ES2641068T3

ES2641068T3 - Composición tópica que comprende una toxina botulínica y un colorante

Info

Publication number: ES2641068T3
Application number: ES11855190.2T
Authority: ES
Inventors: Jacob Waugh; Curtis Ruegg
Original assignee: Revance Therapeuticals Inc
Current assignee: Revance Therapeuticals Inc
Priority date: 2011-01-07
Filing date: 2011-12-22
Publication date: 2017-11-07
Anticipated expiration: 2031-12-22
Also published as: EP2661276A4; JP6605420B2; JP6444032B2; CY1119427T1; JP2017025083A; HRP20171483T1; WO2012094163A1; HK1247553A1; EP3248614A1; EP2661276B1; PL2661276T3; HUE035057T2; LT2661276T; DK2661276T3; EP2661276A1; RS56460B1; US20120294844A1; SI2661276T1; US20140154237A1; NO2661276T3

Abstract

Composición según la reivindicación 1, en donde dicha composición comprende un soporte, dicho soporte comprende una cadena principal polipeptídica cargada positivamente que tiene unida a la misma uno o más grupos eficaces seleccionados del grupo que consiste en (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q, (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q, y (gly)p-RKKRRQRRR(gly)q, en donde los subíndices p y q son cada uno independientemente un número entero de 0 a 20.

Description

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DESCRIPCION

Composicion topica que comprende una toxina botulfnica y un colorante CAMPO DE LA INVENClON

La presente invencion hace referencia a una composicion topica de una toxina.

ANTECEDENTES DE LA INVENClON

La toxina botulfnica (tambien conocida como toxina botulina o neurotoxina botulfnica), es una de las mas potentes neurotoxinas de origen natural conocidas por el hombre. Produce la paralisis de los musculos evitando la transmision sinaptica o la liberacion de acetilcolina a traves de la union neuromuscular, y se cree que actua tambien de muchas otras formas. La toxina botulfnica bloquea, esencialmente, las senales que habitualmente causan espasmos o contracciones musculares, lo que tiene como resultado la paralisis.

A pesar de su toxicidad, la toxina botulfnica ha encontrado numerosos usos terapeuticos y cosmeticos. Por ejemplo, la toxina botulfnica ha sido utilizada para tratar una variedad de condiciones, incluyendo el espasmo hemifacial, tortfcolis espasmodica de inicio en el adulto, fisura anal, blefaroespasmo, paralisis cerebral, distoma cervical, cefaleas migranosas, estrabismo, trastorno temporomandibular, y diversos tipos de calambres y espasmos musculares. Ademas, los efectos paralizantes del musculo de la toxina botulfnica han sido utilizados en aplicaciones terapeuticas y de cosmetica facial, tales como el tratamiento de las arrugas, lfneas de expresion, y otros resultados de los espasmos o contracciones de los musculos faciales.

Convencionalmente, la toxina botulfnica se administra mediante inyeccion en el area que necesita tratamiento. La administracion de la toxina botulfnica mediante inyeccion implica, habitualmente, reconstituir una muestra previamente liofilizada de la toxina botulfnica, utilizando suero fisiologico o algun otro diluyente farmaceuticamente aceptable. La solucion de la toxina botulfnica reconstituida se introduce en una jeringuilla, donde permanece hasta ser inyectado en el paciente. La secuencia de pasos requeridos para la preparacion y posterior administracion de la toxina botulfnica es relativamente segura para el especialista clfnico, ya que la solucion de la toxina botulfnica se encuentra contenida o bien en una jeringuilla o en un vial hasta su administracion. Ademas, las dosis de toxina botulfnica utilizadas en la formulacion inyectable son tambien relativamente bajas. Por ejemplo, las actuales formulaciones de la toxina botulfnica para el tratamiento de arrugas contiene aproximadamente 100 U de toxina por dosis.

Mas recientes avances han permitido la administracion por via topica de la toxina botulfnica. Vease, por ejemplo, la Solicitud de Patente de EE.UU. 11/072,026 (n° de publicacion US 2005-0196414 A1). Sin embargo, el uso de las formulaciones topicas de la toxina botulfnica introduce desaffos nuevos e imprevistos para el especialista clfnico, en particular con respecto a una segura aplicacion, manejo y eliminacion de la toxina botulfnica. Por consiguiente, se necesitan medios seguros y efectivos para aplicar, retirar e inactivar el exceso de toxina botulfnica.

Se reconocen las siguientes referencias:

• El documento WO 2006/094263 A2 (Revance Therapeutics Inc.; Dake; Waugh) 8 de Septiembre de 2006, hace referencia a composiciones y metodos para la aplicacion topica y la administracion transdermica de la toxina botulfnica.

• El documento US 5624636 A (Schwartz) 29 de Abril de 1997, hace referencia a un desinfectante a base de hipoclorito para impresiones dentales.

• El documento US 2009/148342 A1 (Bromberg et al) 11 de Junio 2009, hace referencia a composiciones y a un metodo para producir acido hipohaloso y vapor de acido hipoaloso.

• Senogles et al, Water Research, volume 35, no. 5, 1 de Abril de 2001, paginas 1245-1255, hace referencia a la degradacion fotocatalftica de cilindrospermopsina, utilizando dioxido de titanio e irradiacion UV.

• El documento US 2008/107690 A1 (Dake et al) 8 de Mayo de 2008 hace referencia a composiciones y metodos para la aplicacion topica y la administracion transdermica de las toxinas botulfnicas.

• El documento US 4797128 A (Fowler) 10 de Enero de 1989 hace referencia a un metodo y aparato para la limpieza de prendas y productos suaves contaminados con contaminantes nucleares, qufmicos y/o biologicos.

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• El documento US 6566574 B1 (Tadros et al) 20 de Mayo de 2003 hace referencia a formulaciones para la neutralizacion de toxinas qufmicas y biologicas.

• El documento US 2009/250626 A1 (Schlesser et al) 8 de Octubre de 2009, divulga un dispositivo para la descontaminacion de lfquidos.

• El documento US 7585829 B1 (Taylor) 8 de Septiembre de 2009 hace referencia a productos, metodos y equipo para eliminar manchas de tejidos.

• El documento US 2003/196549 A1 (Rohrbach et al) 23 de Octubre de 2003 divulga un filtro de descontaminacion qufmica/biologica.

RESUMEN DE LA INVENCION

Un aspecto de esta invencion es el reconocimiento de que las formulaciones topicas de toxinas, tales como, por ejemplo, las formulaciones de la toxina botulfnica, deben ser manipuladas y eliminadas utilizando diferentes procedimientos, en comparacion con formulaciones inyectables convencionales que contengan las mismas toxinas. En particular, la invencion reconoce que puede ocurrir una contaminacion no deseable sin un cuidado adecuado y sin procedimientos de manipulacion seguros, ya que las formulaciones de toxinas por via topica pueden extenderse de manera inadvertida a otras superficies por contacto o vertido casual.

Otro aspecto de la invencion es el reconocimiento de que el contenido de toxina en las formulaciones botulfnicas por via topica puede, en muchos casos, ser significativamente mayor que el de las formulaciones de toxina botulfnica inyectable. Sin animo de estar sujetos por la teorfa, se cree que es necesario un contenido mas elevado de toxina botulfnica en las formulaciones por via topica para lograr efectos terapeuticos o cosmeticos, debido a la dificultad de transportar la toxina botulfnica a traves de la piel, incluso con soportes o potenciadores de la penetracion cutanea, tal como se describe en la presente patente. Por ejemplo, una unica dosis de una formulacion topica de toxina botulfnica de tipo A puede comprender mas de 1000-7000 U de toxina, mientras que una formulacion inyectable habitualmente contiene solo aproximadamente 100 U. Por tanto, la invencion reconoce, en primer lugar, que pueden permanecer cantidades significativas de la toxina botulfnica en la superficie de la piel despues de la administracion de una composicion topica, representando de este modo un peligro potencial para el paciente y el especialista clfnico por igual, y generando potenciales problemas medioambientales.

