ES2621403T3 - Nueva composición para la administración de genes - Google Patents

Nueva composición para la administración de genes Download PDF

Info

Publication number
ES2621403T3
ES2621403T3 ES12847217.2T ES12847217T ES2621403T3 ES 2621403 T3 ES2621403 T3 ES 2621403T3 ES 12847217 T ES12847217 T ES 12847217T ES 2621403 T3 ES2621403 T3 ES 2621403T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
composition
gene
protamine
solution
chitosan
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES12847217.2T
Other languages
English (en)
Inventor
Young Nam Lee
Ho Young Hwang
Sang Myoung Noh
Hee-Jeong Cho
Ah-Reum CHAE
Ji Hee Lee
Min Hyo Ki
Jong Lae Lim
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chong Kun Dang Corp
Original Assignee
Chong Kun Dang Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chong Kun Dang Corp filed Critical Chong Kun Dang Corp
Application granted granted Critical
Publication of ES2621403T3 publication Critical patent/ES2621403T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5161—Polysaccharides, e.g. alginate, chitosan, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/12—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Una composición farmacéutica para la administración de genes, que comprende: (i) un gen; (ii) un quitosano hidrosoluble; (iii) un pirofosfato de tiamina o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable; (iv) una protamina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable y (v) un fosfolípido neutro o aniónico, en la que el gen se selecciona del grupo que consiste en un ADN monocatenario o bicatenario, un ARN monocatenario o bicatenario, un ADN de plásmido, un ARNip monocatenario o bicatenario, un oligonucleótido antisentido, una ribozima y un ARN catalítico o un nucleótido.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
5
10
15
20
25
30
35
40
45
EJEMPLOS 5 A 8: Preparación de una composición para la administración de ARNip de VEGF.
Cuatro miligramos de HCl de quitosano 150~400 kDa, 2 mg de pirofosfato de tiamina y 0,5 mg de sulfato de protamina (Alps Pharmaceutical) se disolvieron independientemente en 1 ml de agua destilada estéril. Cada solución se filtró a través de un filtro de 0,22 µm. El ARNip de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (Bioneer) se disolvió a una concentración final de 1 mg/ml en agua destilada estéril. Lipoid S-100 como fosfolípido y DSPEmPEG2000 se disolvieron en las relaciones dadas en la Tabla 2 en 1 ml de etanol, siendo el peso de fosfolípido total 30 mg, seguido por filtración a través de un filtro de 0,22 µm. La solución de ARNip de VEGF se mezcló en las proporciones dadas en la Tabla 2 con la solución de quitosano hidrosoluble y la solución de pirofosfato de tiamina para formar pre-complejos y después se mezcló con la solución de protamina y la solución de fosfolípido para preparar composiciones que contienen nanopartículas. En la presente memoria la secuencia de ARNip de VEG utilizada fue 5'-GGA GUA CCC UGA UGA GAU C(dTdT)-3' (SEQ ID NO: 3).
En la Tabla 2, la unidad es el peso (μg). [TABLA 2]
Ej. 5
Ej. 6 Ej. 7 Ej. 8
ARNip de VEGF
1 1 1 1
HCl de quitosano
17,1 17,1 8,6 8,6
Pirofosfato de tiamina
2,9 2,9 2,9 2,9
Protamina
0,6 0,6 5 5
Lipoid S-1001
32 30,4 32 30,4
DSPE-mPEG2000
0 1,6 0 1,6
EJEMPLOS 9 A 14: Preparación de una composición para la administración de gataparsen
Cuatro miligramos de HCl de quitosano 150~400 kDa, 2 mg de pirofosfato de tiamina y 0,5 mg de sulfato de protamina (Alps Pharmaceutical) se disolvieron independientemente en 1 ml de agua destilada estéril. Cada solución se filtró a través de un filtro de 0,22 µm. Se disolvió gataparsen (ARN antisentido contra survivina, Bioneer) a una concentración final de 1 mg/ml en agua destilada estéril. Lipoid S-100 y DSPE-mPEG2000 se disolvieron en las relaciones dadas en la Tabla 3 en 1 ml de etanol, siendo el peso de fosfolípido total 30 mg, seguido por filtración a través de un filtro de 0,22 µm. La solución de gataparsen (ARN antisentido contra survivina) se mezcló en las proporciones dadas en la Tabla 1 con la solución de protamina para formar pre-complejos y después se mezcló con la solución de quitosano hidrosoluble, la solución de pirofosfato de tiamina y la solución de fosfolípido para preparar una composición que contiene nanopartículas. En la presente memoria, gataparsen tiene la secuencia de 3'-d(P-tio)([2'-O-(2-metoxietil)]m5rU-[2'-O-(2-metoxietil)]rG-[2'-O-(2-metoxietil)]m5rU-[2'-O-(2-metoxietil)]rG-m5C-T-A-T-Tm5C-T-G-T-G-[2'-O-(2-metoxietil)]rA-[2'-O-(2-metoxietil)]rA-[2'-O-(2-metoxietil)]m5rU-[2'-O-(2-metoxietil)]m5rU)-5' (SEQ ID NO:4). En la Tabla 3, la unidad es el peso (μg).
[TABLA 3]
Ej. 9
Ej. 10 Ej. 11 Ej. 12 Ej. 13 Ej. 14
Gataparsen
1 1 1 1 1 1
HCl de quitosano
17,1 17,1 1,7 1,7 0,43 0,43
Pirofosfato de tiamina
2,9 2,9 0,3 0,3 0,07 0,07
Protamina
0,6 0,6 0,2 0,2 0,2 0,2
Lipoid S-100
32 30,4 12 11,4 6 5,7
DSPE-mPEG2000
0 1,6 0 0,6 0 0,3

