ES2628868T3

ES2628868T3 - Diagnóstico de enfermedades infecciosas del tracto respiratorio usando muestras de orina

Info

Publication number: ES2628868T3
Application number: ES12785982.5T
Authority: ES
Inventors: Kamon Shirakawa
Original assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-05-19
Filing date: 2012-05-18
Publication date: 2017-08-04
Anticipated expiration: 2032-05-18
Also published as: JP5956435B2; RU2013156365A; US10054585B2; AU2012256683B2; ZA201308675B; BR112013029647A2; EP2711710A4; WO2012157751A1; BR112013029647B1; AU2012256683A1; RU2664707C2; MX352625B; CA2836565C; MX2013013399A; US9297802B2; CA2836565A1; JPWO2012157751A1; EP2711710A1; US20140171359A1; KR20140033439A

Abstract

Un procedimiento para detectar infección respiratoria asociada con infección bacteriana, que comprende: medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto.

Description

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DESCRIPCION

Diagnostico de enfermedades infecciosas del tracto respiratorio usando muestras de orina Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a un procedimiento para detectar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, un procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico y un procedimiento para determinar el momento adecuado para finalizar la administracion de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el antibiotico. Ademas, la presente invencion tambien se refiere a una composicion para su uso en un procedimiento para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana.

Antecedentes tecnicos

La infeccion respiratoria es una enfermedad frecuentemente encontrada en sitios cllnicos. Hay dos tipos de infeccion respiratoria, concretamente, infeccion respiratoria causada por infeccion vlrica e infeccion respiratoria causada por infeccion bacteriana. Los antibioticos no tienen efecto sobre la infeccion respiratoria vlrica. En principio, tras la administracion de antibioticos, se identifica en primer lugar un microorganismo causante, y un antibiotico usado para ello despues se selecciona dependiendo de la sensibilidad del microorganismo causante a farmacos, etc. Sin embargo, como se tarda un largo periodo de tiempo en buscar dicho microorganismo causante por cultivo de sangre o examen de esputo, en realidad, se ha iniciado un tratamiento usando antibiotico antes de la determination de un patogeno en casi todos los casos. Ademas, como la sensibilidad de detection de las bacterias no es necesariamente alta en dicho cultivo de sangre o examen de esputo, incluso si los resultados son negativos, no se puede negar una infeccion bacteriana. Por tanto, se usan antibioticos incluso par pacientes con infeccion respiratoria sospechosos de tener infeccion bacteriana. Por tanto, la administracion de antibioticos en pacientes que los necesitan causa un aumento en las bacterias resistentes.

(Documento que no es patente 1)

Para el uso apropiado de antibioticos, es necesario que pueda diagnosticase con prontitud y de forma precisa la presencia o ausencia de infeccion bacteriana en infeccion respiratoria en sitios cllnicos. Como dicho marcador de diagnostico, ha sido adecuada la utilidad de la procalcitonina. Se ha informado de que cuando se trata una infeccion del tracto respiratorio inferior o una neumonla con antibioticos, aunque como indication se use la concentration de procalcitonina en sangre, pueden disminuirse las cantidades de los antibioticos usados (documento que no es patente 2 y documento que no es patente 3).

La procalcitonina tambien se ha usado como marcador de diagnostico para septicemia, en este caso, la procalcitonina se usa como indicacion, de modo que cuando la concentracion de procalcitonina en sangre es 0,5 ng/ml o mayor, se determina que el sujeto tiene septicemia, y cuando la concentracion de procalcitonina es 2,0 ng/ml o mayor, se determina que el sujeto tiene septicemia severa. Por otro lado, cuando se usa la procalcitonina como marcador para infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla, debe detectase un cambio en una concentracion de procalcitonina en sangre que varla de 0,1 a 0,5 ng/ml y, por tanto, no hay restricciones de que deba usarse un ensayo altamente sensible. Ademas, tambien se ha informado de que, como la procalcitonina esta presente de forma estable en sangre, la concentracion de procalcitonina en sangre disminuye de forma relativamente lenta incluso en un caso en que el tratamiento ha sido satisfactorio (documento de patente 1). Se considera que cuando la semivida de la procalcitonina en sangre es larga, diflcilmente se detecta un cambio en la concentracion.

Como marcador novedoso para septicemia que es superior a procalcitonina, se ha estudiado la utilidad de sCD14- ST (subtipo de antlgeno cD14 soluble; sobrenombre: presepsina). Se ha informado de que incluso si dicho sCD14- ST se usa en una comparacion entre un paciente con septicemia y un paciente con slndrome de respuesta inflamatoria sistemica (SIRS) que es diflcil de distinguirse de septicemia, muestra un alto valor en la sangre del paciente con septicemia. Por tanto, se ha considerado que sCD14-ST es util como marcador de diagnostico para septicemia (documento que no es patente 4 y documento de patente 2).

Ademas, tambien se ha informado de que sCD14-ST se genera en un proceso en que las celulas engloban y digieren microorganismos foraneos o materias foraneas, y que un aumento en la concentracion de sCD14-ST en fluido sinovial puede detectarse en una enfermedad que implica fagocitosis con participation de respuesta autoinmunitaria o infeccion en sitios locales, tal como artritis (documento de patente 3).

Lista de citas

Documentos de patente

Documento de patente 1: Publication internacional WO2008/104321

Documento de patente 2: Publicacion internacional WO2005/108429

Documento de patente 3: Publicacion internacional WO2009/142303

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Documentos que no son patente

Documento que no es patente 1: Ball y col., Journal of Antimicrobial Chemotherapy 49: 31-40, 2002. Documento que no es patente 2: Christ-Crain y col., The Lancet 363: 600-607, 2004.

Documento que no es patente 3: Christ-Crain y col., Am J Respire CritCare Med 174: 84-93, 2006. Documento que no es patente 4: Yaegashi y col., Journal of Infection and Chemotherapy 11: 234-238, 2005.

Sumario de la invencion

Problema tecnico

Un objetivo de la presente invencion es proporcionar un procedimiento para seleccionar apropiadamente pacientes con infeccion respiratoria a los que tiene que administrarse antibiotico, y un procedimiento para ajustar el periodo de administracion de un antibiotico. Es decir, la presente invencion se refiere a conseguir el objetivo que es el uso apropiado de antibioticos para infeccion respiratoria. Especlficamente, la presente invencion proporciona un procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, un procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico y un procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el antibiotico. Para conseguir estos objetivos, se ha deseado desarrollar un marcador novedoso usado para seleccionar apropiadamente infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana. Ademas, tambien se ha deseado desarrollar un marcador sensible, cuya concentracion disminuye con prontitud con la disminucion y/o desaparicion de la infeccion bacteriana en organos respiratorios. Ademas, la presente invencion proporciona una composition para su uso en un procedimiento para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana.

Solution al problema

El autor de la presente invencion ha descubierto que llega a ser posible seleccionar apropiadamente los pacientes con infeccion respiratoria a los que tiene que administrarse un antibiotico, y tambien ajustar el periodo de administracion de un antibiotico, usando como indication un valor medido de sCD14-ST en orina, completando de ese modo la presente invencion.

Mas especlficamente, la presente invencion incluye las siguientes caracterlsticas.

La presente invencion proporciona los siguientes procedimientos para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana:

(1-1) Un procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende:

1) medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto.

(1-2) El procedimiento de acuerdo con el anterior (1-1), que comprende adicionalmente la siguiente etapa:

2) determinar si el sujeto esta afectado o no con infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana usando como indicacion un valor medido de sCD14-ST en la muestra.

