ES2642003T3 - Sales de un compuesto de benzotiazolona como agonistas del adreno-receptor beta-2 - Google Patents

Sales de un compuesto de benzotiazolona como agonistas del adreno-receptor beta-2 Download PDF

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ES2642003T3
ES2642003T3 ES13812075.3T ES13812075T ES2642003T3 ES 2642003 T3 ES2642003 T3 ES 2642003T3 ES 13812075 T ES13812075 T ES 13812075T ES 2642003 T3 ES2642003 T3 ES 2642003T3
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Nicola Tufilli
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Abstract

Una forma cristalina de sal de acetato de (R)-7-(2-(1-(4-butoxifenil)-2-metilpropan-2-ilamino)-1-hidroxietil)-5- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.

Description

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DESCRIPCION
Sales de un compuesto de benzotiazolona como agonistas del adreno-receptor beta-2
La presente invencion se refiere a un compuesto de benzotiazolona, (como se reivindica) a su preparacion, a su uso medico como un agonista del adreno-receptor beta-2, y a medicamentos, composiciones farmaceuticas y combinaciones que lo comprenden.
Los compuestos de benzotiazolona, los cuales son agonistas del adreno-receptor beta-2 se describen en las Publicaciones Internacionales Numeros WO2004/16601 y WO2006/056471. La Publicacion Internacional Numero WO2005/110990 tambien describe heterociclos benzo-condensados como agonistas de beta-2.
Aunque los agonistas de beta-2 han sido conocidos durante mucho tiempo por sus propiedades broncodilatadoras, tambien son conocidos por su capacidad para producir hipertrofia de musculo esqueletico.
Numerosos estudios se han enfocado en las aplicaciones terapeuticas de las propiedades anabolicas de los agonistas de beta-2 para mitigar la consuncion muscular y mejorar la funcion muscular. Sin embargo, esta clase de compuestos tambien se ha asociado con efectos secundarios indeseables, incluyendo un mayor riesgo de eventos adversos relacionados con el sistema cardiovascular. Por consiguiente, el uso de agonistas de beta-2 en las enfermedades de consuncion muscular ha sido limitado hasta ahora por la hipertrofia cardfaca y por los efectos potencialmente perjudiciales sobre la funcion cardiovascular.
Existe una necesidad de proporcionar nuevos agonistas de beta-2 que sean buenos farmacos candidatos. En particular, un nuevo agonista de beta-2 debe enlazarse potentemente al adreno-receptor beta-2, mientras que muestre poca afinidad por otros receptores, tales como, por ejemplo, el adreno-receptor beta-1, el adrenoreceptor alfa-1A, o el receptor 5HT2C, y que muestre la actividad funcional como un agonista. Debe ser metabolicamente estable y poseer propiedades farmacocineticas favorables. No debe ser toxico, y debe demostrar pocos efectos secundarios, en particular menos efectos secundarios cardfacos que los agonistas de beta-2 comercializados conocidos, tales como, por ejemplo, el formoterol. Adicionalmente, el farmaco candidato ideal existira en una forma ffsica que sea estable, no higroscopica y facilmente formulada.
El compuesto de la invencion es un agonista selectivo de beta-2. En particular, muestra un aumento de afinidad por el adreno-receptor beta-2, la cual es mayor que su afinidad por el adreno-receptor beta-1 o el adreno-receptor alfa-1A, comparandose con los agonistas de beta-2 conocidos, tales como el formoterol. De una manera sorprendente, tambien muestra una afinidad mas baja por el receptor de serotonina (5HT2c), y una potencia funcional mas baja en las celulas que expresan el 5HT2c que su racemato o su enantiomero correspondiente, indicando que no afecta a la actividad locomotora y a la ingestion de alimento que pueda provocar una reduccion del peso corporal, contrarrestando potencialmente la hipertrofia de musculo esqueletico inducida por el agonista de beta-2. Los efectos negativos de los agonistas del receptor 5HT2c sobre la entrada de energfa y el peso corporal son descritos por J. Halford y J. Harrold en Handb Exp Pharmacol. 2012; (209) 349-56.
Por consiguiente, el compuesto de la presente invencion es potencialmente util en el tratamiento de una amplia gama de trastornos, en particular en el tratamiento o en la prevencion de enfermedades de consuncion muscular, tales como distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
El tratamiento de caquexia tambien es un uso contemplado. Todas las formas de caquexia son potencialmente tratables con los compuestos de la presente invencion, incluyendo caquexia por cancer, por ejemplo.
En un primer aspecto de la invencion, por consiguiente, se proporciona una forma cristalina de un compuesto de la formula (I), el cual es:
HN
imagen1
HO
imagen2
S
N
H
'y== o
(I)
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en la forma de la sal de acetato.
El compuesto de la invencion es la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)- 1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona.
Las siguientes son realizaciones de la invencion:
Realizacion 1: Un compuesto de acuerdo con el primer aspecto de la invencion.
Realizacion 2: Un compuesto que es la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il- amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona.
Realizacion 3: Una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, y uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables.
Realizacion 4: Una composicion farmaceutica de acuerdo con la realizacion 3, en donde uno de los vehfculos farmaceuticamente aceptables es alcohol bencflico.
Realizacion 5: Una combinacion que comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, y uno o mas co-agentes terapeuticamente activos.
Realizacion 6: Un compuesto para uso en un metodo para el tratamiento o la prevencion de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia, el cual comprende administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, a un sujeto que lo necesite.
Realizacion 7: Un compuesto para uso en un metodo de acuerdo con la realizacion 6, en donde el compuesto se administra mediante infusion subcutanea.
Realizacion 8: Un compuesto de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, para utilizarse como un medicamento.
Realizacion 9: Un compuesto de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, para utilizarse en el tratamiento o en la prevencion de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
Realizacion 10: El uso de un compuesto de acuerdo con las realizaciones 1 o 2, en la elaboracion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
Realizacion 11: Un proceso para la elaboracion de un compuesto de la formula (I) en la forma de la sal de acetato, el cual incluye los pasos de:
a. la reaccion de un compuesto de la formula (Ila), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
n
imagen3
S
N
OR
b
en donde Ra y Rb son grupos protectores con 2-(4-butoxi-fenil)-1,1-dimetil-etil-amina;
b. la escision de los grupos protectores opcionalmente presentes;
c. la recuperacion del compuesto de la formula (I) que se pueda obtener de esta manera, en la forma de la sal de acetato.
No Realizacion 12: Un proceso para la elaboracion de un compuesto de la formula (I) en la forma de la sal de acetato, de acuerdo con la realizacion 11, en donde el compuesto (IIa) se obtiene mediante la reaccion de un compuesto de la formula (I IIa), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
LG
imagen4
S
/)
N
OR
b
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente con una base y opcionalmente un catalizador de transferencia de fases.
No Realizacion 13: Un proceso de acuerdo con la realizacion 12, en donde la base es carbonato de potasio.
5 No Realizacion 14: Un proceso de acuerdo con la realizacion 13, en donde la base es hidroxido de sodio.
15: Un proceso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 12 a 14, en donde el catalizador de transferencia de fases es yoduro de tetra-butil-amonio.
16: Un proceso para la elaboracion de un compuesto de la formula (I) en la forma de la sal de acetato, de acuerdo con las realizaciones 12 a 15, en donde el compuesto (Ilia) se obtiene mediante la reduccion
10 estereoselectiva de un compuesto de la formula (IVa-2), en forma libre o en una forma de sal
farmaceuticamente aceptable:
imagen5
(IVa-2)
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente.
15 No Realizacion 17: Un proceso de acuerdo con la realizacion 16, en donde la reduccion estereoselectiva se lleva a cabo con [W-[(1S,2S)-2-(amino-KW)-1,2-difenil-etil]-4-metil-bencen-sulfonamidato-KW]cloro[(1,2,3,4,5,6- n)-1-metil-4-(1-metil-etil)-benceno]-rutenio (RuCl(p-cimeno)[(S,S)-Ts-DPEN]).
No Realizacion 18: Un proceso de acuerdo con la realizacion 16 o 17, en donde LG es cloro.
No Realizacion 19: Un proceso de acuerdo con la realizacion 18, en donde el compuesto (IVa'-2), en forma 20 libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
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(IVa'-2)
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se obtiene mediante la reaccion de un compuesto de la formula (Va), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
Hal
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S
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ORb
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y Hal es un halogeno con 2-cloro-N-metoxi-N-metil-acetamida, en la presencia de una base fuerte.
No Realizacion 20: Un proceso de acuerdo con la realizacion 19, en donde la base fuerte es terbutil-litio.
No Realizacion 21: Un proceso para la elaboracion de un compuesto de la formula (I) en la forma de la sal de acetato, el cual incluye los pasos de:
a) la reaccion de un compuesto de la formula (Ilia), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
LG
HO
RaO
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N
(Ilia)
ORb
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente con 2-(4-butoxi-fenil)-1,1 -dimetil-etil- amina;
b) la escision de cualquiera los grupos protectores todavfa presentes;
c) la recuperacion del compuesto de la formula (I) que se pueda obtener de esta manera, en la forma de la sal de acetato.
No Realizacion 22: Un proceso de acuerdo con la realizacion 21, en donde LG es cloro o p-toluen-sulfonilo.
No Realizacion 23: Un proceso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 11 a 22, en donde Ra es butilo terciario.
No Realizacion 24: Un proceso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 11 a 23, en donde Rb es isopropilo.
Breve Descripcion de las Figuras
La Figura 1 muestra el aumento de la masa de musculo esqueletico y de la masa cardfaca en ratas inyectadas con formoterol contra el compuesto A (compuesto de la invencion) - (los valores se expresan como el promedio ± SEM (n = 5-6); grupo de musculos esqueleticos (gastrocnemio-soleo-tibial) normalizado por el
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peso corporal inicial; peso del corazon normalizado por el peso del cerebro.
La Figura 2a muestra el aumento de la frecuencia cardfaca en los nodulos sino-auriculares aislados de conejo cuando se utiliza formoterol contra el compuesto A (compuesto de la invencion).
La Figura 2b muestra el aumento de actividad del marcapasos en corazones de conejo aislados cuando se utiliza formoterol contra el compuesto A (compuesto de la invencion).
Las Figuras 3a y 3b muestran el cambio en la frecuencia cardfaca en ratas despues de un bolo subcutaneo del compuesto A (compuesto de la invencion) o formoterol, respectivamente.
La Figura 3c compara el cambio en la frecuencia cardfaca promedio en ratas cuando se administra formoterol contra el compuesto A (compuesto de la invencion).
Las Figuras 4a y 4b muestran el cambio en la frecuencia cardfaca en monos Rhesus despues de un bolo subcutaneo del compuesto A (compuesto de la invencion) o formoterol, respectivamente.
La Figura 5 muestra el patron de difraccion en polvo de rayos-X de la base libre cristalina del compuesto A (compuesto de la invencion).
La Figura 6 muestra el patron de difraccion en polvo de rayos-X de la sal de acetato cristalina del compuesto A (compuesto de la invencion).
La Figura 7 muestra el patron de difraccion en polvo de rayos-X de la sal de glicolato cristalina del compuesto A (compuesto de la invencion).
El termino “compuesto de la presente invencion”, “compuesto de la invencion" o "compuesto A” se refiere al compuesto como se reivindica, a los hidratos o solvatos del compuesto, asf como a los tautomeros y compuestos isotopicamente marcados (incluyendo las sustituciones con deuterio). El compuesto de la presente invencion comprende ademas los polimorfos del compuesto de la formula (I).
Como se utiliza en la presente, el termino "halogeno" o "halo” se refiere a fluor, cloro, bromo, y yodo.
Como se utiliza en la presente, la estereoqmmica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema R-S de Cahn-lngold-Prelog. Cuando un compuesto es un enantiomero puro, la estereoqmmica en cada atomo de carbono quiral se puede especificar mediante cualquiera de R o S. Los compuestos resueltos cuya configuracion absoluta se desconoce, pueden ser designados como (+) o (-) dependiendo de la direccion (dextrogira o levogira) en la que rotan la luz polarizada en el plano en la longitud de onda de la lmea de sodio D. Cualquier atomo asimetrico (por ejemplo, carbono, o similares) de un compuesto puede estar presente en una configuracion racemica o enantiomericamente enriquecida, por ejemplo, en la configuracion (R), (S) o (R,S). La mezcla racemica 50:50 de estereoisomeros se designa como (R,S), y las formas enantiomericamente enriquecidas por el exceso enantiomerico de las formas (R) a (S), respectivamente, o de (S) a (R). El exceso enantiomerico es representado usualmente mediante la ecuacion: ee = ((ml - m2) / (ml + m2)) * 100%, en donde ml y m2 representan la masa de las formas enantiomericas R y S respectivas.
El compuesto de la presente invencion contiene un centro asimetrico, el cual se define en terminos de estereoqmmica absoluta como (R). Su enantiomero correspondiente se define como (S), el cual es la forma menos activa.
En ciertas realizaciones de la invencion, el atomo asimetrico tiene un exceso enantiomerico de cuando menos el 95, 98 o 99 % en la configuracion (R).
Por consiguiente, en una realizacion de la invencion, se proporciona la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, en un exceso enantiomerico de cuando menos el 95 %.
En otra realizacion de la invencion, se proporciona la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, en un exceso enantiomerico de cuando menos el 98 %.
En todavfa otra realizacion de la invencion, se proporciona la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2- metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, en un exceso enantiomerico de cuando menos el 99 %.
En una realizacion de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il- amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, y uno o mas vehfculos aceptables farmaceuticamente, en donde la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona esta presente en un exceso enantiomerico de cuando menos
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En otra realizacion de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il- amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, y uno o mas vehfculos aceptables farmaceuticamente, en donde la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona esta presente en un exceso enantiomerico de cuando menos el 98 %.
En todavfa otra realizacion de la invencion, se proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2- il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, y uno o mas vehfculos aceptables farmaceuticamente, en donde la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona esta presente en un exceso enantiomerico de cuando menos el 99 %.
Dependiendo de la eleccion de los materiales de partida y de los procedimientos para la sfntesis qufmica, los compuestos pueden estar presentes en la forma de uno de los posibles isomeros o como mezclas de los mismos, por ejemplo, como los isomeros opticos puros, o como mezclas de isomeros, tales como racematos. Los isomeros (R) y (S) opticamente activos se pueden preparar utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver empleando las tecnicas convencionales. Se pretende que se incluyan todas las formas tautomericas del compuesto de la presente invencion.
De conformidad con lo anterior, como se utiliza en la presente, el compuesto de la presente invencion puede estar en la forma de tautomeros o mezclas de los mismos.
Cualesquiera racematos resultantes de los productos finales o intermediarios de sfntesis se pueden resolver en los antfpodas opticos mediante los metodos conocidos, por ejemplo, mediante la separacion de las sales diaestereomericas de los mismos, obtenidas con un acido o con una base opticamente activa, y la liberacion del compuesto acido o basico opticamente activo. En particular, por consiguiente, se puede emplear una fraccion basica para resolver el compuesto de la presente invencion en sus antfpodas opticos, por ejemplo, mediante la cristalizacion fraccionaria de una sal formada con un acido opticamente activo, por ejemplo, acido tartarico, acido dibenzoil-tartarico, acido diacetil-tartarico, acido di-O,O'-p-toluoil-tartarico, acido mandelico, acido malico o acido canfor-10-sulfonico. Los productos racemicos o enantiomericamente enriquecidos tambien se pueden resolver mediante cromatograffa quiral, por ejemplo, cromatograffa de lfquidos a alta presion (HPLc), utilizando un adsorbente quiral.
Como se utilizan en la presente, los terminos “sal" o "sales” se refieren a una sal de adicion de acido o de adicion de base del compuesto de la invencion. Las "sales" incluyen en particular las “sales farmaceuticamente aceptables”. El termino “sales farmaceuticamente aceptables” se refiere a las sales que conservan la efectividad biologica y las propiedades del compuesto de esta invencion, y que tfpicamente no son biologicamente o de otra manera indeseables. El compuesto de la formula I de la presente invencion es capaz de formar una sal caracterfstica con un acido definido en virtud de la presencia de un grupo amino basico en la cadena lateral. Tambien es capaz de formar las sales caracterfsticas con las bases definidas en virtud de la presencia de dos grupos acidos (fenol; anillo de tiazolona) en la fraccion heterocfclica.
Las sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables se pueden formar con acidos inorganicos y acidos organicos, por ejemplo, las sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canfor-sulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etan- disulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, glicolico, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, lauril-sulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metil-sulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato acido/fosfato diacido, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfo-salicilato, tartrato, tosilato y trifluoro-acetato.
