ES2646993B1

ES2646993B1 - Derivados de indolin-2-ona y su uso terapéutico

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Publication number: ES2646993B1
Application number: ES201630826A
Authority: ES
Inventors: Ana Castro Morera; Sergio QUESADA SÁNCHEZ; Inés DÍAZ-LAVIADA MARTURET; Nieves RODRÍGUEZ HENCHE; Ágata RAMOS TORRES; Alicia BORT BUENO
Original assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Universidad de Alcala de Henares UAH
Current assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Universidad de Alcala de Henares UAH
Priority date: 2016-06-17
Filing date: 2016-06-17
Publication date: 2018-09-25
Anticipated expiration: 2036-06-17
Also published as: ES2646993A1

Abstract

Derivados de lndolin-2-ona y su uso terapéutico.#Derivados de indolin-2-ona de fórmula (I), donde el significado para R{sub,1}, R{sub,2}, R{sub,3} y X es el indicado en la descripción. Estos compuestos son útiles como moduladores de la enzima AMPK.

Description

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Derivados de Indolin-2-ona y su uso terapeutico DESCRIPCION

La presente invention se refiere a una serie de compuestos derivados de indolin-2- ona. La presente invencion tambien hace referencia al procedimiento de preparation de dichos compuestos asi como a las composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y su uso para el tratamiento de enfermedades mediadas por AMPK, particularmente enfermedades inflamatorias, autoinmunes, cardiovasculares, neurologicas y cancer. Por tanto, la invencion pertenece al campo de la quimica farmaceutica.

ESTADO DE LA TECNICA

La protema quinasa activada por AMP (AMPK) es una quinasa de tipo serina/treonina descrita como un sensor central del estatus energetico celular. AMPK esta por tanto relacionada con un amplio numero de enfermedades que suelen afectar al metabolismo energetico, incluyendo obesidad, diabetes de tipo 2, hipertension, cancer y enfermedades cardiovasculares, que comportan graves alteraciones del metabolismo de glucosa o lipidos y afectan severamente a la salud y calidad de vida de los individuos afectados. Asi, compuestos capaces de regular el metabolismo energetico a traves de la modulation de AMPK constituyen una estrategia prometedora para la prevention y el tratamiento de este tipo de enfermedades.

AMPK coordina rutas metabolicas y procesos no metabolicos con el objetivo de regular la homeostasis energetica. AMPK es activada por elevadas relaciones AMP/ATP, que se generan tras el consumo de ATP debido a algun tipo de demanda celular, estres fisiologico o privation nutricional. Ello hace que AMPK sea extremadamente sensible a las variaciones en el estado energetico de la celula. A nivel celular, AMPK, en su forma activa, promueve la production de ATP mediante el incremento de la actividad o la expresion de protemas implicadas en el catabolismo, mientras que conserva los niveles de ATP mediante la desactivacion de rutas biosinteticas, restituyendo asi la ratio AMP/ATP [Hardie DG; Ross FA et al. 2012 Nature reviews 13: 251-262].

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Por otro lado, la participation de AMPK en la regulation del metabolismo, no solamente celular sino de todo el cuerpo es un hecho probado. Se ha demostrado que la hormona leptina derivada de los adipocitos lleva a una estimulacion de AMPK y, por tanto, a un incremento en la oxidation de acidos grasos en musculo esqueletico [Minokoshi Y. et al, 2002, Nature, 415, 339]. La adiponectina, otra hormona derivada de adipocitos que lleva a un metabolismo mejorado de carbohidratos y lipidos, estimula AMPK en higado y en musculo esqueletico [Yamanauchi T. et al., 2002, Nature Medicine, 8, 1288]. La activation de AMPK en estas circunstancias no parece ser debida a un incremento de los niveles celulares de AMP, sino mas bien a la fosforilacion de la subunidad catalrtica por una o mas quinasas corriente arriba.

Dado que el metabolismo energetico es esencial y esta estrechamente relacionado con el resto de procesos celulares, AMPK tambien esta relacionada con la regulacion de procesos no metabolicos, como el crecimiento y el ciclo celular. Asi, AMPK participa en la inhibition de la ruta PI3K/Akt/mTOR, que regula ciclo celular, crecimiento y autofagia. AMPK regula negativamente la ruta mTOR a varios niveles. Primero, AMPK fosforila y activa la protema de la esclerosis tuberosa 2 (TSC2), que es un inhibidor de mTOR. En segundo lugar, AMPK fosforila e inactiva a la protema raptor, una subunidad del complejo en el que se encuentra mTOR, dando lugar a la inactivation del complejo. De esta manera, la activacion de AMPK inhibe el crecimiento celular y protege a las celulas de la apoptosis inducida por deprivation de glucosa [Burkewitz K, Zhang Y and Mair W.B. 2014 Cell Metabolism 20: 10-25] La AMPK tambien puede ser una diana terapeutica para muchos canceres que tienen activacion constitutiva de la ruta de senalizacion PI3K/Akt. El tratamiento de diversas lmeas celulares de cancer mediante AICAR (5-amino-1-p-D-ribofuranosil-imidazol-4- carboxamida), un analogo de AMP capaz de estimular AMPK, atenua la proliferation celular tanto en estudios in vitro como in vivo [Rattan R, Giri S, Singh AK, Singh I. 2005 J Biol Chem. 280:39582-39593].

La activacion de AMPK por AICAR reduce la expresion de las enzimas lipogenicas FAS y ACC, dando como resultado la supresion de la proliferacion en celulas cancerosas prostaticas. En los estados avanzados de cancer de prostata predomina la utilization de acidos grasos como fuente de energia observandose tanto un aumento de la lipogenesis como de la p-oxidacion. En concreto se produce un aumento en la expresion y actividad de la Acido graso sintasa (FAS) hasta el punto de que esta enzima se ha considerado como un oncogen. La inhibicion de FAS suprime la

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proliferation de celulas cancerosas e induce la muerte celular. As^ AMPK a traves de su activation y de la inhibition de FAS es una diana para la terapia farmacologica de este tipo de cancer.

La activacion de AMPK en higado conduce a la disminucion de la expresion genica de enzimas gluconeogenicas, con lo que se reduce la production de glucosa hepatica y se mejora la homeostasis global de glucosa. Por otra parte, la inhibicion directa y/o la expresion reducida de enzimas clave en el metabolismo de lipidos reduciria la smtesis de los mismos y ademas se incremental la oxidation de acidos grasos. Esto comportaria una mejora de la homeostasis de glucosa y, debido a una reduction en la acumulacion de trigliceridos en musculo esqueletico, tambien un aumento de la sensibilidad a insulina o una disminucion de la resistencia a e insulina. Por tanto, la combination de estos efectos en Smdrome metabolico deberia reducir significativamente el riesgo de enfermedades cardiovasculares.

Ademas, la action de AMPK sobre el metabolismo energetico seria responsable de los efectos beneficiosos que la activacion de esta quinasa tiene en el corazon, especialmente en la protection contra danos producidos en isquemia-reperfusion. Tambien se ha visto que la activacion de AMPK disminuye la hipertrofia cardiaca y el riesgo de fallo cardiaco, por lo que la administration de activadores de AMPK estaria recomendada en estas patologias [Zaha VG y Young LH. 2012 Circ Res 111: 800814].

Recientemente se ha incrementado el interes por el papel de AMPK en el desarrollo, la funcion y el mantenimiento del sistema nervioso. Este hecho se basa en el estrecho margen entre las necesidades energeticas y la capacidad para almacenar y generar energia de las neuronas, convirtiendolas en sistemas muy sensibles a las fluctuaciones de energia celular. En concreto, se ha descrito que la activacion de AMPK juega un papel neuroprotector en diferentes enfermedades

neurodegenerativas. Asi, su activacion puede ejercer un efecto neuroprotector a traves de la regulacion de los niveles de PGC-1 y UCP2 frente al dano cerebral inducido durante estados de epilepsia [Han et al., 2011, Neurosci Lett 500: 133-138] o a traves de su papel en procesos de excitoxicidad y apoptosis en neuronas de hipocampo [Ullah et al., 2014, CNS Neurosci Ther 20: 327-338].

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Por otra parte, AICAR ejerce un efecto antiinflamatorio atenuando la production de citoquinas y mediadores proinflamatorios. Asimismo, AICAR atenua la progresion de la encefalomielitis autoinmune experimental, limitando la infiltration de leucocitos a traves de la barrera hematoencefalica, por lo que se ha sugerido que los agentes activadores de AMPK actuan como agentes anti-inflamatorios y pueden mantener un potencial terapeutico en la enfermedad de Krabbe/Twitcher.[Giri S et al. 2008, J. Neurochem., 105: 1820-1833].

Por tanto, seria deseable disponer de compuestos que sean potentes moduladores de la enzima AMPK y que resulten utiles en el tratamiento o profilaxis de enfermedades que se relacionan con la regulation de la enzima AMPK, particularmente para el tratamiento del cancer.

DESCRIPCION DE LA INVENCION

En un primer aspecto, la presente invention se refiere a un compuesto de formula (I):

imagen1

(I)

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, donde:

X representa hidrogeno o halogeno;

R1 representa hidrogeno o halogeno;

R2 representa fenilo o Cy1, donde el grupo fenilo esta opcionalmente sustituido por un grupo R4, y donde Cy1 esta opcionalmente sustituido por un grupo R4 o por un grupo

R5;

R3 representa hidrogeno o un grupo de formula (II):

X^CY3

(II);

R4 representa Cy2;

R5 representa hidrogeno, fenilo o piridilo opcionalmente sustituido por uno o mas grupos -NR6R6, -NR6COR6 o -CO2R6;

cada R6 independientemente representa hidrogeno o C1-4 alquilo;

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Cy1 representa heterodclico aromatico de 5 o 6 miembros, que contiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de O, N y S;

Cy2 representa un anillo de 5 o 6 miembros, saturado o aromatico, que contiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de O, N y S;

Cy3 representa fenilo o piridilo, donde Cy3 esta opcionalmente sustituido por uno o mas grupos R7; y

cada R7 independientemente representa halogeno o -OR6.

