ES2621288T3

ES2621288T3 - Composiciones de protección solar eco-compatibles

Info

Publication number: ES2621288T3
Application number: ES12759212.9T
Authority: ES
Inventors: Roberto Danovaro; Elisabetta Damiani; Cinzia CORINALDESI
Original assignee: Aethic Ltd
Current assignee: Aethic Ltd
Priority date: 2011-07-27
Filing date: 2012-07-19
Publication date: 2017-07-03
Anticipated expiration: 2032-07-19
Also published as: AU2012288508A1; US20140170096A1; ZA201400627B; CN103826602B; WO2013014584A3; BR112014001874A2; WO2013014584A2; EP2736482B2; EP2736482A2; ES2621288T5; BR112014001874B1; JP2014521633A; NZ620436A; EP2736482B1; AU2012288508B2; ITRM20110400A1; CN103826602A

Abstract

Una composición de protección solar eco-compatible que comprende: - uno o más filtros UV seleccionados de 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametil-butil)- fenol, benzoato de 2-[4-(dietilamina)-2-hidroxibenzoil]hexilo, etilhexil triazona; - uno o más antioxidantes seleccionados de acetato de tocoferilo, tocoferol, retinol, compuestos polifenólicos extraídos de té verde; - uno o más portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas, y libre de: - conservantes que pertenecen a la familia de los parabenos; - derivados de ácido ascórbico; - filtros UV seleccionados de bis etilhexiloxifenol metoxifenil triazina, cinamatos, benzofenonas, derivados de alcanfor, óxido de titanio; - fragancias seleccionadas de aceite esencial de melaleuca, extractos de flor ylang ylang, extractos de Bambousa Arundinacea, Karité; - portadores seleccionados de grasas derivadas de animales y aceite de argán.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

DESCRIPCION

Composiciones de proteccion solar eco-compatibles

La presente invencion se refiere a composiciones de proteccion solar eco-compatibles, en particular a protecciones solares compatibles con el medio marino y la vida que habita en el, con referencia espedfica a los arrecifes de coral.

Estado de la tecnica anterior

Los arrecifes de coral se encuentran entre los ecosistemas mas biologicamente productivos y diversos del mundo, representando puntos calientes de biodiversidad marina, y manteniendo directamente a quinientos millones de personas (Moberg y Folke, 1999; Wilkinson, 2004). Aproximadamente el 60 % de los arrecifes de coral estan actualmente amenazados por diversos impactos naturales y antropogenicos (Hughes y col., 2003; Pandolfi y col., 2003). Durante los ultimos 20 anos, el blanqueo de corales (perdida de zooxantela simbiotica ubicada en corales escleractinios) ha aumentado de forma significativa, tanto en frecuencia como en extension espacial (Hoegh- Guldberg, 1999; Hughes y col., 2003; Knowlton, 2001). Este fenomeno se ha asociado con anomalfas de temperatura, exceso de radiacion ultravioleta (UV) o disponibilidad alterada de radiacion fotosintetica, y presencia de agentes patogenos bacterianos y agentes contaminantes (Brown y col., 2000; Bruno y col., 2007; Douglas, 2003; Glynn, l996; Jones, 2004).

La produccion y el consumo de productos solares de cuidado personal y cosmetica estan aumentando en todo el mundo, con consecuencias potencialmente importantes relacionadas con la contaminacion medioambiental. La liberacion de estos productos tambien esta unida a la rapida expansion del turismo en areas de costa marina (Wilkinson, 2004). Los compuestos qrnmicos contenidos en protectores solares y otros productos de cuidado personal pueden alcanzar niveles detectables en agua de mar (Daughton y Ternes, 1999; Giokas y col., 2007). Estos compuestos pueden ser potencialmente perjudiciales para el medioambiente; de ah que el uso de productos de proteccion solar este actualmente prohibido en algunos de los destinos tunsticos mas populares, como, por ejemplo, en parques ecologicos marinos de Mexico (Xcaret, 2007; Xel-ha, 2007). Debido a que los protectores solares son lipofilos, sus filtros UV se pueden acumular en animales acuaticos (Giokas y col., 2007) y causar efectos similares a los indicados por otros compuestos xenobioticos (Balmer y col., 2005; Daughton y Ternes, 1999).

Los conservantes de parabeno y algunos absorbentes UV contenidos en protectores solares tienen actividad estrogena (Daughton y Ternes, 1999; Schumpf y col., 2004). Ademas, se ha demostrado que ingredientes de proteccion solar pueden experimentar varias fotodegradaciones, con la transformacion implfcita de esos agentes en subproductos toxicos (Giokas y col., 2007, y bibliograffa del mismo). Tambien se ha demostrado que los protectores solares tienen un impacto en bacterias marinas (Danovaro y Corinaldesi, 2003). Recientemente se observo una estrecha relacion entre protectores solares y blanqueo de corales duros a traves de ensayos espedficos en todo el mundo (Danovaro y col., 2008). En particular, en este estudio se han analizado los efectos perjudiciales sobre corales de algunos filtros UV usados en protectores solares y algunas composiciones de proteccion solar comercialmente disponibles.

Un producto fabricado por la empresa MyChelle es una composicion de proteccion solar no toxica segura para los arrecifes que comprende oxido de cinc como bloqueador solar.

El objeto de la presente invencion es resolver los inconvenientes mencionados anteriormente proporcionando una composicion de proteccion solar que sea eco-compatible con el ecosistema marino de los arrecifes de coral.

Sumario de la invencion

Los protectores solares comercialmente disponibles comprenden una variedad de compuestos qrnmicos, sinteticos y naturales, que son todos potencialmente perjudiciales para el medio marino de los arrecifes de coral. Los inventores han seleccionado sorprendentemente algunas sustancias que, tanto por sf solas como en combinacion entre ellas, no causan perjuicio en este tipo de medio marino, pero de manera concomitante son altamente eficaces para proteger la piel frente a las radiaciones solares.

Por esto, el objeto de la presente invencion es una composicion de proteccion solar eco-compatible de acuerdo con la reivindicacion 1.

Breve descripcion de las figuras

Figura 1: factores de enriquecimiento viral en agua que rodea nubbins de coral (“pequenas ramificaciones con polipos vivos”) en sistemas tratados y en sistemas de control (controles). Se muestran las diversas clases de tratamientos diferentes ensayados en: a) fragancias; b) cremas; c) antioxidantes; d) filtros UV; e) controles.

