ES2626392T3 - Compuestos antivirales - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula:**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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DESCRIPCION

Compuestos antivirales Antecedentes

La hepatitis C esta reconocida como una enfermedad viral cronica del hlgado que se caracteriza por enfermedad hepatica. Aunque los farmacos que se dirigen al hlgado tienen un amplio uso y han mostrado eficacia, la toxicidad y otros efectos secundarios han limitado su utilidad. Los inhibidores del virus de la hepatitis C (VHC) son utiles para limitar el establecimiento y la progresion de la infeccion por VHC asl como en ensayos de diagnostico para VHC.

Existe una necesidad de nuevos agentes terapeuticos para el VHC. En particular, existe una necesidad de agentes terapeuticos para el VHC que tenga una amplia actividad frente a genotipos del VHC (por ejemplo, los genotipos 1a, 1b, 2a, 3a, 4a). Tambien existe una necesidad en particular de agentes que sean menos susceptibles a la resistencia viral. En Antimicrobial Agents and Chemotherapy, septiembre de 2010, Volumen 54, p. 3641-3650 se han descrito mutaciones de resistencia a inhibidores para NS5A del VHC para los genotipos 1a y 1b.

Sumario

La presente divulgacion proporciona compuestos para su uso en composiciones farmaceuticas y metodos para el tratamiento de la hepatitis C (VHC). En particular, en el presente documento se proporcionan compuestos que tienen un nucleo policlclico y grupos de proteccion de 2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-ilo, compuestos que presentan propiedades beneficiosas, tales como, por ejemplo, aumento de la biodisponibilidad y/o aumento de la actividad frente a ciertos genotipos del VHC, que incluyen, pero no se limitan a, mutaciones de resistencia de los mismos (vease, por ejemplo, Tablas 1,2A y 2B).

Por consiguiente, se proporciona un compuesto de formula:

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o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La presente divulgacion tambien proporciona una composition farmaceutica que comprende un compuesto de la divulgacion o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable.

La presente divulgacion tambien proporciona una composicion farmaceutica para su uso en el tratamiento de la hepatitis C (VHC). En una realization la composicion comprende al menos un agente terapeutico adicional para el tratamiento del VHC. En una realizacion, el agente terapeutico se selecciona entre ribavirina, un inhibidor de la proteasa NS3, un inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC, un inhibidor de la alfa- glucosidasa 1, un agente hepatoprotector, un inhibidor no nucleosldico de polimerasa del VHC, o combinaciones de los mismos. En una realizacion, la composicion comprende adicionalmente un inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC. En una realizacion, el inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC se selecciona entre ribavirina, viramidina, levovirina, un L-nucleosido, o isatoribina.

En una realizacion, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto como se describe en el presente documento y al menos un inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC, y al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable. En una realizacion, la composicion comprende adicionalmente un interferon, un interferon pegilado, ribavirina o combinaciones de los mismos. En una realizacion, el inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC es sofosbuvir. En una realizacion, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto como se describe en el presente documento y al menos un inhibidor de la proteasa NS3, y al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable. En una realizacion, la composicion comprende adicionalmente sofosbuvir.

La presente divulgacion tambien proporciona una composicion farmaceutica que comprende adicionalmente un interferon o un interferon pegilado.

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La presente divulgacion tambien proporciona una composition farmaceutica que comprende adicionalmente un analogo de nucleosido.

La presente divulgacion tambien proporciona una composicion farmaceutica en la que dicho analogo de nucleosido se selecciona entre ribavirina, viramidina, levovirina, un L-nucleosido, e isatoribina y dicho interferon es a-interferon o a-interferon pegilado.

La presente divulgacion tambien proporciona un compuesto de la divulgacion para su uso en terapia medica (por ejemplo, para su uso para inhibir la actividad del VHC o para tratar una afeccion asociada con la actividad del VHC).

En el presente documento se desvelan procesos de slntesis y nuevos compuestos intermedios que son utiles para preparar compuestos de la divulgacion. Algunos de los compuestos de la divulgacion son utiles para preparar otros compuestos de la divulgacion.

En otro aspecto la divulgacion proporciona un compuesto de la divulgacion, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento profilactico o terapeutico de la hepatitis C.

Se ha encontrado que los compuestos de formula (I) poseen una actividad util frente a varios genotipos del VHC. Ademas ciertos compuestos de formula (I) presentan una potencia significativa frente a variantes resistentes en, por ejemplo, GT1.

Descripcion detallada

A continuation se hara referencia con detalle a ciertas realizaciones de la divulgacion, ejemplos de las cuales se ilustran en las estructuras y formulas adjuntas. Aunque la divulgacion se describira en conjunto con las realizaciones enumeradas, se entendera que no se pretende limitar la divulgacion a esas realizaciones. Al contrario, la divulgacion pretende cubrir todas las alternativas, modificaciones, y equivalentes, que se puedan incluir dentro del alcance de la presente divulgacion como se define en las realizaciones.

El termino "quiral" se refiere a moleculas que tienen la propiedad de no superponerse con el companero de la imagen especular, mientras que el termino "aquiral" se refiere a moleculas que son superponibles con su companero de la imagen especular.

El termino "estereoisomeros" se refiere a compuestos que tienen una constitution qulmica identica, pero que se diferencian con respecto a la disposition de los atomos o grupos en el espacio.

"Diastereomero" se refiere a un exterior y son con dos o mas centros de quiralidad y cuyas moleculas no son imagenes especulares entre si. Los diastereomero tienen diferentes propiedades flsicas, por ejemplo, puntos de fusion, puntos de ebullition, propiedades espectrales, y de actividades. Las mezclas de diastereomeros se pueden separar con procedimientos anallticos de alta resolution tales como, por ejemplo, electroforesis y cromatografla.

"Enantiomeros" se refiere a dos estereoisomeros de un compuesto que son imagenes especulares no superponibles entre si.

El termino "tratamiento" o "tratar", en la medida en la que se refiere a una enfermedad o afeccion incluye evitar que se produzca la enfermedad o afeccion, inhibir la enfermedad o afeccion, eliminar la enfermedad o afeccion, y/o aliviar uno o mas slntomas de la enfermedad o afeccion.

Las definiciones estereoqulmicas y convenciones usadas en el presente documento por lo general siguen el Dictionary of Chemical Terms de S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; y Eliel, E. y Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York. Muchos compuestos organicos existen en formas opticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de luz polarizada en el plano. En la descripcion de un compuesto opticamente activo, los prefijos (D e l) o (R y S) se usan para indicar la configuration absoluta de la molecula con respecto a su centro o centros quirales. Los prefijos d y 1 o (+) y (-) se usan para designar el signo de rotation de la luz polarizada en el plano por el compuesto, con (-) o 1 haciendo referencia a que el compuesto es levogiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrogiro. Para una estructura qulmica dada, estos estereoisomeros son identicos excepto porque son imagenes especulares entre si. Un estereoisomero especlfico tambien se puede denominar enantiomero, y una mezcla de los isomeros de este tipo a menudo se denomina mezcla enantiomerica. Una mezcla de enantiomeros a 50: se denomina mezcla racemica o racemato, que se puede producir cuando no se ha producido estereoseleccion o estereoespecificidad en una reaction o proceso qulmico. Las expresiones "mezcla racemica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantiomericas, desprovistas de actividad optica. La divulgacion incluye todos los estereoisomeros de los compuestos que se describen en el presente documento.

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Profarmacos

El termino "profarmaco", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier compuesto que cuando se administra a un sistema biologico genera un compuesto de la divulgacion que inhibe la actividad del VHC ("el compuesto inhibitorio activo"). El compuesto se puede formar a partir del profarmaco como resultado de: (i) re reaccion o reacciones qulmicas espontaneas, (ii) reaccion o reacciones qulmicas catalizadas por enzimas, (iii) fotolisis, y/o (iv) reaccion o reacciones qulmicas metabolicas.

"Resto de profarmaco" se refiere a un grupo funcional labil que se separa del compuesto inhibitorio activo durante el metabolismo, de forma sistemica, dentro de una celula, por hidrolisis, escision enzimatica, o mediante algun otro proceso (Bundgaard, Hans, "Design and Application of Prodrugs" en A Textbook of Drug Design and Development (1991), P. Krogsgaard-Larsen y H. Bundgaard, Eds. Harwood Academic Publishers, pp. 113-191). Las enzimas que son capaces de un mecanismo de activacion enzimatica con los compuestos de profarmaco de la divulgacion incluyen, pero no se limitan a, amidasas, esterasas, enzimas microbianas, fosfolipasas, colinesterasas, y fosfasas. Los restos de profarmaco pueden servir para aumentar la solubilidad, absorcion y lipofilia y para optimizar la administracion, biodisponibilidad y eficacia del farmaco. Un resto de profarmaco puede incluir un metabolismo activo o el propio farmaco.

Los restos de profarmaco a modo de ejemplo incluyen los esteres de aciloximetilo hidrollticamente sensibles o labiles -CH2Oc(=O)R99 y los carbonato de aciloximetilo -CH2OC(=O)OR99 en los que R99 alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, C6-C20 arilo o arilo C6-C20 sustituido. El ester de aciloxialquilo se usa en primer lugar como una estrategia de profarmaco para acidos carboxllicos y a continuacion fue aplicado a fosfatos y fosfonatos por Farquhar et al., (1983) J. Pharm. Sci. 72: 324; tambien en los documentos de patente de Estados Unidos N.°s 4816570, 4968788, 5663159 y 5792756. Posteriormente, el ester de aciloxialquilo se uso para administrar acidos fosfonicos a traves de las membranas celulares y para aumentar la biodisponibilidad oral. Una variante cercana del ester de aciloxialquilo, el ester de alcoxicarboniloxialquilo (carbonato), tambien puede aumentar la biodisponibilidad oral como un resto de profarmaco en los compuestos de las combinaciones de la divulgacion. Un ester de aciloximetilo a modo de ejemplo es el pivaloiloximetoxi, (POM) -CH2OC(=O)C(CH3)3. Un resto de profarmaco de carbonato de aciloximetilo a modo de ejemplo es el carbonato de pivaloiloximetilo (POC) -CH2OC(=O)OC(CH3)3.

Grupos Protectores

En el contexto de la presente divulgacion, los grupos protectores incluyen restos de profarmaco y grupos protectores qulmicos.

"Grupo protector" se refiere a un resto de un compuesto enmascara o altera las propiedades de un grupo funcional o las propiedades del compuesto como un conjunto. Los grupos protectores qulmicos y estrategias para proteccion/desproteccion se conocen bien en la tecnica. Vease por ejemplo, Protective Groups in Organic Chemistry, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991. Los grupos protectores a menudo se utilizan para enmascarar la reactividad de ciertos grupos funcionales, para ayudar en la eficacia de reacciones qulmicas deseadas, por ejemplo, formar y romper enlaces qulmicos de una manera ordenada y planificada. La proteccion de grupos funcionales de un compuesto altera otras propiedades flsicas ademas de la reactividad del grupo funcional protegido, tales como, por ejemplo, la polaridad, lipofilia (hidrofobia), y otras propiedades que se pueden medir con herramientas anallticas comunes. Los compuestos intermedios protegidos por via qulmica pueden ser por si mismos biologicamente activos o inactivos.

Los compuestos protegidos tambien pueden presentar propiedades alteradas, y en algunos casos, optimizadas in vitro e in vivo, tales como, por ejemplo, paso a traves de membranas celulares y resistencia a degradacion o secuestro enzimatico. En este papel, los compuestos protegidos con efectos terapeuticos pretendidos se pueden denominar profarmacos. Otra funcion de un grupo protector es convertir el farmaco precursor en un profarmaco, a traves de lo cual el farmaco precursor se libera despues de la conversion del profarmaco in vivo. Dado que los profarmacos activos se pueden absorber de forma mas eficaz que el farmaco precursor, los Profarmacos pueden poseer una potencia mayor in vivo que el farmaco precursor. Los grupos protectores se retiran ya sea in vitro, en el caso de los compuestos intermedios qulmicos, o in vivo, en el caso de los profarmacos. Con los compuestos intermedios qulmicos, no es particularmente importante que los productos resultantes despues de la desproteccion, por ejemplo, alcoholes, sean fisiologicamente aceptables, aunque en general es mas deseable si los productos son farmacologicamente inocuos.

Los grupos protectores estan disponibles, normalmente se conocen y se usan, y opcionalmente se usan para prevenir reacciones secundarias con el grupo protegido durante los procedimientos de slntesis, es decir, rutas o metodos para preparar los compuestos de la divulgacion. En su mayor parte, la decision sobre que grupos proteger, cuando hacerlo, y la naturaleza del grupo protector "PG" qulmico dependera de la qulmica de la reaccion a proteger frente a determinadas condiciones (por ejemplo, condiciones acidas, basicas, oxidantes, reductoras u otras condiciones) y la direccion pretendida de la slntesis. No es necesario que los PG sean, y por lo general no lo son, los mismos si el compuesto esta sustituido con multiples PG. En general, el PG se usara para proteger grupos funcionales tales como, por ejemplo, grupos carboxilo, hidroxilo, tio, o amino y para de este modo prevenir las

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reacciones secundarias o para de otro modo facilitar la eficacia de la slntesis. El orden de la desproteccion para producir grupos desprotegidos libres depende de la direccion pretendida de la slntesis y de las condiciones de la reaccion a encontrar, y se puede producir en cualquier orden segun lo determine el experto en la materia.

Diversos grupos funcionales de los compuestos de la divulgacion se pueden proteger. Por ejemplo, los grupos protectores para los grupos -OH (ya sea hidroxilo, acido carboxllico, acido fosfonico, u otros grupos funcionales) incluyen "grupos formadores de eter o ester". Los grupos formadores de eter o ester son capaces de funcionar como grupos protectores qulmicos en los esquemas de slntesis que se exponen en el presente documento. Sin embargo, algunos grupos protectores de hidroxilo y tio no son ni grupos formadores de eter ni de ester, tal como lo entenderan los expertos en la materia, y estan incluidos con amidas, que se discuten a continuacion.

En Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1991, ISBN 0471-62301-6) ("Greene") se describe un numero muy grande de grupos protectores de hidroxilo y grupos formadores de amida y las correspondientes reacciones de escision qulmica. Vease tambien Kocienski, Philip J.; Protecting Groups (Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, 1994). En particular el Capltulo 1, Protecting Groups: An Overview, paginas 1-20, Capltulo 2, Hydroxyl Protecting Groups, paginas 21-94, Capltulo 3, Diol Protecting Groups, paginas 95-117, Capltulo 4, Carboxyl Protecting Groups, paginas 118-154, Capltulo 5, Carbonyl Protecting Groups, paginas 155-184. Para grupos protectores para acido carboxllico, acido fosfonico, fosfonato, acido sulfonico y otros grupos protectores de acidos vease Greene como se establece a continuacion.

Estereoisom eros

Los compuestos de la divulgacion pueden tener centros quirales, por ejemplo, de carbono o fosforo quirales. Por lo tanto, los compuestos de la divulgacion incluyen todos los estereoisomeros, incluyendo enantiomeros, diastereomeros, y atropisomeros. Ademas, los compuestos de la divulgacion isomeros opticos enriquecidos o resueltos en cualquiera o todos los atomos quirales asimetricos. En otras palabras, los centros quirales aparentes de las representaciones se proporcionan como las mezclas no racemicas o racemicas. Las mezclas tanto racemica como diastereomericas, as! como los isomeros opticos individuales aislados o sintetizados, sustancialmente libres de sus companeros enantiomericos o diastereomericos, estan todos dentro del alcance de la divulgacion. Las mezclas racemicas se separan en sus isomeros individuales, sustancialmente isomeros opticamente puros, a traves de tecnicas bien conocidas, tales como, por ejemplo, la separacion de sales diastereomericas formadas con adyuvantes opticamente activos, por ejemplo, acidos o bases seguido de retroconversion en las sustancias opticamente activas. En la mayorla de los casos, el isomero optico deseado se sintetiza por medio de reacciones estereoespeclficas, comenzando con el estereoisomero apropiado del material de partida deseado o a traves de reacciones enantioselectivas.

Los compuestos de la divulgacion tambien pueden existir como isomeros tautomericos en ciertos casos. Aunque solo se puede representar un tautomero, todas estas formas se encuentran dentro del alcance de la divulgacion. Por ejemplo, para los sistemas de purina, pirimidina, imidazol, guanidina, amidina y tetrazol pueden existir tautomeros en-amino y todas sus posibles formas tautomericas estan dentro del alcance de la divulgacion.

Sales e Hidratos

Los ejemplos sales fisiologica o farmaceuticamente aceptables de los compuestos de la divulgacion de sales obtenidas a partir de una base apropiada, tal como, por ejemplo, un metal alcalino (por ejemplo, sodio), un metal alcalinoterreo (por ejemplo, magnesio), amonio y NX4+ (en el que X es alquilo C1-C4). Las sales fisiologicamente aceptables de un atomo de hidrogeno o un grupo amino incluyen sales de acidos carboxllicos organicos tales como, por ejemplo, acidos acetico, benzoico, lactico, fumarico, tartarico, maleico, malonico, malico, isetionico, lactobionico y succlnico; acidos sulfonicos organicos, tales como, por ejemplo, acidos metanosulfonico, etanosulfonico, bencenosulfonico y p-toluenosulfonico; y acidos inorganicos, tales como, por ejemplo, acidos clorhldrico, sulfurico, fosforico y sulfamico. Las sales fisiologicamente aceptables de un compuesto de un grupo hidroxi incluyen el anion de dicho compuesto en combination con un cation adecuado tal como, por ejemplo, Na+ y NX/ (en el que X se selecciona independientemente entre H o un grupo alquilo C1-C4).

Para uso terapeutico, las sales de principios activos de los compuestos de la divulgacion por lo general seran fisiologicamente aceptables, es decir, seran sales obtenidas a partir de un acido o base fisiologicamente aceptables. Sin embargo, las sales de acidos o bases que no son fisiologicamente aceptables tambien pueden encontrar uso, por ejemplo, en la preparation o purification de un compuesto fisiologicamente aceptable. Todas las sales, obtenidas o no a partir de un acido o base fisiologicamente aceptables, estan dentro del alcance de la presente divulgacion.

Las sales de metal se preparan por lo general haciendo reaccionar el hidroxido de metal con un compuesto de la presente divulgacion. Los ejemplos de sales de metal que se preparan de esta manera son sales que contienen Li+, Na+, y K+. Una sal de metal menos soluble se puede precipitar a partir de la solucion de una sal mas soluble mediante la adicion del compuesto metalico adecuado.

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Ademas, las sales se pueden formar a partir de la adicion de acido de ciertos acidos organicos e inorganicos, por ejemplo, HCl, HBr, H2SO4, H3PO4 o acidos sulfonicos organicos, a centros basicos, por lo general aminas, o a grupos acidos. Por ultimo, se debe entender que en el presente documento las composiciones comprenden compuestos de la divulgacion en su forma no ionizada, as! como zwitterionica, y combinaciones con cantidades estequiometricas de agua al igual que en los hidratos.

Dentro del alcance de la presente divulgacion tambien se incluyen las sales de los compuestos precursores con uno o mas aminoacidos. Cualquiera de los aminoacidos naturales o no naturales son adecuados, especialmente los aminoacidos de origen natural que se encuentran como componentes proteicos, aunque el aminoacido por lo general es uno que porta una cadena lateral con un grupo basico o acido, por ejemplo, lisina, arginina o acido glutamico, o un grupo neutro tal como, por ejemplo, glicina, serina, treonina, alanina, isoleucina, o leucina.

Metodos de Inhibicion del VHC

En el presente documento se describen metodos para inhibir la actividad del VHC que comprenden la etapa de tratar una muestra de la que se sospecha que contiene VHC con un compuesto o composicion de la divulgacion.

La etapa de tratamiento de la divulgacion comprende la adicion del compuesto de la divulgacion a la muestra o comprende la adicion de un precursor de la composicion a la muestra. La etapa de adicion comprende cualquier metodo de administracion como se ha descrito anteriormente.

Si se desea, la actividad del VHC despues de la aplicacion del compuesto se puede observar mediante cualquier metodo incluyendo metodos directos e indirectos para detectar la actividad del VHC. Para determinar la actividad del VHC se contemplan metodos cuantitativos, cualitativos y semicuantitativos. Por lo general se aplica uno de los metodos de identificacion sistematica descritos anteriormente, sin embargo, tambien se puede aplicar cualquier otro metodo tal como, por ejemplo, la observacion de las propiedades fisiologicas de un organismo vivo.

