativamente la supervivencia en modelos de rabdomiosarcoma de hombre a hombre y de hombre a mujer; se observó una mayor eficacia antitumoral en el rabdomiosarcoma murino de macho a hembra, lo que sugiere que la terapia de combinación favorece microambientes más inmunogénicos; la terapia combinada dio como resultado un mayor reclutamiento de linfocitos T CD4+/CD8+ pero no afectó in vivo a la actividad del virus; la terapia de combinación induce más respuestas inflamatorias y, aunque el número de linfocitos T CD4+ aumentó, los números de Treg de CD25+/CD4+ no cambiaron, reduciendo así el microambiente tumoral regulador/supresor.
Métodos y resultados experimentales
Se inyectaron ratones C57BL/6 con 5x106 células M3-9-M por vía subcutánea. Los tumores se trataron intratumoralmente (i.tu.) con Seprehvir cuando los tamaños alcanzaron los 200-400 mm3. Se administró una inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 [anticuerpo anti-PD1 monoclonal de rata RMP1-14 (AbCam pic)] dos veces por semana después de la última dosis del tratamiento con el virus. El crecimiento del tumor se controló dos veces por semana. Los ratones fueron sacrificados cuando los tumores alcanzaron los 2500 mm3 de volumen o crecieron más de 2 cm de longitud.
Se inyectaron ratones hembra C57BL/6 con 5x106 células M3-9-M por vía subcutánea. Los efectos de Seprehvir más el bloqueo anti-PD-1 sobre la eficacia antitumoral se evaluaron midiendo los volúmenes tumorales a lo largo del tiempo. Se evaluó la significación estadística de los datos de supervivencia con la prueba Log-rank (Mantel-Cox). La Figura 29 muestra la combinación de Seprehvir y anticuerpo anti-PD-1 para prolongar significativamente la supervivencia con varias respuestas completas en el modelo de tumor de macho a hembra M3-9-M.
Se inyectaron ratones macho C57BL/6 con 5x106 células M3-9-M por vía subcutánea. Los efectos de Seprehvir más el bloqueo anti-PD-1 sobre la eficacia antitumoral se evaluaron midiendo los volúmenes tumorales a lo largo del tiempo. Se evaluó la significación estadística de los datos de supervivencia con la prueba Log-rank (Mantel-Cox). La Figura 30 muestra la combinación de Seprehvir y anticuerpo anti-PD-1 para prolongar significativamente la supervivencia en el modelo de tumor de macho a macho M3-9-M menos inmunogénico.
Se trataron ratones hembra portadores de tumores M3-9-M con tres dosis de 108 ufp de Seprehvir por vía intratumoral (i.tu.) seguido de inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 o de control. Los tumores se recogieron 3, 24, 72 y 168 horas después de la inyección de anticuerpo intraperitoneal para el ensayo de placa. Los datos se expresan como unidades formadoras de placa totales (ufp) por tumor. La Figura 31 muestra que la inhibición del punto de control no altera significativamente la cinética vírica intratumoral.
Los ratones hembras con tumor M3-9-M recibieron tres dosis de intratumoral (i.tu.) Inyección de seprehvir seguida de inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 o de control. Los infiltrados de células inmunitarias en los tumores se evaluaron mediante análisis de citometría de flujo 72 horas después de la inyección de anticuerpo intraperitoneal. Las Figuras 32A y 32B muestran que la terapia de combinación induce más linfocitos T CD25+CD8+ de memoria pero menos linfocitos Treg CD25+CD4+.
Los ratones hembras con tumor M3-9-M recibieron tres dosis de intratumoral (i.tu.) Inyección de seprehvir seguida de inyección intraperitoneal (i.p.) de anticuerpo anti-PD-1 o de control. Los tumores se recogieron 72 horas después de la inyección de anticuerpo intraperitoneal. T-bet (gen relacionado con Th-1), Foxp3 (gen relacionado con Treg), IFNy, IL-10, iNOS (gen relacionado con macrófagos M1) y MRC-1 (gen relacionado con macrófagos M2) se cuantificaron mediante PCR en tiempo real. La Figura 33 muestra que la terapia de combinación induce una mayor expresión de genes inflamatorios y una menor expresión de genes inmunosupresores. Los datos se representan como expresión relativa de ARN para gapdh.
La combinación del tratamiento oncolítico del HSV con el inhibidor del punto de control inmunitario anti-PD-1 prolongó significativamente la supervivencia en modelos de rabdomiosarcoma de hombre a hombre y de hombre a mujer.
Se observó una mayor eficacia antitumoral en el rabdomiosarcoma murino de macho a hembra, lo que sugiere que la terapia de combinación favorece microambientes más inmunogénicos.
La terapia combinada no dio como resultado un mayor reclutamiento de linfocitos T ni afectó in vivo a la actividad del virus.
La terapia de combinación induce más respuestas inflamatorias con menos respuestas inmunitarias reguladoras/supresoras.
Ejemplo 4: Seprehvir polariza directamente el fenotipo de PBMC para Th1
Cuando las PBMC humanas se expusieron directamente a Seprehvir, el virus indujo un fenotipo de Th1 marcado con producción aumentada de IFNa e IFNy y TNFa. También se estimuló la producción de IL-6 y de IL-10 reguladora y el HSV fue más eficaz que el reovirus, dexametasona, PLX4720 y la radiación ionizante. Por tanto, Seprehvir podría influir en estas células directamente tras su reclutamiento en el microambiente tumoral. La exposición de las PBMC a Seprehvir aumentó la expresión de los puntos de control inmunitario en muchos subconjuntos diferentes, incluidos los linfocitos citolíticos naturales NK, linfocitos CD4+, CD8+ y CD14+ (monocitos) (Figura 36 a 39).
Ejemplo 5: Seprehvir infecta y polariza macrófagos humanos induciendo potencialmente una respuesta de Th1 directamente en PBMC humanas
El día 7 después de la infección con HSV1716 que expresa gfp, los macrófagos humanos derivados de monocitos demostraron un aumento significativo de la infección que se correlacionó con un aumento de la muerte celular.
La infección se demostró mediante la investigación de la expresión de genes de proteínas víricas inmediatas tempranas (ICP0) y tardías (gB) que indican una expresión génica significativa en macrófagos (Figura 43).
Mecanismo de muerte celular en macrófagos humanos
HSV1716 elimina a los macrófagos mediante apoptosis y de una manera dependiente de Fas con la expresión génica de FasL y Bcl-2 regulada positivamente 24 horas después de la infección con HSV1716 a una MDI de 5.
De acuerdo con esta observación, la expresión de genes implicados en la autofagia (Atg5 y LC3B) no se alteró significativamente (Figura 44).
La infección por HSV1716 induce un fenotipo inflamatorio en macrófagos
La infección por HSV1716 de los macrófagos derivados de monocitos del día 7 induce significativamente la expresión de ARNm de marcadores típicos de inflamación 24 horas después de la infección con una expresión significativamente elevada de IL-6, IL-8, TNFalfa. La expresión de IL-10, TGFbeta y NFkappaB no mejoraron significativamente (Figura 45).