Figura 2: factores de enriquecimiento procariotico en agua que rodea nubbins de coral en sistemas tratados y de control. Se muestran las diversas clases de tratamientos diferentes ensayados en: a) fragancias; b) cremas; c) antioxidantes; d) filtros UV; e) controles.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Figura 3: zooxantela total liberada en agua que rodea nubbins durante el ensayo de incubacion. Se muestran las diversas clases de tratamientos diferentes ensayados en: a) fragancias; b) cremas; c) antioxidantes; d) filtros UV; e) controles.

Figura 4: nivel de dano de zooxantela liberada despues de adicion de cremas de proteccion solar; c) antioxidantes; d) filtros UV; e) controles.

Figura 5: nubbins de coral en diferentes tiempos de incubacion. Los paneles a y b muestran sistemas de control en tiempo 0 y despues de 72 horas de incubacion. Los paneles c y d muestran nubbins de corales tratados en tiempo 0 y despues de 72 horas de incubacion.

Figura 6: fotoestabilidad de filtros ensayados por rayos UV.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion se refiere a composiciones de proteccion solar eco-compatibles con el ecosistema marino de arrecifes de coral.

En la presente descripcion, con la definicion “eco-compatible con el ecosistema marino” de los arrecifes de coral se indica un producto que no cause perjuicio o alteracion a los organismos marinos o a las comunidades o habitats en su totalidad. Un producto eco-compatible es, por lo tanto, util sin restricciones, ya que protege la salud del medioambiente y la biodiversidad. En los ensayos indicados anteriormente, se verificaron las condiciones de salud de organismos marinos expuestos a los diversos componentes qmmicos para seleccionar los componentes absolutamente inocuos. Se ha de tener en cuenta que un producto biodegradable (declaracion asociada a algunos productos comercializados) puede ser perjudicial para el medioambiente y por eso puede no ser eco-compatible, ya que el concepto de biodegradacion se refiere unicamente a los tiempos de descomposicion del compuesto.

Las composiciones de la presente invencion comprenden:

- uno o mas filtros UV seleccionados de MBBT, DHHB y EHT;

- uno o mas antioxidantes seleccionados de acetato de tocoferilo, tocoferol, retinol, compuestos polifenolicos extrafdos de te verde, y que no tienen conservantes que pertenecen a la familia de los parabenos.

En la presente descripcion, “parabenos” significan los esteres de acido 4-hidroxibenzoico usados como conservantes en la industria de los cosmeticos. Los parabenos mas comunes son metilparabeno, etilparabeno, propilparabeno y butilparabeno.

Un ejemplo de polifenoles extrafdos de te verde es polyphenone-60 (n.° de CAS 138988-88-2), comercialmente disponible de Sigma.

En una realizacion, las composiciones de la presente invencion pueden comprender una o mas fragancias ecocompatibles con el medio marino, seleccionadas del grupo que consiste en fragancias de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco.

Ejemplos de fragancias adecuadas para la presente invencion son las fragancias comercialmente disponibles de la empresa FAROTTI SRL, tales como guayaba y coco, lavanda natural, pomelo natural, preferiblemente en concentraciones iguales o inferiores al 0,3 % del producto.

Para incrementar los penodos de validez, en una realizacion las composiciones comprenden como conservante acido sorbico, que, de acuerdo con el ensayo indicado en el presente documento, no demostro ser perjudicial para arrecifes de coral en conjuncion con los otros compuestos.

Las composiciones se podfan preparar en diferentes formas de cosmeticos, tales como, por ejemplo, crema, locion, pomada, pulverizacion, barra de labios. Los filtros UV, antioxidantes, fragancias y conservantes seleccionados se podfan mezclar con diferentes portadores adecuados (de acuerdo con los resultados de ensayos) para la forma de cosmetico determinada que se quisiera fabricar.

Preferiblemente, se usaran portadores que tienen una funcion emoliente, seleccionados del grupo que consistente en dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas.

El dicaprilato/dicaprato de propilenglicol (numero de CAS: 68583-51-7) es un derivado de propilenglicol, y es un diester de propilenglicol y acidos grasos. En particular, es una mezcla de dicaprilato de propilenglicol y dicaprato de propilenglicol. Este producto esta comercialmente disponible con el nombre de Labrafac.

La cera de abejas (numero de CAS 8012-89-3) adecuada para la presente invencion esta, por ejemplo, comercialmente disponible con el nombre de Apifil.

Los datos indicados en la seccion experimental demuestran que los filtros MBBT, DHHB, los antioxidantes acetato de tocoferilo y tocoferol y la fragancia de guayaba y coco son los compuestos que tienen una mayor compatibilidad

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

con corales. Preferiblemente, las composiciones de la presente invencion comprenderan, de ese modo, MBBT, DHHB, acetato de tocoferilo o tocoferol y opcionalmente la fragancia de guayaba y coco.

La presente invencion se basa en la seleccion de compuestos adecuados para ser usados en composiciones para su uso como protectores solares compatibles con el medio marino y la vida que habita en el, con referencia particular a arrecifes de coral.

La mayona de compuestos usados de manera comun en protectores solares han demostrado ser perjudiciales para esos medios, compuestos tales como, por ejemplo:

- conservantes que pertenecen a la familia de los parabenos;

- derivados de acido ascorbico;

- filtros UV seleccionados de bis etilhexiloxifenol metoxifenil triazina (BEMT), cinamatos, benzofenonas, derivados de alcanfor, oxido de titanio;

- fragancias seleccionadas de aceite esencial de melaleuca, extractos de flor ylang ylang, extractos de Bambousa Arundinacea, Karite;

- portadores seleccionados de grasas derivadas de animales;

- aceite de Argan.

En una realizacion, las composiciones de proteccion solar comprenden:

- uno o mas filtros UV de 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenol, benzoato de 2- [4-(dietilamino)-2-hidroxibenzoil]hexilo, etilhexil triazona;

- uno o mas antioxidantes seleccionados de acetato de tocoferilo, tocoferol, retinol, compuestos polifenolicos extrafdos de te verde;

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas y estan libres de:

- conservantes que pertenecen a la familia de los parabenos o derivados de acido ascorbico;

- filtros UV seleccionados de bis etilhexiloxifenol metoxifenil triazina, cinamatos, benzofenonas, derivados de alcanfor, oxido de titanio;

- portadores seleccionados de grasas derivadas de animales y aceite de Argan.