Se proporciona la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- tiazol-2(3H)-ona en la forma de la sal de acetato, benzoato, canforato, fumarato, glicolato, lactato, malonato, mesilato, succinato, sulfato, tartrato o xinafoato.
La invencion se refiere a la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi- benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona en una forma de sal de acetato.
Se proporciona la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- tiazol-2(3H)-ona en una forma de sal de glicolato.
Los acidos inorganicos a partir de los cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, acido clorhfdrico, acido bromhfdrico, acido sulfurico, acido nftrico, acido fosforico, y similares.
Los acidos organicos a partir de los cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, acido acetico,
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acido propionico, acido glicolico, acido oxalico, acido maleico, acido malonico, acido succinico, acido fumarico, acido tartarico, acido citrico, acido benzoico, acido mandelico, acido metan-sulfonico, acido etan-sulfonico, acido toluen-sulfonico, acido sulfosalicflico, y similares.
Las sales de adicion de base farmaceuticamente aceptables se pueden formar con bases inorganicas y organicas.
Las bases inorganicas a partir de las cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, las sales de amonio y de los metales a partir de las columnas I a XII de la Tabla Periodica. En ciertas realizaciones, las sales se derivan a partir de sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio y hierro; las sales particularmente adecuadas incluyen las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio.
Las bases organicas a partir de las cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas, incluyendo las aminas sustituidas que se presentan naturalmente, aminas cfclicas, resinas basicas de intercambio de iones, y similares. Ciertas aminas organicas incluyen isopropil-amina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietil-amina, lisina, meglumina, piperazina y trometamina.
Las sales farmaceuticamente aceptables de la presente invencion se pueden sintetizar a partir de una fraccion basica o acida, mediante los metodos qufmicos convencionales. En terminos generales, estas sales se pueden preparar mediante la reaccion de las formas de acido libre del compuesto con una cantidad estequiometrica de la base apropiada (tal como hidroxido, carbonato, o bicarbonato de Na, Ca, Mg, o K, o similares), o mediante la reaccion de las formas de base libre de los compuestos con una cantidad estequiometrica del acido apropiado. Estas reacciones tfpicamente se llevan a cabo en agua o en un solvente organico, o en una mezcla de los dos. En terminos generales, es recomendable el uso de medios no acuosos como eter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo, cuando sea practicable. Las listas de las sales adecuadas adicionales se pueden encontrar, por ejemplo, en “Remington's Pharmaceutical Sciences”, 20a Edicion, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); y en “Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use” por Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2a edicion revisada, 2011).
Adicionalmente, el compuesto de la presente invencion, incluyendo sus sales, tambien se puede obtener en la forma de sus hidratos, o puede incluir otros solventes utilizados para su cristalizacion. El compuesto de la presente invencion puede formar, inherentemente o por diseno, solvatos con los solventes farmaceuticamente aceptables (incluyendo agua); por consiguiente, se pretende que la invencion abarque las formas tanto solvatadas como no solvatadas. El termino "solvato" se refiere a un complejo molecular del compuesto de la presente invencion (incluyendo las sales farmaceuticamente aceptables del mismo) con una o mas moleculas de solvente. Estas moleculas de solvente son aquellas comunmente utilizadas en la tecnica farmaceutica, que sean conocidas como inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol, y similares. El termino "hidrato" se refiere al complejo en donde la molecula de solvente es agua.
El compuesto de la presente invencion, incluyendo las sales, hidratos y solvatos del mismo, puede formar, inherentemente o por diseno, polimorfos.
Se proporciona la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- tiazol-2(3H)-ona en una forma cristalina.
En otra realizacion de la invencion, se proporciona la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona en una forma cristalina.
Se proporciona la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5- hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona en una forma cristalina.
Se proporciona la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- tiazol-2(3H)-ona cristalina en una forma sustancialmente pura.
En otra realizacion de la invencion, se proporciona la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina en una forma sustancialmente pura.
Se proporciona la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5- hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina en una forma sustancialmente pura.
Como se utiliza en la presente, “sustancialmente pura", cuando se utiliza con referencia a la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina, o a su sal farmaceuticamente aceptable, significa que tiene una pureza mayor del 90 % en peso, incluyendo mayor del 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, y 99 % en peso, y tambien incluyendo igual a aproximadamente el 100 % en peso de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)- ona, basandose en el peso del compuesto, o de su sal farmaceuticamente aceptable.
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La presencia de impurezas de la reaccion y/o impurezas del procesamiento se puede determinar mediante tecnicas analtticas conocidas en la materia, tales como, por ejemplo, cromatograffa, espectroscopfa de resonancia magnetica nuclear, espectrometna de masas, o espectroscopfa infrarroja.
La divulgacion se refiere a una forma cristalina de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con cuando menos uno, dos o tres picos que tienen valores de angulo de refraccion 2 Theta (0) seleccionados a partir de 8.5, 13.3, 13.9, 14.4, 15.2, 17.2, 17.5, 18.1, 21.3 y 22.5°, cuando se miden utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde estos valores son mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 15.2°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 18.1°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 22.5°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X sustancialmente igual al patron de difraccion en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 5 cuando se mide utilizando radiacion de CuKa. Para los detalles, vease el Ejemplo 5.
En otro aspecto, la invencion se refiere a una forma cristalina de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi- fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con cuando menos uno, dos o tres picos que tienen valores de angulo de refraccion 2 Theta (0) seleccionados a partir de 8.8, 11.5, 16.4, 17.6, 18.2, 19.6, 20.1, 20.8, y 21.1°, cuando se miden utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde estos valores son mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la invencion se refiere a una forma cristalina de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un
patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 8.8°, cuando
se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la invencion se refiere a una forma cristalina de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un
patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 16.4°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la invencion se refiere a una forma cristalina de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un
patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 20.8°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la invencion se refiere a una forma cristalina de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X sustancialmente igual al patron de difraccion en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 6, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa. Para los detalles vease el Ejemplo 6.
En todavfa otro aspecto, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1- (4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con cuando menos uno, dos o tres picos que tienen valores de angulo de refraccion 2 Theta (0) seleccionados a partir de 8.7, 11.6, 16.1, 18.0, 19.8, 20.7, y 21.1°, cuando se miden utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde estos valores son mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 18.0°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-
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butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un
patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 19.8°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un
patron de difraccion en polvo de rayos-X con un valor de pico en un angulo de refraccion 20 de 20.7°, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa, mas particularmente, en donde este valor es mas o menos 0.2° 20.
En una realizacion, la divulgacion se refiere a una forma cristalina de la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4- butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, la cual tiene un
patron de difraccion en polvo de rayos-X sustancialmente igual al patron de difraccion en polvo de rayos-X mostrado en la Figura 7, cuando se mide utilizando radiacion de CuKa. Para los detalles vease el Ejemplo 7.
El termino “sustancialmente igual” con referencia a las posiciones de picos de la difraccion de rayos-X, significa que se toman en cuenta la posicion tfpica del pico y la variabilidad de la intensidad. Por ejemplo, una persona experta en la materia apreciara que las posiciones de picos (20) mostraran alguna variabilidad inter- aparatos, tfpicamente de tanto como 0.2°. Ademas, una persona experta en la materia apreciara que las intensidades relativas de los picos mostraran una variabilidad inter-aparatos, asf como una variabilidad debida al grado de cristalinidad, a la orientacion preferida, a la superficie de muestra preparada, y a otros factores conocidos por los expertos en este campo, y deberan tomarse solamente como medidas cualitativas.
Un experto ordinario en este campo tambien apreciara que se puede obtener un patron de difraccion de rayos-X con un error de medicion que es dependiente de las condiciones de medicion empleadas. En particular, se sabe en general que las intensidades en un patron de difraccion de rayos-X pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medicion empleadas. Se debe entender ademas que las intensidades relativas tambien pueden variar dependiendo de las condiciones experimentales y, de conformidad con lo anterior, no se debe tomar en cuenta el orden exacto de la intensidad. Adicionalmente, un error de medicion del angulo de difraccion para un patron de difraccion de rayos-X convencional es tfpicamente de aproximadamente el 5 % o menos, y ese grado del error de medicion se debe tomar en cuenta como perteneciente a los angulos de difraccion anteriormente mencionados. En consecuencia, se debe entender que las formas de cristal de la divulgacion no estan limitadas a la forma de cristal que proporcione un patron de difraccion de rayos-X completamente identico al patron de difraccion de rayos-X ilustrado en las Figuras 5, 6 y 7 acompanantes, como se dan a conocer en la presente. Cualesquiera formas de cristal que proporcionen patrones de difraccion de rayos-X sustancialmente identicos a aquellos que se dan a conocer en las Figuras 5, 6 y 7 acompanantes, caen dentro del alcance de la presente divulgacion. La capacidad para aseverar las identidades sustanciales de los patrones de difraccion de rayos-X esta dentro del alcance de un experto ordinario en este campo.
Los solvatos farmaceuticamente aceptables de acuerdo con la invencion incluyen aquellos en donde el solvente de cristalizacion puede ser isotopicamente sustituido por ejemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO.
La formula dada en la presente tambien pretende representar las formas no marcadas asf como las formas isotopicamente marcadas del compuesto. Un compuesto isotopicamente marcado de la invencion tiene una estructura ilustrada por la formula dada en la presente, excepto que uno o mas atomos son reemplazados por un atomo que tiene una masa atomica o numero de masa seleccionados. Los ejemplos de los isotopos que se pueden incorporar en el compuesto de la invencion incluyen los isotopos de hidrogeno, de carbono, de nitrogeno, de oxfgeno, de fosforo, de fluor, y de cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I, respectivamente. La invencion incluye diferentes compuestos isotopicamente marcados, como se definen en la presente, por ejemplo, aquellos en donde hay isotopos radioactivos presentes, tales como 3H y 14C, o aquellos en donde hay isotopos no radioactivos presentes, tales como 2H y 13C. Estos compuestos isotopicamente marcados son utiles en los estudios metabolicos (con 14C), en los estudios de cinetica de reaccion (con, por ejemplo, 2H o 3H), en las tecnicas de deteccion o de formacion de imagenes, tales como tomograffa por emision de positrones (PET) o tomograffa computarizada con emision de un solo foton (SPECT), incluyendo los ensayos de distribucion del farmaco o del sustrato en el tejido, o en el tratamiento radioactivo de los pacientes. En particular, un 18F o un compuesto marcado puede ser particularmente deseable para los estudios de PET o SPECT. Un compuesto isotopicamente marcado de la formula (I) se puede preparar en terminos generales mediante las tecnicas convencionales conocidas por los expertos en este campo o mediante procesos analogos a aquellos descritos en los ejemplos acompanantes, utilizando un reactivo isotopicamente marcado apropiado en lugar del reactivo no marcado previamente empleado.
Ademas, la sustitucion con isotopos mas pesados, en particular deuterio (es decir, 2H o D) puede proporcionar ciertas ventajas terapeuticas resultantes de la mayor estabilidad metabolica, por ejemplo, un aumento de la vida media in vivo, o requerimientos de dosificacion reducida, o una mejora en el fndice terapeutico. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera como un sustituyente de un compuesto de la formula (I). La concentracion de este isotopo mas pesado, especfficamente deuterio, se puede definir por el factor de enriquecimiento isotopico. El termino "factor de enriquecimiento isotopico", como se utiliza en la presente,
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significa la proporcion entre la abundancia isotopica y la abundancia natural de un isotopo especificado. Si un sustituyente en el compuesto de esta invencion es denotado como deuterio, este compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotopico para cada atomo de deuterio designado de cuando menos 3,500 (52.5 % de incorporacion de deuterio en cada atomo de deuterio designado), de cuando menos 4,000 (60 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 4,500 (67.5 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 5,000 (75 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 5,500 (82.5 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 6,000 (90 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 6,333.3 (95 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 6,466.7 (97 % de incorporacion de deuterio), de cuando menos 6,600 (99 % de incorporacion de deuterio), o de cuando menos 6,633.3 (99.5 % de incorporacion de deuterio).
El compuesto de la invencion puede ser capaz de formar co-cristales con formadores de co-cristales adecuados. Estos co-cristales se pueden preparar a partir de un compuesto de la formula (I) mediante los procedimientos de formacion de co-cristales conocidos. Estos procedimientos incluyen molienda, calentamiento, co-sublimacion, co-fusion, o poner en contacto en solucion un compuesto de la formula (I) con el formador de co-cristales bajo condiciones de cristalizacion, y el aislamiento de los co-cristales formados de esta manera. Los formadores de co-cristales adecuados incluyen aquellos descritos en la Publicacion Internacional Numero WO 2004/078163. Por consiguiente, la invencion proporciona ademas co-cristales, los cuales comprenden un compuesto de la formula (I).
Como se utiliza en la presente, el termino "vehfculo farmaceuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersion, recubrimientos, tensoactivos, antioxidantes, conservadores (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifungicos), agentes isotonicos, agentes retardantes de absorcion, sales, conservadores, estabilizantes de farmacos, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegracion, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, tintes, y similares, y combinaciones de los mismos, como serfan conocidos por los expertos en este campo (vease, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edicion, Mack Printing Company, 1990, paginas 1289-1329). Excepto hasta donde cualquier vehfculo convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapeuticas o farmaceuticas.
El termino "una cantidad terapeuticamente efectiva" del compuesto de la presente invencion se refiere a una cantidad del compuesto de la presente invencion que provocara la respuesta biologica o medica de un sujeto, por ejemplo, la reduccion o inhibicion de la actividad de una enzima o de una protefna, o que mitigara los sfntomas, aliviara las condiciones, hara mas lento o retardara el progreso de la enfermedad, o prevendra una enfermedad, etc. En una realizacion no limitante, el termino “una cantidad terapeuticamente efectiva” se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invencion que, cuando se administra a un sujeto, es efectiva para: (1) aliviar, inhibir, prevenir y/o mitigar cuando menos parcialmente una condicion, o un trastorno, o una enfermedad asociada con la actividad del adreno-receptor beta-2; o (2) aumentar o promover la actividad de adreno-receptor beta-2.
En otra realizacion no limitante, el termino “una cantidad terapeuticamente efectiva” se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invencion que, cuando se administra a una celula, o a un tejido, o a un material biologico no celular, o a un medio, es efectiva para aumentar o promover cuando menos parcialmente la actividad de adreno-receptor beta-2. El significado del termino “una cantidad terapeuticamente efectiva”, como se ilustra en la realizacion anterior para el adreno-receptor beta-2, tambien se aplica mediante el mismo significado a cualesquiera otras protefnas/peptidos/enzimas relevantes, tales como mimeticos de IGF-1 o bloqueadores de ActRIIB/miostatina, y similares.
Como se utiliza en la presente, el termino “sujeto” se refiere a un animal. Tfpicamente, el animal es un mamffero. Un sujeto tambien se refiere, por ejemplo, a primates (por ejemplo, a seres humanos, masculinos o femeninos), reses, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves y similares. En ciertas realizaciones, el sujeto es un primate. En todavfa otras realizaciones, el sujeto es un ser humano.
Como se utiliza en la presente, el termino "inhibir", "inhibicion" o “inhibiendo”, se refiere a la reduccion o supresion de una condicion, sfntoma, o trastorno o enfermedad dados, o a una disminucion significativa en la actividad de la lfnea base de una actividad o proceso biologico.
Como se utiliza en la presente, el termino "tratar", "tratando" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno, se refiere, en una realizacion, a disminuir la enfermedad o el trastorno (es decir, hacer mas lento o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o cuando menos uno de los sfntomas clfnicos de la misma). En otra realizacion, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a aliviar o mitigar cuando menos un parametro ffsico, incluyendo aquellos que puedan no ser discernibles por el paciente. En todavfa otra realizacion, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a modular la enfermedad o el trastorno, ya sea ffsicamente (por ejemplo, la estabilizacion de un sfntoma discernible), fisiologicamente (por ejemplo, la estabilizacion de un parametro ffsico), o ambos. En todavfa otra realizacion, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a prevenir o demorar el establecimiento o desarrollo o progreso de la enfermedad o del trastorno.
Como se utiliza en la presente, un sujeto tiene "necesidad de" tratamiento si este sujeto se beneficiarfa
biologicamente, medicamente, o en su calidad de vida, a partir de dicho tratamiento.
Como se utilizan en la presente, los terminos "un,” "uno,” "el” y terminos similares utilizados en el contexto de la presente invencion (en especial en el contexto de las reivindicaciones) se deben interpretar para cubrir tanto el singular como el plural, a menos que se indique de otra manera en la presente o que sea claramente 5 contradicho por el contexto.
