CN108883114B

CN108883114B - 抗结核药物

Info

Publication number: CN108883114B
Application number: CN201780019751.XA
Authority: CN
Inventors: L.巴勒尔佩吉斯; D.巴罗斯阿吉雷; R.H.贝茨; J.卡斯特罗皮切尔; J.埃斯奎维亚斯普罗温西奥; K.佩特
Original assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Current assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Priority date: 2016-03-22
Filing date: 2017-03-20
Publication date: 2021-08-24
Anticipated expiration: 2037-03-20
Also published as: BR112018069487A2; US20190091224A1; CA3018611C; SI3432887T1; DK3432887T3; AU2017237380A1; TW201808295A; ES2833929T3; EP3432887B1; US10624893B2; UY37161A; AR107935A1; KR20180122006A; KR102479358B1; RU2018136747A; CN108883114A; WO2017162591A1; HRP20201861T1; RU2018136747A3; JP6961608B2

Abstract

本发明涉及6‑((4‑(2,3‑二甲基苯氧基)哌啶‑1‑基)甲基)嘧啶‑2,4(1H,3H)‑二酮或其药学上可接受的盐的治疗用途，包括用作抗分枝杆菌，例如治疗结核病；包含6‑((4‑(2,3‑二甲基苯氧基)哌啶‑1‑基)甲基)嘧啶‑2,4(1H,3H)‑二酮或其药学上可接受的盐的组合物；包含6‑((4‑(2,3‑二甲基苯氧基)哌啶‑1‑基)甲基)嘧啶‑2,4(1H,3H)‑二酮或其药学上可接受的盐和6‑((4‑(2,3‑二甲基苯氧基)哌啶‑1‑基)甲基)嘧啶‑2,4(1H,3H)‑二酮的盐的组合。

Description

抗结核药物

技术领域

本发明涉及6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的治疗用途，包括用作抗分枝杆菌，例如治疗结核病；包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的组合物；包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐和6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的盐的组合。

背景技术

分枝杆菌属是称为放线菌(Actinobacteria)的细菌的纲(具有已知为分枝杆菌科的其自身独特的家族)中的一个属。分枝杆菌属包含多种动物的专性致病菌和条件致病菌，其还可以传播至人并引起人中的疾病，因此展示出相当大的人兽互传潜力。在过去的几十年中，鸟胞内分枝杆菌(Mycobacterium avium-intracellulare)复合体(MAIC)的成员作为人疾病的病原体出现，包括儿童中的淋巴结炎，肺结核样疾病和散播的感染(主要在免疫受损的人中出现，尤其是AIDS患者中)。类似地，重要的动物疾病由该组的成员在动物中的感染引起，例如，禽结核病和反刍动物中的副结核病。MAIC包括胞内分枝杆菌(M.intracellulare)和鸟分枝杆菌的四个亚种，即，鸟分枝杆菌鸟亚种(M.aviumsubsp.avium)、鸟分枝杆菌候米瑟氏亚种(M.avium subsp.hominissuis)、鸟分枝杆菌森林土壤亚种(M.avium subsp.silvaticum)和鸟分枝杆菌副结核亚种(M.aviumsubsp.paratuberculosis)。鉴于结核分枝杆菌复合体的成员通过直接宿主接触而传播，MAIC种类主要从环境来源获得，包括土壤、水、尘土和饲料。

结核分枝杆菌(MTB)是小的好氧非运动性高GC杆菌，具有异常厚的、“蜡样的”、疏水的、富含分枝菌酸并极其不可渗透的“外膜”，使得分枝杆菌感染难于治疗。认为世界人口的三分之一被感染过(包括潜伏的MTB)，但该数字在许多亚洲和非洲国家增加至人口的80％以上。如果不治疗，活性MTB感染的死亡率超过50％。此外，HIV和MTB的组合是致命的且渐增的MTB菌株的数目正在变得对标准护理药物具有耐药性；每年报道了大约300,000例新的多药耐药(MDR)结核分枝杆菌病例。多药耐药(MDR)结核分枝杆菌对于异烟肼和利福平是耐药的，且广谱耐药性(XDR)结核分枝杆菌也对于至少一种喹诺酮和一种氨基葡糖苷是耐药的。XDR结核分枝杆菌已在全球许多地方报道。

将这些问题加上易于传播，旅行的全球化和世界人口的许多部分正在发生的重新分布和迁移，明显的是MTB正在变为全球性危机。

用于治疗结核病(TB)的合成药物已用了超过半个世纪，但该疾病的发病率持续在世界范围内增加。超过20亿人目前被结核分枝杆菌感染，大多数是潜伏病例，并且估计每年世界上有超过9百万新病例发生，导致每年170万至近200万例死亡。仅在2004年，就记录有每天大约24,500例新感染和接近5,500例死亡。参见Zignol,M等,M.Surveillance ofanti-tuberculosis drug resistance in the world:an updated analysis,2007-2010。Bull.World Health Organ2012,90(2),111-119D)与HIV的共感染使发病率增加(Williams,B.G.；Dye,C.Science,2003,301,1535)并且非洲AIDS患者的31％的死亡原因可归因于TB。参见Corbett，E.L等人,.Arch.Intl.Med.，2003，163，1009，Septkowitz，A等人，Clin.Microbiol.Rev.1995，8，180)。

结核病治疗和预防的限制性是众所周知的。目前可用的疫苗BCG在1921年推出并且无法保护大部分儿童期之后的人。根据2006年报道-“International Standards forTuberculosis Care”——由Tuberculosis Coalition for Technical Assistance(TBCTA)做出的文件(其参与者包括Centers for Disease Control、AmericanThoracicSociety、Tuberculosis Foundation、KNCV、World Health Organization和InternationalUnion Against Tuberculosis and Lung Disease)，的确感染有活动性疾病的患者目前持续两个月的组合治疗(其使用50-60年前推出的药物－异烟肼(1952)、利福平(1963)、吡嗪酰胺(1954)和乙胺丁醇(1961))－随后为异烟肼和利福平(也称为力复平(rifampicin))的另外4个月治疗。可选地，当无法评估依从性(adherence)时，持续期可以包括异烟肼和乙胺丁醇达六个月，但根据该报道，更长的持续期与更高的失败和复发率相关，尤其是在患有HIV感染的患者中。此外，如该报道中详述的，所用的抗结核病药物的剂量应遵循国际推荐，并且两种(异烟肼和利福平)、三种(异烟肼、利福平和吡嗪酰胺)和四种(异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇)药物的固定剂量组合是高度推荐的，尤其是当不可能监控患者以确保摄入治疗时。

在这些治疗期中需要每日给药并且差的顺应性使多药耐药菌株出现和传播，这对于治疗产生挑战。活性更高的药剂的更短疗程(其可以以更低频率摄取并对于耐药出现呈现高屏障，即，针对TB的多药耐药菌株(MDR-TB)有效的药剂)是迫切需要的。2013年3月的报道(http://www.aidsmap.com/Once-weekly-continuation-phase-TB-treatment-equals-standard-of-care/page/2589498/)建议利福喷汀(利福平的长效衍生物)与莫西沙星(TB治疗中之前未采用过的氟喹诺酮抗生素)的两种药物组合可以允许结核病(TB)治疗在四个月的持续期中每周一次地采用，并且取得与每日用异烟肼和利福平治疗的传统持续治疗相同的护理标准。此类治疗期将使得治疗监督在整个持续期扩展，增加依从性。然而，莫西沙星仍未批准用于治疗TB，并且每周一次的治疗方案尚未被认可或批准作为护理治疗的另一种标准——国际和国家层次的指导组将需要审查发表的证据以确定是否该另一种持续治疗方案应被推荐并采用。此外，利福喷汀价格昂贵，并且利福喷汀和非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)和蛋白酶抑制剂类别的抗逆转录病毒药物的相互作用可能阻止了其在还是HIV阳性且采用抗逆转录病毒药物的TB患者中的使用。因此，目前，采用每周的利福喷汀相比于每日利福平的持续治疗的花费/受益分析仍待充分评估。

结核病药物Sirturo^TM(贝达喹啉(bedaquiline))在2012年12月底在美国获得批准并且目前在欧盟也已批准。另一结核病药物迪拉马尼也已作为Deltyba^TM在EU获得监管批准。然而，两者均专供用于耐药结核病，这些耐药结核病仅占新病例的5％。2007年的Editorial and News Focus in NatureMedicine讨论了截至目前的TB的许多方面，诸如发病机制、流行病学、药物开发和疫苗开发(NatureMedicine,2007,Focus on Tuberculosis,Vol13(3),第263-312页)，其记录了在发现结核分枝杆菌周年后125年，世界上超过三分之一的人口感染有结核分枝杆菌，并且其中，10个人中超过一个人将在其生命中发生称为结核病的疾病(之前称为肺痨)。

当伴随结核分枝杆菌的多药耐药菌株(MDR-TB)的出现时，问题的规模被放大。对于一般的抗生素和抗微生物剂耐药的细菌和其他微生物的全球性出现产生了主要威胁。过去60年间大量的抗微生物剂不断散开到生态圈已经对抗微生物剂耐药病原体的出现和传播引入了强大的选择压力。因此，存在发现并开发新的治疗TB的化学实体的需求(近期进展综述于:Grosset JH，Singer TG，Bishai WR.New Drugs for the Treatment ofTuberculosis：Hope and Reality.Int J Tuberc Lung Dis.2012Aug；16(8):1005-14)。

本发明涉及6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮在治疗中的用途，特别是其对抗结核分枝杆菌的预料不到的活性。

发明内容

在本发明第一方面，提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，其用于治疗。

在本发明第二方面提供了在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法，包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。

在本发明第三方面提供了在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的方法，该方法包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。

在本发明第四方面提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，其用于在哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病。

在本发明第五方面提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，其用于在哺乳动物中治疗分枝杆菌感染。

在本发明第六方面提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，在制备用于治疗哺乳动物分枝杆菌感染的药物中的用途。

在本发明第七方面提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的盐。

在本发明第八方面提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的药学上可接受的盐。

在本发明第九方面提供了一种组合，其组成为

a)6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和

b)第二治疗剂。

在本发明第十方面提供了药物组合物，其包含a)6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和b)药学上可接受的赋形剂。