En una realizacion con una eco-compatibilidad muy alta, ademas comprenderan acido sorbico y/o una o mas fragancias seleccionadas de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco.

En una realizacion con una eco-compatibilidad aun mas alta, las composiciones consisten basicamente en:

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas;

- agua.

- acido sorbico;

- agua.

En una realizacion adicional, las composiciones consisten basicamente en:

- 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenol y/o benzoato de 2-[4-(dietilamino)-2- hidroxibenzoil]hexilo;

- acetato de tocoferilo y/o tocoferol;

- acido sorbico;

- agua;

5

10

15

20

25

30

35

40

- una o mas fragancias seleccionadas de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco.

En una realizacion adicional, las composiciones consisten basicamente en:

- acetato de tocoferilo y/o tocoferol;

- acido sorbico;

- agua;

- una o mas fragancias seleccionadas de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco;

- hidroxietilcelulosa y/o EDTA y/o hidroxido de sodio.

En una realizacion adicional, las composiciones consisten basicamente en:

- 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenol, benzoato de 2-[4-(dietilamino)-2-

hidroxibenzoil]hexilo y etilhexil triazona;

- acetato de tocoferilo;

- acido sorbico;

- dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas;

- agua;

- hidroxietilcelulosa;

- EDTA;

- hidroxido de sodio.

Todas las realizaciones enunciadas anteriormente consisten exclusivamente en compuestos ensayados individualmente como una unidad para tener una eco-compatibilidad completa con el arrecife de coral y (sin necesidad de anadir otros compuestos potencialmente perjudiciales para el ecosistema marino) tienen una fotoestabilidad alta y un almacenaje prolongado en una formulacion cosmetica adecuada.

En las composiciones de la presente invencion, el MBBT, DHHB y EHT podfan aparecer en un porcentaje comprendido entre el 3 y el 6 % en peso de la composicion.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos son meramente ilustrativos y no limitan la invencion (por ejemplo, los pesos y las concentraciones son meramente indicativos, en cuanto a que los FPS y las proporciones de absorbancia UVA/UVB se deben formular espedficamente para ajustarse a los FPS nominales del producto). Las cantidades de los compuestos individuales se expresan en porcentaje en peso.

Ejemplo 1: En una realizacion espedfica, la invencion tiene la siguiente formulacion en forma de crema:

Ingredientes: p/p

MBBT: 4 %

DHHB: 4 %

EHT: 1 % 1%

APIFIL: 12 %

LABRAFAC: 15,5 %

Aceite de oliva: 7 %

Acetato de tocoferilo: 0,5 %

Hidroxietilcelulosa: 0,2 %

EDTA: 0,05 %

Hidroxido de sodio: 0,4 %

Acido sorbico: 1 %

Guayaba y coco: 0,3 %

h2o: resto %

Ejemplo 2: En una realizacion espedfica, la invencion tiene la siguiente formulacion en forma de crema:

Ingredientes: p/p

MBBT: 6 %

DHHB: 6 %

EHT: 2 % 11

APIFIL: 12 %

LABRAFAC: 14,5 %

Aceite de oliva: 6 %

Acetato de tocoferilo: 0,5 %

Hidroxietilcelulosa: 0,2 %

EDTA: 0,05 %

Hidroxido de sodio: 0,4 %

Acido sorbico: 1 %

Lavanda: 0,3 %

H2O: resto %

Ejemplo 3: En una realizacion espedfica, la invencion tiene la siguiente formulacion en forma de crema: 5

Ingredientes: p/p

MBBT: 8 %

DHHB: 8 %

EHT: 3 %

APIFIL: 10 %

LABRAFAC: 13,5 %

Aceite de oliva: 5 %

Acetato de tocoferilo: 0,5 %

Hidroxietilcelulosa: 0,2 %

EDTA: 0,05 %

Hidroxido de sodio: 0,4 %

Acido sorbico: 1 %

Naranja: 0,3 %

H2O: resto %

Ejemplo 4: Preparacion de las composiciones

Las composiciones se preparan mediante el procedimiento descrito a continuacion:

10

Las fases 1 y 3, indicadas en la tabla 1 se disuelven juntas a 65 °C usando un agitador.

La fase 2 se disuelve por separado a la misma temperatura, siempre bajo continua agitacion. Tras alcanzar la misma temperatura, la fase 2 se anade a las fases 1+3 y se mezcla el conjunto durante unos minutos a 65 °C. Para obtener un producto que tenga consistencia homogenea, se mezcla a temperatura ambiente y solo al final 15 se anade la fase 4. Se realizo un ensayo de las tres composiciones preparadas de ese modo como se describe

en la seccion experimental de la presente descripcion.

5

10

15

20

25

30

35

Tabla 1. Composicion de las 3 preparaciones de los ejemplos 1, 2 y 3 que tienen un FPS diferente.

: Bajo 1 - FPS bajo 2 - FPS medio 3 - FPS alto

Fase 1: Apifil 13 % Apifil 12 % Apifil 11 % Apifil 10 %

Labrafac 18,5 %: Labrafac 15,5 % Labrafac 14,5 % Labrafac 13,5 %

: Aceite de oliva 8 % Aceite de oliva 7 % Aceite de oliva 6 % Aceite de oliva 5 %

: Acetato de tocoferilo 0,5 % Acetato de tocoferilo 0,5 % Acetato de tocoferilo 0,5 % Acetato de tocoferilo 0,5 %


: DHHB4 % DHHB 6 % DHHB 8 %


: EHT 1 % EHT 2 % EHT 3 %


: MBBT4 % MBBT 6 % MBBT 8 %

Fase 2: Agua 57,22 Agua 53,05 % Agua 51,05 % Agua 49,05 %

Hidroxietilcelulosa 0,2 %
Hidroxietilcelulosa 0,2 %
Hidroxietilcelulosa 0,2 %
Hidroxietilcelulosa 0,2 %

: EDTA 0,05 % EDTA 0,05 % EDTA 0,05 % EDTA 0,05 %

: Acido sorbico 1 % Acido sorbico 1 % Acido sorbico 1 % Acido sorbico 1 %

Fase 3: Labrafac 1 % Labrafac 1 % Labrafac 1 % Labrafac 1 %

Hidroxido de sodio 0,4 %
Hidroxido de sodio 0,4 %
Hidroxido de sodio 0,4 %
Hidroxido de sodio 0,4 %

