ES2617500T3

ES2617500T3 - Péptidos derivados de lactoferricina para uso en el tratamiento del cáncer

Info

Publication number: ES2617500T3
Application number: ES14700349.5T
Authority: ES
Inventors: Dagmar Zweytick; Karl Lohner; Sabrina Riedl
Original assignee: Newfield Therapeutics Corp
Current assignee: Newfield Therapeutics Corp
Priority date: 2013-01-11
Filing date: 2014-01-09
Publication date: 2017-06-19
Anticipated expiration: 2034-01-09
Also published as: EP2943215B1; EP2943215A1; WO2014108475A1; US20160045562A1; US9872891B2; HUE031361T2; PL2943215T3; US9492497B2; DK2943215T3; US20170042975A1; EP2754450A1

Abstract

Péptido aislado para su utilización en el tratamiento de cáncer que consiste en de 12 a 50 residuos de aminoácidos que comprenden como mínimo dos restos peptídicos, en el que dichos como mínimo dos restos peptídicos son: - como mínimo dos cadenas beta, o - como mínimo dos alfa-hélices, o - como mínimo una cadena beta y como mínimo una alfa-hélice, - en el que dichas cadenas beta y/o alfa-hélices están separadas entre sí por como mínimo un giro; - en el que el péptido tiene una carga positiva neta de +7 o más; - en el que los restos peptídicos tienen una secuencia de aminoácidos, seleccionada del grupo que consiste en FWQRIRKVR (SEQ ID No. 1), FWQRRIRKVRR (SEQ ID No. 2), FWQRKIRKVRK (SEQ ID No. 3), FWQRNIRIRR (SEQ ID No. 4), FWQRNIRKVR (SEQ ID No. 5), FWQRNIRVR (SEQ ID No. 6), FWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 7), FWQRNIRKVKK (SEQ ID No. 8), FWQRNIRKVRRR (SEQ ID No. 9), FWQRNIRKVKKK (SEQ ID No. 10), FWQRNIRKVRRRR (SEQ ID No. 11), FWQRNIRKVRRRI (SEQ ID No. 12), FWQRNIRKVKKKK (SEQ ID No. 13), FWQRNIRKVKKKI (SEQ ID No. 14), FWQRNIRKIR (SEQ ID No. 15), FWQRNIRKLR (SEQ ID No. 16), FWQRNIRKWR (SEQ ID No. 17), FWQRNWRKVR (SEQ ID No. 18), FWQRNFRKVR (SEQ ID No. 19), FWQRNYRKVR (SEQ ID No. 20), FWQRNIRKVS (SEQ ID No. 21), FWQRRIRIRR (SEQ ID No. 22), FWQRPIRKVR (SEQ ID No. 23), FWQRRIRKWR (SEQ ID No. 24), FWPRNIRKVR (SEQ ID No. 26), FWARNIRKVR (SEQ ID No. 27), FWIRNIRKVR (SEQ ID No. 28), FWLRNIRKVR (SEQ ID No. 29), FWVRNIRKVR (SEQ ID No. 30), FWQRNIFKVR (SEQ ID No. 31), FWQRNIYKVR (SEQ ID No. 32), FAWQRNIRKVR (SEQ ID No. 33), FIWQRNIRKVR (SEQ ID No. 34), FLWQRNIRKVR (SEQ ID No. 35), FVWQRNIRKVR (SEQ ID No. 36), FWRIRKWR (SEQ ID No. 37), FWRIRKVR (SEQ ID No. 38), FWRWRR (SEQ ID No. 39), FWRRWRR (SEQ ID No. 40), FWRRWIRR (SEQ ID No. 41), FWRGWRIRR (SEQ ID No. 42), FWRRFWRR (SEQ ID No. 43), FWRWRWR (SEQ ID No. 44), FWRIWRWR (SEQ ID No. 45), FWRIWRIWR (SEQ ID No. 46), FWRNIRKWR (SEQ ID No. 47), FWRRRIRIRR (SEQ ID No. 48), FIWRWRWR (SEQ ID No. 49), PFWRWRIWR (SEQ ID No. 50), PFWRIRIRR (SEQ ID No. 51), PFWRQRIRR (SEQ ID No. 52), PFWRARIRR (SEQ ID No. 53), PFWRKRIRR (SEQ ID No. 54), PFWRKRLRR (SEQ ID No. 55), PFWRKRWRR (SEQ ID No. 56), PFWRRRIRR (SEQ ID No. 57), PFWRRRWRR (SEQ ID No. 58), PFWRIRIRRD (SEQ ID No. 59), PFFWRIRIRR (SEQ ID No. 60), PWRIRIRR (SEQ ID No. 61), RFWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 62), RFWQRNIRKYR (SEQ ID No. 63), PFWQRNIRKWR (SEQ ID No. 64), RFRWQRNIRKYRR (SEQ ID No. 65), RWKRINRQWF (SEQ ID No. 66), KRFCFKK (SEQ ID No. 67), KRFSFKKC (SEQ ID No. 68), KRWSWKK (SEQ ID No. 69), FRFSFKK (SEQ ID No. 70), RRFWFRR (SEQ ID No. 71), FWRNIRIRR (SEQ ID No. 72), FWQRIRIRR (SEQ ID No. 73), FWRWRIWR (SEQ ID No. 74), FWRIRIRR (SEQ ID No. 75), FWRNIRIWRR (SEQ ID No. 76) and FWRNIRIRR (SEQ ID No. 77), RFWQRNIRIRR (SEQ ID No. 78), RWQRNIRIRR (SEQ ID No. 79), RRIRINRQWF (SEQ ID No. 80), PFWRRQIRR (SEQ ID No. 81), PFWRKKLKR (SEQ ID No. 82), PWRRIRR (SEQ ID No. 83), PWRRKIRR (SEQ ID No. 84), PFWRRIRIRR (SEQ ID No. 85), and RRWFWRR (SEQ ID No. 86), FWQRRIRRWRR (SEQ ID No. 112), PFWRRRIRIRR (SEQ ID No. 193), RRWFFWRR (SEQ ID No. 198) y las secuencias inversas de las mismas; y - en el que dicho péptido carece de enlaces disulfuro intramoleculares.