Por consiguiente, se divulga en la presente patente metodos y kits para aplicar, eliminar e inactivar de forma segura un exceso de toxinas (por ejemplo, toxina botulfnica), utilizada en composiciones terapeuticas o cosmeticas.

Tambien se divulga un metodo para aplicar por via topica una formulacion de una toxina. El metodo comprende aplicar por via topica la formulacion de toxina sobre un area a ser tratada, eliminar el exceso de toxina con un agente de eliminacion, e inactivar el exceso de toxina con un agente de inactivacion.

En otro aspecto, la divulgacion proporciona un metodo para eliminar la toxina de la superficie de un paciente. El metodo comprende eliminar la toxina del area con un agente de eliminacion, e inactivar la toxina eliminada con un agente de inactivacion.

En aun otro aspecto, la divulgacion proporciona un kit para aplicar una toxina por via topica. El kit incluye una composicion que comprende una toxina y un aplicador para aplicar la composicion por via topica a un area en necesidad de tratamiento. Opcionalmente, la composicion de la toxina puede contener un colorante. El kit tambien incluye un agente de eliminacion para eliminar el exceso de toxina de un area tratada, y un agente de inactivacion para inactivar el exceso de toxina despues de que haya sido eliminada del area tratada.

En otro aspecto, la divulgacion proporciona un kit para la eliminacion de una toxina aplicada por via topica. El kit comprende un agente de eliminacion para eliminar el exceso de toxina aplicada por via topica a un area en necesidad de tratamiento, y un agente de inactivacion para inactivar el exceso de toxina despues de que haya sido eliminada del area tratada.

La invencion se encuentra definida por las reivindicaciones adjuntas. La invencion proporciona una composicion topica o transdermica que comprende una toxina botulfnica y un colorante. El colorante permite una identificacion visual mas sencilla de la composicion. En determinadas realizaciones preferidas, la toxina botulfnica puede ser cualquiera de los serotipos de toxina botulfnica A, B, C1, D, E, F, o G. En una realizacion particularmente preferida, la toxina botulfnica es una toxina botulfnica de tipo A purificada. En determinadas realizaciones, el colorante es un colorante visible o un colorante fluorescente. En realizaciones preferidas, dichos colorantes detectables, cuando se utilizan en la composicion, no reaccionan con la toxina botulfnica.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

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Esta divulgacion proporciona metodos y kits para eliminar de forma segura e inactivar composiciones de toxina topicas. Tal como se utiliza en la presente patente, los terminos “inactivar”, “inactivando”, “inactivacion”, o variantes de los mismos, cuando se utilizan en referencia a una toxina, hacen referencia a tratar la toxina para dejarla sin neurotoxicidad.

Entre los metodos de la divulgacion se incluyen metodos para aplicar, eliminar e inactivar las composiciones de toxina topicas, ademas de metodos para unicamente eliminar e inactivar las composiciones topicas de la toxina. Los metodos divulgados en la presente patente pueden ser utilizados en referencia a un regimen de tratamiento (por ejemplo, casos en los que la composicion se aplica de forma deliberada), o como una medida de descontaminacion (por ejemplo, para eliminar las composiciones de la toxina en casos en los que la composicion de la toxina se encuentra presente de forma no intencionada o no deseada en una superficie). La divulgacion tambien contempla kits tanto para aplicar, eliminar e inactivar composiciones topicas de la toxina, ademas de kits para unicamente eliminar e inactivar composiciones topicas de la toxina. La invencion abarca composiciones que comprenden colorantes.

La composicion de acuerdo con la invencion comprende una toxina botulfnica.

El termino “toxina botulfnica” tal como se utiliza en la presente patente hace referencia a cualquiera de los tipos conocidos de toxina botulfnica, ya sea producida por la bacteria o mediante tecnicas recombinantes, ademas de cualquiera de dichos tipos que puedan ser descubiertos posteriormente, incluyendo variantes o protefnas de fusion de ingenierfa genetica. La toxina botulfnica puede obtenerse a partir de los serotipos conocidos del C. botulinum (por ejemplo, los serotipos A, B, Ci, D, E, F, o G). En determinadas realizaciones preferidas, la toxina botulfnica esta presente como una molecula de toxina botulfnica aislada (por ejemplo, moleculas de toxina botulfnica de los tipos A, B, Ci, D, E, F, o G sin las protefnas estabilizantes expresadas por C. botulinum). En dichas realizaciones, la molecula de toxina botulfnica aislada es estabilizada preferiblemente por estabilizantes exogenos. Vease, por ejemplo, la Solicitud Provisional de EE.UU. N° 61/220,433 (N° de publicacion Internacional WO 2010/151840) titulada "Albumin Free Botulinum Toxin Formulations" (Formulaciones de toxina botulfnica libres de albumina). De forma alternativa, la toxina botulfnica puede estar presente en forma de complejo, estabilizada, al menos en parte, por una o mas de las protefnas no-toxinas, no hemaglutininas y protefnas no-toxinas hemaglutininas, que son expresadas normalmente junto con la toxina botulfnica por las bacterias C. Botulinum. En determinadas realizaciones, la toxina botulfnica es estabilizada por estabilizantes exogenos, tales como la albumina. La invencion tambien contempla especfficamente el uso de formulaciones de toxina botulfnica comercialmente disponibles, donde ejemplos no limitativos de las cuales incluyen BOTOX®, Dysport® y Xeomin ®.

La toxina botulfnica utilizada en la invencion puede ser, de forma alternativa, un derivado de la toxina botulfnica, es decir, un compuesto que tiene actividad de toxina botulfnica pero que contiene una o mas alteraciones qufmicas o funcionales en cualquier parte o en cualquier cadena en relacion a las toxinas botulfnicas nativas de origen natural o recombinantes. Por ejemplo, la toxina botulfnica puede ser una neurotoxina modificada (por ejemplo, una neurotoxina que tiene al menos uno de sus aminoacidos eliminados, modificados o reemplazados, en comparacion con una neurotoxina nativa o producida de forma recombinante, o un derivado o fragmento de la misma). Por ejemplo, la toxina botulfnica puede ser una que haya sido modificada de forma que, por ejemplo, potencie sus propiedades o disminuya los efectos secundarios no deseables, pero que aun mantenga la actividad deseada de la toxina botulfnica. La toxina botulfnica puede ser cualquiera de los complejos de toxina botulfnica producidos por la bacteria, segun se describe anteriormente. De forma alternativa, la toxina botulfnica puede ser una toxina preparada utilizando tecnicas qufmicas de sfntesis o recombinantes (por ejemplo, un peptido recombinante, una protefna de fusion, o una neurotoxina hfbrida, segun se prepara a partir de subunidades o dominios de diferentes serotipos de toxina botulfnica (vease la Patente de EE.uU. N° 6,444,209, por ejemplo)). La toxina botulfnica puede tambien ser una parte de la molecula completa que se ha mostrado que posee la necesaria actividad de toxina botulfnica, y en tal caso puede ser utilizada per se o como parte de una molecula de combinacion o conjugada, por ejemplo una protefna de fusion. Adicionalmente, la toxina botulfnica puede encontrarse en forma de un precursor de toxina botulfnica, que puede ser en sf mismo no-toxico, por ejemplo, una proteasa de zinc no toxica que se vuelve toxica en el corte proteolftico.

En terminos generales, los metodos y kits divulgados en la presente patente para eliminar e inactivar de forma segura composiciones de toxina topicas terapeuticas o cosmeticas (por ejemplo, composiciones de toxina botulfnica), son adecuadas para su uso con cualquier modo de administracion topica de una composicion de toxina terapeutica o cosmetica, tal como se discute en la presente patente. La administracion topica puede realizarse en cualquier area del cuerpo en necesidad de la misma. En determinados aspectos, el area del cuerpo a ser tratada se selecciona del grupo que consiste en la cara, las axilas, las palmas de las manos, las manos, los pies, la zona lumbar, el cuello, la pierna, la ingle, el brazo, el codo, la rodilla, la pelvis, las nalgas y el torso.

En algunos aspectos, la composicion de toxina topica puede ser administrada para producir un efecto cosmetico. Por ejemplo, la neurotoxina toxina botulfnica de tipo A puede ser aplicada a la cara para reducir la apariencia de las arrugas, incluyendo las lfneas de marioneta, lfneas nasolabiales, patas de gallo, lfneas de la zona glabelar (entrecejo) y combinaciones de las mismas.