在本发明第十一方面提供了在感染分枝杆菌的哺乳动物中杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制的方法，包括将分枝杆菌与治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐接触或用治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐治疗感染分枝杆菌的哺乳动物，以杀死分枝杆菌和/或防止分枝杆菌的复制。

发明详述

本发明者已发现本文所述的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮在本文所述测试中显示活性特性，其表明新的作用方式。这种新的生物特性表明6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮特别适合用于与目前的抗结核病化合物组合并考虑在治疗感染有结核分枝杆菌的动物(包括人)中取得更高的效力。

耐药仍然是治疗结核病(TB)中的一个问题并且一种临床策略集中于与其他TB药物的早期组合和加速化合物在患者中的效力的早期评估。6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮提供了独特的机会以解决治疗TB过程中出现的严重问题，诸如多药耐药、广谱耐药、多药组合中治疗药剂之间的反应性和/或不利相互作用和治疗长度，由此解决潜在的患者需求。

本发明提供6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，即化合物(I)，或其药学上可接受的盐，其用于治疗。

在一个实施方案中，关于本文所述的在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法；或本文所述的在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的方法；所述哺乳动物为人。

本发明的另一实施方案提供关于本文所述的在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法；或本文所述的在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的方法；所述分枝杆菌感染为选自列表A的分枝杆菌的感染：结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)，包括亚种(subsp.)鸟分枝杆菌鸟亚种(Mycobacterium avium subsp.avium)、鸟分枝杆菌候米瑟氏亚种(Mycobacteriumavium subsp.hominissuis)、鸟分枝杆菌森林土壤亚种(Mycobacterium aviumsubsp.silvaticum)和鸟分枝杆菌副结核亚种(Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis)；堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、玛尔摩分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、猿分枝杆菌(Mycobacterium simiae)、斯氏分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)、龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)、副偶发分枝杆菌(Mycobacterium parafortuitum)、戈氏分枝杆菌(Mycobacterium gordonae)、牝牛分枝杆菌(Mycobacterium vaccae)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、牛分枝杆菌BCG、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、卡氏分枝杆菌(Mycobacterium canetti)、山羊分枝杆菌(Mycobacterium caprae)、田鼠分枝杆菌(Mycobacterium microti)、海豹分枝杆菌(Mycobacterium pinnipedi)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)、结核分枝杆菌复合体(MTC)、鸟分枝杆菌复合体(MAC)、鸟胞内分枝杆菌复合体(MAIC)、戈氏分枝杆菌进化枝；堪萨斯分枝杆菌进化枝；龟分枝杆菌进化枝；偶发分枝杆菌进化枝；副偶发分枝杆菌进化枝；和牝牛分枝杆菌进化枝。

在一个实施方案中，关于本文所述的在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法；或本文所述的在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的方法；所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。

在另一实施方案中，关于本文所述的在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法；或本文所述的在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的方法；所述分枝杆菌感染为可使用胆固醇作为碳源的分枝杆菌的感染。

另一实施方案提供在动物，特别是哺乳动物，更特别是人中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法，该方法包括向需要该治疗的动物给药有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐。

另一实施方案提供，关于本文所述的在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法，在哺乳动物中由分枝杆菌感染引起的疾病选自列表B：结核病、麻风病、约内病(Johne’s disease)、布路里溃疡或拜恩斯代尔溃疡(Buruli or Bairnsdale ulcer)、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、肺部疾病或肺部感染、肺炎、黏液囊、滑膜、腱鞘的脓肿、淋巴结炎、皮肤和软组织感染温德米尔女士综合征(Lady Windermere syndrome)、MAC肺疾病、散播的鸟分枝杆菌复合体(DMAC)、散播的鸟胞内分枝杆菌复合体(DMAIC)、热浴盆肺(hot-tub lung)、MAC乳腺炎、MAC脓性肌炎、鸟分枝杆菌副结核病或肉芽肿疾病。在另一实施方案中,关于本文所述的在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的方法，在哺乳动物中由分枝杆菌感染引起的疾病为结核病。

另一实施方案提供治疗动物，特别是哺乳动物分枝杆菌感染的方法，该方法包括向需要该治疗的动物给药治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。另一实施方案提供在动物，特别是哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的方法，其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌。

本发明的另一实施方案提供治疗动物分枝杆菌感染的方法，包括：向动物给药以下任一种：(i)治疗有效量6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐；(ii)治疗有效量的包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的组合；或(iii)治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，以治疗动物的分枝杆菌感染。

本发明的另一实施方案提供治疗动物分枝杆菌感染的方法，包括：向动物给药以下任一种：(i)治疗有效量6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐；(ii)治疗有效量的包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的组合；或(iii)治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的药物制剂，以治疗动物的分枝杆菌感染。

在一个实施方案中，关于6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，其用于在哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病，或其用于在哺乳动物中治疗分枝杆菌感染，所述哺乳动物为人。在另一实施方案，所述分枝杆菌感染为选自上述列表A的分枝杆菌的感染。在另一实施方案中，所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。在另一实施方案中，所述分枝杆菌感染为可使用胆固醇作为碳源的分枝杆菌的感染。

本发明进一步提供6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其用于治疗在动物，特别是人中的分枝杆菌感染。在相关方面，所述哺乳动物为人其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。在一个实施方案中，所述患有结核分枝杆菌感染的人还感染有逆转录病毒，包括人免疫缺陷病毒。

本发明进一步提供6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，其用于在动物，包括人中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病。本发明的另一实施方案提供6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，其用于在动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病，其中所述疾病选自结核病、麻风病、约内病(Johne’sdisease)、布路里溃疡或拜恩斯代尔溃疡(Buruli or Bairnsdale ulcer)、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、肺部疾病或肺部感染、肺炎、黏液囊、滑膜、腱鞘的脓肿、淋巴结炎、皮肤和软组织感染温德米尔女士综合征(Lady Windermere syndrome)、MAC肺疾病、散播的鸟分枝杆菌复合体(DMAC)、散播的鸟胞内分枝杆菌复合体(DMAIC)、热浴盆肺(hot-tub lung)、MAC乳腺炎、MAC脓性肌炎、鸟分枝杆菌副结核病或肉芽肿疾病。在另一实施方案中提供了6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，其用于在动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病，其中所述疾病为结核病。

在一个实施方案中，所述患有结核分枝杆菌感染的人还感染有逆转录病毒，包括人免疫缺陷病毒。

在一个实施方案中，关于6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，在制备用于治疗哺乳动物分枝杆菌感染的药物中的用途，所述哺乳动物为人。在另一实施方案，所述分枝杆菌感染为选自上述列表A的分枝杆菌的感染。在另一实施方案中，所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。在另一实施方案中，所述分枝杆菌感染为可使用胆固醇作为碳源的分枝杆菌的感染。在一个实施方案中，所述哺乳动物中由分枝杆菌感染引起的疾病选自上述列表B。在另一实施方案中，所述哺乳动物中由分枝杆菌感染引起的疾病为结核病。

另一实施方案提供6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐在制备用于治疗动物分枝杆菌感染的药物中的用途。

在一个实施方案中，关于a)6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐；和b)第二治疗剂的组合，所述第二治疗剂选自列表C：异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、莫西沙星、利福喷汀、氯法齐明、贝达喹啉(TMC207)、硝基咪唑并-噁嗪PA-824、迪拉马尼(OPC-67683)、OPC-167832、噁唑烷酮、EMB类似物SQ109、苯并噻嗪酮、二硝基苯甲酰胺和抗病毒剂，包括抗逆转录病毒剂。在另一实施方案中，所述噁唑烷酮为利奈唑胺、泰地唑胺、雷得唑来、sutezolid(PNU-100480)，或泼斯唑来(AZD-5847)。在另一实施方案中，所述第二治疗剂为批准或推荐用于治疗的治疗剂。

在一个实施方案中提供了所述组合，其中所述抗逆转录病毒剂独立地选自齐多夫定、去羟肌苷、拉米夫定、扎西他滨、阿巴卡韦、司他夫定、阿德福韦、阿德福韦二匹伏酯、福齐夫定、todoxil、恩曲他滨、阿洛夫定、氨多索韦、艾夫他滨、奈韦拉平、地拉韦啶、依非韦伦、洛韦胺、怡妙康、奥替普拉、卡普韦林、来司韦林、GSK2248761、TMC-278、TMC-125、依曲韦林、沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦、奈非那韦、安泼那韦、福沙那韦、布瑞那韦、达芦那韦、阿扎那韦、替拉那韦、帕利那韦、拉西那韦、恩夫韦地、T-20、T-1249、PRO-542、PRO-140、TNX-355、BMS-806、BMS-663068和BMS-626529、5-Helix、雷特格韦、埃替格韦、GSK1349572、GSK1265744、维立韦罗(Sch-C)、Sch-D、TAK779、马拉维若、TAK449、去羟肌苷、替诺福韦、洛匹那韦和达芦那韦。

在本发明某些实施方案中提供了抗结核病药物和6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的组合，其用于在动物，包括人中治疗结核分枝杆菌感染。在具体实施方案中，6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮与其它已知的抗结核病药物组合使用，以用于治疗患有结核分枝杆菌感染的动物受试者，特别是另外感染人逆转录病毒，特别是人免疫缺陷病毒(HIV)的动物受试者。

在本发明一个实施方案中，提供了组合，其包含：第一治疗剂，其中所述第一治疗剂为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和第二治疗剂；和任选第三治疗剂；任选第四治疗剂；任选第五治疗剂；和任选第六治疗剂，其中所述第二、和任选第三、第四、第五或第六治疗剂，不是6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中提供了如本文所述的组合，其中所述第二、或任选的第三、第四、第五和第六治疗剂独立地选自异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、莫西沙星、利福喷汀、氯法齐明、贝达喹啉(TMC207)、硝基咪唑并-噁嗪PA-824、迪拉马尼(OPC-67683)、OPC-167832、噁唑烷酮如利奈唑胺、泰地唑胺、雷得唑来、sutezolid(PNU-100480)、或泼斯唑来(AZD-5847)、EMB类似物SQ109、苯并噻嗪酮、二硝基苯甲酰胺和抗病毒剂。包括抗逆转录病毒剂。