En otra realization la invention se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde X representa halogeno.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde X representa F o Cl, y preferiblemente donde X representa F.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R1 representa halogeno.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R1 representa F o Cl.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde:

X representa halogeno, preferiblemente donde X representa F o Cl, y mas preferiblemente donde X representa F; y

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5.

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En otra realization la invention se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde:

R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4, y preferiblemente donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5.

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl; y R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4, y preferiblemente donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5.

X representa halogeno, preferiblemente donde X representa F o Cl, y mas preferiblemente donde X representa F;

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (III):

imagen2

donde R5 tiene el significado descrito anteriormente para un compuesto de formula (I).

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En otra realization la invention se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (IV):

imagen3

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (V):

imagen4

Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5, y preferiblemente donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (III), de un compuesto de formula (IV) o de un compuesto de formula (V).

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl; y

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R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl; y Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5, y preferiblemente donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (III), de un compuesto de formula (IV) o de un compuesto de formula (V).

R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4, y preferiblemente donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5; y Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5, y preferiblemente donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (III), de un compuesto de formula (IV) o de un compuesto de formula (V).

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R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -NR6R6, -NR6COR6 o -CO2R6.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R5 representa fenilo.

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R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6, y preferiblemente donde R5 representa fenilo.

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl; y R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6, y preferiblemente donde R5 representa fenilo.

R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4, y preferiblemente donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5; y R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6, y preferiblemente donde R5 representa fenilo.

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R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R3 representa H.

X representa halogeno, preferiblemente donde X representa F o Cl, y mas preferiblemente donde X representa F; y R3 representa H.

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl; y R3 representa H.

R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4, y preferiblemente donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5; y

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R3 representa H.

Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5, y preferiblemente donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (III), de un compuesto de formula (IV) o de un compuesto de formula (V); y R3 representa H.

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4, y preferiblemente donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5;

R3 representa H; y

X representa halogeno, preferiblemente donde X representa F o Cl, y mas

preferiblemente donde X representa F;

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

R3 representa H

X representa halogeno, preferiblemente donde X representa F o Cl, y mas

preferiblemente donde X representa F;

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

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R3 representa H;

R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6, y preferiblemente donde R5 representa fenilo; y

En otra realization la invention se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde

R1 representa halogeno, y preferiblemente donde R1 representa F o Cl;

R3 representa H;

R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6, y preferiblemente donde R5 representa fenilo;

Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5, y preferiblemente donde Cy1 se selecciona de un compuesto de formula (III), de un compuesto de formula (IV) o de un compuesto de formula (V);

R6 representa hidrogeno o -CH3.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R3 representa un grupo de formula (II).

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde Cy3 representa fenilo opcionalmente sustituido por uno o mas grupos R7.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R7 representa -OR6.

R3 representa un grupo de formula (IN);

5 Cy3 representa fenilo opcionalmente sustituido por uno o mas grupos R7; y

R7 representa -OR6.

En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, donde R6 representa hidrogeno o -CH3.

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En otra realizacion la invencion se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, seleccionado de:

Compuesto: Estructura Nombre

2a: r"0 CXr° H 3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol;

2b: of? H 3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol;

2c: H 3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxoindol;

2d: H 5-cloro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-bencil]-2- oxoindol;

2e: cr"Br H 3-(5-bromofuran-2-il-metil)-2-oxoindol;

2f: 3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol;

2g: ccf° 902Me 3-(5-((2-oxoindolin-3-il)metil)furan-2- il)benzoato de metilo;

3a: H (R, S)-3-fluoro-3-(piridin-3-il-metil)-2- oxoindol;

3b: ^ £f n^ 0 X H (R, S)-3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2- oxoindol;

3c: Fv^ph H (R, S)-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)- 2-oxoindol;

3d: rON° H (R, S)-5-cloro-3-fluro-3-[(4-pirrolidin-1-il)- bencil]-2-oxoindol;

3e: (Y>° ^ H (R, S)-3-fluoro-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il- metil]-2-oxoindol;

3f: Pr§^°'Br H (R, S)-3-cloro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)- 2-oxoindol;

3g: ci s /] H (R, S)-3-cloro-3-[(2, 2,-bitiofen)-5-il- metil]-2-oxoindol;

3h: (R, S)-3-(5-((3-fluoro-2-oxoindolin-3- il)metil)furan-2-il)benzoato de metilo;

4a: k^J''-~|\| Bn (R, S)-1-bencil-3-fluoro-3-(piridin-3-il- metil)-2-oxoindol;

4b: ^ f^ NT rH 0 1 >° Bn (R, S)-1-bencil-3-fluoro-3-(pirrol-2-il- metil)-2-oxoindol;

4c: _f\ FX°^ph Bn (R, S)-1-bencil-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2- il-metil)-2-oxoindol;

4d: rO'N° c'YY>o k^-isi Bn (R, S)-1-bencil-5-cloro-3-fluoro-3-[(4- pirrolidin-1-il)-bencil]-2-oxoindol;

4e: k^^N N^/ V^k-OH (R, S)-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2- il)metil)-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol;

4f: 0 1 >° NcV (R, S)-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2- il)metil)-3-(pirrol-2-il)metil-2-oxoindol; y

4g: JT\ ^/F^ph N=/ (R, S)-3-((5-fenilfuran-2-il)metil-3-fluoro- 1-((3-hidroxipiridin-2-il)metil)-2-oxoindol.

En otra realization la invention se refiere a un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente, seleccionado de:

- (R,S)-3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (3b);

5 - (R,S)-1-bencil-3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (4b);

- (R,S)-5-cloro-3-fluro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-bencil]-2-oxoindol (3d); y

- (R,S)-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxoindol (3c).

Otro aspecto de la invencion se refiere a una composition farmaceutica que 10 comprende un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables del mismo.

Otro aspecto de la invencion se refiere al uso de un compuesto de formula (I) tal y como se ha definido anteriormente o de una composicion farmaceutica tal y como se 15 ha definido anteriormente, para la fabrication de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada a la modulation de la enzima AMPK, preferiblemente donde la enfermedad se selecciona de enfermedad autoinmune, inflamatoria, cardiovascular, smdrome metabolico, neurologica y cancer, mas preferiblemente donde la enfermedad se selecciona de diabetes de tipo 1 y 2, obesidad, inflamacion, 20 dislipidemia, hipertension, hiperglucemia, hipertriglicerimidemia, resistencia a la insulina, epilepsia, ictus, enfermedades de Krabbe/Twitcher, alzheimer, parkinson, huntington y cancer, aun mas preferiblemente donde la enfermedad es cancer; y todavia mas preferiblemente donde la enfermedad es cancer de prostata, cancer de mama, cancer de pancreas, cancer de utero y gliomas.

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Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un proceso de preparacion de un compuesto de formula (I) como se ha definido anteriormente, que comprende: a) halogenar un compuesto de formula (VI):

donde R1y R2 tienen el significado descrito para un compuesto de formula (I); o b) alquilar un compuesto de formula (I, R3=H).

H

I, R3 = H

donde R1y R2 tienen el significado descrito para un compuesto de formula (I).

A lo largo de la invencion, el termino C1-4 alquilo, como grupo o parte de un grupo, significa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 4 atomos de C e incluye los grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y te/f-butilo.

El termino "halogeno" se refiere como grupo o parte de un grupo a fluor, cloro, bromo y yodo.

Los grupos “Cy1” y “Cy2” independientemente se refieren a un grupo heterodclico aromatico de 5 o 6 miembros que contiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de O, N y S. Ejemplos incluyen, entre otros, furanilo, tiofenilo y pirrol.

Cuando en las definiciones usadas a lo largo de la presente descripcion para grupos dclicos los ejemplos especificados se refieren a un radical de un anillo en terminos generales, por ejemplo furanilo, tiofenilo o pirrol, se incluyen todas las posiciones de union posibles. Asi, por ejemplo, en las definiciones de Cy1 y Cy2 el termino furanilo incluye 2-furanilo, 3-furanilo, 4-furanilo y 5-furanilo; tiofenilo incluye 2-tiofenilo, 3- tiofenilo, 4-tiofenilo y 5-tiofenilo; y pirrol incluye 2-pirrol, 3-pirrol, 4-pirrol y 5-pirrol.

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H

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La expresion "opcionalmente sustituido por uno o mas" significa la posibilidad de un grupo de estar sustituido por uno o mas, preferiblemente por 1, 2, 3 o 4 sustituyentes, mas preferiblemente por 1, 2 o 3 sustituyentes y aun mas preferiblemente por 1 o 2 sustituyentes, siempre que dicho grupo disponga de suficientes posiciones disponibles susceptibles de ser sustituidas. Si estan presentes, dichos sustituyentes pueden ser iguales o diferentes y pueden estar situados sobre cualquier posicion disponible.

La expresion “opcionalmente sustituido por un grupo” significa la posibilidad de un grupo de estar sustituido por 1 sustituyente situado sobre cualquier posicion disponible.

Cuando en una definition de un sustituyente aparecen dos o mas grupos con la misma numeration (por ejemplo -NR6R6 y -NR6COR6), esto no significa que tengan que ser identicos. Cada uno de ellos se selecciona independientemente de la lista de posibles significados dada para dicho grupo, y por tanto pueden ser iguales o diferentes.

A lo largo de la presente description, el termino “tratamiento” se refiere a eliminar, reducir o disminuir la causa o efectos de una enfermedad. Para los propositos de esta invention, tratamiento incluye, aunque sin quedar limitados a los mismos, aliviar, disminuir o eliminar uno o mas smtomas de la enfermedad; reducir del grado de enfermedad, estabilizar (es decir, no empeorar) el estado de la enfermedad, retrasar o ralentizar la progresion de la enfermedad, aliviar o mejorar el estado de la enfermedad y remitir (ya sea total o parcial).