Fase 4: Fragancia 0,3 % Fragancia 0,3 % Fragancia 0,3 % Fragancia 0,3 %

Metodoloaia y datos experimentales

3.1. Area de estudio

Las actividades de campo se realizaron en el Laboratorio de biologfa marina de Onong Resort, Isla de Siladen, (Indonesia). El area de estudio se ubica en el Parque nacional de Bunaken, considerado una de las Areas Marinas Protegidas mas importantes del mundo. El Parque Nacional de Bunaken se ubica en el centro de un triangulo de biodiversidad de coral de construccion de arrecife, que abarca aproximadamente las Filipinas, Indonesia y la Gran Barrera de Coral. En total, se han registrado aproximadamente 605 especies de coral con zooxantela en el Triangulo de Coral (Veron y col., 2009), de las que el 66 % son comunes a todas las ecoregiones del area. Esta diversidad equivale al 76 % de las especies totales del mundo. Aproximadamente 450 especies de coral se han descrito hasta ahora en el archipielago indonesio. El Parque Nacional de Bunaken y aguas adyacentes mantienen diversas comunidades de coral hermatipico (de construccion de arrecife), compuestas de mas de 390 especies, 63 generos y 15 familias de corales duros, incluyendo tambien algunas especies aun no descritas. Los corales forman diferentes tipos de comunidad, ampliamente distribuidas en relacion a la profundidad, el angulo de inclinacion, y otros factores medioambientales. El area mantiene varias poblaciones regionalmente importantes de un amplio despliegue de especies de coral, incluyendo unas 20 especies consideradas raras en el mundo. El Parque Nacional de Bunaken exhibe niveles excepcionales de diversidad local. Las ubicaciones mas ricas albergan mas de 25 - 30 % de las especies de coral de construccion de arrecife de la region indo-padfica total. En particular, en el area de estudio, examenes recientes han indicado que los corales de construccion de arrecife representan aproximadamente el 90 % de las especies de coral totales, con una diversidad de coral mas alta en aguas poco profundas, probablemente relacionado con la relativamente alta heterogeneidad del habitat producida por cambios en el angulo de inclinacion, exposicion e iluminacion entre otros factores, desde la inclinacion el arrecife de la parte poco profunda hasta la cresta del arrecife. En el area de estudio, se ha indicado recientemente la presencia de muchas especies endemicas del genera Acropora (Wallace y col., 2001). Acropora representa uno de los mayores grupos taxonomicos de los arrecifes que rodean la Isla Siladen. Acropora es el genera de coral hermatfpico mas diverso, con 114 especies reconocidas en el mundo y 91 especies identificadas en el archipielago indonesio (Wallace, 1999). Las “especies estructurales” tales como Acropora con un componente vital para el ecosistema, y variaciones en su abundancia son cnticas para la dinamica de todas las comunidades de arrecifes (Connell y col., 1997). Acropora spp. representa un papel fundamental en la composicion y abundancia de las especies de muchos arrecifes indonesios actuales (Suharsono, 1992).

3.2. Diseno experimental

Los ensayos in situ se llevaron a cabo sobre nubbins (por ejemplo, pequenas ramificaciones de aproximadamente 36 cm) del coral pedregoso Acropora sp. Los nubbins se incubaron en microcosmos en presencia de concentraciones

conocidas de varios ingredientes que probablemente se incluinan en la composicion de la crema de proteccion solar eco-compatible. En particular, unos submarinistas recogieron nubbins de coral (incluyendo mas de 3000 polipos cada uno) de la misma colonia, ubicada a unos 3 m de profundidad en el borde de la inclinacion del arrecife. El muestreo de los nubbins se llevo a cabo a traves de forceps. Los nubbins se lavaron con agua de mar filtrada en 5 filtros de 0,02 pm para eliminar virus y organismos procarioticos. Cada microcosmo se preparo con un conjunto repetido de nubbins (n=3) sumergido en bolsas de polietileno esteriles (Whirl-pack, Nasco, Fort Atkinson, WI, EE. uU.) rellenas con 2 L de agua de mar filtrada. Se prepararon un total de 27 microcosmos, para ensayar 20 ingredientes con los respectivos controles positivos y negativos. La lista de tratamientos, las concentraciones de compuestos usadas y los sistemas de control se indican en la tabla 2. Los microcosmos se incubaron a temperatura 10 y condiciones de luz in situ durante 72 horas.

Tabla 2. Lista de microcosmos, tipos de tratamiento, concentraciones de composiciones usadas y tiempos de

incubacion.

Codigo: Compuesto Concentracion Tipo

D-01: Fragancia natural de pomelo 0,3 %

D-02: Fragancia de aceite de arbol del te (Melaleuca) 0,3 %

D-03: Fragancia ylang-ylang I 0,3 %

D-04: Fragancia de naranja natural 0,3 %

D-05: Fragancia de lavanda natural 0,3 %

D-06: Aceite de argan 0,3 %

D-07: Guayaba y coco 22661 0,3 % Esencias/

D-08: Bambu 21842 0,3 % Fragancias

D-09: Karite 20471 0,3 %

D-10: Mare d’inverno 4/381 MC 0,3 %

D-11: Joyful 60029MC 0,3 %

D13: Crema base tipo 1 50 pL-1

D14: Crema base tipo 2 50 pL-1 Crema base

D15: Crema base tipo 3 50 pL-1

D-16: Alfa-tocoferol (codigo SIGMA T3251-5G) 3 % Antioxidante

D-17: DL-tocoferol-acetato (codigo SIGMA T3376-5G) 3 %

D-18: sal de trisodio de acido 2-fosfo-asc6rbico(c6digo SIGMA 49752-10G) 3 %

D-19: Palmitato de retinilo (codigo SIGMA R3375-1G) 3 %

D-20: Retinol (codigo SIGMA R7632-250MG) 3 %

D-21: Polifenol 60 de te verde (codigo SIGMA P1204-25G) 3 %

D-22: MBBT (filtro) 7 %

D-23: BEMT (filtro) 7 %

D-24: EHT (filtro) 3 % Filtros

D-25: DHHB (filtro) 7 %

Mito: Mitomicina C (agente que induce el ciclo lttico en infecciones virales). 1 mg mL'1 Sistemas de

BLK BLK PG: PG control

15 Se usaron sistemas de control (controles) tanto positivos como negativos. Los negativos son sistemas en los que se ha usado una sustancia, el antibiotico mitomicina C, que desencadena infecciones virales, como ocurre con el uso de todas las cremas actualmente en el mercado. De ah que sirva para indicar los niveles de respuesta indeseada de un compuesto. Los positivos, indicados por BLK PG y BLK, son simplemente microcosmos sin adicion de ningun compuesto.