本发明的另一实施方案提供如本文所述的组合，其中所述第二、或任选的第三、第四、第五和第六治疗剂选自批准或推荐用于治疗结核病的治疗剂。

另一实施方案提供治疗动物分枝杆菌感染的方法，包括：向动物给药以下任一种：(i)治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐；(ii)治疗有效量的包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的组合；或(iii)治疗有效量的包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的药物制剂，以治疗动物的分枝杆菌感染，其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。在一个实施方案中，分枝杆菌感染为选自上述列表A的分枝杆菌的感染。在另一实施方案中，所述分枝杆菌感染为可使用胆固醇作为碳源的分枝杆菌的感染。

如本文所述，本发明的实施方案包括向暴露于或感染有分枝杆菌菌种，包括结核分枝杆菌菌种的受试者共同给药(同时、相继或组合)，第一治疗剂6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，与第二治疗剂组合，任选组合有第三治疗剂，任选组合有第四治疗剂，任选组合有第五和/或第六治疗剂。在某些实施方案中，所述第一治疗剂为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，且第二和/或第三和/或第四治疗剂为抗结核药物。在某些实施方案中，所述分枝杆菌菌种为抗药性变体；在某些实施方案中所述分枝杆菌菌种为多药耐药性变体。

在一个实施方案中，上述药物组合物包含a)6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和b)药学上可接受的赋形剂，还包含第二治疗剂。在另一实施方案中，所述第二治疗剂选自上述列表C。在另一实施方案中，所述列表C的噁唑烷酮为利奈唑胺、泰地唑胺、雷得唑来、sutezolid(PNU-100480)、或泼斯唑来(AZD-5847)。在另一实施方案中，所述第二治疗剂为批准或推荐用于治疗结核病的治疗剂。

在一个实施方案中，提供了药物制剂，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的赋形剂、佐剂或稀释剂。在一个实施方案中，所述药物制剂包含第二治疗剂。

在本发明一个实施方案中提供了药物制剂，其包含第一治疗剂，所述第一治疗剂为治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐。相关的实施方案提供本文所述的组合和药学上可接受的赋形剂、佐剂或稀释剂。在另一实施方案中，所述药物制剂可进一步包含第二治疗剂。

在一个实施方案中提供了药物制剂，其包含第一治疗剂，所述第一治疗剂为治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的赋形剂、佐剂或稀释剂。

更具体地，提供了药物制剂，包含第一治疗剂6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，所述第一治疗剂为治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，在本文所述的任何实施方案中；药学上可接受的赋形剂、佐剂或稀释剂；和第二治疗剂，其不是6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。

在相关的实施方案中，该药物制剂包含第一治疗剂，其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，且任选包含不是6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的第二治疗剂，且任选包含第三治疗剂，且任选包含第四治疗剂，且任选包含第五治疗剂，且任选包含第六治疗剂。在相关的实施方案中，第二、第三、第四、第五和第六治疗剂为不是6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的抗分枝杆菌药物。在相关的实施方案中，第二、第三、第四、第五和第六治疗剂选自异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、莫西沙星、利福喷汀、氯法齐明、贝达喹啉(TMC207)、硝基咪唑并-噁嗪PA-824、迪拉马尼(OPC-67683)、OPC-167832、噁唑烷酮如利奈唑胺、泰地唑胺、雷得唑来、sutezolid(PNU-100480)、和泼斯唑来(AZD-5847)、EMB类似物SQ109、苯并噻嗪酮、二硝基苯甲酰胺和抗病毒剂，包括抗逆转录病毒剂。在相关的实施方案中，第二、第三、第四、第五和第六治疗剂为批准和/或推荐用于治疗结核病的治疗剂。

相关的实施方案提供药物制剂，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其盐，和第二治疗剂；和任选第三、第四、第五或第六治疗剂，其中所述第二或任选的第三、第四、第五或第六治疗剂为抗逆转录病毒剂，其选自齐多夫定、去羟肌苷、拉米夫定、扎西他滨、阿巴卡韦、司他夫定、阿德福韦、阿德福韦二匹伏酯、福齐夫定、todoxil、恩曲他滨、阿洛夫定、氨多索韦、艾夫他滨、奈韦拉平、地拉韦啶、依非韦伦、洛韦胺、怡妙康、奥替普拉、卡普韦林、来司韦林、GSK2248761、TMC-278、TMC-125、依曲韦林、沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦、奈非那韦、安泼那韦、福沙那韦、布瑞那韦、达芦那韦、阿扎那韦、替拉那韦、帕利那韦、拉西那韦、恩夫韦地、T-20、T-1249、PRO-542、PRO-140、TNX-355、BMS-806、BMS-663068和BMS-626529、5-Helix、雷特格韦、埃替格韦、GSK1349572、GSK1265744、维立韦罗(Sch-C)、Sch-D、TAK779、马拉维若、TAK449、去羟肌苷、替诺福韦、洛匹那韦、或达芦那韦。

在一个实施方案中，关于在感染分枝杆菌的哺乳动物中杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制的方法，包括将分枝杆菌与治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐接触，或用治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐治疗感染分枝杆菌的哺乳动物，以杀死分枝杆菌和/或防止分枝杆菌的复制，所述分枝杆菌为结核分枝杆菌。在另一实施方案中，所述哺乳动物为人。在另一实施方案中，所述分枝杆菌可使用胆固醇作为碳源。

另一实施方案提供杀死分枝杆菌和/或抑制引起动物疾病的分枝杆菌的复制的方法，包括将分枝杆菌与有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐接触，以杀死分枝杆菌和/或防止分枝杆菌的复制。

在另一实施方案中，本发明提供杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制或治疗动物分枝杆菌感染的方法，例如牲畜和宠物，包括牛、绵羊、山羊、狗和猫，或人，包括免疫抑制的人，所述方法，包括：将分枝杆菌与有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮接触，从而杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制，或所述方法包括向动物给药分枝杆菌感染治疗有效量的化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。在一个示例性实施方案中，6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮为本文所述的药物制剂的一部分。在另一示例性实施方案中，所述接触在允许化合物进入分枝杆菌的条件下发生。

在其它具体实施方案中提供了杀死分枝杆菌的方法，包括将分枝杆菌或暴露于或感染分枝杆菌的动物包括人与第一治疗剂(其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐)接触，任选将细胞或受试者与第二治疗剂接触，任选将细胞或受试者与第三治疗剂接触，任选将细胞或受试者与第四治疗剂接触，任选将细胞或受试者与第五和/或第六治疗剂接触，使得该接触杀死分枝杆菌细胞。在具体实施方案中，所述第一治疗剂为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐且所述任选的第二、第三、第四、第五和/或第六治疗剂为抗结核药物或其盐。在其它具体实施方案中，所述受试者暴露于或感染结核分枝杆菌。

其它具体实施方案提供抑制分枝杆菌细胞复制的方法，该方法包括将分枝杆菌细胞或暴露于或感染分枝杆菌细胞的动物包括人与第一治疗剂(其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其盐)接触，任选将分枝杆菌细胞或动物与第二治疗剂接触，任选将分枝杆菌细胞或动物与第三治疗剂接触，任选将分枝杆菌细胞或动物与第四治疗剂，任选将分枝杆菌细胞或动物与第五和/或第六治疗剂接触，使得该接触抑制分枝杆菌细胞的复制。在具体实施方案中，所述第一治疗剂为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其盐且所述任选的第二、第三、第四、第五和/或第六治疗剂为抗结核药物或其盐。在其它具体实施方案中，所述受试者暴露于或感染结核分枝杆菌。

6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的胆固醇依赖性作用方式特别重要。这种生物学特征使得该化合物在已知的抗结核药物中是独特的。通过靶向新途径，预期该化合物可以规避临床环境中存在的TB抗性机制，从而为结核病的新治疗方案提供有用的组分。此外，通过靶向胆固醇分解代谢途径，该化合物可能能够靶向对标准药物不太敏感的杆菌亚群。因此，该化合物还可以具有对抗其他能够降解胆固醇并将其用作碳源的细菌的活性。

具体实施方案的详述

如本文所用的“动物”是指以有机物质为食的物种(动物界)生物体中的任何一种，通常具有专门的感觉器官和神经系统并且能够快速响应刺激。“动物”包括牲畜和宠物，包括牛、绵羊、山羊、狗和猫，或人，包括免疫抑制的人。

本文所用的“哺乳动物”是指一类温血脊椎动物，其特征在于拥有毛发或毛皮，雌性分泌乳汁以供幼崽的营养，并(通常)分娩活幼崽。

本文所用的“本发明化合物”是指6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。

本文所用的“本发明的组合”是指6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和第二治疗剂；和任选第三治疗剂；任选第四治疗剂；任选第五治疗剂；和任选第六治疗剂的组合。

“有效”量的化合物、其组合或其制剂意指为活性剂的化合物(包括其制剂的组合)的量：其使得所述量足以提供期望的局部或全身性作用。“治疗有效的”或“药学上有效的”量指化合物(包括其组合或制剂)的量，其足以实现期望的治疗或药学结果。

在一方面，本发明涉及6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的盐，例如三氟乙酸盐。在另一方面，本发明涉及化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的药学上可接受的盐。

术语“药学上可接受的盐”预期包括6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的盐，其用相对无毒的酸或碱制备。可以通过使化合物的中性形式与足量的期望的碱接触(纯形式(neat)或在合适的惰性溶剂中)来获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐的实例包括钠、钾、钙、铵、有机氨基(诸如胆碱或二乙胺或氨基酸诸如d-精氨酸、l-精氨酸、d-赖氨酸或l-赖氨酸)、或镁盐、或类似的盐。可以通过使化合物的中性形式与足量的期望的酸接触(纯形式(neat)或在合适的惰性溶剂中)来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自以下的无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸、或亚磷酸等，以及衍生自以下的相对无毒的有机酸的盐：乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、酞酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸的盐诸如精氨酸盐等，和有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如Berge等,"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science66:1-19(1977))。

在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘化物、氮化物、碳酸盐、碳酸一氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、硫酸盐、硫酸一氢盐、硫酸二氢盐、或膦酸盐。

在本发明的一个实施方案中，药学上可接受的盐选自乙酸盐、丙酸盐、异丁酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、葡糖醛酸盐、半乳糖醛酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐或甲磺酸盐。

化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮包含使得化合物转化为碱或酸加成盐的碱性和酸性官能团。

6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的中性形式优选通过将盐与碱或酸接触且以常规方式分离母体化合物而产生。该化合物的母体形式在某些物理性质例如在极性溶剂中的溶解度上不同于各种盐形式。