A lo largo de la descripcion y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras caracteristicas tecnicas, aditivos, componentes o pasos.

Los compuestos de la invencion se pueden preparar siguiendo el siguiente esquema 1:

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Esquema 1

donde en el esquema 1, R1 R2 R3 y X tienen el significado descrito anteriormente para un compuesto de formula (I)

En la etapa (a) del esquema 1, tiene lugar la condensation de un derivado de 2- oxoindol de formula (VII) con el correspondiente aldehido para obtener un compuesto de formula (VIII).

En la etapa (b) del esquema 1, se produce la reduction del doble de un compuesto de formula (VIII) para dar lugar a un compuesto de formula (VI).

En la etapa (c) del esquema 1 tiene lugar la halogenacion en position C-3 del anillo de oxoindol para dar lugar a un compuesto de formula (I) donde R3 representa H, es decir, para dar lugar a un compuesto de formula (I, R3=H).

En la etapa (d) del esquema 1, se lleva a cabo la alquilacion del nitrogeno heterodclico de un compuesto de formula (I, R3=H) para obtener un compuesto de formula I donde R3 es distinto de H, es decir, un compuesto de formula (I, R3^H).

Algunos compuestos de formula (I) se pueden obtener alternativamente mediante una reaction de acoplamiento entre un compuesto de formula (VI) y el reactivo correspondiente (etapa (c) del esquema 1) para dar lugar a un compuesto de formula (I, R3=H).

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Los compuestos de la presente invention contienen uno o mas nitrogenos basicos y podrian por tanto formar sales con acidos, tanto organicos como inorganicos. Ejemplos de dichas sales incluyen: sales con acidos inorganicos como acido clorhidrico, acido brom^drico, acido yod^drico, acido mtrico, acido perclorico, acido sulfurico o acido fosforico; y sales con acidos organicos, como acido metanosulfonico, acido trifluorometanosulfonico, acido etanosulfonico, acido bencenosulfonico, acido p- toluenosulfonico, acido fumarico, acido oxalico, acido acetico, acido maleico, acido ascorbico, acido titrico, acido lactico, acido tartarico, acido malonico, acido glicolico, acido suctinico y acido propionico, entre otros. Algunos compuestos de la presente invencion podrian contener uno o mas protones acidos y por tanto podrian formar tambien sales con bases. Ejemplos de dichas sales incluyen: sales con cationes inorganicos como sodio, potasio, calcio, magnesio, litio, aluminio, zinc, etc.; y sales formadas con aminas farmaceuticamente aceptables como amoniaco, alquilaminas, hidroxialquilaminas, lisina, arginina, W-metilglucamina, procama y similares.

No hay limitacion en el tipo de sal que se puede utilizar, con la condicion de que cuando se usen con fines terapeuticos sean farmaceuticamente aceptables. Se entiende por sales farmaceuticamente aceptables aquellas sales que, a criterio medico, son adecuadas para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos u otros mamiferos sin provocar una toxicidad indebida, irritacion, respuesta alergica o similar. Las sales farmaceuticamente aceptables son ampliamente conocidas por cualquier experto en la materia.

Las sales de un compuesto de formula (I) pueden obtenerse durante el aislamiento final y purificacion de los compuestos de la invencion o bien pueden prepararse por tratamiento de un compuesto de formula (I) con una cantidad suficiente del acido o la base deseados para dar la sal de una forma convencional. Las sales de los compuestos de formula (I) se pueden transformar a su vez en otras sales de compuestos de formula (I) por intercambio de iones mediante una resina de intercambio ionico.

Los compuestos de formula (I) y sus sales pueden diferir en ciertas propiedades fisicas, pero son equivalentes a efectos de la invencion. Todas las sales de los compuestos de formula (I) quedan incluidas dentro del ambito de la invencion.

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Los compuestos de la presente invention pueden formar complejos con disolventes en los que se hacen reaccionar o desde los que se hacen precipitar o cristalizar. Estos complejos se conocen como solvatos. Tal como se utiliza aqti, el termino solvato se refiere a un complejo de estequiometria variable formado por un soluto (un compuesto de formula (I) o una sal del mismo) y un disolvente. Ejemplos de disolventes incluyen los disolventes farmaceuticamente aceptables como agua, etanol y similares. Un complejo con agua se conoce como hidrato. Los solvatos de los compuestos de la invencion (o sus sales), incluyendo hidratos, quedan incluidos dentro del ambito de la invencion.

Los compuestos de formula (I) pueden existir en diferentes formas fisicas, es decir en forma amorfa y formas cristalinas. Asimismo, los compuestos de la presente invencion pueden tener la capacidad de cristalizar de mas de una forma, una caracteristica que se conoce como polimorfismo. Los polimorfos se pueden diferenciar por varias propiedades fisicas bien conocidas por los entendidos en la materia como por ejemplo sus difractogramas de rayos X, puntos de fusion o solubilidad. Todas las formas fisicas de los compuestos de formula (I), incluyendo todas sus formas polimorficas (“polimorfos”), quedan incluidas dentro del ambito de la presente invencion.

Algunos compuestos de la presente invencion podrian existir en forma de varios diastereoisomeros y/o varios isomeros opticos. Los diastereoisomeros pueden separarse mediante tecnicas convencionales como la cromatografia o la cristalizacion fraccionada. Los isomeros opticos pueden ser resueltos mediante el uso de tecnicas convencionales de resolution optica, para dar los isomeros opticamente puros. Esta resolution puede realizarse sobre los intermedios de smtesis que sean quirales o bien sobre los productos de formula (I). Los isomeros opticamente puros tambien pueden ser obtenidos individualmente empleando smtesis enantioespedficas. La presente invencion cubre tanto los isomeros individuales como sus mezclas (por ejemplo mezclas racemicas o mezclas de diastereoisomeros), tanto si se obtienen por smtesis como mezclandolos fisicamente.

La presente invencion tambien se refiere a una composition farmaceutica que comprende un compuesto de la invencion (o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo) y uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. Los excipientes deben ser “aceptables” en el sentido de ser compatibles con los demas

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ingredientes de la composition y de no ser perjudiciales para quien tome dicha composition.

Los compuestos de la presente invention pueden ser administrados en forma de cualquier formulation farmaceutica, la naturaleza de la cual, como es bien sabido, dependera de la naturaleza del principio activo y de su via de administration. En principio se puede utilizar cualquier via de administracion, por ejemplo oral, parenteral, nasal, ocular, rectal, y topica.

Las composiciones solidas para la administracion oral incluyen comprimidos, granulados y capsulas. En cualquier caso el metodo de fabrication esta basado en una mezcla simple, granulation seca o granulation humeda del principio activo con excipientes. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes tales como lactosa, celulosa microcristalina, manitol o hidrogenofosfato calcico; agentes aglutinantes como por ejemplo almidon, gelatina o polivinilpirrolidona; disgregantes como carboximetilalmidon sodico o croscarmelosa sodica; y agentes lubricantes como por ejemplo estearato magnesico, acido estearico o talco. Los comprimidos pueden ser ademas recubiertos con excipientes adecuados y mediante tecnicas conocidas con el objeto de retrasar su disgregacion y absorcion en el tracto gastrointestinal y asi conseguir una action sostenida durante un mayor periodo de tiempo, o simplemente para mejorar sus propiedades organolepticas o su estabilidad. El principio activo puede tambien ser incorporado por recubrimiento sobre pellets inertes mediante el uso de polimeros filmogenos naturales o sinteticos. Tambien es posible la realization de capsulas de gelatina blanda, en las que el principio activo se mezcla con agua o con medio oleoso, por ejemplo aceite de coco, parafina liquida o aceite de oliva.

Se pueden obtener polvos y granulados para la preparation de suspensiones orales mediante la adicion de agua, mezclando el principio activo con agentes dispersantes o humectantes; suspensantes y conservantes. Tambien pueden anadirse otros excipientes, por ejemplo edulcorantes, aromatizantes y colorantes.

Como formas liquidas para la administracion oral se pueden incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires que contienen diluyentes inertes comunmente utilizados, tales como agua destilada, etanol, sorbitol, glicerol, polietilenglicoles (macrogoles) y propilenglicol. Dichas composiciones pueden tambien

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contener coadyuvantes como agentes humectantes, suspensantes, edulcorantes, aromatizantes, conservantes y reguladores de pH.

Preparaciones inyectables, de acuerdo con la presente invention, para la administration parenteral, comprenden soluciones, suspensiones o emulsiones esteriles, en un solvente acuoso o no acuoso como propilenglicol, polietilenglicol o aceites vegetales. Estas composiciones pueden tambien contener coadyuvantes, como humectantes, emulsionantes, dispersantes y conservantes. Podrian ser esterilizadas por cualquiera de los metodos conocidos o preparadas como composiciones solidas esteriles que seran disueltas en agua o cualquier otro medio inyectable esteril inmediatamente antes de uso. Tambien es posible partir de materias primas esteriles y mantenerlas en estas condiciones durante todo el proceso de fabrication.

Para la administracion rectal, el principio activo puede ser formulado preferentemente como supositorio en una base oleosa, como por ejemplo aceites vegetales o gliceridos semisinteticos solidos, o en una base hidrofila como polietilenglicoles (macrogol).

Los compuestos de la invencion pueden tambien ser formulados para su aplicacion topica para el tratamiento de patologias en zonas o organos accesibles por esta via, como ojos, piel y tracto intestinal. Formulaciones incluyen cremas, lociones, geles, polvos, soluciones y parches en las que el compuesto se encuentra dispersado o disuelto en excipientes adecuados.

Para la administracion nasal o por inhalation, el compuesto puede presentarse formulado en forma de aerosol de donde es convenientemente liberado con el empleo de propelentes adecuados.

La dosificacion y la frecuencia de las dosis variaran en funcion de la naturaleza y gravedad de la enfermedad a tratar, la edad, la condition general y el peso del paciente, asi como tambien del compuesto particular administrado y la via de administracion, entre otros factores. A trtulo de ejemplo, un rango adecuado de dosificacion oscila entre alrededor de 0,01 mg/Kg y alrededor de 100 mg/Kg por dia, que pueden administrarse como dosis unica o en varias tomas.