20

Tabla 3. Concentraciones de filtros ensayados

FILTROS: Concentracion max. FPS bajo FPS medio FPS alto

MBBT: 10 % 4 6 8

DHHB: 10 % 4 6 8

EHT: 5 % 1 2 3

3.3. Determinacion de abundancias virales y procarioticas

25 Se recogieron submuestras (15 mL) de agua de mar que rodea nubbins de coral al principio del experimento (TO) y despues de 3 y 6 horas de incubacion. Despues del submuestreo, el agua de mar se transfirio a tubos de ensayo esteriles sin usar fijadores y se almaceno a -20 °C hasta el analisis de laboratorio para cuantificacion de abundancia viral y procariotica. Una vez en el laboratorio, las muestras de agua se procesaron inmediatamente. Brevemente,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

200 pL de agua de mar se diluyeron 1:10 con agua MilliQ prefiltrada, por medio de filtros de poros de 0,02 pm (filtro Anodisc; 25-mm de diametro, Al2O3; Whatman) y se tineron con 20 pL de SYBR Green (solucion madre diluida 1:20; Invitrogen; Carlsbad, CA, (EE. UU.)). Los filtros se incubaron en la oscuridad durante 15 minutos y se montaron en placas de cristal con una gota de antifade consistente en un 50 % de solucion reguladora de fosfato (6,7 mM, pH 7,8) y un 50 % de glicerol que contiene un 0,25 % de acido ascorbico (Shibata y col., 2006; Helton y col., 2006; Wen y col., 2004). Las placas se almacenaron a -20 °C hasta analisis de microscopfa. Se obtuvieron conteos de virus y organismos procarioticos con microscopfa epifluorescente (aumento x1000; Zeiss Axioplan) examinando al menos 10 campos opticos, es decir, al menos 200 celulas o virus por repeticion. El enriquecimiento viral (y procariotico) se calculo como proporcion entre abundancias de virus (y procarioticas) y abundancia de virus (y procarioticas) al final del experimento.

3.4. Conteo de zooxantela

Se recogieron submuestras (50 mL) de agua de mar que rodea nubbins de coral al principio del experimento (TO) y despues de 6, 12, 24, 36, 48 y 72 horas de incubacion. Las submuestras se fijaron en un 3 % de glutaraldetndo y despues aproximadamente 6,0 ml de cada repeticion se filtro a traves de filtros de 2,0 pm de policarbonato. Los filtros se montaron en placas de cristal y la zooxantela se calculo en microscopfa epifluorescente (Zeiss Axioplan, Carl Zeiss Inc., Jena, (Alemania); x 400 y x1000) usando luz estandar y UV. Segun el color, autofluorescencia y estructura de ancho de celula, la zooxantela liberada o extrafda de nubbins se clasifico como a) saludable (H, zooxantela de color marron/amarillo brillante, intacta/en buenas condiciones); b) palida (P, zooxantela de color amarillo claro, con vacuolas, parcialmente degradada; transparente (T, zooxantela sin pigmentacion, vada; Mise y Hidaka, 2003).

3.5. Cuantificacion de blanqueo de coral

Para cuantificar los niveles de blanqueo de corales (Siebeck y col., 2006) se llevo a cabo un analisis colorimetrico con fotograffas digitales de corales, tomadas al principio del experimento y despues de 6, 12, 24, 36, 48 y 72 horas de incubacion. Las fotograffas se tomaron con un nivel de iluminacion identico con una camara digital Canon PowerShot A620 (Canon Inc., Tokio, Japon) con un medidor de escala en la superficie. Las fotos se analizaron satisfactoriamente con un software de edicion de fotos (Adobe Photoshop CS2) para composicion de color [cian, magenta, amarillo, negro (CMYK, por sus siglas en ingles)]. Los niveles de blanqueo se midieron como la diferencia entre el color de los corales al principio del experimento y despues de tratamientos. Se analizaron variaciones en el porcentaje de diferentes componentes de los colores (CMYK) con un analisis de varianza (ANOVA). Para categorizar el efecto de blanqueo debido a los compuestos ensayados, se preparo una matriz de similaridad Bray- Curtis y se llevo a cabo un analisis de escala multidimensional de los cambios en la composicion de color CMYK de corales tratados usando un software Primer 5.0 (Primer-E Ltd., Plymouth, (RU)). Se midieron los indices de blanqueo como el porcentaje de disimilaridad en la composicion de colores CMYK entre corales tratados y corales de control usando la herramienta SIMPER del software Primer 5.0 (Primer-E Ltd.).

4. Resultados

4.1. Abundancia viral y procariotica

Las abundancias virales incrementaron significativamente alrededor de 1 orden de magnitud durante los experimentos de incubacion. El enriquecimiento viral vario de 1,9 a 37,4 en los sistemas BLK PG y D08 (figura 1). Las abundancias virales al final del experimento variaron de 0,44 a 31,2 x 105 virus ml-1 en sistemas BLK PG y D15, respectivamente. Las abundancias procarioticas incrementaron de 1-2 ordenes de magnitud durante el experimento de incubacion. Los factores de enriquecimiento procariotico fluctuaron en un amplio intervalo (figura 2). El factor de enriquecimiento mas bajo (1,88) se observo en el sistema BLK PG, mientras que, en el sistema D11, el factor de enriquecimiento era 78,16. Se observo una leve reduccion de proporciones entre abundancia viral y procariotica (VPR) despues de incubaciones en todos los sistemas, con la excepcion de los sistemas D07 y BLK, en los que el VPR permanecio estable en el tiempo. El VPR disminuyo hasta 10 veces en el sistema D22.