Muchos organismos contienen VHC. Los compuestos de la presente divulgacion son utiles en el tratamiento o profilaxis de afecciones asociadas con la activacion del VHC en animales o en el ser humano.

Sin embargo, en la identificacion sistematica de compuestos capaces de inhibir la actividad del VHC se deberla tener en cuenta que los resultados de los ensayos enzimaticos no siempre se pueden correlacionar con ensayos de cultivos celular. Por lo tanto, un ensayo basado en celulas por lo general deberla ser la herramienta principal de identificacion sistematica.

Formulaciones farmaceuticas

Los compuestos de la presente divulgacion se formulan con vehlculos y excipientes convencionales, que se seleccionaran de acuerdo con la practica habitual. Los comprimidos contendran excipientes, sustancias de deslizamiento, cargas, aglutinantes y similares. Las formulaciones acuosas se preparan en forma esteril, y cuando estan destinadas a su administracion por otra via distinta a la administracion oral, por lo general seran isotonicas. Todas las formulaciones contendran opcionalmente excipientes tales como, por ejemplo, los que se establecen en el Handbook of Pharmaceutical Excipients (1986). Los excipientes incluyen acido ascorbico y otros antioxidantes, agentes quelantes tales como, por ejemplo, EDTA, carbohidratos tales como, por ejemplo, dextrina, hidroxialquilcelulosa, hidroxialquilmetilcelulosa, acido estearico y similares. El pH de las formulaciones varla aproximadamente de 3 a aproximadamente 11, pero normalmente es de 7 a 10. Por lo general, el compuesto se administrara en una dosis de 0,01 miligramos a 2 gramos. En una realizacion, la dosis sera de aproximadamente 10 miligramos a 450 miligramos. Se contempla que el compuesto se puede administrar una vez, dos veces o tres veces al dla.

Aunque es posible la administracion de los principios activos de forma individual, puede ser preferente presentarlos como formulaciones farmaceuticas. Las formulaciones, tanto para uso veterinario como para uso humano, de la divulgacion comprenden al menos un compuesto de la divulgacion (denominado principio activo en el presente documento), junto con uno o mas vehlculos aceptables del mismo y opcionalmente otros ingredientes terapeuticos. El vehlculo(s) debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulacion y fisiologicamente inocuo para el receptor de los mismos.

Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para las vlas de administracion mencionadas anteriormente. Las formulaciones se pueden presentar de manera conveniente en forma de dosificacion unitaria y se pueden preparar mediante cualquiera de los metodos bien conocidos en la tecnica farmaceutica. Por lo general las tecnicas y formulaciones se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Los metodos de este tipo incluyen la etapa de poner en asociacion el principio activo con el vehlculo que constituye uno o mas ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociacion de forma uniforme e Intima el principio activo con vehlculos llquidos o vehlculos solidos finamente divididos o ambos, y a continuacion, si fuera necesario, se le da forma al producto.

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Las formulaciones de la presente divulgacion adecuadas para su administracion oral se pueden presentar como unidades separadas tales como, por ejemplo, capsulas, cocleas o comprimidos que contienen cada uno una cantidad predeterminada del principio activo; como un polvo o granulos; como una solucion o una suspension en un llquido acuoso o no acuoso; o en forma de una emulsion llquida de aceite en agua o una emulsion llquida de agua en aceite. El principio activo tambien se puede administrar como un bolo, pastilla para chupar o pasta.

Un comprimido se prepara mediante compresion o moldeado, opcionalmente con uno o mas ingredientes auxiliares. Los comprimidos formados por compresion se pueden preparar mediante la compresion del principio activo en una maquina adecuada, en forma de flujo libre tal como, por ejemplo, un polvo o granulos, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, agente tensioactivo o dispersante. Los comprimidos moldeados se pueden preparar mediante moldeado de una mezcla del principio activo en polvo humedecido con un diluyente llquido inerte en una maquina adecuada. Opcionalmente los comprimidos se pueden revestir o ranurar y opcionalmente se formulan con el fin de proporcionar una liberacion lenta o controladamente del principio activo a partir de los mismos.

Para la administracion al ojo u otros tejidos externos por ejemplo, boca y piel, las formulaciones se aplican preferentemente en forma de una pomada o crema topica que contiene el principio o principios activos en una cantidad de un 0,075 a un 20 % en p/p (incluyendo el principio o principios activos en un intervalo entre un 0,1 % y un 20 % en incrementos de un 0,1 % en p/p tales como, por ejemplo, 0,6 % en p/p, 0,7 % en p/p, etc.), preferentemente de un 0,2 a un 15 % en p/p y lo mas preferentemente de un 0,5 a un 10 % en p/p. Cuando se formulan en una pomada, los principios activos se pueden emplear con una base de pomada paraflnica o miscible en agua. Como alternativa, los principios activos se pueden formular en una crema con una base de crema de aceite en agua.

Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos un 30 % en p/p de un alcohol polihldrico, es decir un alcohol que tiene dos o mas grupos hidroxilo tales como, por ejemplo, propilenglicol, butano 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG 400) y mezclas de los mismos. Las formulaciones topicas pueden incluir de forma deseable un compuesto que mejore la absorcion o penetracion del principio activo a traves de la piel u otras areas afectadas. Los ejemplos de los potenciadores de penetracion dermica de este tipo incluyen dimetilsulfoxido y analogos relacionados.

La fase oleosa de las emulsiones de la presente divulgacion se puede formar a partir de ingredientes conocidos de una manera conocida. Aunque la fase puede comprender simplemente un agente emulsionante (tambien conocido como emulgente), esta comprende de forma deseable una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o tanto con una grasa como con un aceite. Preferentemente, se incluye un emulsionante hidrofilo junto con un emulsionante lipofilo que actua como estabilizante. Tambien se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. En conjunto, el emulsionante(s) con o sin estabilizante(s) constituyen la denominada cera emulsionante, y la cera junto con la que el aceite y la grasa forman la denominada base de pomada emulsionante que forma la fase oleosa dispersa de las formulaciones de crema.

Los agentes emulgentes y estabilizantes de emulsion adecuados para su uso en la formulacion de la divulgacion incluyen Tween® 60, Span® 80, alcohol cetoestearllico, alcohol bencllico, alcohol miristllico, monoestearato de glicerilo y lauril sulfato sodico.

La eleccion de aceites o grasas adecuados para la formulacion se basa en el logro de las propiedades cosmeticas deseadas. La crema debe ser preferentemente un producto no graso, que no manche y que se pueda lavar con una consistencia adecuada para evitar la fuga de los tubos u otros recipientes. Se pueden usar esteres de alquilo mono- o dibasicos de cadena lineal o ramificada, tales como, por ejemplo, diisoadipato, estearato de isocetilo, diester de propilenglicol de acidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de esteres de cadena ramificada conocidos como Crodamol CAP, siendo preferentes los ultimos tres esteres. Estos se pueden usar son los o en combinacion dependiendo de las propiedades requeridas. Como alternativa, se usan llpidos de alto punto de fusion tales como, por ejemplo, parafina blanda de color blanco y/o u otros aceites minerales.

Las formulaciones farmaceuticas de la presente divulgacion comprenden uno o mas compuestos de la divulgacion junto con uno o mas vehlculos o excipientes farmaceuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapeuticos. Las formulaciones farmaceuticas que contienen el principio activo pueden estar en cualquier forma adecuada para el metodo de administracion pretendido. Cuando se utilizan para un uso oral se pueden preparar por ejemplo, comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos dispersables o granulos, emulsiones, capsulas duras o blandas, jarabes o elixires. Las composiciones destinadas a un uso oral pueden se preparar de acuerdo con cualquier metodo conocido en la tecnica para la fabricacion de composiciones farmaceuticas y las composiciones de este tipo pueden contener uno o mas agentes incluyendo agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar una preparacion de sabor agradable. Son aceptables los comprimidos que contienen el principio activo en mezcla con un excipiente no toxico farmaceuticamente aceptable que son adecuados para la fabricacion de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como, por ejemplo, carbonato calcico o sodico, lactosa,

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monohidrato de lactosa, croscarmelosa sodica, povidona, fosfato calcico o sodico; agentes de granulacion y disgregantes, tales como, por ejemplo, almidon de maiz, o acido algmico; agentes aglutinantes, tales como, por ejemplo, celulosa, celulosa microcristalina, almidon, gelatina o goma arabiga; y agentes lubricantes, tales como, por ejemplo, estearato de magnesio, acido estearico o talco. Los comprimidos pueden estar sin revestir o se pueden revestir mediante tecnicas conocidas, incluyendo microencapsulacion para retrasar la desintegracion y la adsorcion en el tracto gastrointestinal y, de este modo, proporcionar una accion sostenida durante un periodo de tiempo mas largo. Por ejemplo, se puede usar un material de retardo del tiempo, tal como, por ejemplo, monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera.

Las formulaciones para uso oral tambien se pueden presentar como capsulas de gelatina dura en las que el principio activo se mezcla con un diluyente solido inerte, por ejemplo fosfato calcico o caolin, o como capsulas de gelatina blanda en las que el principio activo se mezcla con agua o un medio oleoso, tal como, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina liquida o aceite de oliva.

Las suspensiones acuosas de la divulgacion contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabricacion de suspensiones acuosas. Los excipientes de este tipo incluyen un agente de suspension, tal como, por ejemplo, carboximetilcelulosa sodica, metilcelulosa, hidroxipropil metilcelulosa, alginato sodico, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arabiga, agentes dispersantes o humectantes tales como, por ejemplo, fosfatida de origen natural (por ejemplo, lecitina), un producto de condensacion de un oxido de alquileno con un acido graso (por ejemplo, estearato de polioxietileno), un producto de condensacion de oxido de etileno con un alcohol alifatico de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilenooxicetanol), un producto de condensacion de oxido de etileno con un ester parcial obtenido a partir de un acido graso y un hexitol anhidrido (por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitan). La suspension acuosa tambien puede contener uno o mas conservantes tales como, por ejemplo, p-hidroxi-benzoato de etilo o n-propilo, uno o mas agentes colorantes, uno o mas agentes saborizantes y uno o mas agentes edulcorantes, tales como, por ejemplo, sacarosa o sacarina.

Las suspensiones oleosas se pueden formular suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, tal como, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sesamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como, por ejemplo, parafina liquida. Las suspensiones orales pueden contener un agente espesante, tal como, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetilico. Para proporcionar una preparacion oral de sabor agradable se pueden anadir agentes edulcorantes, tales como, por ejemplo, los que se han mencionado anteriormente, y agentes saborizantes. Estas composiciones se pueden conservar mediante la adicion de un antioxidante tal como, por ejemplo, acido ascorbico.

Los polvos dispersables y granulos de la divulgacion adecuados para la preparacion de una suspension acuosa mediante la adicion de agua proporciona el principio activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspension y uno o mas conservantes. Como ejemplos de los agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspension adecuados se usan los desvelados anteriormente. Tambien pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes.

Las composiciones farmaceuticas de la divulgacion tambien pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuete, un aceite mineral, tal como, por ejemplo, parafina Kquida, o una mezcla de los mismos. Los agentes emulgentes adecuados incluyen gomas de origen natural, tales como, por ejemplo, goma arabiga y goma de tragacanto, fosfatidas de origen natural, tales como, por ejemplo, lecitina de soja, esteres o esteres parciales obtenidos a partir de acidos grasos y anhidridos de hexitol, tales como, por ejemplo, monooleato de sorbitan, y productos de condensacion de estos esteres parciales con oxido de etileno, tales como, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitan. La emulsion tambien puede contener agentes edulcorantes y saborizantes. Los jarabes y elixires se pueden formular con agentes edulcorantes, tales como, por ejemplo, glicerol, sorbitol o sacarosa. Las formulaciones de este tipo tambien pueden contener un demulcente, un conservante, un aromatizante o un agente colorante.

Las composiciones farmaceuticas de la divulgacion tambien pueden estar en forma de una preparacion inyectable esteril, tal como, por ejemplo, una suspension acuosa u oleaginosa esteril inyectable. Esta suspension se puede formular de acuerdo con la tecnica conocida usando los agentes de dispersion o humectantes adecuados y agentes de suspension que se han mencionado anteriormente. La preparacion inyectable esteril tambien puede ser una solucion o suspension inyectable esteril en un diluyente o disolvente no toxico parenteralmente aceptable, tal como, por ejemplo, una solucion en 1,3-butanodiol o se puede preparar como un polvo liofilizado. Entre los vehiculos y disolventes aceptables que se pueden usar se encuentran el agua, solucion de Ringer y solucion isotonica de cloruro sodico. Ademas, de forma convencional se pueden usar aceites fijos esteriles como un medio disolvente o de suspension. Para este fin se puede usar cualquier aceite no volatil blando incluyendo mono- o digliceridos sinteticos. Ademas, los acidos grasos tales como, por ejemplo, el acido oleico se puede usar del mismo modo en la preparacion de agentes inyectables.

La cantidad de principio activo que se puede combinar con el material de vehiculo para producir una forma de dosificacion individual variara dependiendo del hospedador tratado y del modo de administracion en particular. Por ejemplo, una formulacion de liberacion en el tiempo para su administracion oral a seres humanos puede contener de

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aproximadamente 1 a 1000 mg de material activo combinado con una cantidad apropiada y conveniente de material de vehlculo que puede variar de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 95 % de las composiciones totales (peso:peso). La composicion farmaceutica se puede preparar para que proporcione cantidades que se puedan medir facilmente para su administration. Por ejemplo, una solution acuosa destinada a infusion intravenosa puede contener de aproximadamente 3 a 500 gig del principio activo por mililitro de solucion para que se pueda producir la infusion de un volumen adecuado a una velocidad de aproximadamente 30 ml/hr.

Las formulaciones adecuadas para su administracion al ojo incluyen gotas oculares en las que el principio activo se disuelve o se suspende en un vehlculo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el principio activo. El principio activo preferentemente esta presente en las formulaciones de este tipo en una concentration de un 0,5 a un 20 %, de forma ventajosa de un 0,5 a un 10 % en particular aproximadamente un 1,5 % en p/p.

Las formulaciones adecuadas para administracion topica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden el principio activo en una base de sabor, normalmente sacarosa y goma arabiga o tragacanto; pastillas que comprenden el principio activo en una base inerte tal como, por ejemplo, gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arabiga; y enjuagues bucales que comprenden el principio activo en un vehlculo llquido adecuado.

Las formulaciones para administracion rectal se pueden presentar en forma de un supositorio con una base adecuada que comprende por ejemplo manteca de cacao o un salicilato.

Las formulaciones adecuadas para administracion intrapulmonar o nasal tienen un tamano de partlcula por ejemplo en el Intervalo de 0,1 a 500 micrometros (incluyendo tamanos de partlcula en un intervalo entre 0,1 y 500 micrometros en incrementos de micrometres, por ejemplo, 0,5, 1, 30 micrometres, 35 micrometres, etc.), que se administra mediante inhalation rapida a traves del conducto nasal o por inhalation a traves de la boca para llegar a los sacos alveolares. Las formulaciones adecuadas incluyen soluciones acuosas u oleosas del principio activo. Las formulaciones adecuadas para la administracion de aerosol o polvo seco se pueden preparar de acuerdo con metodos convencionales y se pueden administrar con otros agentes terapeuticos tales como, por ejemplo, compuestos usados hasta el momento en el tratamiento o profilaxis de afecciones asociadas con la actividad del VHC.

Las formulaciones adecuadas para administracion vaginal se pueden presentar como supositorios vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverization que contienen ademas del principio activo tales vehlculos ya que en la tecnica se sabe que son apropiados.

Las formulaciones adecuadas para administracion parenteral incluyen soluciones para inyeccion esteriles no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, agentes bacteriostaticos y solutos que hacen que la formulation sea isotonica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes.

Las formulaciones se presentan en envases de una sola dosis o de multiples dosis, por ejemplo ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en una condition de secado por congelation (liofilizado) que solamente requiere la adicion del vehlculo llquido esteril, por ejemplo agua para inyeccion, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea se preparan a partir de polvos, granulos y comprimidos esteriles del tipo que se ha descrito anteriormente. Las formulaciones de dosificacion unitaria preferentes son aquellas que contienen una dosis diaria o una subdosis diaria unitaria, como se ha indicado anteriormente en el presente documento, o una fraction apropiada de la misma, del principio activo.

Se deberla entender que ademas de los ingredientes mencionados anteriormente en particular, las formulaciones de la presente divulgation pueden incluir otros agentes convencionales en la tecnica teniendo en cuenta el tipo de formulacion en cuestion, por ejemplo los adecuados para administracion oral pueden incluir agentes saborizantes.

La divulgacion tambien proporciona composiciones veterinarias que comprenden al menos un principio activo como se ha definido anteriormente junto con un vehlculo veterinario del mismo.

Los vehlculos veterinarios son materiales utiles con la finalidad de administrar la composicion y pueden ser materiales solidos, llquidos o gaseosos que de otro modo son inertes o aceptables en la tecnica veterinaria y son compatibles con el principio activo. Estas composiciones veterinarias se pueden administrar por via oral, por via parenteral o mediante cualquier otra via deseada.

Los compuestos de la divulgacion tambien se pueden formular para proporcionar la liberation controlada del principio activo para permitir una dosificacion menos frecuente para mejorar el perfil de farmacocinetica o toxicidad del principio activo. Por consiguiente, la divulgacion tambien proporciona composiciones que comprenden uno o mas compuestos de la divulgacion formulados para liberacion sostenida o controlada.

La dosis eficaz de principio activo depende al menos de la naturaleza de la afeccion que se esta tratando, toxicidad, si el compuesto se esta usando de forma profilactica (dosis mas bajas), el metodo de administracion, y la

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formulacion farmaceutica, y to determinara el experto en medicina usando estudios de aumento de dosis convencionales.

En una realizacion, el principio activo (es decir, uno o mas compuestos como se describe en el presente documento) o composicion farmaceutica que comprende el principio activo son eficaces para tratar uno o mas sujetos infectados con el genotipo 1 del VHC, sujetos infectados con el genotipo 2 del VHC, sujetos infectados con el genotipo 3 del VHC, sujetos infectados con el genotipo 4 del VHC, sujetos infectados con el genotipo 5 del VHC, y/o sujetos infectados con el genotipo 6 del VHC. En una realizacion, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo son eficaces para tratar sujetos infectados con el genotipo 1 del VHC, incluyendo el genotipo 1a y/o el genotipo 1b. En otra realizacion, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo son eficaces para tratar sujetos infectados con el genotipo 2 del VHC, incluyendo el genotipo 2a, genotipo 2b, genotipo 2c y/o el genotipo 2d. En otra realizacion, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo son eficaces para tratar sujetos infectados con el genotipo 3 del VHC, incluyendo el genotipo 3a, genotipo 3b, genotipo 3c, genotipo 3d, genotipo 3e y/o el genotipo 3f. En otra realizacion, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo son eficaces para tratar sujetos infectados con el genotipo 4 del VHC, incluyendo el genotipo 4a, genotipo 4b, genotipo 4c, genotipo 4d, genotipo 4e, genotipo 4f, genotipo 4g, genotipo 4h, genotipo 4i y/o el genotipo 4j. En otra realizacion, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo son eficaces para tratar sujetos infectados con el genotipo 5 del VHC, incluyendo el genotipo 5a. En otra realizacion, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo eficaz para tratar sujetos infectados con el genotipo 6 del VHC, incluyendo el genotipo 6a.

En algunas realizaciones, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo se administra, ya sea solo o en combination con uno o mas agente o agentes terapeuticos para tratar el VHC (tal como un inhibidor de la proteasa NS3 del VHC o un inhibidor de la polimerasa NS5B del VHC), durante aproximadamente 24 semanas, durante aproximadamente 16 semanas, o durante aproximadamente 12 semanas, o un periodo de tiempo inferior. En otras realizaciones, el principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo se administra, ya sea solo o en combinacion con uno o mas agente o agentes terapeuticos para tratar el VHC (tal como un inhibidor de la proteasa NS3 del VHC o un inhibidor de la polimerasa NS5B del VHC), durante aproximadamente 24 semanas o menos, aproximadamente 22 semanas o menos, aproximadamente 20 semanas o menos, aproximadamente 18 semanas o menos, aproximadamente 16 semanas o menos, aproximadamente 12 semanas o menos, aproximadamente 10 semanas o menos, aproximadamente 8 semanas o menos, o aproximadamente 6 semanas o menos poco aproximadamente 4 semanas o menos. El principio activo o composicion farmaceutica que comprende el principio activo se puede administrar una vez al dla, dos veces al dla, una vez cada dos dlas, dos veces a la semana, tres veces a la semana, cuatro veces a la semana, o cinco veces a la semana.

