ES2833929T3 - Agente contra la tuberculosis - Google Patents

Abstract

6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en terapia.

Description

DESCRIPCIÓN

Agente contra la tuberculosis

Campo de la invención

Esta invención se refiere a 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en terapia, incluido el uso como anti-micobacteriano, por ejemplo en el tratamiento de tuberculosis; a composiciones que contienen 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; a combinaciones que comprenden 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y a sales de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona.

Antecedentes de la invención

Mycobacterium es un género en la clase de bacterias denominadas Actinobacteria que es por sí mismo una familia diferenciada conocida como Mycobacteriacae. Mycobacterium contiene diversos agentes patógenos obligados y oportunistas de animales, que pueden ser transmitidos también a seres humanos y provocar enfermedades en seres humanos, exhibiendo así una considerable capacidad potencial zoonótica. Durante las últimas décadas, los miembros del complejo de Mycobacterium avium intracellulare (MAIC) surgieron como agentes patógenos de enfermedades humanas, que incluyen la linfadenitis en niños, enfermedad de tipo tuberculosis pulmonar e infecciones diseminadas (que se producen predominantemente en personas con inmunidad comprometida, particularmente pacientes de SIDA). Análogamente, resultan enfermedades de animales importantes a partir de infecciones en un animal por miembros de este grupo, por ejemplo, tuberculosis aviar y paratuberculosis en rumiantes. El MAIC incluye M. intracellulare y 4 subespecies de M. avium, a saber, M. avium subsp. avium, M. avium subsp. hominissuis, M. avium subsp. silvaticum, y M. avium subsp. paratuberculosis. Aunque los miembros del complejo M. tuberculosis son transmitidos mediante contacto directo con el hospedante, las especies de MAIC son adquiridas predominantemente a partir de fuentes medioambientales, que incluyen el terreno, agua, polvo y alimentos.

Mycobacterium tuberculosis (MTB) es un bacilo de GC elevado, no móvil, aeróbico y pequeño, con una “membrana externa” que es habitualmente gruesa, “cérea”, hidrófoba, con elevado contenido de ácidos micólicos y extremadamente impermeable, lo que hace que las infecciones de micobacteria sean difíciles de tratar. Se cree que un tercio de la población mundial está infectada (incluyendo el MTB latente), pero este número aumenta hasta un 80% de la población en muchos países asiáticos y africanos. Si no se trata, la tasa de mortalidad de infecciones de MTB activas es de más de 50%. Además, la combinación de HIV y MTB es mortal y cada vez hay más cepas de MTB que se están haciendo resistentes a los medicamentos de tratamiento estándar; aproximadamente 300.000 nuevos casos de M. tuberculosis resistente a múltiples fármacos (MDR) se dan a conocer cada año. Los M. tuberculosis resistentes a múltiples fármacos (MDR) son resistentes a isoniazida y rifampicina, y los M. tuberculosis extremadamente resistentes a los fármacos (XDR) son también resistentes a al menos una quinolona y un aminoglicósido. La M. tuberculosis XDR se ha dado a conocer en gran parte del mundo.

Si se suman a estos aspectos la facilidad de transmisión, la globalización de los viajes y la reubicación y emigración en curso de muchos segmentos de la población mundial, y es evidente que el MTB se está convirtiendo en una crisis global.

Han estado disponibles fármacos sintéticos para tratar la tuberculosis (TB) durante más de medio siglo, pero las incidencias de la enfermedad continúan aumentando en todo el mundo. Más de 2 mil millones de personas están actualmente infectadas con M. tuberculosis, siendo latentes la mayoría de los casos, y se estima que se producen por encima de 9 millones de nuevos casos cada año en todo el mundo, dando lugar de 1,7 a 2 millones de muertes por año. Solamente en 2004 se registraron aproximadamente 24.500 nuevas infecciones y cerca de 5.500 muertes cada día. Véase la publicación de Zignol, Met al., M. Surveillance of anti-tuberculosis drug resistance in the world: an updated analysis, 2007-2010. Bull. World Health Organ 2012, 90 (2), 111-119D) La co-infección con HIV está conduciendo a un aumento de la incidencia (Williams, B. G.; Dye, C. Science, 2003, 301, 1535) y la causa de muerte en un 31% de pacientes de SIDA en África puede ser atribuida a la TB. Véase Corbett, E. Let al.,. Arch. Intl. Med., 2003, 163, 1009, Septkowitz, A. et al., Clin. Microbiol. Rev. 1995, 8, 180).

Las limitaciones de la terapia y prevención de la tuberculosis son bien conocidas. La vacuna actualmente disponible, BCG fue introducida en 1921 y no consigue proteger a la mayoría de las personas con posterioridad a la infancia. Según un informe de 2006, “International Standards for Tuberculosis Care”, un documento desarrollado por la entidad Tuberculosis Coalition for Technical Assistance (TBCTA) cuyos socios incluyen las entidades Centers for Disease Control, American Thoracic Society, Tuberculosis Foundation, KNCV, La Organización Mundial de la Salud y la Unión Internacional contra la Tuberculosis y Enfermedades Pulmonares, los pacientes que resultan infectados con la enfermedad activa soportan actualmente dos meses de terapia de combinación con medicinas introducidas hace entre 50 y 60 años, isoniazida (1952), rifampina (1963), pirazinamida (1954) y etambutol (1961), seguido de otros 4 meses de isoniazida y rifampina (también conocida como rifampicina). Alternativamente, la fase de combinación podría incluir isoniazida y etambutol durante seis meses cuando la adherencia no puede ser valorada pero, según este informe, una fase de continuación más prolongada está asociada con una mayor tasa de fallo y recaída, especialmente en pacientes con infección de HIV. Además, como se detalla en este informe, las dosis de fármacos antituberculosis usados se debe adaptar a la recomendación internacional y están especialmente recomendadas combinaciones de dosis fijadas de dos (isoniazida y rifampicina), tres (isoniazida, rifampicina y pirazinamida) y cuatro (isoniazida, rifampicina, pirazinamida y etambutol) fármacos, especialmente cuando no es posible controlar al paciente para asegurarse de que es ingerido el tratamiento.

Es necesaria una dosificación diaria en estas fases del tratamiento y un cumplimiento escaso conduce al surgimiento y extensión de cepas resistentes a múltiples fármacos, que son complicadas de tratar. Los periodos más cortos de agentes más activos que pueden ser tomados menos frecuentemente y que presentan una barrera elevada al surgimiento de resistencia, es decir, agentes que son eficaces contra cepas resistentes a múltiples fármacos de TB (MDR-TB) son urgentemente necesarias. Un informe de marzo de 2013 (http://www.aidsmap.com/Once-weeklycontinuation-phase-TB-treatment-equals-standard-of-care/page/2589498/) sugiere que una combinación de dos fármacos de rifapentina (un derivado de acción prolongada de rifampicina) con moxifloxacina (un antibiótico de fluoroquinolona que no ha sido usado previamente en el tratamiento de TB) puede permitir que el tratamiento de la tuberculosis (TB) se tome una vez a la semana durante la fase de continuación de cuatro meses y consiga el mismo patrón de cuidado que el tratamiento de continuación tradicional de un tratamiento diario con isoniazida y rifampina. Esta fase de tratamiento permitiría que la supervisión del tratamiento se extendiera durante toda la fase de continuación, aumentando la adherencia. Sin embargo, la moxifloxacina no ha sido todavía aprobada para el tratamiento de TB y el protocolo de tratamiento de una vez a la semana todavía no es apoyado o aprobado como un patrón alternativo de tratamiento de cuidado, los grupos reguladores y los niveles internacionales y nacionales necesitarán examinar las evidencias publicadas para determinar si este protocolo de tratamiento de continuación alternativo debe ser recomendado y adoptado. Además, la rifapentina es cara y las interacciones entre rifapentina y fármacos anti-retrovirales en el inhibidor de transcriptasa inversa no nucleósida (NNRTI) y las clases de inhibidores de proteasas pueden impedir su uso en pacientes de TB que son también HIV positivos y tomar medicinas antiretrovirales. Por tanto, en la actualidad, el análisis de costes/ beneficios de un tratamiento de continuación con rifapentina semanalmente frente a rifampicina diariamente todavía no ha sido completamente valorado.

El fármaco Sirturo® (bedaquilina) contra la tuberculosis fue aprobado en los Estados Unidos en diciembre de 2012 y ahora también está aprobodo en la Unión Europea. Otro fármaco contra la tuberculosis, delamanid, también ha obtenido la aprobación reguladora en la Unión Europea como Deltyba®. Sin embargo, ambos están reservados para tuberculosis resistente a los fármacos, que supone solo un 5% de los nuevos casos. La publicación “A 2007 Editorial and News Focus in Nature Medicine” expone muchos aspectos de la TB como agents patógenos, epidemiología, descubrimiento de fármacos y desarrollo de vacunas hasta la fecha (Nature Medicine, 2007, Focus on Tuberculosis, Vol 13(3), pág. 263-312), apreciando que 125 años después del aniversario del descubrimiento de Mycobacterium tuberculosis, más de un tercio de las personas en el mundo están infectadas con M. tuberculosis, y de estas más de 1 de cada 10 desarrollará la enfermedad conocida como tuberculosis, anteriormente conocida como consunción, a lo largo de su vida.

Cuando se asocia con la aparición de cepas resistentes a múltiples fármacos de Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB), la escala del problema se amplifica. La aparición global de bacterias y otros microorganismos resistentes a antibióticos y antimicrobianos en general, plantea una amenaza importante. El despliegue de cantidades masivas de agentes microbianos en la ecosfera durante los últimos 60 años ha introducido una presión selectiva poderosa en cuanto al surgimiento y extensión de agentes patógenos resistentes a antimicrobianos. Por lo tanto, hay una necesidad de descubrir y desarrollar nuevas entidades químicas para tratar TB (las tendencias recientes son examinadas en: Grosset JH, Singer TG, Bishai WR. New Drugs for the Treatment of Tuberculosis: Hope and Reality. Int J Tuberc Lung Dis. 2012 Aug;16(8):1005-14).

El documento EP 1655288 describe derivados de pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona como agente antibacteriano para uso en el tratamiento de la infección por Mycobacterium tuberculosis.

La presente invención se refiere a 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona para uso en terapia y, en particular, a su actividad inesperada contra Mycobacterium tuberculosis.

Breve exposición de la invención

En un primer aspecto de la invención, se proporciona 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en terapia.

En un segundo aspecto de la invención se proporciona 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una enfermedad que es resultado de una infección micobacteriana en un mamífero.

En un tercer aspecto de la invención se proporciona 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un mamífero.

En un cuarto aspecto de la invención se proporciona el uso de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero.

En un quinto aspecto de la invención se proporciona una sal de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona.

En un sexto aspecto de la invención se proporciona una sal farmacéuticamente aceptable de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona.

En un séptimo aspecto de la invención se proporciona una combinación de

a) 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y

b) un segundo agente terapéutico.

En un octavo aspecto de la invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende

a) 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y b) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto de la descripción se proporciona un método para destruir una micobacteria y/o inhibir la replicación de una micobacteria en un mamífero infectado con una micobacteria que comprende poner en contacto la micobacteria o tratar el mamífero infectado con la micobacteria, con una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, con el fin de matar la micobacteria y/o impedir la replicación de la micobacteria.

Descripción detallada de la invención

El alcance de la invención está definido por las reivindicaciones. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.Los presentes inventores han encontrado que la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona como se describe aquí muestra perfiles de actividad en los ensayos descritos aquí que sugieren un nuevo modo de acción. Este nuevo perfil biológico sugiere que la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona es particularmente adecuada para ser usada en combinación con compuestos anti-tuberculares actuales y está previsto que consiga una mayor eficacia para tratar animales, incluidos seres humanos, infectados con M. tuberculosis.

La resistencia continúa siendo un aspecto en el tratamiento de la tuberculosis (TB) y una estrategia clínica es centrarse en una combinación temprana con otros fármacos contra TB y promover una valoración temprana de la eficacia de los compuestos en los pacientes. La 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona ofrece una oportunidad única de abordar los aspectos graves que surgen durante el tratamiento de TB, como la resistencia a múltiples fármacos, resistencia a fármacos extensivos, reactividad y/o interacción adversa entre agentes terapéuticos en una combinación de múltiples fármacos y duración del tratamiento, abordando así las necesidades potenciales del paciente.