Todos los metodos descritos en la presente se pueden llevar a cabo en cualquier orden adecuado, a menos que sea indicado de otra manera en la presente, o que sea claramente contradicho de otra manera por el contexto. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o de lenguaje ejemplar (por ejemplo, “tal como”) proporcionado en la presente, pretende meramente ilustrar mejor la invencion, y no presenta una limitacion 10 sobre el alcance de la invencion reclamada de otra manera.
El compuesto de la formula (I) se puede preparar de acuerdo con el esquema proporcionado a continuacion.
Hal
Hal
imagen10
LA
Ra°'^^N
(Via)
Paso 1
imagen11
°^Rc
Paso 2
XrV°Rb
Ra°^^"N
(iVa)
Paso 3
LG
H°
Ra°
imagen12
°Rb
(iiia)
Paso 4
■N'CO"
Paso 5 h°
H°
imagen13
>=°
N
H
fT X °Rb
(i)
Paso 5
Ra°
(iia)
b
N
°
N
Esquema 1
Los pasos del proceso se describen con mas detalles a continuacion.
15 Paso 1: Un compuesto de la formula (Via), en donde Hal representa halogeno y Ra es un grupo protector, se hace reaccionar con un compuesto de la formula Rb°H en donde Rb es un grupo protector, en la presencia de una base adecuada, por ejemplo, trietil-amina, para dar un compuesto de la formula (Va), en donde Hal representa halogeno y Ra y Rb son grupos protectores.
Paso 2: Un compuesto de la formula (Va) se hace reaccionar con una base fuerte adecuada, por ejemplo, 20 terbutil-litio, en un solvente adecuado, por ejemplo, tetrahidrofurano (THF), en la presencia de un agente de carbonilacion adecuado, por ejemplo, una amida adecuada, para dar un compuesto de la formula (IVa), en donde Ra y Rb son grupos protectores, y Rc es hidrogeno o cualquier fraccion derivada a partir del agente de carbonilacion.
Paso 3: Un compuesto de la formula (IVa) se funcionaliza opcionalmente antes de la conversion
estereoselectiva para dar un compuesto de la formula (Ilia), en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente.
Paso 4: Un compuesto de la formula (Ilia), se trata con una base adecuada, por ejemplo, bicarbonato de sodio, para dar un compuesto de la formula (lla), en donde Ra y Rb son grupos protectores.
5 Paso 5: Un compuesto de la formula (lla) o (Ilia) se hace reaccionar con la 2-(4-butoxi-fenil)-1,1 -dimetil-etil- amina en un solvente adecuado, por ejemplo, tolueno, opcionalmente en la presencia de una base adecuada, por ejemplo, carbonato de potasio, seguido por la desproteccion en la presencia de un acido adecuado, por ejemplo, acido clorhfdrico, para dar un compuesto de la formula (l).
En un aspecto adicional, la invencion se refiere a un proceso para la preparacion de un compuesto de la 10 formula (l) en la forma de la sal de acetato, el cual comprende:
a) la reaccion de un compuesto de la formula (lla), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
O
l>
-S
RaO
imagen14
//
N
OR
b
(IIa)
en donde Ra y Rb son grupos protectores con la 2-(4-butoxi-fenil)-1,1-dimetil-etil-amina;
15 b) la escision de cualquiera los grupos protectores todavfa presentes;
c) la recuperacion del compuesto de la formula (l) que se pueda obtener de esta manera, en la forma de la sal de acetato.
En un aspecto adicional, la invencion se refiere a un proceso para la elaboracion de un compuesto de la formula (l) en la forma de la sal de acetato, el cual incluye los pasos de:
20 a) la reaccion de un compuesto de la formula (llla), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
LG
imagen15
ORb
(IIIa)
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente con la 2-(4-butoxi-fenil)-1,1-dimetil-etil- amina;
25 b) la escision de cualquiera los grupos protectores todavfa presentes;
c) la recuperacion del compuesto de la formula (l) que se pueda obtener de esta manera, en la forma de la sal de acetato.
En otro aspecto, la divulgacion se refiere a un proceso para la preparacion de un compuesto de la formula (llla), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
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10
15
20
25
LG
imagen16
S
/)
N
OR
b
el cual comprende la reduccion estereoselectiva de un compuesto de la formula (IVa-2), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
LG
imagen17
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente, para dar un compuesto de la formula (Ilia), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable.
En los procesos de la divulgacion o de la invencion, los grupos protectores tfpicos incluyen isopropilo, terbutilo, terbutil-dimetil-sililo.
En los procesos de la divulgacion o de la invencion, los grupos salientes tfpicos incluyen cloruro, p-toluen- sulfonilo, bromuro, metan-sulfonilo, bencen-sulfonilo, yoduro.
Las reacciones se pueden efectuar de acuerdo con los metodos convencionales, por ejemplo, como se describe en los Ejemplos. El procesamiento de las mezclas de reaccion y la purificacion de los compuestos que se pueden obtener de esta manera, se pueden llevar a cabo de acuerdo con los procedimientos conocidos. Las sales de adicion de acido se pueden producir a partir de las bases libres de una manera conocida, y viceversa. El compuesto de la formula (I) tambien se puede preparar mediante procesos convencionales adicionales, por ejemplo, como se describe en los Ejemplos, cuyos procesos son aspectos adicionales de la invencion.
Los materiales de partida utilizados son conocidos o se pueden preparar de acuerdo con los procedimientos convencionales, empezando a partir de los compuestos conocidos, por ejemplo, como se describe en los Ejemplos.
La invencion incluye ademas cualquier variante de los presentes procesos, en donde se utilice un producto intermediario que se pueda obtener en cualquier etapa del mismo como material de partida, y se llevan a cabo los pasos restantes, o en donde los materiales de partida se formen in situ bajo las condiciones de reaccion, o en donde los componentes de la reaccion se utilicen en la forma de sus sales como el material opticamente puro.
El compuesto de la invencion y los intermediarios tambien se pueden convertir unos en otros de acuerdo con los metodos conocidos generalmente por los expertos en este campo.
En un aspecto adicional, la divulgacion se refiere a un compuesto de la formula (lla), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
O
imagen18
S
//
N
OR
b
en donde Ra y Rb son grupos protectores,
Ra y Rb pueden ser independientemente seleccionados a partir del grupo que incluye terbutilo, isopropilo y terbutil-dimetil-sililo. En un aspecto, Ra es terbutilo. En un aspecto, Rb es isopropilo.
5 En un aspecto adicional, la divulgacion se refiere a un compuesto de la formula (IIIa-2), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
Cl
imagen19
S
/)
N
OR
b
en donde Ra y Rb son grupos protectores.
Ra y Rb pueden ser independientemente seleccionados a partir del grupo que incluye terbutilo, isopropilo y 10 terbutil-dimetil-sililo. En un aspecto, Ra es terbutilo. En un aspecto, Rb es isopropilo.
En un aspecto adicional, la divulgacion se refiere a un compuesto de la formula (IVa-2), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
imagen20
(IVa-2)
en donde Ra y Rb son grupos protectores, y LG es un grupo saliente.
15 LG puede ser cloro.
Ra y Rb pueden ser independientemente seleccionados a partir del grupo que incluye terbutilo, isopropilo y terbutil-dimetil-sililo. En un aspecto, Ra es terbutilo. En un aspecto, Rb es isopropilo.
En un aspecto adicional, la divulgacion se refiere a un compuesto de la formula (Ia), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable:
HN
imagen21
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S
N
a
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ORb
(Ia)
en donde Ra y Rb son grupos protectores.
Ra y Rb pueden ser independientemente seleccionados a partir del grupo que incluye terbutilo, isopropilo y 5 terbutil-dimetil-sililo. En un aspecto, Ra es terbutilo. En un aspecto, Rb es isopropilo.
En otro aspecto, la presente invencion proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende el compuesto de la presente invencion en la forma de la sal de acetato, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. En particular, la divulgacion se refiere a una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la formula (I) en forma libre, y uno o mas vehfculos 10 farmaceuticamente aceptables. En una realizacion, la divulgacion se refiere a una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la formula (I) en una forma de sal farmaceuticamente aceptable, y uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables. En otra realizacion, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la formula (I) en una forma de sal de acetato, y uno o mas vehfculos 15 farmaceuticamente aceptables. En todavfa otra realizacion, la divulgacion se refiere a una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la formula (I) en una forma de sal de glicolato, y uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables.
La composicion farmaceutica se puede formular para vfas de administracion particulares, tales como administracion oral, aplicacion transdermica, administracion parenteral, administracion rectal, administracion 20 subcutanea, etc. En adicion, las composiciones farmaceuticas de la presente invencion se pueden configurar en una forma solida (incluyendo, sin limitacion, capsulas, tabletas, pfldoras, granulos, polvos o supositorios), o en una forma lfquida (incluyendo, sin limitacion, soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmaceuticas se pueden someter a las operaciones farmaceuticas convencionales, tales como esterilizacion, y/o pueden contener diluyentes inertes, agentes lubricantes, o agentes reguladores convencionales, asf como 25 adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, y reguladores del pH, etc.
Tfpicamente, las composiciones farmaceuticas son tabletas o capsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con:
a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina;
30 b) lubricantes, por ejemplo, sflice, talco, acido estearico, su sal de magnesio o de calcio y/o polietilenglicol; para tabletas tambien,
c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidon, gelatina, tragacanto, metil- celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio y/o polivinil-pirrolidona; si se desea,
d) desintegrantes, por ejemplo, almidones, agar, acido algfnico o su sal sodica, o mezclas efervescentes; y/o
35 e) absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes.
Las tabletas pueden tener recubrimiento de pelfcula o recubrimiento enterico de acuerdo con los metodos conocidos en este campo.
Las composiciones adecuadas para su administracion oral incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invencion en la forma de tabletas, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o granulos 40 dispersables, emulsion, capsulas duras o blandas, o jarabes o elfxires. Las composiciones pretendidas para uso oral se preparan de acuerdo con cualquier metodo conocido en la tecnica para la elaboracion de composiciones farmaceuticas, y estas composiciones pueden contener uno o mas agentes seleccionados a partir del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, y agentes
conservadores, con el objeto de proporcionar preparaciones farmaceuticamente elegantes y de buen sabor. Las tabletas pueden contener al ingrediente activo mezclado con excipientes farmaceuticamente aceptables no toxicos que sean adecuados para la elaboracion de tabletas. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio, o fosfato de 5 sodio; agentes de granulacion o desintegrantes, por ejemplo almidon de mafz, o acido algfnico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidon, gelatina, o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, acido estearico, o talco. Las tabletas no se recubren, o bien se recubren mediante tecnicas conocidas para demorar la desintegracion y absorcion en el tracto gastrointestinal y de esta manera proporcionar una accion sostenida durante un perfodo mas largo. Por ejemplo, se puede emplear un material 10 de demora de tiempo tal como monestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral se pueden presentar como capsulas de gelatina dura en donde se mezcla el ingrediente activo con un diluyente solido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio, o caolfn, o como capsulas de gelatina blanda en donde se mezcla el ingrediente activo con agua o con un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafina lfquida, o aceite de oliva.
15 El compuesto de la invencion se puede administrar oralmente a especies pre-clfnicas como una forma de dosificacion lfquida con el farmaco en un vehfculo en solucion o en suspension. Los vehfculos en solucion pueden estar compuestos de un tensoactivo (por ejemplo, Cremophor o Solutol), un solvente (por ejemplo, propilenglicol), y un agente regulador (por ejemplo, regulador cftrico). Las formulaciones en suspension pueden contener un tensoactivo (por ejemplo, Tween 80), un agente polimerico (por ejemplo, metil-celulosa 20 (MC)), y un agente regulador (por ejemplo, fosfato).
Los ejemplos de las formulaciones en solucion adecuadas para los estudios pre-clfnicos se estipulan a continuacion:
Ingrediente (% en peso/peso)
Solucion 1 Solucion 2
Cremophor RH40
10 -
Solutol HS15
- 10
Regulador cftrico 50 mM, pH 3
90 90
Preparacion: Primero se disuelve la base libre o la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- 25 propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona) en el tensoactivo, y se mezclan hasta que se obtenga una solucion. En seguida, se agrega el regulador, y la solucion se mezcla para proporcionar una solucion transparente. Las formulaciones en solucion 1 y 2 son capaces de soportar una dosis de hasta 10 miligramos/mililitro. Ambas formulaciones son qufmicamente y ffsicamente estables despues de 1 semana a temperatura ambiente.
30 Los ejemplos de las formulaciones en suspension adecuadas para los estudios pre-clfnicos se estipulan a continuacion:
Ingrediente (% en peso/peso)
Suspension 1 Suspension 2
MC al 0.5% en regulador de fosfato 50 mM pH 6.8
100 99.5
5
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20
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Ingrediente (% en peso/peso)
Suspension 1 Suspension 2
Tween 80
- 0.5
Preparacion: La (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol- 2(3H)-ona) se dispersa en el tensoactivo, y se mezcla para homogeneizar la suspension. Entonces se agrega por goteo la solucion polimerica y se mezcla. Se obtiene una suspension homogenea con pequenas particulas. La suspension es qufmicamente y fisicamente estable despues de 1 semana a temperatura ambiente.
Ciertas composiciones inyectables son soluciones o suspensiones isotonicas acuosas, y los supositorios convenientemente se preparan a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Estas composiciones se pueden esterilizar y/o pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservadores, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de solucion, sales para regular la presion osmotica y/o reguladores del pH. En adicion, tambien pueden contener otras sustancias terapeuticamente valiosas. Estas composiciones se preparan de acuerdo con los metodos convencionales de mezcla, granulacion o recubrimiento, respectivamente, y contienen de aproximadamente el 0.1 al 75 %, o contienen de aproximadamente el 1 al 50 % del ingrediente activo.
Las composiciones adecuadas para su aplicacion subcutanea incluyen, por ejemplo, el compuesto de la invencion con el 2.5 % de poloxamero 407 en el 0.9 % de cloruro de sodio. Los ejemplos de los dispositivos adecuados para las composiciones inyectables incluyen bombas de infusion, tales como el sistema OmniPod de Insulet.
El compuesto de la invencion tambien se puede administrar mediante inyeccion subcutanea de multiples dosis, utilizando un auto-inyector o un inyector PEN. Las composiciones de formulacion adecuadas para dicha inyeccion subcutanea se estipulan a continuacion.
Componente
Formulacion 1 Formulacion 2
Compuesto A
1.00 mg 1.00 mg
Acido acetico
0.60 mg 0.60 mg
Manitol
50 mg 50 mg
Alcohol bencflico
8.00 mg 10.00 mg
Hidroxido de sodio 1N
ajustado a un pH de 5.0 ajustado a un pH de 5.0
Agua para inyecciones
agregar hasta 1.016 g agregar hasta 1.016 g
Se encontro que el alcohol bencflico (en comparacion con el fenol o con el m-cresol) es un conservador particularmente adecuado para una formulacion para inyeccion subcutanea.
Por consiguiente, en una realizacion de la divulgacion, se proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva del compuesto A, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo (por ejemplo, el compuesto A en una forma de sal de acetato), y alcohol bencflico.
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En una realizacion adicional de la divulgacion, se proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende una cantidad terapeuticamente efectiva del compuesto A, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo (por ejemplo, el compuesto A en una forma de sal de acetato), y entre el 0.1 y el 10; entre el 0.1 y el 5; entre el 0.5 y el 2; entre el 0.5 y el 1.5; o entre el 0.9 y el 1.1 % (peso/volumen) de alcohol bencflico.
Las composiciones adecuadas para aplicacion transdermica incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invencion con un vehfculo adecuado. Los vehfculos adecuados para suministro transdermico incluyen solventes farmacologicamente aceptables absorbibles para ayudar al paso a traves de la piel del huesped. Una combinacion de PG / OA (propilenglicol / alcohol oleflico) es un ejemplo de un solvente adecuado. Por ejemplo, los dispositivos transdermicos pueden estar en la forma de un parche, el cual comprenda un miembro de respaldo, un deposito que contenga al compuesto opcionalmente con vehfculos, opcionalmente una barrera de control de velocidad para suministrar el compuesto a la piel del huesped a una velocidad controlada y previamente determinada durante un perfodo de tiempo prolongado, y elementos para asegurar el dispositivo a la piel.
Las composiciones adecuadas para su aplicacion topica, por ejemplo a la piel y a los ojos, incluyen soluciones acuosas, suspensiones, unguentos, cremas, geles, o formulaciones rociables, por ejemplo para suministrarse en aerosol o similar. Estos sistemas de suministro topico seran apropiados en particular para aplicacion dermica. De esta manera, son particularmente adecuadas para utilizarse en formulaciones topicas, incluyendo cosmeticas, bien conocidas en este campo. Estas pueden contener solubilizantes, estabilizantes, agentes mejoradores de tonicidad, reguladores del pH, y conservadores.