Description

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DESCRIPCION

Peptidos derivados de lactoferricina para uso en el tratamiento del cancer La presente invention se refiere a un peptido aislado que exhibe efectos antitumorales.

La invencion se define en las reivindicaciones.

Cada ano millones de personas son diagnosticadas con cancer en todo el mundo. A pesar de que en las ultimas decadas se han logrado muchos progresos en la terapia del cancer, el cancer sigue siendo una de las principales causas de muerte. Hoy en dla, la cirugla, la quimioterapia, la radiation, la terapia de ablation hormonal y la terapia dirigida son los tratamientos de referencia, pero en el ano 2008, estos no fueron curativos en mas del 50% de los casos. Ademas, el uso de estos tipos de terapia es limitado debido a las resistencias y se acompana de toxicidad potencial y diversos efectos secundarios debido a una especificidad inadecuada por las celulas tumorales. Obviamente, el descubrimiento de objetivos nuevos y mas especlficos, junto con el diseno de farmacos antitumorales especlficos, es uno de los principales intereses en la investigation del cancer.

Las celulas cancerosas a menudo estan bien caracterizadas, pero se sabe poco sobre la membrana celular plasmatica, o, para ser mas preciso, las diferencias que surgen en la composition lipldica en la carcinogenesis. Las membranas plasmaticas eucariotas comprenden generalmente una carga global neutra sobre la lamina externa debido a la fosfatidilcolina (PC) y esfingomielina (SM) zwitterionicas. El fosfollpido cargado negativamente fosfatidilserina (PS) junto con la mayor parte de la fosfatidiletanolamina (PE) normalmente solo se ensamblan en la lamina interna de las membranas plasmaticas eucariotas. Esta distribution asimetrica de los fosfollpidos esta bien documentada y es mantenida por una aminofosfollpido translocasa dependiente de ATP. Esta asimetrla puede perderse debido a la exposition de la fosfatidilserina cargada negativamente sobre la superficie de las celulas cancerosas y otras celulas patologicas, celulas apoptoticas, as! como plaquetas y eritrocitos tras la activation.

Basandose en el conocimiento de la exposicion a PS, se pueden considerar nuevas estrategias para el diseno de farmacos contra el cancer, especialmente peptidos cationicos derivados de la defensa del huesped que interaccionan con fosfollpidos cargados negativamente. Los peptidos de defensa del huesped han surgido como potenciales agentes terapeuticos alternativos que ofrecen muchas ventajas sobre otras terapias (Mader y otros, Exp. Op. Investig. Drugs 15 (2006), 933-946). Debido a su modo de action y especificidad, siendo la membrana celular el objetivo principal, es menos probable que se produzca resistencia y citotoxicidad, y, por lo tanto, tambien se espera que causen menos efectos secundarios. Ademas, estos peptidos danan principalmente las membranas celulares en cuestion de minutos, lo que dificultarla la formation de resistencia. Inicialmente se descubrieron peptidos de defensa del huesped que formaban parte del sistema inmunologico innato de muchas especies diversas (por ejemplo, mamlferos, insectos, anfibios) debido a su actividad antimicrobiana. Actualmente, la base de datos de peptidos antimicrobianos enumera mas de 100 peptidos naturales de defensa del huesped con actividad antitumoral. Ejemplos de peptidos antimicrobianos se divulgan en el documento WO 2008/002165 A1.