EJEMPLOS 15 A 17: Preparación de una composición liofilizada para la administración de ARNip de survivina
Cuatro miligramos de HCl de quitosano 150-400 kDa, 2 mg de pirofosfato de tiamina y 0,5 mg de sulfato de protamina (Alps Pharmaceutical) se disolvieron independientemente en 1 ml de agua destilada estéril. Cada solución se filtró a través de un filtro de 0,22 µm. El ARNip de survivina se disolvió a una concentración final de 1 mg/ml en agua destilada estéril. Lipoid S-100, 30 mg, se disolvió en 1 ml de etanol, seguido por filtración a través de un filtro de 0,22 µm. La solución de ARNip de survivina se mezcló en las proporciones dadas en la Tabla 4 con la solución de protamina para formar pre-complejos y después se mezcló con la solución de quitosano hidrosoluble, la solución de pirofosfato de tiamina y la solución de fosfolípido para preparar composiciones que contienen nanopartículas. En la presente memoria, el ARNip de survivina tenía la misma secuencia que en los Ejemplos 1 a 4. A las composiciones se añadió una solución al 30 % de un excipiente de azúcar (trehalosa (Trehalose SG, Hayashibara), glucosa) en agua destilada estéril en las proporciones dadas en la Tabla 4. Las soluciones se liofilizaron a -70 °C para formar fases sólidas.
7
En la Tabla 4, la unidad es el peso (μg).
[TABLA 4]
Ej. 15
Ej. 16 Ej. 17
ARNip de survivina
1 1 1
HCl de quitosano
17,1 17,1 17,1
Pirofosfato de tiamina
2,9 2,9 2,9
Protamina
0,6 0,6 0,6
Lipoid S-100
32 32 32
Trehalosa
600 300 300
Glucosa
0 150 300
5 EJEMPLOS COMPARATIVOS
EJEMPLO COMPARATIVO 1: Preparación de una composición que consiste en un gen, protamina, pirofosfato de tiamina y fosfolípido
10 Se preparó una composición que contenía nanopartículas de la misma manera que en el Ejemplo 1, con la excepción de que no se usó HCl de quitosano. Las cantidades de los componentes se dan en la Tabla 5 siguiente (unidad: μg). Esta composición se utilizó como control para la comparación con la composición de la presente invención (Ejemplo 1).
15 [TABLA 5]
Ej. C. 1
ARNip de survivina
1
Pirofosfato de tiamina
2,9
Protamina
0,6
Lipoid S-100
32
EJEMPLO COMPARATIVO 2: Preparación de una composición que consiste en un gen, quitosano hidrosoluble, protamina y fosfolípido
20 Se preparó una composición que contenía nanopartículas de la misma manera que en el Ejemplo 1, con la excepción de que no se usó pirofosfato de tiamina. Las cantidades de los componentes se dan en la Tabla 6 siguiente (unidad: μg). Esta composición se utilizó como control para la comparación con la composición de la presente invención (Ejemplo 1).
25 [TABLA 6]
Ej. C. 2
ARNip de survivina
1
HCl de quitosano
17,1
Protamina
0,6
Lipoid S-100
32
EJEMPLO COMPARATIVO 3: Preparación de una composición que consiste en un gen, quitosano hidrosoluble, pirofosfato de tiamina y fosfolípido
30 Se preparó una composición que contenía nanopartículas de la misma manera que en el Ejemplo 1, con la excepción de que no se usó protamina. Las cantidades de los componentes se dan en la Tabla 7 siguiente (unidad: μg). Esta composición se utilizó como control para la comparación con la composición de la presente invención (Ejemplo 1).
35 [TABLA 7]
Ej. C. 3
ARNip de survivina
1
HCl de quitosano
17,1
Pirofosfato de tiamina
2,9
Lipoid S-100
32
8
imagen6
imagen7
5
15
25
35
45
55
65
gen solo y la composición del Ejemplo Comparativo 1, que no contenía quitosano, no suprimía en absoluto la expresión de la proteína diana. Es decir, el quitosano juega un papel crítico en la administración de los genes y, por lo tanto, la composición de la presente invención no puede llevar a cabo en absoluto la administración de genes sin quitosano.
La composición del Ejemplo Comparativo 2, que carecía de pirofosfato de tiamina, permitió a la proteína diana expresarse a un nivel 60 % mayor que el control, lo que indica que la ausencia de pirofosfato de tiamina debilita la afinidad de unión entre el gen y el quitosano a pH fisiológico (pH 7-7,4), disminuyendo significativamente la eficacia en la administración de genes. Además, la composición del Ejemplo Comparativo 7, que carecía de pirofosfato de tiamina y protamina, expresaba la proteína diana a un nivel de 68 % y, por lo tanto, era significativamente inferior a la composición de la presente invención en términos de la administración de genes.
EJEMPLO EXPERIMENTAL 5: Ensayo de estabilidad en suero de las partículas de la composición para la administración de genes