La presente invención proporciona 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, es decir el compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en terapia.

En una realización, con relación al método aquí descrito para el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un mamífero que lo necesita; o al método aquí descrito para el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero que lo necesita; el mamífero es un ser humano.

Otra realización de la invención proporciona con relación al método descrito aquí para el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un mamífero que lo necesita; o al método descrito aquí para el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero que lo necesita; la infección micobacteriana es una infección de una micobacteria seleccionada de la lista A: Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium incluidas las subespecies (subesp.) Mycobacterium avium subesp. avium, Mycobacterium avium subesp. hominissuis, Mycobacterium avium subesp. silvaticum, y Mycobacterium avium subesp. paratuberculosis; Mycobacterium kansasii, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium simiae, Mycobacterium szulgai, Mycobacterium xenopi, Mycobacterium scrofulaceum, Mycobacterium abscessus, Mycobacteríum chelonae, Mycobacterium haemophilum, Mycobacterium leprae, Mycobacterium marinum, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium parafortuitum, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium vaccae, Mycobacterium bovis, Mycobacterium bovis BCG, Mycobacterium africanum, Mycobacterium canetti, Mycobacterium caprae, Mycobacterium microti, Mycobacterium pinnipedi, Mycobacterium ulcerans, Mycobacterium ntracellulare, complejo de Mycobacterium tuberculosis, (MTC), complejo de Mycobacterium avium (MAC), complejo de Mycobacterium avian-intracellulare (MAIC), ciado de Mycobacterium gordonae; ciado de Mycobacterium kansasii; ciado de Mycobacterium chelonae; ciado de Mycobacterium fortuitum; ciado de Mycobacterium parafortuitum; y ciado de Mycobacterium vaccae.

En una reaiización, con reiación ai método descrito aquí para ei tratamiento de una enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un mamífero que io necesita; o ai método descrito aquí para ei tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero que io necesita; ia infección micobacteriana es una infección por Mycobacterium tuberculosis.

En otra reaiización, con reiación ai método descrito aquí para ei tratamiento de una enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un mamífero que io necesita; o ai método descrito aquí para ei tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero que io necesita; ia infección micobacteriana es una infección de una micobacteria que puede usar coiesteroi como fuente de carbono.

Otra reaiización proporciona un método de tratamiento de una enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un animai, particuiarmente en un mamífero, más particuiarmente en un ser humano, cuyo método comprende administrar ai animai que necesita dicho tratamiento una cantidad eficaz de 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies.

Otra reaiización proporciona, con reiación ai método descrito aquí para ei tratamiento de una enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un mamífero que io necesita, ia enfermedad resuitante de una in fección micobacteriana en un mamífero se seiecciona de ia iista B: tubercuiosis, iepra, enfermedad de Johne, úicera de Buruii o Bairnsdaie, enfermedad de Crohn, enfermedad puimonar o infección puimonar, pneumonia, bursitis, sinovitis, vainas tendinosas, absceso iocaiizado, iinfadenitis, infecciones de ia piei y tejidos biandos, síndrome de Lady Windermere, enfermedad puimonar MAC, compiejo Mycobacterium avium diseminado (DMAC), compiejo Mycobacterium avium intracellulare diseminado (DMAIC), neumopatía de ias saunas, mastitis MAC, piomiositis MAC, Mycobacterium avum paratuberculosis, o enfermedad granuiomatosa. En otra reaiización, con reiación ai método descrito aquí para ei tratamiento de una enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un mamífero que io necesita, ia enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un mamífero es tubercuiosis,

Otra reaiización proporciona un método de tratamiento de una infección bacteriana en un animai, particuiarmente en un mamífero, cuyo método comprende administrar ai animai que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies. Otra reaiización proporciona un método de tratamiento de una infección bacteriana en un animai, particuiarmente un mamífero, en donde ia infección micobacteriana es Mycobacterium tuberculosis.

Otra reaiización de ia invención proporciona un método de tratamiento de una infección micobacteriana en un animai que comprende: administrar ai animai uno cuaiquiera de: (i) una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1 -ii)metii)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies; (ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies; o (iii) una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies, con ei fin de tratar ia infección micobacteriana en ei animai.

Otra reaiización de ia invención proporciona un método de tratamiento de una infección micobacteriana en un animai que comprende: administrar ai animai uno cuaiquiera de: (i) una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1 -ii)metii)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies; (ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies; o (iii) una cantidad terapéuticamente eficaz de una formuiación farmacéutica de 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies, con ei fin de tratar ia infección micobacteriana en ei animai.

En una reaiización, con reiación a ia 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus saies farmacéuticamente aceptabies, para uso en ei tratamiento de una enfermedad resuitante de una infección micobacteriana en un mamífero, o para uso en ei tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero, ei mamífero es un ser humano. En otra reaiización, ia infección micobacteriana es una infección por una micobacteria seieccionada de ia iista A descrita aquí más arriba. En otra reaiización, ia infección micobacteriana es una infección por Mycobacterium tuberculosis. En otra reaiización, ia infección micobacteriana es una infección de una micobacteria que puede usar coiesteroi como fuente de carbono.

La invención proporciona además 6-(4-(2,3-dimetiifenoxi)piperidin-1-ii)metii)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una sai o solavato de la misma farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de una infección micobacteriana en un animal, particularmente en un ser humano. En aspectos relacionados, el mamífero es un ser humano en donde la infección micobacteriana es una infección por Mycobacterium tuberculosis. En una realización, el ser humano con infección por Mycobacterium tuberculosis también está infectado con un retrovirus, incluido un virus de inmunodeficiencia humana.

La invención proporciona además 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un animal, incluido un ser humano. Otra realización de la invención proporciona 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un animal, en donde en donde la enfermedad se selecciona de tuberculosis, lepra, enfermedad de Johne, úlcera de Buruli o Bairnsdale, enfermedad de Crohn, enfermedad pulmonar o infección pulmonar, neumonía, bursitis, sinovitis, vainas tendinosas, absceso localizado, linfadenitis, infecciones de la piel y tejidos blandos, síndrome de Lady Windermere, enfermedad pulmonar MAC, complejo de Mycobacterium avium diseminado (DMAC), complejo de Mycobacterium avium intracellulare diseminado (DMAIC), neumopatía de las saunas, mastitis MAC, piomiositis MAC, paratuberculosis de Mycobacterium avum o enfermedad granulomatosa. En otra realización se proporciona 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un animal, en donde la enfermedad es tuberculosis.

En una realización, el ser humano con una infección por Mycobacterium tuberculosis también está infectado con un retrovirus, incluido un virus de inmunodeficiencia humana.

En una realización, con relación al uso de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero, el mamífero es un ser humano. En otra realización, la infección micobacteriana es una infección por una micobacteria seleccionada de la lista A descrita aquí más arriba. En otra realización, la infección micobacteriana es una infección por Mycobacterium tuberculosis. En otra realización, la infección micobacteriana es una infección de una micobacteria que puede usar colesterol como fuente de carbono. En una realización, la enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un mamífero es seleccionada de la lista B descrita aquí más arriba. En otra realización, la enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un mamífero es tuberculosis.

Otra realización proporciona el uso de una 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección micobacteriana en un animal.

En una realización, con relación a la combinación de a) 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y b) un segundo agente terapéutico, el segundo agente terapéutico se selecciona de la lista C: isoniazida, rifampina, pirazinamida, etambutol, moxifloxacina, rifapentina, clofazimina, bedaquilina (TMC207), nitroimidazo-oxazina Pa -824, delamanid (OPC-67683), OPC-167832, una oxazolidinona, análogo de EMB SQ109, una benzotiazinona, una dinitrobenzamida y un agente antiviral, incluido un agente antirretroviral. En una realización adicional, la oxazolidinona es linezolid, tedizolid, radezolid, sutezolid (PNU-100480), o posizolid (AZD-5847). En una realización adicional, el segundo agente terapéutico es un agente terapéutico aprobado o recomendado para el tratamiento de tuberculosis.

En una realización se proporciona una combinación como se ha descrito en donde el agente antirretroviral se selecciona independientemente de zidovudina, didanosina, lamivudina, zalcitabina, abacavir, estavudina, adefovir, adefovir dipivoxil, fozivudina, todoxil, emtricitabina, alovudina, amdoxovir, elvucitabina, nevirapina, delavirdina, efavirenz, loviride, immunocal, oltipraz, capravirina, lersivirina, GSK2248761, TMC-278, TMC-125, etravirina, saquinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, fosamprenavir, brecanavir, darunavir, atazanavir, tipranavir, palinavir, lasinavir, enfuvirtide, T-20, T-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-806, BMS-663068 y BMS-626529, 5-Helix, raltegravir, elvitegravir, GSK1349572, GSK1265744, vicriviroc (Sch-C), Sch-D, TAK779, maraviroc, TAK449, didanosina, tenofovir, lopinavir, y darunavir.

En ciertas realizaciones de la presente invención se proporcionan combinaciones de agentes anti-tuberculosis y 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona para ser usadas en el tratamiento de infecciones de Mycobacterium tuberculosis en animales, incluidos seres humanos. En realizaciones particulares, se usa 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, en combinación con otros agentes anti-tuberculosis conocidos, para tratar un sujeto animal con infección de Mycobacterium tuberculosis, particularmente en un sujeto animal que está adicionalmente infectado con un retrovirus humano, en particular un virus de inmunodeficiencia humana (HIV).

En una realización de la invención, se proporciona una combinación que comprende: un primer agente terapéutico en donde el primer agente terapéutico es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y un segundo agente terapéutico; y opcionalmente un tercer agente terapéutico; opcionalmente un cuarto agente terapéutico; opcionalmente un quinto agente terapéutico y opcionalmente un sexto agente terapéutico, en dopnde el segundo y opcionalmente el tercero, cuarto, quinto o sexto agente terapéutico, es distinto de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

En una realización se proporciona una combinación como se describe aquí, en la que el segundo, o el tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico opcional se selecciona independientemente entre isoniazida, rifampina, pirazinamida, ethambutol, moxifloxacina, rifapentina, clofazimina, bedaquilina (TMC207), nitroimidazo-oxazina PA-824, delamanid (OPC-67683), OPC-167832, una oxazolidinona como linezolid, tedizolid, radezolid, sutezolid (PNU-100480), o posizolid (AZD-5847), análogo de EMB, SQ109, una benzotiazinona, una dinitrobenzamida o un agente antiviral que incluye un agente anti-retroviral.

Otra realización de la invención proporciona una combinación como se describe en la que el segundo, o el tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico opcional se selecciona entre un agente terapéutico aprobado o recomendado para el tratamiento de la tuberculosis.

Otra realización proporciona un método de tratamiento de una infección micobacteriana en un animal que comprende: administrar al animal uno cualquiera de: (i) una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; (ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; o (iii) una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación farmacéutica que comprende 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para tratar la infección micobacteriana en el animal, en donde la infección micobacteriana es una infección por M. tuberculosis. En una realización, la infección micobacteriana es una infección por una micobacteria seleccionada de la lista A como se ha descrito aquí anteriormente. En otra realización, la infección micobacteriana es una infección por una micobacteria que puede usar colesterol como fuente de carbono.

Como se describe aquí, las realizaciones de la invención incluyen coadministrar, ya sea de manera simultánea, secuencial o en combinación, un primer agente terapéutico que es 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en combinación con un segundo agente terapéutico, opcionalmente en combinación con un tercer agente terapéutico, opcionalmente en combinación con un cuarto agente terapéutico, opcionalmente en combinación con un quinto y/o un sexto agente terapéutico, a un sujeto expuesto a o infectado con una especie micobacteriana, incluida una especie de Mycobacterium tuberculosis. En ciertas realizaciones, el primer agente terapéutico es 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y el segundo y/o tercero y/o cuarto agente terapéutico es un agente anti-tuberculoso. En ciertas realizaciones, la especie antimicobacteriana es una variante fármaco-resistente; en ciertas realizaciones la especie micobacteriana es una variante multifármaco-resistente.