Un miembro prominente de los peptidos anticancerosos es la lactoferricina bovina (bLFcina), que se genera a partir de lactoferrina a traves de la escision de pepsina. La bLFcina posee una estructura en lamina b antiparalela girada aclclica debido a un puente disulfuro entre dos residuos de cistelna. Este peptido es capaz de inhibir la metastasis hepatica y pulmonar en ratones. En estudios in vivo con bLFcina sobre tumores de fibrosarcoma, melanoma y carcinoma de colon se revelo necrosis masiva del tejido tumoral despues de la exposicion al peptido (Yoo y otros, Jpn.J Cancer Res. 88 (1997):184-190). Ademas, se sabe que la bLFcina inhibe el crecimiento tumoral de xenoinjertos de neuroblastoma en ratas atlmicas. La aclaracion del mecanismo revelo que la bLFcina induce apoptosis en celulas tumorales humanas a traves de una via mediada por la production de las ROS intracelulares y la activacion de las endonucleasas dependientes de Ca2+/Mg2+.

Es un objeto de la presente invencion proporcionar compuestos y preparaciones que se pueden usar para tratar el cancer.

Por lo tanto, la presente invencion se refiere a un peptido aislado que se utilizara en el tratamiento del cancer que consiste en 12 a 50 residuos de aminoacidos que comprenden

- como mlnimo dos cadenas beta, o

- como mlnimo dos alfa-helices, o

- como mlnimo una cadena beta y como mlnimo una alfa-helice,

- en el que dichas cadenas beta y/o alfa-helices estan, preferentemente, separadas entre si por como mlnimo un giro, en el que el peptido tiene una carga positiva neta de +7 o mas;

- en el que dicho peptido comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (X1)m- X2-(X3)p-X4-(X5)q-X6-(X7)s o la secuencia inversa de del mismo, en la que

X1 es un aminoacido hidrofobico, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en fenilalanina (Phe), alanina (Ala), leucina (Leu) y valina (Val),

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X2 es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X3 se selecciona del grupo que consiste en alanina (Ala), arginina (Arg), glutamina (Gln), asparagina (Asn), prolina (Pro), isoleucina (Ile), leucina (Leu) y valina (Val),

X4 se selecciona del grupo que consiste en isoleucina (Ile), fenilalnina (Phe), triptofano (Trp) y tirosina (Tyr),

X5 se selecciona del grupo que consiste en arginina (Arg), lisina (Lys), tirosina (Tyr) y fenilalanina (Phe),

X6 es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en isoleucina (Ile), triptofano (Trp), valina (Val) y leucina (Leu), y

X7 se selecciona del grupo que consiste en arginina (Arg), lisina (Lys), isoleucina (Ile) y serina (Ser), y en la que M es 1 o 2,

Q es 1 o 2,

P es 2 o 3, y

S es 1, 2, 3 o 4 con la condicion de que si (X5)q es Arg-Arg S es 1; y - en la que dicho peptido carece de enlaces disulfuro intramoleculares,

estando dicho peptido seleccionado, preferentemente, del grupo que consiste en PFWRIRIRRXRRIRIRWFP (SEQ ID. No. 128), PWRIRIRRXRRIRIRWP (SEQ ID No.184), RWKRINRQWFFWQRNIRKWR (SEQ ID. No. 106), PFWRIRIRRPFWRIRIRR (SEQ ID. No. 125), PFFWRIRIRRPFFWRIRIRR (SEQ ID. No. 141) y

PFWRIRIRRRRIRIRWFP (SEQ ID. No. 127), especialmente las SEQ ID. Nos. 128, 184 y 106, en la que "X" es prolina (Pro) y/o glicina (Gly)1-3.

Resulto que los peptidos que tienen una carga neta positiva de +7 y que comprenden como mlnimo dos cadenas beta o como mlnimo dos alfa helices o como mlnimo una cadena beta y como mlnimo una alfa helice y estan, preferentemente, separadas por como mlnimo un giro presentan efectos citotoxicos sobre celulas cancerosas/tumorales en mamlferos. Esto significa que los peptidos de la presente invention son capaces de afectar a la viabilidad de tales celulas conduciendo a su destruction. Los efectos citotoxicos de los peptidos de la presente invencion son altamente especlficos para celulas cancerosas/tumorales. Esto significa que estos peptidos afectan a celulas sanas en un grado mucho menor (preferentemente como mlnimo del 10%, mas preferentemente como mlnimo del 20%, incluso mas preferentemente como mlnimo del 50%, en particular como mlnimo del 90 a 100%) en comparacion con las celulas cancerosas/tumorales). Esta alta especificidad de los peptidos de la presente invencion permite tratar mamlferos, en particular seres humanos, con una eficacia mucho mayor, reduciendo los efectos secundarios habitualmente conocidos descritos regularmente para compuestos anticancerosos. El efecto citotoxico de tales compuestos normalmente es inespeclfico, lo que da lugar a la destruccion, no solo de celulas cancerosas/tumorales sino tambien de las celulas sanas.