En otras realizaciones, se consigue una respuesta biologica sostenida aproximadamente a las 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 12 semanas, o 16 semanas, o aproximadamente a las 20 semanas, o aproximadamente a las 24 semanas, o aproximadamente a los 4 meses, o aproximadamente a los 5 meses, o aproximadamente a los 6 meses, o a aproximadamente 1 ano, o a aproximadamente 2 anos.

Vfas de Administracion

Uno o mas compuestos de la divulgation (en el presente documento denominados principios activos) se administra mediante cualquier via apropiada para la afeccion a tratar. Las vlas adecuadas incluyen oral, rectal, nasal, topica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intravenosa, intradermica, intratecal y epidural), y similares. Se observara que la via preferente puede variar, por ejemplo, con la afeccion del receptor. Una ventaja de los compuestos de la presente divulgacion es que son biodisponibles por via oral y se pueden dosificar por via oral.

Terapia de Combinacion para VHC

En otra realizacion, los ejemplos mas limitantes de combinaciones adecuadas incluyen combinaciones de uno o mas compuestos de formula (I) y (A1-A4) con uno o mas interferones, ribavirina o sus analogos, inhibidores de la proteasa NS3 del VHC, inhibidores de la alfa-glucosidasa 1, agentes hepatoprotectores, inhibidores de nucleosido o nucleotido de la polimerasa NS5B del VHC, inhibidores no nucleosidos de la polimerasa NS5B del VHC, inhibidores de NS5A del vHc, agonistas de TLR-7, inhibidores de ciclofilina, inhibidores de IRES del VHC, potenciadores farmacocineticos, y otros farmacos como agentes terapeuticos para el tratamiento del VHC.

De forma mas especlfica, uno o mas compuestos de la presente, como se describe en el presente documento, se pueden combinar con uno o mas compuestos seleccionados entre el grupo que consiste en:

1) interferones, por ejemplo, rIFN-alfa 2b pegilado (PEG-Intron®), rIFN-alfa 2a pegilado (Pegasys®), rIFN-alfa 2b (Intron® A), rIFN-alfa 2a (Roferon®-A), interferon alfa (MOR-22, OPC-18, Alfaferon®, Alfanative®, Multiferon®, subalina), interferon alfacon-1 (Infergen®), interferon alfa-n1 (Wellferon), interferon alfa-n3 (Alferon®), interferon- beta (Avonex®, DL-8234), interferon-omega (omega DUROS®, Biomed® 510), albinterferon alfa-2b

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(Albuferon®), IFN alfa-2b XL, BLX-883 (Locteron®), DA-3021, interferon alfa-2b glicosilado (AVI-005), PEG- Infergen, interferon lambda PEGilado-1 (IL-29 PEGilado), y belerofon®;

2) ribavirina y sus analogos, porejemplo, ribavirina (Rebetol®, Copegus®), y taribavirina (Viramidina®);

3) inhibidores de la proteasa NS3 del VHC, por ejemplo, boceprevir (SCH-503034, SCH-7), telaprevir (VX-950), TMC435350, BI-1335, BI-1230, MK-7009, VBY-376, VX-500, GS-9256, GS-9451, BMS-605339, PHX-1766, AS- 101, YH-5258, YH5530, YH5531, ABT-450, ACH-1625, ITMN-191, AT26893, MK5172, MK6325, y MK2748;

4) inhibidores de la alfa-glucosidasa 1, por ejemplo, celgosivir (MX-3253), Miglitol, y UT-231B;

5) agentes hepatoprotectores, por ejemplo, emericasan (IDN-6556), ME-3738, GS-9450 (LB-84451), silibilina, y MitoQ;

6) inhibidores de nucleosido o nucleotido de la polimerasa NS5B del VHC, por ejemplo, R1626, R7128 (R4048), IDX184, IDX-102, BCX-4678, valopicitabina (NM-283), MK-0608, sofosbuvir (GS-7977 (anteriormente PSI-7977)), VLX-135 (anteriormente ALS-2200), e INX-189 (en la actualidad BMS986094);

7) inhibidores no nucleosidos de la polimerasa NS5B del VHC, por ejemplo, PF-868554, VCH-759, VCH-916, JTK-652, MK-3281, GS-9190, VBY-708, VCH-222, A848837, ANA-598, GL60667, GL59728, A-63890, A-48773, A-48547, BC-2329, VCH-796 (nesbuvir), GSK625433, BILN-1941, XTL-2125, ABT-072, ABT-333, GS-9669, PSI- 7792, y GS-9190;

8) inhibidores de NS5A del VHC, por ejemplo, AZD-2836 (A-831), BMS-790052, ACH-3102, ACH-2928, MK8325, MK4882, MK8742, PSI-461, IDX719, GS-5885, y A-689;

9) agonistas de TLR-7, por ejemplo, imiquimod, 852A, GS-9524, ANA-773, ANA-975 (isatoribina), AZD-8848 (DSP-3025), y SM-360320;

10) inhibidores de ciclofilina, por ejemplo, DEBIO-025, SCY-635, y NIM811;

11) inhibidores de IRES del VHC, por ejemplo, MCI-067;

12) potenciadores farmacocineticos, por ejemplo, BAS-100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350 (cobicistat), GS-9585, y roxitromicina; y

13) otros farmacos para el tratamiento del VHC, por ejemplo, timosina alfa 1 (Zadaxin), nitazoxanida (Alinea, NTZ), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02003002, actilon (CPG-10101), GS-9525, KRN-7000, civacir, GI-5005, XTL-6865, BIT225, PTX-111, ITX2865, TT-033i, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, BMS-650032, BMS-791325, Bavituximab, MDX-1106 (ONO-4538), Oglufanida, y VX-497 (merimepodib).

En otra realizacion mas, la presente solicitud desvela composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto como se describe en el presente documento, o una sal, solvato y/o ester farmaceuticamente aceptables del mismo, en combinacion con al menos un agente terapeutico adicional, y un vehlculo o excipiente farmaceuticamente aceptable.

De forma mas especlfica, el agente terapeutico adicional se puede combinar con uno o mas compuestos seleccionados entre el grupo que consiste en inhibidores no nucleosidos de la polimerasa NS5B del VHC (ABT-072 y ABT-333), inhibidores de NS5A del VHC (ACH-3102 y ACH-2928) e inhibidores de la proteasa NS3 del VHC (ABT- 450 y ACH-125).

En otra realizacion, el agente terapeutico usado en combinacion con las composiciones farmaceuticas como se describe en el presente documento puede ser cualquier agente que tenga un efecto terapeutico cuando se usa en combinacion con las composiciones farmaceuticas como se describe en el presente documento. Por ejemplo, el agente terapeutico usado en combinacion con las composiciones farmaceuticas como se describe en el presente documento puede ser interferones, analogos de ribavirina, inhibidores de la proteasa NS3, inhibidores de la polimerasa NS5B, inhibidores de la alfa-glucosidasa 1, agentes hepatoprotectores, inhibidores no nucleosidos del VHC, y otros farmacos para el tratamiento del VHC .

En otra realizacion, el agente terapeutico adicional usado en combinacion con las composiciones farmaceuticas como se describe en el presente documento es un inhibidor de ciclofilina, incluyendo por ejemplo, un inhibidor de ciclofilina desvelado en el documento WO/2013/185093. Los ejemplos no limitantes incluyen uno o mas compuestos seleccionados entre el grupo que consiste en:

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y estereoisomeros y mezclas de estereoisomeros de los mismos.

En otra realization, el agente terapeutico adicional usado en combination con las composiciones farmaceuticas como se describe en el presente documento es un inhibidor no nucleosidico de la polimerasa NS5B del VHC. Un ejemplo no limitantes incluye GS-9669.

Los ejemplos de agentes anti-VHC adicionales que se pueden combinar con las composiciones que se proporcionan en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, los que siguen a continuation:

A. interferones, por ejemplo, rIFN-alfa 2b pegilado (PEG-Intron), rIFN-alfa 2a pegilado (Pegasys), rIFN-alfa 2b (Intron A), rIFN-alfa 2a (Roferon-A), interferon alfa (MOR-22, OpC-18, Alfaferon, Alfanative, Multiferon, subalina), interferon alfacon-1 (Infergen), interferon alfa-n1 (Wellferon), interferon alfa-n3 (Alferon), interferon- beta (Avonex, DL-8234), interferon-omega (omega DUROS, Biomed 510), albinterferon alfa-2b (Albuferon), IFN alfa XL, BLX- 883 (Locteron), DA-3021, interferon alfa-2b glicosilado (AVI-005), PEG-Infergen, interferon lambda PEGilado (IL- 29 PEGilado), o belerofon, IFN alfa-2b XL, rIFN-alfa 2a, IFN alfa consenso, infergen, rebif, IFN-beta pegilado, interferon alfa oral, feron, reaferon, intermax alfa, r-IFN-beta, e infergen + actinmunerribavirina y analogos de ribavirina, por ejemplo, rebetol, copegus, VX-497, y viramidina (taribavirina);

B. inhibidores de NS5A, por ejemplo, Compuesto B (descrito a continuacion), Compuesto C (descrito a continuacion), ABT-267, Compuesto D (descrito a continuacion), JNJ-47910382, daclatasvir (BMS-790052), ABT- 267, MK-8742, EDP-239, IDX-719, PPI-668, GSK-2336805, ACH-3102, A-831, A-689, AZD-2836 (A-831), AZD- 7295 (A-689), y BMS-790052;

C. inhibidores de la polimerasa NS5B, por ejemplo, Compuesto E (descrito a continuacion), Compuesto F (descrito a continuacion), ABT- 333, Compuesto G (descrito a continuacion), ABT-072, Compuesto H (descrito a continuacion), tegobuvir (GS-9190), GS-9669, TMC647055, setrobuvir (ANA-598), filibuvir (PF-868554), VX-222, IDX-375, IDX-184, IDX-102, BI-207127, valopicitabina (NM-283), PSI-6130 (R1656), PSI-7851, BCX-4678,

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nesbuvir (HCV-796), BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, GSK625433, XTL-2125, VCH-916, JTK- 652, MK-3281, VBY-708, A848837, GL59728, A-63890, A-48773, A-48547, BC-2329, BMS-791325, y BILB-1941;

D. inhibidores de la proteasa NS3, por ejemplo, Compuesto I, Compuesto J, Compuesto K, ABT-450, Compuesto L (descrito a continuation), simeprevir (TMC-435), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-900518), vaniprevir (MK-7009), MK- 5172, danoprevir (ITMN-191), sovaprevir (ACH-1625), neceprevir (ACH-2684), Telaprevir (VX-950), VX-813, VX- 500, faldaprevir (BI-201335), asunaprevir (BMS-650032), BMS-605339, VBY- 376, PHX-1766, YH5531, BILN-2065, y BILN-2061;

E. inhibidores de la alfa-glucosidasa 1, por ejemplo, celgosivir (MX-3253), Miglitol, y UT-231B;

F. agentes hepatoprotectores, por ejemplo, IDN-6556, ME 3738, MitoQ, y LB-84451;

G. inhibidores no nucleosidos del VHC, por ejemplo, derivados de bencimidazol, derivados de benzo-1,2,4- tiadiazina, y derivados de fenilalanina; y

H. otros agentes anti-VHC, por ejemplo, zadaxina, nitazoxanida (alinea), BIVN-401 (virostat), DEBIO-025, VGX- 410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituximab, oglufanida, PYN-17, KPE02003002, actilon (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975, XTL-6865, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18, y NIM811.

El Compuesto B es un inhibidor de NS5A y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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El Compuesto C es un inhibidor de NS5A y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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El Compuesto D es un inhibidor de NS5A y se representa con la siguiente estructura qulmica:

imagen7

Vease la Publication de Estados Unidos N.° 2013/0102525 y referencias en la misma.

El Compuesto E es un inhibidor de la polimerasa NS5B Thumb II y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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5 El Compuesto F es un profarmaco inhibidor de nucleotidos disenado para inhibir la replicacion del ARN viral por la polimerasa NS5B del VHC, y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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10 El Compuesto G es un inhibidor de polimerasa del VHC y se representa con la siguiente estructura:

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Vease la Publicacion de Estados Unidos N.° 2013/0102525 y referencias en la misma.

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El Compuesto H es un inhibidor de polimerasa del VHC y se representa con la siguiente estructura:

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Vease la Publicacion de Estados Unidos N.° 2013/0102525 y referencias en la misma.

El Compuesto I es un inhibidor de proteasa del VHC y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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Vease el documento PCT/US2013/049119, presentado el 2 de julio de 2013, y referencias en el mismo.

5 El Compuesto J es un inhibidor de proteasa del VHC y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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El Compuesto K es un inhibidor de proteasa del VHC y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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El Compuesto L es un inhibidor de proteasa del VHC y se representa con la siguiente estructura qulmica:

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Vease la Publicacion de Estados Unidos N.° 2013/0102525 y referencias en la misma.

5 En una realizacion, el agente terapeutico adicional usado en combination con las composiciones farmaceuticas como se describe en el presente documento es un inhibidor de la proteasa NS3 del VHC. Los ejemplos no limitantes incluyen uno o mas compuestos seleccionados entre el grupo que consiste en:

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15 En otra realizacion, la presente solicitud proporciona un metodo para tratar la hepatitis C en un paciente humano con necesidad del mismo que comprende administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de una composition farmaceutica como se describe en el presente documento y un agente terapeutico adicional seleccionado entre el grupo que consiste en rIFN-alfa 2b pegilado, rIFN-alfa 2a pegilado, rIFN-alfa 2b, IFN alfa-2b XL, rIFN-alfa 2a, IFN alfa consenso, infergen, rebif, locteron, AVI-005, PEG-infergen, IFN-beta pegilado, interferon 20 alfa oral, feron, reaferon, intermax alfa, r-IFN-beta, infergen + actinmune, IFN-omega con DUROS, albuferon, rebetol, copegus, levovirina, VX-497, viramidina (taribavirina), A-831, A-689, NM-283, valopicitabina, R1626, PSI-6130 (R1656), HCV-796, BILB 1941, MK-0608, NM-107, R7128, VCH-759, PF-868554, GSK625433, XTL-2125, SCH- 503034 (SCH-7), VX-950 (Telaprevir), ITMN-191, y BILN-2065, MX-3253 (celgosivir), UT-231B, IDN-6556, ME 3738,

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MitoQ, y LB-84451, derivados de bencimidazol, derivados de benzo-1,2,4-tiadiazina, y derivados de fenilalanina, zadaxin, nitazoxanida (alinea), BIVN-401 (virostat), DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituximab, oglufanida, PYN-17, KPE02003002, actilon (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975 (isatoribina), XTL- 6865, ANA 971, NOV-205, tarvacina, EHC-18, y NIM811 y un vehlculo o excipiente farmaceuticamente aceptable.

En otra realizacion se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y sofosbuvir y/o GS-5885 y opcionalmente un interferon o ribavirina.

Se contempla que los agentes terapeuticos adicionales se administraran de una forma que conocida en la tecnica y la dosificacion la puede seleccionar alguien con experiencia en la materia. Por ejemplo, los agentes terapeuticos adicionales se pueden administrar en una dosis de aproximadamente 0,01 miligramos a aproximadamente 2 gramos al dla.

Metabolitos de los Compuestos

Dentro del alcance de la presente divulgacion tambien entran los productos metabolicos in vivo de los compuestos que se describen en el presente documento. Los productos de este tipo se pueden obtener, por ejemplo, a partir de la oxidacion, reduccion, hidrolisis, amidacion, esterificacion y similares del compuesto administrado, debido principalmente a procesos enzimaticos. Por consiguiente, la divulgacion incluye compuestos producidos mediante un proceso que comprende poner en contacto un compuesto de la presente divulgacion con un mamlfero durante un periodo de tiempo suficiente para producir un producto metabolico del mismo. Los productos de este tipo por lo general se identifican mediante la preparation de un compuesto radioetiquetado (por ejemplo, C14 o H3) de la divulgacion, administrandolo por via parenteral en una dosis detectable (por ejemplo, superior a aproximadamente 0,5 mg/kg) a un animal tal como, por ejemplo, rata, raton, cobaya, mono, o al ser humano, permitiendo un periodo de tipo suficiente para que se produzca su metabolismo (por lo general de aproximadamente 30 segundos a 30 horas) y aislando sus productos de conversion a partir de muestras de orina, sangre u otras muestras biologicas. Estos productos se alslan facilmente ya que estan etiquetados (otros se alslan mediante el uso de anticuerpos capaces de unirse a epltopo se sobreviven en el metabolito). Las estructuras del metabolito se determinan de una manera convencional, por ejemplo, mediante analisis de MS o RMN. En general, el analisis de los metabolitos se realiza de la misma manera que los estudios convencionales de metabolismo de farmacos bien conocidos por los expertos en la materia. Los productos de conversion, siempre y cuando no se encuentren de otro modo in vivo, son utiles en ensayos de diagnostico para la dosificacion terapeutica de los compuestos de la divulgacion incluso si no poseen actividad inhibitoria del VHC por si mismos.

Se conocen metodos para determinar la estabilidad de los compuestos en secreciones gastrointestinales sustitutas. Metodos a Modo de Ejemplo para preparar los Compuestos

La divulgacion tambien se refiere a metodos para preparar las composiciones de la divulgacion. Las composiciones se preparan mediante cualquiera de las tecnicas aplicables de slntesis organica. Muchas de las tecnicas de este tipo se conocen bien en la tecnica. Sin embargo, muchas de las tecnicas conocidas estan elaboradas en el Compendio de Metodos de Slntesis Organica (John Wiley & Sons, New York), Vol. 1, Ian T. Harrison y Shuyen Harrison, 1971; Vol. 2, Ian T. Harrison y Shuyen Harrison, 1974; Vol. 3, Louis S. Hegedus y Leroy Wade, 1977; Vol. 4, Leroy G. Wade, Jr., 1980; Vol. 5, Leroy G. Wade, Jr., 1984; y Vol. 6, Michael B. Smith; as! como en March, J., Advanced Organic Chemistry, tercera edition, (John Wiley & Sons, New York, 1985), Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry. En 9 Volumenes, Barry M. Trost, redactor jefe (Pergamon Press, New York, impresion de 1993). Otros metodos adecuados para la preparacion de compuestos de la divulgacion se describen en la Publication de Solicitud de Patente Internacional con Numero WO 2006/020276.

En los esquemas y ejemplos que siguen a continuation se proporciona un numero de metodos a modo de ejemplo para la preparacion de las composiciones de la divulgacion. Estos metodos pretenden ilustrar la naturaleza de las preparaciones de este tipo y no pretenden limitar el alcance de los metodos aplicables.

Por lo general, las condiciones de reaction tales como, por ejemplo, temperatura, tiempo de reaction, disolventes, procedimientos de tratamiento, y similares, seran los comunes en la tecnica para la reaccion en particular a realizar. El material de referencia citado, junto con el material citado en el mismo, contiene descripciones detalladas de tales condiciones. Por lo general, las temperaturas seran de -100 °C a 200 °C, los disolventes seran aproticos o proticos, y los tiempos de reaccion seran de 10 segundos a 10 dlas. Por lo general con el tratamiento consiste en la interruption de cualquiera de los reactivos que no han reaccionado seguido del reparto entre un sistema (extraction) de fase acuosa/organica y separation de la fase que contiene el producto.

Las reacciones de oxidacion y reduccion por lo general se realizan a temperaturas cercanas a la temperatura ambiente (aproximadamente 20 °C), aunque con frecuencia, para reducciones de hidruro metalico, la temperatura se reduce a 0 °C a -100 °C, los disolventes por lo general son aproticos para las reducciones y por lo general pueden ser proticos o aproticos para las oxidaciones. Los tiempos de reaccion se ajustan para conseguir las conversiones deseadas.

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Por lo general, las reacciones de condensacion se realizan a temperaturas cercanas a la temperatura ambiente, aunque para condensaciones controladas por via cinetica, sin equilibrio tambien son habituales las temperaturas reducidas (de 0 °C a -100 °C). Los disolventes pueden ser proticos (comunes en las reacciones de equilibrio) o aproticos (comunes en las reacciones controladas por via cinetica).