Cada una de las composiciones de los Ejemplos 1, 3 y 11 y los Ejemplos Comparativos 2, 3, 4, y 6 se mezclaron con un volumen igual de suero (Invitrogen). Después de la incubación durante 3 horas, los tamaños de las partículas se midieron mediante un analizador del tamaño de las partículas ELS (espectrofotómetro de dispersión de la luz electroforética) y un potenciómetro (ELS-Z, Otsuka, Japón). En este sentido, las celdas para la medición del tamaño de las partículas se usaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante (FIG. 5).
Como se puede ver en la FIG. 5, las nanopartículas de la composición de la presente invención (Ejemplos 1, 3, y 11) mantenían el mismo tamaño original de 200 a 300 nm, incluso en un suero como en agua destilada.
Por el contrario, como las partículas de la composición del Ejemplo Comparativo 3, que no contiene protamina, cuyo tamaño era de 1.500 nm o más, se observaron que se agregaban de forma significativa con las proteínas de suero y no se mantenían de forma estable. Además, se observó que las partículas del Ejemplo Comparativo 4, que no contenía fosfolípido, se agregaban aún más con las proteínas del suero y disminuía su estabilidad, ya que su tamaño era de 4.000 nm o más. Además, también se observó una fuerte agregación con las proteínas del suero y una disminución de la estabilidad de las partículas en la sangre con las partículas del Ejemplo Comparativo 6, que no contenían protamina ni fosfolípidos y cuyo tamaño era de 3.000 nm o más. Estos datos sugieren que todos los componentes de la composición de la presente invención son necesarios para prevenir la agregación con las proteínas del suero, así como para garantizar la estabilidad en el suero de la nanopartícula basada en quitosano.
Un tamaño de las partículas de 1.000 nm o más demostró que las partículas del Ejemplo Comparativo 2, que no contenían pirofosfato de tiamina, también eran inestables en la sangre. En este contexto, la falta de pirofosfato de tiamina, a pesar de contener un gen, un quitosano hidrosoluble, una protamina y un fosfolípido, hacía que los complejos se disociasen fácilmente, haciéndolos inestable.
En consecuencia, con el fin de aplicar el quitosano como un vehículo del gen para la aplicación in vivo, es necesaria la estabilidad de las partículas en el suero. Para este fin, todos los componentes de la composición de la presente invención son necesarios.
EJEMPLO EXPERIMENTAL 6: Liofilización de la composición para la administración de genes y medición del tamaño de las partículas
Las composiciones liofilizadas para la administración de genes, preparadas en los Ejemplos 15, 16 y 17, se resuspendieron en agua purificada para formar una concentración de gen de 100 μg/ml y los tamaños de las partículas se midieron mediante un analizador del tamaño de las partículas ELS (espectrofotómetro de dispersión de la luz electroforética) y un potenciómetro (ELS-Z, Otsuka, Japón). En este sentido, las celdas para la medición del tamaño de las partículas se usaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante (FIG. 6).
Como se puede ver en la FIG. 6, las nanopartículas en las composiciones de los Ejemplos 15 a 17 mantenían un tamaño de las partículas de aproximadamente 300 nm a pesar de que se rehidrataban después de la liofilización. Es decir, las nanopartículas se pueden almacenar de forma estable en una forma liofilizada en presencia de azúcar durante la distribución y almacenamiento. También, se pueden aplicar in vivo simplemente resuspendiendo en agua.
EJEMPLO EXPERIMENTAL 7: Ensayo in vivo de la actividad inhibidora del crecimiento tumoral de la composición
Para su uso en la evaluación de la eficacia en cuanto a la administración de genes in vivo de las composiciones del Ejemplo 1 y Ejemplos Comparativos 5 y 7, se construyeron modelos de ratones inmunodeficientes implantados con células de cáncer de próstata. En este contexto, se suspendió una línea celular de cáncer de próstata a una densidad de 2x106 células en 50 μl de RPMI y se mezcló con 50 μl de Matrigel (BD Biosciences) antes de la inyección subcutánea en ratones macho inmunodeficientes de 5 semanas de edad. Los tumores se dejaron crecer hasta un volumen de 100 mm3, después de lo cual se inyectaron las composiciones de los Ejemplos 1 y Ejemplos Comparativos 5 y 7 en una dosis de genes de 100 μg/ml en la vena de la cola de tres grupos de 8 ratones. A un
11