En una realización, la composición farmacéutica mencionada anteriormente que comprende a) 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una sal de la misma farmacéuticamente; y b) un excipiente farmacéuticamente aceptable, comprende adicionalmente un segundo agente terapéutico. En otra realización, el segundo agente terapéutico se selecciona de la lista C descrita anteriormente en este documento. En una realización adicional, la oxazolidinona de la lista C es linezolid, tedizolid, radezolid, sutezolid (PNU-100480), o posizolid (AZD-5847). En una realización adicional, el segundo agente terapéutico es un agente terapéutico aprobado o recomendado para el tratamiento de la tuberculosis.

En una realización, se proporciona una formulación farmacéutica que comprende 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y un excipiente, adyuvante o diluyente farmacéuticamente aceptable. En una realización, la formulación farmacéutica comprende un segundo agente terapéutico.

En una realización de la presente invención se proporciona una formulación farmacéutica que comprende el primer agente terapéutico, siendo dicho primer agente terapéutico una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Una realización relacionada proporciona una combinación como se describe aquí y un excipiente, adyuvante o diluyente farmacéuticamente aceptable. En otra realización, la formulación farmacéutica puede comprender adicionalmente un segundo agente terapéutico.

En una realización se proporciona una formulación farmacéutica que comprende un primer agente terapéutico, siendo dicho primer agente terapéutico una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y un excipiente, adyuvante o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Más particularmente, se proporciona una formulación farmacéutica que comprende un primer agente terapéutico que es 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, siendo dicho primer agente terapéutico una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en cualquier realización tal como se describe en la presente memoria; un excipiente, adyuvante o diluyente farmacéuticamente aceptable; y un segundo agente terapéutico que es distinto de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

En realizaciones relacionadas, la formulación farmacéutica comprende un primer agente terapéutico que es 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y opcionalmente comprende un segundo agente terapéutico distinto de la 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y opcionalmente comprende un tercer agente terapéutico, y opcionalmente comprende un cuarto agente terapéutico, y opcionalmente comprende un quinto agente terapéutico, y opcionalmente comprende un sexto agente terapéutico. En formas de realización relacionadas, el segundo, tercer, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico es un agente anti-micobacteriano distinto de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En realizaciones relacionadas, el segundo, tercer, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico se selecciona entre isoniazida, rifampina, pirazinamida, etambutol, moxifloxacina, rifapentina, clofazimina, bedaquilina (TMC207), nitroimidazo-oxazina PA-824, delamanida (OPC-67683), OPC-167832, una oxazolidinona tal como linezolid, tedizolid, radezolid, sutezolid (PNU-100480 ) y posizolid (AZD-5847), análogo de EMB SQ109, una benzotiazinona, una dinitrobenzamida y un agente antiviral, incluido un agente anti-retroviral. En realizaciones relacionadas, el segundo, tercer, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico es un agente terapéutico aprobado y/o recomendado para el tratamiento de la tuberculosis.

Una realización relacionada proporciona una formulación farmacéutica que comprende 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal del mismo, y un segundo agente terapéutico; y opcionalmente un tercer, cuarto, quinto o sexto agente terapéutico, en el que el segundo o tercer, cuarto, quinto o sexto agente terapéutico opcional es un agente anti-retroviral seleccionado de zidovudina, didanosina, lamivudina, zalcitabina, abacavir, stavudina, adefovir, adefovir dipivoxil, fozivudina, todoxil, emtricitabina, alovudina, amdoxovir, elvucitabina, nevirapina, delavirdina, efavirenz, lovirida, immunocal, oltipraz, capravirina, lersivirina, GSK2248761, TMC-278, TMC-125, etravirina, saquinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, fosamprenavir, brecanavir, darunavir, atazanavir, tipranavir, palinavir, lasinavir, enfuvirtide, T-20, T-1249, PRO-542, PRO-140, TnX-355, BMS-806, BMS-663068 y b Ms -626529, 5-Helix, raltegravir, elvitegravir, GSK1349572, GSK1265744, vicriviroc (Sch-C), Sch-D, TAK779, maraviroc, TAK449, didanosina, tenofovir, lopinavir, o darunavir.

En una realización, con respecto al método de destruir una micobacteria y/o inhibir la replicación de una micobacteria en un mamífero infectado con una micobacteria, que comprende poner en contacto la micobacteria o tratar el mamífero infectado con la micobacteria, con una cantidad terapéuticamente eficaz de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para destruir la micobacteria y/o prevenir la replicación de la micobacteria, la micobacteria es Mycobacterium tuberculosis. En otra realización, el mamífero es un ser humano. En una realización adicional, la micobacteria puede usar colesterol como fuente de carbono.

Otra realización proporciona un método para destruir micobacterias y/o inhibir la replicación de micobacterias que provocan enfermedad en un animal, que comprende poner en contacto las micobacterias con una cantidad eficaz de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, con el fin de destruir las micobacterias y/o evitar la replicación de las micobacterias.

En una realización adicional, la invención proporciona un método para destruir micobacterias y/o inhibir la replicación de micobacterias o un método para tratar una infección de micobacterias en un animal como ganado y mascotas, que incluyen ganado de ovejas, cabras, perros y gatos o un ser humano, que incluye un ser humano con inmunidad suprimida, comprendiendo dicho método: poner en contacto las micobacterias con una cantidad eficaz de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, destruyendo así las micobacterias y/o inhibiendo la replicación de las micobacterias, o comprendiendo dicho método administrar al animal con la infección de micobacterias una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En un ejemplo de realización, la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona es parte de una formulación farmacéutica descrita aquí. En otro ejemplo de realización, la puesta en contacto se produce bajo condiciones que permite la entrada del compuesto en la micobacteria.

En otras realizaciones particulares se proporciona un método para destruir micobacterias que comprende poner en contacto las micobacterias o un animal, incluido un ser humano, expuesto o infectado con una micobacteria, con un primer agente terapéutico que es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal farmacéuticamente de la misma, poner en contacto opcionalmente las células o el sujeto con un segundo agente terapéutico, poner en contacto opcionalmente las células o el sujeto con un tercer agente terapéutico, poner en contacto opcionalmente las células o el sujeto con un cuarto agente terapéutico, poner en contacto opcionalmente las células o el sujeto con un quinto y/o un sexto agente terapéutico, de forma que el contacto mate las células de micobacterias. En realizaciones particulares, el primer agente terapéutico es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y el segundo, tercero, cuarto, quinto y/o sexto agente terapéutico opcional es un agente antitubercular o una sal del mismo. En otras realizaciones particulares, el sujeto fue expuesto o infectado con Mycobacterium tuberculosis.

Todavía, otras realizaciones particulares proporcionan un método para inhibir la replicación de células micobacterianas, comprendiendo el método poner en contacto las células micobacterianas de un animal, incluido un ser humano expuesto o infectado con una célula micobacteriana con un primer agente terapéutico que es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona o una sal del mismo, poner en contacto opcionalmente las células micobacterianas o animal con un segundo agente terapéutico, poner en contacto opcionalmente las células micobacterianas o animal con un tercer agente terapéutico, poner en contacto opcionalmente las células micobacterianas o animal con un cuarto agente terapéutico, poner en contacto opcionalmente las células micobacterianas o animal con un quinto y/o un sexto agente terapéutico, de forma que el contacto inhiba la replicación de células micobacterianas. En realizaciones particulares, el primer agente terapéutico es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona o una sal de la misma y el segundo, tercero, cuarto, quinto y/o sexto agente terapéutico opcional es un agente anti-tubercular o una sal del mismo. En otras realizaciones particulares, el sujeto fue expuesto o infectado con Mycobacterium tuberculosis.

El modo de acción dependiente de colesterol de la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona es de particular importancia. Este perfil biológico hace que el compuesto sea único entre los fármacos anti­ tuberculares conocidos. Dirigiendo a diana una nueva trayectoria, el compuesto se espera que evite mecanismos de resistencia a TB presentes en ajustes clínicos, proporcionando así un componente útil para un nuevo régimen de tratamiento para la tuberculosis. Además, dirigiendo a diana la trayectoria de catabolismo del colesterol, el compuesto puede ser capaz de tomar como diana sub-poblaciones de bacilos que sean escasamente sensibles a fármacos estándar. Así, este compuesto también podría tener actividad contra otras bacterias que son capaces de degradar colesterol y usarlo como fuente de carbono.

Descripción detallada de realizaciones específicas

“Animal”, como se usa aquí, significa cualquiera de un reino (Animalia) de organismos vivos que se alimentan de materia orgánica, típicamente que tienen órganos sensitivos especializados y sistema nervioso y son capaces de responder rápidamente a estímulos. "Animal" incluye animales de granja y mascotas, incluidos animales de ganado vacuno, ovino, caprino, perros y gatos, o un ser humano, incluido un ser humano inmunodeprimido.

"Mamífero", como se usa aquí, significa un animal vertebrado de sangre caliente de una clase que se distingue por la posesión de pelo o piel, hembras que secretan leche para nutrición de la prole, y (típicamente) el nacimiento de la prole.

"Compuesto de la invención", como se utiliza en la presente memoria, se refiere a 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

“Combinación(es) de la invención”, como se usa aquí, se refiere a la combinación de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y un segundo agetne terapéutico; y opcionalmente un terceragente terapéutico; opcionalmente un cuarto agente terapéutico; opcionalmente un quinto agente terapéutico; y opcionalmente un sexto agente terapéutico.

Cantidad “eficaz” de un compuesto, combinación del mismo o formulación del mismo, significa una cantidad de un compuesto que es el agente activo, que incluye una combinación de formulación del mismo, de forma que la cantidad es suficiente para proporcionar el efecto local o sistémico deseado. Una cantidad “terapéuticamente eficaz” o “farmacéuticamente eficaz” se refiere a la cantidad de compuesto, que incluye una combinación o formulación del mismo, suficiente para conseguir un resultado terapéutico o farmacéutico deseado.

En un aspecto, la invención se dirige a una sal de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, por ejemplo la sal de ácido trifluoroacético. En un aspecto adicional, la invención se dirige a una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de a 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona.

La expresión “sal farmacéuticamente aceptable” está previsto que incluya una sal de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona que se prepara con ácidos o bases relativamente no tóxicos. Se pueden obtener sales por adición de bases poniendo en contacto la forma neutra del compuesto con una cantidad suficiente de la base deseada, en un disolvente puro o inerte adecuado. Ejemplos de sales por adición de bases farmacéuticamente aceptables incluyen una sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánica (tal como colina o dietilamina o aminoácidos como d-arginina, l-arginina, d-lisina o l-lisina), o de magnesio o una sal similar. Se pueden obtener sales por adición de ácidos poniendo en contacto la forma neutra del compuesto con una cantidad suficiente del ácido deseado, en un disolvente puro o inerte adecuado. Ejemplos de sales por adición de ácidos farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como ácidos clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, yodhídrico o fosforoso y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos como acético, propiónico, isobutílico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También están incluidas sales de aminoácidos como arginato y similares y sales de ácidos orgánicos como ácidos glucurónico o galacturónico y similares (véase, por ejemplo, la publicación de Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977)).

En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable se selecciona entre un hidrocloruro, un hidrobromuro, un hidroyoduro, un nitruro, un carbonato, un monohidrogenocarbonato, un fosfato, un monohidrogenofosfato, un dihidrogenofosfato, un sulfato, un monohidrogenosulfato, un dihidrogensulfato, o una sal fosfonato.

En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable se selecciona entre un acetato, un propionato, un isobutirato, un maleato, un malonato, un benzoato, un succinato, un suberato, un fumarato, un glucaronato, un galacturonato, un lactato, un mandelato, un ftalato, un bencenosulfonato, un p-tolilsulfonato, un citrato, un tartrato, o una sal de metanosulfonato.

El compuesto 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona contiene funciones básicas y ácidas que permiten convertir el compuesto en sales de adición de ácidos o bases.

La forma neutra de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona preferentemente es regenerada poniendo en contacto la sal con una base o ácido y aislando el compuesto de origen de la manera convencional. La forma parental del compuesto difiere de las diversas formas de sales en ciertas propiedades físicas, como la solubilidad en disolventes polares.

Los expertos en la técnica apreciarán que el compuesto 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona puede existir en cierto número de formas tautoméricas diferentes. En una realización, el compuesto está en una forma tautomérica diferente del nombre químico 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona. Además, el compuesto 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona posee grupos amina y, por consiguiente, también puede estar en forma de un zwitterion, también conocido como una sal interna. Por lo tanto, en una realización, el compuesto está en forma de zwitterión. Los expertos en la técnica pueden considerar que una forma de zwitterión es una forma tautomérica. Ejemplos de tautómeros de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-,4(1 H,3H)-diona, que incluyen un ejemplo de zwitterion, se representan a continuación.