(1-3) el procedimiento de acuerdo con el anterior (1-1) que comprende adicionalmente las siguientes etapas:

2) comparar un valor medido de sCD14-ST en la muestra con un valor normal; y

3) determinar si el valor medido de la muestra es mayor que el volumen normal.

(1-4) El procedimiento de acuerdo con el anterior (1-3), en el que, como valor normal, se usa un valor promedio de valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT.

(1-5) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (1-1) a (1-4), en el que la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana es infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla.

(1-6) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (1-1) a (1-5), en el que es posible un diagnostico diferencial de infeccion respiratoria causada por infeccion vlrica.

(1-7) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (1-1) a (1-6), en el que, ademas de la medicion de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto, se realiza al menos un tipo de ensayo de microorganismo causante.

(1-8) El procedimiento de acuerdo con el anterior (1-7), en el que el ensayo del microorganismo causante es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en ensayo de frotis tenido, ensayo de antlgeno de virus de la gripe, adenovirus, Legionella, Chlamydia, Mycoplasma, Aspergillus, Candida, Cryptococcus, citomegalovirus, o Pneumococcus, y el ensayo de cultivo de sangre, esputo o fluido de lavado broncoalveolar.

La presente invencion proporciona los siguientes procedimientos para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico:

(2-1) Un procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico, que

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comprende: 1) medir sCD14-ST en muestra de orina obtenidas de pacientes.

(2-2) El procedimiento de acuerdo con el anterior (2-1) que comprende adicionalmente la etapa:

2) determinar si los pacientes estan afectados o no con infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana usando como indicacion valores medidos de sCD14-ST en las muestras.

(2-3) El procedimiento de acuerdo con el anterior (2-1) que comprende adicionalmente las siguientes etapas:

2) comparar los valores medidos de sCD14-ST en las muestras con un valor normal; y

3) determinar si los valores medidos de las muestras son mayores que el valor normal.

(2-4) El procedimiento de acuerdo con el anterior (2-3), en el que, como valor normal, se usa un valor promedio de valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT.

(2-5) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (2-1) a (2-4), en el que la infeccion es infeccion del tracto respiratoria inferior o neumonla.

La presente invention proporciona los siguientes procedimientos para determinar el momento adecuado de la finalization de la administration de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el anti bi otico.

(3-1) Un procedimiento para determinar el momento adecuado de finalizacion de la administracion de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el antibiotico, en el que como indicacion se usa un valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida del paciente.

(3-2) El procedimiento de acuerdo con el anterior (3-1) que comprende las siguientes etapas:

1) comparar el valor medido de sCD14-ST en la muestra con un valor de referencia predeterminado; y

2) cuando el valor medido de la muestra es inferior al valor de referencia predeterminado, determinar la finalizacion de la administracion del antibiotico.

(3-3) El procedimiento de acuerdo con el anterior (3-2), en el que, como valor de referencia predeterminado, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + DT.

(3-4) Un procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico de pacientes con infeccion respiratoria que reciben el antibiotico usando los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes como indicaciones.

(3-5) El procedimiento de acuerdo con el anterior (3-4) que comprende las siguientes etapas:

1) comparar los valores medidos de sCD14-ST en muestras con un valor de referencia predeterminado; y

2) cuando los valores medidos de las muestras son inferiores al valor de referencia predeterminado, determinar la finalizacion de la administracion del antibiotico.

(3-6) El procedimiento de acuerdo con el anterior (3-5), en el que, como valor de referencia predeterminado, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + DT.

(3-7) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (3-1) a (3-6) en el que la infeccion respiratoria es infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla.

La presente invencion proporciona las siguientes composiciones para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana.

(4-1) Una composition para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende un antibiotico como ingrediente activo, en la que la composicion se usa de modo que se mide sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente sospechoso de tener infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, se compara el valor medido con un valor normal y cuando el valor medido en la muestra es mayor que el valor normal, la composicion se administra al paciente. (4-2) La composicion de acuerdo con el anterior (4-1) para su uso en un procedimiento de acuerdo con el anterior (4-1), en el que, como valor normal, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT.

(4-3) La composicion de acuerdo con el anterior (4-1) para su uso en un procedimiento de acuerdo con el anterior (4-1), en el que se mide sCD14-ST en muestras de orina durante un periodo de administracion en el tiempo, y cuando un valor medido es inferior a un valor predeterminado, se finaliza la administracion de la composicion. (4-4) La composicion de acuerdo con el anterior (4-1) para su uso en un procedimiento de acuerdo con el anterior (4-3), en el que, como valor normal, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT y como valor de referencia predeterminado un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + DT.

(4-5) La composicion de acuerdo con el anterior (4-1) para su uso en un procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (4-1) a (4-4), en la que la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana es infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla.

(3-4) Un procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico de pacientes

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con infeccion respiratoria que reciben el antibiotico usando los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes como indicaciones.

(3-5) Un procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administration de un antibiotico de pacientes con infeccion respiratoria que reciben el antibiotico, que comprende las siguientes etapas de:

1) medir sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes;

2) comparar los valores medidos de sCD14-ST en muestras con un valor de referencia predeterminado; y

3) cuando los valores medidos de las muestras son inferiores al valor de referencia predeterminado, determinar la finalization de la administracion del antibiotico.

La presente invention proporciona los siguientes procedimientos de tratamiento de infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana.

(4-1) Un procedimiento para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende las siguientes etapas de:

1) medir sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes;

2) seleccionar pacientes para recibir un antibiotico usando como indication los valores medidos de sCD14-ST en las muestras; y

3) administrar el antibiotico a los pacientes seleccionados.

(4-2) El procedimiento de acuerdo con el (4-1) anterior, en el que la etapa de selection de los pacientes para recibir un antibiotico, usando como indicacion los valores medidos de sCD14-ST en las muestras, comprende las siguientes etapas de:

1) comparar los valores medidos de sCD14-ST en las muestras con un valor normal; y

2) seleccionar pacientes para recibir un antibiotico cuyos valores medidos en las muestras son mayores que el nivel normal.

(4-3) El procedimiento de acuerdo con el (4-2) anterior, en el que, como valor normal, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT.

(4-4) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (4-1) a (4-3), que comprende adicionalmente las siguientes etapas de:

1) medir en el tiempo sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes que reciben un antibiotico;

3) cuando los valores medidos de las muestras son inferiores al valor de referencia predeterminado, determinar la finalizacion de la administracion del antibiotico.

(4-5) El procedimiento de acuerdo con el (4-4) anterior, en el que, como valor de referencia predeterminado, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + DT.

(4-6) El procedimiento de acuerdo con cualquiera de los anteriores (4-1) a (4-5), en el que la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana es infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla.

La presente invencion proporciona las siguientes composiciones para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana.

(5-1) Una composition para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende un antibiotico como ingrediente activo, en la que la composicion se usa de modo que se mide sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente sospechoso de tener infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, el valor medido se compara con un valor normal y cuando el valor medido en la muestra es mayor que el valor normal, se administra la composicion al paciente.

(5-2) La composicion para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de acuerdo con el anterior (5-1), en la que, como valor normal, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT.

(5-3) Una composicion para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende un antibiotico como ingrediente activo, en la que la composicion se usa de modo que se mide sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente sospechoso de tener infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, el valor medido se compara con un valor normal y cuando el valor medido en la muestra es mayor que el valor normal, se administra la composicion al paciente, y se mide sCD14-ST en muestras de orina durante un periodo de administracion en el tiempo y cuando el valor medido es inferior a un valor predeterminado, se finaliza la administracion de la composicion.