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En otros aspectos, la composicion de toxina topica puede ser administrada para proporcionar un efecto terapeutico a un sujeto. Por ejemplo, la composicion de toxina topica puede atenuar los impulsos nerviosos colinergicos, suprimiendo de ese modo la produccion de una glandula. En ciertos aspectos, la composicion de toxina topica comprende una toxina botulfnica que puede ser administrada para reducir la hipersecrecion de las glandulas sudorfparas o de las glandulas sebaceas, para tratar la hiperhidrosis o el acne, respectivamente. Mas generalmente, esta divulgacion tambien contempla la administracion de composiciones topicas de toxina botulfnica para tratar cualquier indicacion para la cual se conoce que la toxina botulfnica proporciona una mejora en una condicion. Ejemplos de dichas indicaciones incluyen espasmo hemifacial, tortfcolis espasmodica de inicio en el adulto, fisura anal, blefaroespasmo, paralisis cerebral, distoma cervical, cefaleas migranosas, estrabismo, trastorno temporomandibular, y diversos tipos de calambres y espasmos musculares.

En aspectos preferidos, la composicion de la invencion puede ser aplicada para administrar una cantidad efectiva de la toxina. La expresion “cantidad efectiva” utilizada en la presente patente hace referencia a una cantidad de una toxina (por ejemplo, toxina botulfnica) que es suficiente para producir los efectos deseados de paralisis muscular u otros efectos biologicos o esteticos, pero que implfcitamente es una cantidad segura, es decir, una que sea lo suficientemente baja para evitar efectos secundarios serios. Los efectos deseados incluyen la relajacion de ciertos musculos con la finalidad de, por ejemplo, disminuir la apariencia de finas lfneas y/o arrugas, especialmente en la cara, o ajustar la apariencia facial en otras formas tales como ampliar el ancho de los ojos, o suavizar las lfneas que se despliegan desde el labio superior, o la relajacion general de la tension muscular. El ultimo efecto mencionado, la relajacion general de la tension muscular, puede ser efectuado en la cara o en cualquier otro lugar. En algunas realizaciones, la composicion de la invencion puede contener una cantidad efectiva apropiada de la toxina botulfnica para su aplicacion como un tratamiento en una unica dosis, o puede estar mas concentrada, bien para su dilucion en el lugar de administracion o para su uso en multiples aplicaciones. La toxina botulfnica puede ser administrada por via topica para su administracion transdermica a los musculos o a otras estructuras asociadas con la piel. La administracion puede realizarse, por ejemplo, en las piernas, hombros, espalda (incluyendo la zona lumbar), axilas, palmas, pies, cuello, ingle, el dorso de las manos o pies, los codos, brazos, rodillas, muslos, nalgas, torso, pelvis, o cualquier otra parte del cuerpo en donde se desee la administracion de la toxina botulfnica.

En determinadas realizaciones, la dosis de toxina botulfnica para la composicion de toxina topica de la invencion se encuentra en un rango de 100 U a 7000 U, mas preferiblemente de 500 U a 6000 U, mas preferiblemente de 1000 U a 5000 U, e incluso mas preferiblemente de 2000 a 4000 U. En unas realizaciones, la dosis de toxina botulfnica se encuentra en el rango de 1000 a 7000 U, aunque la invencion especfficamente contempla que los lfmites inferior y/o superior de este rango pueden ser incrementados o reducidos, respectivamente, en intervalos de 50 U, donde cada sub-rango se considera una realizacion de la invencion.

La composicion de toxina topica incluye un indicador que permite a un especialista clfnico ver la composicion de toxina topica mas facilmente. Por tanto, en casos en donde el especialista clfnico aplica manualmente la formulacion de toxina botulfnica topica directamente en el area a ser tratada, el indicador puede ayudar al especialista clfnico a determinar que areas de la piel ya han sido tratadas. Ademas, el indicador puede permitir que el especialista clfnico localice las areas que han sido contaminadas por la composicion de toxina topica. En terminos generales, el indicador es inerte con respecto a la toxina y puede ser aplicado de forma segura a la superficie de la piel en la concentracion utilizada. El indicador es un colorante detectable. El colorante puede ser un colorante visible o fluorescente que este producido a partir de fuentes naturales o producido de forma artificial. Los colorantes de fuentes naturales pueden incluir, pero no se limitan a, colorantes alimenticios naturales. Ejemplos no limitativos de colorantes visibles incluyen, pero no se limitan a, FD&C Azul N° 1, FD&C Azul N° 2, FD&C Verde N° 3, FD&C Rojo N° 40, FD&C Rojo N° 3, FD&C Amarillo N° 5, y FD&C Rojo N° 6, colorante de caramelo, annatto, cochinilla, betanina, curcuma, azafran, paprika, pandan, y conchita azul. Ejemplos no limitativos de colorantes fluorescentes incluyen, pero no se limitan a, fluorescefna sodica, rodamina B, Naranja de acridina, protefna verde fluorescente, curcuma, y sulfuro de zinc. En realizaciones preferidas, el colorante no afecta a la eficacia o biodisponibilidad de la toxina en la composicion de toxina topica.

En otros aspectos de la divulgacion, el indicador puede comprender partfculas inertes, coloreadas que se mezclan en la composicion de toxina topica para permitir una identificacion visual mas facil de la composicion. Por ejemplo, pueden anadirse pequenas partfculas de dioxido de titanio para impartir un color blanco a la composicion de toxina topica. El uso de oxido de titanio como indicador tiene ademas la ventaja anadida de que las partfculas de oxido de titanio pueden actuar como un agente de inactivacion en presencia de radiacion UV, tal como se discute mas adelante. Sin embargo, cuando se utiliza dioxido de titanio como indicador, se debe tener cuidado para evitar exponer la composicion de toxina topica a luz UV de forma prematura, para evitar la inactivacion inadvertida de la toxina mediante reacciones de degradacion fotocatalftica.

En determinados aspectos preferidos, la composicion de toxina topica se deja reposar sobre la piel durante un periodo de tiempo despues de su aplicacion para permitir que la toxina penetre en la piel. La duracion de este tiempo de reposo puede variar dependiendo de la composicion de toxina topica en particular, la cantidad de toxina que va a ser administrada, y el area que va a ser tratada. Ejemplos de tiempos de reposo que pueden ser utilizados en relacion con esta invencion incluyen, pero no se limitan a, 1 minuto, 2 minutos, 3 minutos, 4 minutos, 5 minutos, 6

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Esta divulgacion tambien proporciona un agente de eliminacion para eliminar las composiciones de toxina topicas de las superficies cuando la presencia de las composiciones topicas de la toxina sobre dichas superficies no se desee. Por ejemplo, el agente de eliminacion puede ser utilizado para eliminar el exceso de la composicion de toxina topica que ha sido aplicada en el area de la piel que va a ser tratada. De forma alternativa, el agente de eliminacion puede ser utilizado para eliminar la composicion de toxina topica que ha sido administrada de forma inadvertida en un area de la piel que no necesita tratamiento. La divulgacion tambien contempla la utilizacion del agente de eliminacion para eliminar la toxina de la superficie de cualquier artfculo que haya sido contaminado con la toxina. Por ejemplo, entre los ejemplos de artfculos en un entorno especialista clfnico que pueden ser contaminados por una composicion de toxina topica se incluyen superficies de mesas, sillas, suelos, mesas de laboratorio, guantes, gafas, aplicadores, y similares.