Las propiedades antitumorales de los peptidos segun la presente invencion son especlficamente sorprendentes, porque los presentes peptidos estan, por su definition, desprovistos de enlaces disulfuro, es decir, desprovistos de enlaces S-S intramoleculares (debido a la ausencia de (como mlnimo) dos residuos de cistelna en la secuencia de aminoacidos que forman este enlace). Las moleculas de la presente invencion se han derivado de la lactoferricina humana (hLFcina: TKCFQWQRNMrKvRGPPVSCIKRDS (SEQ ID No. 207)), un peptido que contiene dos cistelnas que forman un enlace disulfuro intramolecular. Uno de los compuestos de partida de los desarrollos de la presente invencion era una parte de la hLFcina que carece de las cistelnas y en la que la metionina ha sido reemplazada por isoleucina (FQWQRNIRKVR; SEQ ID NO. 87; "PEP parental"). En contraste con otros peptidos activos de membrana, por tanto, el PEP parental estaba desprovisto de enlaces disulfuro intramoleculares (e incluso desprovisto de residuos de cistelna) que se pensaba que eran importantes para la funcion activa de la membrana (antimicrobiana) (vease, por ejemplo, Harwig y otros, Eur. J. Biochem. 240 (1996), 352-357). De hecho, la elimination de los enlaces disulfuro de dichas moleculas redujo significativamente la actividad permeabilizante de la membrana de tales peptidos (Matsuzaki y otros, Biochemistry 32 (1993), 11704-11710; Tamamura y otros, Chem. Pharm. Bull. 43 (5) (1995), 853-858). Una persona con una habilidad media en la materia sabla que los enlaces disulfuro son de gran importancia para los peptidos activos de membrana. Por lo tanto, fue sorprendente que los peptidos segun la presente invencion que son tambien activos en la membrana, no contienen enlaces disulfuro intramoleculares. De hecho, los restos peptldicos preferentes que son responsables del efecto antitumoral de los peptidos segun la presente invencion estan completamente libres de residuos de cistelna. Por lo tanto, el peptido antitumoral segun la presente invencion esta habitualmente libre de cistelna. Sin embargo, si es necesario, pueden usarse residuos de cistelna para acoplar el presente peptido a otras moleculas (por ejemplo, transportadores (por ejemplo, protelnas portadoras)) que se liberan, preferentemente, de los peptidos segun la presente invencion antes de la administration o (despues de la administration) al cuerpo de un paciente. En tales casos, el enlace disulfuro no se encuentra dentro del peptido definido por la presente invencion sino entre el peptido segun la presente invencion (que esta definido por una conexion de enlace peptldico continuo (secuencia de aminoacidos)) y otro compuesto qulmico. El hecho de que los peptidos segun la presente invencion estan desprovistos de enlaces disulfuro intramoleculares es especlficamente sorprendente con respecto al hecho de que los peptidos segun la presente invencion derivan de lactoferricina humana (hLFcina) para la cual se ha divulgado que el enlace disulfuro es esencial para la actividad antimicrobiana y tambien son relevantes para la actividad antitumoral (Gifford y otros, Cell. Mol. Life Sci. 62 (2005), 2588-2598). Tambien para la lactoferricina bovina (LFcinaB), el enlace disulfuro se considero necesario para la actividad antitumoral (Eliassen y otros, Antican. Res. 22 (2002), 2703-2710).

Esto tambien muestra que la actividad antitumoral de los peptidos de la presente invencion no depende de una

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estructura secundaria especlficamente estabilizada (es decir, por enlaces disulfuro), sino que el plegamiento en cadena beta y en alfa-helice es suficiente para los peptidos definidos, por ejemplo, por las secuencias consenso de los restos peptldicos presentes en el peptido segun la presente invencion.

Preferentemente, los peptidos aislados segun la presente invencion contienen como mlnimo un giro. Un “giro” es un elemento de estructura secundaria en los polipeptidos en los que la cadena polipeptldica invierte su direccion global. Un “giro” puede, de una forma estructuralmente mas precisa, definirse como un “motivo estructural” en el que los atomos Ca de dos residuos separados por algunos enlaces peptldicos (habitualmente de 1 a 5) estan muy cercanos (< 7 A), mientras que los correspondientes residuos no forman un elemento de estructura secundaria regular, tal como una alfa-helice o lamina beta". El giro segun la presente invencion puede consistir tambien en aminoacidos de los restos peptldicos (especlficamente, por supuesto, si no se localiza ningun enlazador separado entre los restos). Sin embargo, el giro segun la presente invencion puede ser tambien un bucle (siendo un "bucle w" un termino general para un bucle mas largo, extendido o desordenado sin enlaces de hidrogeno internos fijos, vease tambien Toniolo y otros, CRC Crit. Rev. Biochem. 9 (1980): 1-44).