La infección por HSV1716 induce un fenotipo inflamatorio en macrófagos
La infección por HSV1716 de los macrófagos derivados de monocitos del día 7 induce significativamente la expresión de ARNm de marcadores de macrófagos M1 inflamatorios típicos (NOS2 y CXCL10) y regula significativamente la expresión del marcador M2 MRC1 expresado por macrófagos derivados de tumores (Figura 46). No hubo cambios significativos en otros dos marcadores M2, Arg1 y VEGF.
La infección por HSV1716 induce la expresión de PCNA en macrófagos
La infección por HSV1716 de los macrófagos derivados de monocitos del día 7 induce significativamente la expresión de PCNA que, por lo tanto, podría ser un posible mecanismo para inducir la replicación vírica, la muerte celular de macrófagos y el cambio de M2 a M1 en monocitos que viven en tumores y otras células supresoras derivadas de mieloides. Actualmente se están realizando más estudios para investigar la reducción de la expresión de ARNip de PCNA antes de la infección por HSV1716 (Figura 47).
En conjunto, los ejemplos 4 y 5 sugieren que Seprehvir es capaz de inducir respuestas de Th1 que llevan a inmunidad antitumoral mediante dos mecanismos separados pero interdependientes. La replicación oncolítica de las células cancerosas dentro del microambiente tumoral induce una respuesta inflamatoria que atrae a las células inmunes en circulación e inicia una respuesta de Th1. Tanto las células inmunitarias residentes en el tumor como las recién reclutadas, especialmente monocitos y otras células derivadas de mieloides, tal como los macrófagos M2 (TAM, macrófagos asociados a tumores) son susceptibles a la infección por Seprehvir en este medio inflamatorio localizado. Su posterior infección por la progenie de Seprehvir liberada de la replicación lítica de las células cancerosas amplifica esta respuesta de Th1 como, por ejemplo, los macrófagos están polarizados al fenotipo M1 antitumoral agresivo. Los antígenos tumorales liberados por la oncólisis y recogidos por las células presentadoras de antígeno activadas llevan al desarrollo de inmunidad antitumoral.
Ejemplo 6: un estudio de fase I que investiga la seguridad, tolerabilidad y eficacia de las inyecciones intravenosas del virus del herpes simple con capacidad de replicación selectiva Seprehvir en pacientes con tumores sólidos en recaída o refractarios
Compendio de la experiencia clínica
Hasta la fecha, noventa y ocho pacientes han recibido Seprehvir, en el contexto de una enfermedad localmente avanzada, a través de una variedad de vías, principalmente intratumoral (n = 83) y el resto a través de infusiones intrapleurales (n = 11) o intravenosas (n = 4), en ausencia de cualquier toxicidad relacionada con Seprehvir definitivamente atribuible.
Cuarenta y siete pacientes con tumores cerebrales han recibido una variedad de dosis de Seprehvir (103 hasta 2 x 106) por vía intratumoral (n=35) o peritumoral después de la extirpación (n=12) en 4 estudios clínicos, tres en el glioma primario o recurrente y 1 en el glioblastoma multiforme recurrente (GBM). No se observó inducción de encefalitis ni reactivación del HSV de tipo silvestre latente y no se identificaron síntomas clínicos adversos atribuibles a Seprehvir.
Se han completado otros dos estudios clínicos de Seprehvir. El primero de estos, un estudio en pacientes con melanoma involucró a cinco pacientes con melanoma metastásico y nódulos tumorales de tejido blando accesibles. No se observó toxicidad local o sistémica asociada con Seprehvir.
El segundo de estos estudios incluyó a 20 pacientes con carcinoma de células escamosas extirpable de cabeza y cuello en los que los pacientes recibieron una única inyección intratumoral preoperatoria (1, 3 o 14 días antes de la cirugía) con Seprehvir a una dosis de 105 u.i. (5 pacientes) o 5x105 u.i. (15 pacientes). Ninguno de los pacientes experimentó toxicidad y se observó evidencia de virus en el tejido tumoral.
Actualmente se están realizando dos estudios clínicos.
Un estudio de fase l/lla en mesotelioma pleural maligno está investigando la seguridad, la tolerabilidad y el efecto biológico de la administración intrapleural única y repetida de Seprehvir a una dosis de 1 x 107 u.i. Hasta la fecha, tres pacientes han recibido una dosis única de Seprehvir a través de su IPC, tres han recibido dos dosis y cinco han recibido cuatro dosis con el reclutamiento de un paciente adicional requerido en el nivel de cuatro dosis para completar el ensayo. Seprehvir se tolera bien con un número limitado de eventos adversos transitorios posiblemente relacionados identificados.
En el estudio de aumento gradual de dosis de fase I en tumores que no son del SNC, tres pacientes han recibido una única administración intratumoral de 1x105 u.i. de Seprehvir, dos pacientes han recibido una única administración intratumoral de 2x106 u.i. de Seprehvir, un paciente ha recibido una única administración intratumoral de 2x106 u.i. de Seprehvir en dos ocasiones distintas y tres pacientes han recibido una única administración intratumoral de 1x107 u.i. de Seprehvir hasta la fecha. La sección intratumoral de este estudio ahora está cerrada al reclutamiento.
Justificación del estudio
El seprehvir es un virus oncolítico que se replica y lisa las células en división de los tumores, pero no se replica en las células posmitóticas normales. Seprehvir también tiene potencial de vacunación contra el cáncer con la inducción de respuestas inmunitarias antitumorales observadas en pacientes con mesotelioma (MPM)
Basándose en este fenotipo de replicación selectiva y la falta de toxicidad atribuible observada en modelos de dosificación sistémica preclínica, junto con el perfil de seguridad clínica demostrado en 96 pacientes tratados con administración localizada de Seprehvir, se propone un estudio en pacientes con tumores sólidos avanzados recurrentes/metastásicos. La dosis inicial será 1 x 107 u.i. basada en la dosis actual administrada locorregionalmente utilizada en el estudio MPM de los presentes inventores y respaldada por estudios de biodistribución murina y la dosis máxima de las dosis aprobadas por la FDA que se utilizarán en la sección sistémica del estudio en tumores sólidos que no son del SNC en niños y adolescentes.
Dado que se considera muy importante analizar el tejido tumoral en busca de evidencia de replicación y lisis celular de Seprehvir, se realizarán biopsias pretumorales y biopsias o extirpaciones posteriores al tratamiento para todos los pacientes.
Objetivos y criterios de valoración
Objetivo primario: Evaluar la seguridad, tolerabilidad y localización tumoral de la administración IV repetida de Seprehvir en pacientes con tumores sólidos en recaída o refractarios
Objetivo secundario: Evaluar la respuesta inmunitaria del paciente después de la administración de Seprehvir Criterio de valoración primario: La seguridad y tolerabilidad, en términos de la aparición de DLT, se evaluará mediante la realización de las siguientes evaluaciones de seguridad en puntos de tiempo predefinidos durante el estudio: • Examen físico, incluyendo signos vitales
• EGG
• Análisis de los parámetros de laboratorio de la siguiente manera.