4.2. Abundancia de zooxantela

Al principio de las incubaciones, en los microcosmos no se encontro zooxantela liberada. El numero de zooxantela aumento con el tiempo en todos los microcosmos considerados. La abundancia final de zooxantela encontrada en agua que rodea los nubbins de coral vario de 0,85 a 4,45 x 104 celulas ml-1, respectivamente en sistemas D11 (inoculado con Joyful 60029MC) y D18 (inoculado con sal de trisodio de acido 2-fosfo-L-ascorbico), (figuras 3a, b, c, d, e).

En algunos casos, la abundancia de zooxantela liberada era menor en sistemas tratados que en controles. Analisis estadfsticos revelaron que solo en el caso de los sistemas D15, D16, D17 y D18 la abundancia de celulas liberadas era significativamente mayor que en el sistema BLK (P<0,01). Para todos los demas compuestos, no se encontraron diferencias significativas entre sistemas de control y tratados, sugiriendo que la presencia de compuestos ensayados en los sistemas experimentales (con la excepcion de D15, D16, D17 y D18) no causa un incremento en el mdice de

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

zooxantela liberada de corales.

Durante analisis con microscopio, la zooxantela observada se separo en tres grupos principales (saludable, palido y transparente) como se describe en la seccion de materiales y procedimientos. Al final de las incubaciones, cada grupo exhibio diferentes abundancias en el agua que rodeaba los nubbins de coral (figura 4). Los grupos de zooxantela palida y transparente eran, en todos los sistemas experimentales, los grupos dominantes, representando de media un 44 % y un 50 % de zooxantela liberada total. La zooxantela saludable siempre representaba la fraccion menor, variando del 0 al 21 %.

La baja abundancia de celulas saludables sugiere que el tiempo de incubacion de los experimentos causa un nivel alto de dano a la zooxantela en todos los sistemas considerados, incluidos controles negativos (BLK).

4.3. Blanqueo de coral

En todas las repeticiones de cada microcosmo (incluidos sistemas de control), la liberacion de mucosa de coral (compuesta por zooxantela y tejido de coral) se observo en las primeras 48 h de incubacion. Esta observacion esta en lmea con los resultados de zooxantela indicados en la seccion 4.2. La liberacion de mucosa por fragmentos de coral se puede relacionar con la presion mecanica ejercida durante el muestreo y la preparacion de microcosmos. En todos los microcosmos (incluidos sistemas BLK) despues de 72 horas de incubacion se observo un leve cambio de color en nubbins de coral, probablemente ocurrido como consecuencia de la presion inducida por las incubaciones. Los cambios mas evidentes se observaron en sistemas D18 y MITO, en los que los 4 canales de color se alteraron significativamente al final de las incubaciones. En sistemas D05, D08 y BLK PG, 3 de 4 canales de color mostraron alteraciones. En los demas sistemas, 2 o 1 canales de color mostraron cambios significativos. Los sistemas D03, D09, D10, D11, D21, D21 mostraron cambios en 2 canales de color, mientras que los sistemas D01, D04, D05, D13, D14, D19, D20 y BLK mostraron cambios solo en 1 canal de color. En los demas sistemas experimentales, no se detectaron cabios de color en nubbins en los que se llevaron a cambio ensayo.

4.4. Fotoestabilidad de crema de proteccion solar expuesta a rayos UVA (~ 275 kJ/m2)

Se distribuyeron 2 mg cm-2 de crema en placas de cristal (5x5 cm) y se expusieron a rayos UVA.

• Absorbancia UVA, 320-400 nm (pico correspondiente al filtro DHHB) es demasiado alta con respecto a la de UVB, 290-320 nm (pico correspondiente al filtro EHT). La absorbancia UVA debena ser de aproximadamente 1/3 de la de UVB.

• El espectro del filtro de amplio espectro, MBBT, no es visible, ya que tiene un coeficiente de extincion inferior a DHHB y EHT, de ah que se cubra con la absorbancia del ultimo. MBBT debena aparecer como un amplio espectro sin picos maximos y mmimos.

• En este momento, la absorbancia obtenida cae dentro del intervalo de una crema de proteccion solar con FPS ato y bajo.

• De acuerdo con los resultados, se puede concluir que los filtros son altamente fotoestables.

4.5. Resumen de criterios usados para probar la eco-compatibilidad de productos ensayados con arrecifes de coral

Para seleccionar los productos mas eco-compatibles para cada grupo de compuestos (por ejemplo, crema base, fragancia, antioxidantes y filtros), se seleccionaron los siguientes criterios:

1. nivel de blanqueo de coral;

2. grado de liberacion de zooxantela simbiotica;

3. condiciones de salud de zooxantela;

4. enriquecimiento viral en el medio de incubacion con respecto a los controles.

Tabla 4. Resumen de compuestos eco-compatibles ^ agrupados por categona.

Grupo de compuestos: Ingredientes Eco-compatibilidad

Crema base: Tipo 1 Altamente compatible

: Tipo 2 Compatible

: Tipo 3 Compatible

Fragancias: Guayaba & Coco Altamente compatible

: Naranja Compatible

: Lavanda Compatible

: Pomelo Compatible

Antioxidantes: Acetato de tocoferilo Altamente compatible

: Tocoferol Altamente compatible

Grupo de compuestos: Ingredientes Eco-compatibilidad

: Retinol Compatible

: Polifenone-60 Compatible

: Palmitato de retinilo Compatible

Filtros UV: MBBT Altamente compatible

: DHHB Altamente compatible

: EHT Compatible

Tabla 5. Abundancia y enriquecimiento viral durante las incubaciones. Tiempos de incubacion (Incub.), abundancias virales totales (TVN) y el factor de enriquecimiento viral (VEF) tambien se indican. Se indican los valores de ____________ desviacion estandar (STD) y coeficientes de variacion para todos los datos. ___________