Las tecnicas de sintesis convencionales tales como, por ejemplo, retirada azeotropica de productos secundarios de la reaccion y el uso de condiciones de reaccion anhidras (por ejemplo, entornos de gas inerte) son comunes en la tecnica y se aplicaran cuando sean aplicables.

Los terminos "tratado", "que trata", "tratamiento", y similares, cuando se usan en relacion con una operacion de sintesis quimica, es decir, contacto, mezcla, reaccion, permitir la reaccion, poner en contacto, y otros terminos comunes en la tecnica para indicar que una o mas entidades quimicas se tratan de un modo tal que se puede convertir en una u otras entidades quimicas mas. Esto significa que "tratamiento del compuesto uno con el compuesto dos" es sinonimo de "permitir que el compuesto uno reaccione con el compuesto", "poner en contacto el compuesto uno con el compuesto dos", "hacer reaccionar el compuesto uno con el compuesto dos", y otras expresiones comunes en la tecnica de sintesis organica para indicar de manera razonable que el compuesto uno se "trato", "hizo reaccionar", "permitio que reaccionara", etc., con el compuesto dos. Por ejemplo, tratamiento indica que la manera razonable y habitual en la que se permite que los agentes quimicos organicos reaccionen. A menos que se indique de otro modo se pretenden concentraciones normales (0,01 M a 10 M, por lo general de 0,1 M a 1 M), temperaturas (de -100 °C a 250 °C, por lo general de -78 °C a 150 °C, mas habitualmente de -78 °C a 100 °C, aun mas habitualmente de 0 °C a 100 °C), recipientes de reaccion (por lo general vidrio, plastico, metal), disolventes, presiones, atmosferas (por lo general aire para el oxigeno y reacciones insensibles al agua o nitrogeno o argon para sensibles a oxigeno o agua), etc. El conocimiento de reacciones similares conocidas en la tecnica de sintesis organica se usa para seleccionar las condiciones y aparatos para el "tratamiento" en un proceso dado. En particular, a quien con una experiencia habitual en la materia de la sintesis organica selecciono las condiciones y aparatos de los que se espera razonablemente que realicen de forma satisfactoria las reacciones quimicas de los procesos descritos basados en el conocimiento en la tecnica.

Las modificaciones de cada uno de los esquemas a modo de ejemplo y en los Ejemplos (en lo sucesivo en el presente documento "esquemas a modo de ejemplo") conducen a diversos analogos de los materiales a modo de ejemplo especificos que se producen. Las menciones citadas anteriormente que describen metodos adecuados de sintesis organica se pueden aplicar a las modificaciones de este tipo.

En cada uno de los esquemas a modo de ejemplo puede ser ventajoso separar los productos de reaccion entre si y/o de los materiales de partida. Los productos deseados de cada etapa o series de etapas se separan y/o purifican (en lo sucesivo en el presente documento se separan) hasta el grado de homogeneidad deseado con las tecnicas habituales en la tecnica. Por lo general, las separaciones de este tipo implican extraccion de multiples fases, cristalizacion en un disolvente o mezcla de disolventes, destilacion, sublimacion o cromatografia. La cromatografia puede implicar cualquier numero de metodos que incluyen, por ejemplo: metodos y aparatos de cromatografia en fase inversa y en fase normal; exclusion por tamano; intercambio ionico; cromatografia liquida de presion elevada, media y baja; cromatografia analitica a pequena escala; de lecho movil simulado (SMB) y cromatografia preparativa en capa fina o gruesa, asi como tecnicas de cromatografia en capa fina y ultrarrapida a pequena escala.

Otra clase de metodos de separacion implica el tratamiento de una mezcla con un reactivo seleccionado para que se unan o para que de otro modo consiga que un producto deseado, material de partida sin reaccionar, producto secundario de reaccion, o similares se pueda separar. Los reactivos de este tipo incluyen adsorbentes o absorbentes tales como, por ejemplo, carbono activado, tamices moleculares, medios de intercambio ionico, o similares. Como alternativa, los reactivos para ser acidos en el caso de un material basico, bases en el caso de un material acido, reactivos de union tales como, por ejemplo, anticuerpos, proteinas de union, agentes quelantes selectivos tales como, por ejemplo, eteres corona, reactivos de extraccion ionica de liquido/liquido (LIX), o similares.

La seleccion de metodos de separacion apropiados depende de la naturaleza de los materiales implicados. Por ejemplo, punto de ebullicion, y peso molecular en destilacion y sublimacion, presencia o ausencia de grupos funcionales polares en cromatografia, estabilidad de materiales en medios acidos y basicos en extraccion de multiples fases, y similares. Un experto en la materia aplicara tecnicas lo mas probablemente para conseguir la separacion deseada.

Un estereoisomero individual, por ejemplo, un enantiomero, sustancialmente libre de sus estereoisomeros se puede obtener por resolucion de la mezcla racemica usando un metodo tal como, por ejemplo, formacion de diastereomeros usando agentes de resolucion opticamente activos (Stereochemistry of Carbon Compounds, (1962) de E. L. Eliel, McGraw Hill; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113, 3) 283-302). Las mezclas racemicas de compuestos quirales de la divulgacion se pueden separar y aislar mediante cualquier metodo adecuado, que incluye: (1) formacion de sales diastereomericas, ionicas con compuestos quirales y separacion mediante cristalizacion fraccionada u otros metodos, (2) formacion de compuestos diastereomericos con reactivos de derivatizacion quiral, separacion de los diastereomeros, y conversion en los estereoisomeros puros, y (3) separacion de los estereoisomeros sustancialmente puros o enriquecidos directamente en condiciones quirales.

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Con el metodo (1), se puede informar sales diastereomericas por reaccion de bases quirales enantiomericamente puras tales como, por ejemplo, brucina, quinina, efedrina, estricnina, a-metil-p-feniletilamina (anfetamina), y similares con compuestos asimetricos que portan grupos funcionales acidos, tales como, por ejemplo, acido carboxllico y que acido sulfonico. La separation de las sales diastereomericas se puede inducir mediante cristalizacion fraccionada o cromatografla ionica. Para la separacion de los isomeros opticos de compuestos amino, la adicion de acidos carboxllico o sulfonico quirales, tales como, por ejemplo, acido canforsulfonico, acido tartarico, acido mandelico, o acido lactico puede dar como resultado la formation de las sales diastereomericas.

Como alternativa, con el metodo (2), el sustrato a resolver se hace reaccionar con un enantiomero de un compuesto quiral para formar un par diastereomerico (Eliel, E. y Wilen, S. (1994) Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., p. 322). Los compuestos diastereomericos se pueden formar por reaccion de compuestos asimetricos con reactivos de derivatizacion quirales enantiomericamente puros, tales como, por ejemplo, derivados de mentilo, seguido por separacion de los diastereomeros e hidrolisis para producir el sustrato enantiomericamente enriquecido, libre. Un metodo para determinar la pureza optica implica la preparation de esteres quirales, tales como, por ejemplo, un ester de mentilo, por ejemplo, (-) cloroformiato de mentilo en presencia de base, o ester de Mosher, acetato de a-metoxi-a-(trifluorometil)fenilo (Jacob III. (1982) J. Org. Chem. 47: 4165), de la mezcla racemica, y analizar el espectro de RMN para la presencia de los dos diastereomeros atropisomericos. Los diastereomeros estables de compuestos atropisomericos se pueden separar y aislar mediante cromatografla en fase y en fase inversa siguiendo metodos para la separacion de naftil-isoquinolinas atropisomericas (Hoye, T., documento WO 96/15111). Con el metodo (3), una mezcla racemica de dos enantiomeros se puede separar mediante cromatografla usando una fase estacionaria quiral (Chiral Liquid Chromatography (1989) W. J. Lough, Ed. Chapman y Hall, New York; Okamoto, (1990) J. of Chromatogr. 513: 375-378). Los enantiomeros enriquecidos o purificados se queden distinguir con metodos usados para distinguir otras moleculas quirales con atomos de carbono asimetricos, tales como, por ejemplo, rotation optica o dicrolsmo circular.

Esquemas y Ejemplos

Los aspectos generales de estos metodos a modo de ejemplo se describen a continuation y en los Ejemplos. Cada uno de los productos de los procesos finales se separa, alsla y/o purifica opcionalmente s antes de su uso en procesos posteriores.

En el presente documento se proporciona un numero de metodos a modo de ejemplo para la preparacion de compuestos de la divulgation, por ejemplo, en los Ejemplos que siguen a continuacion. Estos metodos pretenden ilustrar la naturaleza de las preparaciones de este tipo y no pretenden limitar el alcance de los metodos aplicables. Ciertos compuestos de la divulgacion se pueden usar como compuestos intermedios para la preparacion de otros compuestos de la divulgacion. En los metodos a modo de ejemplo que se describen en el presente documento con el fragmento E-V- tambien se puede escribir como R9-. PG representa un grupo protector comun para el grupo funcional dado al que se une. La instalacion y retirada del grupo protector se puede realizar usando tecnicas convencionales, tales como las que se describen en Wuts, P. G. M., Greene, T. Protective Groups in Organic Synthesis, 4a ed.; John Wiley & Sons, Inc.: Hoboken, New Jersey, 2007.

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El Esquema 1 muestra una slntesis general de una molecula de E-V-C(=O)-P-W-P-C(=O)-V-E de la divulgacion en la que, para fines ilustrativos, E es metoxicarbonilamino. El tratamiento de cualquiera de 1a o 1c con uno o dos equivalentes respectivamente de cloroformiato de metilo en condiciones basicas (por ejemplo, hidroxido sodico) proporciona la molecula 1b o 1d.

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El Esquema 2 muestra una slntesis general de una molecula de E-V-C(=O)-P-W-P-C(=O)-V-E de la divulgacion en la que, para fines ilustrativos, P es pirrolidina. El acoplamiento de la amina 2a con el acido 2b se consigue usando un 5 reactivo de acoplamiento de peptidos (por ejemplo, HATU) para proporcionar 2c. Como alternativa, la amina 2d se acopla con dos equivalentes de 2b en condiciones similares para proporcionar 2e. Como alternativa, la amina 2d reacciona con dos equivalentes de 2b’ directamente para proporcionar 2e en el que E’ es un grupo saliente tal como hidroxibenzotriazol, para-nitrofenol o similares convirtiendo a la estructura 2b’ en un ester activado.

Esquema 3. Sintesis representativa de I^-V-C^OJ-P-R2

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V-NH-PG

El Esquema 3 muestra una sintesis general de una molecula del compuesto intermedio R1-V-C(=O)-P-R2 en el que, para fines ilustrativos, P es pirrolidina, R1 es un grupo generico que se representa como cualquiera de -E o un grupo 5 protector de amino, y R2 es un grupo generico que se representa como -W-P-C(=O)-V-E, - W-P-C(=O)-V-NH-PG, - W-P-NH-PG, o -W-NH-PG. El acoplamiento de la amina 3a (o 3d, 3h, 3k) con el acido 3b o 3e se consigue usando un reactivo de acoplamiento de peptidos (por ejemplo, HATU) para proporcionar 3c (o 3f, 3g, 3i, 3j, 3l, 3m) respectivamente.

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El Esquema 4 muestra una slntesis general de una molecula del compuesto intermedio E-V-C(=O)-R1 en la que, para fines ilustrativos, E es metoxicarbonilamino y R1 es un grupo generico que se representa como cualquiera de - 5 P-W-P-C(=O)-V-NH-PG, -P-W-P-PG, -P-W-PG, -P-PG, u -O-PG. El tratamiento de 4a (o 4c, 4e, 4g, 4i) con

cloroformiato de metilo en condiciones basicas (por ejemplo, hidroxido sodico) proporciona la molecula 4b (o 4d, 4f, 4h, 4j).

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El Esquema 5 muestra una slntesis general de un compuesto intermedio R1-P-W-P-R2 de la divulgacion en el que, para fines ilustrativos, R1 y R2 son grupos protectores independientes y W es una unidad de dos anillos aromaticos 5 construida a traves de un ciclado mediado por metal de transition. La alquilacion del fenol 5b con un bromuro de

alquilo, tal como 5a, proporciona el eter 5c. El ciclado de los anillos aromaticos en presencia de un catalizador de paladio proporciona el compuesto 5d. El tratamiento de 5d con CuBr2 proporciona la a-halocetona 5e, que proporciona 5f despues de la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, EtsN). La reaction de 5f con una amina o sal de amina (por ejemplo, acetato amonico) proporciona la molecula que contiene imidazol 5g. La 10 oxidation de 5g, 5i, o 5l se puede realizar mediante calentamiento en presencia de MnO2 para proporcionar 5h, 5j, o

5m, respectivamente. La conversion de 5g o 5h con un catalizador de paladio, tal como Pd2dba3 y X-Phos, y una fuente de boro tal como bis(pinacolato)diboro proporciona el ester boronico 5i o 5j. El ester boronico se acopla con un companero de acoplamiento apropiado (por ejemplo, 5k) usando un catalizador de paladio, tal como Pd(PPh3)4 o PdCL(dppf), para proporcionar 5l o 5m. Para cada reaccion de acoplamiento cruzado mediada por metal de 15 transicion, los papeles del nucleofilo y del electrofilo se pueden invertir para proporcionar el mismo producto de

acoplamiento. Otros acoplamientos cruzados mediados por metal de transicion que permiten la construction de W, pero que usan companeros de acoplamiento y reactivos alternativos, incluyen, pero no se limitan a, los acoplamientos de Negishi, Kumada, Stille, y Ullman. Para la preparation de grupos W que contienen dos anillos aromaticos alternados, este esquema general se puede aplicar a traves de la election apropiada de los reactivos de 20 partida.

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El Esquema 6 muestra una slntesis general de un compuesto intermedio R1-P-W-P-R2 de la divulgacion en el que, para fines ilustrativos, R1 y R2 son grupos protectores independientes y W es una unidad de dos anillos aromaticos

5 construida a traves de un ciclado mediado por metal de transicion. El tratamiento de 5d con un reactivo de vinilo

activado (por ejemplo, viniltrifluoroborato potasico) en presencia de un catalizador de paladio (por ejemplo, acetato

de paladio y S-Phos) proporciona el compuesto de vinilo 6a. La conversion en la correspondiente a-halo cetona se puede realizar por bromacion con N-bromosuccinimida, seguido de oxidacion con MnO2. El desplazamiento de la a- halo cetona evoluciona mediante la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, EtsN). La bromacion de 10 6d evoluciona despues del tratamiento con tribromuro de piridinio, y va seguida por la adicion de un segundo acido

en condiciones basicas para proporcionar el diester 6e. La reaccion de 6e con una amina o sal de amina (por

ejemplo, acetato amonico) proporciona la molecula que contiene imidazol 6f. La oxidacion de 6f se puede realizar en presencia de MnO2 para proporcionar 6g.

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El Esquema 7 muestra una slntesis general de un compuesto intermedio E-V-C(=O)-P-W-P-R de la divulgacion en el que, para fines ilustrativos, R es un grupo protector y W es una unidad de dos anillos aromaticos. El desplazamiento 5 de la a-halo cetona 6b evoluciona mediante la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, EtsN). La bromacion de 7b evoluciona despues del tratamiento con tribromuro de piridinio, y va seguida por la adicion de un segundo acido en condiciones basicas para proporcionar el diester 7c. La reaccion de 7c con una amina o sal de amina (por ejemplo, acetato amonico) proporciona la molecula que contiene imidazol 7d. La oxidacion de 7d se puede realizar en presencia de MnO2 para proporcionar 7e.

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El Esquema 8 muestra una slntesis general de un compuesto intermedio E-V-C(=O)-P-W-P-R de la divulgacion en el que, para fines ilustrativos, R es un grupo protector y W es una unidad de dos anillos aromaticos. El desplazamiento 5 de la a-halo cetona 6d evoluciona mediante la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, EtsN). La reaccion de 8a con una amina o sal de amina (por ejemplo, acetato amonico) proporciona la molecula que contiene imidazol 8b. La oxidacion de 8b se puede realizar en presencia de MnO2 para proporcionar 8c.

Esquema 9. Sintesis representativa de E-V-C(=0)-P-\V-P-C(=0)-V-E

o

-A,

H2N-V-C(=0)-P-W-P-C(=0)-V-E --------------------

9a

O

2 -Ac,

H2N-V-C(=0)-P-W-P-C(=0)-V-NH2 ----------------

9c

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El Esquema 9 muestra una slntesis general de una molecula de E-V-C(=O)-P-W-P-C(=O)-V-E de la divulgacion en la que, para fines ilustrativos, E es etilcarbonilamino. El tratamiento de cualquiera de 9a o 9c con uno o dos equivalentes respectivamente de cloruro de propionilo en condiciones basicas (por ejemplo, hidroxido sodico) proporciona la molecula 9b o 9d.

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El Esquema 10 muestra una slntesis general alternativa de un compuesto intermedio R1-P-W-P-R2 en el que, para fines ilustrativos, R1 y R2 son grupos protectores independientes y W es una unidad de dos anillos aromaticos 5 construida a traves de un ciclado mediado por metal de transicion. La bromacion de 6b con un agente de bromacion (es decir, tribromuro de piridinio) proporciona el dibromuro 10a. A continuation el desplazamiento del bromuro primario evoluciona mediante la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, K2CO3) para proporcionar 10d. La conversion en 10f o 10g se puede conseguir siguiendo los metodos que se describen en el Esquema 8.

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El Esquema 11 muestra una slntesis general alternativa de un compuesto intermedio E-V-C(=O)-P-W-P-R en el que, para fines ilustrativos, R es un grupo protector y W es una unidad de dos anillos aromaticos. La bromacion de 6b con 5 un agente de bromacion (es decir tribromuro de piridinio) proporciona el dibromuro 10a. El desplazamiento del bromuro primario evoluciona a continuation mediante la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, K2CO3) para proporcionar 11b. La conversion en 11d u 11e se puede realizar siguiendo metodos que se describen en el Esquema 8.

Esquema 12. Sintesis representativa de R’-V-QK^-P-R2

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El Esquema 12 muestra una sintesis general de un compuesto intermedio R1-V-C(=O)-P-R2 en el que, para fines ilustrativos, P es pirrolidina, R1 es un grupo generico que se representa como cualquiera de -E o un grupo protector 5 de amino, y R2 es un grupo generico que se representa como -C(=O)-O-PG. El acoplamiento de la amina 12a (o 12d) con el acido 12b o 12e se consigue usando un reactivo de acoplamiento de peptidos (por ejemplo, HATU) para proporcionar 12c (o 12f) respectivamente. La conversion de 12f en 12c se puede realizar mediante retirada del grupo protector apropiado, seguido de tratamiento con cloroformiato de metilo en condiciones basicas (por ejemplo, hidroxido sodico).

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El Esquema 13 muestra una sintesis general alternativa de un compuesto intermedio E-V-C(=O)-P-W-P-C(=O)-V- en el que, para fines ilustrativos, W es una unidad de dos anillos aromaticos. El desplazamiento de ambos bromuros

evoluciona mediante la adicion de un acido en condiciones basicas (por ejemplo, K2CO3) para proporcionar 11c. La conversion en 11d u 11e se puede realizar siguiendo metodos que se describen en el Esquema 8.

Realizacion Especifica

5

En una realizacion, la divulgacion proporciona un compuesto de formula:

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10 La divulgacion se ilustrara a continuacion con los siguientes Ejemplos no limitantes. Las siguientes abreviaturas se usan en toda la memoria descriptiva, incluyendo los Ejemplos.

% de F

% de Biodisponibilidad

(g)

Gas

°C

Grados Celsius

Ac

Acetato

ACN

Acetonitrilo

aprox./aprx.

Aproximado

AUC

Area bajo la curva

Bn

Bencilo

BOC/Boc

terc-Butoxicarbonilo

a

Ancho

calc’d

Calculado

CC50

50 % de Concentracion de citotoxicidad

d

Duplete

dba

dibenzalacetona

DCM

Diclorometano

dd

Duplete de Dupletes

DIPEA/DIEA

N,N-Diisopropiletilamina

DMA

N,N-Dimetilacetamida

DMAP

4-Dimetilaminopiridina

DMEM

Medio esencial mlnimo de Eagle

DMF

Dimetilformamida

DMSO/dmso

Dimetilsulfoxido

dppf

1, 1 '-bi(difenilfosfanil) ferroceno

CE50

Concentration eficaz semi maxima

EDTA

Acido etilendiamintetracetico

ESI

Ionization por electropulverizacion

Et

Etilo

FBS

Suero bovino fetal

g

Gramo

HATU

Metanaminio de hexafluorofosfato de 2-(1H-7-Azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil uronio

HPLC

Cromatografla llquida de alto rendimiento

hr/h

Hora

Hz

Hercio

d.i.