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Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y caracteristicas de la invention se desprenderan en parte de la description y en parte de la practica de la invention. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustracion, y no se pretende que sean limitativos de la presente invencion.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

FIG 1a y FIG 1b. Variation de la viabilidad celular de celulas epiteliales de prostata humana normal, PNT2, tratadas con distintas concentraciones de los compuestos durante 24 y 48 horas. Las celulas PNT2 se incubaron con los diferentes compuestos a las dosis y tiempos indicados tras lo cual se determino la viabilidad celular mediante MTT. Los resultados estan referidos al de las celulas tratadas con vehiculo, tomado como 100% de viabilidad y son medias ± D.E. de tres experimentos realizados por duplicado.

FIG 2a y FIG 2b. Variacion de la viabilidad celular de celulas humanas de cancer de prostata PC-3 tratadas con distintas concentraciones de los compuestos a 24 y 48 horas. Las celulas PC-3 se incubaron con los diferentes compuestos a las dosis y tiempos indicados tras lo cual se determino la viabilidad celular mediante MTT. Los resultados estan referidos al de las celulas tratads con vehiculo, tomado como 100% de viabilidad y son medias ± D.E. de tres experimentos realizados por duplicado.

FIG 3a y FIG 3b. Niveles de fosforilacion de AMPK enThr172 (p-AMPK), AMPK total, fosforilacion de ACC en Ser79(p-ACC) y ACC total despues de su tratamiento con los compuestos objeto de estudio durante 1 h a 25 ^M encelulas humanas de cancer de prostata PC-3. Los niveles de p-tubulina se muestran como control de carga. La imagen es representativa de tres experimentos. A la derecha se muestran los valores de los densitometrados de las bandas.

FIG 4a y FIG 4b. Niveles de fosforilacion de AMPK enThr172 (p-AMPK), AMPK total, fosforilacion de ACC en Ser79(p-ACC) y ACC total despues de su tratamiento con los compuestos objeto de estudio durante 1 h a 25 ^M, seguidos de 1mM de AICAR durante los ultimos 30 minutos en celulas humanas de cancer de prostata PC-3. Los niveles de p-tubulina se muestran como control de carga. La imagen es representativa de tres experimentos. A la derecha se muestran los valores de los densitometrados de las bandas.

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FIG 5a y FIG 5b . Variacion de la viabilidad celular de celulas de hepatocarcinoma humano HepG2 a distintas concentraciones de los compuestos y tiempos de incubacion indicados. Las celulas HepG2 se incubaron con los diferentes compuestos a las dosis y tiempos indicados tras lo cual se determino la viabilidad celular mediante MTT. Los resultados estan referidos al de las celulas tratadas con vehiculo, tomado como 100% de viabilidad y son medias ± D.E. de tres experimentos realizados por duplicado.

FIG 6a y FIG 6b. Niveles de fosforilacion de AMPK enThr172 (p-AMPK), AMPK total, fosforilacion de ACC en Ser79(p-ACC) y ACC total despues de su tratamiento con los compuestos objeto de estudio durante 1 h a 25 ^M en celulas humanas de Hepatocarcinoma HepG2.

FIG. 6c y FIG 6d. Niveles de fosforilacion de AMPK enThr172 (p-AMPK), AMPK total, fosforilacion de ACC en Ser79(p-ACC) y ACC total despues de su tratamiento con los compuestos objeto de estudio durante 1 h a 25 ^M en celulas humanas de Hepatocarcinoma HepG2 seguido de 1mM de AICAR durante los ultimos 30 minutos.

FIG 7a y FIG 7b. Niveles de fosforilacion de AMPK enThr172 (p-AMPK), AMPK total, fosforilacion de ACC en Ser79(p-ACC) y ACC total despues de su tratamiento con los compuestos objeto de estudio durante 1 h a 25 ^M, seguidos de 5 ^M de dorsomorfina en celulas humanas de Hepatocarcinoma HepG2.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Procedimiento general de sintesis de los compuestos de formula general (3) y

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Los compuestos 3a-h y 4a-g fueron sintetizados de acuerdo con la ruta sintetica que se recoge en el siguiente esquema de reaccion:

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r1=H R2= 2-pirrolilo r1=H R2=(5-Ph)-2-furilo R-i=CI R2=(4-pirrolidil)-Ph

r1= h R2= 2,2'bitiofen-5-il r1=H R2= 5-Br-2-furilo

imagen10

R-i=H R2=3-piridilo R3=Bn

R-i=H R2=2-pirrolilo R3=Bn

R-i=H R2=(5-Ph)-2-furilo R3=Bn

R-i=CI R2=(4-pirrolidil)-Ph R3=Bn

R-i=H R2=3-piridilo R3=(3-OH)-2-piridilmetil

R-i=H R2=2-pirrolilo R3=(3-OH)-2-piridilmetil

R-i=H R2=(5-Ph)-2-furilo R3=(3-OH)-2-piridilmetil

a) R2CHO (1 eq.), pirrolidina (0,1 eq.), MeOH, ref., 8 h, b) NaBH4 (1,2 eq.), DMF anh., t.a., 2 h c) Selectfluor (1,5 eq.), MeOH, t.a., 48 h, o NCS (1,2 eq.), TEA (0,6 eq.), DCM, t.a., 1 h; d) R3Br (1 eq.), NaH (1,1 eq.), DMF anh., t.a., 25 min. 3h e) Acido 35 metoxicarbonil-fenil boronico (1,63 eq.), Na2CO3 (2 eq.), Pd(PPh3)2Cl2 (0,02 eq.), isopropanol:agua 5:1, m.o., 90 °C, 70 min.

Procedimiento general de slntesis de 3-metilen-2-oxoindoles (1a-f)

A una disolucion del correspondiente 2-oxoindol (1 eq.) en metanol (25 mg/mL) se 10 anade el correspondiente aldehido (1 eq.). La mezcla se agita a reflujo durante 3h. Una vez terminada la reaccion, se deja enfriar el crudo primero hasta temperatura ambiente y despues a 0 oC, apareciendo un precipitado que se aisla por filtracion a vado y se lava con varias porciones de metanol a 0 oC.

(E/Z) 3-(piridin-3-il-metilen)-2-oxo-indol (1a)

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Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-metilen-2-oxoindoles, la reaccion de 2-oxoindol (621,58 mg, 4,67 mmol) con piridin-3-carboxaldeWdo (515 mg, 4,67 mmol), da lugar a 490 mg (47 %) de un solido amarillo. P.f. 190 - 192 oC (bibl. 187 - 196 oC). 1H RMN (300 MHz, CDCfe) 5 (ppm): 13,32 (s, 1H, NH), 8,04 (s, 1H, H-Ar), 7,57 -7,46 (m, 2H, H-Ar), 7,30 (s, 1H, H-Ar), 7,27 -7,18 (m, 2H, H-Ar), 7,11 (t, J = 7,6 Hz, 1H, H-Ar), 6,94 (d, J = 7,6 Hz, 1H, H-Ar), 6,83 (s, 1H), 6,43 (s, 1H). HPLC: tR= 2,30 (99,9%). EM (ES, modo positivo) m/z 219,4 [M-3H]+.

(E/Z) 3-(pirrol-2-il-metilen)-2-oxo-indol (1b)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-metilen-2-oxoindoles, la reaccion de 2-oxoindol (990 mg, 7,44 mmol) y pirrol-2-carboxaldehido (707,4 mg, 7,44 mmol), da lugar a 502 mg (64 %) de un solido amarillo. P.f. 215 - 217 oC (bibl. 215 - 220 oC). 1H RMN (300 MHz, CDCfe) 5 (ppm): 13,18 (s, 1H, NH), 8,07 (s, 1H, NH), 7,45 - 7,31 (m, 2H), 7,14 - 7,07 (m, 2H), 6,99 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,70 (s, 1H), 6,32 (s, 1H). HPLC: tR= 4,74 (99 %). EM (ES, modo positivo) m/z 210,9 [M+H]+.

(E/Z) 3-(5-fenilfuran-2-il-metiliden)-2-oxo-indol (1c)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-metilen-2-oxoindoles, la reaccion de 2-oxoindol (495 mg, 3,72 mmol) y 5-fenil-2-furaldehido (640,34 mg, 3,72 mmol), da lugar a 445 mg (46 %) de un solido naranja. P.f. 230 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 10,59 (s, 1H, NH), 8,49 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H-Ar), 7,93 (d, J = 7,7 Hz, 2H, H- Ar), 7,57 (t, J = 7,7 Hz, 3H, H-Ar), 7,50 -7,23 (m, 6H, H-Ar), 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 1H, H- Ar), 6,92 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-Ar). HPLC: tR= 5,32 (99 %). EM (ES, modo positivo) m/z 288,0 [M+H]+.

(E/Z) 5-doro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-benciliden]-2-oxo-indol (1d)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-metilen-2-oxoindoles, la reaccion de 5-cloro-2-oxoindol (300 mg, 1,79 mmol) y 4-(1-pirrolidina)benzaldehido (313,68 mg, 1,79 mmol), da lugar a 366 mg (37 %) de un aceite amarillo. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 11,14 (s, 1H, NH), 9,64 (s, 2H), 7,72 - 7,52 (m, 4H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,63 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,41 - 3,33 (m, 4H, N-CH2), 1,98 (t, J = 6,7 Hz, 4H, N-CH2-CH2). HPLC: tR = 3,38 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 323,0 [M-2H]+.

(E, Z)-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metiliden]-2-oxoindol (1e)

Siguiendo el procedimiento general para la smtesis de 3-metilen-2-oxoindoles, se partio de 137 mg (1,03 mmol) de 2-oxoindol y de 200 mg (1,03 mmol) de 2-2'- bitiofeno-5-carboxaldehido para dar lugar a 292 mg (92 %) de un solido naranja. P. f.