Sistema: Incub. TVN STD CV VEF STD

D01: 0 9,50E+04 2,69E+04 2,83E+01 19,62 2,00

: 12 h 1,83E+06 3,39E+05 1,85E+01

D02: 0 8,13E+04 2,11E+04 2,60E+01 19,87 4,43

: 12 h 1,57E+06 3,34E+05 2,12E+01

D03: 0 9,82E+04 2,19E+04 2,23E+01 15,48 0,81

: 12 h 1,51E+06 2,99E+05 1,98E+01

D04: 0 1,71E+05 3,08E+04 1,80E+01 11,01 0,80

: 12 h 1,87E+06 2,18E+05 1,17E+01

D05: 0 9,74E+04 1,94E+04 1,99E+01 12,44 2,28

: 12 h 1,20E+06 2,29E+05 1,92E+01

D06: 0 1,14E+05 2,67E+04 2,34E+01 9,37 4,06

: 12 h 1,02E+06 3,88E+05 3,79E+01

D07: 0 2,81E+05 2,48E+04 8,82E+00 8,50 1,08

: 12 h 2,38E+06 3,09E+05 1,30E+01

D08: 0 7,49E+04 2,30E+04 3,08E+01 37,39 13,49

: 12 h 2,60E+06 1,45E+05 5,58E+00

D09: 0 3,56E+05 6,28E+04 1,77E+01 5,55 0,93

: 12 h 1,94E+06 1,96E+05 1,01E+01

D10: 0 2,20E+05 5,34E+04 2,43E+01 7,18 1,80

: 12 h 1,52E+06 1,31E+05 8,58E+00

D11: 0 1,14E+05 5,77E+04 5,08E+01 30,89 14,56

: 12 h 2,95E+06 5,30E+05 1,80E+01

D13: 0 1,34E+05 3,42E+04 2,56E+01 14,29 2,60

: 12 h 1,87E+06 4,29E+05 2,29E+01

D14: 0 2,35E+05 5,20E+04 2,21E+01 11,03 6,65

: 12 h 2,36E+06 1,03E+06 4,35E+01

D15: 0 3,79E+05 8,90E+04 2,35E+01 8,21 0,28

: 12 h 3,12E+06 7,64E+05 2,45E+01

D16: 0 3,24E+05 7,97E+04 2,46E+01 4,54 0,48

: 12 h 1,46E+06 2,87E+05 1,97E+01

D17: 0 3,49E+05 6,79E+04 1,94E+01 8,36 2,46

Sistema: Incub. TVN STD CV VEF STD

: 12 h 2,83E+06 6,23E+05 2,20E+01

D18: 0 3,70E+05 5,71E+04 1,55E+01 7,09 3,00

: 12 h 2,51E+06 6,73E+05 2,69E+01

D19: 0 1,03E+05 1,37E+04 1,33E+01 18,92 4,43

: 12 h 1,98E+06 6,60E+05 3,33E+01

D20: 0 2,47E+05 7,76E+04 3,14E+01 8,09 1,18

: 12 h 1,97E+06 4,92E+05 2,50E+01

D21: 0 3,23E+05 9,01E+04 2,79E+01 8,56 3,32

: 12 h 2,57E+06 1,94E+05 7,54E+00

D22: 0 5,06E+05 1,12E+05 2,21E+01 6,16 1,77

: 12 h 2,99E+06 3,50E+05 1,17E+01

D23: 0 1,87E+05 3,30E+04 1,77E+01 4,80 2,60

: 12 h 8,65E+05 3,77E+05 4,36E+01

D24: 0 9,58E+04 3,38E+04 3,53E+01 12,58 5,97

: 12 h 1,08E+06 1,96E+05 1,81E+01

D25: 0 3,67E+05 8,46E+04 2,30E+01 7,44 1,79

: 12 h 2,63E+06 8,45E+04 3,21E+00

MITO: 0 1,11E+05 2,20E+04 1,98E+01 14,33 4,09

: 12 h 1,53E+06 1,45E+05 9,46E+00

BLK: 0 2,03E+04 3,61E+03 1,78E+01 3,68 1,62

: 12 h 4,45E+04 4,01E+04 9,00E+01

BLK PG: 0 2,42E+04 4,26E+03 1,76E+01 1,88 0,64

: 12 h 4,37E+04 8,06E+03 1,84E+01

Tabla 6. Abundancia de bacterias (numero de bacterias total, TBN) durante incubaciones, y desviaciones estandar y

coeficiente de variacion relacionados.