Diametro interno

IPAm

Isopropilamina

IV

Intravenoso

J

Constante de acoplamiento

L

Litro

LCMS

Cromatografla llquida con espectrometrla de masas

M

Molar

m

Multiplete

m/z

Masa con respecto a carga

M+

Pico de masas

Me

Metilo

mg

Miligramo

MHz

Megahercio

min

Minuto

ml

Mililitro

ml

Mililitro

mM

Milimolar

mm

Millmetro

mmol

Milimol

MS

Espectrometrla de masas

MTBE

Metil terc-butil eter

N

Normal

NADPH

Dinucleotido fosfato de nicotinamida y adenina

NBS

N-Bromosuccinimida

nm

Nanometro

RMN

Resonancia magnetica nuclear

o/n

Durante ia noche

Pap

Permeabiiidad aparente

PBS

Sistema de tampon fosfato

Pd/C

Paiadio sobre carbono

PEG

Poiietiiengiicoi

Ph

Feniio

Piv

Pivaiato

Py/pyr

Piridina

c

Cuadrupiete

cuant

Cuantitativo

ta/TA

Temperatura ambiente

s

Singiete

SFC

Cromatografla dei fiuido supercrltico

SPhos/S-Phos

2-Diciciohexiifosfino-2',6'-dimetoxibifeniio

SRM

Controi de ia reaccion seieccionada

t

Tripiete

t-Bu

terc-Butiio

TEA

Trietiiamina

TEMPO

(2,2,6,6-T etrametii-piperidin-1-ii)oxiio

Tf

Trifiuorometanosuifonato

TFA

Acido trifiuoroacetico

THF

Tetrahidrofurano

TLC

Cromatografla en capa fina

TMS

Trimetiisiiiio

UV

Uitravioieta

p/p

Peso con respecto a peso

X-Phos/XPhos

2-Diciciohexiifosfino-2',4',6'-triisopropiibifeniio

5

Despiazamiento qulmico

pi

Microiitro

pm

Micromoiar

Ejemplos

Compuesto Intermedio 1

imagen32

5

A una solucion agitada de 7-hidroxi-1-tetralona (13,9 g, 85,7 mmol) y 1-bromo-2-(bromometil)-4-clorobenceno 10 (25,6 g, 90,0 mmol) en dimetilformamida (850 ml) se anadio carbonato potasico (24 g, 172 mmol). La reaccion se

agito en atmosfera de argon durante 18 horas y a continuation se diluyo con acetato de etilo (1 l). Los extractos organicos se lavaron tres veces con agua y una vez con solucion salina saturada. A continuacion la fase organica se seco con sulfato de magnesio, se filtra y se concentro. Al aceite resultante se anadio metanol (500 ml) y la suspension se agito durante treinta minutos. Por filtration se aislo 7-(2-bromo-5-clorobenciloxi)-3,4-dihidronaftalen- 15 1(2H)-ona (27,8 g, rendimiento de un 89 %).

3-Cloro-10,11 -dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

A un matraz de 1 l que contenla pivalato de paladio (II) (1,18 g, 3,8 mmol), tri(4-fluorofenil)fosfina (1,20 g, 3,8 mmol), 20 acido pivalico (2,33 g, 22,8 mmol) y carbonato potasico (31,8 g, 228 mmol) se anadio una solucion de 7-(2-bromo-5- clorobenciloxi)-3,4-dihidronaftalen-1(2H)-ona (27,8 g, 76,2 mmol) en dimetilacetamida (380 ml). El matraz se evacuo y se volvio a cargar con argon 5 veces y a continuacion se agito en atmosfera de argon a 60 °C durante 24 horas. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con MTBE y agua. La mezcla bifasica resultante se agito durante 3 horas se filtro a traves de Celite, aclarando con MTBE. La fase organica del filtrado se separo and y a 25 continuacion se lavo dos veces con agua y una vez con solucion salina saturada. A continuacion los extractos organicos se secaron con sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron y se purificaron por cromatografla en columna ultrarrapida (Hexanos/DCM) para producir 3-cloro-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (14,4 g, rendimiento de un 67 %) en forma de un solido de color blanquecino.

5

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3-Vinil-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

Un matraz de fondo redondo de 500 ml secado al horno de 3 bocas se enfrio en atmosfera de Ar, a continuacion se cargo con 3-Cloro-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (12,0 g, 42,1 mmol), viniltrifluoroborato potasico (8,47 g, 6,32 mmol), Pd(OAc)2 (473 mg, 2,11 mmol), SPhos (1,74 g, 4,25 mmol), K2CO3 (17,5 g, 126 mmol) y propanol anhidro (120 ml). La mezcla de reaccion se rocio con Ar durante 16 min, a continuacion se calento a reflujo durante 5,5 h. Despues de su finalizacion, la mezcla de reaccion se enfrio a TA y se concentro a presion reducida. El residuo en bruto se suspendio en DCM, y a continuacion se lavo con H2O y solucion salina saturada. La solucion organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro a presion reducida. El residuo resultante se purifico adicionalmente a traves de tapon de sllice, eluyendo con DCM para proporcionar 3-vinil-10,11-dihidro-5H- dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (10,2 g, 87 %).

3-(2-Bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

La 3-vinil-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (9,98 g, 36,1 mmol) se disolvio en una solucion agitada de THF (70 ml), DMSO (70 ml) y H2O (35 ml). Se anadio NbS (6,75 g, 37,9 mmol) en una sola porcion y la mezcla de reaccion se agito a TA durante 33 min. Despues de su finalizacion, el medio de reaccion se diluyo con EtOAc y se lavo dos veces con H2O y una vez con solucion salina saturada. La fase organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro a presion reducida. La bromhidrina en bruto resultante se suspendio en DCM (200 ml) y se trato con MnO2 activado (62,7 g, 722 mmol). Despues de agitar durante 15 h a TA, la mezcla de reaccion se filtro sobre celite y la torta de filtro se aclaro varias veces con DCM. El filtrado combinado (~400 ml) se trato con MeOH (~100 ml) y la mezcla se concentro gradualmente a presion reducida, haciendo que el material solido precipitara a partir de la solucion. Cuando el volumen de llquido alcanzo ~200 ml, el solido se retiro por filtracion y se aclaro con MeOH. La secuencia de concentracion/precipitacion/filtracion/adarado se realizo 2 x mas, dando como resultado la recogida de 3 cosechas de 3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona en polvo (7,49 g, 56 % durante 2 etapas).

Compuesto Intermedio 2

imagen33

PyHBr3

9:1 DCM,’MeOH

9-bi oino-3-(2-l)i omoacetil)-10,11

3-<2-l>iomo<icetilM0.11-<lihi<lio-

(lihirii o-5H-<lil>enzo[c.<j]ci omen-

5H(lil>enzo[c,(j]ci omen-8(9H)-

8<9H>-on«i

ona

9-Bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

Una mezcla de 3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (2,58 g, 6,95 mmol), tribromuro de piridinio (2,56 g, 8,0 mmol), diclorometano (22 ml) y metanol (2,5 ml) se agito a aproximadamente 20 °C durante 3 horas para obtener una suspension. El producto precipitado se filtro, se lavo con diclorometano (10 ml) y se seco en un horno de vaclo a 40 °C para dar 9-bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (2,62 g, rendimiento de un 84 %). 400 MHz RMN 1H (CDCL) 5 8,03-8,01 (m, 1H), 7,85 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,74 (dd, J = 4,1, 4,1 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H), 3,37-3,29 (m, 1H), 2,99-2,92 (m,1H), 2,59-2,46 (m, 2H).

Compuesto Intermedio 2a

imagen34

3-<2-l>fomo-1-hi<lvoxietil)-10,11- diliidi o-5H-(libenzo[c.<j]ci omen- 8(9H)-oiia

9-l)ioino-3-(2-l)ioino-1- hidioxietilMO 11 -dihidio-5H- dil>enzo[c.y)ciomen-8<9H}-ona

9-bi omo-3-i 2-hi omoocetib-10.11- diliidi o-5H-<lil>enzo[c,<j]ci omen- 8(9H)-ona

9-Bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

A 3-(2-bromo-1-hidroxietil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (20,3 g, 54,4 mmol) en DCM (365 ml) se anadio MeOH (22 ml) y tribromuro de piridinio (18,24 g, 57,0 mmol). Despues de 2 h, se anadio agua (100 ml) y

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despues de agitar brevemente, las capas se separaron y la fase organica se recogio. A continuation la fase organica se lavo con HCl 1 M (100 ml) y la fase organica de la parte inferior que contema 9-bromo-3-(2-bromo-1-hidroxietil)- 10,11 -dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona se recogio. 400 MHz RMN 1H (CDCl3) 7,75 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,42 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 5,13 (s, 2H), 4,99-4,96 (m, 1H), 4,73 (dd, J = 4,1,4,1 Hz, 1H), 3,69-3,66 (m, 1H), 3,58-3,53 (m, 1H), 3,35-3,27 (m, 1H), 2,96-2,90 (m, 1H), 2,58-2,44 (m, 2H), C-OH no observado.

A 9-bromo-3-(2-bromo-1-hidroxietil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (aprox. 54,4 mmol) en DCM (365 ml) se anadio bicarbonato sodico (5,45 g), bromuro sodico (6,14 g), TEMPO (16,55 mg) y agua (60 ml). La solution se enfrio entre 0-5 °C y se anadio lejia al 6 % (91,5 ml). Despues de 1 h se anadio alcohol isopropflico (20 ml) y la mezcla de reaction se calento a temperatura ambiente. La agitation se detuvo, las fases se separaron y la fase organica inferior se recogio y se concentro retirando aproximadamente 345 g de disolvente. La suspension se filtro y la torta se lavo con 50 ml de agua y a continuacion con 50 ml de DCM (enfriado previamente a 5 °C). Los solidos se recogieron y se secaron al vatio para obtener 9-bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H- dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (18,6 g, rendimiento de un 76 %). 400 MHz RMN 1H (CDCL) 5 8,03-8,01 (m, 1H), 7,85 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,74 (dd, J = 4,1, 4,1 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H), 3,37-3,29 (m, 1H), 2,99-2,92 (m,1H), 2,59-2,46 (m, 2H); 100 MHz RMN 13C (CDCis) 5 190,4, 189,6, 154,2, 136,6, 134,1, 133,9, 132,9, 131,8, 129,3, 127,2, 125,6, 124,2, 123,3, 117,0, 68,1,49,9, 31,8, 30,4, 25,5.

Compuesto Intermedio 2b

imagen35

— A /? TFA' h2°.

tms-=-h

65 °C

PdCI^MeCN)?, X-Phos

K3PO4, MeCN, 65 °C

3 miimetilsilibetinib- lO.TI-dihidio-

3-cloi O-10.11-<liliidi o-5H

5H-<lil)enzo[c.<j]cioinen-8(9H)-on<i

<lil>enzo[c,<j]ci omen-8(9HLon<i

PyHBr3

DCM, MeOH

35 °C

9-Bi omo-3-(2-l)i oino<icetilf-10,1o-5H

(lil)enzo[c.<j]croinen-8i9HLoihi

(lil)enzo[c.<jlcioinen-8<9H)-on<i

3-((T rimetilsilil)etinil)-10,11 -dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

Un matraz de 300 ml equipado con un agitador de cabeza superior y un condensador de reflujo en una atmosfera de nitrogeno se cargo con 3-cloro-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (10,0 g, 35,12 mmol), fosfato tripotasico anhidro en polvo (22,4 g, 105,4 mmol), XPhos (1,34 g, 2,81 mmol) y PdCl2(MeCN)2 (364 mg, 1,40 mmol). Se anadio acetonitrilo (140 ml) seguido de TMS acetileno (18 ml, 141 mmol). La mezcla se calento a 65 °C. Despues de 6 h, se considero que la reaccion era completa, y la mezcla se enfrio a 20 °C. La mezcla se filtro a traves de un embudo con frita, y la torta de filtro se lavo con acetonitrilo. El filtrado se concentro a aproximadamente 150 ml a presion reducida y se extrajo con heptano (50 ml, 3 x 100 ml). Se anadio W-acetil cistema (15 g) a la fase de acetonitrilo, y la mezcla se agito durante 5 h a 45 °C. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente, se filtro a traves de un embudo con frita, y la torta de filtro se lavo con acetonitrilo. El filtrado se concentro a aproximadamente 120 ml a presion reducida. Se anadio un (120 ml) y la mezcla se agito durante 40 minutos a 45 °C y a continuacion se enfrio a temperatura ambiente. Despues de 30 minutos la mezcla se filtro a traves de un embudo con frita para proporcionar 3-((trimetilsilil)etinil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (4,07 g, rendimiento de un 33,4 %) en forma de un solido de color amarillo: 400 MHz RMN 1H (CDCL) 5 7,65 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,47 (dd, J = 8,1, 1,4 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,06 (s, 2H), 2,95 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,67 - 2,59 (m, 2H), 2,18 - 2,08 (m, 2H), 0,26 (s, 9H).

3-Acetil-10,11 -dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

Un vial de 20 ml con barra de agitacion se cargo con 3-((trimetilsilil)etinil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen- 8(9H)-ona (850 mg, 2,44 mmol) y acido formico (9,8 ml). La solucion se calento a 65 °C. Despues de 3 h, se considero que la reaccion era completa. La mezcla se concentro a presion reducida; el residuo resultante se recogio en CH2Cl2 y se cargo sobre un cartucho de 25 g de gel de silice empaquetado previamente. El producto se purifico por cromatografia sobre una columna de 80 g de gel de sflice empaquetada previamente eluyendo con un gradiente de disolvente de un 5 % a un 85 % de EtOAc/hexanos. Las fracciones que conteman el producto se combinaron y se concentraron para proporcionar 3-acetil-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (616 mg, 86 %): 400 MHz RMN 1H (CDCls) 5 8,00 - 7,94 (m, 1H), 7,81 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,64 (s, 2H), 5,16 (s, 2H), 2,98 (t,

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J = 6,1 Hz, 2H), 2,69 - 2,64 (m, 2H), 2,63 (s, 3H), 2,21 - 2,09 (m, 2H). 9-Bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona

Un vial de 20 ml con barra de agitacion se cargo con 3-acetil-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (100 mg, 0,366 mmol), CH2Ch/MeOH a 9:1 (3,4 ml) y tribromuro de piridinio (246 mg, 0,769 mmol). La solucion se calento a 35 °C. Despues de 30 minutos, se considero que la reaccion era completa. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente, se diluyo con EtOAc (50 ml) y se lavo secuencialmente con Na2S2O3 acuoso saturado (20 ml), NaHCO3 acuoso al 2 % (20 ml), agua (20 ml), y solucion salina saturada (10 ml). La fase organica se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro a presion reducida dando como resultado 9-bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H- dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (68 mg, 41 %): 400 MHz RMN 1H (CDCh) 5 8,03 - 8,01 (m, 1H), 7,85 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,74 (dd, J = 4,1, 4,1 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H), 3,37-3,29 (m, 1H), 2,99 - 2,92 (m,1H), 2,59 - 2,46 (m, 2H).

Compuesto Intermedio 3

imagen36

Una solucion de (S)-piroglutamato de etilo y N-Boc (20,0 g, 77,7 mmol) que estaba en THF anhidro (150 ml) en un matraz de fondo redondo de dos bocas en atmosfera de argon se enfrio a -40 °C. A la mezcla de reaccion se anadio gota a gota una solucion de bromuro metilmagnesio (3,0 M en eter, 28,5 ml, 85,5 mmol) durante 30 minutos. La reaccion se agito durante 4 h a -40 °C y a continuation durante 1 h a 0 °C. La reaccion se repartio entre acetato de etilo y solucion saturada de cloruro de amonio y se acidifico con HCl 1 N. La fase acuosa se extrajo dos veces mas con acetato de etilo. Las fases organicas se combinaron y se secaron con sulfato sodico. El material en bruto se purifico por cromatografla en columna (20 % - 40 % de EtOAc/hexanos) para producir (S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-5-oxohexanoato de etilo en forma de un aceite viscoso y se uso directamente en la siguiente etapa.

(S)-5-Metil-3,4-dihidro-2H-pirrol-2-carboxilato de etilo

El (S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-5-oxohexanoato de etilo en un matraz de 1 l se trato con una solucion de acido trifluoroacetico / diclorometano (mezcla a 1:1, 100 ml). Se observo efervescencia y la mezcla se dejo en agitacion durante 4 horas a temperatura ambiente. Despues de ese tiempo las sustancias volatiles se retiraron al vaclo para

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producir (S)-5-metil-3,4-dihidro-2H-pirrol-2-carboxilato de etilo en forma de un aceite, y se uso directamente en la siguiente etapa.

(25.55) -5-Metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo

El (S)-5-metil-3,4-dihidro-2H-pirrol-2-carboxilato de etilo en un matraz de 1 l se disolvio con etanol (400 ml) se evacuo ese cargo con argon tres veces (3 x). Se anadio paladio sobre carbono (aprx. 750 mg, 10 % en p/p, seco) y la reaccion se evacuo de gas y se cargo con gas hidrogeno (3 x). La reaccion se dejo en agitacion en atmosfera de hidrogeno durante 16 horas. La mezcla se filtro a traves de un lecho de celite y el filtrado se concentro al vaclo. Se anadio eter dietllico al aceite y se formo un precipitado. La mezcla se filtro para producir (2S,5S)-5-metilpirrolidin-2- carboxilato de etilo, en forma de un solido de color blanco (10,6 g, 67,4 mmol, 86,7 % durante tres etapas). RMN 1H (400 MHz, cdcl3) 6 4,48 (dd, 1H), 4,27 (c, 2H), 3,92 - 3,80 (m, 1H), 2,52 - 2,36 (m, 1H), 2,32 - 2,13 (m, 2H), 1,75 - 1,60 (m, 1H), 1,51 (d, 3H), 1,30 (t, 3H).

(25.55) -5-Metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-etilo

A una solucion de (2S,5S)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo (7,0 g, 44,5 mmol) en diclorometano (250 ml), se anadieron sucesivamente anhldrido diterc-butllico (10,7 g, 49,0 mmol), diisopropiletilamina (17,1 ml, 98,0 mmol) gota a gota durante 10 minutos, y dimetil amino piridina (0,27 g, 2,23 mmol). Se observo efervescencia y la mezcla se dejo en agitacion durante 16 horas a temperatura ambiente. La reaccion se lavo con HCl (250 ml, de 1 N). A continuation la fase organica se seco con sulfato sodico. El material en bruto se purifico por cromatografla en columna (5 % - 25 % de EtOAc/hexanos) para producir (2S,5S)-5-metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-etilo en forma de un aceite (6,46 g, 25,1 mmol, 56 %). LCMS-ESI+: calculado para C13H23NO4: 257,16 (M+); Encontrado: 258,70 (M+H+).

Acido (2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-carboxilico

A una solucion de (2S,5S)-5-metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-etilo (6,46 g, 25,1 mmol) en etanol (20 ml) se anadio mono hidrato de hidroxido de litio (2,11 g, 50,2 mmol) y agua desionizada (12 ml). La mezcla se dejo en agitacion durante 16 horas y a continuacion se repartio entre acetato de etilo y una mezcla a 1:1 de solucion salina saturada y HCl 1 N. La fase acuosa se extrajo una vez adicional con acetato de etilo. Las fases organicas se combinaron, se secaron con sulfato sodico y el disolvente se retiro al vaclo para producir acido (2S,5S)-1-(terc- butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-carboxllico en forma de un solido de color blanco (cuant.) y se uso directamente en la siguiente etapa.

Compuesto Intermedio 4

TFA

H

Xr

EtO

{2S.5S)- 5-mef ilpii r olidin-2- caiboxilato de etilo-TFA

O

HOA^NHC02Me

<icido (S)-2- < metoxicai bonilainino) -3-metilbiitanoico

HATU, DIPEA DMF

NHCOoMe

Vr

°JJ

EtdV—^

LiOH

H,0/MeOH

(2S.5S)-1-((S)-2-(metoxic<iil)onil<imino)-3- inetillwtonoill-5- metilpii i olidin-2-cai boxiloto <le etilo

NHCOoMe

Vr

vJv

Acido (2S,5S)-1-((S)-2 -(metoxicai bomlainino)-3- inetilbiitanoil)-5- metilpii r olidin-2-car boxilico

(2S,5S)-1-((S)-2-(Metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo

Se combinaron 2,2,2-trifluoroacetato de (2S,5S)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo (10,0 g, 39,3 mmol), acido (S)- 2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (6,88 g, 39,3 mmol) y HATU (14,9 g, 39,3 mmol) en DMF (100 ml) y se anadio DIPEA (15,0 ml, 86,5 mmol). Despues de agitar durante 1 h a TA, la mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc. La fase organica se lavo sucesivamente con HCl al 10 %, NaHCO3 acuoso saturado y solucion salina saturada, a

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25

30

continuation se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro a presion reducida para proporcionar (25,5S)-1-((S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo. El material en bruto se uso sin purification adicional.