Debe entenderse que se entiende que cuando se hace referencia aquí a la 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona se pretende abarcar todos sus tautómeros, y también mezclas de dos o más tautómeros de los mismos.

El compuesto 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona puede ser preparada en forma cristalina o no cristalina y, si es cristalina, puede ser opcionalmente solvatada, por ejemplo, en forma del hidrato. Los solvatos pueden estar en forma de solvatos estequiométricos (por ejemplo, hidratos), así como compuestos que contienen cantidades variables de disolvente (por ejemplo, agua). El compuesto 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona se puede preparar en formas isotópicamente marcadas que son idénticas a la 6­ (4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona excepto en el hecho de que uno o más átomos son sustituidos con un átomo que tiene un peso atómico o número másico diferente del peso atómico o número másico que es el que se encuentra más comúnmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden ser incorporados en 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, flúor, yodo y cloro como 3H, 11C, 14C, 18F, 123I o 125I.

Los compuestos isotópicamente marcados, por ejemplo, aquellos en los que se han incorporado isótopos radioactivos como 3H o 14C, son útiles en ensayos de distribución de fármacos y/o tejidos de sustratos. Los isótopos de hidrógeno tritiado, es decir, 3H, y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y capacidad de detección. Los isótopos de 11C y 18F son particularmente útiles en PET (tomografía de emisión positrones).

Como la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona como se describe aquí está destinada a ser usada en composiciones farmacéuticas, se comprenderá fácilmente que sea proporcionada preferentemente en forma sustancialmente pura, por ejemplo, al menos 60% pura, más adecuadamente al menos 75% pura y preferentemente al menos 85%, especialmente al menos 98% pura (los % son sobre un peso para una base en peso). Las preparaciones impuras de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal de la misma, pueden ser usadas para preparar las formas más puras usadas en las composiciones farmacéuticas.

En una realización la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Otra realización de la invención proporciona adicionalmente un método de tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero, particularmente en un ser humano, método que comprende administrar a un mamífero que necesita este tratamiento una cantidad eficaz de un primer agente terapéutico que es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Otras realizaciones relacionadas comprenden administrar a un mamífero que necesita este tratamiento una cantidad eficaz de un primer agente terapéutico que es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, administrando opcionalmente en combinación con una cantidad eficaz de un segundo agente terapéutico, administrando opcionalmente en combinación con una cantidad eficaz de un tercer agente terapéutico, administrando opcionalmente en combinación con una cantidad eficaz de un cuarto agente terapéutico, administrando opcionalmente en combinación con una cantidad eficaz de un quinto agente terapéutico, administrando opcionalmente en combinación con una cantidad eficaz de un sexto agente terapéutico.

En realizaciones relacionadas, el segundo, tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico opcional es un agente anti-micobacteriano. En realizaciones relacionadas, la administración del primer agente terapéutico y la administración opcional del segundo, tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico se produce de forma concurrente, o administrando el primer agente terapéutico y la administración opcional del segundo, tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico se produce de forma secuencial. En otras realizaciones relacionadas de la invención, uno cualquiera del segundo, tercero, cuarto, quinto o sexto agente terapéutico se selecciona entre un agente antimicrobiano, un agente antiviral, un agente anti-infeccioso, un analgésico, una vitamina, un complemento nutritivo, un agente antiinflamatorio, un analgésico y un esteroide.

La invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables, para ser usada en el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero, particularmente en un ser humano.

La invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables, para ser usada en el tratamiento de infecciones micobacterianas en un mamífero, particularmente en un ser humano.

En una realización particular, la infección micobacteriana y/o enfermedad es tratada a través de una administración oral del compuesto o de la combinación de la invención. En un ejemplo de realización, la infección micobacteriana y/o enfermedad es tratada a través de una administración intravenosa del compuesto o de la combinación de la invención.

Formulaciones farmacéuticas

En una realización, la invención es una formulación farmacéutica que incluye: (a) un excipiente farmacéuticamente aceptable; (b) un compuesto o combinación de la invención. En otra realización, la formulación farmacéutica incluye: (a) un excipiente farmacéuticamente aceptable y (b) un compuesto o combinación descrita aquí. En otra realización, la formulación farmacéutica incluye: (a) un excipiente farmacéuticamente aceptable; y (b) un compuesto o cominación descrita aquí, o una sal de la misma. En otra realización, la formulación farmacéutica incluye: (a) un excipiente farmacéuticamente aceptable; y (b) una sal de un compuesto o combinación descrita aquí. En un ejemplo de realización, la sal es una sal farmacéuticamente aceptable. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación unitaria. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación unitaria única.

En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación unitaria. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación unitaria única. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación de dos unidades. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación de tres unidades. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación de cuatro unidades. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación de cinco unidades. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación de seis unidades. En un ejemplo de realización, la formulación farmacéutica es una forma de dosificación de una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete unidades que comprende una primera forma de dosificación unitaria y una segunda, tercera, cuarta, quinta y/o sexta de dosificación unitaria, en que la primera forma de dosificación unitaria incluye a) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se describe aquí y b) un primer excipiente farmacéuticamente aceptable; y la segunda, tercera, cuarta, quinta y/o sexta forma de dosificación unitaria incluye c) una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente terapéutico adicional que es un agente anti-micobacteriano y d) un segundo excipiente farmacéuticamente aceptable.

La información relativa a los excipientes para ser usados en las formulaciones de la invención se puede encontrar en la publicación de Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Pharmaceutical Press (2011).

Combinaciones

En un ejemplo de realización, la invención proporciona a) un primer agente terapéutico que es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona; b) una segunda actividad terapéutica. En ciertas realizaciones, el segundo terapéutico es un agente antibacteriano, más específicamente un agente anti-tubercular, más específicamente un agente anti-M. tuberculosis.

En un ejemplo de realización, la combinación es parte de una formulación farmacéutica descrita aquí. Estas condiciones son bien conocidas por un experto en la técnica y las condiciones específicas se exponen en los ejemplos anejos a la presente memoria.

Formas de dosificación del compuesto o de las combinaciones del mismo

Los componentes individuales del compuesto de la invención o de las combinaciones de la invención, por ejemplo, una combinación como está descrita aquí, pueden ser administrados de forma simultánea o secuencial en una forma de dosificación unitaria. La forma de dosificación unitaria puede ser una forma de dosificación unitaria única o múltiple. En un ejemplo de realización, la invención proporciona un compuesto o combinación en una forma de dosificación unitaria única. Un ejemplo de una forma de dosificación unitaria única es una cápsula en la que el compuesto de la invención o tanto el compuesto de la invención como un agente terapéutico adicional están contenidos en la misma cápsula. En un ejemplo de realización, la invención proporciona una combinación en una forma de dosificación de dos unidades. Un ejemplo de una forma de dosificación de dos unidades en una primera cápsula que contiene el compuesto de la invención y una segunda cápsula que contiene el agente terapéutico adicional. Por tanto, las expresiones “unitaria única” o “de dos unidades” o “de unidades múltiples” se refieren al objeto que el paciente ingiere, no a los componentes interiores del objeto. Las dosis apropiadas del compuesto de la invención serán fácilmente apreciadas por los expertos en la técnica. Las dosis apropiadas de un agente terapéutico adicional que es distinto de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, se apreciarán fácilmente por los expertos en la técnica. En una realización particular, el compuesto de la invención está presente a solas o en la combinación en una cantidad terapéuticamente eficaz. En una realización particular, el agente terapéutico adicional distinto de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona está presente en la combinación en una cantidad suficiente para destruir o reducir la presencia, cantidad o velocidad de crecimiento de micobacterias expuestas al compuesto de la invención, que incluye M. tuberculosis.

Las combinaciones de la invención, por ejemplo, una combinación descrita aquí, pueden incluir también un agente terapéutico o agentes terapéuticos adicionales. Por tanto la invención proporciona, en una realización adicional, una combinación que comprende un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y al menos un agente terapéutico adicional. Por tanto la invención proporciona, en una realización adicional, una combinación que comprende un compuesto de de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un agente terapéutico adicional. En un ejemplo de realización, el agente terapéutico adicional es un agente antimicobacteriano. En una realización, la invención comprende: a) una combinación de la invención; y b) al menos un agente terapéutico adicional. En otro ejemplo de realización, la invención comprende a) una combinación de la invención; b) un primer agente terapéutico adicional; y c) un segundo agente terapéutico adicional. En otro ejemplo de realización, la invención comprende: a) una combinación de la invención; b) un primer agente terapéutico adicional; c) un segundo agente terapéutico adicional; y d) un tercer agente terapéutico adicional. El primer agente terapéutico adicional o segundo agente terapéutico adicional o tercer agente terapéutico adicional se pueden seleccionar entre los agentes terapéuticos adicionales descritos aquí.

El compuesto de la invención o las combinaciones pueden ser presentadas convenientemente para ser usadas en la forma de una formulación farmacéutica. En una realizaación adicional de la presente invención se proporciona una combinación farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, junto con uno o más agentes terapéuticos adicionales y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Los componentes individuales de estas combinaciones pueden ser administrados de formas secuencial o simultánea en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas mediante cualquier vía conveniente.

Cuando el agente terapéutico adicional es usado con una combinación como se describe aquí contra el mismo estado de enfermedad, la dosis de cada compuesto puede diferir de cuando el compuesto es usado solo. Las dosis apropiadas serán fácilmente apreciadas por los expertos en la técnica. Se apreciará que la cantidad de un compuesto como se describe aquí, necesaria para ser usada en el tratamiento, variará con la naturaleza del estado que esté siendo tratado y la edad y estado del paciente y estará finalmente a la discreción del facultativo o veterinario en cargado.

Composición y formulaciones

El compuesto 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser formulados para una administración en cualquier forma conveniente para un uso en medicina humana o veterinaria, por analogía con una formulación de agentes anti-micobacterianos, o formulación de otros agentes anti-tuberculares.

El compuesto 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables serán formulados normalmente, pero no necesariamente, en forma de composiciones farmacéuticas antes de la administración a un paciente. En una realización, la invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. En otra realización, la invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal farmacéuticamente aceptablede la misma, y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables. El vehículo, excipiente o diluyente debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial para el receptor del mismo.

Las composiciones farmacéuticas descritas aquí incluyen las que están en una forma adaptada para un uso oral o parenteral y pueden ser usadas para el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero que incluye un ser humano.

Las composiciones farmacéuticas descritas aquí describen las que están en una forma adaptada para un uso oral o parenteral y pueden ser usadas para el tratamiento de infecciones micobacterianas en un mamífero que incluye un ser humano.

La composición puede ser formulada para una administración mediante cualquier vía conveniente. Para el tratamiento de tuberculosis, las composiciones pueden estar en la forma de comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pastillas, aerosoles o preparaciones líquidas, como soluciones o suspensiones orales o parenterales esterilizadas.

Los comprimidos y cápsulas para una administración oral pueden estar en forma de presentación de dosis unitaria y pueden contener excipientes convencionales como agentes aglutinantes, por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; materiales de carga, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricantes para la formación de comprimidos, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes, por ejemplo, almidón de patata; o agentes humectantes aceptables como laurilsulfato de sodio. Los comprimidos pueden ser revestidos según métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal. Las preparaciones líquidas pueden estar en la forma, por ejemplo, de suspensiones, soluciones o emulsiones acuosas o aceitosas, jarabes o elixires, o pueden ser presentadas en forma de un producto seco para una reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Estas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales como agentes suspensores, por ejemplo, sorbitol, metil-celulosa, jarabe de glucosa, gelatina, hidroxietil-celulosa, carboximetil-celulosa, gel de estearato de aluminio o grasas comestibles hidrogenadas, agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo, aceite de almendras, ésteres aceitosos como glicerina, propilenglicol o alcohol etílico; conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico y, si se desea, agentes para dar sabor o colorantes convencionales.

Los supositorios contendrán bases para supositorios convencionales, por ejemplo, manteca de cacao u otro glicérido.