Como se utiliza en la presente, una aplicacion topica tambien puede pertenecer a una inhalacion o a una aplicacion intranasal. De una manera conveniente, se pueden suministrar en la forman de un polvo seco (ya sea solo, como una mezcla, por ejemplo una mezcla seca con lactosa, o bien como una partfcula componente mezclada, por ejemplo con fosfolfpidos) a partir de un inhalador de polvo seco o de una presentacion de aspersion en aerosol a partir de un recipiente presurizado, bomba, aspersor, atomizador o nebulizador, con o sin el uso de un propelente adecuado.
La presente invencion proporciona ademas composiciones farmaceuticas y formas de dosificacion anhidras, las cuales comprenden los compuestos de la presente invencion como ingredientes activos, debido a que el agua puede facilitar la degradacion de ciertos compuestos.
Se pueden preparar composiciones farmaceuticas y formas de dosificacion anhidras de la invencion utilizando ingredientes anhidros o que contengan una baja humedad, y condiciones de baja humedad. Una composicion farmaceutica anhidra se puede preparar y almacenar de tal manera que se mantenga su naturaleza anhidra. De conformidad con lo anterior, las composiciones anhidras se empacan utilizando materiales que se sepa que previenen la exposicion al agua, de tal forma que se puedan incluir en kits de formulacion adecuados. Los ejemplos del empaque adecuado incluyen, pero no se limitan a, laminas hermeticamente selladas, plasticos, recipientes de dosis unitaria (por ejemplo, frascos), paquetes de burbuja, y paquetes de tiras.
La invencion proporciona ademas composiciones farmaceuticas y formas de dosificacion que comprenden uno o mas agentes que reducen la velocidad a la cual se descompondra el compuesto de la presente invencion como un ingrediente activo. Estos agentes, los cuales son referidos en la presente como "estabilizantes", incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes, tales como acido ascorbico, reguladores del pH, o reguladores de sales, etc.
El compuesto de la formula (I), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable, exhibe valiosas propiedades farmacologicas, por ejemplo, propiedades moduladoras del adreno-receptor beta-2, por ejemplo, como se indica en las pruebas in vitro e in vivo proporcionadas en las siguientes secciones y, por consiguiente, se indica para la terapia o para utilizarse como un producto qufmico de investigacion, por ejemplo, como un compuesto de herramienta.
El compuesto de la invencion puede ser util en el tratamiento de una indicacion seleccionada a partir de: distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
Por consiguiente, como una realizacion adicional, la presente invencion proporciona el compuesto de la formula (I), como se define en la presente, como un medicamento. En una realizacion, la presente invencion se refiere al compuesto de la formula (I) para utilizarse como un medicamento. En una realizacion adicional, la presente invencion se refiere al compuesto de la formula (I) para utilizarse en el tratamiento o en la prevencion de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
Por consiguiente, como una realizacion adicional, la presente invencion proporciona un compuesto de la formula (I) en terapia. En una realizacion adicional, la terapia se selecciona a partir de una enfermedad que se pueda tratar mediante la activacion del adreno-receptor beta-2. En otra realizacion, la enfermedad se selecciona a partir de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
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En otra realizacion, la invencion proporciona un compuesto para uso en un metodo para el tratamiento de una enfermedad que se trate mediante la activacion del adreno-receptor beta-2, el cual comprende la administracion de una cantidad terapeuticamente aceptable de un compuesto de la formula (I). En una realizacion adicional, la enfermedad se selecciona a partir de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
Un aspecto adicional de la divulgacion, por consiguiente, se refiere a un compuesto para uso en un metodo para el tratamiento o la prevencion de distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia, el cual comprende administrar una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la formula (I), en forma libre o en una forma de sal farmaceuticamente aceptable, a un sujeto que lo necesite.
Como una realizacion adicional, la presente invencion proporciona el uso de un compuesto de la formula (I) para la elaboracion de un medicamento. En una realizacion adicional, el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad o de un trastorno que se pueda tratar mediante la activacion del adreno-receptor beta-2. En otra realizacion, la enfermedad se selecciona a partir de la lista anteriormente mencionada, de una manera adecuada enfermedades de consuncion muscular, de una manera mas adecuada distrofia muscular, atrofia relacionada con desuso, caquexia o sarcopenia.
El compuesto de la presente invencion se puede administrar ya sea simultaneamente con, o antes o despues de, uno o mas agentes terapeuticos diferentes. El compuesto de la presente invencion se puede administrar por separado, por la misma o diferente via de administracion, o juntos en la misma composicion farmaceutica que los otros agentes.
En una realizacion, la invencion proporciona un producto que comprende un compuesto de la formula (I), y cuando menos otro agente terapeutico, como una preparacion combinada para su uso simultaneo, separado, o en secuencia, en terapia. En una realizacion, la terapia es el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2. Los productos proporcionados como una preparacion combinada incluyen una composicion que comprende el compuesto de la formula (I) y los otros agentes terapeuticos juntos en la misma composicion farmaceutica, o el compuesto de la formula (I) y los otros agentes terapeuticos en una forma separada, por ejemplo, en la forma de un kit.
En una realizacion, la invencion proporciona una composicion farmaceutica, la cual comprende un compuesto de la formula (I), y otros agentes terapeuticos. Opcionalmente, la composicion farmaceutica puede comprender un excipiente farmaceuticamente aceptable, como se describe anteriormente.
Un aspecto adicional de la invencion, por consiguiente, se refiere a una combinacion que comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de la formula (I), y uno o mas co-agentes terapeuticamente activos.
En una realizacion, la invencion proporciona un kit, el cual comprende dos o mas composiciones farmaceuticas separadas, cuando menos una de las cuales contiene un compuesto de la formula (I). En una realizacion, el kit comprende elementos para contener por separado estas composiciones, tales como un recipiente, un frasco dividido, o un paquete de lamina dividido. Un ejemplo de este kit es un paquete de burbujas, como se utiliza tfpicamente para el empaque de tabletas, capsulas y similares.
El kit de la invencion se puede utilizar para administrar formas de dosificacion diferentes, por ejemplo, oral y parenteral, para administrar las composiciones separadas en diferentes intervalos de dosificacion, o para titular las composiciones separadas una contra la otra. Para ayudar al cumplimiento, el kit de la invencion tfpicamente comprende instrucciones para la administracion.
En las terapias de combinacion de la invencion, el compuesto de la invencion y el otro agente terapeutico pueden ser elaborados y/o formulados por el mismo o por diferentes fabricantes. Mas aun, el compuesto de la invencion y el otro agente terapeutico, se pueden reunir en una terapia de combinacion: (i) antes de liberar el producto de combinacion a los medicos (por ejemplo, en el caso de un kit que comprenda el compuesto de la invencion y el otro agente terapeutico); (ii) por los medicos mismos (o bajo la gufa del medico) poco antes de la administracion; (iii) en los pacientes mismos, por ejemplo, durante la administracion en secuencia del compuesto de la invencion y el otro agente terapeutico.
De conformidad con lo anterior, la invencion proporciona un compuesto de la formula (I) para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2, en donde el medicamento se prepara para su administracion con otro agente terapeutico. La invencion tambien proporciona otro agente terapeutico para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2, en donde el medicamento se administra con un compuesto de la formula (I).
La invencion tambien proporciona un compuesto de la formula (I) para utilizarse en un metodo para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2, en donde el compuesto de la formula (I) se prepara para su administracion con otro agente terapeutico. La invencion tambien proporciona otro agente terapeutico para utilizarse en un metodo para el tratamiento de una
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enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2, en donde el otro agente terapeutico se prepara para su administracion con un compuesto de la formula (I). La invencion tambien proporciona un compuesto de la formula (I) para utilizarse en un metodo para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2, en donde el compuesto de la formula (I) se administra con otro agente terapeutico. La invencion tambien proporciona otro agente terapeutico para utilizarse en un metodo para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el agonismo del adreno-receptor beta-2, en donde el otro agente terapeutico se administra con un compuesto de la formula (I).
La invencion tambien proporciona un compuesto de la formula (I) para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el adreno-receptor beta-2, en donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de 24 horas) con otro agente terapeutico. La invencion tambien proporciona el uso de otro agente terapeutico para el tratamiento de una enfermedad o condicion modulada por el adreno-receptor beta- 2, en donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de 24 horas) con un compuesto de la formula (I).
En una realizacion, el otro agente terapeutico se selecciona a partir de testosterona, agonistas de androgenos, o SARM (moduladores selectivos de los receptores de androgenos); mimeticos de IGF-1; bloqueadores de miostatina y su receptor ActRIIA/B; bloqueadores de TGFbeta y activina (como agentes contra la atrofia); inhibidores de ligasa Muf1/MAFbx E3; inhibidores de desacetilasa de histona o cualesquiera agentes oncolfticos (por ejemplo, para caquexia por cancer); agentes anti-inflamatorios como los agentes anti- inflamatorios no esteroideos (NSAIDs), bloqueadores del factor de necrosis tumoral (TNF) o de IL-1b; moduladores metabolicos como agonistas de PPAR o mimeticos de IL-15; agentes cardiovasculares como los bloqueadores de b(1) (por ejemplo, nebivolol) o ARB (por ejemplo, para caquexia cardfaca); oligomeros anti- sentido para saltarse exones (por ejemplo, para distrofia); un potenciador del apetito, tal como grelina, progestina o antagonistas de MC-4; suplementos de nutrientes altos en protefna, y similares.
La composicion o una combinacion farmaceutica de la presente invencion puede estar en una dosificacion unitaria de aproximadamente 0.05 a 1,000 miligramos de ingrediente(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50 a 70 kilogramos, o de aproximadamente 0.05 a 500 miligramos, o de aproximadamente 0.05 a 250 miligramos, o de aproximadamente 0.05 a 150 miligramos, o de aproximadamente 0.05 a 100 miligramos, o de aproximadamente 0.05 a 50 miligramos, o de aproximadamente 0.05 a 10 miligramos de ingredientes activos. La dosificacion terapeuticamente efectiva de un compuesto, de la composicion farmaceutica, o de las combinaciones de los mismos, depende de la especie del sujeto, del peso corporal, de la edad y condicion individual, del trastorno o enfermedad que se este tratando, o de la gravedad de la misma. Un medico, clfnico, o veterinario de una experiencia ordinaria puede determinar facilmente la cantidad efectiva de cada uno de los ingredientes activos necesaria para prevenir, tratar, o inhibir el progreso del trastorno o de la enfermedad.
Las propiedades de dosificacion anteriormente citadas se pueden demostrar en pruebas in vitro e in vivo utilizando convenientemente mamfferos, por ejemplo, ratones, ratas, perros, monos u organos aislados, tejidos y preparaciones de los mismos. El compuesto de la presente invencion se puede aplicar in vitro en la forma de soluciones, por ejemplo, soluciones acuosas, e in vivo ya sea enteralmente, parenteralmente, de una manera conveniente intravenosamente, por ejemplo, como una suspension o en solucion acuosa. La dosificacion in vitro puede estar en el intervalo de concentraciones de entre aproximadamente 10-3 molar y 109 molar. Una cantidad terapeuticamente efectiva in vivo, dependiendo de la via de administracion, puede estar en el intervalo de entre aproximadamente 0.01 y 500 miligramos/kilogramo, o de entre aproximadamente 0.01 y 100 miligramos/kilogramo, o de entre aproximadamente 0.01 y 1 miligramo/kilogramo, o de entre aproximadamente 0.01 y 0.1 miligramo/kilogramo.
La actividad del compuesto de la presente invencion se puede evaluar mediante el siguiente metodo in vitro. Se describen metodos in vivo adicionales en los Ejemplos.
Prueba 1: Ensayo funcional celular in vitro utilizando celulas CHO y celulas de musculo esqueletico
cAMP: Las celulas de musculo esqueletico humanas (skMC) se obtuvieron en Cambrex (catalogo numero CC- 2561), y se cultivaron en un Medio Basal Esqueletico (SKBM) obtenido en Cambrex (catalogo numero #CC- 3161). Las respuestas de cAMP se midieron utilizando el kit de Ensayo-HTRF a granel dinamico 2 de cAMP obtenido en Cisbio o Cis Competitive Intelligence (catalogo numero 62AM4PEC). Las celulas skMC se cultivaron durante 1 dfa en un medio de cultivo celular SKBM complementado con suero fetal de becerro (FCS) al 20 % en placas de 384 pozos a 37°C, con CO2 al 5 %. Al dfa siguiente, las celulas se lavaron dos veces con 50 microlitros de suero regulado con fosfato (PBS), y se diferenciaron durante 3 dfas en SKBM sin suero en la presencia de SB431542 1 pM, un Inhibidor de ALK 4/5 obtenido en Sigma (catalogo numero S4317) a 37°C, con CO2 al 7.5 %. En el dfa 4, se removio el SKBM sin suero complementado con SB431542 1 pM, las celulas se lavaron dos veces con 50 microlitros de suero regulado con fosfato (PBS), y se diferenciaron adicionalmente durante 1 dfa en SKBM sin suero y sin SB431542 (50 microlitros por pozo) a 37°C, con CO2 al 7.5 %. se aislaron celulas skMC y cardiomiocitos de rata a partir de ratas neonatales de una
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forma convencional, y se trataron como se describe anteriormente. Las celulas de ovario de hamster chino (CHO) establemente transfectadas con adreno-receptores-13 humanos (131 o 132) se produjeron en Novartis Institutes for BioMedical Research, y se cultivaron como se describe anteriormente (J Pharmacol Exp Ther. mayo de 2006; 317(2): 762-70).
Los compuestos se hicieron en regulador de estimulacion a 2 x la concentracion requerida, y se prepararon diluciones en serie 1:10 en regulador de estimulacion, en una placa de 96 pozos (forma en U). El control de sulfoxido de dimetilo (DMSO) se normalizo al contenido de sulfoxido de dimetilo (DMSO) de la dilucion mas alta, por ejemplo, sulfoxido de dimetilo (DMSO) al 0.1 % (2 veces) para una concentracion de 10-5 M (2 veces) de la dilucion del primer compuesto. El ensayo se llevo a cabo en placas de 384 pozos, en un volumen de estimulacion de 20 microlitros, y un volumen final del ensayo de 40 microlitros por pozo. En el dfa del experimento, se removio el medio de cultivo a partir de las placas de cultivo celular de 384 pozos invirtiendo y poniendo mecha a la placa sobre una pila de papel de 2 a 3 veces. Primero se agregaron 10 microlitros del medio de cultivo fresco por pozo a la placa de 384 pozos. Despues de 10 minutos de incubacion a temperatura ambiente, se agregaron 10 microlitros por pozo de las diluciones de los compuestos de procesamiento a las celulas, y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Durante este tiempo, se prepararon las soluciones de procesamiento de los reactivos mediante la dilucion de las soluciones de suministro del criptato anti-cAMP y el cAMP-D2 a 1:20 en regulador de lisis, suministrados con el kit. Despues de 30 minutos de incubacion del compuesto, se agregaron en secuencia 10 microlitros de cAMP-D2 y 10 microlitros de criptato anti-cAMP a las placas de ensayo. Despues de un tiempo de incubacion de 1 hora a temperatura ambiente en la oscuridad, se llevo a cabo la medicion con el PheraStar (Longitud de onda de excitacion: 337 nanometros, Longitudes de onda de emision: 620 y 665 nanometros).
Ca2+: La lfnea celular CHO-K1 Alpha1A adrenergica humana se adquirio en Perkin Elmer (lfnea celular GPCR recombinante estable, catalogo numero ES-036-C, Lote numero M1W-C1, Boston, Massachusetts, EUA). Un dfa antes del experimento, las celulas Alfa1A congeladas (10 millones por mililitro, y por frasco) se descongelaron en un bano de agua a 37°C. La suspension celular se centrifugo durante 5 minutos a 1,000 revoluciones por minuto, y el aglomerado celular se volvio a suspender en el medio de cultivo celular. Las celulas se sembraron en placas negras de 384 pozos con fondo transparente a una densidad de 8,000 celulas por pozo en 50 microlitros del medio de cultivo celular. Las placas se incubaron durante aproximadamente 24 horas a 37°C, con CO2 al 5 %. El dfa del experimento, el medio se removio utilizando una lavadora de celulas (TECAN PW3). Despues del lavado final, habfan quedado 10 microlitros en los pozos. Se agregaron 40 microlitros de regulador de carga, y las celulas se cargaron durante 60 minutos a 37°C, con CO2 al 5 %. Las placas se lavaron con TECAN PW3 con los 20 microlitros de regulador de ensayo que quedaron, y se incubaron durante cuando menos 20 minutos a temperatura ambiente antes llevar a cabo el experimento FLIPR. Los compuestos se caracterizaron entonces en el modo de agonista y/o antagonista. Para la validacion del ensayo, se utilizo el mismo protocolo con las celulas frescas. En este caso, las celulas se desprendieron a partir de un matraz de 150 cm2 utilizando 3 mililitros de Tripsina-EDTA, se centrifugaron, y se volvieron a suspender en el medio de cultivo celular.