Segun la presente invencion, las como mlnimo dos cadenas beta o como mlnimo dos alfa-helices o la como mlnimo una cadena beta o la como mlnimo una alfa-helice estan, preferentemente, separadas por como mlnimo un giro, dando como resultado peptidos con restos alfa-helice y/o cadenas beta que tienen las siguientes estructuras basicas generales.

a) cadena beta- (giro) - cadena beta

b) alfa-helice - (giro) - alfa-helice

c) cadena beta - (giro) - alfa-helice

d) alfa-helice - (giro) - cadena beta

Segun la presente invencion, los peptidos divulgados en el presente documento tambien pueden comprender 3, 4 o incluso 5 cadenas beta o alfa-helice como restos peptldicos. En tal caso, las cadenas beta o alfa-helices del peptido pueden agruparse (por ejemplo, dos cadenas beta estan situadas adyacentes entre si) y, preferentemente, separadas por uno o mas (por ejemplo 2, 3 o 4) giros o cada cadena o helice unicas estan, preferentemente, separadas por uno o mas giros. Por lo tanto, el peptido aislado de la presente invencion puede comprender tambien mas de un tramo que tiene la estructura basica general anterior.

Los peptidos de la presente invencion tienen una carga positiva neta de +7 o mas (para el proposito de una definicion formal para la presente invencion, la carga positiva neta puede considerarse definida a pH 7,4 en tampon PBS (solucion salina tamponada con fosfato: NaPi, 20 mM , NaCl 130 mM, pH 7,4)). Esto significa que los peptidos de la presente invencion pueden tener, preferentemente, una carga positiva neta de +8, +9, +10, +11, +12, +13, +14, + 15 o incluso de +20. Una carga positiva neta de como mlnimo +7 de los peptidos de la presente invencion da como resultado una mejor adsorcion a la membrana diana (con carga negativa) y una mejor estabilizacion de la estructura secundaria mediante puentes de hidrogeno. El calculo de las cargas netas de un peptido se realiza anadiendo las cargas positivas a un polipeptido (y, si esta presente, restando las cargas netas negativas). Por ejemplo, un peptido con tres residuos de lisina y cuatro residuos de arginina tiene una carga neta positiva de +7 a un pH por debajo de 10,5 (pK lisina ~ 10,5, arginina incluso se cargarla positivamente a pH 12,5). La amidacion del grupo carboxilato C- terminal de un peptido anade una carga positiva adicional (vease, por ejemplo, Yang y otros, J. Pep. Sci. 10 (2004), 37-46). Otra posibilidad de llegar a la carga neta Z de un peptido a un cierto pH se puede estimar mediante el calculo

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donde N,■ es el numero, y los valores de pKai y de pKa, del extremo N y las cadenas laterales de arginina, lisina e histidina. El Indice j pertenece al extremo C y los aminoacidos acido aspartico, acido glutamico, cistelna, tirosina.

Los presentes peptidos se designan, preferentemente, "peptidos activos de membrana", es decir peptidos que tienen, debido a sus propiedades fisicoqulmicas, afinidad por las membranas. Las propiedades habituales de los peptidos activos de membrana se divulgan en, por ejemplo, Last y otros, Protein Science 22 (2013), 870-882 o Wang y otros, J. Biol. Chem. 114 (2010), 13726-13735). Los peptidos activos de membrana son capaces de alterar la funcion de barrera estructural de las membranas celulares, lo que, en ultima instancia, puede conducir a lisis celular y muerte celular; estos peptidos comparten dos caracterlsticas comunes: anfipaticidad y una carga positiva neta (vease Rekdal at al., Journal of Biological Chemistry 287 (2012), 233-244). Comparten rasgos comunes como residuos cationicos que se ha indicado que son importantes para la interaccion electrostatica inicial y residuos hidrofobicos que son importantes para la alteracion de la membrana (vease Lohner y otros, Combinatorial Chemistry & High Throughput Screening, 2005, 8, 241-256). La presencia de propiedades activas de la membrana puede

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determinarse por una diversidad de procedimientos. Los procedimientos preferentes para verificar la propiedad activa de la membrana segun la presente invencion son estudios de permeabilidad (liberacion de colorantes) usando liposomas compuestos por fosfatidilserina, expuesta de forma natural por las celulas cancerosas (Riedl y otros, BBA 1808 (2011) 2638-2645) y, por tanto, relevantes par las celulas cancerosas, as! como la permeabilizacion de la membrana de las celulas tumorales (captacion de yoduro de propidio (PI)). Por lo tanto, un peptido activo de membrana, especialmente un peptido activo de membrana de cancer de la presente invencion debera exhibir como mlnimo una actividad permeabilizante de membrana (liberacion de ANTS/DpX) en PS-liposomas de mas del 20% a una concentracion del peptido de 8 pM (prueba segun Zweytick y otros, J. Biol. Chem. 286 (2011), 21266-21276). La captacion de PI de 105 celulas tumorales debe ser, preferentemente, de como mlnimo 20% despues de 8 horas de incubacion del peptido a una concentracion de 20 pM del peptido activo de membrana (prueba segun Schroder- Borm y otros, J. FEBS Lett. 2005 Nov 7;579(27):6128-34).