Para administración parenteral, las formas de dosificación unitaria fluidas se preparan utilizando el compuesto y un vehículo esterilizado, siendo preferida el agua. El compuesto, dependiendo del vehículo y la concentración usados, puede estar en suspensión o disuelto en el vehículo. En la preparación de soluciones, el compuesto puede ser disuelto en agua para inyección y ser esterilizado en filtros antes de introducirse como relleno en un vial o ampolla adecuado y ser sellado.

Agentes como un anestésico local, conservante y agentes tamponantes pueden ser disueltos en el vehículo. Para mejorar la estabilidad, la composición puede ser congelada antes de ser introducida como relleno en el vial y el agua puede ser separada bajo vacío. El polvo liofilizado seco es seguidamente sellado en el vial y puede ser suministrado un vial acompañante de agua para inyección para reconstituir el líquido antes de su uso. Las suspensiones parenterales se preparan sustancialmente de la misma manera, con la excepción de que el compuesto es puesto en suspensión en el vehículo en lugar de ser disuelto y no se puede realizar una esterilización por filtración. El compuesto puede ser esterilizado mediante una exposición a óxido de etileno antes de ser puesto en suspensión en el vehículo esterilizado. Ventajosamente, es incluido un tensioactivo o agente humectante en la composición para facilitar una distribución uniforme del compuesto.

Las composiciones pueden contener de 0,1% en peso, preferentemente de 10-60% en peso del material activo, dependiendo del método de administración. Cuando las composiciones comprenden unidades de dosificación, cada unidad contendrá preferentemente de 20-1.000 mg del ingrediente activo. La dosificación empleada para un tratamiento de ser humano adulto variará normalmente en el intervalo de 50 a 300 mg por día, por ejemplo, 150 a 200 mg por día, dependiendo de la vía y frecuencia de administración. Esta dosificación corresponde a 0,5 a 5 mg/kg por día. Preferentemente, la dosificación es de 0,5 a 2 mg/kg por día y, más preferentemente, la dosis de menos de 1 mg/kg por día.

La 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, puede ser el único agente terapéutico en las composiciones descritas aquí, o puede estar presente en la formulación en combinación con uno más agentes terapéuticos adicionales. Por tanto, la invención proporciona, en una realización adicional, una combinación que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, junto con uno o más agentes terapéuticos adicionales.

El uno o más agentes terapéuticos adicionales es, por ejemplo, un agente útil para el tratamiento de tuberculosis en un mamífero. Ejemplo de estos agentes terapéuticos incluyen rifampina, pirazinamida, etambutol, moxifloxacina, rifapentina, clofazimina, bedaquilina (TMC207), nitroimidazo-oxazina pA-824, delamanid (OPC-67683), OPC-167832, una oxazolidinona como linezolid, tedizolid, radezolid, sutezolid (PNU-100480), y posizolid (AZD-5847), análogo de EMB SQ109, una benzotiazinona, una dinitrobenzamida y un agente antiviral que incluye un agente anti-retroviral, o cualquier agente para TB que esté desarrollado para el tratamiento de TB con una respuesta positiva en ensayos EBA de fase IIa, o cualquier agente para TB bajo un desarrollo para la entidad Global Alliance for Tuberculosis.

Cuando la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal o solvato farmacéutica­ mente aceptable de la misma, es usada en combinación con uno o más agentes terapéuticos, la dosis del compuesto o agente puede diferir de cuando el compuesto o agente es usado solo. Las dosis apropiadas serán fácilmente apreciadas por los expertos en la técnica. Se apreciará que la cantidad de un compuesto descrito aquí y el uno o más agentes terapéuticos adicionales requeridos para ser usados en el tratamiento variarán con la naturaleza del estado que está siendo tratado y la edad y el estado del paciente y quedará finalmente a la discreción del facultativo o veterinario encargado.

Las combinaciones pueden ser conveniente presentadas para ser usadas en la forma de una formulación farmacéutica. En una realización adicional de la presente invención, se proporciona una combinación farmacéutica que comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, junto con uno o más agentes terapéuticos adicionales, y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Los componentes individuales de estas combinaciones pueden ser administrados de forma secuencial o simultánea en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas mediante cualquier vía convencional.

Cuando la administración es secuencial, el compuesto de la presente invención o uno o más agente terapéuticos adicionales pueden ser administrados en primer lugar. Cuando la administración es simultánea, la combinación puede ser en la misma o diferente composición farmacéutica. Cuando se combina en la misma formulación, se apreciará que el compuesto y agentes deben ser estables y compatibles unos con otros y los otros componentes de la formulación. Cuando se formula separadamente, se pueden proporcionar en cualquier formulación conveniente, de forma conveniente en una manera como es conocido para estos compuestos en la técnica.

Métodos para inhibir el crecimiento bacteriano o destruir bacterias

El compuesto o combinaciones de la invención se espera que exhiban potencia contra micobacterias y que, por lo tanto, tengan la capacidad potencial de destruir micobacterias y/o inhibir la replicación de micobacterias. El compuesto o combinaciones de la invención se espera que exhiban potencia contra micobacterias que poseen resistencia a agentes anti-micobacterianos de cuidado estándar y, por tanto, que tengan la capacidad potencial de destruir micobacterias y/o inhibir la replicación de estas micobacterias “resistentes”. En aspectos de la invención, el compuesto como se describe aquí posee una actividad significativa contra una selección de aislados micobacterianos sensibles a fármacos que incluyen aislados clínicos MDR-TB (TB resistente a múltiples fármacos) cuando se ensaya en medios que contienen colesterol.

En una realización adicional, la invención proporciona un método para destruir micobacterias y/o inhibir la replicación de micobacterias o un método para tratar una infección micobacteriana en un animal como ganado y mascotas, que incluyen bovino, ovejas, cabras, perros y gatos, o un ser humano, que incluye un ser humano con inmunidad suprimida, comprendiendo dicho método: poner en contacto las micobacterias con una cantidad eficaz de un compuesto o combinación como se describe aquí, destruyendo así las micobacterias y/o inhibiendo la replicación de las micobacterias, o comprendiendo dicho método administrar al animal con la infección micobacteriana una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o combinación de la invención, en que la combinación comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. En un ejemplo de realización, el compuesto o combinación es parte de una formulación farmacéutica descrita aquí. En otro ejemplo de realización, el contacto se produce bajo condiciones que permiten la entrada del compuesto o combinación en la micobacteria.

En un ejemplo de realización, las micobacterias son destruidas o su replicación es inhibida, o la infección micobacteriana es tratada a través de la administración oral de un compuesto o combinación como se describe aquí.

En un ejemplo de realización, las micobacterias son destruidas o su replicación es inhibida o la infección micobacteriana es tratada, a través de una administración intravenosa de un compuesto o combinación como se describe aquí. En un ejemplo de realización, la micobacteria es destruida o su replicación es inhibida, o la infección micobacteriana es tratada a través de una administración subcutánea de un compuesto o combinación como se describe aquí, en que la combinación comprende 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

En ejemplos de realizaciones, la micobacteria se pone en contacto o la infección micobacteriana es tratada con una combinación como se describe aquí, que comprende un primer agente terapéutico que es 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una sal de la misma, y un segundo agente terapéutico, y que comprende opcionalmente un tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico en una población de micobacterias que comprende una micobacteria resistente con una mutación que confiere resistencia a uno o más del tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico opcional. En realizaciones relacionadas, el tercero, cuarto, quinto y sexto agente terapéutico opcional, o una sal del mismo, es un agente anti-micobacteriano, particularmente un agente anti-micobacteriano conocido, más preferentemente un agente anti-micobacteriano de cuidado estándar.

En otro ejemplo de realización, se proporciona un método para destruir y/o inhibir la replicación de micobacterias que provocan o están asociadas con una enfermedad en un animal, o un método para tratar una infección micobacteriana en un animal, comprendiendo el método poner en contacto las micobacterias con una cantidad eficaz de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona o una sal de la misma, con el fin de destruir y/o evitar la replicación de la micobacteria, o administrar al animal una cantidad eficaz de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H, 3H)-diona o una sal de la misma, en que la micobacteria se selecciona entre Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium including subspecies (subsp.) Mycobacterium avium subsp. avium, Mycobacterium avium subsp. hominissuis, Mycobacterium avium subsp. silvaticum, y Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis; Mycobacterium balnei, Mycobacterium sherrisii, Mycobacterium africanum, Mycobacterium microti, Mycobacterium silvaticum, Mycobacterium colombiense, Mycobacterium indicus pranii, Mycobacterium gastri, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium hiberniae, Mycobacterium nonchromagenicum, Mycobacterium terrae, Mycobacterium trivial, Mycobacterium kansasii; Mycobacterium malmoense; Mycobacterium simiae; Mycobacterium triplex, Mycobacterium genavense, Mycobacterium florentinum, Mycobacterium lentiflavum, Mycobacterium palustre, Mycobacterium kubicae, Mycobacterium parascrofulaceum, Mycobacterium heidelbergense, Mycobacterium interjectum, Mycobacterium szulgai; Mycobacterium branden, Mycobacterium cookie, Mycobacterium celatum, Mycobacterium bohemicum, Mycobacterium haemophilum, Mycobacterium lepraemurium, Mycobacterium lepromatosis, Mycobacterium botniense, Mycobacterium chimaera, Mycobacterium conspicuum, Mycobacterium doricum, Mycobacterium forcinogenes, Mycobacterium heckeshornense, Mycobacterium lacus, Mycobacterium monacense, Mycobacterium montefiorense, Mycobacterium murale, Mycobacterium nebraskense, Mycobacterium saskatchewanenese, Mycobacterium scrofulaceum, Mycobacterium shimoidel, Mycobacterium tusciae, Mycobacterium xenopi, Mycobacterium intermedium, Mycobacterium bolletii, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium foruitum subsp. acetamidolyticum, Mycobacterium boenickei, Mycobacterium perigrinum, Mycobacterium porcinum, Mycobacterium senegalense, Mycobacterium septicum, Mycobacterium neworleansense, Mycobacterium houstonense, Mycobacterium mucogenicum, Mycobacterium mageritense, Mycobacterium brisbanense, Mycobacterium cosmeticum, Mycobacterium parafortuitum, Mycobacterium austroafricanum, Mycobacterium diernhoferi, Mycobacterium hodieri, Mycobacterium neoaurum, Mycobacterium prederkisbergense, Mycobacterium aurum, Mycobacterium vaccae, Mycobacterium chitae, Mycobacterium fallax, Mycobacterium confluentis, Mycobacterium flavenscens, Mycobacterium madagascariense, Mycobacterium phlei, Mycobacterium smegmatis, Mycobacterium goodie, Mycobacterium colinskui, Mycobacterium thermoresistbile, Mycobacterium gadium, Mycobacterium kormossense, Mycobacterium obuense, Mycobacterium sphagni, Mycobacterium agri, Mycobacterium aichiense, Mycobacterium alvei, Mycobacterium arupense, Mycobacterium brumae, Mycobacterium canariasense, Mycobacterium chubuense, Mycobacterium conceptionense, Mycobacterium duvalii, Mycobacterium elephantis, Mycobacterium gilvum, Mycobacterium hassiacum, Mycobacterium holsaticum, Mycobacterium immunogenum, Mycobacterium massiliense, Mycobacterium moriokaense, Mycobacterium psychrotoleranse, Mycobacterium pirenivorans, Mycobacterium vanbaalenii, Mycobacterium pulveris, Mycobacterium arosiense, Mycobacterium aubagnense, Mycobacterium caprae, Mycobacterium chlorophenolicum, Mycobacterium fluoroanthenivorans, Mycobacterium kumamotonense, Mycobacterium novocastrense, Mycobacterium parmense, Mycobacterium phocaicum, Mycobacterium poriferae, Mycobacterium rhodesiae, Mycobacterium seolense, Mycobacterium tokalense, Mycobacterium xenopi; Mycobacterium scrofulaceum; Mycobacterium abscessus; Mycobacterium chelonae; Mycobacterium haemophilum; Mycobacterium leprae; Mycobacterium marinum; Mycobacterium fortuitum; Mycobacterium bovis; Mycobacterium ulcerans; Mycobacterium pseudoshottsii, Mycobacterium shottsii, Mycobacterium intracellulare; complejo de Mycobacterium tuberculosis (MTC); complejo de Mycobacterium avianintracellulare (MAIC) y complejo de Mycobacterium avium (MAC).