本领域技术人员将理解化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮可以多种不同互变异构形式存在。在一个实施方案中，该化合物为与化学名6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮不同的互变异构形式。此外，该化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮具有胺基团且随后也可为两性离子形式，也称为内盐。因此，在一个实施方案中，该化合物为两性离子形式。两性离子形式可被本领域技术人员视为互变异构形式。6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的互变异构体的实例，包括两性离子的实例，如下所示。

应理解本文提及的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮预期包括其所有互变异构体，以及其两种或更多种互变异构体的混合物。

化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮可以以结晶或非结晶形式制备，并且，如果结晶，则可以任选被溶剂化，例如作为水合物。溶剂合物的形式可为化学计量的溶剂合物(例如水合物)以及含有可变量的溶剂(例如水)的化合物。化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮可以同位素标记的形式制备，该同位素标记的形式与6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮相同，例外在于以下事实：一个或多个原子被具有与自然界中最通常发现的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子所替代。可掺入6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、碘和氯的同位素，如³H、¹¹C、¹⁴C、¹⁸F、¹²³I或¹²⁵I。

同位素标记的化合物，例如放射性同位素如³H或¹⁴C已掺入其中的那些可用于药物和/或底物组织分布测定。氚化的即³H和碳-14即¹⁴C同位素由于其易于制备和可检测性因而是特别优选的。¹¹C和¹⁸F同位素尤其可用于PET(正电子发射断层成像)。

因为本文所述的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮旨在用于药物组合物中，因此容易理解其优选以基本上纯的形式提供，例如纯度至少为60％，更合适地纯度为至少75％且优选为至少85％，尤其纯度为至少98％(％基于重量/重量计)。6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其盐的不纯的制剂可以用于制备用于药物组合物中的更纯的形式。

在一个实施方案中本发明提供药物组合物，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

本发明的另一实施方案进一步提供治疗哺乳动物，特别是人的分枝杆菌感染的方法，该方法包括向需要该治疗的哺乳动物给药有效量的第一治疗剂，其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。相关实施方案进一步包括向需要该治疗的哺乳动物给药有效量的第一治疗剂，其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，任选组合给药有效量的第二治疗剂，任选组合给药有效量的第三治疗剂，任选组合给药有效量的第四治疗剂，任选组合给药有效量的第五治疗剂，任选组合给药有效量的第六治疗剂。

在相关的实施方案中所述任选的第二、第三、第四、第五和第六治疗剂为抗分枝杆菌药物。在相关的实施方案中，给药第一治疗剂和任选给药第二、第三、第四、第五和第六治疗剂同时发生，或给药第一治疗剂和任选给药第二、第三、第四、第五和第六治疗剂相继发生。在本发明的其它相关实施方案中，第二，第三、第四、第五或第六治疗剂的任一种选自抗微生物剂、抗病毒剂、抗感染剂、镇痛药、维生素、营养补充剂、抗炎剂、镇痛药和类固醇。

本发明还提供药物组合物，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其用于在哺乳动物中治疗分枝杆菌感染，特别是人。

本发明还提供药物组合物，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，其用于治疗哺乳动物，特别是人的分枝杆菌感染。

在一个具体实施方案中，所述分枝杆菌感染和/或疾病通过口服给药本发明的化合物或组合而治疗。在一个示例性实施方案中，所述分枝杆菌感染和/或疾病通过静脉内给药本发明的化合物或组合而治疗。

药物制剂

在一个实施方案中，本发明为药物制剂，其包含：(a)药学上可接受的赋形剂；(b)本发明的化合物或组合。在另一实施方案中，所述药物制剂包含：(a)药学上可接受的赋形剂；和(b)本文所述的化合物或组合。在另一实施方案中，所述药物制剂包含：(a)药学上可接受的赋形剂；和(b)本文所述的化合物或组合，或其盐。在另一实施方案中，所述药物制剂包含：(a)药学上可接受的赋形剂；和(b)本文所述的化合物或组合，或其盐。在另一实施方案中，所述药物制剂包含：(a)药学上可接受的赋形剂；和(b)本文所述的化合物或组合，或其盐。在另一实施方案中，所述药物制剂包含：(a)药学上可接受的赋形剂；和(b)本文所述的化合物的盐或组合。在一个示例性实施方案中，所述盐为药学上可接受的盐。在另一实施方案中，所述药物制剂包含：(a)药学上可接受的赋形剂；和(b)本文所述的化合物或组合。在一个示例性实施方案中，所述药物制剂为单位剂型。在一个示例性实施方案中，所述药物制剂为单一单位剂型。

在示例性的实施方案中，药物制剂是单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是单一单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是二单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是三单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是四单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是五单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是六单位剂型。在示例性的实施方案中，药物制剂是一、二、三、四、五、六或七单位剂型，其包含第一单位剂型和第二、第三、第四、第五和/或第六单位剂型，其中所述第一单位剂型包括a)治疗有效量的如本文所述的化合物和b)第一药学上可接受的赋形剂；且第二、第三、第四、第五和/或第六单位剂型包括c)治疗可接受量的为抗分枝杆菌剂的额外的治疗剂和d)第二药学上可接受的赋形剂。

关于用于本发明的制剂的赋形剂的信息可见于Remington：The Science andPractice of Pharmacy，第21版,Pharmaceutical Press(2011)，其通过引用并入本文。

组合

在一个示例性实施方案中，本发明提供a)第一治疗剂，其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮；b)第二治疗活性剂。在某些实施方案中，所述第二治疗剂为抗细菌剂，更具体为抗结核药物，更具体为抗结核分枝杆菌药物。

在示例性的实施方案中，组合为本文所述的药物制剂的一部分。此类条件对于本领域技术人员而言是已知的且具体条件描述于本文所附的实施例中。

化合物或其组合的剂型

本发明的化合物或本发明的组合例如本文所述的组合的各个组分可以以单位剂型同时或依次施用。单位剂型可以是单一或多个单位剂型。在示例性的实施方案中，本发明提供呈单一单位剂型的化合物或组合。单一单位剂型的实例为胶囊，其中本发明的化合物或本发明的化合物和另外的治疗剂包含于相同的胶囊内。在示例性的实施方案中，本发明提供呈二单位剂型的组合。二单位剂型的实例为第一胶囊(其含有本发明的化合物)和第二胶囊(其含有额外的治疗剂)。因此，术语“单一单位”或“二单位”或“多单位”指患者摄入的物体而非物体的内部组分。本发明的化合物的合适剂量将被本领域技术人员容易地理解。不是6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐的额外治疗剂的合适剂量将会被本领域技术人员容易地理解。在一个具体的实施方案中，本发明的化合物以治疗有效量单独或组合存在。在一个具体的实施方案中，不是6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的额外的治疗剂以足以杀灭暴露于本发明的化合物的分枝杆菌(包括结核分枝杆菌)或降低其存在、量或生长速率的量存在于组合中。

本发明的组合例如本文描述的组合还可以包含额外的一种或多种治疗剂。因此，在进一步的实施方案中，本发明提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外的治疗剂的组合。因此，在进一步的实施方案中，本发明提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外的治疗剂的组合。在示例性的实施方案中，额外的治疗剂为抗分枝杆菌剂。在一个实施方案，本发明包括：a)本发明的组合；和b)至少一种额外的治疗剂。在另一个示例性的实施方案中，本发明包括：a)本发明的组合；b)第一额外的治疗剂；和c)第二额外的治疗剂。在另一个示例性的实施方案中，本发明包括：a)本发明的组合；b)第一额外的治疗剂；c)第二额外的治疗剂；和d)第三额外的治疗剂。第一额外的治疗剂或第二额外的治疗剂或第三额外的治疗剂可以选自本文所述的额外的治疗剂。

本发明的化合物或组合可以方便地呈现供以药物制剂的形式使用。在本发明的进一步的实施方案中，提供药物组合，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐，连同一种或多种额外的治疗剂，和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。此类组合的各个组分可以通过任何方便的途径在分开的或组合的药物制剂中依次地或同时地施用。

当针对相同疾病状态使用额外的治疗剂与如本文所述的组合时，每一化合物的剂量可以与所述化合物单独使用时的剂量有所不同。合适剂量将会被本领域技术人员容易地理解。应理解用于治疗所需的如本文所述的化合物的量将根据治疗的病况的性质和患者的年龄和状况而不同，且将最终依巡诊医生或兽医的判定。

组合物和制剂

化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，可以配制用于以用于人或兽医药物的任何方便的方式施用，类似于抗分枝杆菌剂的制剂或其他抗结核病剂的制剂。

在施用于患者前，通常(但不是必需地)将化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐配制到药物组合物中。在一个实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或药学上可接受的盐。在另一实施方案中本发明涉及药物组合物，其包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。载体、赋形剂或稀释剂必须在与制剂的其他成分相容且对于其受者是无害的意义上是“可接受的”。

本文所述的药物组合物包括以适合于口服或肠胃外使用的形式的那些，并且可以用于治疗哺乳动物(包括人)中的分枝杆菌感染。

本文所述的药物组合物包括以适合于口服、局部或肠胃外使用的形式的那些，并且可以用于治疗哺乳动物(包括人)中的分枝杆菌感染。

组合物可以配制用于通过任何方便的途径施用。对于结核病的治疗，组合物可以为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、气雾剂或液体制剂诸如口服或无菌肠胃外溶液或混悬剂的形式。

用于口服施用的片剂和胶囊剂可以为单位剂量呈现的形式，并可以包含常规赋形剂诸如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或硅石；崩解剂，例如马铃薯淀粉；或可接受的湿润剂诸如十二烷基硫酸钠。片剂可以根据常规药物实践中熟知的方法来包衣。口服液体制剂可以呈例如含水或油性混悬液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形式，或者可以呈现为使用前用水或其他合适的媒介物重构的干产品。此类液体制剂可以含有常规添加剂，诸如助悬剂，例如山梨醇、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用油脂，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性媒介物(其可以包含食用油)，例如杏仁油、油性酯类诸如甘油、丙二醇、或乙醇；防腐剂例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如需要，常规的调味剂或着色剂。