La alfa-helice (a-helice) es un motivo comun en la estructura secundaria de protelnas, polipeptidos y peptidos. Las alfa-helices tienen una conformacion en espiral o enrollada a la derecha, en la que cada grupo N-H de la cadena principal dona un enlace de hidrogeno al grupo C=O de la cadena principal del aminoacido cuatro residuos antes. La lamina beta (lamina b) es la segunda forma de estructura secundaria regular en protelnas, polipeptidos y peptidos. Las laminas beta consisten en cadenas beta conectadas lateralmente por como mlnimo dos o tres enlaces de hidrogeno de la cadena principal, formando una lamina plegada generalmente girada. Un giro es un motivo estructural en el que los atomos Ca de dos residuos separados por uno o mas enlaces peptldicos estan muy cercanos (aproximadamente < 7 A), mientras que los residuos correspondientes no forman un elemento de estructura secundaria regular, tal como una alfa-helice o lamina beta (Chou PY y otros, Annual Review of Biochemistry 47 (1978) :251-276). La estructura secundaria de los supuestos peptidos aislados activos puede predecirse con precision por el programa en llnea PEP-FOLD: por ejemplo,
http://bioserv.rpbs.univ-paris- diderot.fr/PEP-FOLD/ (vease Maupetit y otros, Nucleic Acids Res. 37(2009), W498-W503 y/o Thevenet y otros, Nucleic Acid Res. 40 (2012), W288-W293).

El experto en la materia puede identificar peptidos que presentan las propiedades descritas en el presente documento utilizando procedimientos conocidos. La estructura secundaria puede identificarse como se ha descrito en lo que antecede. La carga neta se puede calcular sumando las cargas positivas y negativas de los residuos de aminoacidos presentes en un peptido.

Un experto en la materia puede sintetizar facilmente los peptidos de la presente invencion. Los procedimientos estandar para preparar peptidos sinteticos son bien conocidos en la materia. Los peptidos de la presente invencion se pueden sintetizar mediante procedimientos de utilization habitual, tales como protection t-BOC o FMOC, preferentemente proteccion FMOC, de grupos alfa-amino. Ambos procedimientos implican la slntesis por etapas mediante la cual se anade un unico aminoacido a cada etapa comenzando a partir del extremo carboxilo del peptido (vease, Coligan y otros, Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, 1991, Unidad 9). Los peptidos de la invencion tambien se pueden sintetizar mediante los procedimientos de slntesis peptldica en fase solida bien conocidos en la materia. (Merri-field, J. Am. Chem. Soc., 85:2149, 1963), y Stewart y Young, Solid Phase Peptides Synthesis, Pierce, Rockford, I11. (1984)). Los peptidos se pueden sintetizar usando un copoli(estirenodivinilbenceno) que contiene 0,1-1,0 mMol de aminas/g de pollmero. Al termino de la slntesis qulmica, los peptidos pueden desprotegerse y escindirse del pollmero mediante tratamiento con HF llquido-10% de anisol durante aproximadamente 0,25 a 1 hora a 0°C. Despues de la evaporation de los reactivos, los peptidos se extraen del pollmero con solution de acido acetico al 1% que, despues, se liofiliza para producir el material crudo. Esto se puede purificar, tlpicamente, mediante tecnicas tales como filtration en gel sobre Sephadex G-15 usando acido acetico al 5% como disolvente, por cromatografla llquida de alta presion, y similares. La liofilizacion de fracciones apropiadas de la columna producira el peptido o derivados peptldicos homogeneos, que despues se pueden caracterizar mediante tecnicas convencionales tales como analisis de aminoacidos, cromatografla en capa fina, cromatografla llquida de alto rendimiento, espectroscopia de absorcion por ultravioleta, rotation molar, solubilidad, y evaluados mediante degradation de Edman de fase solida (vease, por ejemplo, M. P. Deutscher, ed. Methods in Enzymology, Vol 182, Academic Press, 1990). Se puede lograr la slntesis automatica usando procedimientos sinteticos en fase solida FMOC utilizando un sintetizador peptldico automatico (Modelo 432A, Applied Biosystems, Inc.).

Los peptidos/polipeptidos de la presente invencion tambien se pueden sintetizar usando un procedimiento microbiano de protelnas de fusion en el que un peptido vehlculo anionico se fusiona con un peptido cationico. Un procedimiento para dicha production microbiana de peptidos cationicos que tienen actividad antimicrobiana se proporciona en el documento US 5.593.866.

Los peptidos de la presente invencion producidos de este modo pueden purificarse mediante procedimientos de aislamiento/purificacion para protelnas generalmente conocidas en el campo de la qulmica de protelnas. Mas particularmente, se puede mencionar, por ejemplo, extraction, recristalizacion, salification con sulfato de amonio, sulfato de sodio, etc., centrifugation, dialisis, ultrafiltracion, cromatografla de adsorcion, cromatografla de intercambio ionico, cromatografla hidrofoba, cromatografla de fase normal, cromatografla de fase inversa, procedimiento de filtracion en gel, cromatografla de permeation en gel, cromatografla de afinidad, electroforesis, distribution en contracorriente, etc. y combinaciones de estos. El mas eficaz es un procedimiento por cromatografla

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llquida de alta resolution de fase inversa.