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265 °C. 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 7,70-7.62 (m, 2H), 7,56-7,47 (m, 1H), 7,48-7,42 (m, 1H), 7,39 (dd, J = 3,8, 1.1 Hz, 1H), 7,37-7,17 (m, 2H), 7,15-6,97 (m, 2H), 6,87 (d, J = 7,8 Hz, 1H). HPLC: tR = 5.59 (98%). EM (ES, modo positivo) m/z 310.2 [M-

H]+.

(E, Z)-3-(5-bromofuran-2-il-metiliden)-2-oxoindol (1f)

Siguiendo el procedimiento experimental descrito para este tipo de compuestos, a una disolucion de 1 g (7,52 mmol) de 2-oxoindol se le anaden 1,31 g de 5-bromo-2- furalde^do (7,52 mmol), resultando de la reaccion 1,45 g (67 %) de un solido amarillo. P. f. 230 °C. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 8,36 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-Ar), 7,68 (s, 1H, NH), 7,36-7,18 (m, 2H, H-Ar), 7,11 (td, J = 7,7, 1,2 Hz, 1H, H-Ar), 6,93-6,79 (m, 2H, H-Ar), 6,57 (d, J = 3,5 Hz, 1H, CH). HPLC: tR = 4,70 (95%). EM (ES, modo positivo) m/z 292.2 [M-2H]+.

Procedimiento general de slntesis de 3-(arilmetil)-2-oxoindoles (2a-f)

A una disolucion del correspondiente 5-amino-3-fenil-1H-pirazol (1 eq.) en metanol (10 mg/mL) se anade NaBH4 (5 eq.) durante 30 min. Finalizada la adicion, la mezcla se agita a temperatura ambiente durante una noche. Una vez terminada la reaccion, se anade un volumen de agua aproximadamente igual a la mitad del crudo y la mezcla se extrae tres veces con un volumen igual de acetato de etilo. Las fases organicas se combinan, se secan sobre sulfato sodico anhidro, se filtran y se concentran a sequedad a presion reducida. El residuo se purifica mediante cromatografia en columna sobre gel de sflice utilizando como eluyente una mezcla de hexano:acetato de etilo (2:1).

3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (2a)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-2-oxoindoles, se parte de 3-(piridin-3-il-metilen)-2-oxo-indol (250 mg, 1,12 mmol) y NaBH4 (212 mg, 5,56 mmol), obteniendose 80 mg (31 %) de un solido amarillo palido. P.f. 115 - 117 oC (bibl. 139 - 142 oC). 1H RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 10,32 (s, 1H, NH), 8,34 (d, J = 3,2 Hz, 1H, H-Ar), 8,28 (s, 1H, H-Ar), 7,50 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-Ar), 7,21 (dd, J = 7,8, 4,7 Hz, 1H, H-Ar), 7,11 (t, J = 7,6 Hz, 1H, H-Ar), 7,04 (d, J = 7,4 Hz, 1H, H-Ar), 6,89 (t, J = 7,4 Hz, 1H, H-Ar), 6,71 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H-Ar), 3,86 (t, J = 6,1 Hz, 1H, H3), 3,32 -3,24 (m, 1H, CH2), 3,07 (dd, J = 13,9, 6,7 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 3,76 (98 %). EM (ES, modo positivo) m/z 225,3 [M+H]+.

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3-(pirml-2-il-metil)-2-oxoindol (2b)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-2-oxoindoles, se parte de (pirrol-2-il-metilen)-2-oxo-indol (400 mg, 1,90 mmol) y NaBH4 (366,96 mg, 9,51 mmol), obteniendose 110 mg de un solido amarillo (27 %). P.f. 173 - 175 oC. 1H RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 9,21 (s, 1H, NH), 7,90 (s, 1H, NH), 7,30 - 7,03 (m, 4H, H- Ar), 6,89 (d, J = 7,6 Hz, 1H, H-Ar), 6,74 (m, 1H, H-Ar), 6,12 (m, 1H, H-Ar), 5,97 (m, 1H, H3), 3,76 (t, J = 6,3 Hz, 1H, CH2), 3,31 -3,21 (m, 1H, CH2). HPLC: tR= 3,73 (98 %). EM (ES, modo positivo) m/z 213,0 [M+H]+.

3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxo-indol (2c)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-2-oxoindoles, se parte de 3-(5-fenilfuran-2-il-metiliden)-2-oxo-indol (500 mg, 1,74 mmol) y NaBH4 (335,64 mg, 8,70 mmol), obteniendose 226 mg (45 %) de un solido naranja palido. P.f. 201 - 203 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 10,43 (s, 1H, NH), 7,53 (d, J = 7,1 Hz, 2H, CH-C-furilo), 7,36 (t, J = 7,7 Hz, 2H, CH-CH-C-furilo), 7,23 (t, J = 7,3 Hz, 1H, H-Ar), 7,14 (t, J = 7,7 Hz, 1H, H-Ar), 7,02 (d, J = 7,4 Hz, 1H, H-Ar), 6,89 (t, J = 6,9 Hz, 1H, H- Ar), 6,79 (d, J = 7,7 Hz, 1H, H-Ar), 6,75 (d, J = 3,2 Hz, 1H, H-Ar), 6,54 (m, 1H), 6,11 (d, J = 3,3 Hz, 1H, H3), 3,83 (dd, J = 7,3, 4,9 Hz, 1H, CH2), 3,10 (dd, J = 15,4, 7,4 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR= 4,92 (98 %). EM (ES, modo positivo) m/z 290,0 [M]+.

5-cloro-3-[(4-pirrolidin- 1-il)-bencil]-2-oxo-indol (2d)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-2-oxoindoles, se parte de 5-cloro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-benciliden]-2-oxo-indol (150 mg, 0,46 mmol) y NaBH4 (91 mg, 2,31 mmol), obteniendose 75 mg (50 %) de un aceite anaranjado. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 5 (ppm): 8,04 (d, J = 1,2 Hz, 1H, H-Ar), 7,43 - 7,37 (m, 2H, H- Ar), 7,31 - 7,22 (m, 2H, H-Ar), 6,64 - 6,58 (m, 2H, H-Ar), 4,24 - 4,17 (m, 1H), 3,88 (dd, J = 9,4, 7,6 Hz, 2H), 3,67 - 3,53 (m, 2H), 3,48 - 3,21 (m, 2H), 3,09 - 2,94 (m, 1H), 2,13 (m, 2H), 1,79 - 1,30 (m, 2H). HPLC: tR = 3,40 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 323,2 [M-2H]+.

3-(5-bromofuran-2-il-metil)-2-oxoindol (2e)

Seguido el procedimiento general para la smtesis de 3-arilmetil-2-oxoindoles, se partio de 500 mg (1,72 mmol) de 3-(5-bromofuran-2-il-metiliden)-2-oxoindol y de 76,6 mg (2,07 mmol) de borohidruro sodico, obteniendo 134 mg (27%) de un solido blanco. P. f. 126 °C. 1H-RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 8,22 (s, 1H, NH), 7,29-7,16 (m, 1H, H- Ar), 7,08-6,75 (m, 3H, H-Ar), 6,20 (d, J = 3,3 Hz, 1H, H-Ar), 6,01 (d, J = 3,3 Hz, 1H, H- Ar), 3,77 (dd, J = 9,5, 4,7 Hz, 1H, CH), 3,43 (dd, J = 15,4, 4,6 Hz, 1H, CH2), 2,96 (dd, J

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= 15,3, 9,2 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 4,40 (99,5%). EM (ES, modo positivo) m/z 292,1 [M]+.

3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol (2f)

Siguiendo el procedimiento general para la smtesis de 3-arilmetil-2-oxoindoles, partiendo de 200 mg (0,65 mmol) de 3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metiliden]-2-oxoindol y de 28,8 mg (0,78 mmol) de NaBH4 se obtuvieron 54 mg (27%) de un aceite amarillo. 1H- RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 8,19 (s, 1H, NH), 7,36-7,11 (m, 3H, H-Ar), 7,11-6,77 (m, 5H, H-Ar), 6,65 (d, J = 3,6 Hz, 1H, H-Ar), 3,75 (dd, J = 8,2, 4,6, 1H, CH), 3,57 (dd, J = 14,9, 4,4 Hz, 1H, CH2), 3,30 (dd, J = 14,9, 8,0 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 5,31 (97%). EM (ES, modo positivo) m/z 312,0 [M-H]+.

Procedimiento para la smtesis de 3-(5-((2-oxoindolin-3-il)metil)furan-2- il)benzoato de metilo (2g)

A una disolucion de 50 mg (0,17 mmol) de 3-(5-bromofuran-2-il-metil)-2-oxoindol (1 eq.) en isopropanol (15 mL) en un reactor sellado, se le anaden 4,8 mg (0.02 eq,

O, 034 mmol) de Pd(PPh3)2Cl2, 36.25 mg (0,34 mmol) de Na2CO3, disuelto en 3 mL de agua y 50,1 mg (0,28 mmol) de acido 3-metoxicarbonil-fenil boronico. La mezcla se agita a 90 °C bajo irradiacion de microondas durante 70 min. Una vez terminada la reaccion, se elimina el disolvente a presion reducida y el residuo se disuelve en acetato de etilo y se extrae tres veces con agua. Las fases organicas se combinan, se secan sobre sulfato sodico anhidro y se concentran a sequedad a presion reducida. El residuo se purifica mediante cromatografia en columna sobre gel de sflice hexano:acetato de etilo (3:1), obteniendose 38 mg (72%) de un solido marron palido.