En terminos generales, el agente de eliminacion es cualquier agente que es capaz de reducir ffsicamente la cantidad de toxina activa en la superficie de la piel. Por ejemplo, en determinados aspectos, el agente de eliminacion puede adsorber, absorber, o ffsicamente raspar el exceso de composicion de toxina topica. En dichos aspectos, el agente de eliminacion puede comprender cualquier material/artfculo capaz de eliminar la composicion incluyendo, pero sin limitarse a, artfculos polimericos sinteticos y/o naturales, artfculos metalicos, artfculos ceramicos, y artfculos de vidrio. Los artfculos polimericos pueden comprender celulosa y/o derivados de celulosa o plasticos. Entre los ejemplos de agentes de eliminacion se incluyen, pero sin limitarse a, espatulas, materiales que comprenden algodon, materiales que comprenden rayon, toallitas de papel, gasas, hisopos, bolas de algodon, vendaje quirurgico, papel facial, materiales absorbentes desechables, materiales adsorbentes desechables, panos desechables, textiles tejidos y no tejidos desechables, toallitas humedas y toallitas secas.

La etapa de eliminar el exceso de toxina puede implicar limpiar, secar, raspar o frotar el area de la superficie con el agente de eliminacion. En algunos aspectos, el agente de eliminacion puede tambien ser colocado directamente en una superficie durante un periodo de tiempo para permitir que la composicion de toxina topica sea absorbido por o se adsorba en el agente de eliminacion. En aspectos en los que la composicion de toxina topica comprende un indicador, el agente de eliminacion puede ser administrado repetidamente por el especialista clfnico hasta que el indicador ya no sea visible o se encuentre presente en una cantidad que este por debajo de un lfmite superior aceptable, indicando de este modo que la mayor parte de, si no toda, la composicion de toxina topica ha sido eliminada. Por ejemplo, cuando el indicador es un colorante, este lfmite umbral puede ser expresado como un porcentaje de la cantidad de colorante originalmente presente, como un numero absoluto, o de otra forma conocida para un experto en el arte. Los lfmites umbral de colorante contemplados por la invencion pueden ser cualquiera conocido por un experto en el arte incluyendo, pero sin limitarse a, menos del 20% del originalmente presente, menos del 10% del originalmente presente, menos del 5% del originalmente presente, menos del 1% del originalmente presente, menos del 0,5% del originalmente presente, menos del 0,1% del originalmente presente, menos del 0,05% del originalmente presente y un 0,01% del originalmente presente. Se contempla el uso de mas de uno y/o mas de un tipo de agente de eliminacion para eliminar toxina no deseada de una superficie.

En determinados aspectos preferidos de la divulgacion, el agente de eliminacion se utiliza en combinacion con un agente de inactivacion. El agente de inactivacion es cualquier agente que inactive la toxina, dejando de ese modo la toxina sin neurotoxicidad. Ejemplos no limitativos de agentes de inactivacion incluyen oxidantes, tensioactivos, oxidantes, radiacion electromagnetica, y agentes basicos.

En ciertos aspectos, el agente de eliminacion y el agente de inactivacion se utilizan simultaneamente. Por ejemplo, en un ejemplo particularmente preferido, una toallita que ha sido impregnada con lejfa de hipoclorito puede ser utilizada para eliminar ffsicamente la toxina topica que se encuentra en la superficie mientras la inactiva al mismo tiempo. En otros aspectos, el agente de eliminacion y el agente de inactivacion se utilizan secuencialmente. Por ejemplo, despues de que el agente de eliminacion elimine ffsicamente la toxina de una superficie, el agente de eliminacion puede ser expuesto a un agente de inactivacion para volver la toxina inocua en contacto con el agente de eliminacion. De forma alternativa, el agente de eliminacion y el agente de inactivacion pueden ser aplicados secuencialmente a una superficie para descontaminar la superficie de la toxina topica presente sobre la misma.

Un aspecto de la divulgacion es el reconocimiento de que ciertas clases de tensioactivos inactivan la toxina botulfnica, mientras que otras clases de tensioactivos no. En terminos generales, los detergentes ionicos fuertes son utiles como agentes de inactivacion, ejemplos no limitativos de los cuales incluyen dodecilsulfato sodico, lauroil lactilato sodico, lauril eter sulfato sodico, y laurilsarcosinato sodico. Por ejemplo, se observo que el contacto de la toxina botulfnica de tipo A con toallitas de limpieza facial de Dove “Facial Cleaning Cloths, Deep Moisture®” inactivan la toxina botulfnica de tipo A. Estas toallitas de limpieza detallan las siguientes sustancias como ingredientes: agua, glicerina, decilglucosido, laurilsarcosinato sodico, cocamidopropil betafna, silicona quaternium-8, laurilsarcosinato sodico, polyquaternium-10, acetato de tocoferilo (acetato de vitamina E), palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A), lactato potasico, acido lactico, colesterol, esterol de glicina soja (grano de soja), urea, sodio Pca, policuaternio 4, fragancia/perfume, DMDM Hidantofna, y butilcarbamato de yodopropinilo. Por tanto, aunque los detergentes ionicos

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fuertes, tales como los detallados anteriormente, son utiles para inactivar la toxina botulfnica, son a menudo inapropiados para limpiar el area de tratamiento ya sea antes o despues de la administracion de la toxina botulfnica, ya que destruyen la actividad de la toxina botulfnica.

En contraste, los tensioactivos no ionicos (por ejemplo, polisorbato 20, polisorbato 40, polisorbato 60, polisorbato 80, Span 20, Span 60, Span 65, Span 80, PEG 4 Laurato, y PEG 6 gliceridos Caprflico/Caprico) generalmente son menos utiles como agentes de inactivacion, particularmente en concentraciones bajas, pero pueden ser utilizados de forma ventajosa para limpiar un area de la piel previamente al tratamiento o como parte de un agente de eliminacion para potenciar la eliminacion de la toxina botulfnica topica de un area tratada de la piel. Por ejemplo, las toallitas desmaquilladoras de Neutrogena “Makeup Remover Cleansing Towelettes®”, que contienen tensioactivos no ionicos, pueden ser utilizadas como una toallita post-tratamiento para limpiar el exceso de toxina botulfnica en un area de la piel despues de la administracion de la composicion de toxina botulfnica topica. Las toallitas desmaquilladoras de Neutrogena “Makeup Remover Cleansing Towelettes®” contienen los siguientes ingredientes: agua, etilhexanoato de cetilo, palmitato de isostearilo, tetraetilhexanoato de pentaeritritilo, isononanoato de isononilo, ciclopentasiloxano, hexilenglicol, PEG 4 laureato, Gliceridos PEG-6 caprflico/caprico, cocoato de sacarosa, carbomero, hidroxido de sodio, acido benzoico, Acido Dehidroacetato, fenoxietanol, butilcarbamato de yodopropinilo, y fragancia. Ademas, las toallitas desmaquilladoras de Neutrogena “Makeup Remover Cleansing Towelettes®” pueden utilizarse como una toallita de pre-tratamiento para limpiar el area que va a ser tratada, sin afectar de forma perjudicial la actividad de la composicion de toxina botulfnica topica aplicada posteriormente. En aspectos que implican tensioactivos no ionicos que no inactivan la toxina botulfnica, se utiliza preferiblemente un agente de activacion para neutralizar el exceso de toxina botulfnica. Por ejemplo, en determinados aspectos preferidos, el agente de inactivacion puede ser unas formas solidas o en solucion de hipoclorito sodico (por ejemplo, lejfa) segun se ha descrito en la presente memoria. Ademas, se contempla el uso de otras sustancias qufmicas como agente de eliminacion, o como una parte de un agente de eliminacion. Por ejemplo, puede eliminarse el exceso de toxina botulfnica de tipo A en la superficie de la piel de un paciente, sin una inactivacion significativa, limpiando con una gasa humedecida con alcohol isopropflico al 70%.

En determinados aspectos preferidos, el agente de inactivacion es un oxidante. Por ejemplo, entre los oxidantes adecuados se incluye cualquier sustancia qufmica capaz de oxidar la toxina para volverla inocua. Ejemplos no limitativos de oxidantes adecuados incluyen gas ozono, agua ozonizada, peroxidos e hipocloritos. En ciertos aspectos preferidos, el oxidante es una sal de hipoclorito, que puede ser utilizada sola o en combinacion con otros agentes de inactivacion. Las sales de hipoclorito adecuadas incluyen, pero no se limitan a, hipoclorito sodico e hipoclorito de calcio. La sal de hipoclorito puede encontrarse en cualquier forma y/o concentracion que se conozca sea de utilidad para inactivar la composicion. Entre los ejemplos no limitativos de formas de sales de hipoclorito se incluyen la forma lfquida, polvos, sal cristalina y nebulizacion. En algunos casos, se hace referencia al hipoclorito sodico utilizado como agente de inactivacion como lejfa. La concentracion de sal de hipoclorito puede ser, pero sin limitarse a, de al menos 0,1%, aproximadamente de 0,1% a 50%, de 0,1% a 12%, de 0,3% a 10%, o de 0,5% a 10%. En aspectos preferidos, la sal de hipoclorito es hipoclorito sodico en una concentracion entre aproximadamente 0,1% a 6%.