Hematología: hemograma completo, incluido el recuento diferencial de glóbulos blancos, hemoglobina y hematocrito; parámetros de coagulación que incluyen el tiempo de protrombina (PT) y el tiempo de tromboplastina parcial activada (APPT)
Bioquímica: urea, creatinina, sodio, potasio, proteína total, bilirrubina total, alanina aminotransferasa (ALT), aspartato aminotransferasa (AST), Y-glutamiltranspeptidasa, lactato deshidrogenasa (LDH), fosfatasa alcalina, albúmina, calcio, fósforo, glucosa, creatina quinasa
• Excreción de virus en muestras de orina y frotis bucales
La evidencia de la replicación de Seprehvir se evaluará utilizando muestras de plasma/suero y tejido tumoral mediante: ◦ PCR para la detección de genomas de Seprehvir
◦ IHQ de antígenos de Seprehvir en biopsia/tejido extirpado
Los eventos adversos se registrarán durante todo el período de estudio.
Criterios de valoración secundarios: La respuesta inmunitaria a la administración de Seprehvir se evaluará realizando lo siguiente en puntos de tiempo predefinidos durante el estudio:
• Medición de IgG e IgM anti-HSV en circulación en muestras de plasma
• Análisis de las células inmunitarias en circulación y localizadas en el tumor mediante el perfil de las células inmunitarias y la aparición de respuestas inmunitarias antitumorales
• Evaluaciones farmacodinámicas en muestras de plasma/suero y tejido tumoral
◦ Marcadores tumorales (CEA, Ca19-9, Ca15-3, Ca125, LDH, PSA según corresponda)
◦ Biomarcadores de la actividad de Seprehvir que incluyen, entre otros, IFNgamma y citocinas y quimiocinas de Th1 relacionadas, HMGB1, HSP70 y 90
◦ Histología e inmunohistoquímica para necrosis, apoptosis, infiltración inmunitaria
Diseño del estudio
El presente estudio de Fase I se llevará a cabo en dos sitios en el Reino Unido.
Este es un estudio de Fase I, sin enmascaramiento, con aumento gradual de dosis para evaluar la seguridad, tolerabilidad y localización tumoral de Seprehvir, un virus del herpes simple con capacidad de replicación selectiva, administrado por vía IV en 36-40 pacientes con tumores sólidos avanzados o metastásicos no extirpables confirmados histológicamente que son refractarios a la terapia convencional.
El estudio seguirá un diseño 3+3 para explorar la seguridad y la tolerabilidad y la localización del tumor de hasta 8 administraciones IV de Seprehvir, a 2 niveles de dosis (1 x 107 ui y 1 x 108 ui).
La dosis inicial será de 1 x 107 ui, administrada IV en 4 ocasiones semanales los días 1, 8, 15 y 22. Luego, la dosis aumentará a 1x108 ui y Seprehvir administrado por vía intravenosa en 4 ocasiones semanales los días 1, 8, 15 y 22. Se probarán otros dos regímenes de dosificación a 1x108 ui. Los pacientes recibirán un solo ciclo de 4x Seprehvir IV los días 1, 5, 8 y 13 o dos ciclos de esta pauta de dosificación con una semana de diferencia.
El período de evaluación de DLT comprenderá los primeros 12 días después de la última dosis intravenosa. El reclutamiento en cada cohorte será secuencial, por lo que el primer paciente a ser tratado debe haber completado con éxito el período de evaluación de DLT sin experimentar una DLT, antes de que el siguiente paciente sea tratado con ese nivel de dosis. Se observará el intervalo de dosificación de doce días para todos los pacientes posteriores. Inicialmente, se tratará a tres pacientes en una cohorte determinada. Si alguno de estos 3 pacientes experimenta una DLT durante el período de evaluación de la DLT, otros 3 pacientes (un total de seis) serán tratados con ese nivel de dosis. Después de que el último paciente de cada cohorte complete el período de evaluación de DLT, el investigador principal y el patrocinador recopilarán y revisarán todos los datos de seguridad de laboratorio y eventos adversos disponibles, y se tomará una decisión con respecto a la progresión al siguiente nivel de dosis.
Los pacientes que no completen el período de evaluación de DLT por razones distintas a la toxicidad serán reemplazados con el propósito de evaluar la toxicidad.
Toxicidades que limitan la dosis
La definición de la DLT de Seprehvir se realizará de acuerdo con los Criterios de terminología común para eventos adversos del Instituto Nacional del Cáncer (NCI) [NCI CTCAE Versión 4]. DLT hematológica:
• Neutropenia < 0,5 x 109/l por > 5 días
• Neutropenia < 1 x 109/l con fiebre
• T rombocitopenia < 25 x 109/l acompañado de sangrado o trombocitopenia < 10 x 109/l
DLT no hematológica:
• Cualquier toxicidad de grado 3 o 4 que no esté relacionada con la progresión del tumor, con la excepción de ◦ Síntomas similares a los de la gripe de grado 3 (que incluyen fiebre, escalofríos y malestar) en ausencia de una profilaxis adecuada
◦ Náuseas de grado 3, vómitos y dolor abdominal a menos que persistan durante > 2 días a pesar de la profilaxis adecuada
◦ Las anomalías de laboratorio aisladas > Grado 3 que se resuelven a < Grado 1 en < 7 días sin secuelas clínicas o necesidad de intervención terapéutica no se considerarán una DLT
Si un paciente presenta un recuento absoluto de neutrófilos (RAN) < 500/pl o un recuento de plaquetas < 25.000/pl, las muestras de sangre deben recolectarse cada 2 o 3 días y el tratamiento del estudio debe retenerse hasta que los recuentos se resuelvan o hasta que el RAN vuelva a > 1000/pl y el recuento de plaquetas vuelva a > 75.000/pl. Población de estudio
Criterios de inclusión:
1. Pacientes con tumor sólido confirmado histológicamente que han agotado todas las líneas convencionales de terapia para enfermedad avanzada o metastásica y/o para quienes no existe una terapia convencional
2. Tratamiento previo con agente(s) contra el cáncer, incluida la quimioterapia, inmunoterapia, terapia biológica u hormonal (que no sean agonistas de LHRH), debe completarse > 4 semanas (6 semanas para nitrosoureas o mitomicina C) antes de la administración de Seprehvir, y toda la toxicidad asociada debe resolverse a < grado 1 antes de la administración de Seprehvir
3. La radioterapia previa debe completarse > 14 días antes de la administración de Seprehvir, y toda la toxicidad asociada debe resolverse a < Grado 1 antes de la administración de Seprehvir
4. La cirugía mayor previa debe completarse dentro de las 4 semanas previas a la administración de Seprehvir 5. Edad >18 años (en el momento de la selección)
6. Estado funcional ECOG 0 o 1 en la selección
7. Esperanza de vida > 12 semanas (en el momento de la selección) según lo determine el investigador principal/subinvestigador
8. Capacidad para otorgar un consentimiento informado por escrito, tal como lo demuestra la firma en el formulario de consentimiento del paciente, para comunicarse bien con el investigador y cumplir con las expectativas del estudio
9. Los pacientes masculinos y femeninos en edad fértil deben utilizar un método anticonceptivo aprobado durante el estudio y durante 3 meses después de la última dosis de Seprehvir
Criterio de exclusión:
Un paciente será excluido del estudio si se aplica alguno de los siguientes:
1. Evidencia de enfermedad sistémica grave o no controlada, insuficiencia cardíaca congestiva > Clase 2 de la New York Heart Association (NYHA), infarto de miocardio dentro de los 6 meses, o cualquier afección médica o quirúrgica que el investigador principal considere importante
2. Hipersensibilidad conocida a cualquier excipiente de Seprehvir
3. Metástasis cerebrales que se asocian con un déficit neurológico cambiante que se ha documentado como estable durante <3 meses, o para las que se requieren corticoesteroides sistémicos
4. Valores de laboratorio:
a) RAN <1500/pl
b) Recuento de plaquetas <75.000/gl
c) Hemoglobina <9 g/dl
d) Bilirrubina sérica >1,5 x límite superior de lo normal (LSN) a menos que se sepa que la enfermedad de Gilbert (>2 x LSN) es el único trastorno hepático subyacente
e) Aspartato aminotransferasa (AST) y alanina aminotransferasa (ALT) >2,5 x LSN (AST y ALT >5 x LSN para sujetos con metástasis hepática)
f) Excreción de creatinina dentro del intervalo normal del laboratorio local
g)> 1+ proteinuria en pruebas consecutivas con al menos 24 horas de diferencia
5. Agentes en investigación previos para enfermedades malignas o no malignas dentro de las 4 semanas o 5 semividas (lo que sea más corto) antes del Día 1
6. Tratamiento previo con terapia vírica de cualquier tipo dentro de las 8 semanas posteriores al ingreso al estudio 7. Infección bacteriana sistémica activa o clínicamente probada con hepatitis B (HBV) o C (HCV) o evidencia de infección por el virus de inmunodeficiencia humana (HIV)
8. Embarazo o lactancia
9. Antecedentes de una segunda neoplasia maligna, excepto aquellas tratadas con intención curativa> 3 años antes en ausencia de recidiva y cáncer de piel de células basales o cáncer de cuello uterino in situ
Tratamiento e intervenciones
Los pacientes asistirán a las visitas del estudio clínico durante la selección y los días 1,8, 15 y 22 para la administración IV de Seprehvir al primer nivel de dosis de 1x107 ui (Figura 53). Luego, la dosis se aumentará gradualmente a 1 x108 ui y los pacientes asistirán a las visitas del estudio clínico durante la selección y los días 1, 8, 15 y 22 para la administración intravenosa de seprehvir a esta dosis (Figura 53). Se probarán otros dos regímenes de dosificación a 1x108 ui. Los pacientes recibirán un solo ciclo de 4x de Seprehvir IV los días 1,5, 8 y 13 o dos ciclos de esta pauta de dosificación con una semana de diferencia (Figura 53). Luego, los pacientes se someterán a una biopsia o extirpación, 4-7 días después de la dosis final.
Período de selección: Biopsia del tumor dentro de los 14 días anteriores a la primera dosis de Seprehvir (día 1). Ciclo de tratamiento: Días 1 a 22, 1 a 13 o 1 a 32 (Figura 53).
Duración y frecuencia
Seprehvir se administrará el día 1 de cada ciclo de dosis de 4 a 8 hasta que se desarrolle una toxicidad grave o se retire el consentimiento.
Evaluación
Examen físico, signos vitales, ECG, análisis de sangre de rutina (hematología, coagulación química clínica), respuesta inmunitaria al HSV (IgG/IgM), muestra de orina y frotis bucal para la evaluación de la excreción vírica tomada al inicio de la evaluación inicial, seguido de los días 1, 8, 15, 22, 36 si hay inyecciones semanales, los días 1, 5, 8, 13, 26 si son 2 inyecciones/semana o los días 1, 5, 8, 13, 21, 25, 28, 32 y 46 si se administran 2x2 inyecciones por semana.
La sangre de HSV (IgG/IgM) y perfil de células inmunitarias (FACS) tomadas en la preselección, en el momento de la biopsia/cirugía y al final de la visita del estudio.
Evaluación adicional de viremia (sangre de PCR del HSV-1) realizada a las 3, 6 y 24 horas después de la administración.
Replicación de seprehvir y reclutamiento de células inmunitarias (HSV-1 PCR e IHC): muestras de tejido tumoral tomadas en una biopsia previa al tratamiento y una cirugía o biopsia posterior al tratamiento.
Seguimiento: La visita de finalización del estudio se realizará 14 días después de que el sujeto haya interrumpido el tratamiento del estudio. Se realizará un seguimiento de todas las toxicidades relacionadas con el Seprehvir hasta la visita de finalización del estudio o hasta que todas las toxicidades relacionadas con el tratamiento se hayan resuelto a < Grado 2, se hayan estabilizado o hayan vuelto a las condiciones iniciales.
Ejemplo 7: ensayo de fase I de HSV1716 en pacientes con tumores sólidos no del sistema nervioso central (no del SNC)
El ensayo clínico NCT00931931 es una investigación sobre el uso de HSV1716 en pacientes con tumores sólidos no del sistema nervioso central (no del SNC) (típicamente sarcomas y neuroblastoma) y tiene un diseño de estudio de dos partes. La parte 1 del estudio especifica una dosis única de virus. Los participantes que experimentan al menos una enfermedad estable o una recaída después de una determinación de enfermedad estable, pueden ser cualificados para dosis posteriores en la Parte 2. Hay dos secciones de tratamiento: una vía intratumoral en la que los participantes con enfermedad localizada reciben HSV1716 como una inyección intratumoral; y una vía intravenosa en la que los participantes con enfermedad metastásica reciben HSV1716 por vía intravenosa.
La aprobación de la FDA para la administración sistémica de Seprehvir en un ensayo clínico fue respaldada por estudios in vivo de toxicología y biodistribución para Seprehvir IV y estudios extensos de eficacia preclínica en modelos de xenoinjerto murino.
Los participantes inscritos en el ensayo ahora han comenzado a recibir HSV1716. Se inscriben 9 pacientes en la sección de administración intravenosa. La infusión intravenosa ha comenzado a un nivel conservador con una dosis única de 2x106 u.i. de HSV1716. Los resultados iniciales de los primeros 4 pacientes demuestran evidencia de que HSV1716 está llegando al tumor y se está replicando en él.
Se utilizó el análisis de PCR de muestras de sangre obtenidas de los pacientes en varios puntos de tiempo para identificar la presencia ("Pos") o ausencia ("Neg") de ADN del HSV-1. Los resultados se muestran en las Figuras 58 y 61 y no indican evidencia de HSV1716 en la circulación inmediatamente después de la infusión intravenosa (día 0 después de la infusión).
Las muestras de sangre se sometieron a cultivo en tubo de fondo plano. Todos los cultivos para HSV1716 viable también fueron negativos en todos los puntos temporales
Sin embargo, para el día 4, es notable que en 2/4 pacientes reaparece una señal en las muestras de sangre recolectadas y analizadas para ADN del HSV mediante PCR. Esta señal es consistente con un estallido inicial de replicación de HSV1716 en el tumor después de la administración y el desprendimiento de ADN de HSV1716 de regreso a la circulación. En 1 de 4 pacientes, la señal persistió hasta el día 14. Esto es alentador dado que el tratamiento implicó una dosis única a título bajo. En 1 paciente, la señal no se materializó hasta el día 28.