En realizaciones relacionadas, la micobacteria es Mycobacterium tuberculosis. En otras realizaciones, la micobacteria es Mycobacterium avium, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium simiae, Mycobacterium szulgai, Mycobacterium xenopi, Mycobacterium scrofulaceum, Mycobacterium abscessus, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium haemophilum, Mycobacterium leprae, Mycobacterium marinum, M. fortuitum, Mycobacterium bovis, M. bovis BCG, M. africanum, M. canetti, M. caprae, M. microti, M. pinnipedi, o Mycobacterium ulcerans. En realiaciones relacionadas, la micobacteria es una subespecie (subesp.) de Mycobacterium avium, incluidas Mycobacterium avium subsp. avium, Mycobacterium avium subsp. hominissuis,

Mycobacterium avium subsp. silvaticum, y Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. En otra realización

relacionada, la micobacteria es Mycobacterium intracellulare. En realizaciones relacionadas adicionales, la

micobacteria es un miembro del complejo Mycobacterium tuberculosis. (MTC) el complejo Mycobacterium avium

(MAC) o el complejo Mycobacterium avian-intracellulare (MAIC). En realizaciones relacionadas, la micobacteria es un

complejo no tuberculosis o clado, que incluye: complejo de Mycobacterium avium; clado de Mycobacteriumgordonae;

clado de Mycobacterium kansasii; clado de Mycobacterium chelonae; clado de Mycobacterium fortuitum; clado de

Mycobacterium parafortuitum; y clado de Mycobacterium vaccae.

En un ejemplo de realización, la micobacteria en los métodos descritos aquí comprenden una micobacteria resistente.

En un ejemplo de realización, la micobacteria resistente es una mutación de una micobacteria descrita aquí. En otra

realización, la infección micobacteriana es una infección por una micobacteria que puede usar colesterol como fuente

de carbono.

Métodos para tratar y/o prevenir enfermedades

El compuesto o combinaciones de la presente invención exhiben potencia contra micobacterias y, por lo tanto, tienen

una capacidad potencial de conseguir una eficacia terapéutica en animales, incluidos ser humanos.

En otra realización, la invención proporciona un método para tratar y/o prevenir una enfermedad. El método incluye

administrar al animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o combinación de la invención, suficiente

para tratar y/o prevenir la enfermedad. En un ejemplo de realización, el compuesto o combinación de la invención

puede ser usada en terapia médica humana o veterinaria, particularmente en el tratamiento o profilaxis de una

enfermedad asociada a micobacterias.

En otro ejemplo de realización, el animal es como se define aquí. En otro ejemplo de realización, la enfermedad es

una enfermedad sistémica o una enfermedad cutánea. En otro ejemplo de realización, la enfermedad es una

enfermedad respiratoria. En otro ejemplo de realización, la enfermedad es tuberculosis.

Preparación del compuesto

Los procedimientos generales que pueden utilizarse para sintetizar el compuesto 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, y sus sales, se exponen en el Esquema de reacción 1, y se ilustran en los

Ejemplos 1a y 1b.

Esquema 1

i) Cs2CO3, DMF, 90°C, 20h; o ii) HCl (3N), MeOH, rt, 7h; o

Cs²CO³ , CH³CN; o HCl, Dioxano; o

Cs²CO³ , NMP; o HCl, AcOEt; o

Cs²CO³ , AcNMe² ; o HCl, H²O, EtOH; o

Cs²CO³ , DMSO; o F³CCO²H, CH²CI² ; o

K²CO³ , DMF; o AcCl, MeOH

K²CO³ , CH³CN; o

K²CO³ , NMP; o iii) Et³N, CH³CN, reflujo, 2h; o

K²CO³ , AcNMe² ; o EtN(iPr)² , CH³CN;

K²CO³ , Bu⁴ NCl, H²O; o i-Pr²NH, CH³CN

K²CO³ , Bu⁴NI, DMF; o Et³N, DMF

K²CO³ , Me²CHOH; o EtN(iPr)² , DMF;

K²CO³ , KI, DMF; o K²CO³ , KI, DMF; o

K²CO³ , K[N(SiMe³)²], DMF; o K²CO³ , NaI, DMF;

K³ PO⁴ , DMF; o K²CO³ , NaI, BuOH;

NaH, DMF; o Cs²CO³ , DMF; o

CsF, AcNMe² ; o K2CO3 , AcNMe2

CsF, CH²Cl² EtN(iPr)² , MeOH;

DBu, MeOH

NaOEt, DMF

Abreviaturas

En la descripción de la invención, los elementos químicos son identificados de acuerdo con la Tabla Periódica de los elementos. Las abreviaturas y símbolos utilizados aquí están de acuerdo con el uso común de estas abreviaturas y símbolos por los expertos en las técnicas químicas. Se usan aquí las siguientes abreviaturas:

AcOH Ácido acético

Ac²O Anhídrido acético

ADC Albúmina Dextrosa Catalasa

AIBN 2,2'-azoisobutironitrilo

BOC N-tert-butoxicarbonilo

Anhídrido BOC Carbonato de di-ferí-butilo

B²pin² bis(pinacolato)diboro-diboro, también conocido como 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bis(1,3,2-dioxaborolano)

Celite® Un adyuvante de filtración compuesto por sílice de diatomeas lavada con agua, (una marca registrada de la empresa Manville Corp., Denver, Colorado)

CTAB Bromuro de cetiltrimetilammonio

DCM diclorometano

DIAD Azodicarboxilato de diisopropilo

DIBAL-H Hidruro de diisobutil-aluminio

DME dimetoxietano

DCE dicloroetano

DMF dimetilformamida

DMSO-d6 Dimetilsulfóxido deuteratedo

DMSO dimetilsulfóxido

DS sensible al fármaco

ESI Ionización por electropulverización

ES MS Espectrometría de masas por electropulverización

EÍ2Ü Dietil-éter

EtOH etanol

EtOAc, EA acetato de etilo

h horas

HPLC Cromatografía líquida de alta resolución

KOAc Acetato de potasio

LCMS Espectroscopia de masas de cromatografía líquida

mCPBA Ácido meta-cloro-perbenzoico

MDR multi-fármaco resistente

MeNO2 nitrometano

MeOH metanol

NBS N-bromosuccinimida

NCS N-clorosuccinimida

NIS N-yodosuccinimida

NXS N-halosuccinimida

NaBH(OAc)3 Triacetoxiborohidruro de sodio

NMR Espectroscopia de resonancia magnética nuclear

PE Éter de petróleo

PPh3 trifenilfosfina

ta o t.a. Temperatura ambiente

RT Tiempo de retención

SFC Cromatografía de fluidos supercríticos

t-BuOMe Metil-t-butil-éter

THF tetrahidrofurano

uv ultravioleta

XDR TB extremadamente resistente a fármacos

Ejemplos

Los siguientes ejemplos ilustran la invención. Estos ejemplos no están destinados a limitar el alcance de la invención, sino que en lugar de ello proporcionan una guía al experto en la técnica para preparar y usar el compuesto, composiciones y métodos de la invención. Aunque se describen realizaciones particulares de la invención, el experto en la técnica apreciará que se pueden hacer diversos cambios y modificaciones. Las referencias a las preparaciones llevadas a cabo de una manera similar o mediante el método general de otras publicaciones, puede abarcar variaciones en parámetros rutinarios como el tiempo, temperatura, condiciones de tratamiento, cambios menores en las cantidades de reactivos, etc.

Se registraron espectros de resonancia magnética nuclear protónica (1H RMN) y los desplazamientos químicos se expresaron en partes por millón (5) con relación a la referencia del disolvente (DMSO-d6 = 2,50, CDCl3 = 7,27). Los datos para las abreviaturas de RMN son como sigue: s = singlete, d = doblete, t = triplete, q = cuartete, m = multiplete, dd = doblete de dobletes, dt = doblete de tripletes, app = aparente, br = ancho. Los espectros de masas se obtuvieron usando técnicas de ionización de electropulverización (ES). Todas las temperaturas expresadas en grados centígrados.

Ejemplo 1a: Síntesis de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 h,3h)-diona

Se disolvieron 2,3-dimetilfenol (2,14 g, 1,0 equiv.), 4-((metilsulfonil)oxi)piperidino-1-carboxilato de ferc-butilo (10,04 g, 1,6 equiv.), y carbonato de cesio (14,6 g, 2,0 equiv.) en N,N-dimetilformamide (400 ml) y la solución resultante se calentó a 90°C durante 20 h. Seguidamente el disolvente se evaporó la solución resultante se diluyó con diclorometano (250 ml) e hidróxido de sodio acuoso 3 M (250 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo dos veces con diclorometano (250 ml x2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para proporcionar un aceite en bruto. Este aceite se purificó parcialmente mediante cromatografía de columna (eluyendo con 0-10% de gradiente de acetato de etilo:ciclohexano). Los disolventes se separaron de la fracción deseada mediante evaporación seguida de dilución nuevamente con diclorometano (150 ml) e hidróxido de sodio 3 M (150 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo dos veces con diclometano (2x 150 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para proporcionar una mezcla ~ 2:1 de 4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidina-1-carboxilato de terc-butilo y el subproducto de eliminación 5,6-dihidropiridino-1(2H)-carboxilato de terc-butilo. Esta mezcla se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.

La mezcla anteriormente mencionada se disolvió en solución 3 M de ácido clorhídrico en metanol (25 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 7 h hasta que observó una conversión completa del material de partida mediante análisis de partes alícuotas por cromatografía de capa fina y RMN. Después de la evaporación de los disolventes, el sólido en bruto resultante se diluyó con diclorometano (100 ml) e hidróxido de sodio acuoso 1 M (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo tres veces con diclorometano (4x100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para proporcionar un aceite en bruto. Después de dejar el aceite bajo alto vacío durante 1,5 horas, se detectaban todavía impurezas residuales. La muestra se diluyó con diclorometano (100 ml) e hidróxido de sodio acuoso 2 M (100 ml). La capa acuosa se separó y se extrajo dos veces con diclorometano (2x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para proporcionar 4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidina (2,93 g, rendimiento cuantitativo). 1H Rm N (400 MHz, CDCl3) 57,03 (1H, t, J = 7,8 Hz), 6,78 (1H, d, J = 7,3 Hz), 6,74 (1H, d, J, = 8,1 Hz), 4,35 (1H, m), 3,15 (2H, ddd, J = 3,8, 6,3, 12,4 Hz), 2,74 (2H, ddd, J = 3,3, 8,8, 12,4 Hz), 2,28 (3H, s), 2,18 (3H, s), 2,00 (2H, m), 1,72 (2H, m), 1,58 (1H, bs).

Se colocaron 6-(clorometil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona (2,5 g, 1,1 equiv.), 4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidina (2,93 g, 1,0 equiv.) y CH³CN (15 ml/g) en un matraz. Se añadió Et³N (3,95 ml, 2 equiv.) a la suspensión y la mezcla se agitó a reflujo 2,5 h. El disolvente se evaporó y los sólidos se lavaron con NaOH (0,5 M, 15 ml) para 6-(clorometil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona en exceso en exceso, H²O (3x15 ml) y Et²O (2x15 ml) para proporcionar 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona con un rendimiento de 96%. ¹H Nm R (400 MHz, CD³OD) 5 6,98 (1H, t, J = 8,1 Hz), 6,77 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,73 (1H, d, J = 7,6 Hz), 4,49 (1H, m), 2,76 (2H, m), 2,45 (2H, m), 2,24 (3H, s), 2,15 (3H, s), 2,01 (2H, m), 1,86 (2H, m).