La radiacion electromagnetica puede ser utilizada como un agente de inactivacion sola o en combinacion con otros agentes de inactivacion. La radiacion electromagnetica adecuada para su uso como un agente de inactivacion incluye cualquier radiacion de cualquier longitud de onda que sea capaz de degradar la toxina para volverla no toxica. En ciertos aspectos preferidos, el agente de inactivacion puede incluir, pero no esta limitado a, rayos gamma, rayos x, y radiacion ultravioleta. La radiacion electromagnetica puede ser generada de forma natural o artificial. En aspectos preferidos, la radiacion electromagnetica incluye longitudes de onda entre aproximadamente 10 nm a 400 nm. En casos en los que la radiacion electromagnetica es radiacion ultravioleta (UV), puede utilizarse cualquier fuente de UV conocida por un experto en el arte. Estas pueden incluir, pero sin limitarse a, fuentes relacionadas con la energfa solar, “luces negras” o luz de Wood, lamparas fluorescentes UV, diodos emisores de luz UV (LEDs UV), laseres UV, y lamparas de descarga de gas. En ciertos aspectos, los agentes de inactivacion que comprenden radiacion electromagnetica comprenden ademas dioxido de titanio. Aunque sin tener la intencion de estar sujetos a cualquier teorfa, el dioxido de titanio puede actuar como un fotocatalizador para mejorar la capacidad del agente de inactivacion para degradar la composicion.

Los agentes que modifican el pH pueden utilizarse como agentes de inactivacion, solos o en combinacion con otros agentes de inactivacion. Cualquier sustancia que modifique el pH hasta un valor que cause la degradacion de la toxina puede ser utilizada como un agente de inactivacion modificador del pH. Ejemplos no limitativos de agentes de inactivacion modificadores del pH, adecuados para la invencion incluyen hidroxido potasico (KOH), hidroxido de bario (Ba(OH)2), hidroxido de cesio (CsOH), hidroxido de sodio (NaOH), hidroxido de estroncio (Sr(OH)2), hidroxido de calcio (Ca(OH)2), hidroxido de litio (LiOH), e hidroxido de rubidio (RbOH).

El calor puede ser utilizado como un agente de inactivacion, solo o en combinacion con otros agentes de inactivacion. En casos en los que la composicion es una toxina, y en particular una toxina botulfnica, calentar la composicion a temperaturas superiores a 85 °C durante al menos 5 minutos inactivara la toxina. En ciertos aspectos preferidos, la toxina es inactivada calentandola a mas de 70 °C, aproximadamente de 70 a 100 °C, 70 a 80 °C, 80 a

90 °C, 85 a 90 °C, 86 a 90 °C, 87 a 90 °C, 88 a 90 °C, 89 a 90 °C, 86 °C, 87 °C, 88 °C, 89 °C, 90 °C, 90 a 100 °C, 100 a 110 °C, 110 a 120 °C, 120 a 130 °C, mas de 130 °C pero menos de una temperatura que danarfa el artfculo que se esta descontaminando. La fuente de calor puede ser cualquiera de aquellas que sean conocidas por un experto en el arte, incluyendo, pero sin limitarse a, elementos de calentamiento resistivos, bloques termicos de 5 laboratorio, banos de agua caliente, autoclaves, hornos, y hornos microondas.

En ciertos aspectos, la antitoxina puede ser utilizada como un agente de inactivacion sola o en combinacion con otros agentes de inactivacion. La antitoxina puede ser obtenida de una fuente conocida para un experto en el arte incluyendo, pero sin limitarse a, equinos, murinos, porcinos, humanos y similares. La antitoxina puede comprender anticuerpos completos, anticuerpos parciales, y/o componentes no-anticuerpos. En ciertos aspectos preferidos, la 10 antitoxina es una antitoxina botulfnica trivalente equina. En otros aspectos preferidos, la antitoxina es una antitoxina botulfnica heptavalente equina.

El agente de inactivacion puede degradar la composicion mediante cualquier medio posible incluyendo, pero sin limitarse a, mediante procesos termicos, qufmicos, fotoqufmicos, y de fluctuacion del pH. Puede utilizarse cualquier metodo conocido por un experto en el arte para inactivar la composicion.

15 Tambien se divulgan kits para aplicar las composiciones topicas terapeuticas o cosmeticas. El kit comprende una composicion para la aplicacion topica a un area que necesita tratamiento. El kit tambien puede comprender un indicador que permite monitorizar la ubicacion y presencia de la composicion. En ciertos aspectos, el kit incluye una composicion que comprende una toxina, y opcionalmente, un indicador tal como un colorante detectable. En aspectos preferidos, la toxina es una toxina botulfnica y mas preferiblemente, una toxina botulfnica purificada de tipo 20 A. El kit comprende ademas un aplicador para aplicar por via topica la composicion a un area que necesita tratamiento. El aplicador puede comprender cualquier componente requerido para la administracion de la composicion, incluyendo un aplicador personalizado, un guante, o una jeringuilla. En aspectos preferidos, dicho kit tambien incluye un agente de eliminacion. Este agente de eliminacion se utiliza para eliminar una composicion de toxina topica no deseada en cualquier superficie. En aspectos preferidos, el agente de eliminacion es un artfculo a 25 polimerico a base de celulosa, por ejemplo, una toalla de papel, gasa, un hisopo, o una bola de algodon. El kit ademas comprende un agente de inactivacion que se utiliza para inactivar el exceso de la composicion al eliminarlo del area tratada. El agente de inactivacion puede comprender cualquier componente conocido para inactivar la composicion eliminada. En ciertos aspectos, el agente de inactivacion incluye tensioactivos, hipoclorito sodico, radiacion ultravioleta, agentes acidos o basicos, y elementos de calentamiento resistivos. El kit puede tambien, en 30 ciertos aspectos, incluir instrucciones para el uso de los componentes contenidos en el mismo.

Tambien se divulgan kits para la eliminacion de las composiciones terapeuticas o cosmeticas aplicadas por via topica. En ciertos aspectos preferidos, la composicion comprende una toxina tal como la toxina botulfnica de tipo A, opcionalmente en forma aislada con estabilizantes exogenos. El kit comprende un agente de eliminacion para eliminar el exceso de composicion aplicada por via topica en un area en necesidad de tratamiento. El agente de 35 eliminacion puede incluir cualquier componente conocido para eliminar el exceso de composicion del area de tratamiento y en aspectos preferidos, el agente de eliminacion es un artfculo polimerico a base de celulosa, por ejemplo, una toalla de papel, gasa, un hisopo, o una bola de algodon. El kit ademas comprende un agente de activacion que se utiliza para inactivar el exceso de composicion al eliminarla del area tratada. El agente de inactivacion puede comprender cualquier componente conocido para inactivar el exceso de composicion eliminada. 40 En determinados aspectos, el agente de inactivacion incluye tensioactivos, hipoclorito sodico, radiacion ultravioleta, agentes acidos o basicos, y elementos de calentamiento resistivos. El kit puede ademas, en ciertos aspectos, incluir instrucciones para el uso de los componentes contenidos en el mismo.