Estos datos muestran que el virus del herpes simple administrado a la sangre se absorbe inmediatamente de manera que las partículas víricas intactas no son detectables en la sangre. El ADN vírico tampoco es detectable inmediatamente después de la administración, pero es detectable varios días después de la administración. Esto apoya la teoría de que el HSV1716 es absorbido rápidamente por las células o se neutraliza después de la administración intravenosa, pero puede alcanzar el tejido tumoral donde puede infectar, replicar y lisar células, lisis de células tumorales que liberan ADN vírico que es detectable en la sangre. Se han observado resultados de PCR similares en el día 4 después de la administración intratumoral guiada por imágenes de HSV1716 en algunos pacientes de este estudio y la similitud en el patrón entre las muestras de sangre de PCR tanto por inyección intratumoral como por infusión intravenosa es significativa.
Los datos farmacocinéticos de los dos primeros pacientes tratados con Seprehvir intravenoso indican una pérdida inicial de la señal de entrada durante las primeras 24 horas después de la infusión intravenosa con la posterior reaparición de la señal el día 4. El cuarto paciente IV tuvo una señal positiva el día 28 (Figura 59). Apoyo de la replicación intratumoral (los pacientes intratumorales también han mostrado este patrón de aparición de1HSV en la circulación).
Hasta la fecha, no se ha detectado ningún virus en la circulación del tercer paciente con administración IV.
Caso de estudio - paciente HSV13.
Este es el cuarto paciente que recibe Seprehvir por administración intravenosa. El paciente es un varón caucásico de 25 años diagnosticado con sarcoma de Ewing (lesión primaria en tibia, lesión metastásica en pulmón) e inscrito en el estudio el 21 de abril de 2016. HSV13 recibió una dosis única de 2x106 ufp de Seprehvir por infusión intravenosa.
La selección de PET/CT (Figuras 60 y 61) reveló un bajo nivel de valor de captación estandarizado (VCE) en la preselección (no se dispone de PET digital), el día 14 después de la administración de Seprehivir se observó un brote (pseudoprogresión) con un VCE aumentado. El día 28 después de la administración de Seprehivir se observó un retorno al VCE de bajo nivel. Se reconoce el efecto de la "pseudoprogresión" poco después del tratamiento para los agentes biológicos.
Se ha observado un patrón similar en el paciente HSV06 (que recibió Seprehvir por administración intratumoral).
Caso de estudio - paciente HSV07
Este paciente recibió Seprehvir por administración intratumoral. El paciente es un varón de 8 años con diagnóstico de rabdomiosarcoma recurrente (eRMS en estadio III de 13 cm) de localización retroperitoneal. El tratamiento previo incluye cirugía, radiación (41,4 Gy de lecho tumoral/36 Gy LN), quimioterapia (VAC según D9803 - remisión; Recaída: VI, Ciclo/topo, IE por ARST0121; PD: Vinorelbina, citox oral, temsirolimus; PD: Vinorelbina, citox oral, Avastina). Las complicaciones incluyen AKI por uropatía obstructiva y stents ureterales, nefrostomías.
HSV07 mostró hallazgos interesantes de PET/CT (Figuras 62 y 63). Una PET de preinyección el 28 de mayo de 2014 identificó un sitio en la masa tumoral para inyección. El escaneo por PET el día 14 tras la 1a inyección indicó enfermedad estable en el lugar de la inyección - 2a inyección administrada. Punto caliente de PET en un sitio distante de la 1a inyección el día 28. Punto caliente elegido como sitio para la 2a inyección el 27 de junio de 2014. El punto caliente de PET desapareció el 24 de julio de 2014.
Análisis
El SHV se detecta en pacientes que reciben una única dosis baja intravenosa (2x106 ufp) de Seprehvir. Esta es una dosis baja, similar a las dosis normalmente utilizadas en experimentos con ratones. Los experimentos en ratones suelen utilizar una dosis de 1x106 o mayor, lo que significa que después del aumento para la administración humana (considerando la masa humana y el volumen sanguíneo), la dosis esperada requerida sería de aproximadamente 1x109 ufp o superior. Tal dosis proporcionaría nuevos desafíos para (i) demostrar la seguridad de una dosis tan alta y (ii) fabricar cantidades suficientes de virus. El hallazgo de que un efecto está presente en una dosis tan baja como 1x106 ufp significa que la administración intravenosa de dosis en el intervalo de 1x107 hasta 1x108 representa un enfoque viable para el tratamiento de tumores en pacientes humanos. Los resultados de nuestro estudio de pacientes con mesotelioma (Ejemplo 1) también son consistentes con múltiples dosis sistémicas de Seprehvir que llevan a una respuesta de Th1 sostenida.
No se detecta HSV inmediatamente después de la administración del virus pero, sorprendentemente, una señal de HSV está reapareciendo en 3 de cada 4 pacientes después de al menos varios días. La reaparición de la señal concuerda con los resultados observados en pacientes que recibieron administración intratumoral de Seprehvir mediante tecnología guiada por imágenes (compare las secciones de IV e ITu en la Figura 59).
Los niveles de ADN del HSV detectados por PCR cuantitativa son aproximadamente equivalentes a la dosis administrada, que es un claro indicador de que el virus se está replicando. Los experimentos de los presentes inventores sobre la estabilidad de Seprehvir en sangre humana (Ejemplos 11 a 13) muestran que Seprehvir tiene una vida media corta en sangre humana. Por lo tanto, la observación de los presentes inventores es consistente con suficiente virus que alcanza el tumor y se replica en él.
El protocolo de infusión intravenosa ha sido bien tolerado, sin reacciones adversas hasta ahora.
Estas observaciones son significativas. Contrariamente al punto de vista establecido (p. ej., véase Russell et al., (Oncolytic virotherapy. Nature Biotechnology Vol. 30 N.° 7 de julio de 2012) y Seymour y Fisher (British Journal of Cancer (2016) 114, 357-361)), los datos que surgen de este ensayo indican que Seprehvir puede sortear con éxito los obstáculos innatos presentados por la sangre humana y el sistema inmunitario humano, puede replicar y expandir la población vírica a niveles terapéuticamente eficaces y alcanzar el tejido tumoral. Esto abre la puerta a un tratamiento alternativo de tumores de difícil acceso mediante inyección intratumoral.
Descripción de NCT00931931
Título oficial: Un estudio de fase I de aumento de dosis de HSV1716 mutante del virus del herpes simple 1 intratumoral o intravenoso en pacientes con tumores sólidos refractarios del sistema nervioso no central (no SNC).
Fin
Los pacientes con tumores sólidos en recaída, como sarcomas y neuroblastoma, tienen una escasa supervivencia, generalmente < 20 %. Existe una necesidad urgente de nuevos tratamientos que sean seguros y eficaces.