栓剂将包含常规栓剂基质例如可可脂或其他甘油酯。

对于肠胃外施用，利用化合物和无菌媒介物(优选水)来制备流体单位剂型。化合物根据所用的媒介物和浓度可以混悬或溶解于媒介物中。在制备溶液中，化合物可以溶解于注射用水并用滤器灭菌，随后填充至合适的小瓶或安瓿并密封。

试剂诸如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂可以溶解于媒介物中。为了增强稳定性，组合物可以在填充至小瓶并在真空下除去水后冷冻。随后将干燥的冻干粉末密封在小瓶中并且可以提供一个随附的注射用水的小瓶以在使用前重构液体。肠胃外悬浮液以基本上相同的方式制备，不同之处在于将化合物混悬于媒介物中而不是溶解，并且灭菌不能通过过滤完成。化合物可以通过暴露于环氧乙烷来灭菌，随后混悬于无菌媒介物中。有利地，将表面活性剂或湿润剂包含在组合物中以利于化合物的均匀分布。

取决于施用方法，组合物可以包含从0.1重量％、优选10-60重量％的活性物质。当组合物包含剂量单位时，每一单位将优选包含从20-1000mg的活性成分。取决于施用途径和频率，用于成年人治疗的剂量通常范围为50-300mg/天，例如150-200mg/天。此类剂量对应于每天0.5-5mg/kg。优选地，剂量为每天0.5-2mg/kg且更优选剂量小于每天1mg/kg。

6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐或溶剂合物，可以是本文所述的组合物中唯一的治疗剂，或者其可以与一种或多种额外的治疗剂组合存在于制剂中。本发明因此在另一实施方案中提供包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐连同一种或多种额外的治疗剂的组合。

所述一种或多种额外的治疗剂例如是可用于治疗哺乳动物中结核病的药剂。此类治疗剂的实例包括：利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、莫西沙星、利福喷汀、氯法齐明、贝达喹啉(TMC207)、硝基咪唑并-噁嗪PA-824、迪拉马尼(OPC-67683)、OPC-167832、噁唑烷酮如利奈唑胺、泰地唑胺、雷得唑来、sutezolid(PNU-100480)、和泼斯唑来(AZD-5847)、EMB类似物SQ109、苯并噻嗪酮、二硝基苯甲酰胺和抗病毒剂，包括抗逆转录病毒剂、或任何开发用于治疗TB的在IIa期EBA试验中具有阳性应答的TB药剂，或任何由Global Alliance正在开发的用于结核病的TB药剂。

当6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐或溶剂合物用于具有一种或多种额外的治疗剂的组合中时，化合物或药剂的剂量可以与当所述化合物或药剂单独使用时的剂量不同。合适剂量将会被本领域技术人员容易地理解。应理解用于治疗所需的如本文所述的化合物和所述一种或多种额外的治疗剂的量将根据治疗的病况的性质和患者的年龄和状况而不同，且将最终依巡诊医生或兽医的判定。

组合可以方便地呈现供以药物制剂的形式使用。在本发明另一实施方案中提供了药物组合，包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐，连同一种或多种额外的治疗剂，和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。此类组合的各个组分可以通过任何方便的途径在分开的或组合的药物制剂中依次地或同时地施用。

当顺序施用时，本发明的化合物或一种或多种额外的治疗剂可以首先施用。当同时施用时，组合可以在相同或不同的药物组合物中施用。当在相同的制剂中组合时，应理解化合物和药剂必须是稳定的并且彼此之间和与制剂的其他组分是相容的。当分开配制时，它们可以以任何方便的制剂提供，方便地以本领域中对于此类化合物已知的方式提供。

抑制细菌生长或杀灭细菌的方法

本发明的化合物或组合预期展示针对分枝杆菌的效力并因此具有杀灭分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌复制的潜力。本发明的化合物或组合预期展示针对对护理标准的抗分枝杆菌剂具有耐药性的分枝杆菌的效力并因此具有杀灭分枝杆菌和/或抑制此类“耐药”分枝杆菌复制的潜力。在本发明的的实施方案中，当在含胆固醇的介质中测试时，如本文所述的化合物具有针对所选的药物敏感性分枝杆菌分离株(包括MDR-TB(多药耐药TB)临床分离株)的显著活性。

在另一实施方案中，本发明提供杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制或治疗动物(如家畜和宠物包括牛、绵羊、山羊、犬和猫，或人(包括免疫抑制的人))分枝杆菌感染的方法，所述方法，包括：将分枝杆菌与有效量的如本文所述的化合物或组合接触，从而杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制，或所述方法包括向感染分枝杆菌的动物给药治疗有效量的本发明的化合物或组合，其中所述组合包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。在一个示例性实施方案中，所述化合物或组合为本文所述药物制剂的一部分。在另一示例性实施方案中，所述接触在允许化合物或组合进入分枝杆菌的条件下发生。

在一个示例性实施方案中，所述分枝杆菌被杀死或其复制被抑制，或所述分枝杆菌感染通过口服给药本文所述的化合物或组合而治疗。在一个示例性实施方案中，所述分枝杆菌被杀死或其复制被抑制，或所述分枝杆菌感染通过静脉内给药本文所述的化合物或组合而治疗。在一个示例性实施方案中，所述分枝杆菌被杀死或其复制被抑制，或分枝杆菌感染通过皮下给药化合物或如本文所述的组合而治疗，其中所述组合包含6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐。

在示例性实施方案中，所述分枝杆菌与本文所述的组合接触或分枝杆菌感染用本文所述的组合治疗，所述组合包含第一治疗剂，其为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其盐，和第二治疗剂，且任选包含第三、第四、第五和第六治疗剂，所述分枝杆菌群体包含具有赋予对任选的第三、第四、第五和第六治疗剂中的任一种或多种的耐药性的突变的耐药分枝杆菌。在相关的实施方案中，任选的第三、第四、第五和第六治疗剂或其盐为抗分枝杆菌剂，具体为已知的抗分枝杆菌剂，更优选护理标准的抗分枝杆菌剂。

在另一示例性实施方案中，提供杀灭引起动物中疾病或与该疾病相关的分枝杆菌和/或抑制其复制的方法，或治疗动物中分枝杆菌感染的方法，所述方法包括使分枝杆菌与有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其盐接触，从而杀灭分枝杆菌和/或阻止其复制，或者向动物施用治疗有效量的6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其盐，其中所述分枝杆菌选自结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)，包括亚种(subsp.)鸟分枝杆菌鸟亚种(Mycobacterium avium subsp.avium)、鸟分枝杆菌候米瑟氏亚种(Mycobacterium avium subsp.hominissuis)、鸟分枝杆菌森林土壤亚种(Mycobacterium avium subsp.silvaticum)和鸟分枝杆菌副结核亚种(Mycobacteriumavium subsp.paratuberculosis)；巴氏分枝杆菌(Mycobacterium balnei)、Mycobacterium sherrisii、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、田鼠分枝杆菌(Mycobacterium microti)、Mycobacterium silvaticum、Mycobacterium colombiense、Mycobacterium indicus pranii、胃分枝杆菌(Mycobacterium gastri)、戈氏分枝杆菌(Mycobacterium gordonae)、爱尔兰分枝杆菌(Mycobacterium hiberniae)、无色分枝杆菌(Mycobacterium nonchromagenicum)、地分枝杆菌(Mycobacterium terrae)、次要分枝杆菌(Mycobacterium trivial)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、玛尔摩分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、猿分枝杆菌(Mycobacterium simiae)、Mycobacteriumtriplex、日内瓦分枝杆菌(Mycobacterium genavense)、Mycobacterium florentinum、Mycobacterium lentiflavum、Mycobacterium palustre、Mycobacterium kubicae、Mycobacterium parascrofulaceum、Mycobacterium heidelbergense、Mycobacteriuminterjectum、斯氏分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)；Mycobacterium branderi、库氏分枝杆菌(Mycobacterium cookie)、隐藏分枝杆菌(Mycobacterium celatum)、Mycobacterium bohemicum、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)、鼠麻疯分枝杆菌(Mycobacterium lepraemurium)、Mycobacterium lepromatosis、Mycobacteriumbotniense、Mycobacterium chimaera、Mycobacterium conspicuum、Mycobacteriumdoricum、Mycobacterium forcinogenes、Mycobacterium heckeshornense、Mycobacteriumlacus、Mycobacterium monacense、Mycobacterium montefiorense、Mycobacteriummurale、Mycobacterium nebraskense、Mycobacterium saskatchewanenese、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、Mycobacterium shimoidel、Mycobacterium tusciae、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、中间分枝杆菌(Mycobacterium intermedium)、Mycobacterium bolletii、偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)、偶发分枝杆菌解乙酰氨亚种(Mycobacterium foruitumsubsp.acetamidolyticum)、Mycobacteriumboenickei、Mycobacterium perigrinum、Mycobacterium porcinum、塞内加尔分枝杆菌(Mycobacterium senegalense)、Mycobacterium septicum、Mycobacteriumneworleansense、Mycobacterium houstonense、Mycobacterium mucogenicum、Mycobacterium mageritense、Mycobacterium brisbanense、Mycobacterium cosmeticum、副偶发分枝杆菌(Mycobacterium parafortuitum)、南非分枝杆菌(Mycobacteriumaustroafricanum)、迪尔诺弗分枝杆菌(Mycobacterium diernhoferi)、Mycobacteriumhodieri、新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)、Mycobacterium prederkisbergense、Mycobacterium aurum、牝牛分枝杆菌(Mycobacterium vaccae)、千田分枝杆菌(Mycobacterium chitae)、假分枝杆菌(Mycobacterium fallax)、汇合分枝杆菌(Mycobacterium confluentis)、淡黄分枝杆菌(Mycobacterium flavenscens)、马达加斯加分枝杆菌(Mycobacterium madagascariense)、草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)、耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)、古地分枝杆菌(Mycobacterium goodie)、Mycobacterium colinskui、Mycobacterium thermoresistbile、嘎地分枝杆菌(Mycobacterium gadium)、Mycobacterium kormossense、奥布分枝杆菌(Mycobacteriumobuense)、泥炭藓分枝杆菌(Mycobacterium sphagni)、田野分枝杆菌(Mycobacteriumagri)、爱知分枝杆菌(Mycobacterium aichiense)、蜂房分枝杆菌(Mycobacteriumalvei)、Mycobacterium arupense、冬天分枝杆菌(Mycobacterium brumae)、Mycobacterium canariasense、楚布分枝杆菌(Mycobacterium chubuense)、Mycobacterium conceptionense、杜氏分枝杆菌(Mycobacterium duvalii)、Mycobacterium elephantis、微黄分枝杆菌(Mycobacterium gilvum)、Mycobacteriumhassiacum、Mycobacterium holsaticum、Mycobacterium immunogenum、Mycobacteriummassiliense、莫里奥卡分枝杆菌(Mycobacterium moriokaense)、Mycobacteriumpsychrotoleranse、Mycobacterium pyrenivorans、Mycobacterium vanbaalenii、灰尘分枝杆菌(Mycobacterium pulveris)、Mycobacterium arosiense、Mycobacteriumaubagnense、山羊分枝杆菌(Mycobacterium caprae)、氯酚红分枝杆菌(Mycobacteriumchlorophenolicum)、Mycobacterium fluoroanthenivorans、Mycobacteriumkumamotonense、Mycobacterium novocastrense、Mycobacterium parmense、Mycobacterium phocaicum、多孔分枝杆菌(Mycobacterium poriferae)、罗得西亚分枝杆菌(Mycobacterium rhodesiae)、Mycobacterium seolense、Mycobacterium tokalense、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)；瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)；脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)；龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)；嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)；麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)；海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)；偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)；牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)；溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)；Mycobacteriumpseudoshottsii、Mycobacterium shottsii、胞内分枝杆菌(Mycobacteriumintracellulare)；结核分枝杆菌复合体(MTC)；鸟胞内分枝杆菌复合体(MAIC)成员和鸟分枝杆菌复合体(MAC)成员。