Las celulas se estimularon mediante la adicion de 5 microlitros de los compuestos (5 veces), utilizando la cabeza del FLIPR. Los compuestos que actuan como agonistas inducen un aumento transitorio del calcio intracelular. Esto se registro en el sistema FLIPR. Primero se registro una medicion de la lfnea base de la senal cada segundo durante 2 minutos antes de la inyeccion de los compuestos. Las mediciones de calcio se llevaron a cabo mediante la excitacion de las celulas con el dispositivo de laser de ion de argon a 488 nanometros a una potencia del dispositivo de laser de 0.6 W y registrando la senal de fluorescencia con una camara CCD (abertura de 0.4 segundos) durante 2 minutos. Los controles bajos se determinaron (celulas no estimuladas) con la adicion de 5 microlitros de regulador de ensayo. Los controles altos se determinaron con la adicion de 5 microlitros de un agonista conocido en una alta concentracion EC100 (A-61603 a 1 pM), y tambien se agrego un compuesto agonista de referencia a cada placa.
El compuesto de la invencion exhibe eficacia en el ensayo de prueba 1 con una EC50 de menos de 10 nM. La actividad especffica se muestra en el Ejemplo 10
En los Ejemplos 11 a 15 se describen otras actividades especfficas del compuesto de la invencion.
Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la invencion y no deben interpretarse como limitaciones sobre la misma. Las temperaturas se dan en grados Celsius. Si no se menciona de otra manera, todas las evaporaciones se llevan a cabo bajo presion reducida, tfpicamente entre aproximadamente 15 mmHg y 100 mmHg (= de 20 a 133 mbar). La estructura de los productos finales, de los intermediarios, y de los materiales de partida, se confirma mediante los metodos analfticos convencionales, por ejemplo, microanalisis y caracterfsticas espectroscopicas, por ejemplo, MS, IR, RMN. Las abreviaturas empleadas son aquellas convencionales en la materia.
Todos los materiales de partida, bloques de construccion, reactivos, acidos, bases, agentes deshidratantes, solventes, y catalizadores utilizados para sintetizar el compuesto de la presente invencion son cualesquiera de aquellos comercialmente disponibles, o se pueden producir mediante los metodos de sfntesis organica
5
10
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20
25
30
35
conocidos por un experto ordinario en este campo (Houben-Weyl 4a Edicion 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volumen 21). Ademas, el compuesto de la presente invencion se puede producir mediante los metodos de sfntesis organica conocidos por un experto ordinario en este campo, como se muestra en los siguientes ejemplos.
Ejemplos (solamente los ejemplos cubiertos por el alcance de las reivindicaciones forman parte de la invencion)
Lista de Abreviaturas:
1M uno molar
APCI ionizacion qufmica a presion atmosferica
aq acuoso
AR adreno-receptor
atm atmosfera
br amplio
cm centfmetros
d doblete
dd doble doblete
ddd doble doble doblete
(DHDQ)2PHAL 1,4-ftalazin-di-il-dieter de hidro-quinidina
DMAC dimetil-acetamida
DMSO sulfoxido de dimetilo
DSC calorimetrfa de exploracion diferencial
ee exceso enantiomerico
equiv equivalentes
ES aspersion de electrones
g gramos
h horas
HPLC cromatograffa de lfquidos de alto rendimiento
HRMS espectroscopfa de masas de alta resolucion
m multiplete
MC metil-celulosa
mbar milibar
MeOH metanol
min minutos
ml mililitros
MS espectroscopfa de masas MTBE metil-terbutil-eter nm nanometros
RMN resonancia magnetica nuclear
5
10
15
20
25
30
RT tiempo de retencion r.t. temperatura ambiente s singulete sat. saturado sept septeto t triplete
TFA acido trifluoro-acetico
pm micras
w/v peso/volumen
XRPD difraccion en polvo de rayos-X
A menos que se indique de otra manera, los espectros de HPLC/MS se registraron en un Agilent Serie 1100 LC / Cuadrupolo Agilent MS 6210. Se utilizo una columna Waters Symmetry C8 (3.5 micras; 2.1 x 50 milfmetros) (WAT200624). Se aplico el siguiente metodo de gradiente (% = % por volumen): A = agua + acido trifluoro-acetico (TFA) al 0.1 % / B = acetonitrilo + acido trifluoro-acetico (TFA) al 0.1 %; de 0.0 a 2.0 minutos con 90A:10B - 5A:95B; de 2.0 a 3.0 minutos con 5A:95B; de 3.0 a 3.3 minutos con 5A:95B - 90A:10B; flujo de
1.0 mililitro/minuto; temperatura de la columna de 50°C. Todos los compuestos se ionizaron en el modo ApCI.
Los espectros de 1H-RMN se registraron en una maquina Varian Mercury (400 MHz) o Bruker Advance (600 MHz).
La rotacion optica se midio en un Polarfmetro Perkin Elmer 341.
Condiciones de LCMS para los Ejemplos 2b, 2c, 2d, 2e, 2g:
Estacion de espectros de masas: LC/MS con Cuadrupolo Agilent 6130 con HPLC Agilent 1200; Columna: Agilent Zorbax SB-C18 (resolucion rapida), 2.1 x 30milfmetros, 3.5 micras; Fases moviles: B: acido formico al 0.1 % en agua; C: acido formico al 0.1 % en MeCN; de 1.0 minuto a 6.0 minutos, del 95 % de B al 5 % de B, y del 5 % de C al 95 % de C; de 6.0 minutos a 9.0 minutos, 5 % de B y 95 % de C; tiempo posterior: 2.0 minutos; velocidad de flujo: 0.8 mililitros / minuto; temperatura de la columna: 30°C; deteccion UV: 210 nanometros y 254 nanometros; MS exploracion positiva y negativa: 80-1000; Metodo de ionizacion: API-ES.
Condiciones de HRMS para el Ejemplo 2f:
Instrumento: Waters Acquity UPLC acoplado con Synapt Q-TOF MS; Columna: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 milfmetros, 1.7 micras; Fase movil: A: acido formico al 0.1 % en agua, B: acido formico al 0.1 % en acetonitrilo; Temperatura de la columna: a temperatura ambiente; deteccion UV: exploracion de 190 nanometros a 400 nanometros; Velocidad de flujo: 0.5 mililitros / minuto;
Condicion de gradiente:
Tiempo [min.]
Fase B [%]
0
5
1
5 Inicio de adquisicion
9
95
11
95 Final de adquisicion
11.10
5
Tiempo [min.]
Fase B [%]
14
5 Siguiente inyeccion
Metodo de ionizacion: ESI+; MS rango de exploracion: 100-1,000 m/z.
Intermediario A: 2-(4-butoxi-fenil)-1,1-dimetil-etil-amina
a) 4-(2-metil-2-nitro-propil)-fenol
Una mezcla de 4-(hidroxi-metil)-fenol (20 gramos), KOtBu (27.1 gramos), y DMAC (200 mililitros) se agito con 5 un agitador magnetico. Se agrego lentamente 2-nitro-propano (21.5 gramos), dentro de 20 minutos. La mezcla se calento a 140°C durante 5 horas antes de enfriarse hasta la temperatura ambiente. La mezcla se agrego lentamente para enfriar la solucion acuosa de HCl (3.0 %, 600 mililitros), entonces se extrajo con metil-terbutil- eter (MTBE) (300 mililitros, 1 vez, 200 mililitros, 1 vez). Las capas organicas se combinaron, se lavaron con agua (300 mililitros, 2 veces), y una solucion acuosa saturada de NaCl (50 mililitros, 1 vez), entonces se 10 secaron con Na2SO4 anhidro. La mezcla se filtro y se concentro al vacfo, para dar un solido amarillo claro (28.5 gramos), el cual se utilizo para el siguiente paso sin mayor purificacion.
[M-1]+ =194.2; RT = 5.3 minutos.
1H-RMN (400 MHz, CDCb) ppm 6.96 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.75 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.11 (s, 2H), 1.56 (s, 6H).
b) 1-butoxi-4-(2-metil-2-nitro-propil)-benceno
15 La mezcla de 4-(2-metil-2-nitro-propil)-fenol (20.4 gramos), 1-bromo-butano (28.7 gramos), DMAC (200 mililitros), K2CO3 (21.6 gramos), y yoduro de tetrabutil-amonio (38.7 gramos), se agito con un agitador magnetico, y se calento a 85°C durante 17 horas. La mezcla se enfrio hasta 0-10°C y se agrego agua (700 mililitros). La mezcla se extrajo con metil-terbutil-eter (MTBE) (300 mililitros, 1 vez, 200 mililitros, 1 vez). Las fases organicas combinadas se lavaron con agua (250 mililitros, 2 veces), y entonces se concentraron al 20 vacfo, para dar un aceite color rojo-cafe (27.8 gramos), el cual se utilizo en el siguiente paso sin mayor purificacion.
iH-RMN (400 MHz, CDCb) ppm 7.0 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.12 (s, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.56 (s, 6H), 1.48 (m, 2H), 0.97 (t, 3H).
c) 2-(4-butoxi-fenil)-1,1-dimetil-etil-amina
25 En un reactor de hidrogenacion (1 litro), se agrego una solucion de 1-butoxi-4-(2-metil-2-nitro-propil) benceno (27.8 gramos) en AcOH (270 mililitros), seguida por Nfquel de Raney humedo (7.0 gramos). La mezcla se purgo con H2 por 3 veces, entonces se calento hasta 60°C, y se mantuvo agitandose bajo 5.0 atmosferas durante 16 horas. La mezcla se filtro, y el filtrado total se concentro al vacfo. El residuo resultante se diluyo con agua (150 mililitros)/ heptano normal (80 mililitros), la capa acuosa se lavo con heptano normal (80 30 mililitros) nuevamente. La capa acuosa se ajusto con NaOH (aproximadamente 20 %), a un pH de aproximadamente 11, entonces se extrajo con metil-terbutil-eter (MTBE) (100 mililitros, 1 vez), y EtOAc (150 mililitros, 2 veces). La capa del medio se desecho. Todas las capas superiores se combinaron y se lavaron con NaHCO3 saturado (100 mililitros), y NaCl saturado (100 mililitros) antes de secarse con Na2SO4 anhidro. Despues de la filtracion, la mezcla se concentro. El residuo resultante se agito, y se agrego una solucion de 35 HCl en alcohol isopropflico (2M, 40 mililitros). La pasta acuosa se calento a 60°C, y se agrego heptano normal (120 mililitros). La mezcla se enfrio hasta 20°C, entonces se filtro, la torta se lavo con algo de heptano normal. El solido blanco se seco en aire durante 2 dfas para dar 10 gramos de la sal pura de HCl del producto. Rendimiento: 35.2 %.
[MH]+ =222.2; RT = 5.0 minutos.
40 iH-RMN (400 MHz, d-DMSO) ppm 8.13 (s, 3H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.80 (s, 2H), 1.67 (m, 2H), 1.42 (m, 2H), 1.18 (s, 6H), 0.92 (t, 3H).
Ejemplo 1: (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-
2(3H)-ona
F
imagen24
O' ^''NH
tiofosgeno
K2CO3
agua/CHCl3
(VII)
F
imagen25
O ^^N
-x
(VI)
_EtsN_
iPrOH
imagen26
S |
kX
O ^ N O H
(V)
tBuUJDMF
THF
Xs XX ^o
~x
(IV-1)
Ph3PMeBr , nBuLi THF
imagen27
S
N )~
(IV'-1)
t-BuOH/H2O
OH
K2CO3, K3Fe(CN)6 (DHQD)2PHAL, OsO4
HO
O
"7^
imagen28
S
1 X M
^N V
(IV"-1)
cloruro de toluen-sulfonilo
piridina
O. .O
imagen29
(III-1)
imagen30
HCOQH
imagen31
(I)
F
a) 1-terbutoxi-3-fluoro-5-isotiocianato-benceno
Se agregan por goteo tiofosgeno (33.6 gramos) en CHCl3 (250 mililitros), y K2CO3 (64.7 gramos) en H2O (450 mililitros), por separado y de una manera simultanea, a una solucion de 3-terbutoxi-5-fluoro-fenil-amina (42.9 5 gramos) en CHCl3 (350 mililitros) a 0°C. La mezcla de reaccion se calienta a temperatura ambiente durante la noche. Los materiales organicos se separan y se lavan con agua (3 veces), salmuera (1 vez), se secan sobre MgSO4, se filtran, y el solvente se remueve al vacfo. Se obtiene el compuesto del tftulo mediante cromatograffa en columna por evaporacion instantanea (sflice, eluyente de dicloro-metano (DCM) / iso- hexano, 1:3).
10 1H RMN (CDCl3, 400 MHz); 6.70 (m, 3H), 1.40 (s, 9H).
b) O-isopropil-ester del acido (3-terbutoxi-5-fluoro-fenil)-tiocarbamico
El 1-terbutoxi-3-fluoro-5-isotiocianato-benceno (24.0 gramos) y trietil-amina (10.9 gramos) se disuelven en isopropanol (150 mili-litros). La mezcla de reaccion se pone a reflujo durante 18 horas, y el solvente se remueve al vacfo. El producto crudo se disuelve en hexano : dietil-eter (19:1). El dietil-eter se remueve al 15 vacfo, y la solucion se enfrfa a 0°C durante 3 horas. La solucion se filtra, para dar el compuesto del tftulo.
iH RMN (CDCl3, 400 MHz); 8.10 (br s, 1H), 6.65 (br s, 2H), 6.45 (ddd, 1H) 5.60 (septeto, 1H), 1.35 (d, 6H), 1.30 (s, 9H).
c) 5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzotiazol-7-carbaldeh[do
El O-isopropil-ester del acido (3-terbutoxi-5-fluoro-fenil)-tiocarbamico (2.2 gramos) se disuelve en tetrahidrofurano (THF) seco (20 mililitros). La mezcla de reaccion se enfria a -78°C, y se agrega terbutil-litio (15.2 mililitros, de 1.5 M solucion) durante 20 minutos. La mezcla de reaccion entonces se calienta a -10°C 5 durante 75 minutos. La mezcla de reaccion entonces se vuelve a enfriar hasta -78°C, se agrega N,N-dimetil- formamida (1.5 gramos), y la mezcla de reaccion se calienta lentamente a temperatura ambiente, y entonces se agita a -10°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se apaga con HCl (acuoso) (5 mililitros, de una solucion 2 M), los materiales organicos se separan entre acetato de etilo/agua, y se remueven al vacfo. Se obtiene el compuesto del tftulo mediante cromatograffa en columna por evaporacion instantanea (sflice, 10 eluyente: acetato de etilo/isohexano, 1:9). MS (ES+) m/e 294 (MH+).
d) 5-terbutoxi-2-isopropoxi-7-vinil-benzotiazol
El Ph3PMe.Br (5.0 gramos) se disuelve en tetrahidrofurano (THF) seco (100 mililitros), bajo argon. Se agrega n-butil-litio (8.8 mililitros, de una solucion 1.6 M) a temperatura ambiente durante 10 minutos, y la mezcla de reaccion se agita durante 30 minutos adicionales. Se agrega por goteo una solucion de 5-terbutoxi-2- 15 isopropoxi-benzotiazol-7-carbaldehfdo (1.25 gramos) en dicloro-metano (DCM) (40 mililitros) a la mezcla de reaccion, y la mezcla de reaccion se agita durante 4.5 horas a temperatura ambiente. El solvente se remueve al vacfo, se vuelve a disolver en acetato de etilo, se lava con agua (3 veces), salmuera (1 vez), se seca sobre MgSO4, se filtra, y el solvente se remueve al vacfo. Se obtiene el compuesto del tftulo mediante cromatograffa en columna por evaporacion instantanea (sflice, eluyente de acetato de etilo / isohexano, 1:9). MS (ES+) m/e 20 292 (MH+).
e) (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzotiazol-7-il)-etano-1.2-diol
Se disuelven K3Fe(CN)6 (1.2 gramos), K2CO3 (0.5 gramos), (DHQD)2PHAl (19 miligramos) en terbutanol/agua (15 mililitros, mezcla de 1:1), bajo argon, y se agitan durante 15 minutos. La mezcla de reaccion se enfria a 0°C, y se agrega OSO4 (3.1 miligramos), seguido por 5-terbutoxi-2-isopropoxi-7-vinil-benzotiazol (0.35 25 gramos). La mezcla de reaccion se agita durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se apaga con meta-bisulfato de sodio (1 gramo), y se agita durante 1.5 horas. Se agrega acetato de etilo, los materiales organicos se separan, se lavan con agua (2 veces), salmuera (1 vez), se secan sobre MgSO4, se filtran, y el solvente se remueve al vacfo. Se obtiene el compuesto del tftulo mediante cromatograffa en columna por evaporacion instantanea (sflice, eluyente de acetato de etilo/isohexano, 2:5).