(5-4) La composicion para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de acuerdo con el

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anterior (5-3), en la que, como valor normal, se usa un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + 2 DT y como valor de referencia predeterminado un valor promedio de los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales + DT.

(5-5) La composition para tratar una infection respiratoria asociada con infection bacteriana de acuerdo con cualquiera de los anteriores (5-1) a (5-4), en la que la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana es infeccion del tracto respiratoria inferior o neumonla.

(6) El procedimiento, marcador o composicion de acuerdo con cualquiera de los anteriores (1-1) a (5-5) en el que, en la medicion de sCD14-ST en la muestra de orina, un valor promedio de los valores medidos de pacientes con neumonla asociada con infeccion bacteriana es mayor que el de sujetos normales, y un valor promedio de los valores medidos de pacientes con neumonla vlrica es inferior al de sujetos normales.

(7) El procedimiento, marcador o composicion de acuerdo con cualquiera de los anteriores (1-1) a (6) en el que, con respecto a la medicion de sCD14-ST en la muestra de orina, se mide la concentration de sCD14-ST en una muestra de sangre obtenida del mismo paciente y despues se comparan los dos valores medidos entre si.

Efectos de la invencion

De acuerdo con la presente invention, usando como indication un valor medido de sCD14-ST en orina, llega a ser posible seleccionar apropiadamente pacientes con infeccion respiratoria a los que se tiene que administrar antibiotico, y tambien ajustar el periodo de administration del antibiotico. Los antibioticos deben administrarse a las enfermedades con participation de infeccion bacteriana. Midiendo la concentracion de sCD14-ST en orina, los pacientes que tienen infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana pueden detectarse con alta especificidad y/o alta sensibilidad. Ademas, determinando el momento adecuado para la finalization de la administracion de un antibiotico usando como indicacion un valor medido de sCD14-ST en orina, el periodo de administracion del antibiotico puede reducirse. El uso apropiado de un antibiotico para infeccion respiratoria, usando como indicacion un valor medido de sCD14-ST en orina, es util porque posibilita la supresion de la aparicion de bacterias resistentes a multiples farmacos, una reduction en el periodo de tratamiento, una reduction en la cantidad del antibiotico usado y una reduccion en los costes medicos, sin alterar la seguridad y utilidad del mismo.

Breve descripcion de los dibujos

[Figura 1] La figura 1 es una vista que ilustra una curva patron del sistema de medicion de sCD14-ST producido en el ejemplo 1.

[Figura 2] La figura 2 es una vista que ilustra una distribucion de las concentraciones de sCD14-ST en orina de pacientes con neumonla medidas en el ejemplo 2. El eje horizontal indica la cantidad de dlas que han pasado desde el diagnostico de neumonla hasta la recogida de las muestras y el eje longitudinal indica la concentracion de sCD14-ST en orina. En la figura, la llnea solida indica un valor promedio (3338 pg/ml) de sujetos sanos y la llnea de puntos indica un valor promedio + 2 DT (5758 pg/ml) de sujetos sanos.

[Figura 3] La figura 3 es una vista que ilustra una distri bucion de las concentraciones de sCD14-ST en orina de pacientes con neumonla con infeccion bacteriana y pacientes con neumonla con infeccion vlrica, que se midieron en el ejemplo 5. El eje longitudinal indica la concentracion de sCD14-ST en orina.

[Figura 4] La figura 4 es una vista que ilustra una transition en las concentraciones de sCD14-ST en sangre y una transicion en las cantidades de sCD14-ST en orina en el caso de administracion intravenosa de sCD14-ST, que se midieron en el ejemplo 6. El eje horizontal indica el tiempo que ha pasado despues de completarse la administracion. El eje longitudinal izquierdo indica la cantidad de sCD14-ST en orina y el eje longitudinal derecho indica la concentracion de sCD14-ST en sangre.

Descripcion de las realizaciones

A partir de ahora en el presente documento, la presente invencion se describira en detalle

1. sCD14-ST

sCD14-ST (sobrenombre: presepsina) es una especie molecular de CD14 soluble. sCD14-ST se caracteriza porque el peso molecular medido por sDS-PAGE en condiciones no reductoras es 13 ± 2 kDa y retiene una parte N-terminal de CD14. Ademas, cuando dicha sCD14-ST se compara con la CD14 de longitud completa, tiene una secuencia de aminoacidos que comprende una deletion significativa en el lado C-terminal de la misma y las dos protelnas anteriores son diferentes entre si en terminos de conformation. Por tanto, muestran diferente inmunogenicidad. Por tanto, las dos protelnas pueden distinguirse entre si basandose en los anticuerpos a los que se unen. sCD14-ST tiene la propiedad de unirse especlficamente a un anticuerpo producido usando un peptido que consiste en los 16 restos de aminoacido mostrados en la SEQ ID NO: 2 como antlgeno. Ademas, sCD14-ST puede tener una o mas caracterlsticas dadas cualesquiera seleccionadas de unirse especlficamente a un peptido que consiste en los aminoacidos en las posiciones 17 a 26 de la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID NO: 3, de no unirse a un anticuerpo 3C10, de no unirse a un anticuerpo MEM-18, de no tener capacidad de union a LPS y de poder obtenerse de sangre humana. Ademas, sCD14-ST se caracteriza porque tiene la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID NO: 1 como secuencia N-terminal. Mas especlficamente sCD14-ST puede especificarse por las caracterlsticas de que el extremo N-terminal de sCD14-ST es el aminoacido en la position 1 de la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID NO: 3 y de que el extremo C-terminal de la misma es uno cualquiera de los

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aminoacidos en las posiciones 59 a 90 de la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID NO: 3. Dicha sCD14- ST se divulga en detalle en la publicacion internacion WO2005/108429. El termino "sCD14-ST" se usa en la presente memoria descriptiva para indicar sCD14-ST humana, salvo que se especifique lo contrario.

Para la medicion de sCD14-ST en una muestra de orina, puede usarse un sistema de medicion inmunologico para detectar especlficamente sCD14-ST, que se divulga en la publicacion internacional W02004/044005 o la publicacion internacional W02005/108429, por ejemplo. Especlficamente, puede usarse un sistema de inmunoensayo de tipo sandwich que comprende una combinacion de un anticuerpo producido usando un peptido que consiste en los 16 restos de aminoacido mostrados en la SEQ ID NO: 2 como antlgeno con un anticuerpo que se une a un peptido que consiste en los aminoacidos en las posiciones 17 a 26 de la secuencia de aminoacidos mostrada en la SEQ ID NO: 3 o con un anticuerpo competitivo para el anticuerpo mencionado anteriormente (un anticuerpo F1106-13-3 o un anticuerpo F1031-8-3).

El valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina puede indicarse generalmente como una concentracion de sCD14-ST en orina. Tras el calculo de la concentracion de sCD14-ST en orina, el valor medido de sCD14-ST puede corregirse basandose en la concentracion de la orina de acuerdo con la correccion de creatinina o similar. Ademas, el valor medido de sCD14-ST puede ser uno cualquiera de un valor cuantitativo, un valor semicuantitativo y un valor cualitativo. Cuando se usa dicho valor semicuantitativo, la concentracion de sCD14-ST puede indicarse como una fase de 0, 1, 2 y 3, o de +, ++ y +++. Como esta fase se correlaciona con la concentracion cuantitativa de sCD14-ST, puede determinarse si la concentracion de sCD14-ST obtenida es mayor o no que el valor de referencia predeterminado basandose en la correlation de la fase semicuantitativa con la concentracion cuantitativa de sCD14- ST. A parte de eso, en el caso de un ensayo semicuantitativo, el valor inferior al valor de referencia puede establecerse a una fase de 0 o - (menos). Cuando se usa un valor cuantitativo, el valor inferior al valor de referencia puede establecerse en negativo y el valor mayor que el valor de referencia, puede establecerse en positivo.

sCD14-ST de orina significa sCD14-ST en sangre que se ha eliminado en la orina. La sCD14-ST en sangre se elimina de forma relativamente rapida en la orina despues de haberse generado. Ademas, como sCD14-ST contenida en la sangre en circulation se concentra y despues se elimina en orina, la concentracion de sCD14-ST en orina es mayor que la concentracion de sCD14-ST en sangre. Por consiguiente, usando como indicacion el valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina, puede detectarse de forma sensible la presencia o ausencia de infection bacteriana en organos respiratorios.

2. Procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana

La presente invention proporciona un procedimiento para detectar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto.

Los ejemplos preferentes de infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana incluyen infeccion del tracto respiratorio inferior y neumonla.

La infeccion del tracto respiratorio inferior incluye infeccion aguda del tracto respiratorio inferior e infeccion cronica del tracto respiratorio inferior. La infeccion aguda del tracto respiratorio inferior incluye traqueltis aguda, bronquitis aguda y bronquiolitis aguda. La mayorla de estas enfermedades se desarrollan como resultado de la expansion de la infeccion vlrica del tracto respiratorio inferior al tracto respiratorio superior. En algunas de estas enfermedades, despues tiene lugar una infeccion secundaria por bacterias. Cuando se encuentran los slntomas de dicha infeccion secundaria por bacterias, se aplica la administration de antibioticos. La infeccion cronica del tracto respiratorio inferior es una afeccion patologica en que se ha encontrado infeccion bacteriana persistente en el tracto respiratorio inferior que tiene trastornos organicos causados por bronquiectasia o enfermedad pulmonar obstructiva cronica, e incluye infeccion persistente y exacerbation aguda. Las enfermedades que causan trastornos organicos al tracto respiratorio inferior incluyen bronquiectasia, enfermedad pulmonar obstructiva cronica, bronquitis cronica, panbronquiolitis difusa, tuberculosis pulmonar infrecuente, neumoconiosis, infeccion micobacteriana no tuberculosa, aspergilosis broncopulmonar alergica, fibrosis pulmonar y asma bronquial cronica. En ambos casos de infeccion persistente y exacerbacion aguda, se aplica la administracion de antibioticos.

La neumonla incluye neumonla extrahospitalaria y neumonla adquirida en el hospital. En la presente invencion, es preferente la neumonla extrahospitalaria.

El tipo de sujeto no esta particularmente limitado en el presente documento. Un sujeto preferente es una persona sospechosa de tener infeccion respiratoria basandose en los hallazgos cllnicos. Dichos hallazgos cllnicos incluyen al menos disnea o toses. Ademas, los hallazgos cllnicos preferentes incluyen al menos uno seleccionado del grupo que consiste en expectoration, dolor toracico, sibilancias, sombra en el examen toracico por rayos-X, fiebre y recuento de leucocitos.

El procedimiento para la detection de infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de la presente invencion se caracteriza porque comprende las siguientes etapas de: 1) medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto; y 2) determinar si el sujeto esta afectado o no con infeccion espiratoria asociada con infeccion bacteriana usando como indication un valor medido de sCD14-ST en la muestra. Mas especlficamente, la etapa 2) mencionada anteriormente puede comprender las siguientes etapas de: 3) comparar un valor medido de sCD14-ST

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en la muestra con un valor normal; y 4) determinar si el valor medido de la muestra es mayor que el valor normal.

Comparando un valor medido de sCD14-ST en la muestra con el valor de referencia predeterminado, pude determinarse si el sujeto tiene o no infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana. El valor de referencia usado en el procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de la presente invencion es preferentemente un valor normal que se ha establecido basandose en el valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto sano. Como dicho valor normal, puede usarse un valor promedio de los resultados de medicion de sCD14-ST en las muestras de orina de sujetos sanos o un valor normalizado por definicion del alcance, etc. Cuando el valor medido de una muestra obtenida de un sujeto sano es casi igual que el valor del fondo en un sistema de medicion, puede usarse un valor promedio de los valores de fondo en el sistema de medicion o un valor normalizado por definicion del alcance, etc. El valor de fondo en el sistema de medicion significa un valor medido obtenido en un caso en que no se ha anadido una muestra, sino un tampon, una solucion de ensayo o similar al sistema de medicion. Como valor obtenido por normalizacion de los valores medidos de las muestras obtenidas de sujetos, puede usarse un valor promedio + 0,5 DT a + 5 DT (DT: desviacion tlpica) de los valores medidos de sujetos sanos, un percentil 5 a 95, 10 a 90, 15 a 85 o 25 a 75 de los valores medidos de sujetos sanos o similares. Un valor preferente es un valor promedio + DT, + 2 DT o + 3 DT de los valores medidos de sujetos sanos.

Tras establecer un valor normal basandose en los valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos sanos, puede usarse el valor de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente que tiene infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que se ha medido previamente, como referencia. En este caso, puede usarse un valor de corte que optimiza la sensibilidad y/o especificidad en la deteccion de una enfermedad como valor normal. Es decir, por ejemplo, 5000 pg/ml.

Cuando el valor medido de una muestra obtenida de un sujeto se compara con un valor normal y el valor medido de la muestra es mayor que el valor normal, puede determinarse que el sujeto es muy probable que este afectado con infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, concretamente, el sujeto es positivo. Ademas, segun aumenta el valor medido, puede determinarse que el grado de la enfermedad y/o la gravedad de la enfermedad, es elevada.

Como sCD14-ST se genera poco en sangre en el caso de infeccion vlrica respiratoria sin infeccion bacteriana, la concentracion de sCD14-ST en orina no aumenta, tampoco. Por tanto, midiendo sCD14-ST en una muestra de orina, puede distinguirse infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de infeccion vlrica respiratoria.

Ademas, en el procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de la presente invencion, puede realizarse al menos un ensayo de microorganismo causante, ademas de la medicion de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto. Como dicho ensayo de microorganismo causante, puede seleccionarse apropiadamente un procedimiento entre procedimientos conocidos tales como ensayo de frotis tenido, un ensayo de antlgeno y un ensayo de cultivo, y despues pueden usarse.

Ademas, en el procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de la presente invencion, puede medirse al menos un biomarcador diferente de sCD14-ST, ademas de la medicion de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto. Como dicho biomarcador diferente de sCD14-ST, puede seleccionarse un marcador adecuado entre un marcador inflamatorio, un marcador relacionado con trombosis/hemostasis, un marcador de infeccion, un marcador de neumonla intersticial, y similares y despues puede usarse. Los ejemplos preferentes de dicho biomarcador incluyen, aunque sin limitacion procalcitonina, una protelna C-reactiva (CRP) y KL-6.

El procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de la presente invencion tambien puede mencionarse como un procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico. Un sujeto en que se ha detectado una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana es un paciente que tiene alta probabilidad de estar afectado con la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana y, por tanto, el sujeto puede ser una diana preferente para administracion de antibioticos. Entre dichos pacientes sospechosos de tener infeccion respiratoria basandose en los hallazgos cllnicos, los pacientes a los que tienen que administrarse los antibioticos son aquellos que tienen infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana. Usando como indicacion un valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina, puede detectarse la presencia o ausencia de infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana y, por tanto, ha llegado a ser posible seleccionar pacientes con infeccion respiratoria a los que tienen que administrarse antibioticos. Es decir, la presente invencion proporciona un procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico, que se caracteriza porque comprende medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente. Para el procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico de la presente invencion, puede aplicarse directamente el aspecto del procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana.

3. Procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el antibiotico

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La presente invencion proporciona un procedimiento para determinar el momento adecuado de la finalizacion de la administracion de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el antibiotico, en el que como indicacion se usa un valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida del paciente.

El tipo de paciente, al que se aplica el procedimiento para determinar el momento adecuado de la finalizacion de la administracion de un antibiotico de la presente invencion, no esta particularmente limitado, siempre que sea un paciente con infeccion respiratoria al que tiene que administrarse un antibiotico. Un ejemplo preferente es un sujeto, en el que se ha detectado infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana por el procedimiento descrito en 2 anterior, y que se ha seleccionado como paciente con infeccion respiratoria al que se administra un antibiotico.

El procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico de la presente invencion se caracteriza porque comprende las siguientes etapas de: 1) medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente; y 2) determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico al paciente usando como indicacion un valor medido de sCD14-ST en la muestra obtenida. Mas especlficamente, la etapa 2) mencionada anteriormente puede comprender las siguientes etapas de:

3) comparar el valor medido de sCD14-ST en la muestra con un valor de referencia predeterminado; y 4) cuando el valor medido de la muestra es inferior al valor de referencia predeterminado, determinar la finalizacion de la administracion del antibiotico.

En el procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico de la presente invencion, cuando se mide sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente, puede medirse en el tiempo. En general, en el caso de infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, los antibioticos se administran durante un periodo de aproximadamente 5 a 14 dlas. Para reducir la carga en el paciente y evitar la aparicion de bacterias resistentes, se desea terminar la administracion de un antibiotico tan pronto como pueda confirmarse la curacion o mejora de la infeccion. Midiendo sCD14-ST en el tiempo, puede determinarse de forma mas precisa el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico. Como la concentracion de sCD14-ST en orina disminuye con prontitud con la disminucion y/o desaparicion de la infeccion bacteriana en organos respiratorios, es util como indicacion para determinar la terminacion del tratamiento. El periodo de medicion puede establecerse apropiadamente. Puede establecerse, por ejemplo, cada dla, cada dos dlas, en el 3.er dla, el 5.° dla o el 7.° dla despues del inicio de la administracion de un antibiotico.

Como se usa un valor medido de sCD14-ST en la muestra como indicacion de la presencia o ausencia de infeccion bacteriana en el paciente, cuando el valor medido de la muestra es inferior al valor de referencia predeterminado, puede determinarse que la infeccion se ha curado o mejorado, determinando de ese modo finalizar la administracion del antibiotico. El valor de referencia usado en el procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion del antibiotico de la presente invencion no esta particularmente limitado, siempre que pueda usarse para confirmar que el antibiotico ha sido eficaz. Por ejemplo, un valor que es 1/2, 1/5 o 1/10 del valor de sCD14-ST medido durante un periodo desde antes de la administracion del antibiotico hasta 24 horas despues del inicio de la administracion del antibiotico puede usarse como valor de referencia. Por el contrario, tambien puede usarse un valor normal establecido basandose en el valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto sano, como se describe en el aspecto 2 anterior, como valor de referencia. Por ejemplo, es un valor promedio + DT, + 2 DT o + 3 DT de sujetos sanos. Si el valor medido de sCD14-ST esta en el intervalo de valores normales, puede considerarse que la infeccion se ha curado o mejorado hasta un nivel equivalente a los sujetos sanos. Preferentemente, usando los valores medidos previamente de sCD14-ST en nuestras de orina obtenidas de sujetos sanos y de pacientes que tienen infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, se establecio un valor de corte de modo que pueda optimizase la sensibilidad y/o especificidad en la deteccion de una enfermedad. El valor de corte as! establecido puede usarse como valor de referencia. Es, por ejemplo 5000 pg/ml.

El procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico de la presente invencion tambien puede mencionarse como un procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico de pacientes con infeccion respiratoria que reciben el antibiotico. Determinando el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico, un paciente se convierte en una diana para la finalizacion de la administracion del antibiotico. Por tanto, el procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion del antibiotico tiene el mismo significado que el del procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico. Es decir, la presente invencion proporciona un procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico de pacientes con infeccion respiratoria que reciben el antibiotico usando valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes como indicaciones. Para el procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico de la presente invencion, puede aplicarse directamente el aspecto del procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico.

4. Procedimiento para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana

Se divulga un procedimiento para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana. El procedimiento de tratamiento se caracteriza porque comprende seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico usando como indicacion el valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto, y este es un procedimiento para tratar una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana

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administrando un antibiotico a los pacientes as! seleccionados. Especlficamente, los pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico se seleccionan por el procedimiento descrito en el aspecto 2 anterior, y el antibiotico se administra despues a los pacientes seleccionados. Ademas, el momento adecuado para finalizar la administracion de un antibiotico se determina por el procedimiento descrito en el aspecto 3 anterior, para proporcionar un tratamiento mas eficaz.

Ademas, la presente invencion proporciona una composition para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que se caracteriza porque usa un antibiotico mediante un uso que es de acuerdo con el procedimiento de tratamiento mencionado anteriormente. La composicion comprende un antibiotico como ingrediente activo. La composicion puede comprender cualquier aditivo y/o vehlculo dado farmaceuticamente aceptable, as! como una cantidad eficaz de antibiotico.

Los tipos de antibioticos usados en las invenciones de acuerdo con los aspectos descritos en 2 a 5 anteriores no estan particularmente limitados. Los antibioticos que pueden aplicarse a al menos una infeccion del tracto respiratorio inferior y/o neumonla son preferentes. Los ejemplos de dichos antibioticos incluyen antibioticos de penicilina, antibioticos de penem, antibioticos de carbapenem, antibioticos de cefem, antibioticos de monobactama, antibioticos de fosfomicina, antibioticos glucopeptldicos, antibioticos aminoglucosldicos, antibioticos de macrolido, antibioticos de cetolido, antibioticos de lincomicina, antibioticos de tetraciclina, nuevos antibioticos de quinolona, antibioticos de sulfonamida , antibioticos de oxazolidinona y antibioticos de estreptogramina. Puede seleccionarse apropiadamente uno o multiples antibioticos entres estos antibioticos y despues pueden usarse. Para la selection de antibioticos, pueden aplicarse procedimientos conocidos tales como el procedimiento descrito en la Japanese Respiratory Society, "The Japanese Respiratory Society Guidelines for Management of Adult Community-Acquired Pneumonia" (Asu no Rinsho, Vol. 19, n.° 1, pag. 41-61,2007).

A partir de ahora en el presente documento, se describira mas especlficamente la presente invencion en los siguientes ejemplos.