Ejemplo 1b: Síntesis de 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1ñ,3ñ)-diona

Se suspendieron 6-(clorometil)pirimidina-2,4-(1 H,3H)-diona (166 g, 1034 mmoles, 1,0 equiv) e hidrocloruro de 4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidina (250 g, 1034 mmol, 1,0 equiv) en CH³CN (3 L) en un recipiente de vidrio de 10 L recubierto con camisa y después se añadió trietilamina (0,288 L, 2068 mmol, 2,0 equiv). La mezcla se agitó a reflujo durante 3 h y 30 min. Se evaporó el disolvente y al producto bruto se añadió NaOH (0,5 M, 1075 ml, 538 mmol, pH 9-10). La mezcla se agitó durante 30 min y después se filtró, se lavó con agua (1000 ml) y se secó a vacío. El sólido se disolvió en 1-butanol (1,7 L) y se calentó a 140°C durante 30 min y después se enfrió a temperatura ambiente durante 3 h. El precipitado se separó por filtración, y después se suspendió en H²O (2 L) y se agitó a reflujo durante 1 h. La mezcla se enfrió a 5°C y después se filtró. El sólido se lavó con TBME (1000 mL) y se secó a vacío para dar 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona con un rendimiento del 78% y alta pureza (99,35%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 10,94 (1H, s), 10,64 (1H, br s), 6,99 (1H, t, J = 7,8 Hz), 6,81 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,73 (1H, d, J = 7,3 Hz), 5,47 (1H, s), 4,36 (1H, m), 3,20 (2H, s), 2,64 (2H, m), 2,35 (2H, m), 2,19 (3H, s), 2,08 (3H, s), 1,89 (2H, m), 1,68 (2H, m); LCMS (Es ) [M+H] calculado para C¹⁸H⁰N³O³330,17, encontrado 330.

El compuesto 6-((4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidina-2,4(1 H,3H)-diona también se adquirió en Enamine.

Actividad biológica

Ejemplo 2: Actividad contra Mycobacterium bovis BCG cepa Pasteur 1173P2

La actividad antitubercular frente M. bovis BCG se hizo usando un ensayo de alta producción.

Se hicieron crecer inóculos bacterianos durante 4-5 días en medio Middlebrook 7H9 (Difco cat. n° 271310) con glucosa como fuente de carbono. El medio de cultivo contenía por litro: 4,7 g de polvo de Middlebrook 7H9, 5 g de albúmina, 1 g de glucosa, 0,85 g de NaCl y 0,25 g de Tween 80. La solución se esterilizó mediante filtración a través de un filtro de 0,2 pm.

El ensayo se llevó a cabo en placas esterilizadas de 1536 pocillos (Greiner, 782074). El/Los compuesto(s) de ensayo se añadieron a las placas en forma de una solución de 50 nl en DMSO puro antes de la adición de los componentes del ensayo usando un instrumento Echo 555 (Labcyte Inc). Las placas de ensayo se rellenaron posteriormente con 5 pl de la solución bacteriana (ajustado a 105 bacterias por ml) usando un instrumento Multidrop Combi NL (Thermo Fischer Scientific Inc.). Las placas inoculadas se asociaron en grupos de 7-8 placas, con la placa superior tapada con una tapadera esterilizada. Las placas se cubrieron cuidadosamente con una hoja de aluminio para evitar la evaporación y se dejaron incubar a 37 °C a un 80% de humedad relativa durante siete días.

Después del periodo de incubación, las placas se retiraron de la incubadora y se dejaron equilibrar a temperatura ambiente. Se añadió BacTiter-Glo recientemente reconstituido (5 pl, Promega) a cada pocillo usando el instrumento Multidrop Combi. Después de dejar en reposo a temperatura ambiente durante 7-8 minutos, se cuantificó la señal de luminiscencia con un lector Acquest (Molecular Devices) y el modo de luminiscencia enfocado. Cada placa del ensayo contenía dos columnas de testigos negativos (ctrl 1) con DMSO, que corresponde cada una reacciones de actividad de 100% (luminiscencia máxima) y dos columnas de testigos positivos (ctrl 2) en la que se alcanzó una inhibición de 100% añadiendo un inhibidor conocido (rifampicina 2 pM como patrón; crecimiento bacteriano completamente inhibido). Estos testigos se usaron para verificar la calidad del ensayo a través de la determinación de Z’ así como normalizar los datos sobre una base por placa. El efecto de un compuesto dado se calcula como: % inh = 100x[(datos-ctrl 1)/(ctrl 2-ctrl 1)].

Ejemplo 3a: Ensayo de viabilidad extracelular (método 1)

La actividad antitubercular frente a Mycobacterium tuberculosis (cepa H37Rv de la ATCC cat #27294) que expresa la proteína fluorescente verde (GFP) que crece en diferentes fuentes de carbono (glucosa o colesterol) se realizó en placas de 384 pocillos. Se preparó un cultivo de partida diluyendo una parte alícuota congelada en 50 ml de medio 7H9C (4,7 g/litro de polvo de Middlebrook 7H9, 0,81 g/litro de NaCl, 5 g/litro de BSA, 2 g/litro de d-dextrosa y 0,05% de Tween 80).

El cultivo se incubó durante tres días a 37 °C para obtener un cultivo en crecimiento con una OD⁶⁰⁰ de 0,2 a 0,3.

Ensayo estándar (medios de glucosa)

Los inóculos de trabajo se prepararon diluyendo el cultivo en crecimiento con medio 7H9 sin glicerol y la OD⁶⁰⁰ se ajustó a 0,02 antes de añadir a la microplaca del ensayo.

Ensayo de colesterol (medio de colesterol)

Para preparar suspensión bacteriana, se usaron células de fase log crecidas en medio 7H9 para inocular un medio mínimo definido (4,7 g/litro de polvo Middlebrook 7H9, 1 g/litro de KH² PO⁴ , 2,5 g/litro Na²HPO⁴ , 0,5 g/litro de asparagina, 50 mg/litro de citrato de amonio férrico, 10 mg/litro MgSO⁴ -7H²O, 0,5 mg/litro de CaCl² , y 0,1 mg/litro de ZnSÜ⁴ , 2% de BSA, y 1 mg/ml de colesterol) a una A⁶⁰⁰ inicial de 0,02. La solución madre de colesterol (100 mg/ml) se prepare en tiloxapol/etanol (1:1) y se calentó a 65 °C durante 30 minutos antes de la adición.

El compuesto de ensayo se diluyó en serie (dilución de 3 veces, 10 puntos) en DMSO al 100% a una concentración máxima de 2 mM.

La placa maestra de compuesto se repitió en la placa de ensayo transfiriendo 0,5 gl de cada pocillo usando el instrumento HummingBird Plus38, 40 gl de solución madre de trabajo bacteriana y 10 gl de medio.

Las placas se incubaron a 37 °C durante 5 días. El crecimiento bacteriano se determinó midiendo la intensidad de la fluorescencia relativa usando un lector de placas VICTOR3. La IC⁵⁰, la concentración del compuesto que inhibe el crecimiento en comparación con el testigo exento de fármaco después de 5 días en un 50%, se determinó usando el software Graph Pad PRISM®.

Ejemplo 3b: Ensayo de viabilidad extracelular, medio glucosa (método 2)

La cepa H37Rv de M. tuberculosis se cultivó en medio Middlebrook 7H9 suministrado con ADC al 10% y Tween 80 al 0,025% y se incubó a 37°C durante aproximadamente 10 días.

La pureza se comprobó y el cultivo se subcultivó en medio Middlebrook 7H9 suministrado con ADC al 10% y Tween al 0,025% hasta Od (600 nm) = 0,01 y se incubó a 37°C durante 4-6 días. El inóculo se normalizó a aprox. 1x107 ufc/ml midiendo la DO a 600 nm. El cultivo se diluyó (1/100) en caldo Middlebrook 7H9 suministrado con ADC al 10% y Tween al 0,025%. Se hicieron 10 diluciones al doble de fármaco en DMSO en pocillos de microtitulación de fondo en V y se añadieron 5 gl de solución de fármaco a 95 gl de Middlebrook.

Se colocó medio 7H9 (filas 1-10, líneas A-H) en placas de microtitulación de fondo plano. En paralelo, se realizó un control de 8 diluciones al doble de isoniazida en DMSO (comenzando a 160 gg/ml) y se añadieron 5 gl de control a 95 gl de medio Middlebrook H9 (fila 11, líneas A-H).

Se añadieron 5 ul de DMSO a la fila 12. Se añadieron 100 ul de inóculo a toda la placa excepto a 12A-12F (controles en blanco). Se añadieron 100 ul de medio Middlebrook 7H9 con ADC al 10% a controles en blanco. Todas las placas se colocaron en una caja sellada para evitar la evaporación e incubar a 37°C durante seis días. Después se añadieron 25 gl de solución de resazurina a cada pocillo (un comprimido en 30 ml de PBS estéril)y las placas se incubaron a 37 °C durante dos días adicionales. Finalmente, se midió la fluorescencia. El valor MIC fue la concentración mínima de compuesto que da una señal de fluorescencia inferior a 2,5 veces la fluorescencia media de los controles en blanco. Los pocillos también se pueden leer visualmente en un lector de espejos de microtitulación y se registran valores de MIC; el valor de MIC se consideró como la concentración mínima de compuesto que inhibía completamente el crecimiento visible del organismo como se detecta mediante la reducción de la resazurina (pocillos azules).

Ejemplo 3c: Ensayo de viabilidad extracelular, cepa Erdman, medio de colesterol (método 3) Preparación de medio de colesterol al 0,01%

Preparación de medio base

Se prepararon 2 bottellas def 2L de medio base:

Ingrediente volumen final 2 litros - 0,5 g de KH²PO⁴ (Panreac, Cat.#141509) 2g

- 1,25 g de Na2HPO4 (Panreac, Cat.#131679) 5g

- 0,25 g de L-Asparagina monohidratada (Sigma Aldrich, Cat.#A8381) 1 g

- 25 mg de citrato férrico amónico (Sigma Aldrich, Cat. # 22896-6) 100 mg

- 5 mg de MgSO4- 7H20 [solución madre 100 mg/ml] (Sigma Aldrich, Cat. #M5921) 20 mg o 200 ul solución madre

- 0,25 mg de CaCͲ [solución madre 1M] (Sigma Aldrich, Cat. #C8106) 1 mg ó 18 ul solución - 0,5 mg ZnSO4 [solución madre 10 mg/ml] (Sigma Aldrich, Cat. #Z2876) madre

0,2 mg o 20 ul solución madre

Se disolvió en 449,5 ml de milliQ-water.

El medio base se precalentó a 65°C.

Solución de colesterol

Se pesaron 100 mg de colesterol (Sigma, Cat.# C8667-25G) en un tubo eppendorf (se usaron 4 alícuotas de colesterol por 4L de medio)

Se preparó una solución 1:1 de etanol 100% (Merck Millipore, Cat.# 159010) y tiloxapol 100% (Sigma, Cat.#T0307-60G). La solución se calentó hasta 72°C en un baño seco con agitación.

Solución de colesterol: se diluyeron 100 mg de colesterol en 1 ml de solución 1:1 de tiloxapol y etanol en un baño seco con agitación a 72°C y se agitó usando un vórtice para disolver completamente el colesterol.

Se resuspendió 1ml de solución de colesterol en 1 litro de medio base pre-calentado a 65°C.

El medio se agitó e hirvió hasta que el colesterol se disolvió compeltamente.

Resazurina

Se añadió 1 comprimido de resazurin (Fisher Scientifics, cat#R/0040/74) per 30 ml of PBS 1X.

Preparación del cultivo celular

La cepa Erdman de Mycobacterium tuberculosis se hizo crecer en medio base enriquecido con 0,01% de colesterol durante 12-16 días hasta alcanzar una densidad óptica [DO(600nm)] entre 0,15-0,26. Se diluyeron las células en medio de colesterol de nueva aportación hasta una DO(600nm) inicial =0,015 (1,2x106 CFU/ml) y se suministraron 200 ml a cada pocillo.Las placas se sellaron con parafilm y se incubaron a 37°C durante 7 días dentro de un recipiente.

Después de los 7 días de incubación, se añadieron 25 ml de resazurina (ver sección A2 del apéndice) a cada pocillo y se incubaron durante 48 horas a 37°C. Después de ese período, se dejó que las placas se equilibraran a temperatura ambiente y se midió la fluorescencia del punto final en un lector de microplacas espectrofotómetro Spectramax M5 (Molecular Devices Equipment) a 1600 nm.

Para el análisis de datos se utilizó XLFit para Excel para generar un modelo de regresión no lineal para ajustarse a los resultados normalizados de las curvas de respuesta a la dosis y IC50.

Ejemplo 4: Ensayo de viabilidad intracelular 1a

La actividad antitubercular del compuesto frente a Mycobacterium tuberculosis que crece dentro de monocitos THP-1 humanos se determinó usando M. tuberculosis H37Rv que contiene el gen de luciferasa de luciérnaga.