30 MS (ES+) m/e 326 (MH+).
f) 4-metil-bencen-sulfonato de (R)-2-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-hidroxi-etilo
En un matraz de fondo redondo, de 3 cuellos, de 500 mililitros, purgado y mantenido con una atmosfera inerte de nitrogeno, se coloco una solucion de (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-etano-1,2-diol (20 gramos, 59.05 milimoles) en piridina (240 mililitros), y tamices moleculares de 4 Angstroms (5 gramos). Esto 35 fue seguido por la adicion por goteo de una solucion de cloruro de acido toluen-sulfonico (cloruro de tosilo) (15.3 gramos, 79.73 mili-moles) en piridina (60 mililitros) con agitacion a 0°C. La solucion resultante se agito durante 4 horas a temperatura ambiente. La reaccion entonces se apago mediante la adicion de 1,000 mililitros de cloruro de hidrogeno 1M. La solucion resultante se extrajo con 2 x 300 mililitros de acetato de etilo, y las capas organicas se combinaron. La fase organica se lavo con 1 x 500 mililitros de cloruro de 40 hidrogeno 1M, 1 x 500 mililitros de bicarbonato de sodio al 10 % y 300 mililitros de salmuera. La mezcla se seco sobre sulfato de sodio anhidro, y se concentro al vacfo. El residuo se aplico sobre una columna de gel de sflice con acetato de etilo/eter de petroleo (1:10). Esto dio como resultado 26 gramos (87 %) del 4-metil- bencen-sulfonato de (R)-2-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-hidroxi-etilo como un aceite amarillo.
45 LC/MS Rt = 2.47 minutos; (m/z): 480 [M+H]+.
1H-RMN: (400 MHz, DMSO-de): 5 (ppm) 7.57 (d, 2H); 7.36 (d, 2H); 7.17 (d, 1H); 6.79 (d, 1H); 6.32 (d, 1H); 5.37-5.26 (m, 1H); 4.97-4.90 (m, 1H); 4.12-4.00 (m, 2H); 2.40 (s, 3H); 1.45-1.38 (m, 6H); 1.32 (s, 9H).
g) (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-etanol
En un matraz de fondo redondo, de 4 cuellos, de 1,000 mililitros, se coloco una solucion del 4-metil-bencen- 50 sulfonato de (R)-2-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-hidroxi-etilo (26 gramos, 51.55 milimoles,
1.00 equivalentes) en tolueno (320 mili-litros), y 2-(4-butoxi-fenil)-1,1-dimetil-etil-amina (intermediario A) (22 gramos, 99.47 milimoles, 1.93 equivalentes). La solucion se agito durante 24 horas a 90°C en un bano de aceite. La mezcla resultante se concentro al vacfo. El residuo es aplico sobre una columna de gel de sflice con acetato de etilo/eter de petroleo (1:8). Esto dio como resultado 16 gramos (58 %) del (R)-1-(5-terbutoxi-2- 55 isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-etanol como un aceite amarillo claro.
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LC/MS: Rt = 2.24 minutos (m/z): 529 [M+H]+.
1H-RMN: (600 MHz, DMSO-de): 5 (ppm) 7.12 (s, 1H); 6.83 (d, 2H); 6.77 (s, 1H); 6.63 (d, 2H); 5.80 (br. s, 1H); 5.38-5.30 (m, 1H); 4.70-4.66 (m, 1H); 3.90 (t, 2H); 2.81-2.61 (m, 2H); 2.50 a 2.39 (m, 2H); 1.71-1.62 (m, 2H); 1.47-1.41 (m, 2H); 1.41 (d, 6H); 1.22 (s, 9H); 0.91 (q, 3H); 0.88 (s, 3H); 0.83 (s, 3H).
h) (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
Una solucion del (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il- amino)-etanol (3.5 gramos) en acido formico (40 mililitros), se agito durante 68 horas a temperatura ambiente. Se agregaron 50 mililitros de agua, y la mezcla resultante se evaporo a sequedad (evaporador giratorio, 15 mbar, 40°C), para dar 3.8 gramos del producto crudo. Este material se dividio entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 mililitros), y acetato de etilo (50 mililitros), con el objeto de remover el acido formico. La capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo (30 mililitros cada una). Los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, y se concentraron, para dar 3 gramos de la base libre cruda. Este material se paso por cromatograffa por evaporacion instantanea (gel de sflice; gradiente del 0 al 60 % de metanol en dicloro-metano (DCM)). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron a sequedad, para dar 1.74 gramos de un semi-solido amorfo.
Este material se sometio a cromatograffa de preparacion quiral [columna: Chiralpak IC (20 micras) 7.65 x 37.5 centfmetros; eluyente: heptano normal/dicloro-metano (DCM)/etanol/dietil-amina, 50:30:20 (+0.05 dietil- amina); velocidad de flujo = 70 mililitros / minuto; concentracion: 2.5 gramos / 50 mililitros de eluyente; deteccion: UV, 220 nanometros], para dar el enantiomero puro (100 % de exceso enantiomerico (ee)).
Este material se disolvio en 45 mililitros de acetonitrilo a 60°C. La solucion se dejo enfriar a temperatura ambiente durante 18 horas, despues de lo cual, se presento la precipitacion. La mezcla se diluyo con 5 mililitros de acetonitrilo frfo (4°C), y se filtro a traves de un embudo Buchner. La torta del filtro se lavo dos veces con acetonitrilo frfo. Entonces el solido humedo se recolecto y se seco al vacfo (0.2 mbar), a temperatura ambiente durante la noche, para dar 1.42 gramos de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan- 2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona como un polvo incoloro.
LC/MS: Rt = 1.81 minutos (m/z): 431 [M+H]+.
1H-RMN: (600 MHz, DMSO-de): 5 (ppm) 11.5 (br. s, 1H); 9.57 (br. s, 1H); 6.99 (d, 2H); 6.76 (d, 2H); 6.52 (s, 1H); 6.47 (s, 1H); 5.63 (br. s, 1H); 4.53-4.48 (m, 1H); 3.90 (t, 2H); 2.74-2.63 (m, 2H); 2.54-2.45 (m, 2H); 1.711.62 (m, 2H); 1.49-1.40 (m, 2H); 0.93 (q, 3H); 0.89 (s, 6H).
Rotacion optica: [a]o22 = -43o (c = 1.0 gramo/100 mililitros de MeOH).
Ejemplo 2: Ruta alternativa para la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5- hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
F
tiocarbonil-
diimidazol
O ^
"A
(VII)
nh2
F
O
"7^
N
(VI)
S
iPrOH
F
imagen32
(V)
2-cloro-N-metoxi-
N-metil-acetamida
f-BuLi
Cl
l*O
O
“A
V°
N A
(IV-2)
RuCl (p-cimeno) [(S,S)-Ts-DPEN]
HCOOH
Cl
imagen33
O
NaOH A^S
^ .Wv
-h r
2-(4-Butoxi-fenil)-1,1-
dimetil-etilamina
hnA'
HO
imagen34
imagen35
S /
N
(II-2)
(I')
HCl
hnA‘
HO
imagen36
HO
Vo
N
H
(I)
a) 1-terbutoxi-3-fluoro-5-isotiocianato-benceno
El 1,1'-tiocarbonil-di-imidazol (423 gramos, 2.37 moles) se disolvio en dicloro-metano (DCM) (3200 mililitros). 5 La mezcla se agito bajo una atmosfera de N2 mientras se agregaba lentamente una solucion de 3-terbutoxi-5- fluoro-anilina (435 gramos, 2.37 moles) en dicloro-metano (DCM) (800 mililitros) dentro de 2 horas. Entonces la mezcla se mantuvo agitando a 20°C durante 16 horas. La mezcla se diluyo con agua (3000 mililitros). La fase de dicloro-metano (DCM) separada se lavo nuevamente con agua (3,000 mililitros) antes de secarse con Na2SO4 anhidro durante 2 horas. La mezcla se filtro, y el filtrado se concentro al vacfo para remover el 10 solvente, para dar el 1-terbutoxi-3-fluoro-5-isotiocianato-benceno (499 gramos).
1H-RMN (400 MHz, CDCb): 6.63-6.68 (m, 3 H), 1.37 (s, 9H).
b) O-isopropil-ester del acido (3-terbutoxi-5-fluoro-fenil)-tiocarbamico
A una solucion del 1-terbutoxi-3-fluoro-5-isotiocianato-benceno (460 gramos, 2.04 moles) en alcohol isopropflico anhidro (3250 mililitros), se le agrego trietil-amina (315 gramos, 3.06 moles). La mezcla se calento 15 a reflujo bajo una atmosfera de N2 durante 16 horas, y la temperatura se enfrio hasta 40-50°C. Despues de la concentracion, el residuo oscuro resultante se diluyo con heptano normal (1,000 mililitros), y se calento a 60°C. La mezcla se enfrio lentamente a 25°C, al mismo tiempo que se agregaba la siembra. Se observo una pasta acuosa y se agito a 25°C durante 16 horas antes de enfriarse lentamente hasta 0-10°C dentro de 2
horas. Despues de la filtracion y del lavado con heptano normal (200 mililitros), el solido recolectado se seco en un horno al vacfo a 40-45°C durante 18 horas, para dar el O-isopropil-ester del acido (3-terbutoxi-5-fluoro- fenil)-tiocarbamico (453.1 gramos).
LCMS: [M+H]+ = 286.1; RT = 7.2 minutos.
5 1H-RMN (400 MHz, CDCb): 8.18 (s, 1H), 6.81 (m, 2H), 6.51 (dt, J = 10.2 Hz, 1H), 5.66 (hepteto, J = 6.3 Hz, 1H), 1.42 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.37 (s, 9H).
c) 1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzotiazol-7-il)-2-cloro-etanona
Bajo una atmosfera de nitrogeno, se agrego por goteo una solucion de terbutil-litio (481 mililitros, 737.6 milimoles, 1.6 M) a una solucion del O-isopropil-ester del acido (3-terbutoxi-5-fluoro-fenil)-tiocarbamico (200 10 gramos, 700.83 milimoles) en 2-Me-THF (1,600 mililitros), a una temperatura por debajo de -65°C. La temperatura de la reaccion se calento a -35°C, y se agrego lentamente una segunda porcion de terbutil-litio (388 mililitros, 737.6 milimoles, 1.9 M), mientras que se mantema la temperatura por debajo de -35°C. La mezcla de reaccion se agito luego a esta temperatura durante 3 horas, y se enfrio hasta -70°C. Se agrego una solucion de W-metil-W-metoxi-cloro-acetamida (96.4 gramos, 700.83 milimoles) en 2-MeTHF (300 mililitros) a 15 la mezcla de reaccion, mientras que se mantema la temperatura por debajo de -70°C. La mezcla se calento entonces a -30°C, y se agito durante 45 minutos. La mezcla de reaccion fria se apago mediante la adicion por goteo de HCl al 30 % en isopropanol (240 gramos), seguida por la adicion de 1,500 mililitros de agua. La capa organica se lavo en secuencia con 1,000 mililitros de agua, 1,500 mililitros de NaHCO3 acuoso saturado, y 1,500 mililitros de salmuera. Despues de la concentracion, el residuo color cafe claro resultante se agrego a 20 isopropanol (135 mili-litros). La mezcla se calento a 50°C, y se enfrio lentamente hasta 25°C. Se agrego por goteo heptano normal (135 mililitros) a la solucion, y la mezcla se agito durante la noche. La pasta acuosa se filtro, y la torta del filtro se lavo con heptano normal (40 mililitros), seguido por otra porcion de heptano normal (20 mililitros). La torta se seco al vacfo, para proporcionar la 1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzotiazol-7-il)-2- cloro-etanona como un polvo grisaceo (42.8 gramos, 17.9 % de rendimiento).
25 iH RMN (400 MHz, CDCb): 7.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.40 (hepteto, J = 6.3 Hz, 1H), 4.77 (s, 2H), 1.47 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 1.40 (s, 9H).
LCMS: [M+H]+ = 342.1, RT = 7.29 minutos.
d) (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzotiazol-7-il)-2-cloro-etanol
Una suspension de la 1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-cloro-etanona (70 gramos, 204.8 30 milimoles), y RuCl(p-cimeno)[(S,S)-Ts-DPEN] (1.954 gramos, 3.07 milimoles) en metanol (MeOH)/N,N-dimetil- formamida (DMF) (1,330 mililitros/70 mililitros) se desgasifico y se relleno con N2 tres veces. Se agrego lentamente una mezcla preformada desgasificada de acido formico (28.3 gramos) en Et3N (124.3 gramos), mientras que se mantema la temperatura interna entre 15°C y 20°C. La suspension amarilla resultante se calento hasta 30°C. Despues de 2 horas, la mezcla de reaccion se enfrio hasta 25°C, entonces se agrego 35 agua (750 mililitros) a la mezcla de reaccion, seguida por la adicion de acido acetico (56 mililitros) en una porcion. La mezcla se concentro, y entonces se diluyo con el terbutil-metil-eter (TBME) (1,000 mililitros). La fase acuosa se separo y se extrajo con el terbutil-metil-eter (TBME) (1,000 mililitros). La fase organica combinada se lavo en secuencia con agua y salmuera, y entonces se seco con Na2SO4 y se concentro al vacfo, para dar el (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzotiazol-7-il)-2-cloro-etanol (72 gramos).
40 LCMS (metodo A): [M+H]+ = 343.1, RT = 5.67 minutos.
iH RMN (400 MHz, CDCb): 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.37 (hepteto, J = 6.3 Hz, 1H), 4.96 (m, 1H), 3.74 (m, 2H), 3.01 (s, 1H), 1.46 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.36 (s, 9H).
e) (R)-5-terbutoxi-2-isopropoxi-7-oxiranil-benzotiazol
A una solucion del (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-cloro-etanol (140 gramos, 407.1 45 milimoles) en terbutil-metil-eter (TBME) (420 mililitros), se le agrego por goteo una solucion acuosa de NaOH (2M, 420 mililitros), seguida por yoduro de tetrabutil-amonio (7.52 gramos, 20.36 milimoles) agregado en una porcion. Despues de 4 horas a 26°C, se agregaron 400 mililitros de terbutil-metil-eter (TBME), y la capa organica se separo. La capa acuosa se extrajo con el terbutil-metil-eter (TBME) (400 mililitros). Las capas organicas combinadas se lavaron con agua (400 mililitros), y salmuera (400 mililitros), para dar el (R)-5- 50 terbutoxi-2-isopropoxi-7-oxiranil-benzotiazol (122 gramos).
LCMS: [M+H]+ = 308.0, RT = 6.80 minutos.
iH RMN (400 MHz, CDCb) ppm 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.38 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 3.15 (dd, J =4.3, 5.5 Hz, 1H), 2.94 (dd, J =4.3, 5.5 Hz, 1H), 1.45 (d, J = Hz, 6H), 1.37 (s, 9H).
f) (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-etanol
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
El (R)-5-terbutoxi-2-isopropoxi-7-oxiranil-benzotiazol (145 gramos, 471.7 milimoles), y la 2-(4-butoxi-fenil)-1,1- dimetil-etil-amina (114.8 gramos, 518.9 milimoles) se disolvieron en sulfoxido de dimetilo (DMSO) (850 mililitros). La mezcla de reaccion se calento a 80°C, y se agito durante 27 horas. La mezcla entonces se enfrio hasta 25°C y, se agrego a una mezcla agitada de agua (1,500 mililitros), y terbutil-metil-eter (TBME) (1,500 mililitros). La capa acuosa se separo y se extrajo con el terbutil-metil-eter (TBME) (1,000 mililitros). Las capas organicas combinadas se lavaron en secuencia con agua (1,500 mililitros), y salmuera (1,000 mililitros), y se secaron con Na2SO4 anhidro. Despues de la concentracion, el residuo se purifico mediante cromatograffa en columna (eluyendo con EtOAc al 10 % en heptano normal hasta EtOAc al 33 % en heptano normal). Se obtuvo el producto solido de (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-etanol (140 gramos) como un solido grisaceo.