P. f. 153 °C. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 8,32 (s, 1H, NH), 8,22 (t, J = 1,8 Hz, 1H, H-Ar), 7,80 (dd, J = 8,1 Hz, 2H, H-Ar), 7.40 (td, J = 7,9, 3,6 Hz, 1H, H-Ar), 7,337,10 (m, 2H, H-Ar), 7,04-6,82 (m, 2H, H-Ar), 6,62 (d, J = 3,3 Hz, 1H, H-Ar), 6,15 (d, J = 3,3 Hz, 1H, H-Ar), 3,95 (s, 3H, -OCH3), 3,88 (dd, J = 9,0, 4,7 Hz, 1H, CH), 3,55 (dd, J =

15,0, 4,5 Hz, 1H, CH2), 3,09 (dd, J = 15,1, 9,2 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 4,78 (97%). EM (ES, modo positivo) m/z 348,4 [M-H]+.

Procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles (3a-d)

A una disolucion del correspondiente 3-(arilmetil)-2-oxoindoles (1 eq.) en metanol (5 mg/mL) enfriada hasta 0 oC, se anade Selectfluor (2 eq.) lentamente. La mezcla se agita a 0 oC durante 6 - 7 h. Una vez terminada la reaccion, se elimina el disolvente a

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presion reducida y el residuo se purifica mediante cromatografia en columna sobre gel de sflice hexano:acetato de etilo (1:1).

(R, S)-3-fluoro-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (3a)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (100 mg, 0,446 mmol), y Selectfluor (316 mg, 0,892 mmol), obteniendose 22 mg de un solido amarillo palido (20 %). P.f. 107 - 110 oC. 1H RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 8,49 (d, J = 3,2 Hz, 1H, H6’), 8,29 (s, 1H, H2’), 7,87 (s, 1H, NH), 7,51 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H4), 7,20 (m, 2H), 7,03 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H7), 3,55 (dd, J = 13,7, 10,6 Hz, 1H, CH2), 3,27 (dd, J =

21.1, 13,6 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR=1,75 (96 %). EM (ES, modo positivo) m/z 241,3 [M-H]+.

(R, S)-3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (3b)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (100 mg, 0,708 mmol) y Selectfluor (501,28 mg, 1,415 mmol), obteniendose 20 mg de un solido amarillo (18 %). P.f. 143 - 146 oC. 1H RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 7,99 (s, 1H, NH), 7,59 (dd, J = 5,6, 3,4 Hz, 1H, H4), 7,14 (m, 2H, H5+H6), 7,03 (dd, J = 5,6, 3,4 Hz, 1H, H7), 6,56 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H, H5’), 6,07 (t, J = 7,5 Hz, 1H, H4’), 5,80 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H, H3’), 3,75 (dd, J =

25.2, 12,3 Hz, 1H, CH2), 3,01 (dd, J = 25,2, 12,4 Hz, 1H, CH2). EM (ES, modo positivo) m/z 4,84 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 231,8 [M+H]+.

(R, S)-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxoindol (3c)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-2-oxoindoles, se parte de 3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxo-indol (200 mg, 0,70 mmol) y Selectfluor (489,77 mg, 1,40 mmol), obteniendose 40 mg (18 %) de un solido amarillo. P.f. 215 - 218 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 7,85 (dd, J = 7,4, 1,5 Hz, 1H), 7,88 - 7,74 (m, 2H), 7,59 (dt, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H), 7,55 - 7,39 (m, 4H), 7,27 (dd, J = 7,5, 1,6 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 3,77 (dd, J = 25,1, 12,4 Hz, 1H, CH2), 3,42 (dd, J = 25,2, 12,4 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 2,56 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 306,8 [M]+.

(R, S)-5-cloro-3-fluro-3-[(4-pirrolidin- 1-il)-bencil]-2-oxoindol (3d)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 5-cloro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-bencil]-2-oxo-indol (50 mg, 0,15 mmol) y Selectfluor (108,40 mg, 0,30 mmol), obteniendose 27 mg (53 %) de un aceite rojo. 1H

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RMN (300 MHz, DMSO-d6) 5 (ppm): 9,64 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H, H3'), 7,31 - 7,05 (m, 2H, H6+H7), 6,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H4), 6,50 (d, J = 8,6 Hz, 2H, H4'), 3,46 (m, 2H, CH2), 3,32 (t, J = 6,7 Hz, 4H, H7'), 2,03 - 1,92 (m, 4H, H8'). HPLC: tR = 0,55 (99,9%). EM (ES, modo positivo) m/z 343,3 [M-H]+.

Procedimiento general para la slntesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles 3e y 3 h

A una disolucion del correspondiente 3-(arilmetil)-2-oxoindol (1 eq.) en metanol (5 mg/mL), se anade cinconina (1.5 eq.). La mezcla se agita a t.a. durante 30 min. Tras esto, la mezcla se enfria a 0 °C y se anade Selectfluor (1.5 eq.) lentamente y se agita la mezcla resultante durante 48 h mas. Una vez terminada la reaccion, se elimina el disolvente a presion reducida y el residuo se disuelve en acetato de etilo y se extrae tres veces con agua. Las fases organicas se combinan, se secan sobre sulfato sodico anhidro y se concentran a sequedad a presion reducida. El residuo se purifica mediante cromatografia en columna sobre gel de sflice hexano:acetato de etilo (2:1).

(R, S)-3-fluoro-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol (3e)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles se partio de 45 mg (0,15 mmol) de (R, S)-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol, de 76,8 mg (0,22 mmol) de Selectfluor y de 63,8 mg (0,22 mmol) de cinconina, para dar lugar a 10,4 mg (22%) de un aceite amarillo. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 7,95 (s, 1H, NH), 7,32 (tt, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H, H-Ar), 7,17 (m, 2H, H-Ar), 7,10-7,00 (m, 2H, H- Ar), 6,95 (m, 2H, H-Ar), 6,84 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H-Ar), 6,67 (d, J = 3,6 Hz, 1H, H-Ar), 3,71 (dd, J =21,0, 14,5 Hz, 1H, CH2), 3,48 (dd, J = 21,0, 14,6 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 5,18 (99%). EM (ES, modo positivo) m/z 330.2 [M-H]+.

(R, Sj-3-(5-((3-fluoro-2-oxoindolin-3-il)metil)furan-2-il)benzoato de metilo (3h)

Seguido el procedimiento descrito para la smtesis de 3-(arilmetil)-3-fluoro-2- oxoindoles, partiendo de 45 mg (0,13 mmol) de 3-(5-((2-oxoindolin-3-il)metil)furan-2- il)benzoato de metilo, 68.9 mg (0,19 mmol) de Selectfluor y de 57.2 mg (0,19 mmol) de cinconina se obtienen 14 mg (31%) de un solido blanco. P. f. 157 °C. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 8,10 (t, J = 1,9 Hz, 1H, H-Ar), 7,97-7,80 (m, 2H, H-Ar), 7,67-7,58 (m, 1H, H-Ar), 7,41-7,22 (m, 2H, H-Ar), 7,07 (t, J = 7,6 Hz, 1H, H-Ar), 6,82 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H-Ar), 6,57 (t, J = 3,6 Hz, 1H, H-Ar), 6,21 (d, J = 3,4 Hz, 1H, H-Ar), 3,93 (s, 3H, -OCH3), 3,68 (dd, J = 18,6, 14,7 Hz, 1H, CH2), 3,47 (dd, J = 18,6, 14,6 Hz, 1H, CH2). HPLC: tR = 4,98 (99,9%). EM (ES, modo positivo) m/z 366,3 [M-H]+.

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Procedimiento general para la slntesis de 3-(arilmetil)-3-cloro-2-oxoindoles (3 f- g)

A una disolucion de 3-(arilmetil)-2-oxoindol (1 eq.) en diclorometano (10 mL) se anade trietilamina (0.6 eq.). La mezcla se enfna a 0 °C y sobre ella se adiciona N- clorosuccinimida (1.2 eq.) disuelta en diclorometano (5 mL) lentamente. La mezcla resultante se agita durante 1h a temperatura ambiente. Una vez finalizada la reaccion se elimina el disolvente a presion reducida y el residuo se purifica mediante cromatografia en columna sobre gel de sflice hexano:acetato de etilo (3:1).

(R, S)-3-cloro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxoindol (3f)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis para los 3-(arilmetil)-3-cloro-2- oxoindoles y partiendo de 60 mg (0,21 mmol) de (R, S)-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2- oxoindol, de 33,7 mg de N-clorosuccinimida (0,25 mmol) y de 18 ^L (0,13 mmol) de trietilamina se obtienen 50 mg de un solido marron palido. P. f. 139-141 °C. 1H-RMN (300 MHz, CDCh) 5 (ppm): 8,98 (s, 1H, NH), 7,26 (m, 8H, H-Ar), 6,74 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H-Ar), 6,28 (t, J = 3,3 Hz, 1H, H-Ar), 5,99 (d, J = 3,3 Hz, 1H, H-Ar), 3,76-3,39 (m, 2H, CH2). HPLC: tR = 5,26 (98%). EM (ES, modo positivo) m/z 324,2 [M-H]+.

(R, S)-3-cloro-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol (3g)

Seguido el procedimiento general para la smtesis de 3-(arilmetil)-3-cloro-2-oxoindoles, se partio de 30 mg (0,10 mmol) de (R, S)-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol, de 15,44 mg (0,12 mmol) de N-clorosuccinimida y de 9 ^L (0,62 mmol) de trietilamina para obtener 16 mg (48%)de un aceite marron. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 8,18 (s, 1H, NH), 7,36 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H-Ar), 7,26 (s, 1H, H-Ar), 7,18-7,06 (m, 2H, H-Ar), 6,99-6,89 (m, 2H, H-Ar), 6,87-6,78 (m, 2H, H-Ar), 6,58 (d, J = 3,7 Hz, 1H, H-Ar), 4,12 (d, J = 7,1 Hz, 1H, CH2), 3,72 (d, 1H, CH2). HPLC: tR = 5,32 (98%). EM (ES, modo positivo) m/z 346,2 [M-H]+.

Procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3-(arilmetil)-3- fluoro-2-oxoindoles (4a-g)

A una disolucion del correspondiente 3-(arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindol (1 eq) en DMF anhidra (12 mL/g) se anade NaH (1,1 eq. cuando el derivado bromado es bromuro de bencilo y 2,1 eq. cuando es hidrocloruro de 2-bromometil-3-hidroxipiridina). Tras 10 min. a temperatura ambiente, se anade el derivado bromado correspondiente (1 eq) y

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se deja agitar la mezcla el tiempo indicado en cada caso. Finalizada la reaccion, se anade aproximadamente la mitad de volumen de una solucion saturada de cloruro sodico, manteniendo la mezcla de reaccion a 0oC. El precipitado se filtra y se lava con porciones sucesivas de solucion satura de cloruro sodico. El crudo obtenido se purifica por cromatografia en columna sobre gel de sflice utilizando mezclas de hexano: acetato de etilo (1:3).

(R, S)- 1-bencil-3-fluoro-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (4a)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-fluoro-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (100 mg, 0,425 mmol), NaH (11,25 mg, 0,468 mmol) y bromuro de bencilo (28,08 mg, 0,425 mmol) agitandose durante 15 minutos a temperatura ambiente para obtener 30 mg de un solido naranja (21 %). P.f. 115 - 118 oC. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 8,48 (d, J = 4,7 Hz, 1H, H3''), 8,26 (s, 1H, H5''), 7,46 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H7''), 7,23 -6,93 (m, 9H, H-Ar), 6,58 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H7), 4,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H, H1'), 4,60 (d, J = 15,7 Hz, 1H, H1'), 3,68 - 3,54 (m, 1H, H1''), 3,48 - 3,31 (m, 1H, H1''). HPLC: tR = 3,72 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 333,2 [M-H]+.

(R, S)- 1-bencil-3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (4b)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (50 mg, 0,156 mmol), NaH (4,12 mg, 0,172 mmol) y bromuro de bencilo (26,68 mg, 0,156 mmol), agitandose durante 15 minutos a temperatura ambiente para obtener 10 mg de un solido beige (15 %). P.f. 121 - 124 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 7,80 (m, 1H, H4), 7,38 -7,11 (m, 9H), 6,28 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H5’’), 5,99 (t, J = 7,5 Hz, 1H, H4’’), 5,81 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H3’’), 5,53 - 5,47 (m, 1H, CH2-Ph), 5,33 - 5,26 (m, 1H, CH2-Ph), 3,65 (dd, J = 25,2, 12,3 Hz, 1H, CH2-C-F), 3,42 (dd, J = 25,1, 12,4 Hz, 1H, CH2-C-F). HPLC: tR = 3,39 (99,9 %) EM (ES, modo positivo) m/z 323,1 [M+2H]+.

(R, S)- 1-bencil-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxoindol (4c)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2- oxoindol (40 mg, 0,13 mmol), NaH (3,43 mg, 0,143 mmol) y bromuro de bencilo (22,26 mg, 0,13 mmol), agitandose durante 15 minutos a temperatura ambiente para obtener 20 mg (39 %) de un solido amarillo. P.f. 170 - 173 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) 5 (ppm): 7,74 (J = 6,4 Hz, 1H, H4), 7,69 -7,14 (m, 13H), 6,85 (t, J = 7,4 Hz, 1H, H4’),

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6,51 (t, J = 7,4 Hz, 1H, H3’), 6,01 (m, 1H, CH2-Ph), 5,23 (m, 1H, CH2-Ph), 3,63 (dd, J =

25,2, 12,3 Hz, 1H, CH2-C-F), 3,45 (dd, J = 25,1, 12,4 Hz, 1H, CH2-C-F). HPLC: tR = 5,38 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 398,3 [M+H]+.

(R, S)- 1-bencil-5-doro-3-fluoro-3-[(4-pirrolidin- 1-il)-bencil]-2-oxoindol (4d)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 5-cloro-3-fluro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-bencil]- 2-oxoindol (50 mg, 0,145 mmol), NaH (3,83 mg, 0,160 mmol) y bromuro de bencilo (24,8 mg, 0,145 mmol), agitandose durante 15 minutos a temperatura ambiente para obtener 30 mg de un aceite naranja (47 %). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 5 (ppm): 7,61 (dd, J = 7,5, 2,0 Hz, 1H, H6), 7,51 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H7), 7,36 (d, J = 1,9 Hz, 1H, H4), 7,29 - 7,20 (m, 5H), 7,08 - 7,02 (m, 2H), 6,61 (d, J = 7,5 Hz, 2H, H3''), 5,73 (m, 1H, CH2-PI-1), 5,24 (m, 1H, CH2-PI-1), 3,89 (m, 2H, H6''), 3,70 - 3,56 (m, 3H), 2,98 (m, 1H, CH2-CF), 2,20 - 2,11 (m, 2H, H7''), 1,73 - 1,61 (m, 2H, H7''). HPLC: tR=4,69 (98 %). EM (ES, modo positivo) m/z 432,2 [M-2H]+.

(R, S)-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2-il)metil)-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (4e) Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-fluoro-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol (100 mg, 0,3 mmol), NaH (15,12 mg, 0,63 mmol) e hidrocloruro de 2-bromometil-3- hidroxipiridina (80,67 mg, 0,3 mmol) agitandose durante 2,5 horas a temperatura ambiente para obtener 4 mg (9 %). P.f. 172 - 175 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 8,40 -8,33 (m, 2H), 8,30 (d, J = 4,9, 1H, H6’), 7,76 (t, J = 8,1, 1H, H4’’), 7,34 - 7,16 (m, 7H), 5,87 (s, 1H, OH), 5,55 (d, J = 12,5 Hz, 1H, CH2-piridina), 5,29 (d, J = 12,3 Hz, 1H, CH2-piridina), 3,69 (dd, J = 25,1, 12,5 Hz, 1H, CH2-CF), 3,11 (dd, J = 25,1, 12,5 Hz, 1H, CH2-CF). HPLC: tR = 4,96 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 355,4 [M+5H]+.

(R, S)-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2-il)metil)-3-(pirrol-2-il)metil-2-oxoindol (4f)

Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol (10 mg, 0,043 mmol), NaH (2,3 mg, 0,091 mmol) e hidrocloruro de 2-bromometil-3- hidroxipiridina (11,53 mg, 0,043 mmol), agitandose durante 2 horas a temperatura ambiente para obtener 3 mg (21 %). P.f. 123 oC. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 8,24 (d, J = 4,9 Hz, 1H, H6'), 8,00 (s, 1H, NH), 7,68 (dd, J = 7,1, 2,3 Hz, 1H, H4), 7,38 - 7,06 (m, 5H), 6,56 (dd, J = 7,5, 1,5 Hz, 1H, H5''), 6,07 (t, J = 7,4 Hz, 1H, H4''), 5,89 - 5,80 (m, 2H), 5,46 (s, 2H, CH2-piridina), 3,72 (dd, J = 25,2, 12,3 Hz, 1H,

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CH2-CF), 3,43 (dd, J = 25,2, 12,4 Hz, 1H, CH2-CF). HPLC: tR = 4,95 (99,9 %). EM (ES, modo positivo) m/z 341,3 [M+3H]+.

(R, S)-3-((5-fenilfuran-2-il)metil-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2-il)metil)-2-oxoindol (4g) Siguiendo el procedimiento general de smtesis de derivados N-sustituidos de 3- (arilmetil)-3-fluoro-2-oxoindoles, se parte de 3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2- oxoindol (15 mg, 0,049 mmol), NaH (2,59 mg, 0,102 mmol) e hidrocloruro de 2- bromometil-3-hidroxipiridina (13,17 mg, 0,049 mmol), agitandose durante 2 horas a temperatura ambiente para obtener 6 mg (30 %) de un aceite naranja. 1H RMN (300 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 8,27 (dd, J = 5,0, 1,2 Hz, 1H), 7,90 (dd, J = 6,9, 2,7 Hz, 1H), 7,40 - 7,32 (m, 4H), 7,32 - 7,26 (m, 2H), 7,26 - 7,22 (m, 1H), 7,22 - 7,14 (m, 2H), 7,08 (dd, J = 8,1, 5,0 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,31 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,97 (d, J = 12,4 Hz, 1H, CH2-piridina), 5,75 (s, 1H, OH), 5,50 (d, J = 12,4 Hz, 1H, CH2- piridina), 3,76 (dd, J = 25,2, 12,4 Hz, 1H, CH2-CF), 3,47 (dd, J = 25,3, 12,4 Hz, 1H, CH2-CF). HPLC: tR = 3,88 (95 %). EM (ES, modo positivo) m/z 412,1 [M-2H]+.

Ejemplo 2 L'tneas celulares

Las celulas PNT2 (Sigma, St Lous, MO, USA), PC-3 (ATCC CRL-1435) y HepG2 (ATCC, HB-8065) fueron crecidas de manera rutinaria en frascos de cultivo con RPMI 1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino (SFB) (Gibco BRL; Escocia, Reino Unido) en presencia de 1% de solucion de antibiotico (penicilina G 100 Ul/ml, sulfato de estreptomicina 100 ^g/ml y anfotericina B 0,25 ^g/ml de Invitrogen; Paisley, UK) y se mantuvieron a 37°C en un ambiente humedo y con un 5% de CO2.

Determinacion de la viabilidad celular.

Despues de la incubacion con los compuestos 3b, 4b, 3c y 3d a dosis comprendidas entre 1 y 100 ^M durante 24 y 48 horas, se anadieron 100 ^L de MTT (Bromuro de 3- [4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazol) durante 1 h, y el precipitado formado se solubilizo con 200-500 ^L isopropanol. Posteriormente se midio la absorbancia a 570 nm con un espectrofotometro de placas (ELX 800 Bio-Tek Intruments, INC).

Los resultados obtenidos indican que los compuestos 4b y 3c inhiben la viabilidad de las celulas de prostata y de HCC (Figuras 1a, 1b, 2a, 2b, 5a y 5b), siendo el compuesto 3cel mas potente y eficaz, especialmente frente a las celulas tumorales. Se calcula una IC50 para el compuesto 3c en las celulas tumorales de prostata PC-3 de12 ^M (Figura 2a y 2b).