Muchas modificaciones y variaciones de esta invencion pueden realizarse sin apartarse de su alcance, tal como sera evidente para los expertos en el arte. Las realizaciones especfficas descritas en la presente patente se ofrecen a 45 modo de ejemplo unicamente, y la invencion sera limitada unicamente por los terminos de las reivindicaciones adjuntas.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Composiciones de toxina topicas adecuadas para su uso con los metodos y kits para eliminar e inactivara la toxina

50 Tal como se describe en la presente patente, los metodos y kits para eliminar e inactivar las composiciones de toxina topicas no se encuentran particularmente limitadas. En general, pueden utilizarse con cualquier sistema de administracion en el que la toxina se aplica por via topica en la piel. Por ejemplo, en ciertos aspectos, los metodos y kits de la divulgacion son adecuados para su uso con los parches transdermicos que administran la toxina a la piel. En ciertos aspectos diferentes, el sistema de administracion puede implicar aplicar de forma manual la formulacion 55 topica de la toxina directamente sobre el area a ser tratada. Cuando la composicion topica de la toxina se aplica manualmente de esta manera, puede extenderse utilizando un aplicador personalizado o a mano, siempre que la mano este protegida por un guante realizado de un material adecuado (por ejemplo, nitrilo).

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En general, los metodos y kits descritos en la presente patente son adecuados para eliminar e inactivar la toxina en una amplia variedad de diferentes composiciones de toxina topicas. Por ejemplo, los metodos y kits son adecuados para su uso con composiciones de toxina topicas, en las que la toxina se administra mediante un soporte o un potenciador de la penetracion en la piel. Ejemplos no limitativos de soportes incluyen soportes polimericos con carga positiva y micelas (por ejemplo, micelas de fosfolfpidos tales como esfingosina y cerebrosido). Entre los ejemplos de potenciadores de la penetracion en la piel se incluyen DMSO, d-limoneno, alantofna, acido fulvico, mirra, glyquin hidroquinona, quillaja saponaria, y acanthophyllum squarrusum.

En determinadas realizaciones, las composiciones topicas comprenden un soporte con carga positiva que promueve el transporte transdermico de la toxina. Vease, por ejemplo, la publicacion de EE.UU. N° 2005/0196414 titulada "Compositions and Methods for Topical Application and Transdermal Delivery of Botulinum Toxin" (Composiciones y metodos para la aplicacion topica y la administracion transdermica de toxina botulfnica). Por ejemplo, el soporte puede ser una molecula portadora con carga positiva con grupos eficaces unidos a la misma. En ciertas realizaciones preferidas, el transporte topico es potenciado por el soporte sin modificacion covalente del agente activo terapeutico o cosmetico que va a ser administrado.

Por “cargado positivamente” se entiende que el soporte tiene una carga positiva en al menos algunas condiciones de fase en solucion, mas preferiblemente en algunas condiciones al menos fisiologicamente compatibles. Generalmente, el soporte cargado positivamente comprende una “cadena principal cargada positivamente” que es habitualmente una cadena lineal de atomos, ya sea con grupos en la cadena que porta una carga positiva con pH fisiologico, o con grupos que portan una carga positiva unida a cadenas laterales que se extienden desde la cadena principal. Preferiblemente, la propia cadena principal cargada positivamente no tendra una actividad biologica enzimatica o terapeutica definida. La cadena principal lineal es una cadena principal de hidrocarburo que esta, en algunas realizaciones, interrumpida por heteroatomos seleccionados de nitrogeno, oxfgeno, azufre, silicio y fosforo. La mayorfa de los atomos de la cadena principal son habitualmente carbono. Adicionalmente, la cadena principal a menudo sera un polfmero de unidades de repeticion (por ejemplo, aminoacidos, poli(etilenoxi), poli(propilenamina), polialquilenimina, y similares), pero puede ser un heteropolfmero. En un grupo de realizaciones, la cadena principal cargada positivamente es una polipropilenamina en donde un numero de atomos de nitrogeno de amina estan presentes como grupos amonio (tetrasustitufdos) que portan una carga positiva. En otra realizacion, la cadena principal cargada positivamente es un polfmero no peptidflico, que puede ser un hetero- u homo-polfmero, tal como una polialquilenimina, por ejemplo una polietilenimina o polipropilenimina, con un peso molecular de aproximadamente 10.000 a aproximadamente 2.500.000, preferiblemente de aproximadamente 100.000 a aproximadamente 1.800.000, y mas preferiblemente de aproximadamente 500.000 a aproximadamente 1.400.000. En otro grupo de realizaciones, la cadena principal tiene unida una pluralidad de fracciones de cadena lateral que incluyen grupos cargados positivamente (por ejemplo, grupos amonio, grupos fosfonio, grupos sulfonio, grupos guanidinio, o grupos amidinio). Las fracciones de cadena lateral en este grupo de realizaciones pueden estar ubicadas a espacios a lo largo de la cadena principal que son constantes o variables. Adicionalmente, la longitud de las cadenas laterales puede ser similar o diferente. Por ejemplo, en un grupo de realizaciones, las cadenas laterales pueden ser cadenas lineales o ramificadas de hidrocarburos que tienen de uno a veinte atomos de carbono, y que terminan en el extremo distal (lejos de la cadena principal) en uno de los grupos cargados positivamente indicados anteriormente. En todos los aspectos de la presente invencion, la asociacion entre el soporte y los agentes activos terapeuticos o cosmeticos es mediante interaccion no covalente, ejemplos no limitativos de la cual incluyen interacciones ionicas, enlaces de hidrogeno, fuerzas de van der Waals, o combinaciones de las mimas.

En un grupo de realizaciones, la cadena principal cargada positivamente es un polipeptido que tiene multiples grupos de cadena la lateral cargados positivamente (por ejemplo, lisina, arginina, ornitina, homoarginina, y similares). Preferiblemente, el polipeptido tiene un peso molecular de aproximadamente 10.000 a aproximadamente 1.500.000, mas preferiblemente de aproximadamente 25.000 a aproximadamente 1.200.000, mas preferiblemente de aproximadamente 100.000 a aproximadamente 1.000.000. Un experto en el arte apreciara que cuando se utilizan aminoacidos en esta parte de la invencion, las cadenas laterales pueden tener la forma D- o L- (configuracion R o S) en el centro de la union. De forma alternativa, la cadena principal puede ser un analogo de un polipeotido tal como un peptoide. Vease, por ejemplo, Kessler, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32:543 (1993); Zuckermann et al. Chemtracts-Macromol. Chem. 4:80 (1992); y Simon et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 89:9367 (1992)). Brevemente, un peptoide es una poliglicina en la que la cadena lateral esta unida a los atomos de nitrogeno de la cadena principal en lugar de a los atomos de carbono a. Como se ha indicado anteriormente, una parte de las cadenas laterales terminaran habitualmente en un grupo cargado positivamente para proporcionar un componente de la cadena principal cargado positivamente. La sfntesis de peptoides se describe en, por ejemplo, la patente de EE.UU. N° 5,877,278. Tal como se utiliza el termino en la presente memoria, las cadenas principales cargadas positivamente que tienen una construccion de cadena principal peptoide se consideran “no peptfdicas” ya que no estan compuestas de aminoacidos con cadenas naturales de origen natural en las localizaciones del carbono a.

Puede utilizarse una variedad de otras cadenas principales, por ejemplo, analogos estericos o electronicos de polipeptidos en donde los enlaces amida del peptido se reemplazan con sustitutos tales como enlaces de ester, tioamidas (--CSNH--), tioamidas inversas (--NHCS-), aminometileno (--NHCH2--) o los grupos de metilenamino (-- CH2NH--) inverso, grupos cetometileno (--COCH2--), fosfinato (--PO2RCH2--), fosfonamidato y ester de

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fosfonamidato (--PO2RNH--), peptido inverso (--NHCO--), trans-alqueno (--CR=CH-), fluoroalqueno (--CF=CH--), dimetileno (--CH2CH2--), tioeter (--CH2S--), hidroxietileno (--CH(OH)CH2--), metilenoxi (--CH2O--), tetrazol (CN4), sulfonamido (--SO2NH- -), metilensulfonamido (--CHRSO2NH--), sulfonamida (--NHSO2--) inversa, y cadenas principales con subunidades de malonato y/o alquilo gem-diamino, por ejemplo, segun se revisa en Fletcher et al. ((1998) Chem. Rev. 98:763) y se detalla por referencias citadas en la presente memoria. Muchas de las sustituciones mencionadas tienen como resultado, aproximadamente, cadenas principales polimericas isostericas en relacion a cadenas principales formadas a partir de a-aminoacidos.