Claims (1)

  1. imagen1
ES12847217.2T 2011-11-10 2012-11-09 Nueva composición para la administración de genes Active ES2621403T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020110117082A KR101383324B1 (ko) 2011-11-10 2011-11-10 신규한 유전자 전달용 조성물
KR20110117082 2011-11-10
PCT/KR2012/009443 WO2013070010A1 (en) 2011-11-10 2012-11-09 Novel composition for gene delivery

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2621403T3 true ES2621403T3 (es) 2017-07-04

Family

ID=48290305

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES12847217.2T Active ES2621403T3 (es) 2011-11-10 2012-11-09 Nueva composición para la administración de genes

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9173853B2 (es)
EP (1) EP2776056B1 (es)
JP (1) JP5923177B2 (es)
KR (1) KR101383324B1 (es)
ES (1) ES2621403T3 (es)
WO (1) WO2013070010A1 (es)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101494594B1 (ko) 2011-08-30 2015-02-23 주식회사 종근당 약리학적 활성물질의 서방성 지질 초기제제 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
KR101586791B1 (ko) 2012-12-28 2016-01-19 주식회사 종근당 ＧｎＲＨ 유도체의 서방성 지질 초기제제 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
BR112015018442B1 (pt) 2013-01-31 2022-09-06 Chong Kun Dang Pharmaceutical Corp. Compostos de derivados de ciclohexeno biaril- ou heterocíclico biaril-substituídos, composições farmacêuticas e uso
KR101601035B1 (ko) 2013-02-28 2016-03-08 주식회사 종근당 키토산 및 액상결정 형성 물질을 포함하는 유전자 전달용 조성물
CL2014003514A1 (es) * 2014-12-23 2015-05-08 Univ De Concepción Nanopartículas a base de quitosano para el transporte de péptidos con actividad en el sistema nervioso central.
KR101916193B1 (ko) 2016-08-25 2018-11-07 주식회사 파마리서치프로덕트 핵산 및 키토산을 포함하는 관절강 주사용 조성물
CN110536694A (zh) 2017-04-20 2019-12-03 Atyr 医药公司 用于治疗肺部炎症的组合物和方法
EP4257600A3 (en) 2018-07-03 2024-01-10 Gilead Sciences, Inc. Antibodies that target hiv gp120 and methods of use
EP3990476A1 (en) 2019-06-25 2022-05-04 Gilead Sciences, Inc. Flt3l-fc fusion proteins and methods of use
CA3145791A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Gilead Sciences, Inc. Hiv vaccines and methods of making and using
CR20220129A (es) 2019-09-30 2022-05-06 Gilead Sciences Inc Vacunas para vhb y métodos de tratamiento de vhb
EP3954393A1 (en) 2020-08-13 2022-02-16 Bioasis Technologies Inc. Combination therapies for delivery across the blood brain barrier
TWI815194B (zh) 2020-10-22 2023-09-11 美商基利科學股份有限公司 介白素2-Fc融合蛋白及使用方法
WO2024015741A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Gilead Sciences, Inc. Hiv immunogenic polypeptides and vaccines and uses thereof