Acido (2S,5S)-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxnico

Se suspendio (2S,5S)-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo (39,3 mmol, suponiendo una conversion completa a partir de la transformation anterior) en MeOH (200 ml) y se anadio LiOH acuoso (1,0 M, 100 ml, 100 mmol). La mezcla de reaction se agito o/n, a continuacion se concentro a presion reducida para retirar la mayor parte del MeOH. La solution acuosa se lavo 2 x con DCM antes de su acidification a pH~1-2 con HCl al 10 %. A continuacion la fase acuosa acida se extrajo 5 x con EtOAc. Los extractos de EtOAc combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida para proporcionar acido (2S,5S)-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxllico (6,89 g, 56 % durante 2 etapas).

Compuesto Intermedio 5

imagen37

(2S,4S)-Pirrolidina-1,2,4-tricarboxilato de 1-terc-butilo y 2,4-dimetilo

A una solucion de (2S,4S)-4-cianopirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (9,0 g, 35,4 mmol) en MeOH (196 ml) se anadio HCl (4 M en 1,4-dioxano, 100 ml, 403 mmol). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 16 h y se concentro al vaclo. El compuesto intermedio en bruto se disolvio en EtOAc (180 ml) y se basifico con bicarbonato acuoso (sat.). Se anadio bicarbonato de di-terc-butilo (8,5 g, 38,9 mmol) y la solucion bifasica se agito a temperatura ambiente durante 12 h. A continuacion, las fases se separaron y la fase acuosa se volvio a extraer con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con solucion salina saturada, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron. El aceite en bruto se purifico por cromatografla sobre gel de sllice (de un 15 % a un 40 % a un 100 % de EtOAc/Hexanos) para proporcionar (2S,4S)-pirrolidina-1,2,4-tricarboxilato de 1-terc-butilo y 2,4- dimetilo (9,56 g, 94 %).

5

10

15

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35

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45

50

55

Acido (3S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(metoxicarbonil)pirrolidina-3-carboxnico

A una solucion de (2S,4S)-pirrolidina-1,2,4-tricarboxilato de 1-terc-butilo y 2,4-dimetilo (9,56 g, 33,3 mmol) en THF (70 ml) a 0 °C (temperatura externa, bano con hielo) se anadio NaOH (1 N acuoso, 33 ml, 33,3 mmol) gota a gota durante 15 min. La solucion se agito a 0 °C durante 5 h antes de acidificar con HCl (1 N). La solucion se extrajo con EtOAc (3 x). Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El aceite en bruto se purifico por cromatografla sobre gel de sllice (de un 2 % a un 5 % a un 10 % de MeOH/CH2Ch) para proporcionar acido (3S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(metoxicarbonil)pirrolidina-3-carboxllico (6,38 g, 70 %).

(25.45) -4-(Hidroximetil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo

A una solucion de acido (3S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(metoxicarbonil)pirrolidina-3-carboxllico (6,38 g, 23,3 mmol) en THF (116 ml) a 0 °C (temperatura externa, bano con hielo) se anadio Et3N (4,9 ml, 35,0 mmol) y cloroformiato de etilo (2,7 ml, 28,0 mmol). La solucion resultante se agito a 0 °C durante 45 min, tiempo durante el que se forma un precipitado de color blanco. La mezcla de reaccion se filtro a traves de celite y se concentro.

El compuesto intermedio en bruto se disolvio en THF (59 ml) y se enfrio a 0 °C (temperatura externa, bano con hielo). Se anadio NaBH4 (4,41 g, 116,7 mmol) en H2O (59 ml) lentamente y la solucion resultante se agito a 0 °C durante 2 h. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y se lavo con H2O. La fase acuosa se volvio a extraer con EtOAc. Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El aceite en bruto se purifico por cromatografla sobre gel de sllice (de un 42 % a un 69 % a un 100 % de EtOAc/Hexanos) para proporcionar

(25.45) -4-(hidroximetil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (3,63 g, 60 %).

(25.45) -4-(metoximetil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo

A una solucion de (2S,4S)-4-(hidroximetil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (2,57 g, 9,9 mmol) en CH2Cl2 (50 ml) se anadio AgOTf (4,07 g, 15,8 mmol) y 2,6-di-terc-butilpiridina (4,4 ml, 19,8 mmol). La mezcla de reaccion se enfrio a 0 °C (temperatura externa, bano con hielo) y se anadio Mel (0,98 ml, 15,8 mmol) lentamente. La suspension resultante se agito a 0 °C durante 1,5 h y a temperatura ambiente durante 1,5 h. La suspension se diluyo con CH2Cl2 y se filtro a traves de celite. El filtrado se concentro a sequedad, se disolvio en Et2O, y se lavo con HCl (1 N) y solucion salina saturada. Las fases acuosas se volvieron a extraer con Et2O y las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El aceite en bruto se purifico por cromatografla sobre gel de sllice (de un 10 % a un 75 % a un 100 % de EtOAc/Hexanos) para proporcionar (2S,4S)-4- (metoximetil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (2,11 g, 78 %). RMN 1H: 400 MHz, (CDCL) 6: (mezcla de rotameros, principal informado) 4,20 (t, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 3,34 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,16 (t, 1H), 2,43 (m, 2H), 1,74 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).

Acido (2S,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(metoximetil)pirrolidina-2-carboxilico

A una solucion de (2S,4S)-4-(metoximetil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (2,11 g, 7,7 mmol) en una mezcla de THF (38 ml) y MeOH (15 ml) se anadio LiOH (acuoso 2,5 M, 15 ml, 38,6 mmol). La solucion resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 h, y se acidifico con HCl acuoso (1 N). El producto deseado se extrajo con CH2Cl2 (4x). Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar acido (2S,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(metoximetil)pirrolidina-2-carboxllico (2,0 g, 99 %). RMN 1H: 400 MHz, (CDCl3) 6: (mezcla de rotameros, principal informado) 4,33 (t, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 3,16 (t, 1H), 2,45 (m, 2H), 2,12 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).

Compuesto Intermedio 6

imagen38

Acido (2S,5S)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5 metilpirrolidina-2-carboxilico

El acido (25,5S)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5 metilpirrolidina-2-carboxllico se sintetizo de una manera similar a la del Compuesto Intermedio 4 sustituyendo el acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-

5

10

15

20

25

30

metilbutanoico por el acido (2S,3S)-2-(metoxicarbonil-amino)-3-metilpentanoico. MS (ESI) m/z 301,19 [M + H]+. Compuesto Intermedio 7

imagen39

Acido (2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-etilpirrolidina-2-carboxnico

El acido (2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-etilpirrolidina-2-carboxllico se sintetizo de una manera similar a la del Compuesto Intermedio 3 sustituyendo el bromuro de etilmagnesio por el bromuro de metilmagnesio. RMN 1H (400 MHz, DMSO-de): 5 12,37 (1H, s), 4,05-4,07 (1H, m), 3,63-3,64 (1H, m), 2,13-2,15 (1 H, m), 1,63-1,90 (4H, m), 1,39 (10H, m), 0,83 (3H, t, J = 7,2 Hz).

Compuesto Intermedio 8

imagen40

HN^o

<K

Acido (2S,5S)-5-etil-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)pirrolidina-2-carboxilico

El acido (2S,5S)-5-etil-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)pirrolidina-2-carboxllico se sintetizo de una manera similar a la del Compuesto Intermedio 4 sustituyendo el (2S,5S)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato 2,2,2- trifluoroacetato de etilo con el HCl de (2S,5S)-5-etilpirrolidina-2-carboxilato de metilo. MS (ESI) m/z 301,15 [M + H]+.

Compuesto Intermedio 9

imagen41

Acido (2S,5S)-5-etil-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)pirrolidina-2-carboxilico

El acido (2S,5S)-5-etil-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)pirrolidina-2-carboxllico se sintetizo de una manera similar a la del Compuesto Intermedio 4 sustituyendo el acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilbutanoico con el acido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoico y el 2,2,2-trifluoroacetato de (2S,5S)- 5-metilpirrolidin-2-carboxilato de etilo con el clorhidrato de (2S,5S)-5-etilpirrolidina-2-carboxilato de metilo.

5

10

15

20

25

30

imagen42

rC

Cr03l Piridina

vY MeO J 0^0

DCM,ta,4h cr"o

Ph3PEtBr

KOlBu, THF. ta, 4h

(2S,4R)-4-Hi<lroxipirrolidma- <SM-Oxopirrolidina-1,2-dicarboxilatode (S)-4-Etilidenpirroli(lina-1,2-dicarboxilatocle

1.2-dicai boxi ato de 1-tei c-bntilo v 2-metilo ^ ^

* iieiuHHiioy^meuio 1-tei C-l)iItllo y 2-metllo

1-tei c-Imtilo y 2-metilo

Pel al 10 %/ C

h2, EtOH, ta. Me° 0<L0 dm ante la noclie

LiOH

PhCH2Br

MeOH Hp HO i TEA, THF, 0°C-ta, ta, 2h Qr'O . . , .

Y dm ante la noclie

'T'

(2S)- 4-Etilpii i olidina- 1.2-dicai hoxilato de Acido <2S>-1-<tei c-htifoxicai honil>-4- 1-tei c-hiitilo y 2-metilo etilpii i olidina-2-cai hoxilico

SFC

°^s-C~y Pd al 10 %/ C, H2 ^ N -------------------►

A

A

V N-

BnO J MeOH, ta,5h

CTT)

(2S)-4-Etilpii i olidina-1,2- dicaiboxilato de 2-l>encilo y 1-teic-bntilo

(2S,4S)4-Etilpirr olidina-1,2- dicar boxilato de 2-bencilo y 1-teic-bntilo

Acido (2S,4S)-1-(teic-lmtoxicaibonilM- etilpii i olidina-2-cai boxilic o

(S)-4-Oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo

CrO3 (194 g, 1,94 mol) se anadio lentamente con agitacion durante 30 min a una solucion de piridina (340 ml) en DCM (900 ml) a 0 °C. La mezcla se calento a ta y se anadio (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc- butilo y 2-metilo (56 g, 0,216 mol) en DCM (700 ml). La reaccion se agito vigorosamente durante 4 horas a ta. El solido de color oscuro formado se decanto y se lavo con DCM. Las fases organicas se lavaron con NaHCO3 ac., acido cltrico acuoso al 10 %, y solucion salina saturada, y se seco sobre Na2SO4 anhidro. El disolvente se retiro al vaclo y se purifico por cromatografla en columna sobre gel de sllice (PE:EtOAc = 50:1 a 10:1) para proporcionar (S)-

4-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (42,6 g, 81 %) en forma de un aceite de color amarillo.

(S)-4-Etilidenpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo

Una solucion de Ph3PEtBr (84 g, 227 mmol) y KOtBu (76,7 g, 556 mmol) en THF (1100 ml) se agito a ta en atmosfera de nitrogeno durante 1 h, y a continuacion se anadio (S)-4-oxopirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (50 g, 206 mmol) en THF (350 ml) gota a gota. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La TLC mostraba que la reaccion se habla completado. La mezcla se inactivo con NH4Cl acuoso y se concentro para retirar THF, y a continuacion se disolvio en EtOAc y agua. La fase organica combinada se lavo con agua y solucion salina saturada, se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro. El producto en bruto se purifico por cromatografla en columna (PE:EtOAc = 30:1 a 5:1) para proporcionar (S)-4-etilidenpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1- terc-butilo y 2-metilo (18,3 g, 35 %) en forma de un aceite de color amarillo.

(2S)-4-Etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo

Una mezcla de (S)-4-etilidenpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (50 g, 196 mmol), Pd/C (5 g) en EtOH (500 ml) se hidrogeno a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se filtro y se concentro para proporcionar (2S)-4-etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (9,8 g, 97 %) en forma de un aceite incoloro.

5

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Acido (2S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-etilpirrolidina-2-carboxilico

Una mezcla de (2S)-4-etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-metilo (49,5 g, 0,19 mol), LiOH (950 ml, 1 M) en MeOH (1500 ml) se agito a temperatura ambiente durante una noche. La TLC mostraba que la reaccion se habla completado. La mezcla se concentro, el pH se ajusto a 2 con HCl 1 N. La mezcla se extrajo con EA, la fase organica combinada se lavo con solucion salina saturada, se seco sobre Na2SO4, se concentro para proporcionar acido (2S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-etilpirrolidina-2-carboxllico (45,5 g, 97 %) en forma de un solido de color blanco sin purification adicional.

(2S)-4-Etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc-butilo

Una mezcla de acido (2S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-etilpirrolidina-2-carboxllico (45,5 g, 187 mmol), TEA (37,8 g, 374 mmol) en THF (1 l) se anadio gota a gota BnBr (38,5 g, 225 mmol) a 0 °C. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante una noche. La TLC mostraba que la reaccion se habla completado. La mezcla se concentro para retirar el disolvente. El residuo se repartio entre EtOAc y agua. La fase organica combinada se lavo con solucion salina saturada, se seco sobre Na2SO4 y se concentro. El producto en bruto se purifico por cromatografla en columna para dar (2S)-4-etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc-butilo (46 g, 74 %) en forma de un aceite incoloro. El (2S)-4-etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc-butilo se separo mediante SFC preparativa a traves de una columna Chiralcel de 10 pm de DO 250*50 mm de d.i. (Fase movil: A para n-hexano y B para etanol (IPAm al 0,05 %), Gradiente: A: B = 97:3, Caudal: 100 ml/min, Longitud de onda: 210 y 220 nm, Cantidad de inyeccion: 0,4 g por inyeccion) para proporcionar (2S,4S)-4-etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc- butilo.

Acido (2S,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-etilpirrolidina-2-carboxilico

Una mezcla de (2S,4S)-4-etilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc-butilo (18 g, 54,1 mmol), Pd/C (3,6 g) en MeOH (1 l) se hidrogeno a temperatura ambiente durante una noche. La TLC mostraba que la reaccion se habla completado. La mezcla se filtro con Celite. El filtrado se concentro para proporcionar acido (2S,4S)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-etilpirrolidina-2-carboxllico (10 g, 77 %) en forma de un solido de color blanco. RMN 1H: 400 MHz CDCl3: 5 9,88 (a, 1H), 4,31-4,19 (m, 1H), 3,82-3,68 (m, 1H), 3,03-2,95 (m, 1H), 2,49-2,39 (m, 1H), 2,12-2,03 (m, 1H), 1,81-1,56 (m, 1H), 1,45 (d, J = 8 Hz, 11H), 0,92 (t, J = 6 Hz, 3H).

Compuesto Intermedio 11

imagen43

1) Pt/C, H2

►

2) LiOH

imagen44

4.5-(ljinetil-1H-|)jiiol-1,2-(lic<irl)Oxjl<ito de

1-terc-biitiloy 2-etilo

Acido ieM2S.4S.5S)-1-(teic-l)iitoxic<iil)onil)- 4'5-dimetil|>ii i olidina-2-car boxilico

Acido rel-(2S,4S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4,5-dimetilpirrolidina-2-carboxflico

A una solucion de 4,5-dimetil-1H-pirrol-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-etilo (4,016 g, 15,02 mmol) en EtOH (100 ml) se anadio Platino sobre carbono (5 %, 0,58 g). La suspension se agito en una atmosfera de hidrogeno (101 kPa) durante 3 dlas. La suspension se filtro a traves de celite y se lavo con MeOH. El filtrado se concentro y el producto en bruto se purifico por cromatografla en columna (SiO2, un 5-10-20 % de EtOAc/Hexanos) para proporcionar el rel-(2S,4S,5S)-4,5-dimetilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-etilo.

A una solucion de rel-(2S,4S,5S)-4,5-dimetilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo y 2-etilo en una mezcla de THF (70 ml), MeOH (25 ml), y H2O (25 ml) se anadio hidroxido de litio (1,53 g, 63,7 mmol). La suspension se agito a temperatura ambiente durante 2,5 h y a 45 °C durante 2 h. La solucion se enfrio a temperatura ambiente y se anadio HCl (acuoso, 1 N, 70 ml). Los extractos organicos se concentraron y la fase acuosa resultante se extrajo con EtOAc (3 x). Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar el acido rel-

(2S,4S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4,5-dimetilpirrolidina-2-carboxllico (3,08 g, 84 %).

imagen45

H.v-O

DIPPA. DMAP

MCI

DCM

clorhidiato de <2S,3aS,6aS)-oct«ihidiociclo|)enta

l2S.3<iS.6<iSMiexahidi ociclo|)Oht<i[I)]|)ii i ol

[l)]i)ii r ol-2-cai boxilato

1'2<2H)-dicai boxilato de

de bencHo

2-benciloy 1-terc-biitilo

Pd c. H2(Exceso)

r.tOAc

Acido (2S,3aS,6aS)-1-<teic-

biitoxicai bonihoctahidi ociclopenta

|l>]|)ii r ol-2-c«iv hoxilico

5 (2S,3aS,6aS)-Hexahidrociclopenta[b]pirrol-1,2(2H)-dicarboxilato de 2-bencilo y 1 -terc-butilo

A una solucion de clorhidrato de (2S,3aS,6aS)-octahidrociclopenta[b]pirrol-2-dicarboxilato de bencilo (4,70 g, 16,68 mmol) disponible en el mercado, en cloruro de metileno (42 ml) se anadio bicarbonato de Di-terc-butilo (7,28 g, 33,36 mmol) N,N-diisopropiletilamina (5,82 ml, 33,36 mmol) y 4-(Dimetilamino)piridina (0,20 g, 1,67 mmol). La 10 solucion se agito al aire durante 16 horas. Despues de su finalizacion, la reaccion se concentro al vaclo, se diluyo en acetato de etilo, y se lavo con HCl 1 N. Las fases acuosas se volvieron a extraer dos veces con acetato de etilo y las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron. El residuo resultante se purifico por cromatografla sobre gel de sllice (acetato de etilo al 5-40 % en hexanos) para proporcionar (2S,3aS,6aS)-hexahidrociclopenta[b]pirrol-1,2(2H)-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc-butilo que se uso sin 15 purification adicional. MS (ESl) m/z 368,47 [m + Na]+.

Acido (2S,3aS,6aS)-1-(terc-butoxicarbonil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilico

A un matraz de fondo redondo de 250 ml cargado con una barra de agitacion y (2S,3aS,6aS)- 20 hexahidrociclopenta[b]pirrol-1,2(2H)-dicarboxilato de 2-bencilo y 1-terc-butilo (5,76 g, 16,68 mmol) se anadio Paladio al 10 % sobre carbono (1,77 g). Sobre la mezcla se vertio etanol y la mezcla de reaccion se evacuo y se lavo abundantemente con gas hidrogeno tres veces. La suspension se agito a temperatura ambiente bajo una atmosfera de hidrogeno durante 24 horas. Despues de su finalizacion, la mezcla de reaccion se filtro a traves de celite y se concentro para dar acido (2S,3aS,6aS)-1-(terc-butoxicarbonil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxllico 25 (4,45 g, > 99 %). MS (ESI) m/z 256,21 [M + H]+.