Los peptidos de la presente invention pueden formar una sal mediante la adicion de un acido. Entre los ejemplos del acido se incluyen acidos inorganicos (tales como, acido trifluoroacetico, acido clorhldrico, acido bromhldrico, acido fosforico, acido nltrico y acido sulfurico) o acidos carboxllicos organicos (tales como acido acetico, acido propionico, acido maleico, acido succlnico, acido malico, acido cltrico, acido tartarico y acido salicllico), azucares acidos tales como acido glucuronico, acido galacturonico, acido gluconico, acido ascorbico, etc., polisacaridos acidos tales como acido hialuronico, sulfatos de condroitina, acido alglnico o acidos sulfonicos organicos (tales como acido metanosulfonico y acido p-toluenosulfonico) y similares. De estas sales, se prefiere una sal farmaceuticamente aceptable.

Los peptidos de la presente invencion pueden formar una sal con una sustancia basica. Entre los ejemplos de la sal se incluyen, por ejemplo, sales farmaceuticamente aceptables seleccionadas entre sales con bases inorganicas, tales como sales de metales alcalinos (sal de sodio, sal de litio, sal de potasio, etc.), sales de metales alcalinoterreos, sales de amonio y similares, o sales con bases organicas, tales como sales de dietanolamina, sales de ciclohexilamina y similares.

Los terminos "aminoacido" y "residuo de aminoacido" tal como se usan en el presente documento significan L- aminoacidos. Sin embargo, tambien se pueden utilizar D-aminoacidos en la fabrication de los peptidos segun la presente invencion.

El peptido de la presente invencion presenta, preferentemente, propiedades anfipaticas. Esto significa que el peptido de la presente invencion puede comprender regiones hidrofobicas e hidrofllicas. Los procedimientos para determinar las propiedades anfipaticas son bien conocidos en la materia.

Segun la presente invencion, el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (X1)m-X2-(X3)p-X4-(X5)q-X6-(X7)s (SEQ ID No. 203) o la secuencia inversa del mismo, en la que

Xi es un aminoacido hidrofobico, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en fenilalanina (Phe), alanina (Ala), leucina (Leu) y valina (Val),

X2 es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

Q es 1 o 2,

P es 2 o 3, y

S es 1, 2, 3 o 4 con la condition de que si (X5)q es Arg-Arg S es 1.

Como se usa en el presente documento, la expresion "secuencia inversa" de una secuencia de aminoacidos significa que una secuencia especlfica esta invertida. Por ejemplo, la secuencia inversa de la secuencia de aminoacidos ABCDEFG es GFEDCBA.

El como mlnimo un resto de peptido tiene, preferentemente, una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FWQRIRKVR (SEQ ID No. 1), FWQRRIRKVRR (SEQ ID No. 2), FWQRKIRKVRK (SEQ ID No. 3), FWQRNIRIRR (SEQ ID No. 4), FWQRNIRKVR (SEQ ID No. 5), FWQRNIRVR (SEQ ID No. 6), FWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 7), FWQRNIRKVKK (SEQ ID No. 8), FWQRNIRKVRRR (SEQ ID No. 9), FWQRNIRKVKKK (SEQ ID No. 10), FWQRNIRKVRRRR (SEQ ID No. 11), FWQRNIRKVRRRI (SEQ ID No. 12), FWQRNIRKVKKKK (SEQ ID No. 13), FWQRNIRKVKKKI (SEQ ID No. 14), FWQRNIRKIR (SEQ ID No. 15), FWQRNIRKLR (SEQ ID No. 16), FWQRNIRKWR (SEQ ID No. 17), FWQRNWRKVR (SEQ ID No. 18), FWQRNFRKVR (SEQ ID No. 19), FWQRNYRKVR (SEQ ID No. 20), FWQRNIRKVS (SEQ ID No. 21), FWQRRIRIRR (SEQ ID No. 22), FWQRPIRKVR (SEQ ID No. 23), FWQRRIRKWR (SEQ ID No. 24), FWPRNIRKVR (SEQ ID No. 26), FWARNIRKVR (SEQ ID No. 27), FWIRNIRKVR (SEQ ID No. 28), FWLRNIRKVR (SEQ ID No. 29), FWVRNIRKVR (SEQ ID No. 30), FWQRNIFKVR (SEQ ID No. 31), FWQRNIYKVR (SEQ ID No. 32), FAWQRNIRKVR (SEQ ID No. 33), FLWQRNIRKVR (SEQ ID No. 35) y FVWQRNIRKVR (SEQ ID No. 36) o la secuencia inversa de las mismas.