HSV1716, un virus oncolítico, es un virus del herpes simple (HSV) mutante de tipo I, delecionado en el gen RL1 que codifica la proteína ICP34.5, un determinante específico de la virulencia. Los mutantes que carecen del gen RL1 son capaces de replicarse en células en división activa pero no en células diferenciadas terminalmente, un fenotipo que se aprovecha para eliminar selectivamente células tumorales. En estudios clínicos previos, se ha demostrado que HSV1716 es seguro cuando se inyecta en dosis de hasta 105 unidades formadoras de placa (ufp) directamente en el glioma humano de alto grado y en el cerebro normal adyacente al tumor, después de la extirpación de un glioma de alto grado. En un estudio de extensión, se ha demostrado que HSV1716 es seguro cuando se inyecta en una dosis de hasta 106 ufp directamente en tumores cerebrales.
Se ha demostrado la replicación de HSV1716 en glioblastoma humano in situ. Después de una única administración de HSV1716 mediante inyección directa en el tumor activo recurrente o en el cerebro adyacente al tumor, algunos pacientes han vivido más de lo esperado. En parte, el presente estudio busca evaluar la seguridad de una sola inyección de HSV1716 en el tratamiento de tumores sólidos extracraneales en adolescentes y adultos jóvenes. HSV1716 también ha demostrado ser seguro cuando se administra mediante inyección intratumoral directa en pacientes con carcinoma escamoso de cabeza y cuello y en pacientes con melanoma maligno.
Se ha demostrado la replicación de mutantes de HSV en sarcomas humanos y neuroblastoma en células cultivadas y modelos de xenoinjertos humanos. Este estudio está diseñado en dos partes. La PARTE 1 del estudio especifica una dosis única de virus. Los participantes que experimentan al menos una enfermedad estable o una recaída después de una determinación de enfermedad estable, pueden ser cualificados para dosis posteriores en la PARTE 2. La PARTE 2 requiere la firma de un consentimiento por separado.
Medidas de resultado primarias:
Determinar si la inyección intratumoral o las infusiones intravenosas de HSV1716 son seguras en adolescentes y adultos jóvenes con tumores sólidos distintos del SNC.
Medidas de resultado secundarias:
Medir la respuesta inmunitaria antivírica en pacientes con cáncer refractario tratados con HSV1716.
Secciones de tratamiento
Vía intratumoral: los participantes con enfermedad localizada reciben HSV1716 como una inyección intratumoral. Vía intravenosa: los participantes con enfermedad metastásica reciben HSV1716 por vía intravenosa.
Afección
Los participantes pueden tener una de las siguientes afecciones: rabdomiosarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Ewing, sarcoma de tejidos blandos, neuroblastoma, tumor de Wilms, tumor maligno de la vaina del nervio periférico, cordoma clival, tumores sólidos no del SNC.
Elegibilidad
Edades elegibles para estudiar: 7 años a 30 años
Géneros elegibles para estudiar: Ambos
Acepta voluntarios sanos: No
Criterios de inclusión:
Inclusión de mujeres y minorías: El estudio está abierto a todos los participantes independientemente de su género o etnia.
Inclusión para inyección intratumoral: El sujeto debe tener 1-3 lesiones susceptibles de administración de HSV1716 con aguja si son superficiales; con aguja y/o catéter si es profundo o pulmonar, mediante radiología intervencionista sin riesgo indebido. La(s) lesión(es) deben cumplir con criterios de tamaño específicos.
Inclusión para administración intravenosa: El sujeto debe tener enfermedad metastásica o una lesión que no se considere adecuada para inyección directa.
Edad: Los sujetos deben ser mayores o iguales a 7 años y menores o iguales a 30 años al momento de firmar el consentimiento (ingreso al estudio).
Diagnóstico histológico: Los sujetos deben haber tenido una verificación histológica de un tumor sólido fuera del SNC en el momento del diagnóstico original. El tumor debe ser susceptible de administración de HSV1716 sin riesgo indebido. La enfermedad debe considerarse refractaria a la terapia convencional o para la que no existe una terapia convencional.
Enfermedad metastásica: Los sujetos que tienen metástasis en el cerebro son elegibles para el brazo intratumoral de este estudio; sin embargo, no se considerará la inyección en sitios metastásicos dentro del cerebro. Los sujetos que tienen metástasis en el cerebro son elegibles para la sección intravenosa de este estudio solo si esas metástasis han sido tratadas y ya no están activas.
Nivel de desempeño: Karnofsky mayor o igual a 50. Los sujetos que no pueden caminar debido a la parálisis, pero que están en una silla de ruedas, se considerarán ambulatorios a los efectos de evaluar la puntuación de rendimiento. Los sujetos deben haberse recuperado completamente de los efectos tóxicos agudos de toda la quimioterapia previa, inmunoterapia o radioterapia antes de ingresar a este estudio;
Quimioterapia mielosupresora: No debe haber recibido dentro de los 28 días de la entrada en este estudio (42 días si la nitrosourea previa) acompañada de recuperación hematopoyética, o 14 días después de suspender la terapia no mielosupresora siempre que se cumplan los requisitos hematopoyéticos;
Biológico (agente antineoplásico): No se debe haber recibido dentro de los 7 días posteriores a la entrada en este estudio (21 días si es anterior a VEGF-Trap y al menos 3 vidas medias después de la última dosis de un anticuerpo monoclonal). Para los agentes biológicos que tienen efectos adversos conocidos que ocurren más allá de 7 días después de la administración, este período debe extenderse más allá del tiempo durante el cual se sabe que ocurren los eventos adversos;
Sin radioterapia mayor o igual a 14 días para XRT paliativo local (puerto pequeño): debe haber transcurrido más o igual a 6 meses si la XRT craneoespinal previa o si la radiación de la pelvis es mayor o igual al 50 %; debe haber transcurrido más de o igual a 42 días si otra radiación sustancial de la médula ósea;
Trasplante de células madre inmunoablativo o mieloablativo (SCT): deben haber transcurrido más de o igual a 6 meses desde el trasplante autólogo anterior. Los sujetos no deben tener la enfermedad de injerto contra huésped después de un autotrasplante;
Agente investigador: debe haber transcurrido más de o igual a 28 días desde el tratamiento con un agente de fase I diferente;
Los sujetos con trastorno convulsivo pueden inscribirse si toman anticonvulsivos y están bien controlados. En el momento de la inscripción, las afecciones específicas del SNC deben ser inferiores o iguales a la toxicidad de Grado II según los criterios CTCAE 3.0;
Todos los sujetos deben tener un recuento sanguíneo adecuado definido como: recuento absoluto de neutrófilos periféricos (RAN) mayor o igual a 750/ul, Recuento de plaquetas mayor o igual a 100.000/ul (puede ser un valor posterior a la transfusión), Hemoglobina mayor o igual a 9,0 g/dl (puede ser un valor posterior a la transfusión) Función renal adecuada definida como: Creatinina sérica menor o igual a 1,5 x límite superior de lo normal (LSN) para la edad o excreción de creatinina o GFR de radioisótopos mayor o igual a 70 ml/min/1,73 m2;