在相关实施方案中，分枝杆菌是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。在其他实施方案中，分枝杆菌是鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、玛尔摩分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、猿分枝杆菌(Mycobacterium simiae)、斯氏分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)、龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae,)、海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、牛分枝杆菌(Mycobacteriumbovis)、牛分枝杆菌BCG(M.bovis BCG)、非洲分枝杆菌(M.africanum)、卡氏分枝杆菌(M.canetti)、山羊分枝杆菌(M.caprae)、田鼠分枝杆菌(M.microti)、海豹分枝杆菌(M.pinnipedi)、或溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)。在相关的实施方案中，分枝杆菌是鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)的亚种(subsp.)，包括鸟分枝杆菌鸟亚种(Mycobacterium avium subsp.avium)、鸟分枝杆菌候米瑟氏亚种(Mycobacterium aviumsubsp.hominissuis)、鸟分枝杆菌森林土壤亚种(Mycobacterium aviumsubsp.silvaticum)和鸟分枝杆菌副结核亚种(Mycobacterium aviumsubsp.paratuberculosis)。在另一相关的实施方案中，分枝杆菌是胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)。在进一步相关的实施方案中，分枝杆菌是结核分枝杆菌复合体(Mycobacterium tuberculosis complex，MTC)鸟分枝杆菌复合体(Mycobacterium avium complex，MAC)或鸟胞内分枝杆菌复合体(Mycobacterium avian-intracellulare complex,MAIC)的成员。在相关的实施方案中，分枝杆菌是非结核病复合体或进化枝，包括：鸟分枝杆菌复合体(Mycobacterium avium complex)；戈氏分枝杆菌进化枝(Mycobacterium gordonae clade)；堪萨斯分枝杆菌进化枝(Mycobacteriumkansasii clade)；龟分枝杆菌进化枝(Mycobacterium chelonae clade)；偶发分枝杆菌进化枝(Mycobacterium fortuitum clade)；副偶发分枝杆菌进化枝(Mycobacteriumparafortuitum clade)；和牝牛分枝杆菌进化枝(Mycobacterium vaccae clade)。

在一个示例性实施方案中，本文所述的方法中的分枝杆菌包括耐药分枝杆菌。在一个示例性实施方案中，所述耐药分枝杆菌为本文所述的分枝杆菌的突变。在另一实施方案中，所述分枝杆菌感染为可使用胆固醇作为碳源的分枝杆菌的感染。

治疗和/或预防疾病的方法

本发明的化合物或组合展示针对分枝杆菌的效力，并因此具有实现动物(包括人)中的治疗效果的潜力。

在另一实施方案中，本发明提供治疗和/或预防疾病的方法。该方法包括向动物给药足以治疗和/或预防疾病的治疗有效量的本发明的化合物或组合。在一个示例性实施方案中，本发明的化合物或组合可用于人或兽医学治疗，特别是在治疗或预防分枝杆菌相关疾病中。

在另一示例性实施方案中，所述动物如本文定义。在另一示例性实施方案中，所述疾病为全身性疾病或皮肤疾病。在另一示例性实施方案中，所述疾病为呼吸道疾病。在另一示例性实施方案中，所述疾病为结核病。

化合物制备

可用于合成化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮及其盐的通用步骤总结于反应方案1，且在实施例1a和1b中示例。

方案1

缩写

在描述本发明中，化学元素根据元素周期表鉴别。本文所用的缩写和符号与化学领域技术人员对此类缩写和符号的通常用法一致。以下缩写用于本文：

AcOH 乙酸

Ac₂O 乙酸酐

ADC 白蛋白葡萄糖过氧化氢酶

AIBN 2-2'-偶氮异丁腈

BOC N-叔丁氧基羰基

BOC酸酐焦碳酸二叔丁基酯

B₂pin₂ 二(频哪醇合)二硼二硼，也称为4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷

由酸洗的硅藻土构成的助滤剂(Manville Corp.，Denver，Colorado的商标)

CTAB 鲸蜡基三甲基溴化铵

DCM 二氯甲烷

DIAD 二异丙基偶氮二甲酸酯

DIBAL-H 二异丁基氢化铝

DME 二甲氧基乙烷

DCE 二氯乙烷

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO-d6 氘化二甲基亚砜

DMSO 二甲基亚砜

DS 药物敏感的

ESI 电喷射离子化

ES MS 电喷雾质谱分析

Et₂O 乙醚

EtOH 乙醇

EtOAc，EA 乙酸乙酯

h 小时

HPLC 高效液相色谱法

KOAc 乙酸钾

LCMS 液相色谱法质谱分析

mCPBA 间氯过苯甲酸

MDR 多药耐药性

MeNO₂ 硝基甲烷

MeOH 甲醇

NBS N-溴代琥珀酰亚胺

NCS N-氯琥珀酰亚胺

NIS N-碘代琥珀酰亚胺

NXS N-卤代琥珀酰亚胺

NaBH(OAc)₃ 三乙酰氧基硼氢化钠

NMR 核磁共振光谱学

PE 石油醚

PPh₃ 三苯基膦

rt或r.t. 室温

RT 保留时间

SFC 超临界流体色谱法

t-BuOMe 甲基叔丁基醚

THF 四氢呋喃

uv 紫外线

XDR 极其抗药的TB

实施例

以下实施例说明本发明。这些实施例不旨在限制本发明的范围，而是为技术人员提供制备并使用本发明的化合物、组合物和方法的指导。尽管描述了本发明的具体实施方案，但技术人员将理解可以进行各种改变和修饰。对以与其他制备相似的方式或通过其他制备的通常方法进行的制备的提及可以涵盖常规参数诸如时间、温度、后处理条件的变化、试剂量的微小改变等。

记录质子核磁共振(¹H NMR)光谱，并且化学位移以相对溶剂参照的百万分率(δ)记录。NMR数据的缩写如下：s＝单峰、d＝双峰、t＝三重峰、q＝四重峰、m＝多重峰、dd＝双峰的双峰、dt＝三重峰的双峰、app＝表观的、br＝宽峰。使用电喷射(ES)离子化技术获得质谱。所有温度均以摄氏度记录。

实施例1a：6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成

将2,3-二甲酚(2.14g，1.0当量)、4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1甲酸叔丁酯(10.04g，1.6当量)和碳酸铯(14.6g，2.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(400mL)，且所得溶液经20h加热至90℃。然后蒸发溶剂，且所得浆液用二氯甲烷(250mL)和3M氢氧化钠水溶液(250mL)稀释。分离水层且用二氯甲烷萃取两次(250mL x2)。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发以得到粗油状物。该油状物部分通过柱色谱法纯化(用0-10％乙酸乙酯:环己烷梯度液洗脱)。溶剂从所需级分通过蒸发去除，然后用二氯甲烷(150mL)和3M氢氧化钠(150mL)再次稀释。分离水层且用二氯甲烷(2x150 mL)萃取两次。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，且蒸发以得到4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和消除副产物5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯的～2:1混合物。该混合物直接用于下一步而不用进一步纯化。

将上述混合物溶于3M氯化氢的甲醇(25mL)溶液中。将反应在室温下搅拌7小时，直到通过薄层色谱和NMR等分试样观察到原料的完全转化。蒸发溶剂后，将得到的粗固体用二氯甲烷(100mL)和1M氢氧化钠水溶液(100mL)稀释。分离水层并用二氯甲烷(4×100mL)萃取三次。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到粗油。将油在高真空下放置1.5小时后，仍然检测到痕量杂质。将样品用二氯甲烷(100mL)和2M氢氧化钠水溶液(100mL)稀释。分离水层，用二氯甲烷(2×100mL)萃取两次。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶(2.93g，定量产量)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.03(1H，t，J＝7.8Hz)，6.78(1H，d，J＝7.3Hz)，6.74(1H，d，J，＝8.1Hz)，4.35(1H，m)，3.15(2H，ddd，J＝3.8，6.3，12.4Hz)，2.74(2H，ddd，J＝3.3，8.8，12.4Hz)，2.28(3H，s)，2.18(3H，s)，2.00(2H，m)，1.72(2H，m)，1.58(1H，bs)。

将6-(氯甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.5g，1.1当量)、4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶(2.93g，1.0当量)和CH₃CN(15mL/gr)置于烧瓶中。将Et₃N(3.95mL，2当量)加入悬浮液中，并将混合物在回流下搅拌2.5小时。蒸发溶剂，用NaOH(0.5M，15mL)洗涤固体，以洗涤过量的6-(氯甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮、H₂O(3x15 mL)和Et₂O(2x15 mL)以得到6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，其具有96％产率。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)δ6.98(1H，t，J＝8.1Hz)，6.77(1H，d，J＝8.1Hz)，6.73(1H，d，J＝7.6Hz)，4.49(1H，m)，2.76(2H，m)，2.45(2H，m)，2.24(3H，s)，2.15(3H，s)，2.01(2H，m)，1.86(2H，m)。