Los monocitos THP-1 se mantuvieron en suspensión en un medio RPMI-1640 que contiene 10% de FBS, piruvato 1 mM, L-glutamina 2 mM y se incubó a 37 °C con 5% de CO².

Los monocitos se hicieron crecer hasta sub-confluencia (5x105 células/ml) y se infectan durante 4 h en una botella con ruedas celular con una multiplicidad de infección (MOI) de 1 con suspensión bacteriana dispersando en gránulos de vidrio asépticamente en RPMI-0,05% de Tween 80. Las bacterias en exceso se separaron lavando cinco veces en medio RPMI (1.500 rpm, 5 minutos).

Las células infectadas se suministraron en placas blancas de 96 pocillos (50.000 células/pocillo) que contienen diluciones en serie 1:2 de compuesto. El porcentaje de DMSO debe estar por debajo de 0,5%.

La luminiscencia se midió después de 5 días usando un estuche de ensayo Steady-Glo Promega en un sistema Victor 1420. Los resultados se trataron usando un software Grafit. Los valores de IC50 se calculan a partir de las curvas de respuesta a la dosis mediante análisis de regresión no lineal.

Ejemplo 4: Ensayo de viabilidad intracelular 1b

La actividad antitubercular del compuesto frente a Mycobacterium tuberculosis que crece dentro de monocitos THP-1 humanos se determinó usando M. tuberculosis H37Rv que contiene el gen de luciferasa de luciérnaga.

Los monocitos THP-1 se mantuvieron en suspensión en un medio RPMI-1640 que contenía 10% de FBS, piruvato 1 mM, L-glutamina 2 mM y se incubó a 37 °C con 5% de CO².

Los monocitos se hicieron crecer hasta sub-confluencia (5x105 células/ml) y se infectaron durante 4 h en una botella con ruedas celular con una multiplicidad de infección (MOI) de 1. Las bacterias en exceso se separaron lavando cinco veces en medio RPMI (1.500 rpm, 5 minutos).

Las células infectadas se suministraron en placas blancas de 96 pocillos (50.000 células/pocillo) y se añadieron diluciones en serie 1:3 de compuesto a la placa de células. El porcentaje de DMSO debe estar por debajo de 0,5%. La luminiscencia se midió después de 5 días usando un estuche de ensayo Steady-Glo Promega en un sistema Victor 1420. Los resultados se trataron usando un software Grafit. Los valores de MIC90 se calculan a partir de las curvas de respuesta a la dosis mediante análisis de regresión no lineal.

Ejemplo 5: Ensayo de viabilidad intracelular 2

La actividad antitubercular del compuesto frente a Mycobacterium tuberculosis que crece en la línea celular Raw 264.7 de múridos (Cat.TIB-71) se determinó usando M. tuberculosis modificado a partir de la cepa H37Rv obtenido de la entidad ATCC (Cat. 27294) mediante inserción de gen GFP.

Se obtuvieron células de macrófagos en bruto de la entidad ATCC y se cultivaron en medio de cultivo de macrófagos (RPMIC) preparado a partir de RPMI 1640 (Welgene, Cat. LM011-01) complementado con 10% de suero bovino fetal (Gibco, Cat. 26140-079).

Se preparó un cultivo de partida mediante dilución de una parte alícuota congelada de macrófago en 30 ml de RPMIC en un matraz de cultivo celular de 75 cm2 con tapadera filtrada. Se mantuvieron en RPMIC a 37 °C en incubadora con 5% de CO2 y se hizo pasar dividiendo 1:5 cuando se alcanzó una confluencia de 80%. Se usaron para cuantificar la actividad intracelular del compuesto a partir del paso 3 pero nunca más del paso 10.

En cada experimento, se ensayaron rifampicina e isoniazida en respuesta a la dosis para fines de control de calidad. La rifampicina fue ensayada desde 12 pM hasta 0,4 nM y el isoniazida desde 73 pM hasta 2 nM (curva de respuesta a la dosis de 16 puntos).

El compuesto del ensayo se diluyó en serie (dilución de 3 veces, dilución de 10 puntos) en DMSO al 100% partiendo de una concentración de 2 mM (100x). Seguidamente, las placas maestras del compuesto se repitieron en las placas de ensayo, usando HummingBird Plus384, transfiriendo 0,5 pl en placas de ensayo que ya contenían 10 pl de RPMIC por pocillo.

Las células de macrófagos se cultivaron como sigue. Parte de la materia sobrenadante se retiró dejando solamente 10 ml. Seguidamente usando un rascador de células, las células fueron suavemente desprendidas, transferidas a un tubo cónico de 15 ml y centrifugadas a 1.100 rpm durante 5 minutos. La materia sobrenadante se desechó y las células se volvieron a poner en suspensión en 10 ml de RPMIC de nueva aportación. El número de células se determinó usando un hemocitómetro.

Después de 2 horas de infección, la suspensión de células/bacterias se centrifugó a menos de 1.100 rpm durante 5 minutos para separar bacterias extracelulares. Las células infectadas se volvieron a poner en suspensión suavemente en 30 ml/tubo de RPMI complementado con solamente FBS al 1% y se centrifugaron nuevamente a 1.100 rpm durante 5 minutos. La operación se repitió dos veces (3 lavados en total) y el sedimento celular final se volvió a poner en suspensión con un volumen de RPMIC para una concentración celular a 300.000 células/ml.

El ensayo se llevó a cabo en micro-placas de fondo liso de 384 pocillos en un volumen final de 50,5 pl. A cada pocillo que contenía 0,5 pl de compuesto del ensayo diluido en serie complementado con 10 pl de medio, se añadieron 40 pl de macrófagos infectados.

Las placas se incubaron a 37 °C y 5% de CO² durante 5 días.

Después de 5 días, los núcleos se tiñeron mediante la adición de 10 pl/pocillo de Syto60 (a 30 pM proporcionando una concentración final a 5 pM) durante 1 hora a 37 °C.

Seguidamente las placas se transfirieron a un microscopio de fluorescencia Evotec OPERA (Perkin Elmer) equipado con un software de adquisición Acapella para una lectura con un aumento de 10x Air en canal azul para Syto60 (excitación a 635 nm y lectura con filtro de 690/50) para la localización de núcleos/células y en canal verde para GFP (excitación a 488 nm y lectura con filtro de 520/35) para la localización de bacterias; al menos 4 campos por pocillo. Los datos se analizaron usando Graph Pad PRISM para determinar los valores IC⁵⁰ frente a M. tuberculosis (H37Rv-GFP).

Ejemplo 6: Modelo agudo en ratón

Se adquirieron ratones hembras C57BL/6 de 8-10 semanas de edad, exentos de agentes patógenos específicos, de los laboratorios Harlan Laboratories y se dejaron aclimatar durante semana. Los ratones fueron infectados por vía intratraqueal con 100.000 CFU/ratón (cepa H37Rv de M. tuberculosis). El compuesto se administró una vez al día durante 8 días consecutivos partiendo del día uno después de la infección. Los pulmones se recolectaron 24 horas después de la última administración. Todos los lóbulos pulmonares fueron asépticamente extirpados, homogeneizados en agua destilada y congelados. Los homogenatos se dispusieron en placas en 10% de OADC-7H11 complementado con carbón activado al 0,4% durante 18 días a 37 °C.

Resultados mostrados como reducción de carga de microorganismos en pulmones (log 10 cfu/pulmones) con respecto a testigos sin tratar (día 9):

Testigo positivo (moxifloxacina): reducción de 3,2 log¹⁰ CFU a 30 mg/kg

Compuesto del ensayo: reducción de 1,6 log¹⁰ CFU a 200 mg/kg

Ejemplo 7: Ensayo extracelular para resistencia a múltiples fármacos (MDR) M. tuberculosis

Las cepas resistentes a M. tuberculosis se hicieron crecer hasta una DO de 0,2-0,6 en un medio regular basado en 7H9 suplementado con 97 mg / ml de colesterol en una placa de 24 pocillos. En una placa transparente de fondo redondo de 96 pocillos se añadieron 50 pl de medio excepto en la primera fila. Se añadieron 100 uL de cada fármaco diluido en el mismo medio en la primera fila a 100 uM. Se transfirieron 50 pl a cada pocillo de la fila 1 a la 12. A cada pocillo se añadieron 2 x 104 bacterias y las placas se incubaron durante 3 semanas a 37°C en una bolsa de cremallera. En varios puntos de tiempo y con espejo de ampliación invertido se usó el lector de placas para clasificar como crecimiento o no crecimiento. Se estableció la MIC como la concentración que inhibía completamente el crecimiento. La MIC debe ser leída tempranamente cuando el crecimiento es claramente visible para evitar la proliferación en los puntos de tiempo más largos relacionados con la resistencia o los mecanismos reguladores de adaptación. Este punto de tiempo depende de la cepa (generalmente entre 1 y 2 semanas).

A la semana 2, se añadió 1/10 de volumen de Alamar Blue a placas con medio de colesterol y 7H9 regular. Después de la incubación a 37°C durante 24 h, las placas se leyeron mediante puntuación visual (azul = inhibición del crecimiento, rosa = crecimiento). La adición de Alamar Blue al medio de colesterol es necesaria para distinguir la precipitación del colesterol del crecimiento que ocurre si el medio se enfría durante la configuración de la MIC.

Discusión

Los datos presentados en los Ejemplos 2-7 anteriores ilustran que la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona posee actividad anti-micobacteriana bajo condiciones específicas, a saber, cuando los bacilos son macrófagos internos, o si no en presencia de colesterol tal como en un ensayo extracelular con un medio de colesterol. Estos descubrimientos son congruentes dado que los macrófagos se conoce que tienen elevadas concentraciones de colesterol intracelular. Este perfil biológico relacionado con el colesterol del compuesto es inusual y sugiere que el compuesto actúa a través de un nuevo mecanismo de acción. Son deseables nuevas dianas biológicas en la terapia de TB debido a la previsión de que la resistencia previamente existente es improbable que exista en el campo. Adicionalmente, tomando como diana micobacterias que pueden usar colesterol como fuente de carbono, este compuesto puede ser capaz de contribuir con un componente bactericida único a un régimen de fármacos de combinación para TB. Finalmente, los datos in vivo de múridos demuestran que la 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona es biodisponible por vía oral y eficaz frente a bacterias bajo las condiciones heterogéneas que se encuentran en experimentos con animales.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en terapia.

2. 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una enfermedad resultante de una infección micobacteriana en un mamífero.

3. 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para uso en el tratamiento de una infección micobacteriana en un mamífero.

4. 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso según la reivindicación 2 o 3, en donde la infección micobacteriana es una infección por Mycobacterium tuberculosis.

5. 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso según la reivindicación 2, en donde la enfermedad es tuberculosis.

6. 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, según la reivindicación 2 o 3, en donde el mamífero es un ser humano.

7. Una sal de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona.

8. Una sal farmacéuticamente aceptable de 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1 -il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona.

9. Una combinación de:

a) 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y

b) un segundo agente terapéutico.

10. Una combinación según la reivindicación 9, en la que el segundo agente terapéutico se selecciona independientemente entre isoniazida, rifampina, pirazinamida, etambutol, moxifloxacina, rifapentina, clofazimina, bedaquilina (TMC207), nitroimidazo-oxazina PA-824, delamanid (OPC-67683), OPC-167832, una oxazolidinona, un análogo SQ109 de EMB, una benzotiazinona, una dinitrobenzamida y un agente antiviral que incluye un agente antiretroviral.

11. Una combinación según la reivindicación 10, en la que la oxazolidinona es linezolid, tedizolid, radezolid, sutezolid (PNU-100480), o posizolid (AZD-5847).

12. Una combinación según la reivindicación 9, en la que el segundo agente terapéutico se selecciona entre un agente terapéutico aprobado o recomendado para el tratamiento de tuberculosis.

13. Una composición farmacéutica, que comprende a) 6-(4-(2,3-dimetilfenoxi)piperidin-1-il)metil)pirimidino-2,4(1 H,3H)-diona, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y b) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

14. Una composición farmacéutica según la reivindicación 13, que comprende un segundo agente terapéutico.

15. Una composición farmacéutica según la reivindicación 14, en donde el segundo agente terapéutico es como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 10-12.