HRMS: [M+1] 529.2996.
1H RMN (400 MHz, CDCb): 7.26 (m, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.99 (m, 1H), 6.78-6.80 (m, 3H), 5.39 (m, 1H), 4.65 (dd, J = 3.8, 8.8Hz, 1H), 3.83 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.96 (dd, J = 3.8, 12 Hz, 1H), 2.74 (dd, J = 8.8, 12 Hz, 1H), 2.60 (dd, J = 13.6, 17.6 Hz, 2H), 1.72-1.79 (m, 2H), 1.50 (m, 2H), 1.46 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 1.45 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.06 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
g) (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
Al (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-etanol
(7.5 gramos) en iso-propanol (30 mililitros), y agua (25 mililitros), se le agrego una solucion acuosa de HCl 1M (43 mililitros). La mezcla de reaccion entonces se calento a 60°C, y se agito durante 2.5 horas. La mezcla se enfrio hasta 50°C, y entonces se agrego lentamente una solucion acuosa de NaOH 2M (18 mililitros), para ajustar el pH entre 8.2 y 8.4. La mezcla de reaccion entonces se enfrio hasta 30°C, seguido por extraccion con el terbutil-metil-eter (TBME) (la primera vez con 40 mililitros, la segunda vez con 25 mililitros). Las dos capas organicas se combinaron y se lavaron con agua (38 mililitros por dos veces) antes de secarse con Na2SO4 anhidro. Despues de la filtracion, el filtrado se concentro, y entonces se disolvio en MeCN (145 mili-litros). La solucion se trato con carbon activado (0.6 gramos), y se calento a 60°C. Despues de una segunda filtracion, la torta se lavo con MeCN (10 mililitros por dos veces), y el filtrado se cristalizo a 60°C para obtener la (R)-7-(2- (1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona (3.8 gramos). Exceso enantiomerico (e.e.) = 97.6 %.
LCMS (metodo A): [M+H]+ =431.2.
iH RMN (400 MHz, DMSO- da): 9.5 (br. s, 1H), 6.81 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.57 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.33 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.43 (br. s, 1H), 3.69 (t, J = 6.4Hz, 2H), 2.58-2.59 (m, 2H), 2.24-2.31 (m, 2H), 1.41-1.48 (m, 2H), 1.15-1.25 (m, 2H), 0.78 (s, 6H), 0.70 (t, J = 7.4Hz, 3H).
Ejemplo 3: Sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi- benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
500 miligramos (1.161 milimoles) de la base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona se suspendieron en 10.0 mililitros de acetonitrilo y 0.25 mililitros de agua, en un matraz de cuatro cuellos de 50 mililitros, y se agitaron con aspas a temperatura ambiente. La suspension se calento a una temperatura interna de 50°C (temperatura de la camisa de 75°C), y se agregaron 72 miligramos de acido acetico (1.161 milimoles) (se formo una solucion amarilla transparente). La solucion se enfrio durante 30 minutos a temperatura ambiente, y se agregaron 0.15 mililitros de agua.
La solucion entonces se sembro con acetato de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, y se agito durante la noche (16 horas), a temperatura ambiente. La suspension entonces se filtro a temperatura ambiente a traves de un filtro de vidrio, y se lavo tres veces con 1 mililitro de acetonitrilo. Se secaron 510 miligramos de la torta del filtro humeda en un horno de secado durante la noche (16 horas) a temperatura ambiente a sequedad. Rendimiento: 508 miligramos de un polvo blanco (89.1 %)
Preparacion de la siembra de acetato de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5- hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
57.0 miligramos (0.132 milimoles) de la base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona y 8.03 miligramos (0.132 milimoles) de acido acetico se disolvieron en 1.0 mililitro de acetonitrilo y 0.05 mililitros de agua. La solucion se agito a temperatura ambiente con un agitador magnetico. La precipitacion tuvo lugar durante la noche. La solucion entonces se filtro a temperatura ambiente a traves de un filtro de vidrio, y se lavo tres veces con 0.5 mililitros de acetonitrilo. La torta del filtro humeda se seco en un horno de secado durante la noche (16 horas) a temperatura ambiente a sequedad. Rendimiento: 57 miligramos de un polvo blanco
Ejemplo 3a: Procedimiento alternativo para la formacion de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
El (R)-1-(5-terbutoxi-2-isopropoxi-benzo-[d]-tiazol-7-il)-2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-etanol (1 equivalente) se suspendio en isopropanol. De 50°C a 60°C, se agrego una solucion acuosa de acido clorhidrico 1M (3 equivalentes), dentro de aproximadamente 30 a 60 minutos. Despues de completarse la reaccion (aproximadamente 2.5 horas a 60°C), la solucion se enfrio hasta 20°C, y se agrego gradualmente hidroxido de sodio 2M (3 equivalentes) a esta temperatura. Despues de la adicion completa, la base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona emulsionada se extrajo en acetato de etilo, y la capa organica se lavo con agua. La capa organica se trato con carbon activado, y se filtro utilizando celulosa microcristalina como un auxiliar de filtro. La torta del filtro se lavo con acetato de etilo. El filtrado, que contenfa la base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il- amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona, se concentro cuidadosamente hasta obtener un volumen residual definido mediante destilacion a una temperatura de la camisa de 55°C bajo presion reducida. Entonces se agrego acetato de isopropilo, y se removio parcialmente mediante destilacion hasta obtener un volumen residual definido a una temperatura de la camisa de 55°C bajo presion reducida. Se agregaron acetato de isopropilo y la solucion del acido acetico en acetato de isopropilo adicionales al residuo caliente de la destilacion a 50-55°C. Durante la adicion del acido acetico, el lote se sembro con la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol- 2(3H)-ona para iniciar temprano la cristalizacion controlada de la sal de acetato a 50-55°C. Despues de enfriarse gradualmente hasta 0°C, la suspension del producto se filtro y se lavo dos veces con acetato de isopropilo frfo. La torta del filtro se seco de 50°C a 90°C bajo presion reducida hasta tener un peso constante, para dar la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi- benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina en un rendimiento tfpico de aproximadamente el 80 %.
Ejemplo 4: Sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi- benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
Se suspendieron 500 miligramos (1.161 milimoles) de la base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona en 10.0 mililitros de acetonitrilo y 0.25 mililitros de agua, en un matraz de cuatro cuellos de 50 mililitros, y se agitaron con aspas a temperatura ambiente. La suspension se calento a una temperatura interna de 60°C (temperatura de la camisa de 85°C), y se agregaron 90 miligramos de acido 2-hidroxi-acetico (1.161 milimoles) a la solucion. Entonces se agregaron 0.25 mililitros de agua a una temperatura interna de 60°C. La solucion se sembro con el glicolato de (R)-7-(2- (1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona a una temperatura interna de 30°C, y se agito durante la noche (16 h) a temperatura ambiente. Se agregaron otros 10 mililitros de acetonitrilo, y se agitaron durante el fin de semana a temperatura ambiente. La suspension se filtro a temperatura ambiente a traves de un filtro de vidrio, y se lavo una vez con 1.0 mililitro de acetonitrilo/agua, 9:1 en volumen/volumen, y dos veces con 1.0 mililitro de acetonitrilo. Se secaron 320 miligramos de la torta del filtro humeda en un horno de secado durante la noche (16 horas) a temperatura ambiente a sequedad.
Preparacion de la siembra de glicolato de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)- 5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona
Se disolvieron 63.0 miligramos (0.146 milimoles) de la base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan- 2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona y 11.24 miligramos (0.146 milimoles) de acido glicolico en 1.0 mililitro de acetonitrilo y 0.05 mililitros de agua. La solucion se agito a temperatura ambiente con un agitador magnetico. La precipitacion tuvo lugar durante la noche. La suspension se filtro a temperatura ambiente a traves de un filtro de vidrio, y se lavo tres veces con 0.5 mililitros de acetonitrilo. La torta del filtro humeda se seco en un horno de secado durante la noche (16 horas) a temperatura ambiente a sequedad. Rendimiento: 52 miligramos de un polvo blanco
Ejemplos 5, 6 y 7: Analisis de XRPD y DSC de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina y sus formas de sales de acetato y glicolato
El analisis de difraccion en polvo de rayos-X (XRPD) de la base libre la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil- propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina y sus formas de sales de acetato y glicolato se llevo a cabo bajo las siguientes condiciones experimentales:
Metodo de XRPD
Instrumento
Bruker D8 Advance (reflexion)
Metodo de XRPD
Irradiacion
CuKa (40 kV, 30 mA)
Paso
0.017 grd
Tipo de exploracion
Exploracion continua
Tiempo de exploracion
107.1 segundos
Rango de exploracion
2°-40° (valor 2-Theta)
El analisis de calorimetrfa de exploracion diferencial (DSC) se llevo a cabo bajo las siguientes condiciones experimentales:
Metodo de DSC
Instrumento
Perkin Elmer Diamond
Intervalo de temperatura
30°C - 300°C
Masa de muestra
2 a 3 miligramos
Bandeja de muestra
Aluminio cerrada
Flujo de nitrogeno
20-50 K / minuto
5 Ejemplo 5: Analisis de XRPD de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5- hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina
La base libre de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol- 2(3H)-ona se recristalizo como se describe a continuacion, antes del analisis de difraccion en polvo de rayos- X (XRPD).
10 Se suspendieron 4.0 gramos (2.232 milimoles) de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1- hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona en 24.0 mililitros de acetato de etilo en un matraz de cuatro cuellos de 100 mililitros, y se agitaron con aspas a temperatura ambiente. La suspension se disolvio a una temperatura interna de 70°C (temperatura de la camisa de 90°C), para proporcionar una solucion amarilla transparente. La solucion se enfrio durante 30 minutos a temperatura ambiente, y se sembro con la base libre 15 de (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona a una temperatura interna de 35°C (en donde la cristalizacion tuvo lugar muy lentamente), y se agito durante la noche (16 horas) a temperatura ambiente. La solucion entonces se filtro a temperatura ambiente a traves de un filtro de vidrio (filtracion rapida, duracion: <1 minutos), y se lavo 3 veces con 2.0 mililitros de acetato de
etilo (licor madre color amarillo transparente). Se secaron 5.82 gramos de la torta del filtro humeda en un horno de secado durante la noche (16 horas) a temperatura ambiente y durante 16 horas a 40°C. Rendimiento: 3.63 gramos de un polvo blanco (90.75 %).
La (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona 5 cristalina se analizo mediante difraccion en polvo de rayos-X (XRPD), y los picos caracterfsticos se muestran en la siguiente tabla (vease tambien la Figura 5). De estos, los picos a 8.5, 13.3, 13.9, 14.4, 15.2, 17.2, 17.5, 18.1, 21.3 y 22.5° 2-theta son los mas caracterfsticos.
Angulo (2-Theta °)
Intensidad Angulo (2-Theta °) Intensidad
8.5
media 21.7 alta
11.4
media 22.5 alta
12.7
media 23.3 alta
13.3
media 23.6 media
13.9
media 24.4 media
14.4
media 25.6 media
15.2
media 26.1 alta
17.2
alta 26.6 alta
17.5
alta 27.9 media
18.1
alta 28.5 media
21.3
media 28.9 media
La base libre de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- 10 tiazol-2(3H)-ona cristalina se analizo mediante calorimetria de exploracion diferencial (DSC), y se encontro que tiene un establecimiento de punto de fusion a aproximadamente 115°C.
Ejemplo 6: Analisis de XRPD de la sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)- 1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina
La sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- 15 tiazol-2(3H)-ona cristalina se analizo mediante difraccion en polvo de rayos-X (XRPD), y los picos caracterfsticos se muestran en la siguiente tabla (vease tambien la Figura 6). De estos, los picos en 8.8, 11.5, 16.4, 17.6, 18.2, 19.6, 20.1, 20.8, y 21.1° 2-Theta son los mas caracterfsticos.
Angulo (2-Theta °)
Intensidad Angulo (2-Theta °) Intensidad
8.8
alta 19.1 baja
10.0
baja 19.6 media
11.5
alta 20.1 alta
14.2
baja 20.8 alta
14.6
baja 21.1 media
15.7
baja 23.3 media
16.4
alta 26.2 baja
17.6
media 26.6 media
18.2
alta 27.1 media
La sal de acetato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]- tiazol-2(3H)-ona cristalina se analizo mediante calorimetria de exploracion diferencial (DSC), y se encontro que tiene una amplia endotermia alrededor de 170°C.
5 Ejemplo 7: Analisis de XRPD de la sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)- 1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo-[d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina
La sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo- [d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina se analizo mediante difraccion en polvo de rayos-X (XRPD), y los picos caracterfsticos se muestran en la siguiente tabla (vease tambien la Figura 7). De estos, los picos en 8.7, 11.6, 10 16.1, 18.0, 19.8, 20.7, y 21.1° 2-theta son los mas caracterfsticos.
Angulo (2-Theta °)
Intensidad Angulo (2-Theta °) Intensidad
8.7
alta 22.6 baja
11.6
media 23.1 media
16.1
alta 23.3 media
17.4
media 23.7 baja
5
10
15
20
25
30
Angulo (2-Theta °)
Intensidad Angulo (2-Theta °) Intensidad
18.0
alta 26.2 alta
19.2
media 26.8 media
19.8
alta 27.9 baja
20.7
alta 28.3 baja
21.1
alta
La sal de glicolato de la (R)-7-(2-(1-(4-butoxi-fenil)-2-metil-propan-2-il-amino)-1-hidroxi-etil)-5-hidroxi-benzo- [d]-tiazol-2(3H)-ona cristalina se analizo mediante calorimetrfa de exploracion diferencial (DSC), y se encontro que tiene un establecimiento de punto de fusion a aproximadamente 188°C.
Ejemplo 8: Metodo para la preparacion de una formulacion farmaceutica adecuada para la administracion subcutanea del compuesto A en una forma de sal de acetato
Para una solucion de 1.00 litro de producto de farmaco, se colocan aproximadamente 900 gramos de agua para inyecciones en un recipiente limpio adecuado para la elaboracion farmaceutica. Se agregan 50 gramos de manitol, 0.60 gramos de acido acetico, y 10 gramos de alcohol bencflico, y se disuelven en el agua para inyecciones. Entonces se agrega 1.00 gramo del compuesto A, y se disuelve. El pH se ajusta hasta el valor objetivo, por ejemplo, 5.0, con una solucion de hidroxido de sodio 1N. Entonces se agrega agua para inyecciones a la solucion del producto objetivo, peso de 1.016 kilogramos. La solucion del producto de farmaco se filtra para esterilizarse a traves de una membrana de PVDF de 0.22 micras en frascos lavados y despirogenizados, se cierran con tapones de caucho esteriles, y se traban. Los frascos se esterilizan terminalmente mediante su paso por autoclave.
Ejemplo 8a: Metodo alternativo para la preparacion de una formulacion farmaceutica adecuada para la administracion subcutanea del compuesto A en una forma de sal de acetato
Para una solucion de 1.00 litro de producto de farmaco, se colocan aproximadamente 900 gramos de agua para inyecciones en un recipiente limpio adecuado para la elaboracion farmaceutica. Se agregan 50 gramos de manitol y 10 gramos de alcohol bencflico, y se disuelven en el agua para inyecciones. Entonces se agregan 1.14 gramos de la sal de acetato del compuesto A, y se disuelven. El pH se ajusta al valor objetivo, por ejemplo, 5.0, con una solucion de acido acetico. Entonces se agrega agua para inyecciones a la solucion del producto objetivo, peso de 1.016 kilogramos. La solucion del producto de farmaco se filtra para esterilizarse a traves de una membrana de PVDF de 0.22 micras en frascos lavados y despirogenizados, se cierran con tapones de caucho esteriles, y se traban. Los frascos se esterilizan terminalmente mediante su paso por autoclave.
Ejemplo 9: Solubilidades comparativas de las formas de base libre, de sal de acetato, y de sal de glicolato del compuesto A
Se analizaron las solubilidades relativas de la forma de base libre de las formas de sal de acetato y glicolato del compuesto A, y los resultados se muestran en la siguiente Tabla. Las soluciones se titularon con la adicion de HCl o NaOH para el ajuste del pH. Las solubilidades acuosas mejoradas de las formas de sal de acetato y glicolato en relacion con la forma de base libre del compuesto A hacen que las sales de acetato y glicolato del compuesto sean mas adecuadas para inyeccion subcutanea o infusion.