实施例1b：6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成

将6-(氯甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(166g，1034mmol，1.0当量)和4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶盐酸盐(250g，1034mmol，1.0当量)悬浮在10L夹套玻璃容器中的CH₃CN(3L)中，然后加入三乙胺(0.288L，2068mmol，2.0当量)。将混合物在回流下搅拌3小时30分钟。蒸发溶剂，向粗产物中加入NaOH(0.5M，1075mL，538mmol，pH 9-10)。将混合物搅拌30分钟，然后过滤，用水(1000mL)洗涤并在真空下干燥。将固体溶于1-丁醇(1.7L)中并加热至140℃保持30分钟，然后冷却至室温3小时。滤出沉淀物，然后悬浮在H₂O(2L)中并搅拌至回流1小时。将混合物冷却至5℃，然后过滤。将固体用TBME(1000mL)洗涤并在真空下干燥，得到6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，具有78％产率和高纯度(99.35％)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.94(1H，s)，10.64(1H，br s)，6.99(1H，t，J＝7.8Hz)，6.81(1H，d，J＝8.1Hz)，6.73(1H，d，J＝7.3Hz)，5.47(1H，s)，4.36(1H，m)，3.20(2H，s)，2.64(2H，m)，2.35(2H，m)，2.19(3H，s)，2.08(3H，s)，1.89(2H，m)，1.68(2H，m)；LCMS(ES)[M+H]C₁₈H₂₃N₃O₃的计算值330.17，实测值330。

化合物6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮也购自Enamine。

生物活性

实施例2:对牛分枝杆菌BCG菌株Pasteur 1173P2的活性

使用高通量测定法进行针对牛分枝杆菌BCG的抗结核活性。

细菌接种物在Middlebrook 7H9培养基(Difco cat.#271310)中以葡萄糖作为碳源生长4-5天。每升培养基含有：4.7g Middlebrook 7H9粉末、5g白蛋白、1g葡萄糖、0.85gNaCl和0.25g吐温80。通过0.2μm过滤器过滤将溶液灭菌。

测定在1536孔无菌平板中进行(Greiner，782074)。在通过使用Echo 555仪器(Labcyte Inc)添加测定组分之前，将待测化合物作为在纯净DMSO中的50nL溶液加入板中。随后使用Multidrop Combi NL仪器(Thermo Fischer Scientific Inc.)将测定板填充5μL细菌溶液(调节至105个细菌/mL)。将接种的平板堆叠成7-8个平板的组，顶板覆盖无菌盖子。用铝箔小心地包裹板以防止蒸发，并使其在37℃，80％相对湿度下孵育7天。

孵育期后，从培养箱中取出平板并使其在室温下平衡。使用Multidrop Combi将新鲜重构的BacTiter-Glo(5μL，Promega)加入每个孔中。在室温下静置7-8分钟后，用聚焦发光模式的Acquest读数器(Molecular Devices)定量发光信号。每个测定板含有两列具有DMSO的阴性对照(ctrl 1)，其对应于100％活性反应(最大发光)，和两列阳性对照(ctrl2)，其中通过添加已知抑制剂达到100％抑制(2μM利福平作为标准；细菌生长完全受到抑制)。这些对照用于通过测定Z'监测测定质量以及基于每个平板对数据进归一化。给定化合物的效果计算如下：％抑制＝100×[(数据-ctrl 1)/(ctrl 2-ctrl 1)].

	％抑制
		阴性对照(DMSO)	0
阳性对照(利福平)	100
		测试化合物	46.18

实施例3a：细胞外活力测定(方法1)

在384孔板中进行表达在不同碳源(葡萄糖或胆固醇)中生长的绿色荧光蛋白(GFP)的结核分枝杆菌(来自ATCC目录号27294的H37Rv株)的抗结核活性。通过将冷冻的等分试样稀释在50mL 7H9C培养基(4.7g/升Middlebrook7H9粉末，0.81g/升NaCl，5g/升BSA，2g/升d-葡萄糖和0.05％吐温80)中来制备起始培养物。

将培养物在37℃下培养3天，以获得OD₆₀₀为0.2至0.3的生长培养物。

标准测试(葡萄糖培养基)

通过用7H9无甘油培养基稀释生长的培养物来制备工作接种物，并在加入测定微孔板之前将OD₆₀₀调节至0.02。

胆固醇测试(胆固醇培养基)

为了制备细菌悬浮液，使用在7H9培养基中生长的对数期细胞来接种确定的基本培养基(4.7g/升Middlebrook 7H9粉末，1g/升KH₂PO₄,2.5g/升Na₂HPO₄,0.5g/升天冬酰胺，50mg/升柠檬酸铁铵，10毫克/升MgSO₄·7H₂O，0.5毫克/升CaCl₂和0.1毫克/升ZnSO₄，2％BSA和1mg/ml胆固醇)，初始A₆₀₀为0.02。在泰洛沙泊/乙醇(1:1)中制备胆固醇储备溶液(100mg/ml)，并在加入前在65℃加热30分钟。

将试验化合物在100％DMSO中以2mM的顶部浓度连续稀释(3倍稀释，10个点)。

通过使用HummingBird Plus38,40μl细菌工作原液和10μl培养基从每个孔转移0.5μL，将化合物母板复制到测定板上。

将板在37℃下孵育5天。通过使用读板器VICTOR3测量相对荧光强度来确定细菌生长。使用Graph Pad

软件测定IC 50，即5天后与无药物对照相比抑制生长50％的化合物浓度。

实施例3b：细胞外活力测定，葡萄糖培养基(方法2)

结核分枝杆菌菌株H37Rv在含有10％ADC和0.025％吐温80的Middlebrook 7H9培养基中培养，并在37℃下培养约10天。

然后检查纯度，将培养物在含有10％ADC和0.025％吐温的Middlebrook7H9培养基中传代培养至OD(600nm)＝0.01，并在37℃下培养4-6天。通过测量600nm处的OD来将接种物标准化至约1x107 cfu/ml。在含有10％ADC和0.025％吐温的Middlebrook 7H9肉汤中稀释(1/100)培养物。在DMSO中进行10次2倍药物稀释至V-底微量滴定孔中，并将5ul药物溶液加入95ul Middlebrook中。

将7H9培养基(第1-10行，A-H列)置于平底微量滴定板中。平行地，在DMSO中(从160ug/ml开始)进行8个2倍稀释的异烟肼对照，并将5ul对照加入到95ul Middlebrook H9培养基中(第11行，A-H列)。

向第12行中加入5μl DMSO。将100ul接种物添加至整个平板除了12A-12F(空白对照)。将100ul含10％ADC的Middlebrook 7H9培养基加入空白对照中。将所有平板置于密封盒中以防止蒸发并在37℃下孵育6天。之后，向每个孔中加入25μl刃天青溶液(一片在30ml无菌PBS中)，并将板在37℃下再培养2天。最后，测量荧光。MIC值是荧光信号低于空白对照的平均荧光的2.5倍的化合物的最小浓度。还可以在微量滴定镜读取器上目视读取孔并记录MIC值；MIC值被认为是通过刃天青的减少(蓝色孔)检测到的完全抑制生物体可见生长的化合物的最小浓度。

实施例3c：细胞外活力测定，Erdman菌株，胆固醇培养基(方法3)

胆固醇培养基0.01％制剂

基础培养基制备

制备2瓶2L基础培养基：

溶于449.5ml milliQ-水。

在65℃预热的基础培养基。

胆固醇溶液

在埃彭道夫上称量100mg胆固醇(Sigma，Cat.#C8667-25G)(每4l培养基使用4个胆固醇等分试样)

制备1:1的100％乙醇(Merck Millipore，Cat.#159010)和100％的泰洛沙泊(Sigma，Cat.#T0307-60G)溶液。

将溶液在干浴中加热至72℃并搅拌。

胆固醇溶液：在72℃将100mg胆固醇在1ml 1:1的泰洛沙泊和乙醇溶液中在干浴中稀释，搅拌并用涡旋搅拌以完全溶解胆固醇。

将1ml胆固醇溶液重悬于1升在65℃预热的基础培养基中。

搅拌并煮沸培养基直至胆固醇完全溶解。

刃天青

每30ml PBS 1X加入1片刃天青(Fisher Scientifics，cat#R/0040/74)。

细胞培养制备。

结核分枝杆菌Erdman菌株在补充有0.01％胆固醇的基础培养基中生长12-16天，直至达到0.15-0.26之间的光密度[OD(600nm)]。将细胞在新鲜胆固醇培养基中稀释至初始OD(600nm)＝0,015(1,2x10⁶ CFU/ml)，每孔分配200ml。用封口膜密封平板，并在容器内于37℃温育7天。

孵育7天后，向每个孔中加入25ml刃天青(参见附录A2)并在37℃下培养48小时。在此期间后，使板在室温下平衡，并在微板读取器Spectramax M5分光光度计(MolecularDevices Equipment)上在1600nm处测量终点荧光。

对于数据分析，使用Excel的Add-in XLFit生成非线性回归模型，以拟合剂量响应曲线和IC50的归一化结果。

	IC50(uM)
		测试化合物	0.874(5次测量的平均值)

实施例4a:细胞内活力测定1a

使用含有萤火虫荧光素酶基因的结核分枝杆菌H37Rv测定该化合物对人THP-1单核细胞内生长的结核分枝杆菌的抗结核活性。

用含有10％FBS、1mM丙酮酸盐、2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640培养基将THP1单核细胞维持在悬浮液中，并在37℃下用5％CO2温育。

使单核细胞生长至亚融合(5x10⁵细胞/ml)并在感染复数(MOI)为1的细胞滚瓶中感染4小时，其中无菌玻璃珠分散在RPMI-0.05％吐温80中的细菌悬浮液中。过量细菌是通过在RPMI培养基中洗涤五次(1500rpm，5分钟)除去。