Ejemplos

(Ejemplo 1) Production del sistema de medicion de sCD14-ST (1-1) Preparation de anticuerpo marcado con peroxidasa

Para producir un sistema de ELISA de tipo sandwich, se marco el anticuerpo F1106-13-3 descrito en la publication internacional W02004/044005 con peroxidasa. En primer lugar, el anticuerpo F1106-13-3 se digirio con lisil endopeptidasa (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) para producir F(ab')2. Especlficamente, el anticuerpo F1106- 13-3 se dializo frente a Tris-HCl 50 mM (pH 8,5) y el anticuerpo resultante despues se mezclo con lisil endopeptidasa (en la que la relation molar fue 10:1). La mezcla obtenida se hizo reaccionar a 37 °C durante 1 hora. Despues de ello, se anadio TLCK (Sigma) al producto de reaction hasta una concentration final de 30 mM, para terminar la reaccion. Posteriormente, para retirar Fc, se anadio la solution de reaccion a una columna de protelna A (Prosep-A; Millipore) y despues se recupero un producto no adsorbido. La fraction no adsorbida as! recuperada se concentro y despues se purifico por filtration en gel (Superdex 75; GE Healthcare), de modo que se separo el F(ab')2 contenido del Fab. El F(ab')2 obtenido se concentro y despues se dializo frente a un tampon carbonato 10 mM (pH 9,5).

Posteriormente, de acuerdo con el procedimiento de Nakane y col. (J. Histochem. Cytochem., 22, 1084, 1974), se disolvio 1 mg de peroxidasa (Toyobo Co., Ltd.) en agua destilada y despues se anadio a la misma acido peryodico 100 mM disuelto en agua destilada. La mezcla obtenida se hizo reaccion a 25 °C durante 15 minutos. Despues de completarse la reaccion, se anadio etilenglicol al 1,5 % a la solucion de reaccion y despues se hizo reaccionar la mezcla obtenida a 25 °C durante 20 minutos. Despues de ello, la solucion de reaccion se dializo frente a tampon acetato 1 mM (pH 4,4). En el siguiente dla, se anadio tampon carbonato 0,2 M (pH 9,5) con respecto a 1 mg de un anticuerpo F(ab')2 F1106-13-3 y despues se mezclaron 0,8 mg de peroxidasa activada con la mezcla anterior. La mezcla as! obtenida se hizo reaccionar a 25 °C durante 2 horas. Despues, se anadieron 4 mg/ml de borohidruro sodico a la solucion de reaccion y la mezcla obtenida se hizo reaccionar adicionalmente a 4 °C durante 2 horas. La solucion de reaccion se dializo frente a PBS (pH 7,4) para obtener un anticuerpo marcado con peroxidasa. Se midio la cantidad del llquido y despues se calculo la concentracion de anticuerpo basandose en la cantidad del anticuerpo usado.

(1-2) Produccion de sistema EIA de tipo sandwich

El anticuerpo policlonal peptldico S68 descrito en la publicacion internacional W02004/044005 se diluyo con D-PBS (pH 7,4), produciendo una concentracion de 5 pg/ml y despues se anadieron 50 pl de la solucion de anticuerpo a cada pocillo de una inmunoplaca (Maxisorp; NUNC). El anticuerpo se hizo reaccionar a 4 °C durante una noche y despues se lavo con agua de intercambio de iones cinco veces. Despues de ello, se anadieron 200 pl de D-PBS que contenla StabilGuard al 0,1 % (SurModics, Inc) y Tween 20 al 0,1 % a cada pocillo para bloquearlo. Posteriormente, se uso D-PBS (pH 7,4) que contenla suero absorbido de CD14 al 1 % y BSA al 0,1 % como diluyente para preparar una serie de dilution de productos patron de protelna sCD14-ST que tienen cada uno, una concentracion de 0, 0,015, 0,031, 0,063, 0,125, 0,25, o 0,5 ng/ml. Como dicho producto patron de protelna sCD14-ST, se uso rsCD14-ST

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descrito en la publicacion de patente WO2005/108429. Se anadieron 50 pi de cada uno de la serie de dilucion de los productos patron a cada pocillo y despues se hizo reaccionar la mezcla obtenida a 25 °C durante 1 hora (una primera reaccion). Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se lavo con una solucion salina normal que contenla Tween 20 al 0,05 % cinco veces. Despues de ello, se anadieron 50 pl de un anticuerpo F(ab')2 F1106-13-3 marcado con peroxidasa que se habla diluido hasta una concentracion de 0,25 pg/ml con PBS (pH 7,4) que contenla suero de rata al 2 %, suero de raton al 1 % y Tween 20 al 0,1 % a cada pocillo. La mezcla obtenida se hizo reaccionar a 25 °C durante 1 hora (una segunda reaccion) y, despues de ello, la mezcla de reaccion se lavo cinco veces de la misma manera que se ha descrito anteriormente. Despues de ello, se anadieron 50 pl de una solucion de tetrametilbencidina (TMB, BioFix) a cada pocillo y la mezcla obtenida despues se hizo reaccionar a tempera ambiente durante 20 minutos. Despues de eso, se anadieron 50 pl de una solucion de acido sulfurico 0,5 M a la mezcla de reaccion para terminar la reaccion. Se midio la absorbancia a 450/630 nm usando un espectrofotometro de placa (Multiscan JX; Thermo Electron). Mostro la curva patron producida en la figura 1.

(Ejemplo 2) Medicion de sCD14-ST en orina

Usando el sistema EIA de tipo sandwich preparado en el ejemplo 1, se midieron las concentraciones de sCD14-ST en muestras de orina (dilucion de factor 200) de 10 sujetos normales (adquiridas de Bioreclamation, LLC) y de 6 pacientes con neumonla asociada con infeccion bacteriana (neumonla extrahospitalaria) (adquiridas de Bioreclamation, LLC). Como resultado, como se muestra en la tabla 1, el valor promedio de la concentracion de sCD14-ST en muestras de orina de sujetos normales fue 3338 pg/ml y la DT fue 1210 pg/ml. El valor promedio de las de pacientes con neumonla fue de 2591 a 7937 pg/ml. Para referencia, se midio la concentracion de sCD14-ST en una muestra de sangre que se habla recogido en la misma fecha que la de una muestra de orina obtenida de cada uno de los pacientes con neumonla. Como resultado, una fluctuacion en las concentraciones de sCD14-ST en orina se correlaciono con una fluctuacion en las concentraciones de sCD14-ST en sangre y la concentracion de sCD14-ST en orina fue mayor que la de sangre en aproximadamente 5 veces. A partir de estos resultados se asumio que sCD14-ST en sangre en circulacion se concentraba de forma relativamente rapida y se eliminaba en la orina. Como se muestra en la figura 2, en que la cantidad de dlas desde el dla del diagnostico como neumonla hasta el dla del muestreo se represento en la abscisa y la concentracion de sCD14-ST en la ordenada, cantidades mas pequenas de dlas desde el diagnostico condujeron a una mayor concentracion y las cantidades mas grandes de dlas desde el diagnostico condujeron a una concentracion menor. En general, se recomienda el inicio de la administracion de un antibiotico en 4 horas despues del diagnostico de neumonla. Por tanto, se demostro que pacientes con neumonla asociada con infeccion bacteriana tienen mayor concentracion de sCD14-ST en orina y que la mejora sintomatica por el tratamiento y la reduction en la concentracion de sCD14-ST en orina estan correlacionadas. Es decir, se demostro que, usando como indication la concentracion de sCD14-ST en orina (por ejemplo, usando un valor promedio de sujetos normales + 2 DT como valor de corte), puede detectarse una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana y pueden seleccionarse los pacientes para recibir un antibiotico. Ademas, se demostro que, cuando la concentracion de sCD14-ST en orina es inferior a un valor de referencia (por ejemplo, un valor promedio de sujetos normales + 2 DT o, para condiciones mas estrictas, un valor promedio de sujetos normales + DT), puede determinarse la finalization de la administracion de un antibiotico.