Sistema: Incubacion TBN STD CV

D01: 0 1,93E+04 3,42E+03 1,77E+01

: 12 h 1,21E+06 1,66E+05 1,37E+01

D02: 0 2,17E+04 6,39E+03 2,94E+01

: 12 h 8,48E+05 1,42E+05 1,67E+01

D03: 0 3,14E+04 4,83E+03 1,54E+01

: 12 h 9,20E+05 1,04E+05 1,13E+01

D04: 0 3,54E+04 1,09E+04 3,07E+01

: 12 h 8,43E+05 9,84E+04 1,17E+01

D05: 0 7,25E+03 2,42E+03 3,33E+01

: 12 h 3,19E+05 2,59E+04 8,10E+00

D06: 0 3,94E+04 5,03E+03 1,27E+01

: 12 h 4,99E+05 5,03E+04 1,01E+01

D07: 0 2,74E+04 7,76E+03 2,84E+01

Sistema: Incubacion TBN STD CV

: 12 h 1,11E+06 2,42E+05 2,18E+01

D08: 0 4,75E+04 2,79E+03 5,87E+00

: 12 h 1,22E+06 2,74E+05 2,25E+01

D09: 0 2,58E+04 1,39E+03 5,41E+00

: 12 h 1,18E+06 1,87E+05 1,58E+01

D10: 0 1,69E+04 2,42E+03 1,43E+01

: 12 h 9,74E+05 1,12E+05 1,15E+01

D11: 0 2,50E+04 6,08E+03 2,44E+01

: 12 h 1,88E+06 2,83E+05 1,50E+01

D13: 0 2,82E+04 6,08E+03 2,16E+01

: 12 h 1,35E+06 1,73E+05 1,28E+01

D14: 0 4,67E+04 3,69E+03 7,90E+00

: 12 h 1,92E+06 3,52E+05 1,83E+01

D15: 0 2,01E+04 5,03E+03 2,50E+01

: 12 h 1,05E+06 2,11E+05 2,02E+01

D16: 0 3,78E+04 1,01E+04 2,66E+01

: 12 h 1,18E+06 2,51E+04 2,13E+00

D17: 0 5,80E+04 1,05E+04 1,82E+01

: 12 h 1,42E+06 3,82E+05 2,70E+01

D18: 0 3,86E+04 6,39E+03 1,65E+01

: 12 h 1,39E+06 1,22E+05 8,73E+00

D19: 0 3,62E+04 1,45E+04 4,00E+01

: 12 h 1,54E+06 1,58E+05 1,02E+01

D20: 0 3,62E+04 9,66E+03 2,67E+01

: 12 h 1,71E+06 4,32E+05 2,53E+01

D21: 0 3,06E+04 6,08E+03 1,99E+01

: 12 h 1,57E+06 1,99E+05 1,27E+01

D22: 0 5,47E+04 9,14E+03 1,67E+01

: 12 h 9,18E+05 2,90E+05 3,16E+01

D23: 0 4,67E+04 3,69E+03 7,90E+00

: 12 h 2,03E+06 3,31E+05 1,63E+01

D24: 0 2,09E+04 3,69E+03 1,76E+01

: 12 h 7,41E+05 2,13E+05 2,87E+01

D25: 0 3,67E+05 8,46E+04 2,30E+01

: 12 h 2,63E+06 8,45E+04 3,21E+00

MITO: 0 1,11E+05 2,20E+04 1,98E+01

: 12 h 1,53E+06 1,45E+05 9,46E+00

BLK: 0 2,03E+04 3,61E+03 1,78E+01

: 12 h 4,45E+04 4,01E+04 9,00E+01

Sistema: Incubacion TBN STD CV

BLK PG: 0 2,42E+04 4,26E+03 1,76E+01

: 12 h 4,37E+04 8,06E+03 1,84E+01

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

REIVINDICACIONES

1. Una composicion de proteccion solar eco-compatible que comprende:

- uno o mas filtros UV seleccionados de 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametil-butil)- fenol, benzoato de 2-[4-(dietilamina)-2-hidroxibenzoil]hexilo, etilhexil triazona;

- uno o mas antioxidantes seleccionados de acetato de tocoferilo, tocoferol, retinol, compuestos polifenolicos ex^dos de te verde;

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas, y libre de:

- conservantes que pertenecen a la familia de los parabenos;

- derivados de acido ascorbico;

- filtros UV seleccionados de bis etilhexiloxifenol metoxifenil triazina, cinamatos, benzofenonas, derivados de alcanfor, oxido de titanio;

- fragancias seleccionadas de aceite esencial de melaleuca, extractos de flor ylang ylang, extractos de Bambousa Arundinacea, Karite;

- portadores seleccionados de grasas derivadas de animales y aceite de argan.
2. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que comprende ademas una o mas fragancias seleccionadas de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco.
3. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, que comprende ademas acido sorbico.
4. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que consiste en:

- uno o mas filtros UV seleccionados de 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)- fenol, benzoato de 2-[4-(dietilamino)-2-hidroxibenzoil]hexilo, etilhexil triazona;

- uno o mas antioxidantes seleccionados de acetato de tocoferilo, tocoferol, retinol, compuestos polifenolicos extrafdos de te verde;

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas;

- agua.
5. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que consiste en:

- uno o mas filtros UV seleccionados de 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)- fenol, benzoato de 2-[4-(dietilamino)-2-hidroxibenzoil]hexilo, etilhexil triazona;

- uno o mas antioxidantes seleccionados de acetato de tocoferilo, tocoferol, retinol, compuestos polifenolicos extrafdos de te verde;

- acido sorbico;

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas;

- agua.
6. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que consiste en:

- 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenol y/o benzoato de 2-[4-(dietilamino)-2- hidroxibenzoil]hexilo;

- acetato de tocoferilo y/o tocoferol;

- acido sorbico;

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas;

- agua;

- una o mas fragancias seleccionadas de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco.
7. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que consiste en:

- 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenol y/o benzoato de 2-[4-(dietilamino)-2- hidroxibenzoil]hexilo;

- acetato de tocoferilo y/o tocoferol;

- acido sorbico;

- uno o mas portadores seleccionados de dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva, cera de abejas;

- agua;

- una o mas fragancias seleccionadas de naranja, lavanda, pomelo, guayaba y coco;

- hidroxietilcelulosa y/o EDTA y/o hidroxido de sodio.
8. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que consiste en:

- 2,2'-metilen-bis-(6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenol, benzoato de 2-[4-(dietilamina)-2- hidroxibenzoil]hexilo y etilhexil triazona;

5 - acetato de tocoferilo;

- acido sorbico;

- dicaprilato/dicaprato de propilenglicol, aceite de oliva y cera de abejas;

- agua;

- hidroxietilcelulosa;

10 - EDTA;

- hidroxido de sodio.
9. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que dichos filtros UV estan presentes en una concentracion comprendida entre el 3 y el 6 % en peso.

15
10. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en forma de crema, locion, pomada, pulverizacion, barra de labios.
11. La composicion de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizada por que no es 20 perjudicial para el medio ambiente marino y en particular para los arrecifes de coral.

imagen1

Facto res

Factores

de enriquecimiento viral

de enriquecimiento viral

Esencias

Cremas

001 D Oi D03 D04 D05 DOS DOT DOB 003 D10 D

D13

014

D15

Factores

Factores

de enriquecimiento viral

de enriquecimiento viral

Antioxidantes

Fi tros

D16

□ 17

D1B

□19 D20

D2'

□22

D23

r-■-

D25

Factores

de enriquecimiento viral

Contro es

iMSiSi

M TO

BLK

BLK PG

Figura 1

imagen2

Factores

Factores

de enriquecimiento procariotico

de enriquecimiento procariotico

120

120

Cremas

Esencias

1 JU

100

□01 D02 D03 D04 DOS D06 DOT DOB DOS DIO D11

D13

□14

D15

Factores

Factores

120
10.

de enriquecimiento procariotico

de enriquecimiento procariotico

Antioxidantes

Fi tros

1 00

io:

D22

□23

D24

D25

D16 D17 D1E D19 D20 D21

Factores

de enriquecimiento procariotico

Contra es

Figura 2

lO'-celulas ml'1

imagen3

imagen4

mmm

.....

iK*Sra¥:¥K*HW

Esencias

Cremas

100%

100%

30%

80%

70%

50%

50%

20%

zo%

to%

too

T09

T12

Saludable Blanqueado Transparent©

Saludable Blanqueado Transparent©

Antioxiaantes

F iltros

100%

100%

90%

Ho-y;

70%

50“4

50%

10%

20%

10%

D22

D23

024

D25

Saludable Blanqueado Transparent©

Saludable Blanqueado Transparent©

Controles

100 V,

00%

/O':'..

60%

50%

30%

20%

MITO

BLK

BLK PG

Saludable Blanqueado Transparent©

Figura 4

imagen5

Figura 5

imagen6