Solubilidad de la base libre del
Solubilidad de sal de acetato Solubilidad de sal de glicolato
Compuesto A en H2O
del Compuesto A en H2O del Compuesto A en H2O
pH
Conc. en mg/mL pH Conc. en mg/mL pH Conc. en mg/mL
6.2
0.27 5.9 1.33 5.1 13.1
7.0
0.05 6.0 1.11 5.3 6.39
7.3
<0.01 6.1 1.10 5.4 4.47
7.8
<0.01 6.2 0.55
Ejemplo 10: Perfiles celulares in vitro del compuesto de la invencion (Compuesto A), su enantiomero (Compuesto B), su racemato (Compuesto A/B), y formoterol
El compuesto de la invencion (Compuesto A) muestra los siguientes valores EC50 en la Prueba 1 como se 5 describe anteriormente en la presente.
Compuestos
Celulas CHO# EC50 (Emax%) Celulas primarias; respuesta cAMP, EC50 ( Emax%)
132 AR
31 AR a1A AR skMC de Humano skMC de Rata Cardiomiocitos de Rata
Formoterol
0.7 nM (99%**) 85 nM (86%**) 190 nM 0.2 nM 0.9 nM 2.9 nM
Compuesto A (R)
5.6 nM (88%**) 560 nM (32%**) > 10 pM 0.7 nM (96%*) 3.4 nM (98%*) 5.7 nM (71%**)
Compuesto B (S)
950 nM (83%**) > 10 pM > 30 pM 280 nM (100%*) n.d. n.d.
Compuesto A/B
11 nM (87%**) 684 nM (38%**) n.d. 0.63 nM (100%*) n.d. n.d.
Sal de acetato del Compuesto
2.5 nM n.d. n.d. 1.7 nM n.d. n.d.
5
10
15
20
25
30
Compuestos
Celulas CHO# EC50 (Emax%) Celulas primarias; respuesta cAMP, EC50 (Emax%)
32 AR
31 AR a1A AR skMC de Humano skMC de Rata Cardiomiocitos de Rata
A (R)
(91%**) (93%**)
skMC: miotubos esqueleticos diferenciados; *: comparandose con formoterol;
**: comparandose con isoprenalina;
#: cAMP para 31 y 132, Ca2+ para a1A; n.d.: no determinado.
El compuesto de la invencion (Compuesto A) es un agonista de 32 AR potente y selectivo con una eficacia intrfnseca muy baja sobre 31 AR y ninguna actividad sobre a1A AR. Su enantiomero, el Compuesto B, es muy debil sobre 32 AR con una EC50 de 950 nM.
Ejemplo 11: Efectos del Formoterol y el Compuesto A sobre el peso del musculo esqueletico y del corazon in vivo
Las ratas Wistar Han IGS machos (International Genetic Standard) (Crl:WI(Han)) con un peso de 350 a 400 gramos, se adquirieron en Charles River Laboratories. Las ratas se aclimataron a la instalacion durante 7 dfas. Los animales se alojaron en grupos de 3 animales a 25°C con un ciclo de luz-oscuridad de 12:12 horas. Se alimentaron con una dieta de laboratorio estandar conteniendo el 18.2 % de protefna y el 3.0 % de grasa con un contenido de energfa de 15.8 MJ/kilogramo (NAFAG 3890, Kliba, Basilea, Suiza). Se proporcionaron alimento y agua ad libitum. El Formoterol o el Compuesto A se disolvio en el vehfculo indicado mas adelante, para alcanzar un intervalo de dosis de 0.003 a 0.03 miligramos/kilogramo/dfa para el Formoterol, y de 0.01 a 0.1 miligramos/kilogramo/dfa para el Compuesto A, con el modelo "ML4 de Alzet, durante 28 dfas. Las bombas se llenaron con la solucion, y se mantuvieron durante varias horas a 37°C en suero regulado con fosfato hasta la implantacion quirurgica. Las ratas se trataron subcutaneamente con Temgesic en una dosis de 0.02 miligramos/ kilogramo con un volumen de 1 mililitro/kilogramo cuando menos 30 minutos antes de la cirugfa, y entonces las bombas llenadas con la solucion indicada anteriormente se implantaron subcutaneamente en el lomo de las ratas bajo anestesia con isoflurano en una concentracion del 3 %. El Temgesic se administro subcutaneamente a las ratas 24 horas y 48 horas despues de la cirugfa. Los pesos corporales se midieron dos veces por semana. Los clips se removieron 10 dfas despues de la cirugfa bajo anestesia. Cuatro semanas despues del tratamiento, las ratas se eutanizaron con CO2, y se disectaron y se pesaron los musculos tibial anterior, gastrocnemio y soleo, el corazon y el cerebro. El peso del cerebro se utilizo para la normalizacion de los pesos de los organos. Los resultados se expresan como el promedio +/- SEM. El analisis estadfstico se llevo a cabo utilizando la prueba de comparacion multiple de Dunnett en seguida del analisis de variacion de una via, para comparar los grupos de tratamiento con el grupo de control con vehfculo. Las diferencias se consideraron como significativas cuando el valor de probabilidad fue < 0.05: *: Los analisis estadfsticos se llevaron a cabo mediante el GraphPad Prism version 5.0 (GraphPad Software, Inc., la Jolla, CA). El peso del musculo se normalizo al peso corporal en el dfa 0 (el peso corporal inicial), y el peso del corazon se normalizo mediante el peso del cerebro.
Estudio 1: Formoterol
Grupo
Tratamiento Dosis (mg/kg) Via Regimen
1
Vehfculo* 0 s.c. Minibomba Alzet 2ML4 durante 4 semanas
2
Formoterol 0.003
3
Formoterol 0.01
5
10
15
20
25
30
Grupo
Tratamiento Dosis (mg/kg) Vfa Regimen
4
Formoterol 0.03
* Vehfculo: 20%, 1:2 de Cremophor:Etanol en solucion salina (NaCl al 0.9 %).
Estudio 2: Compuesto A
Grupo
Tratamiento Dosis (mg/kg) Vfa Regimen
1
Vehfculo* 0
2
Compuesto A 0.01 Minibomba Alzet 2ML4 durante 4 semanas
3
Compuesto A 0.03 s.c.
4
Compuesto A 0.1
* Vehfculo: 20 % 1:2 Cremophor:Etanol en solucion salina (NaCl al 0.9 %).
La Figura 1 muestra que el formoterol induce tanto hipertrofia del musculo esqueletico como un incremento de la masa cardfaca hasta el mismo grado, mientras que el compuesto A induce hipertrofia del musculo esqueletico con un impacto mmimo sobre la masa cardfaca, indicando que el compuesto A exhibe un efecto selectivo en el musculo esqueletico sobre el musculo cardfaco. El compuesto A induce significativamente hipertrofia del musculo esqueletico por el 11 % a 0.01 miligramos/kilogramo/dfa con una concentracion en plasma de estado continuo de aproximadamente 0.2 nM, mientras que no hubo hallazgos en la histopatologfa del corazon incluso a 0.1 miligramos/kilogramo/dfa con una concentracion de estado continuo de aproximadamente 2 nM.
Ejemplo 12: Efectos del Formoterol y del Compuesto A sobre la funcion de los organos aislados (contraccion de auricula izquierda, frecuencia de latido del nodulo sino-auricular, y automaticidad del corazon entero)
Metodo
Contraccion de auricula izquierda: El ensayo de contraccion de la auricula izquierda se llevo a cabo en Ricerca Biosciences, LLC (catalogo numero 407,500 Adrenergic beta1), utilizando la auricula izquierda del Cobayo Dunkin Hartley con un peso corporal de 600 +/-80 gramos (Arch. Int. Pharmacodyn. 1971: 191: 133141.).
Frecuencia de latido del nodulo sino-auricular: Los conejos Nueva Zelanda hembras blancos se sacrificaron mediante exsanguinacion despues de una anestesia profunda utilizando una mezcla de quetamina/xilazina, intravenosamente (i.v.). Se removio rapidamente el corazon y se coloco en una solucion de Tyrode. Esta solucion se gasifico continuamente con O2 al 95 %, CO2 al 5 %, y previamente se calento hasta aproximadamente 36°C ± 0.5°C. La auricula derecha se separo del resto del corazon. Las preparaciones se montaron en un bano de tejido y se mantuvieron a 37°C ± 0.5°C durante cuando menos un hora para la estabilizacion. Los potenciales de accion (AP) se registraron intracelularmente con un microelectrodo de vidrio estandar llenado con KCl 3M, conectado a un amplificador neutralizante de impedancia de entrada alta (amplificador de microelectrodo VF-180, Bio-Logic). Los potenciales de accion (AP) se exhibieron en un osciloscopio digital (osciloscopio HM-407, HAMEG), y se analizaron por medio de un sistema de adquisicion de datos de alta resolucion (software Notocord hem 4.2, Notocord SA, Croissy, Francia). Despues de una hora de estabilizacion, los compuestos se agregaron a la solucion de Tyrode en concentraciones crecientes,
5
10
15
20
25
30
35
manteniendose cada concentracion durante 30 minutos. No hubo deslavado entre dos concentraciones. Las mediciones electrofisiologicas se hicieron mediante el analisis de los potenciales de accion durante el protocolo experimental al final del perfodo de perfusion de 30 minutos. La frecuencia espontanea del nodulo sino-auricular (SA) se evaluo contando el numero de latidos cada 10 segundos con el fin de expresar los resultados en numero de latidos por minuto (bpm). Los datos se expresaron como el promedio ± SEM.
Automaticidad: Se investigo la automaticidad en los corazones de conejos perfundidos Langendorff aislados, conducida por Hondeghem Pharmaceuticals Consulting N.V., B-8400 Oostende, Belgica. Las pruebas se ejecutaron en corazones de conejos albinos hembras con un peso de aproximadamente 2.5 kilogramos, y que tenfan una edad de aproximadamente 3 meses. Los efectos de los compuestos se midieron en un modelo completamente automatizado utilizando el corazon de conejo aislado perfundido de acuerdo con la tecnica de Langendorff. El corazon que late espontaneamente se perfunde retrogradualmente con concentraciones crecientes del artfculo de prueba. Se coloca cuidadosamente un electrodo en la auricula izquierda con el objeto de registrar la duracion del ciclo de la automaticidad del nodulo del seno.
Las Figuras 2a y 2b muestran los resultados obtenidos cuando se comparo el formoterol con el compuesto de la invencion (Compuesto A).
El compuesto A no muestra efectos sobre la contraccion de la auricula izquierda con hasta 10 pM, y muestra efectos menos directos sobre la actividad del marcapasos, comparandose con el formoterol.
Formoterol Compuesto A
Contraccion de auricula izquierda EC50 (n=2)
17 nM > 10 pM
Frecuencia de latido del nodulo sino-auricular, incremento maximo (n=6)
+45% +6.2%
Automaticidad, incremento maximo (n=3)
+46% +17%
Los valores en las Figuras 2a y 2b se expresan como el promedio ± SEM; Nodulo sino-auricular (n = 6), corazon aislado (n = 3).
Ejemplo 13: Efectos del Formoterol y del Compuesto A sobre la frecuencia cardiaca in vivo
Las ratas Wistar Han (W-H) IGS (International Genetic Standard) (Crl:WI(Han)) se adquirieron en Charles River Laboratories. Se implantaron cronicamente cateteres venosos y arteriales femorales, y se exteriorizaron a traves de un sistema de cabeza giratoria cautiva de resorte, y se alojaron en caulas especializadas. El cateter arterial se conecto a un transductor de presion para medir continuamente la presion del pulso, la presion arterial media, y la frecuencia cardiaca, que se derivo a partir de la serial de la presion sanguinea, por medio de un sistema de adquisicion de datos digitales. Los compuestos se administraron por medio de un cateter subcutaneo (s.c.) implantado a traves de la piel. Los valores se expresan como el promedio ± SEM (n = 3).
El compuesto A muestra menos incrementos en la frecuencia cardiaca comparandose con el formoterol cuando se administra con un bolo subcutaneo (s.c.) de hasta 0.3 miligramos/kilogramo, como se muestra en las Figuras 3a, 3b y 3c.
Ejemplo 14: Efectos del Formoterol y del Compuesto A sobre la frecuencia cardiaca in vivo
Los monos Rhesus, 24 hembras con un peso corporal de alrededor de 4 a 8 kilogramos, se seleccionaron aleatoriamente en 4 grupos de n = 6. Los animales se restringieron en una silla hasta 4 horas despues de una sola administracion subcutanea de los compuestos, y entonces se regresaron a sus corrales. Las frecuencias cardiacas se midieron utilizando un dispositivo Surgivet V3304. Los valores se expresan como el promedio ± SEM (n = 6).
El compuesto A muestra un menor incremento de la frecuencia cardiaca comparandose con el formoterol cuando se administra como un bolo subcutaneo (s.c.) de hasta 0.03 miligramos/kilogramo, como se muestra en las Figuras 4a y 4b.
5
10
15
20
25
Ejemplo 15: Efecto del Compuesto A, su enantiomero (Compuesto B), y su racemato (Compuesto A/B) sobre el receptor de Serotonina 5-HT2C
Se utilizan membranas celulares de CHO de hr5-HT2C recombinantes humanas (Biosignal Packard, EUA), y 3H-Mesulergina (NEN Life Science Products, EUA, 1 nM) para medir la afinidad de enlace de los compuestos con el receptor 5-HT2C humano. El enlace no especffico se evalua en la presencia de Mesulergina 1 pM. Se incuban cincuenta microlitros de cada uno de la membrana, el ligando, y el compuesto, en un volumen total de 250 microlitros, en placas de 96 pozos durante 60 minutos a 22°C, en un regulador que contiene Tris 50 mM, acido ascorbico al 0.1 %, Pargilina 10 pM, pH de 7.7. Las placas se filtran, se lavan 3 veces en Tris 50 mM helado, se secan, y se miden en el Topcount.
Las celulas CHO-K1 que co-expresaban la apoecuorina mitocondrial, el 5-HT2Cne de serotonina recombinante, y la protefna-G promiscua Ga16, cultivadas hasta la fase mid-log en el medio de cultivo sin antibioticos, se desprendieron con PBS-EDTA, se centrifugaron, y se volvieron a suspender en el regulador de ensayo (DMEM/F12 de HAM con HEPES, sin rojo de fenol + albumina de suero bovino (BSA) al 0.1 % sin proteasa), en una concentracion de 1 x 106 celulas/mililitro. Las celulas se incubaron a temperatura ambiente durante cuando menos 4 horas con coelenterazina h. El agonista de referencia fue el a-metil-5-HT. Para la prueba del agonista, se mezclaron 50 microlitros de la suspension celular con 50 microlitros del agonista de prueba o de referencia en una placa de 96 pozos. La emision de luz resultante se registra utilizando un luminometro del sistema de rastreo de farmacos funcional Hamamatsu Functional Drug Screening System 6,000 (FDSS 6000). La actividad agonista del compuesto de prueba se expreso como un porcentaje de la actividad del agonista de referencia en su concentracion EC100.
5-HT2C de Serotonina
Enlace CHO EC50 (Emax%)
5-HT
n.d. 0.24 nM
Compuesto A (R)
11 pM 280 nM (83%)
Compuesto B (S)
0.8 pM 19.7 nM (99%)
Compuesto A/B
1.7 pM 25 nM (113%)
El Compuesto A es 50 veces menos activo sobre 5-HT2C cuando se compara con la actividad del agonista 132 AR (5.6 nM), mientras que su enantiomero, el Compuesto B, es muy debil sobre 32 AR con una EC50 de 950 nM pero mucho mas potente sobre 5-HT2C con una EC50 de 19.7 nM, mostrando una selectividad inversa sobre el objetivo.
El Compuesto A tambien es mas de 10 veces menos activo sobre 5-HT2C cuando se compara con el racemato o el enantiomero (S), sugiriendo que es conveniente el perfil de efectos secundarios de este compuesto.

Claims (8)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Una forma cristalina de sal de acetato de (R)-7-(2-(1-(4-butoxifenil)-2-metilpropan-2-ilamino)-1-hidroxietil)-5- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.
  2. 2. Una forma cristalina de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizada por un patron de difraccion de rayos 5 X en polvo que comprende tres picos que tienen valores de angulo de refraccion 2 theta (0) seleccionados de
  3. 8.8 ± 0.2°, 16.4 ± 0.2°, 20.8 ± 0.2° cuando se mide utilizando la radiacion CuKa.
  4. 3. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 y uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables.
  5. 4. Una combinacion que comprende una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con 10 cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 y uno o mas coagentes terapeuticamente activos.
  6. 5. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 para su uso como un medicamento.
  7. 6. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 para uso en el tratamiento o prevencion de enfermedades que debilitan los musculos.
  8. 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 6, en donde la enfermedad que debilita los musculos se 15 selecciona de distrofia muscular, atrofia relacionada con el desuso, caquexia o sarcopenia.
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