5

10

15

20

25

30

imagen46

clormdrato de

acido (2S,3S)-2-

(2S,3aS,6<iS)-octahldf ociclo|)ent<i[l>]|)ii i ol-2-

(metoxicarbonilammo)

carboxilatode bencilo

3-inetil|)ent<inoico

Pd/C, H2(exceso)

BnO

EtOAc

Acido (2S,3<lS,6«iS)-1 -{<2S,3S)-2-

(2S,3aS,6aS)-1 -<( 2S,3S)-2-(metoxicai bonilamiiio)

(metoxicar boiiilaininoi-3-

3-metil|)entanoil)octahidrociclopeiita

metilpentanoiboctahidrociclopentalb]

[b]|)ii i ol-2-cai boxilato

|)iiiol-2- carboxilico

de bencilo

(2S,3aS,6aS)-1-((2S,3S)-2-(Metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilato de bencilo

A una solucion de clorhidrato de (2S,3aS,6aS)-octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilato de bencilo disponible en el mercado (10,0 g, 35,489 mmol) en cloruro de metileno (100 ml) se anadio acido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilpentanoico (10,072 g, 53,23 mmol), HATU (21,59 g, 56,78 mmol) y DIPEA (18,59 ml, 106,46 mmol). La reaccion se agito durante una noche, momento en el que se concentro al vaclo, se diluyo en acetato de etilo y se lavo con HCl (1 N). La fase acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo, y los extractos organicos combinados se secaron sobre sulfato sodico, se filtraron y se concentraron. El aceite resultante se diluyo en una pequena cantidad de cloroformo y se filtro para retirar el precipitado de tetrametil urea. El aceite resultante se purifico por cromatografla en fase normal (acetato de etilo al 50 % en hexanos) para dar (2S,3aS,6aS)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilpentanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilato de bencilo (19,53 g, > 99 % de rendimiento) que se uso sin purificacion adicional. LCMS-ESI+ calculado para C23H33N2O5: 417,23; Encontrado: 417,37.

Acido (2S,3aS,6aS)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-

carboxilico

A un matraz de fondo redondo de 250 ml cargado con una barra de agitacion y (2S,3aS,6aS)-1-((2S,3S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxilato de bencilo (19,53 g en bruto, suponiendo 35,49 mmol) se anadio Paladio al 10 % sobre carbono (3,55 g). Sobre la mezcla se vertio etanol y la mezcla de reaccion se evacuo y se lavo abundantemente con gas hidrogeno tres veces. La suspension se agito a temperatura ambiente bajo una atmosfera de hidrogeno durante 3 dlas. Despues de su finalizacion, la mezcla de reaccion se filtro a traves de celite y se concentro para dar el acido (2S,3aS,6aS)-1-((2S,3S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxllico (13,65 g, > 99 %). LCMS-ESI+ calculado para C16H26N2O5: 327,18; Encontrado: 327,13.

imagen47

5 Acido (2S,3aS,6aS)-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carbox[lico

El acido (2S,3aS,6aS)-1-((S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2- carboxllico se sintetizo de una manera similar a la del acido (2S,3aS,6aS)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- metilpentanoil)octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carboxllico sustituyendo el acido (2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- 10 metilpentanoico por el acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico. LCMS-ESI+ calculado para C15H25N2O5: 313,17; Encontrado: 313,12.

Compuesto Intermedio 15

15

imagen48

Acido (2S,5S)-1-((S)-2-((2R,6R)-2,6-<limetilteti«ihi<lio- 2H-|)ii an-4-il)-2-(metoxicar bonilamino)acetil)-5- inetilpir i olidina-2-car hoxilico

Acido (2S,5S)-1-((S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acetil)-5-

metilpirrolidina-2-carboxilico

20 El acido (2S,5S)-1-((S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acetil)-5-metil- pirrolidina-2-carboxllico se sintetizo de una manera similar a la del Compuesto Intermedio 4 sustituyendo el acido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico por el acido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2- (metoxicarbonilamino)acetico. RMN 1H (400 MHz, Cloroformo-d) 5 5,33 - 5,16 (m, 1H), 4,70 - 4,59 (m, 1H), 4,54 (t, 1H), 4,34 - 4,19 (m, 2H), 4,12 (c, 1H), 3,78 - 3,70 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,37 - 2,17 (m, 3H), 2,15 - 2,07 (m, 1H), 2,04 25 (s, 1H), 1,84 - 1,73 (m, 1H), 1,82 - 1,43 (m, 3H), 1,32 (d, 3H), 1,26 (d, 4H), 1,11 (d, 3H), 0,96 (c, 1H). LCMS-ESI+

calculado para C17H29N2O6: 357,19; Encontrado: 357,08.

Ejemplo AA (referencia)

imagen49

k2co3

9-hi omo-3-(2-br omo<icetib-10,11-

ticido (2S,5S)-1-((2S,3S)-2-

dihidi o-5H-dibenzo[c,<j]ci omen-

(metoxicai boiiil<iiniiio)-3-inotilp6iit<iiioih-

8l9hb-on<i

5-metil|)ii i olidm-2-car boxilico

C$2003

Boc

acido (2S,5SM-deic-birtoxicaibomb-5-

(2S,5SM-((2S,3S)-2-(metoxicaibonilamii)o)-3-

metilpir 1 olidin-2-cai boxilico

metilpehtanoil)-5-metilpinolidm-2-caiboxilato de

2-(9-biomo-8-oxo-8,9,10,11-tetiahidio-5H-

(libenzo[c.<j]ciomen-3-ib-2-oxoetilo

HMDS

Acido Piopiomco

(2S.5S)- 5-Metilpii 1 oli(lina-1.2-dicov boxiloto

2-(3-<2-((2S,5S)-1-((2S,3S)-2-0netoxicaibonilamino)-3-

metilpeiitanoih- 5-inetilpu 1 olidm-2- cai bomlox0acetil)-8-oxo-8,9,10,11-

teti aludi o-5H-dibenzo[c,(j]ci omen-9-ilo) y 1 -tei c-luitilo

imagen50

Mn02

(2S,5S)-2-[9-(2-1(2S,5S)-1-[N-(metoxicail>onih-L

isoleucil] 5-inetilpiiioluliii-2-il} 1H nmdazo! 5-ih-1.4.5.11-

teti ahidi oisoci omeno[4\3':6.7]nafto[ 1.2-d]imidazol-2-il]-5-

metilpii i olidina- 1-car hoxilato de tei c-lxitilo

1) HCI

2) HATU, DIPEA

/^NH

(2S.5S>-2-[9-(2-{(2S.5S)-1-[N-(metoxicail>omh

L-isoleucil]-5metil|)iiiolidin-2-il}1H-imidazol-5-ilM,11-

dihidioisociomeno[4\3:6Jjnafto[1,2-d]imidazol-2-il]-5

metilpu i olidina- 1-cai hoxilato de tei c-lxitilo

Acido (S)-2-(2R,6R)-2,6-dimetilteti almli o-2H pn an

4ilJ2-(metoxicai hoiiilaminoiacetico

/^NH

***•

{(2S,3S)-1-[<2S,5S)-2-<5-{2-[i2S,5SM-{<2Sl-2-[<2R,6Rl-2,6-dimetiltetiahidio

2H-piian-4-ilj-2-[(inetoxicail)onihainino]acetil}-5-inetilpiiioli(lin-2-il]-1.11-

diliidi oisoci oineno[4,3 i6,7jiiafto[1,2-dJiinidazol-9-il)-1H-iinidazol-2-il)-5-

inetilpiiiolidin-1-il]-3-inetil-1-oxopeiitan-2-il}cail>ainato de inetilo

(25.55) -1-((2S,3S)-2-(MetoxicarbonMamino)-3-metMpentanoM)-5-metMpirrolidin-2-carboxMato de 2-(9-bromo-8- oxo-8,9,10,11-tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-3-N)-2-oxoetilo

5

A una suspension de 9-bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (4,00 g, 8,88 mmol) en diclorometano (50 ml) se anadio acido (2S,5S)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5- metilpirrolidin-2-carboxllico (2,80 g, 9,32 mmol) y K2CO3 (1,84 g, 13,31 mmol). La suspension resultante se agito a temperatura ambiente durante 18 h. La reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con HCl acuoso (0,5 M) y 10 solucion salina saturada. Las fases acuosas se volvieron a extraer con diclorometano (2 x), y las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto en bruto se uso directamente en la reaccion siguiente.

(25.55) -5-Metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-(3-(2-((2S,5S)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3- 15 metilpentanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboniloxi)acetil)-8-oxo-8,9,10,11-tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-9-ilo)

y 1-terc-butilo

A una solucion de (2S,5S)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxilato de 2- (9-bromo-8-oxo-8,9,10,11-tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-3-il)-2-oxoetilo (5,95 g, 8,88 mmol) en THF (60 ml) se 20 anadio acido (2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-carboxllico (3,05 g, 13,3 mmol) y Cs2CO3 (2,31 g, 7,09 mmol). La solucion resultante se calento a 50 °C durante 18 h. La solucion se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con EtOAc y se lavo con HCl acuoso (0,5 M). La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc (2 x), y las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El aceite en bruto se purifico por cromatografla en columna (SiO2, EtOAc al 25-100 % (MeOH al 5 %)/ Hexanos) para proporcionar (2S,5S)-5- 25 metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-(3-(2-((2S,5S)-1-((2S,3S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5- metilpirrolidin-2-carboniloxi)acetil)-8-oxo-8,9,10,11 -tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-9-ilo) y 1 -terc-butilo (3,116, 43 % para 2 etapas) en forma de una espuma de color naranja. LCMS-ESI+: calculado para C44H55N3O12: 817,38 (M+); Encontrado: 817,65 (M+).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

(25.55) -2-[9-(2-1 (2S,5S)-1 -[N-(metoxicarbonil)-L-isoleucil]-5-metilpirrolidin-2-il}-1 H-imidazol-5-il)-1,4,5,11 - tetrahidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-2-il]-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo

A una solucion de (2S,5S)-5-metil-pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-(3-(2-((2S,5S)-1-((2S,3S)-2- (metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboniloxi)acetil)-8-oxo-8,9,10,11-tetrahidro-5H- dibenzo[c,g]cromen-9-ilo) y 1-terc-butilo (3,116 g, 3,57 mmol) en tolueno (35 ml) se anadio hexametdisilazano (6,0 ml, 28,7 mmol) y acido propionico (8,0 ml, 107,1 mmol). La solucion se calento a 90 °C durante 18 h y se enfrio a temperatura ambiente. La solucion se diluyo con MeOH y se basifico con una mezcla de NH4OH y agua a 1:1. La suspension se extrajo con diclorometano (3 x). Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El aceite en bruto se uso directamente en la siguiente etapa. LCMS-ESI+: calculado para C44H55N7O6: 777,42 (M+); Encontrado: 778,30 (M+H+).

(25.55) -2-[9-(2-{(2S,5S)-1 -[N-(metoxicarbonil)-L-isoleucil]-5-metilpirrolidin-2-il}-1 H-imidazol-5-il)-1,11- dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-2-il]-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo

A una solucion de (2S,5S)-2-[9-(2-{(2S,5S)-1-[N-(metoxicarbonil)-L-isoleucil]-5-metilpirrolidin-2-il}-1H-imidazol-5-il)-

1.4.5.11- tetrahidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-2-il]-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (2,77 g, 3,5 mmol) en diclorometano (25 ml) se anadio MnO2 (9,00 g, 103 mmol). La suspension resultante se agito a temperatura ambiente durante 20 h. La solucion se diluyo con diclorometano, se filtro a traves de celite, y se concentro. El aceite en bruto se purifico por cromatografla en columna (SiO2, EtOAc al 0-5-10 % / MeOH) para proporcionar (2S,5S)-2-[9-(2-{(2S,5S)-1-[N-(metoxicarbonil)-L-isoleucil]-5-metilpirrolidin-2-il}-1H-imidazol-5-il)-1,11- dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-2-il]-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (1,10 g, 40 % para 2 etapas) en forma de una espuma de color marron. LCMS-ESI+: calculado para C44H53N7O6: 775,41 (M+); Encontrado: 776,37 (M+H+).

{(2S,3S)-1-[(2S,5S)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1-{(2S)-2-[(2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2- [(metoxicarbonil)amino]acetil}-5-metilpirrolidin-2-il]-1,11-dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9- il}-1 H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidin-1 -il]-3-metil-1 -oxopentan-2-il}carbamato de metilo

A una solucion de (2S,5S)-2-[9-(2-{(2S,5S)-1-[N-(metoxicarbonil)-L-isoleucil]-5-metilpirrolidin-2-il}-1H-imidazol-5-il)-

1.11- dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-2-il]-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (0,30 g, 0,39 mmol) en una mezcla de diclorometano (4 ml) y metanol (0,5 ml) se anadio HCl (4 M en dioxanos, 1,45 ml, 5,80 mmol). La solucion se calento a 40 °C durante 1 h y se enfrio a temperatura ambiente. A continuation la solucion se concentro al vaclo. El solido resultante se disolvio en DMF (3 ml), seguido de la adicion de acido (S)-2- ((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acetico (0,11 g, 0,46 mmol), HATU (0,18 g, 0,48 mmol), y diisopropiletilamina (0,3 ml, 1,72 mmol). La solucion resultante se agito a temperatura ambiente durante 3 h. Se anadio HCl acuoso (6 M, 4 gotas) y la solucion se purifico por HPLC de fase inversa (columna Gemini, MeCN al 10-53 %/H2O/0,1 % > TFA). Las fracciones deseadas se combinaron, y los extractos organicos se concentraron al vaclo. La solucion acuosa resultante se basifico con NaHCO3 saturado para proporcionar un precipitado de color blanco. El solido se filtro y se seco para proporcionar {(2S,3S)-1-[(2S,SS)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1- {(2S)-2-[(2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(metoxicarbonil)amino]acetil}-5-metilpirrolidin-2-il]-1,11- dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il}-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidin-1-il]-3-metil-1-oxopentan-2- il}carbamato de metilo (0,082 g, 23 %) en forma de un polvo de color blanco. LCMS-ESI+: calculado para C50H62N8O9: 903,08 (M+); Encontrado: 903,84 (M+H+). RMN 1H (400 MHz, Metanol-d4) 5 8,36 -8,22 (m, 1H), 7,98 - 7,82 (m, 1H), 7,69 - 7,20 (m, 8H), 5,22 - 5,07 (m, 3H), 5,02 (d, 1H), 4,73 - 4,64 (m, 1H), 4,49 (s, 3H), 4,26 - 3,97 (m, 4H), 3,79 (d, 1H), 3,72 (s, 1H), 3,63 - 3,52 (m, 4H), 3,47 - 3,32 (m, 1H), 2,61 - 2,43 (m, 1H), 2,32 -1,98 (m, 4H), 1,95 - 1,78 (m, 1H), 1,79 - 1,65 (m, 1H), 1,54 (s, 4H), 1,41 (d, 2H), 1,28 - 1,09 (m, 3H), 1,04 (dd, 6H), 0,90 (d, 1H), 0,88 - 0,59 (m, 10H).

Ejemplo AU

imagen51

{(1S)-1-[(2R,6R)-2,6-Dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(2S,5S)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1-{(2S)-2-[(2R,6R)-2,6- dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(metoxicarbonil)amino]acetil}-5-metilpirrolidin-2-il]-1,11- dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il}-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidin-1-il]-2- oxoetil}carbamato de metilo

5

El {(1S)-1-[(2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(2S,5S)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1-{(2S)-2-[(2R,6R)-2,6-

dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(metoxicarbonil)amino]acetil}-5-metilpirrolidin-2-il]-1,11-

dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il}-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidin-1-il]-2-oxoetil}carbamato de metilo se sintetizo de una manera similar a la del ejemplo AA sustituyendo el acido (2S,5S)-1-((2S,3S)-2- 10 (metoxicarbonilamino)-3-metilpentanoil)-5-metilpirrolidin-2-carboxllico por el acido (2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5- metilpirrolidin-2-carboxllico. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 5 12,94 (s, 1H), 12,36 (s, 1H), 11,77 (s, 1H), 8,42 (m, 1H), 8,13 - 7,16 (m, 7H), 5,11 (s, 3H), 4.96 (s, 1H), 4,64 (s, 2H), 3,97 (m, 4H), 3,67 - 3,11 (m, 13H), 2,39 -1,66 (m, 10H), 1,62 - 1,30 (m, 7H), 1,30 - 0,92 (m, 9H), 0,81 (m, 6H). MS (ESI) m/z 960,04 [M + H]+.

15 Ejemplo AU-2

imagen52

CS2CO3

Boc

9-hi omo-3-(2-bi omoacetib-10.11 -

icido (2S,5S)-1-(teic-mitoxic«iil>onm-5

diliidi o-5H-dil>enzo[c,<j]ci omen-

metili)ii 1 olidm-2-car hoxilico

8(9H)-ona

NH4OAC

isopropanol

(2S,5S)-5-metil|)ii 1 olidina- 1.2-dicai boxilato de

2-(2-(9-(((2S,5S)-1-(teic-bi!toxicaibonih-5-metil|)iiiolidin-2-caiboml)oxi)-8-oxo-

8,9,10,11-teti aliidi o-5H-dibenzo[c,<j]oi omen-3-ib-2-oxoetilo) y 1-tei c-birtilo

Mn02

BOC II N>>N U H

Boc

(2S,5S)-2-(5-(2-((2S,5S)-1-(teic-Biitoxicaibonil)-5-

inetilpn 1 olidm-2-il> 1.4.5.11-teti aliidi oisoci omeno[4,3:6,7]nafto[1,2-

d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-ih-5-metil|)iiiolidma-1-cai boxilato de teic-biitilo

5

10

15

20

25

imagen53

(2S,5S)-2-(5-(2-((2S,5S)-1-(teic-Butoxic«irl)onil)-5- metilpirrolidin-2-il)-1,11-dihidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2- d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato <le rei c-hirtilo

EDCI, HOBt

2-((2S,5S}-5-Metil|)ii i olidin-2-il)-9-(2-((2S,5S)-5- metilpirrolidiii-2-il)-1H-imidazol-5-il)-1,11- diliidi oisocr oineiio[4\3*:6.7]nafto[ 12-d]iinidazol

acido (S)-2-((2FL6R>-2,6-diinetmetiahidio-2H-piian

4-il)-2-(0netoxicail)onil)ainino)acetico

{(1S)-1-[(2R.6R)-2,6-Dimetiltetiahidio-2H-piian-4-il]-2-[(2S,5S)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1- {(2S)-2-[(2R,6R)-2,6-dimetilteti ahidi o-2H-pir an-4-il]-2-[(metoxicar l)onil>amino]acetil}-5 inetilpiiioli(lin-2-il]-1.11-dihidioi$ocioineNo[4\3,:G,7lNafto[1,2-d]iinidazol-9-il}-1H imidazol-2-il)-5-metilpir i olidin-1 il]- 2-oxoetil)c ai bai nato de metilo

(25.55) -5-Metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-(2-(9-(((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2- carbonil)oxi)-8-oxo-8,9,10,11-tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-3-il)-2-oxoetilo) y 1-terc-butilo

A una solucion de acido (2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-carboxllico (25,44 g, 111 mmol) en THF (400 ml) se anadio carbonato de cesio (21,7 g, 66,6 mmol). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 15 min, seguido de la adicion de 9-bromo-3-(2-bromoacetil)-10,11-dihidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-8(9H)-ona (19,9 g, 44,4 mmol). La suspension se agito a temperatura ambiente durante 15 minutos y a continuation se calento a 40 °C durante 16 horas. La reaction se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con EtOAc. La solucion se lavo con HCl acuoso 0,3 M. La fase acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc, y las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. A continuacion, el aceite en bruto se filtro a traves de un lecho de gel de sllice (260 g) con un 40 % de EtOAc/Hexanos. Los filtrados se combinaron y se concentraron para proporcionar (2S,5S)-5- metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-(2-(9-(((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-carbonil)oxi)-8-oxo-

8,9,10,11-tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-3-il)-2-oxoetilo) y 1-terc-butilo (33 g, 100 %). MS (ESI) m/z 647,57 [M - Boc] +.

(25.55) -2-(5-(2-((2S,5S)-1 -(terc-Butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-il)-1,4,5,11 -

tetrahidroisocromeno[4’,3’:6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo

A una solucion de (2S,5S)-5-metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-(2-(9-(((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5- metilpirrolidin-2-carbonil)oxi)-8-oxo-8,9,10,11 -tetrahidro-5H-dibenzo[c,g]cromen-3-il)-2-oxoetilo) y 1 -terc-butilo (49,3 g, 66 mmol) en tolueno (600 ml) e isopropanol (66 ml) se anadio acetato amonico (102 g, 1323 mmol). La reaccion se calento a 90 °C durante 18 horas y se enfrio a temperatura ambiente. La reaccion se interrumpio mediante la adicion de agua (200 ml) y se agito a temperatura ambiente durante 10 min. La fase organica se aislo y se lavo con agua (200 ml). Las fases acuosas combinadas se extrajeron de nuevo con una mezcla de

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tolueno/isopropanol/metanol (10:1:1, 60 ml). Las fases organicas combinadas se transfirieron a un matraz de fondo redondo y se anadieron celite (29 g), metanol (150 ml), y una mezcla de solucion salina saturada a 2:1 y NaOH 6 M. Despues de agitacion vigorosa durante 40 min, la suspension se filtro y se aclaro con una mezcla de tolueno/isopropanol a 9:1. La fase organica se aislo, se diluyo con EtOAc, y se lavo con agua. A continuacion, la fase organica se concentro, se disolvio en una mezcla de CH2Cl2/hexanos, y se concentro a sequedad. Esto proporciono

(25.55) -2-(5-(2-((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-il)-1,4,5,11-tetrahidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2- d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (32,3 g, 69 %). MS (ESI) m/z 707,30 [M + H] +.