En cada una de las cadenas principales proporcionadas anteriormente, pueden unirse grupos de cadena lateral que portan un grupo cargado positivamente. Por ejemplo, las cadenas principales ligadas a sulfonamida (--SO2NH-- y -- NHSO2--) pueden tener grupos de cadena lateral unidos a los atomos de nitrogeno. De igual manera, el enlace de hidroxietileno (--CH(OH)CH2--) puede llevar un grupo de cadena lateral unido al sustituyente hidroxi. Un experto en el arte puede adaptar facilmente las qufmicas de los otros enlaces para proporcionar grupos de cadena lateral cargados positivamente utilizando metodos estandar de sfntesis.

En una realizacion, la cadena principal cargada positivamente es un polipeptido que tiene grupos eficaces. Tal como se utiliza en la presente patente, un grupo de eficacia es cualquier agente que tiene el efecto de promover la translocacion de la cadena principal cargada positivamente a traves de un tejido o membrana celular. Ejemplos no limitativos de grupos eficaces incluyen -(gly)ni-(arg)n2, TAT-VIH o fragmentos de los mismos, o el dominio de transduccion de protefnas de Antennapedia, o un fragmento del mismo, en el que el subfndice n1 es un numero entero de 0 a 20, mas preferiblemente de 0 a 8, aun mas preferiblemente de 2 a 5, y el subfndice n2 es, independientemente, un numero entero impar de aproximadamente 5 a 25, mas preferiblemente de aproximadamente 7 a aproximadamente 17, mas preferiblemente de aproximadamente 7 a aproximadamente 13. Aun adicionalmente preferidos son aquellas realizaciones en las que el fragmento TAT-VIH tiene la formula (gly)p- RGRDDRRQRRR-(gly)q, (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q o (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q en donde los subfndices p y q son cada uno, independientemente, un numero entero de 0 a 20 y el fragmento esta unido a la cadena principal a traves del extremo C-terminal o del N-terminal del fragmento. Son fragmentos preferidos de TAT-VIH aquellos en los que los subfndices p y q son cada uno, independientemente, numeros enteros de 0 a 8, mas preferiblemente de 2 a 5. En algunas realizaciones, el soporte tiene la secuencia de aminoacidos RKKRRQRRR-G-(K)15-GRKKRRQRRR.

En otra realizacion preferida el grupo de eficacia cargado positivamente es el dominio de transduccion (PTD) de la protefna Antennapedia (Antp), o un fragmento del mismo que mantenga la actividad. (Vease, por ejemplo, Console et al., J. Biol. Chem. 278:35109 (2003).) Preferiblemente, el soporte cargado positivamente incluye grupos eficaces cargados positivamente de la cadena lateral, en una cantidad de al menos aproximadamente un 0,05%, como porcentaje del peso total del soporte, preferiblemente de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 45% en peso, y mas preferiblemente de aproximadamente un 0,1 a aproximadamente un 30% en peso. Para grupos eficaces cargados positivamente con la formula -(gly)n1-(arg)n2, la cantidad de mayor preferencia es de aproximadamente un 0,1 a aproximadamente un 25%.

En otra realizacion, la parte de la cadena principal es una polilisina y unos grupos eficaces cargados positivamente estan unidos a los grupos amino de la cadena lateral de la lisina. En algunas realizaciones, la polilisina puede tener un peso molecular que se encuentra en un rango de aproximadamente 10.000 a aproximadamente 1.500.000, preferiblemente de aproximadamente 25.000 a aproximadamente 1.200.000, y de mayor preferencia de aproximadamente 100.000 a aproximadamente 1.000.000. En otras realizaciones, la polilisina puede tener un peso molecular que se encuentra en un rango de aproximadamente 500 a aproximadamente 5000, de aproximadamente 1000 a aproximadamente 4000, de aproximadamente 1500 a aproximadamente 3500, o de aproximadamente 2000 a aproximadamente 3000. La polilisina puede ser cualquiera de las que estan comercialmente disponibles (Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo., USA) polilisinas tales como, por ejemplo, polilisina que tiene un MW>70.000, polilisina que tiene un MW de 70.000 a 150.000, polilisina que tienen un MW de 150.000 a 300.000 y polilisina que tiene un MW>300.000. La seleccion de una polilisina apropiada dependera del resto de componentes de la composicion, y sera suficiente para proporcionar una carga total neta positiva a la composicion, y, en algunas realizaciones, proporcionar una longitud que es preferiblemente de una a cuatro veces la longitud combinada de los componentes cargados negativamente. Entre los grupos eficaces cargados positivamente y los grupos eficaces se incluyen, por ejemplo, -gly-gly-gly-arg-arg-arg-arg-argarg- arg (-GlyaArgz) o TAT-VIH. En otra realizacion preferida, la cadena principal cargada positivamente es una polialquilenimina de cadena larga, tal como una polietilenimina, por ejemplo, una que tiene un peso molecular de aproximadamente 1.000.000.

En otra realizacion, el soporte es una polilisina con grupos ramificados cargados positivamente unidos a los grupos amino de la cadena lateral de la lisina. La polilisina utilizada en esta realizacion en particular puede ser cualquiera de las que se encuentran comercialmente disponibles (Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo., USA, por ejemplo) polilisinas tales como, por ejemplo, polilisina que tiene un MW>70.000, polilisina que tiene un MW de 70.000 a 150.000, polilisina que tiene un MW de 150.000 a 300.000 y polilisina que tiene un MW>300.000. Sin embargo, preferiblemente la polilisina tiene un MW de al menos aproximadamente 10.000. Entre los grupos de ramificacion cargados positivamente o grupos eficaces se incluyen, por ejemplo, -gly-gly-glyarg-arg-arg-arg-arg-arg-arg (- GlyaArgy), TAT-VIH o fragmentos del mismo, y PTD de Antennapedia o fragmentos del mismo.

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En otras realizaciones de esta invencion, el soporte es una cadena principal de polilisina o polietilenimina (PEI) relativamente corta (que puede ser lineal o ramificada) y que tiene grupos de ramificacion cargados positivamente. Dichos soportes son de utilidad para minimizar la agregacion no controlada de las cadenas principales y la toxina botulfnica en una composicion terapeutica, la cual causa que la eficacia del transporte disminuya drasticamente. Cuando el soporte es una cadena principal lineal de polilisina o PEI relativamente corta, la cadena principal tendra un peso molecular de menos de 75.000, mas preferiblemente menos de 30.000, y de mayor preferencia, de menos de 25.000. Cuando el soporte es una cadena principal ramificada de polilisina o PEI relativamente corta, sin embargo, la cadena principal tendra un peso molecular menor de 60.000, mas preferiblemente menor de 55.000, y de mayor preferencia menor de 50.000.

Ejemplo 2: Aplicacion, eliminacion e inactivacion de la Toxina Botulfnica de tipo A de la piel.

Una persona con lfneas en la zona del entrecejo visita a un especialista clfnico para tratarlas. El especialista clfnico inicialmente limpia el area que va a ser tratada frotandola con una bola de algodon que ha sido humedecida con agua desionizada. El especialista clfnico prepara a continuacion una composicion de toxina topica reconstituyendo una formulacion liofilizada que contiene la neurotoxina toxina botulfnica de tipo A aislada, y un soporte cargado positivamente tal como se describe en el Ejemplo 2. El especialista clfnico aplica la composicion de toxina topica sobre el area de tratamiento deseada y a continuacion la extiende utilizando guantes de nitrilo.

El especialista clfnico a continuacion limpia el guante contaminado con una toallita humeda que ha sido impregnada con hipoclorito sodico (es decir, una toallita con lejfa). La toallita con lejfa elimina ffsicamente la composicion de toxina topica e inactiva qufmicamente la toxina botulfnica. El especialista clfnico coloca a continuacion la toallita con lejfa usada en un recipiente hermetico que contiene hipoclorito sodico lfquido para ayudar a asegurar que cualquier residuo de la toxina botulfnica sea inactivado.