Función hepática adecuada definida como: Bilirrubina total menor o igual a 2.0 x LSN para la edad y SGPT (ALT) menor o igual a 2.5 x LSN para la edad y albúmina mayor o igual a 2 g/dl, GGT < 2,5 x LSN
Función cardíaca adecuada definida por; Fracción de acortamiento > 25 % por ecocardiograma o fracción de eyección por encima del límite institucional inferior normal según MUGA, Sin anomalías focales del movimiento de la pared según lo determinado por cualquiera de los estudios anteriores, ECG sin evidencia de isquemia o arritmia significativa Coagulación adecuada definida por: PT/INR y PTT < 1,5 x LSN para la edad;
Enfermedad infecciosa: Evidencia documentada de pruebas negativas para la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B, anticuerpo de la hepatitis C, anticuerpos contra el VIH1 y el VIH2 en los tres meses anteriores al ingreso al estudio. Los sujetos que no tengan dicha evidencia deben someterse a las pruebas adecuadas antes de la administración del virus;
Criterio de exclusión:
Trasplante de células madre: Ningún sujeto que haya recibido un trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas es elegible;
Embarazo o lactancia: No hay información disponible sobre toxicidades teratogénicas o fetales en humanos. Se excluyen las mujeres embarazadas y se deben realizar pruebas de embarazo en las niñas que son posmenárquicas. Los hombres o mujeres en edad reproductiva no pueden participar a menos que hayan acordado utilizar un método anticonceptivo eficaz desde el momento del ingreso al estudio hasta un período de no menos de cuatro meses después de la inyección final de HSV1716. Por el mismo período de tiempo, las mujeres que participan en este estudio deben estar de acuerdo en no amamantar;
Consentimiento: No puede o no quiere dar consentimiento/asentimiento informado voluntario;
Leucemia: Los sujetos con leucemia no son elegibles para participar en el estudio;
Infección o cualquier otra enfermedad sistémica grave o afección médica o quirúrgica considerada significativa por el investigador principal;
Administración de cualquier agente en investigación o sin licencia dentro de las 4 semanas posteriores al ingreso al estudio;
Factor(es) de crecimiento: Sin PEG-GCSF dentro de los 14 días posteriores a la inyección del virus (día 0);
Antivíricos anti-HSV: Los sujetos cuyos médicos determinan que la terapia antivírica anti-VHS (tal como aciclovir, ganciclovir, foscarnet, etc.) no se puede suspender de forma segura desde 2 días antes de la inyección hasta 28 días después de que la inyección no deberían estar en el estudio.
Los sujetos que tengan otras afecciones que, en opinión del investigador, contraindiquen la recepción de HSV1716 o indiquen la incapacidad del sujeto para seguir los requisitos del protocolo.
Ejemplo 8 - Una evaluación de fase Ib/2 sin enmascaramiento de la seguridad y eficacia de la administración intravenosa del virus del herpes simple oncolítico HSV1716 y pembrolizumab en comparación con pembrolizumab solo y HSV1716 solo en sujetos con cáncer de cabeza y cuello en estadio III o estadio IV. En la parte de la Fase Ib de este estudio, El objetivo del estudio es demostrar que e1HSV1716 se dirige al tumor cuando se administra por vía intravenosa en pacientes con cualquier cáncer de cabeza y cuello operable que están indicados para recibir una extirpación tumoral.
Cada paciente recibirá hasta 4 dosis de HSV1716 por infusión intravenosa a dos niveles de dosis (1x107 u.i. y 1x108 u.i.). Cada dosis se administrará entre 1 y 7 días después de la dosis anterior. La dosis final se administrará entre 1 y 14 días después de la extracción del tumor. El material del tumor del paciente se recolectará durante el procedimiento y se almacenará para su análisis para confirmar la evidencia de la localización de1HSV1716 en el tumor y el efecto inmunitario o biológico antitumoral. El análisis implicará cultivo en tubo de fondo plano, análisis inmunohistoquímico del tejido tumoral, qPCR para detectar ADN del HSV y detección de respuesta inmunitaria, p. ej., células inmunitarias infiltrantes, respuesta de citocinas.
Además, la seguridad y tolerabilidad de los dos niveles de dosis se controlarán y compararán cuidadosamente durante el período hasta la extirpación del tumor para confirmar la dosis máxima tolerada (MTD) para la parte de Fase II del Estudio. Se reclutarán 3 pacientes para cada nivel de dosis, pero en el caso de una toxicidad limitante de dosis única en cualquier nivel de dosis, la cohorte se ampliará a 6 pacientes de acuerdo con el diseño habitual de aumento gradual de dosis "3+3".
En la parte de la Fase 2 de este estudio, los objetivos de este estudio son evaluar las siguientes medidas en un estudio multicéntrico, controlado, sin enmascaramiento. Aproximadamente 180 pacientes serán reclutados y distribuidos al azar 1:1:1 en cada una de las 3 secciones de tratamiento:
Sección 1: pembrolizumab solo;
Sección 2: HSV1716 solo;
Sección 3: HSV1716 y pembrolizumab.
Pembrolizumab (también conocido como MK-3475; lambrolizumab, Keytruda™; Merck, EE. UU.) es un anticuerpo humanizado que se une a PD-1.
Medidas de resultado primarias:
• Supervivencia libre de progresión (PFS) según los criterios de respuesta inmunitaria (''irRC'') para todos los participantes
• Supervivencia general (SG) de todos los participantes
Medidas de resultado secundarias:
• PFS por irRC en participantes con expresión positiva para PD-L1
• SG en participantes con expresión positiva para PD-L1
• Tasa de respuesta objetiva (ORR) por irRC en todos los participantes
• ORR por irRC en participantes con expresión positiva para PD-L1
Tiempo hasta la progresión del tumor (TTP) por IRRC en todos los participantes
TTP por irRC en participantes con expresión positiva para PD-L1
Porcentaje de participantes que experimentan EA de grado 3-5
Tiempo hasta el evento adverso (EA) de primer grado 3-5
Porcentaje de participantes que experimentan excreción vírica del HSV1716
Porcentaje de participantes que experimentan una respuesta inmunitaria antivírica a1HSV1716
En la sección 1, pembrolizumab se administra por vía intravenosa a una dosis de 200 mg el día 1 de cada ciclo de 3 semanas.
En las secciones 2 y 3, HSV1716 se administra mediante perfusión intravenosa a una dosis de hasta 1x108 u.i. en cada ocasión o en la dosis de HSV1716 establecida como MTD en la parte de Fase 1b del estudio. Para infusión intravenosa de HSV1716, los viales de HSV1716 se diluirán en 250 ml de solución de Ringer lactato y se administrarán durante una hora. El virus se infundirá a través de un acceso IV periférico. Se seguirán las precauciones respiratorias y de contacto hospitalario estándar, por estándares institucionales de operación para este tipo de producto. La pauta de dosificación para HSV1716 comienza el día 1 y continúa cada semana a partir de entonces hasta que se hayan administrado hasta 8 dosis (es decir, días 1,8, 15, 22, 29, 36, 43 y 50).