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6008202A (en) 1995-01-23 1999-12-28 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US7052678B2 (en) 1997-09-15 2006-05-30 Massachusetts Institute Of Technology Particles for inhalation having sustained release properties
NZ505876A (en) 1998-01-16 2002-12-20 Univ Johns Hopkins Solid nanosphere composition and delivery of a coacervate polymeric cation (gelatine or chitosan) and a polyanion (nucleic acids)
US20030134810A1 (en) 2001-10-09 2003-07-17 Chris Springate Methods and compositions comprising biocompatible materials useful for the administration of therapeutic agents
US20070116767A1 (en) * 2003-02-14 2007-05-24 Mohapatra Shyam S Chitosan-microparticles for ifn gene delivery
KR100882611B1 (ko) * 2006-11-14 2009-02-12 주식회사 키토라이프 표적 리간드로서 폴릭산이 도입된 유전자 전달체용저분자량 수용성 키토산 나노입자 및 이의 제조방법
KR100825519B1 (ko) * 2007-01-05 2008-04-25 주식회사 바이오폴리메드 키토산 기재 고분자 접합체 및 그 제조방법
WO2009120247A2 (en) 2007-12-27 2009-10-01 The Ohio State University Research Foundation Lipid nanoparticle compositions and methods of making and using the same
KR101494594B1 (ko) 2011-08-30 2015-02-23 주식회사 종근당 약리학적 활성물질의 서방성 지질 초기제제 및 이를 포함하는 약제학적 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR101383324B1 (ko) 2014-04-28
EP2776056B1 (en) 2017-01-11
US20150110876A1 (en) 2015-04-23
JP2015501791A (ja) 2015-01-19
KR20130051754A (ko) 2013-05-21
JP5923177B2 (ja) 2016-05-24
EP2776056A4 (en) 2015-07-15
WO2013070010A1 (en) 2013-05-16
US9173853B2 (en) 2015-11-03
EP2776056A1 (en) 2014-09-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2621403T3 (es) Nueva composición para la administración de genes
Yang et al. Functional exosome-mimic for delivery of siRNA to cancer: in vitro and in vivo evaluation
JP2024023853A (ja) 疾患の処置のためのエキソソームの使用
US11085044B2 (en) miRNA for treatment of breast cancer
JP2022542389A (ja) 拘束された脂質を含むナノ材料およびその使用
ES2832330T3 (es) Vector para administración pulmonar, agente inductor y usos
KR20150132131A (ko) 약물 전달 담체로서 생체분해가능하고 임상적으로 상용가능한 나노입자
Xu et al. Engineered mesenchymal stem cell-derived exosomes with high CXCR4 levels for targeted siRNA gene therapy against cancer
Xu et al. Co-delivery of 5-fluorouracil and miRNA-34a mimics by host-guest self-assembly nanocarriers for efficacious targeted therapy in colorectal cancer patient-derived tumor xenografts
ES2956776T3 (es) Composición farmacéutica que comprende miARN-3140 para su uso en el tratamiento del cáncer
JP5382682B2 (ja) 薬物送達複合体
Li et al. Codelivery of Shikonin and siTGF-β for enhanced triple negative breast cancer chemo-immunotherapy
ES2870477T3 (es) Composición farmacéutica y aplicaciones de los mismos
JP2021506795A (ja) エキソソーム関連遺伝子編集を用いてがんを処置するための方法および組成物
JP4881327B2 (ja) 抗腫瘍活性物質のリポソーム製剤
JP2021521126A (ja) エキソソームを用いたがん遺伝子に対する治療的な標的指向化の方法
CA3223463A1 (en) Methods and materials for treating cancer
CN103804473B (zh) 一种多肽及包含该多肽的核酸药物纳米粒
ES2691494T3 (es) Liposoma para administración tópica y aplicación del mismo
Chen et al. Albumin conjugation promotes arsenic trioxide transport through alkaline phosphatase-associated transcytosis in MUC4 wildtype pancreatic cancer cells
KR101684265B1 (ko) 방사선 기술을 이용한 2-아미노에틸 메타크릴레이트가 접합된 유전자 전달용 키토산 복합체 및 이의 제조 방법
US20210087221A1 (en) Spherical nucleic acids with tailored and active protein coronae
US20220202902A1 (en) Compositions comprising a tweak ligand and methods of using same
US20220031633A1 (en) Poly(amine-co-ester) polymeric particles for selective pulmonary delivery
US20200138727A1 (en) Enhanced therapeutic agent and nucleic acid delivery via hdl or reconstituted hdl nanoparticles