[Tabla 1]

Tabla 1

Numero de muestra: Clasificacion Cantidad de dlas que han pasado desde el diagnostico hasta la recogida de las muestras Concentracion de sCD14-ST (pg/ml)

N1: Normal - 2069

N2: Normal - 2143

N3: Normal - 2550

N4: Normal - 2994

N5: Normal - 5586

N6: Normal - 5252

N7: Normal - 2735

N8: Normal - 3771

N9: Normal - 2994

N10: Normal - 3290

S1: Neumonla 3 dlas 7937

S2: Neumonla 4 dlas 7291

S3: Neumonla 7 dlas 5552

S4: Neumonla 11 dlas 4170

S5: Neumonla 11 dlas 2591

S6: Neumonla 18 dlas 3749

(Ejemplo 3) Selection de pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico usando como indicacion la concentracion de sCD14-ST.

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Los pacientes que muestran al menos dificultad para respirar o tos como hallazgo cllnico y sospechosos de tener infeccion respiratoria, se asignan a un grupo de control para recibir tratamiento habitual con un antibiotico y un grupo de sCD14-ST para recibir tratamiento con el antibiotico usando como indicacion la concentration de sCDl4-ST. Los pacientes del grupo de control reciben el antibiotico a criterio del medico como es habitual. Los pacientes del grupo de sCD14-ST reciben el antibiotico dependiendo del valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina; cuando el valor medido de sCD14-ST es mayor que un valor normal, se recomienda la administration del antibiotico y cuando el valor medido de sCD14-ST es igual al valor normal o inferior al valor normal, no se recomienda la administracion del antibiotico.

La mejora sintomatica en ambos grupos de pacientes se evalua a las 2, 4, 6 u 8 semanas despues del inicio del estudio. Tambien se evalua la administracion del antibiotico hasta 2 o 4 semanas despues del inicio del estudio. Como information adicional, cuando es apropiado, se comprueba neumonla, bronquitis, exacerbation aguda de enfermedad pulmonar obstructiva cronica, asma bronquial, y similares de infecciones del tracto respiratorio en ambos grupos de pacientes basandose en sombras de rayos-X, analltica de sangre, ensayo de funcion respiratoria, y similares.

La mejora sintomatica se evalua como una mejora de los hallazgos cllnicos. Como puntos finales adicionales, puede anadirse la autoevaluacion por los pacientes (VAS, cuestionario QOL y similares) y los valores medidos de sCD14- ST.

Como resultado, no hay diferencia en la mejora sintomatica entre ambos grupos. Sin embargo, la administracion del antibiotico se reduce significativamente en el grupo de sCD14-ST. Ademas, se demuestra que, en el grupo de sCD14-ST, el subgrupo de pacientes con una enfermedad a menudo asociada con infeccion bacteriana (por ejemplo, neumonla) tienen un porcentaje mayor de recibir el antibiotico y el otro subgrupo de pacientes con una enfermedad raramente asociada con infeccion bacteriana (por ejemplo, asma bronquial) tienen un menor porcentaje de recibir el antibiotico.

Por lo tanto, usando como indicacion la concentracion de sCD14-ST, pueden seleccionarse apropiadamente los pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico, y puede reducirse el uso de un antibiotico (numero de pacientes para recibir el antibiotico, cantidad del antibiotico a recibir, duration a estar recibiendolo o cantidad de prescripciones) sin ser destructivo para la seguridad y la eficacia de la terapia con antibioticos.

(Ejemplo 4) Optimization de la duracion para recibir un antibiotico en pacientes con neumonla usando como indicacion la concentracion de sCD14-ST

Los pacientes cuya afeccion se diagnostica como neumonla basandose en los hallazgos cllnicos y para recibir un antibiotico se asignan a un grupo de control para recibir tratamiento habitual con el antibiotico y a un grupo de sCD14-ST para recibir tratamiento con el antibiotico usando como indicacion la concentracion de sCD14-ST. Los pacientes del grupo de control dejan de recibir el antibiotico a criterio del medico como es habitual. Los pacientes del grupo de sCD14-ST reciben el antibiotico dependiendo del valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina; cuando el valor medido de sCD14-ST es igual al valor normal o inferior al valor normal, se recomienda la finalization de la administracion del antibiotico. El valor medido de sCD14-ST se obtiene preferentemente con el tiempo (por ejemplo, cada dla despues del inicio de recibir el antibiotico).

La mejora sintomatica en ambos grupos de pacientes se evalua a las 2, 4, 6 u 8 semanas despues del inicio de la administracion del antibiotico. Tambien se evalua el periodo que ha pasado hasta que ha terminado la administracion del antibiotico. Como informacion adicional, se determina la gravedad de la neumonla en ambos grupos de pacientes.

La mejora sintomatica se evalua como una mejora de los hallazgos cllnicos. En particular, preferentemente se comprueba la cura de la neumonla. Como puntos finales adicionales, puede anadirse la autoevaluacion por los pacientes (VAS, cuestionario QOL y similares) y los valores medidos de sCD14-ST.

Como resultado, no hay diferencias en la mejora sintomatica entre ambos grupos. Sin embargo, la duracion de la administracion del antibiotico se reduce significativamente en el grupo de sCD14-ST.

Por lo tanto, usando como indicacion la concentracion de sCD14-ST, puede determinarse apropiadamente el momento adecuado para la finalizacion de la administracion del antibiotico y puede reducirse la duracion de la administracion del antibiotico sin ser destructiva para la seguridad y la eficacia de la terapia de antibioticos.

(Ejemplo 5) Medicion de sCD14-ST en orina

Las condiciones de medicion aplicada al sistema EIA de tipo sandwich preparado en el ejemplo 1 se revisaron y se cambiaron las condiciones de la primera reaction descrita en el ejemplo 1 a 25 °C durante 1 hora y las condiciones de la segunda reaccion a 25 °C durante 2 horas. Usando este sistema, se midieron las concentraciones de sCD14- ST en muestras de orina (dilution de factor 5) de 9 pacientes con neumonla asociada con infeccion bacteriana y de 2 pacientes con neumonla vlrica (adquiridas de Bioreclamation, Inc.). Como resultado, las concentraciones de sCD14-ST en orina de pacientes con neumonla asociada con infeccion bacteriana fueron de 419 a 3859 pg/ml

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(mediana, 1885 pg/ml) y las de pacientes con neumonla vlrica fueron de 115 a 517 pg/m (mediana, 316 pg/ml). Por consiguiente, las concentraciones de sCD14-ST en orina de pacientes con neumonla vlrica eran inferiores al valor promedio de sujetos normales y eran claramente inferiores a las de pacientes con neumonla asociada con infeccion bacteriana que necesita administracion del antibiotico (figura 3). Por lo tanto, se indico que medir sCD14-ST en una muestra de orina puede distinguir la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana de infeccion vlrica respiratoria.