En la sección 3, se administran pembrolizumab a una dosis de 200 mg y HSV1716 hasta 1x108 u.i. de acuerdo con la siguiente pauta. El tratamiento puede tener lugar el mismo día. Cuando un retraso en el inicio de pembrolizumab esté clínicamente justificado, se puede administrar 1 ciclo de HSV1716 antes de comenzar con pembrolizumab.
Figure imgf000052_0001
En las secciones 1 y 3, los sujetos continuarán recibiendo tratamiento con pembrolizumab hasta que se alcance un número predeterminado de dosis, se observe toxicidad limitante de la dosis o se observe progresión de la enfermedad. Los tiempos especificados anteriormente están sujetos a una tolerancia de /- 3 días.
Los resultados pueden estratificarse por estadio de la enfermedad, estado de PD-L-1 del tumor, ciclos de tratamiento y respuesta inmunitaria antivírica.
Los sujetos son tratados en cada sección del estudio hasta que tenga lugar el primero de: respuesta completa; progresión de la enfermedad según el irRC; o intolerancia al tratamiento del estudio. Para infusión intravenosa de HSV1716, los viales de HSV1716 se diluirán en 250 ml de Ringer lactato y se administrarán durante una hora. El virus se infundirá a través de un acceso IV periférico. Se seguirán las precauciones respiratorias y de contacto hospitalario estándar, por estándares institucionales de operación para este tipo de producto.
Ejemplo 9: método para seleccionar pacientes para el tratamiento con una combinación de HSV1716 y pembrolizumab
Los pacientes con cáncer de cabeza y cuello que están indicados para cirugía pueden recibir hasta 4 dosis de HSV1716 por infusión intravenosa antes de la extracción quirúrgica. El tejido tumoral de la extracción se puede analizar en busca de evidencia de que HSV1716 se dirija al tumor y de una actividad inmunitaria o biológica en respuesta a la inmunoterapia oncolítica. Los pacientes que demuestran tal actividad se pueden seleccionar para ciclos de terapia con HSV1716 después de la cirugía con el objetivo de direccionar a células tumorales residuales en el sitio de extirpación quirúrgica y/o enfermedad metastásica.
Ejemplo 10: preparación de un vial de HSV1716 para infusión intravenosa
La dosis total de virus para cada paciente se diluirá en 250 ml de lactato de Ringer y se administrará durante una hora de acuerdo con las siguientes instrucciones. El virus se infundirá a través de un acceso IV periférico. Se seguirán las precauciones respiratorias y de contacto hospitalario estándar, por estándares institucionales de operación para este tipo de producto.
Los viales congelados de HSV1716 se dispensarán en la farmacia. La preparación para la administración intravenosa se realizará en una sala "limpia" adecuada. Si se requiere el transporte a una sala 'limpia', los viales se colocarán en un recipiente secundario, serán debidamente etiquetados y transportados en hielo seco. La etiqueta incluirá "Vía de administración: intravenosa".
Una bolsa de 250 ml de solución de Ringer lactato para infusión intravenosa también se dispensará de la farmacia y se transportará según sea necesario a la sala "limpia" en preparación para la administración intravenosa. La solución de Ringer lactato debe mantenerse a temperatura ambiente.
Descongelar los viales de HSV1716 de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Una vez descongelados los viales, deben usarse inmediatamente.
Colocar los viales resuspendidos y la bolsa que contiene 250 ml de solución de Ringer lactato (bolsa intravenosa) en una cabina de bioseguridad para preparar el fármaco final HSV1716 para administración intravenosa.
Aspirar 1 ml de la suspensión de virus de cada vial en una jeringa lista para inyección en la bolsa de 250 ml de Ringer lactato a través del puerto de entrada. Mezclar suavemente el contenido de la bolsa intravenosa con un movimiento de balanceo hacia adelante y hacia atrás.
Inmediatamente después de la dilución del producto en investigación en 250 ml de solución de Ringer lactato, etiquetar la bolsa intravenosa que contiene el producto farmacéutico en investigación fina1HSV1716 para la administración intravenosa de acuerdo con las políticas institucionales y las regulaciones estatales y federales aplicables. Transferir inmediatamente al investigador principal u otro personal según corresponda para su uso.
La administración intravenosa debe completarse dentro de un período de tres horas después de la preparación del producto farmacológico final HSV1716.
Tras la preparación de HSV1716 para uso intravenoso, colocar inmediatamente los viales usados en hielo y devolverlos al equipo de bioseguridad del estudio para fines de investigación apropiados o para desactivarlos.

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un virus del herpes simple oncolítico que codifica un gen funcional ICP47 o ICP6 para su uso en un método de tratamiento del cáncer en un sujeto humano, comprendiendo el método administrar por vía intravenosa, intraarterial, intracavidad o intratumoral más de una dosis del virus del herpes simple oncolítico al sujeto en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de una cepa 17 del HSV-1, y comprende además administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor del punto de control inmunitario.
2. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según la reivindicación 1, en donde el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de una diana seleccionada del grupo que consiste en CTLA4, PD-1, PDL-1, TIM-3 o LAG-3.
3. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según la reivindicación 1, en donde el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716 o un mutante del mismo.
4. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según la reivindicación 1 o 2, en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante nulo de ICP34.5.
5. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el método comprende seleccionar un sujeto en el que el virus del herpes simple oncolítico induce o provoca una respuesta inmunitaria de Th1 para el tratamiento con el inhibidor del punto de control inmunitario.
6. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el método comprende la administración del virus del herpes simple oncolítico durante un período de tiempo suficiente para inducir una respuesta de Th1 sostenida en el sujeto.
7. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según la reivindicación 6, en donde el sujeto no recibe el inhibidor del punto de control inmunitario durante el período de tiempo.
8. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el método comprende administrar 2, 3 o 4 dosis del virus del herpes simple oncolítico al sujeto a intervalos regulares.
9. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según la reivindicación 8, en donde el sujeto recibe dosis semanales o quincenales del virus del herpes simple oncolítico durante al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 semanas o 1, 2, 3, 4, 5 o 6 meses.
10. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde la dosis del virus está en el intervalo de 106 a 109 ui.
11. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el virus se administra por vía intravenosa, por ejemplo por infusión.
12. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el virus se administra por vía intratumoral.
13. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el virus se administra por vía intraarterial.
14. El virus del herpes simple oncolítico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde el cáncer es un tumor sólido.
15. Una composición farmacéutica para su uso en terapia, la composición que comprende un virus del herpes simple oncolítico y unacuso inhibidor del punto de control inmunitario, en donde el virus oncolítico codifica un gen ICP47 funcional, en donde el virus del herpes simple oncolítico es un mutante de una cepa 17 de1HSV-1, en donde el inhibidor del punto de control inmunitario es un inhibidor de una diana seleccionada del grupo que consiste en CTL4A, PD-1, PDL-1, TIM-3, LAG-3, CD80, CD86, PD-L2, BTLA, KIR, VISTA, A2aR, B7-H3 y B7H4, y en donde la composición se administra por vía intravenosa o intraarterial.
16. La composición farmacéutica de la reivindicación 15, en donde el virus del herpes simple oncolítico es HSV1716.
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