将感染的细胞分配到含有1：2连续稀释的化合物的96孔白色板(50.000细胞/孔)中。DMSO百分比必须低于0.5％。

在5天后测量发光，使用Steady-Glo Promega试剂盒进入Victor 1420系统。

使用Grafit软件处理结果。通过非线性回归分析从剂量-反应曲线计算IC50值。

	IC50(uM)
		阳性对照(利福平)	0.01
测试化合物	0.39

实施例4b:细胞内活力测定1b

使单核细胞生长至亚融合(5x10⁵细胞/ml)并在感染复数(MOI)为1的细胞滚瓶中感染4小时。过量细菌是通过在RPMI培养基中洗涤五次(1500rpm，5分钟)除去。

将感染的细胞分配到96孔白色板(50.000细胞/孔)中，且将1:3连续稀释的化合物添加至细胞板。DMSO百分比必须低于0.5％。

使用Bright-GloPromega试剂盒在5天后测量发光。

使用Grafit软件处理结果。通过非线性回归分析从剂量-反应曲线计算MIC90值。

	IC50(uM)
		阳性对照(利福平)	0.002
测试化合物	0.07

实施例5:细胞内活力测定2

使用通过插入GFP基因从ATCC(Cat.27294)获得的H37Rv菌株修饰的结核分枝杆菌测定化合物对抗鼠Raw 264.7(Cat.TIB-71)细胞系内生长的结核分枝杆菌的抗结核活性。

从ATCC获得原始巨噬细胞并培养到由补充有10％胎牛血清(Gibco，Cat.26140-079)的RPMI 1640(Welgene，Cat.LM011-01)制备的巨噬细胞培养基(RPMIC)中。

通过将冷冻的等分试样的巨噬细胞稀释到30mL的RPMIC中，制备起始培养物到具有过滤盖的75cm2细胞培养瓶中。将它们保持在37℃、5％CO2培养箱中的RPMIC中，当它们达到80％融合时通过1:5分开传代。它们用于定量来自第3代的化合物的细胞内活性，但不超过第10代。

在每个实验中，为了质量控制目的，以剂量响应测试利福平和异烟肼。利福平在12μM至0.4nM下测试，异烟肼从73μM至2nM测试(16点剂量-响应曲线)。

从浓度2mM(100x)开始，将测试化合物在100％DMSO中连续稀释(3倍稀释，10点稀释)。然后，使用HummingBird Plus384将化合物母板复制到测定板上，其通过将0.5μL转移到已经每孔含有10μL RPMIC的测定板中。

如下收获巨噬细胞。除去部分上清液，仅留下10mL。然后使用细胞刮板，将细胞轻轻分离，转移至15mL锥形管中并以1,100rpm离心5分钟。弃去上清液，将细胞重悬于10mL新鲜RPMIC中。使用血细胞计数器测定细胞数。

感染2小时后，将细胞/细菌悬浮液以低于1100rpm离心5分钟以除去细胞外细菌。将感染的细胞轻轻重悬浮于30mL/管的补充有仅1％FBS的RPMI中，并再次以1100rpm离心5分钟。该操作重复两次(总共3次洗涤)，最后的细胞沉淀用一定体积的RPMIC重悬至细胞浓度为300,000个细胞/mL。

该测定在384孔平底微板中进行，终体积为50.5μL。向含有0.5μL系列稀释物的每个孔中加入补充有10μl培养基的测试化合物、40μL感染的巨噬细胞。

将板在37℃、5％CO2下温育5天。

5天后，通过添加10μL/孔的Syto60(在30μM，产生最终浓度5μM)在37℃下对细胞核染色1小时。

然后将平板转移至配备有Acapella采集软件的Evotec OPERA(Perkin Elmer)荧光显微镜，用于以10x Air的放大读取，在蓝色通道内针对Syto 60(在635nm激发，以690/50滤镜读取)用于细胞核/细胞定位，在绿色通道内针对GFP(在488nm激发，以520/35滤镜读取)用于细菌定位；每孔至少4个视野。使用Graph Pad PRISM分析数据以确定针对结核分枝杆菌(H37Rv-GFP)的IC50值。

	IC50(uM)
		阳性对照(利福平)	0.2
阳性对照(异烟肼)	0.07
		测试化合物	0.06

实施例6:急性小鼠模型

从Harlan实验室购买无特定病原体的8-10周龄雌性C57BL/6小鼠，并使其适应环境一周。用100.000CFU/小鼠(结核分枝杆菌H37Rv株)气管内感染小鼠。从感染后一天开始，每天一次给予化合物连续8天。最后一次给药后24小时采集肺。无菌取出所有肺叶，在蒸馏水中匀浆并冷冻。将匀浆物在含有0.4％活性炭的10％OADC-7H11中在37℃下铺板18天。

结果表明，与未处理的对照组(第9天)相比，肺中微生物负荷减少(log10cfu/肺)：

阳性对照(莫西沙星)：在30mg/kg降低3.2log₁₀ CFU

测试化合物：在200mg/kg降低1.6log₁₀ CFU

实施例7：多药耐药性(MDR)结核分枝杆菌的细胞外测试

结核分枝杆菌耐药菌株在24孔板中在常规的基于7H9的培养基中生长至OD为0.2-0.6，所述培养基补充有97mg/mL胆固醇。在96孔透明圆底板中，除第一行外，加入50μL培养基。在第一行中以100uM加入100μL在相同培养基中稀释的每种药物。将50uL从第1行至第12行转移至每个孔。向每个孔中加入2x 10⁴个细菌，并将板在37℃下在拉链袋中温育3周。在不同时间点将倒置的放大镜读板仪用于分级为生长或无生长。MIC被确定为完全抑制生长的浓度。当生长明显可见时，必须尽早读取MIC，以避免在与抗性或调节适应机制相关的较长时间点生长。该时间点取决于菌株(通常在1至2周之间)。

在第2周，将1/10体积的Alamar Blue加入具有7H9-常规和胆固醇培养基的平板中。在37℃温育24小时后，通过视觉评分(蓝色＝生长抑制，粉红色＝生长)读取平板。Alamar Blue添加到胆固醇培养基中是必要的，以区分胆固醇沉淀与生长，如果培养基在MIC设置期间冷却，则会发生生长。

讨论

上述实施例2-7中给出的数据表明，6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮在特定条件下具有抗分枝杆菌活性，即当杆菌在巨噬细胞内，或者在胆固醇存在下，例如在用胆固醇培养基进行细胞外试验时。鉴于已知巨噬细胞具有高细胞内胆固醇浓度，这些发现是一致的。该化合物的这种与胆固醇相关的生物学特征是不寻常的，并且表明该化合物通过新的作用机制起作用。由于预期在领域中不可能存在预先存在的抗性，因此在TB治疗中需要新的生物学靶标。另外，通过靶向可以使用胆固醇作为碳源的分枝杆菌，该化合物可能能够为TB组合药物方案贡献独特的杀菌成分。最后，小鼠体内数据表明，6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮口服生物可利用，且在动物实验中发现的异质性条件下对细菌有效。

应理解本发明覆盖具有所有其它合适实施方案的实施方案和/或本文描述的示例性实施方案的所有组合。应理解本发明还覆盖具有所有其它合适实施方案的所有组合。

应理解本文所述的实施例和实施方案仅用于说明性目的且在其教导下的各种改变或变化均将被暗示于本领域技术人员且被包括在本申请的精神和范围以及所附权利要求的范围之内。

Claims

1.6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐在制备用于在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的药物中的用途，其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。

2.6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐在制备用于在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的药物中的用途，其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。

3.根据权利要求1或2的用途，其中所述哺乳动物为人。

4.根据权利要求1的用途，其中所述疾病为结核病。

5.一种组合产品，其为以下物质的组合产品：

b)第二治疗剂，其为治疗结核病的治疗剂或抗病毒剂。

6.根据权利要求5的组合产品，其中所述第二治疗剂选自异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、莫西沙星、利福喷汀、氯法齐明、贝达喹啉(TMC207)、硝基咪唑并-噁嗪PA-824、迪拉马尼(OPC-67683)、OPC-167832、噁唑烷酮、EMB类似物SQ109、苯并噻嗪酮、二硝基苯甲酰胺和抗病毒剂，包括抗逆转录病毒剂。

7.根据权利要求6的组合产品，其中所述噁唑烷酮为利奈唑胺、泰地唑胺、雷得唑来、sutezolid(PNU-100480)或泼斯唑来(AZD-5847)。

8.根据权利要求5的组合产品，其中所述第二治疗剂为批准或推荐用于治疗结核病的治疗剂。

9.用于治疗哺乳动物的结核分枝杆菌感染的药物组合物，其包含a)6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮，或其药学上可接受的盐；和b)药学上可接受的赋形剂。

10.根据权利要求9的药物组合物，其包含第二治疗剂。

11.根据权利要求10的药物组合物，其中所述第二治疗剂如权利要求6-8任一项所限定。

12.6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮或其药学上可接受的盐在制备用于在感染分枝杆菌的哺乳动物中杀死分枝杆菌和/或抑制分枝杆菌的复制的药物中的用途，其中所述分枝杆菌为结核分枝杆菌。

13.根据权利要求12的用途，其中所述哺乳动物为人。

14.6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的盐、权利要求5-8中任一项的组合产品以及权利要求9-11中任一项的药物组合物在制备用于在需要的哺乳动物中治疗由分枝杆菌感染引起的疾病的药物中的用途，其中所述盐为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的三氟乙酸盐或选自以下的药学上可接受的盐：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘化物、氮化物、碳酸盐、碳酸一氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、硫酸盐、硫酸一氢盐、硫酸二氢盐、膦酸盐、乙酸盐、丙酸盐、异丁酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、葡糖醛酸盐、半乳糖醛酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐或甲磺酸盐，并其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。

15.6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的盐、权利要求5-8中任一项的组合产品以及权利要求9-11中任一项的药物组合物在制备用于在需要的哺乳动物中治疗分枝杆菌感染的药物中的用途，其中所述盐为6-((4-(2,3-二甲基苯氧基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的三氟乙酸盐或选自以下的药学上可接受的盐：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘化物、氮化物、碳酸盐、碳酸一氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、硫酸盐、硫酸一氢盐、硫酸二氢盐、膦酸盐、乙酸盐、丙酸盐、异丁酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、葡糖醛酸盐、半乳糖醛酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐或甲磺酸盐，并且其中所述分枝杆菌感染为结核分枝杆菌感染。

16.根据权利要求14或15的用途，其中所述哺乳动物为人。

17.根据权利要求14的用途，其中所述疾病为结核病。