Despues de que se da tiempo a la composicion de toxina topica para penetrar en al area tratada de la piel, el especialista clfnico elimina el exceso de composicion de toxina topica secando las areas tratadas con una toallita de papel. El especialista clfnico a continuacion coloca la toallita de papel usada y los guantes de nitrilo en el recipiente hermetico para su eliminacion segura.

Ejemplo 3: Aplicacion, eliminacion e inactivacion de una composicion botulfnica topica que contiene un indicador

Una persona que sufre de hiperhidrosis visita a un doctor para su tratamiento. El doctor inicialmente limpia el area de la axila del paciente frotandola con bolas de algodon que han sido humedecidas con agua desionizada. Antes del tratamiento, el doctor seca el area que va a ser tratada. El doctor entonces prepara una composicion de toxina topica reconstituyendo una formulacion liofilizada que contiene una neurotoxina toxina botulfnica de tipo A aislada, un soporte cargado positivamente tal como se describe en el Ejemplo 2, y un indicador que comprende finas partfculas de dioxido de titanio. El doctor aplica la composicion de toxina topica sobre el area de tratamiento deseada, y a continuacion la extiende frotando con guantes de nitrilo el area que va a ser tratada. La presencia de dioxido de titanio en la formulacion reconstituida vuelve la formulacion blanca, lo que permite que el doctor vea mas facilmente que areas de la piel de la axila ya han sido tratadas.

Despues de que se deje tiempo a la composicion de toxina topica para que penetre en el area tratada de la piel, el doctor elimina el exceso de composicion de toxina topica secando las areas tratadas con una toallita de papel. El doctor coloca a continuacion la toallita de papel contaminada y los guantes de nitrilo en una camara de descontaminacion que esta equipada con una fuente de luz UV. Encendiendo la fuente de luz UV, el doctor inicia las reacciones fotocatalfticas que implican que las partfculas de dioxido de titanio degraden la toxina botulfnica, volviendo, de ese modo, la toxina inocua.

Entre pacientes, el doctor enciende una luz UV en la sala de tratamiento, para degradar de forma fotocatalftica cualquier toxina que pueda haber sido aplicada de forma inadvertida a una superficie en la sala de tratamiento.

Ejemplo 4: Aplicacion, eliminacion e inactivacion de una composicion botulfnica topica utilizando un tensioactivo

Una persona con lfneas no deseadas en la zona del entrecejo visita a un especialista clfnico para que las trate. El especialista clfnico inicialmente limpia el area que va a ser tratada frotandola con una bola de algodon que esta humedecida con agua desionizada. El especialista clfnico prepara a continuacion una composicion de toxina topica reconstituyendo una formulacion liofilizada que contiene una neurotoxina toxina botulfnica de tipo A, y un soporte cargado positivamente segun se describe en el Ejemplo 2. El especialista clfnico aplica la composicion de toxina topica sobre el area de tratamiento deseado, y a continuacion la extiende con guantes de nitrilo.

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El especialista clfnico limpia a continuacion el guante contaminado con una toallita humeda que ha sido impregnada con hipoclorito sodico (es decir, una toallita con lejfa). La toallita con lejfa elimina ffsicamente la composicion de toxina topica e inactiva qufmicamente la toxina botulfnica. El especialista clfnico coloca a continuacion la toallita de lejfa usada en un recipiente hermetico que contiene hipoclorito sodico lfquido para ayudar a asegurar que los residuos de toxina botulfnica quedan inactivados.

Despues de que se deje tiempo a la composicion de toxina topica para que penetre en el area tratada de la piel, el especialista clfnico elimina el exceso de la composicion de toxina topica secando las areas tratadas con una toallita de papel. El especialista clfnico a continuacion limpia las areas tratadas con un hisopo de algodon que ha sido previamente impregnado con un tensioactivo. El tensioactivo elimina el exceso de toxina en la superficie de las areas tratadas, sin afectar a la toxina que ya ha penetrado en la piel.

El especialista clfnico a continuacion coloca la toallita de papel, hisopo y guantes de nitrilo usados en el recipiente hermetico para su eliminacion segura.

Ejemplo 5: Aplicacion, eliminacion e inactivacion de una composicion de toxina botulfnica topica para tratar las lfneas del area cantal lateral

Un paciente con lfneas en el area cantal lateral no deseadas fue tratado con una composicion de toxina botulfnica topica. Antes de la administracion de una composicion de toxina botulfnica topica, las areas cantales laterales se limpiaron con gasas humedecidas con agua. La composicion de toxina botulfnica topica, que comprende moleculas de toxina botulfnica purificadas y un soporte de cadena principal cargada positivamente con grupos eficaces TAT- VIH unidos, se aplico a gotitas en una de las areas cantales laterales del paciente utilizando una jeringuilla con una aguja de punta roma. La composicion de toxina botulfnica topica se aplico con un masaje en el area cantal lateral con un dedo utilizando guantes. La composicion de toxina botulfnica topica se aplico de forma similar en la otra area cantal lateral del paciente. Posteriormente, ambas areas cantales laterales se cubrieron con un vendaje oclusivo. Se dejo descansar al sujeto durante un periodo de descanso de 30 a 65 minutos. Despues de este periodo de descanso, las areas cantales laterales se limpiaron suavemente con una serie de gasas humedecidas con agua.

Los materiales usados (por ejemplo, jeringuillas, material oclusivo, guantes, y gasas) fueron dispuestos en una bolsa para peligro biologico. Para inactivar la toxina botulfnica, los materiales usados se calentaron a aproximadamente 120 °C durante 60 minutos. Una reduccion perceptible en la apariencia de las lfneas del area cantal lateral se observo despues de 5 dfas. Despues de dos semanas, se observo una reduccion sustancial en la apariencia de las lfneas del area cantal lateral. La mayor reduccion en la apariencia de las lfneas del area cantal lateral (es decir, el efecto pico) ocurrio a aproximadamente 28 dfas despues de la administracion de la composicion de toxina botulfnica topica.

Claims

5

10

15

20

25

REIVINDICACIONES

1. Composicion topica o transdermica que comprende una toxina botulfnica y un colorante.
2. Composicion segun la reivindicacion 1, en donde dicha composicion comprende un soporte, dicho soporte comprende una cadena principal polipeptfdica cargada positivamente que tiene unida a la misma uno o mas grupos eficaces seleccionados del grupo que consiste en (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q, (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q, y (gly)p-RKKRRQRRR(gly)q, en donde los subfndices p y q son cada uno independientemente un numero entero de 0 a 20.
3. Composicion segun la reivindicacion 2, en donde el soporte comprende la secuencia de aminoacidos RKKRRQRRR- G-(K)i5-G-RKKRRQRRR.
4. Composicion segun la reivindicacion 1, en donde la toxina botulfnica se selecciona del grupo que consiste en los serotipos de la toxina botulfnica A, B, C1, D, E, F, y G.
5. Composicion segun la reivindicacion 4, en donde la toxina botulfnica es una molecula de toxina botulfnica purificada.
6. Composicion segun la reivindicacion 1, en donde el colorante es un colorante visible.
7. Composicion segun la reivindicacion 6, en donde el colorante visible es un colorante artificial.
8. Composicion segun la reivindicacion 6, en donde el colorante se selecciona del grupo que consiste en FD&C Azul

N° 1, FD&C Azul N° 2, FD&C Verde N° 3, FD&C Rojo N° 40, FD&C Rojo N° 3, FD&C Amarillo N° 5, y FD&C Rojo N°
6.
9. Composicion segun la reivindicacion 6, en donde el colorante visible es un colorante alimenticio natural.
10. Composicion segun la reivindicacion 9, en donde el colorante alimenticio natural se selecciona del grupo que consiste en colorante de caramelo, annatto, cochinilla, betanina, curcuma, azafran, paprika, pandan, y conchita azul.
11. Composicion segun la reivindicacion 1, en donde el colorante es un colorante fluorescente.
12. Composicion segun la reivindicacion 11, en donde el colorante fluorescente se selecciona del grupo que consiste en fluorescefna sodica, rodamina B, Naranja de acridina, protefna verde fluorescente, curcumina, y sulfuro de zinc.