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Eiemplo 3

Inmunodeteccion de protemas

Para la obtencion de protemas, se levantaron las celulas de la placa con tampon de homogeneizacion (Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, triton X100, Na3V041 mM, p-glicerofosfato 10 mM, NaF 5 mM, leupeptina 2 ^g/ml, aprotinina 10 ^g/ml, PMSF 0,1 mM ) mediante raspado en hielo. Posteriormente, las muestras se dejaron a 4°C durante 15 min. Inmediatamente despues se centrifugaron a 12000 gdurante 10 min a 4°C, recogiendo el sobrenadante. Las muestras (20 ^g de protemas) se sometieron a electroforesis en geles de acrilamida/bisacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE) al 10% o 15 %, utilizando un tampon de electroforesis compuesto por Tris 25 mM, pH 8,3, Glicina 0,2 M y SDS 0,1%. Se utilizaron marcadores de bajo peso molecular de Lonza Group Ldt (Basilea, Suiza), detectando posteriormente la protema de interes mediante Western blot, El analisis densitometrico de las bandas obtenidas en las placas fotograficas se realizo con el programa Scion Image (Scion Corporation, Maryland, USA). Los anticuerpos primarios p-AMPKa1-thr172, p-ACC-ser79 AMPK, ACC y p-tubulina fueron obtenidos de Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Como anticuerpos secundarios se han utilizado los siguientes anticuerpos conjugados con peroxidasa: IgG anti-mouse de Sigma (St. Louis, USA), IgG anti-rabbit de Cell Signaling (Cell Signaling Technology, MA, USA).

Se incuban las celulas PC-3 con los diferentes compuestos a una dosis de 25 ^M durante 1h, y se determinan los niveles de las protemas fosforiladas y totales. Se comprueba que los compuestos 4b y 3d producen inhibicion de la forforilacion de AMPK y de uno de sus sustratos mas tipicos, ACC (Figura 3a y 3b). Sin embargo, con el compuesto 3c se produce un notable aumento de la fosforilacion de AMPK que se corresponde con un aumento de ACC (Figura 3a). Esto indica que in vivo el compuesto 3c se comporta como activador de AMPK en celulas de prostata. Curiosamente esto se correlaciona con una mayor eficacia en el efecto antiproliferativo.

En presencia del activador de AMPK AICAR, este efecto se mantiene y la fosforilacion de AMPK y de ACC esta incluso por encima de la producida por el AICAR solo (Figura 4a y 4b). Los compuestos 4b y 3d se siguen comportando como inhibidores incluso en presencia de AICAR (Figura 4a y4b).

En cambio, en las celulas de carcinoma hepatocelular, todos los compuestos se comportan como inhibidores tanto en ausencia como en presencia de AICAR (Figura 6a, 6b, 6c y 6d).

5 El efecto inhibidor de AMPK de los compuestos 4b, 3c y 3d, en celulas de carcinoma hepatocelular se suma al del inhibidor de AMPK, dorsomorfina. En las celulas HepG2 tratadas con estos compuestos y con dorsomorfina se observa una inhibicion de la forsforilacion de AMPK y de la de ACC superior a la producida por dorsomorfina sola (Figura 7a y 7b).

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Claims

5

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REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de formula (I):

O

r3

(I)

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, donde:

X representa hidrogeno o halogeno;

R1 representa hidrogeno o halogeno;

R2 representa fenilo o Cy1, donde el grupo fenilo esta opcionalmente sustituido por un grupo R4, y donde Cy1 esta opcionalmente sustituido por un grupo R4 o por un grupo

R5;

R3 representa hidrogeno o un grupo de formula (II):

X^CY3

(II);

R4 representa Cy2;

R5 representa hidrogeno, fenilo o piridilo opcionalmente sustituido por uno o mas grupos -NR6R6, -NR6COR6 o -CO2R6;

cada R6 independientemente representa hidrogeno o C1-4 alquilo;

Cy1 representa heterodclico aromatico de 5 o 6 miembros, que contiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de O, N y S;

Cy2 representa un anillo de 5 o 6 miembros, saturado o aromatico, que contiene 1 o 2 heteroatomos seleccionados de O, N y S;

Cy3 representa fenilo o piridilo, donde Cy3 esta opcionalmente sustituido por uno o mas grupos R7; y

cada R7 independientemente representa halogeno o -OR6.
2. El compuesto segun la reivindicacion 1, donde X representa halogeno.
3. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, donde X representa F o Cl.
4. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde X representa F.

imagen1

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5. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R1 representa halogeno.
6. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde R1 representa F o Cl.
7. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde R2 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo R4.
8. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde R2 representa Cy1 opcionalmente sustituido por un grupo R5.
9. El compuesto segun la reivindicacion 8, donde Cy1 representa un heterociclo aromatico de 5 miembros, que contiene 1 heteroatomo seleccionado de O, N y S opcionalmente sustituido por un grupo R5.
10. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -NR6R6, -NR6COR6 o -CO2R6.
11. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, donde R5 representa fenilo opcionalmente sustituido por un grupo -CO2R6.
12. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde R5 representa fenilo.
13. El compuestos segun cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, donde Cy1 se selecciona de un compuestos de formula (IN):

imagen2

donde R5 tiene el significado descrito anteriormente para un compuesto de formula (I).

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14. El compuestos segun cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, donde Cy1 se selecciona de un compuestos de formula (IV):

imagen3

donde R5 tiene el significado descrito anteriormente para un compuesto de formula (I).
15. El compuestos segun cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, donde Cy1 se selecciona de un compuestos de formula (V):

imagen4

donde R5 tiene el significado descrito anteriormente para un compuesto de formula (I).
16. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, donde R3

representa H.
17. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, donde R3

representa un grupo de formula (II).
18. El compuesto segun la reivindicacion 17, donde Cy3 representa fenilo

opcionalmente sustituido por uno o mas grupos R7.
19. El compuesto segun la reivindicacion 18, donde R7 representa -OR6.
20. El compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, donde R6

representa hidrogeno o -CH3.
21. El compuesto segun la revindication 1, seleccionado de:

Compuesto

Estructura Nombre

2a

rQu (Xr° H 3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol;

2b

H 3-(pirrol-2-il-metil)-2-oxoindol;

2c

oS?' H 3-(5-fenilfuran-2-il-metil)-2-oxoindol;

2d

"XX^° H 5-tioro-3-[(4-pirrolidin-1-il)-bentil]-2- oxoindol;

2e

J c>'Br H 3-(5-bromofuran-2-il-metil)-2-oxoindol;

2f

3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il-metil]-2-oxoindol;

2g

ccf° 902Me 3-(5-((2-oxoindolin-3-il)metil)furan-2- il)benzoato de metilo;

3a

H (R, S)-3-fluoro-3-(piridin-3-il-metil)-2- oxoindol;

3b

0 X H (R, S)-3-fluoro-3-(pirrol-2-il-metil)-2- oxoindol;

3c

jr\ Fx°^ph H (R, S)-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)- 2-oxoindol;

3d

rON° H (R, S)-5-doro-3-fluro-3-[(4-pirrolidin-1-il)- bencil]-2-oxoindol;

3e

s^\0 (Y>° ^ H (R, S)-3-fluoro-3-[(2, 2,-bitiofen)-5-il- metil]-2-oxoindol;

3f

PrS°'Br H (R, S)-3-cloro-3-(5-fenilfuran-2-il-metil)- 2-oxoindol;

3g

ci s /] (Y>° ^ H (R, S)-3-cloro-3-[(2, 2’-bitiofen)-5-il- metil]-2-oxoindol;

3h

(R, S)-3-(5-((3-fluoro-2-oxoindolin-3- il)metil)furan-2-il)benzoato de metilo;

4a

Cxd^ Bn (R, S)-1-bencil-3-fluoro-3-(piridin-3-il- metil)-2-oxoindol;

4b

^ f^ NT rH 0 1 >° Bn (R, S)-1-bencil-3-fluoro-3-(pirrol-2-il- metil)-2-oxoindol;

4c

FX°^ph Bn (R, S)-1-bencil-3-fluoro-3-(5-fenilfuran-2- il-metil)-2-oxoindol;

4d

rOrN° c'YY>o Bn (R, S)-1-bencil-5-tioro-3-fluoro-3-[(4- pirrolidin-1-il)-bencil]-2-oxoindol;

4e

N^/ OH (R, S)-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2- il)metil)-3-(piridin-3-il-metil)-2-oxoindol;

4f

fT^rv! H NcV (R, S)-3-fluoro-1-((3-hidroxipiridin-2- il)metil)-3-(pirrol-2-il)metil-2-oxoindol; y

4g

JT\ ^/£o^ph Nas/ V^A~OH (R, S)-3-((5-fenilfuran-2-il)metil-3-fluoro- 1-((3-hidroxipiridin-2-il)metil)-2-oxoindol.
22. Una composition farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 y uno o mas excipientes 5 farmaceuticamente aceptables del mismo.
23. Uso de un compuesto de formula (I) segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 o de una composition farmaceutica segun la reivindicacion 22, para la fabrication de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad asociada a

5 la modulation de la enzima AMPK.
24. El uso segun la reivindicacion 23, donde la enfermedad se selecciona de autoinmune, inflamatoria, cardiovascular, smdrome metabolico, neurologica y cancer.

10
25. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones 23 o 24, donde la enfermedad se selecciona de diabetes de tipo 1 y 2, obesidad, inflamacion, dislipidemia, hipertension, hiperglucemia, hipertriglicerimidemia, resistencia a la insulina, epilepsia, ictus, enfermedades de Krabbe/Twitcher, alzheimer, parkinson,

15 huntington y cancer.
26. El uso segun cualquiera de las reivindicaciones 23 a 25, donde la enfermedad es cancer.

20 27. El uso segun la reivindicacion 26, donde el cancer se selecciona de cancer de

prostata, cancer de mama, cancer de pancreas, cancer de utero y gliomas.