(25.55) -2-(5-(2-((2S,5S)-1-(terc-Butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-il)-1,11-

dihidroisocromeno[4\3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc- butilo

A una solucion de (2S,5S)-2-(5-(2-((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-il)-1,4,5,11- tetrahidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (32,3 g, 45,7 mmol) en CH2Cl2 (420 ml) se anadio dioxido de manganeso (120 g, 1380 mmol). La suspension se agito a temperatura ambiente durante 46 hora. La reaccion a continuacion se diluyo con CH2Cl2 y se anadio celite. Despues de agitar a temperatura ambiente durante 20 min, la suspension se filtro y el celite se lavo con CH2Cl2. El filtrado se concentro para proporcionar (2S,5S)-2-(5-(2-((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-il)-1,11- dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (25,1 g, 78 %). MS (ESI) m/z 705,50 [M + H] +.

2-((2S,5S)-5-Metilpirrolidin-2-il)-9-(2-((2S,5S)-5-metilpirrolidin-2-il)-1H-imidazol-5-il)-1,11-

dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol

A una solucion de (2S,5S)-2-(5-(2-((2S,5S)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-il)-1,11- dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il)-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (25,1 g, 35,6 mmol) en CH2O2 (350 ml) se anadio lentamente HCl (6 M en dioxano, 180 ml, 720 mmol) durante 5 minutos. La solucion se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos, y a continuacion se calento a 40 °C durante 1,5 horas. La suspension resultante se enfrio a temperatura ambiente y se filtro. A continuacion el precipitado se lavo con CH2O2 y se seco para proporcionar 2-((2S,5S)-5-metilpirrolidin-2-il)-9-(2-((2S,5S)-5- metilpirrolidin-2-il)-1H-imidazol-5-il)-1,11-dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol en forma de la sal de tetra- HCl (21,2 g, 92 %). MS (ESI) m/z 505,18 [M + H] +.

{(1S)-1-[(2R,6R)-2,6-Dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(2S,5S)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1-{(2S)-2-[(2R,6R)-2,6- dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(metoxicarbonil)amino]acetil}-5-metilpirrolidin-2-il]-1,11- dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il}-1H-imidazol-2-il)-5-metilpirrolidin-1-il]-2- oxoetil}carbamato de metilo

A una solucion de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCl.HCl, 11,7 g, 61 mmol) en DMF (180 ml) se anadio 1-hidroxibenzotriazol (8,2 g, 61 mmol). La suspension se agito hasta que fue homogenea y se enfrio a 2 °C. Se anadio acido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-((metoxicarbonil)amino)acetico (15,0 g, 61,2 mmol) y se agito a 1 °C durante 1 hora. A continuacion se anadieron la sal de tetra-HCl de 2-((2S,5S)-

5-metilpirrolidin-2-il)-9-(2-((25,5S)-5-metil-pi rrolidin-2-il)-1 H-imidazol-5-il)-1, 11 -dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2- d]imidazol (15,6 g, 27,1 mmol) y n-metilmorfolina (17,8 ml, 162,6 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 22 horas. A continuacion la reaccion se diluyo con EtOAc y se lavo con NH4O (2 x 500 ml), bicarbonato acuoso (2 x 300 ml), y solucion salina saturada (300 ml). Las fases acuosas se volvieron a extraer con EtOAc. Las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El material en bruto se purifico a traves de un lecho de gel de sllice con un 3 a un 8 % de MeOH/CH2Cl2 para proporcionar {(1S)-1-[(2R,6R)- 2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]-2-[(2S,5S)-2-(5-{2-[(2S,5S)-1-{(2S)-2-[(2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il]- 2-[(metoxicarbonil)amino]acetil}-5-metilpirrolidin-2-il]-1,11-dihidroisocromeno[4',3':6,7]nafto[1,2-d]imidazol-9-il}-1H- imidazol-2-il)-5-metilpirrolidin-1-il]-2-oxoetil}carbamato de metilo (20,5 g, 79 %). MS (ESI) m/z 959,87 [M + H] +.

Ensayos biologicos

Efecto de protefnas sericas en la potencia del replicon: Los ensayos de replicon se realizan en medio de cultivo celular normal (DMEM + FBS al 10 %) suplementado con concentraciones fisiologicas de albumina de suero humano (40 mg/ml) o a-acido glicoprotelna (1 mg/ml). Las CE50 en presencia de protelnas de suero humano se comparan con la CE50 en medio normal para determinar el numero de veces de desplazamiento en potencia.

Citotoxicidad de Celulas MT-4: Las celulas MT4 se tratan con diluciones en serie de compuestos durante un periodo de cinco dlas. La viabilidad celular se mide al final del periodo de tratamiento usando el ensayo Promega CellTiter-Glo y la regresion no lineal se realiza para calcular la CC50.

Concentracion del Compuesto Asociada con Celulas a CE50: Los cultivos de celulas Huh-luc se incuban con un compuesto a concentraciones iguales a la CE50. En multiples momentos (0 - 72 horas), las celulas se lavan 2X con

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medio frlo y se extraen con acetonitrilo al 85 %; tambien se extraera una muestra de los medios en cada momento. Los extractos de celulas y medios se analizan mediante LC/MS/MS para determinar la concentration molar de los compuestos en cada fraction. Los compuestos representativos de la divulgation mostraron actividad.

Solubilidad y Estabilidad: La solubilidad se determina tomando una allcuota de solution de reserva de DMSO 10 mM y preparando el compuesto a una concentracion final de 100 mM en las soluciones de medio de ensayo (PBS, pH 7,4 y HCl 0,1 N, pH 1, 5) con una concentracion total de DMSO de un 1 %. Las soluciones de medio de ensayo se incuban a temperatura ambiente agitando durante 1 h. Las soluciones se centrifugaran a continuation y los sobrenadantes recuperados se someteran a ensayo en la HPLC/UV. La solubilidad se calculara comparando la cantidad de compuesto detectado en la solucion de ensayo definida en comparacion con la cantidad detectada en DMSO a la misma concentracion. Tambien se determinara la estabilidad de los compuestos despues de una incubation de 1 hora con PBS a 37 °C.

Estabilidad en Hepatocitos Crioconservados de Ser Humano, Perro y Rata: Cada compuesto se incuba durante 1 hora en suspensiones de hepatocitos (100 pl, 80.000 celulas por pocillo) a 37 °C. Los hepatocitos crioconservados se reconstituyen en el medio de incubacion sin suero. La suspension se transfiere en placas de 96 pocillos (50 pl/pocillo). Los compuestos se diluyen a 2 pM en medio de incubacion y a continuacion se anaden a suspensiones de hepatocitos para iniciar la incubacion. Las muestras se toman a 0, 10, 30 y 60 minutos despues del inicio de la incubacion y la reaction se interrumpira con una mezcla que consiste en acido formico al 0,3 % en acetonitrilo al 90 %/agua al 10 %. La concentracion del compuesto en cada muestra se analiza usando LC/MS/MS. La semivida de desaparicion del compuesto en la suspension de hepatocitos se determina ajustando los datos de concentracion- tiempo con una ecuacion exponencial monofasica. Los datos tambien se ampliaran para representar la elimination hepatica intrlnseca y/o la eliminacion hepatica total.

Estabilidad en la Fraccion Hepatica S9 de Ser Humano, Perro y Rata: Cada compuesto se incuba durante 1 hora en suspension de S9 (500 pl, 3 mg de protelna/ml) a 37 °C (n = 3). Los compuestos se anaden a la suspension de S9 para iniciar la incubacion. Las muestras se toman a los 0, 10, 30 y 60 minutos despues del inicio de la incubacion. La concentracion del compuesto en cada muestra se analiza usando LC/MS/MS. La semivida de desaparicion del compuesto en la suspension de S9 se determina ajustando los datos de concentracion-tiempo con una ecuacion exponencial monofasica.

Permeabilidad de Caco-2: Los compuestos se someten a ensayo a traves de un servicio contractual (Absorption Systems, Exton, PA). Los compuestos se proporcionan al contratista de una manera con ocultacion. Se medira la permeabilidad tanto directa (A a B) como inversa (B a A). Las monocapas de Caco-2 se cultivan hasta confluencia en membranas de policarbonato revestidas con colageno, microporosas en placas Costar TRANSWELL® de 12 pocillos. Los compuestos se dosifican en el lado apical para la permeabilidad directa (A a B), y se dosifican en el lado basolateral para la permeabilidad inversa (B a A). Las celulas se incuban a 37 °C con CO2 al 5 % en una incubadora humidificada. Al comienzo de la incubacion y a 1 h y 2 h despues de la incubacion, se toma una allcuota de 200 pl de la camara receptora y se reemplaza con un tampon de ensayo recien preparado. La concentracion del compuesto en cada muestra se determina con LC/MS/MS. Se calcula la permeabilidad aparente, Pap.

Union a Proteina Plasmatica: La union a protelna plasmatica se mide mediante dialisis en equilibrio. Cada compuesto se fija en plasma en blanco a una concentracion final de 2 mM. El plasma fijado y el tampon fosfato se colocan en lados opuestos de las celulas de dialisis ensambladas, que a continuacion se giraran lentamente en un bano de agua a 37 °C. Al final de la incubacion, se determina la concentracion del compuesto en plasma y del tampon fosfato. El porcentaje no unido se calcula usando la siguiente ecuacion:

t

% No unido = 100 •

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c,

cb +Cf

\

en la que Cf y Cb son las concentraciones libre y no unida determinadas como el tampon despues de la dialisis y concentraciones en plasma, respectivamente.

Formation de perfiles de CYP450: Cada compuesto se incuba con cada una de las 5 enzimas CYP450 recombinantes humanas, incluyendo CYP1A2, CYP2C9, CYP3A4, CYP2D6 y CYP2C19 en presencia y ausencia de NADPH. Se tomaran muestras en serie de la mezcla de incubacion al comienzo de la incubacion y a los 5, 15, 30, 45 y 60 minutos despues del inicio de la incubacion. La concentracion del compuesto en la mezcla de incubacion se determina mediante LC/MS/MS. El porcentaje del compuesto que queda despues de la incubacion en cada momento se calcula comparando con la toma de muestras al comienzo de la incubacion.

Estabilidad en Rata, Perro, Mono y Plasma Humano: Los compuestos se incubaran durante 2 horas en plasma (rata, perro, mono, ser humano) a 37 °C. Los compuestos se anaden al plasma a concentraciones finales de 1 y 10 pg/ml. Se toman allcuotas a los 0, 5, 15, 30, 60 y 120 minutos despues de anadir el compuesto. La concentracion

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de los compuestos y metabolitos principales en cada momento se miden por LC/MS/MS.

Evaluacion de la actividad anti-VHC basada en celulas: la potencia antiviral (CE50) se determino usando un ensayo de indicador de replicon de VHC basado en luciferasa de Renilla (RLuc). Para llevar a cabo el ensayo para el genotipo 1 y 2a de JFH-1, las celulas de replicon de RLuc de VHC 1a estables (que albergan un replicon de H77 de genotipo 1a dicistronico que codifica un indicador de RLuc), celulas de replicon de RLuc de VHC 1b estables (que albergan un replicon Con1 de genotipo 1b dicistronico que codifica un indicador de RLuc), o celulas de replicon de Rluc 2a JFH-1 de VHC estables (que albergan un replicon de JFH-1 de genotipo 2a dicistronico que codifica un indicador de RLuc; con L31 presente en NS5A) se distribuyeron en placas de 384 pocillos para ensayos de CE50. Para llevar a cabo el ensayo para el genotipo 2a (con M31 presente en NS5A) o 2b, los replicones de JFH-1 de genotipo quimerico NS5A que codifica un indicador RLuc-Neo y cualquiera del gen NS5A de la cepa J6 de genotipo 2a o el gen NS5A de la cepa MD2b-1 de genotipo 2b (ambos con M31 presente) respectivamente, se transfectaron de forma transitoria (t) en celulas Huh-Lunet o se establecieron como celulas de replicon que se replican de forma estable (s). Cualquiera de las celulas se dispenso en placas de 384 pocillos para los ensayos de CE50. Para llevar a cabo el ensayo para los genotipos 3 y 4, el replicon Con1 de genotipo 1b quimerico de NS5A que codifica un indicador Pi-RLuc y cualquiera del gen NS5A de la cepa S52 de genotipo 3a o el gen NS5A de la cepa ED43 de genotipo 4a respectivamente, se transfectar donde forma transitoria (t) en celulas Huh-Lunet, que se distribuyeron posteriormente en placas de 384 pocillos. Los compuestos se disolvieron en DMSO a una concentracion de 10 mM y se diluyeron en DMSO de forma manual o usando un instrumento de pipeteo automatizado. Los compuestos de diluyeron en serie 3 veces mezclados de forma manual con medios de cultivo de celulas y se anadieron a las celulas sembradas o se anadieron directamente a las celulas usando un instrumento automatizado. El DMSO se uso como un control negativo (disolvente, sin inhibicion), y el inhibidor de la proteasa, ITMN-191, se incluyo a una concentracion > 100 x CE50 como control positivo. 72 horas mas tarde, las celulas se lisaron y la actividad de luciferasa de Renilla se cuantifico de acuerdo con lo recomendado por el fabricante (Promega-Madison, WI). Para calcular los valores de CE50 se realizo regresion no lineal.

Para determinar la potencia antiviral (CE50) frente a mutantes de resistencia, se introdujeron mutaciones de resistencia, incluyendo M28T, Q30R, Q30H, Q30E, L31M, Y93C, Y93H, e Y93N en el genotipo 1a de NS5A, Y93H y L31V/Y93H en el genotipo 1b de NS5A, e Y93H para el genotipo 3a NS5A, de forma individual en cualquiera de los replicones 1a Pi-Rluc o 1b Pi-Rluc por mutagenesis dirigida al sitio. El ARN del replicon de cada mutante resistente se transfecto de forma transitoria en celulas curadas 51 obtenidas a partir de Huh-7 y se determino la potencia antiviral en estas celulas transfectadas como se ha descrito anteriormente.

Estudios de Farmacocinetica de una Sola Dosis IV y PO en Ratas SD: La farmacocinetica de los compuestos seleccionados se caracterizo en ratas Sprague-Dawley (SD) macho (250-300 g). En este estudio, dos grupos de ratas SD de raza pura sin tratamiento previo (N = 3 por grupo, en ayunas durante una noche) recibieron el compuesto seleccionado ya sea como una infusion intravenosa (IV) (1 mg/kg durante 30 minutos) a traves de la vena yugular o mediante sonda oral (2 mg/kg). El vehlculo de dosificacion intravenosa (IV) fue etanol al 5 %, polietilenglicol 400 (PEG 400) al 35 % y agua al 60 % a pH 2,0. El vehlculo de dosificacion oral fue al etanol 5 %, PEG 400 al 55 % y tampon citrato al 40 % a pH 2,2.

Las muestras de sangre en serie (de aproximadamente 0,3 ml cada una) se extrajeron de la vena yugular u otra vena adecuada en momentos especificados. Para el grupo de infusion IV, las muestras de sangre se extrajeron antes de la dosis y a las 0,25, 0,48, 0,58, 0,75, 1,5, 3, 6, 8, 12 y 24 horas despues del inicio de la infusion. Para el grupo oral, las muestras de sangre se extrajeron antes de la dosis y a las 0,25, 0,50, 1, 2, 4, 6, 8, 12 y 24 horas despues de la dosificacion. Las muestras de sangre se recogieron en tubos Vacutainer™ que contenlan EDTA-K3 como anticoagulante y se centrifugaron a aproximadamente 4 °C para obtener plasma. Las muestras de plasma se almacenaron a -20 °C hasta su analisis por LC/MS/MS.

Un metodo bioanalltico utilizando cromatografla llquida de alto rendimiento acoplado a espectrometrla de masas en tandem (LC/MS/MS) se desarrollo para el analisis del compuesto seleccionado en plasma de rata. La deteccion se realizo usando el control de reaccion seleccionado (SRM); los iones que representan la especie precursora (M+H)+ se seleccionaron en cuadrupolo 1 (Q1) y colisionaron con gas argon en la celda de colision (Q2) para generar iones de producto especlfico, que se controlaron posteriormente en cuadrupolo 3 (Q3). Las muestras de curva patron y de control de calidad se prepararon en plasma de rata macho y se procesaron de la misma manera que las muestras de ensayo para generar datos cuantitativos.

Los parametros farmacocineticos se generaron usando analisis farmacocinetico no compartimental (Phoenix WinNonlin, version 6,3). A los valores inferiores al llmite inferior de cuantificacion (LLOQ) se les asigno un valor de cero si eran de antes de la dosis y a partir de ese momento se trataron como faltantes. El area bajo la curva (AUC) se calculo usando la regla trapezoidal lineal. La biodisponibilidad oral (% de F) se determino por comparacion del area bajo la curva (AUC) del compuesto y/o un metabolito generado en plasma despues de la administracion oral con respecto a la generada despues de la administracion intravenosa.

Los datos obtenidos en los ensayos descritos anteriormente para el compuesto como se describe en el presente documento se muestran en la Tabla 1.

Los compuestos de la presente divulgacion presentan una mejora de la biodisponibilidad y/o actividad y hacia ciertos genotipos del VHC y/o mutantes resistentes de los mismos cuando se comparan con los ejemplos comparativos que se enumeran a continuacion. Los ejemplos comparativos (Comp 1-14), como se muestra en las Tablas 2A y 2B que siguen a continuacion, se prepararon de acuerdo con los protocolos de slntesis que se describen en el presente 5 documento usando los materiales de partida apropiados.

Claims (15)

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   1. Un compuesto que tiene la formula:

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   o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 que tiene la formula:

   imagen2
3. 3. Una composicion farmaceutica que comprende el compuesto como se describe en la reivindicacion 1 o en la reivindicacion 2 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable.
4. 4. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 3 para su uso en el tratamiento de la hepatitis C (VHC).
5. 5. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 3, que comprende adicionalmente al menos un agente terapeutico adicional para el tratamiento del VHC.
6. 6. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 5, en la que dicho agente terapeutico adicional se selecciona entre ribavirina, un inhibidor de la proteasa NS3, un inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC, un inhibidor de la alfa-glucosidasa 1, un agente hepatoprotector, un inhibidor no nucleosldico de polimerasa del VHC o combinaciones de los mismos.
7. 7. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 3, que comprende adicionalmente un inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC.
8. 8. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 7, en la que dicho inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC se selecciona entre ribavirina, viramidina, levovirina, un L-nucleosido o isatoribina.
9. 9. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto como se describe en la reivindicacion 1 o en la reivindicacion 2 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, al menos un inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC y al menos un vehlculo farmaceuticamente aceptable.
10. 10. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 9, que comprende adicionalmente un interferon, un interferon pegilado, ribavirina o combinaciones de los mismos.
11. 11. La composicion farmaceutica de una cualquiera de las reivindicaciones 9-10, en la que el inhibidor nucleosldico o nucleotldico de la polimerasa NS5B del VHC es sofosbuvir.
12. 12. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto como se describe en la reivindicacion 1 o en la reivindicacion 2 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, al menos un inhibidor de la proteasa NS3 y al
13. 13. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 12, que comprende adicionaimente sofosbuvir.

    5 14. Un compuesto como se describe en la reivindicacion 1 o en la reivindicacion 2 o una sal farmaceuticamente

    aceptable del mismo, para su uso en un metodo para tratar la hepatitis C, comprendiendo dicho metodo administrar a un paciente humano una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto o de la sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

    10 15. El compuesto o la sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de acuerdo con la reivindicacion 14,

    en donde el metodo comprende adicionalmente administrar al paciente un interferon o un interferon pegilado.
14. 16. El compuesto o la sal farmaceuticamente aceptable del mismo para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 14-15, en donde el metodo comprende adicionalmente administrar ribavirina al paciente.

    15
15. 17. Un compuesto como se describe en la reivindicacion 1 o en la reivindicacion 2 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia medica.