(Ejemplo 6) Elimination de sCD14-ST de sangre en la orina

Se determino la tasa de eliminacion de sCD14-ST de la sangre en la orina. A 3 perros (perros beagle macho, de 7 u 8 meses de edad, adquiridos de Kitayama Labes Co., Ltd.), se les administro por via intravenosa sCD14-ST recombinante (rsCD14-ST descrito en el documento WO 2005/108429) a una dosis de 10 pg/kg, y se recogio la sangre y la orina en el tiempo hasta 24 horas despues de la administracion. Usando el sistema EIA de tipo sandwich descrito en el ejemplo 1, se midio la concentration de sCD14-ST en sangre y la cantidad de sCD14-ST en orina. Se calculo la cantidad de sCD14-ST en orina de acuerdo con la formula: la concentracion de sCD14-ST (pg/ml) x la cantidad de orina (ml).

La sangre se recogio antes de la administracion, 5 minutos, 10 minutos, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 4 horas y 24 horas despues de la administracion y se uso plasma centrifugado como muestra de medicion. La orina se recogio por cateterizacion uretral en condiciones sin anestesia. Toda la cantidad de orina restante en la vejiga se recogio antes de la administracion y 15 minutos, 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 150 minutos, 6 horas y 24 horas despues de la administracion. Ademas, despues de completarse la recogida de orina, se administraron por via oral 100 ml de solution salina normal a cada perro antes de la administracion de la sCD14-ST.

La figura 4 ilustra la transition en las concentraciones de sCD14-ST en sangre y la transition de las cantidades de sCD14-ST en orina. La semivida de sCD14-ST en sangre fue 25 minutos en 1 hora despues de la administracion, y despues fue de 58 minutos y, por tanto, la sCD14-ST en sangre mostro una cinetica bifasica. La concentracion de sCD14-ST en sangre 120 minutos despues de la administracion se redujo hasta aproximadamente un 6 % de la concentracion en sangre 5 minutos despues de la administracion, y se elimino completamente sCD14-ST de la sangre 24 horas despues de la administracion. La cantidad de sCD14-ST en orina alcanzo un pico en 30 minutos despues de la administracion y, despues, 150 minutos despues de la administracion, la cantidad de sCD14-ST en orina se redujo hasta aproximadamente un 4 % la del tiempo del pico. Veinticuatro horas despues de la administracion, sCD14-ST desaparecio completamente de la orina. A partir de estos resultados, queda claro que sCD14-ST en sangre empieza a eliminarse en la orina en 1 hora despues de la administracion y que la mayor parte de sCD14-ST despues se elimina incluso de la orina en 3 horas despues de la administracion. La aparicion y eliminacion de sCD14-ST en orina tiene lugar con mucha prontitud y se considera que refleja de forma sensible el movimiento de sCD14-ST generada en un cuerpo por infeccion bacteriana. Es decir, se demostro que cuando se disminuye o elimina una infeccion bacteriana en los organos respiratorios, la concentracion de sCD14-ST en orina tambien se reduce rapidamente y puede usarse apropiadamente para la determination de la finalization de la administracion de un antibiotico y similares.

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> MOCHIDA PHARMACEUTICAL CO., LTD.

<120> Diagnostico de enfermedades infecciosas del tracto respiratorio usando muestras de orina

<130> W-4725PCT

<160>3

<170> PatentIn version 3.1

<210> 1 <211 > 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 1

Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu 15 10

<210>2 <211> 16

5 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400>2

Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gin Tyr Ala Asp Thr Val Lys 15 10 15

10

<210>3 <211> 356 <212> PRT <213> Homo sapiens 15

<400> 3

Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu Asp Phe Arg Cys Val 15 10 15

Cys Asn Phe Ser Glu Pro Gin Pro Asp Trp Ser Glu Ala Phe Gin Cys 20 25 30

Val Ser Ala Val Glu Val Glu lie His Ala Gly Gly Leu Asn Leu Glu 35 40 45

Pro Phe Leu Lys Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gin Tyr Ala 50 55 60

Asp Thr Val Lys Ala Leu Arg Val Arg Arg Leu Thr Val Gly Ala Ala 65 70 75 80

Gin Val Pro Ala Gin Leu Leu Val Gly Ala Leu Arg Val Leu Ala Tyr 85 90 95

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para detectar infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende:

medir sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un sujeto.
2. El procedimiento de la reivindicacion 1, que comprende la siguiente etapa:

determinar si el sujeto esta afectado o no con infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana usando como indicacion un valor medido de sCD14-ST en la muestra.
3. El procedimiento de la reivindicacion 1, que comprende las siguientes etapas:

comparar un valor medido de sCD14-ST en la muestra con un valor normal; y determinar si el valor medido de la muestra es mayor que el valor normal.
4. Un procedimiento para seleccionar pacientes con infeccion respiratoria para recibir un antibiotico, que comprende: medir sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes.
5. El procedimiento de la reivindicacion 4, que comprende la siguiente etapa:

determinar si los pacientes estan afectados o no con infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana usando como indicacion valores medidos de sCD14-ST en las muestras.
6. El procedimiento de la reivindicacion 4, que comprende las siguientes etapas:

comparar los valores medidos de sCD14-ST en las muestras con un valor normal; y determinar si los valores medidos de las muestras son mayores que el valor normal.
7. Un procedimiento para determinar el momento adecuado para la finalizacion de la administracion de un antibiotico a un paciente con infeccion respiratoria que recibe el antibiotico, en el que como indicacion se usa un valor medido de sCD14-ST en una muestra de orina obtenida del paciente.
8. El procedimiento de la reivindicacion 7, que comprende las siguientes etapas:

comparar el valor medido de sCD14-ST en la muestra con un valor de referencia predeterminado; y

cuando el valor medido de la muestra es inferior al valor de referencia predeterminado, determinar la finalizacion

de la administracion del antibiotico.
9. Un procedimiento para seleccionar pacientes para finalizar la administracion de un antibiotico de pacientes con infeccion respiratoria que reciben el antibiotico usando valores medidos de sCD14-ST en muestras de orina obtenidas de pacientes como indicaciones.
10. El procedimiento de la reivindicacion 9, que comprende las siguientes etapas:

comparar los valores medidos de sCD14-ST en muestras con un valor de referencia predeterminado; y cuando los valores medidos de las muestras son inferiores al valor de referencia predeterminado, determinar la finalizacion de la administracion del antibiotico.
11. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que la infeccion respiratoria es infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla.
12. Una composicion para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, que comprende un antibiotico como ingrediente activo, en la que la composicion se usa de modo que se mide sCD14-ST en una muestra de orina obtenida de un paciente sospechoso de tener infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana, el valor medido se compara con un valor normal y cuando el valor medido en la muestra es mayor que el valor normal, se administra la composicion al paciente.
13. La composicion de la reivindicacion 12 para su uso en el procedimiento de la reivindicacion 12, en la que se mide sCD14-ST en muestras de orina durante un periodo de administracion en el tiempo, y cuando un valor medido es inferior al valor predeterminado, se finaliza la administracion de la composicion.
14. La composicion de la reivindicacion 12 para su uso en el procedimiento de la reivindicacion 12 o 13, en la que la infeccion respiratoria asociada con infeccion bacteriana es infeccion del tracto respiratorio inferior o neumonla.

imagen1

Concentracion de sCD14-ST en orina (pg/ml)

Fig. 2

imagen2

Cantidad de dias que han pasado despues del diagnostic*) de neumonia

Concentration de sCD14-ST en orina (pg/ml)

Fig. 3

imagen3

Infection Infection

bacteriana virica

Cantidad de sCD14-ST en orina (pg)

Fig. 4

■*0*- SCD14-ST en orina SCD14-ST en sangre

imagen4

Tiempo (min)

Concentracion de sCD14-ST en sangre (pg/ml)