Segun otra realization preferente de la presente invencion, el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (X1,)m,-X2'-(X3')p'-(X4')q'-(X5')t,-(X6')r'-(X7')s' (SEQ ID No. 204) o la secuencia inversa del mismo, en la que

Xr es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en fenilalanina (Phe) e isoleucina (Ile),

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X2' es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X3’ se selecciona del grupo que consiste en glicina (Gly), asparagina (Asn), isoleucina (Ile) y fenilalanina (Phe),

X4 es isoleucina (Ile) o triptofano (Trp),

X5' es arginina (Arg) o lisina (Lys),

X6’ es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en isoleucina (Ile), triptofano (Trp) y valina (Val) y X7 es arginina (Arg), y en la que M' es 1 o 2,

T' es 1 o 2,

R' es 0 o 1,

P' es 1, 2 o 3,

Q' es 1, y S' es 0, 1 o 2.

El como mlnimo un resto peptldico en el peptido de la presente invencion puede tener una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FWRIRKWR (SEQ ID No. 37), FWRIRKVR (SEQ ID No. 38), FWRWRR (SEQ ID No. 39), FWRRWRR (SEQ ID No. 40), FWRRWIRR (SEQ ID No. 41), FWRGWRIRR (SEQ ID No. 42), FWRRFWRR (SEQ ID No. 43), FWRWRWR (SEQ ID No. 44), FWRIWRWR (SEQ ID No. 45), FWRIWRIWR (SEQ ID No. 46), FWRNIRKWR (SEQ ID No. 47) y FWRRRIRIRR (SEQ ID No. 48) o la secuencia inversa de las mismas.

Segun una realizacion preferente adicional de la presente invencion, el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos ((X1")m"-X2"-(X3")p"-(X4")q"-(X5")r"-(X6")s" (SEQ ID No. 205) o la secuencia inversa del mismo, en la que

X1" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en prolina (Pro) y fenilalanina (Phe),

X2" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X3" se selecciona del grupo que consiste en (Ala), arginina (Arg), glutamina (Gln), lisina (Lys), triptofano (Trp) e isoleucina (Ile),

X4" se selecciona del grupo que consiste en arginina (Arg) y aspartato (Asp),

X5" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en isoleucina (Ile), triptofano (Trp), fenilalanina (Phe), valina (Val) y leucina (Leu), y

X6' se selecciona del grupo que consiste en arginina (Arg), lisina (Lys), isoleucina (Ile), serina (Ser), y aspartato (Asp), y en la que M" es 0, 1, 2 o 3,

Q" es 0, 1, 2 o 3,

R" es 1 o 2,

P" es 1, 2 o 3, y S" es 1, 2 o 3.

El como mlnimo un resto peptldico tiene, preferentemente, una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en PFWRWRIWR (SEQ ID No. 50), PFWRIRIRR (SEQ ID No. 51), PFWRQRIRR (SEQ ID No. 52), PFWRARIRR (SEQ ID No. 53), PFWRKRIRR (SEQ ID No. 54), PFWRKRLRR (SEQ ID No. 55), PFWRKRWRR (SEQ ID No. 56), PFWRRRIRR (SEQ ID No. 57), PFWRRRWRR (SEQ ID No. 58), PFWRIRIRRD (SEQ ID No. 59), PFFWRIRIRR (SEQ ID No. 60), PWRIRIRR (SEQ ID No. 61), PFWRRQIRR (SEQ ID No. 81), PFWRKKLKR (SEQ ID No. 82), PWRRIRR (SEQ ID No. 83), PWRRKIRR (SEQ ID No. 84) y PFWRRIRIRR (SEQ ID No. 85) o la secuencia inversa de las mismas.

Segun una realizacion preferente de la presente invencion, el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (Xr')Mm- (X2'")o",-X3'"-(X4''')p'"-(X5'")q'"-(X6'")t"-(X7'")R"—(X8'")s'" (SEQ ID No. 206) o la secuencia inversa del mismo, en la que

X2' es un aminoacido basico, preferentemente arginina (Arg),

X3" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X4" se selecciona del grupo que consiste en (Ala), arginina (Arg), glutamina (Gln),asparagina (Asn) y lisina (Lys),

X5" se selecciona del grupo que consiste en isoleucina (Ile), fenilalnina (Phe) y triptofano (Trp),

X6" se selecciona del grupo que consiste en glutamina (Gln), arginina (Arg) y asparagina (Asn),

X7" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en isoleucina (Ile), triptofano

(Trp) y fenilalanina (Phe), y

Xb" es arginina (Arg), y en la que

M"' es 0, 1, 2 o 3,

T'" es 0, 1, 2 o 3, o"' es 0 o 1,

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P'" es 1, 2 o 3,

Q"' es 1 o 2, y

R"' y S"' son 0, 1 o 2.

El como mlnimo un peptido puede tener una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FWRNIRIRR (SEQ ID No. 72), FWQRIRIRR (SEQ ID No. 73), FWRWRIWR (SEQ ID No. 74), FWRIRIRR (SEQ ID No. 75), FWRNIRIWRR (SEQ ID No. 76) y FWRNIRIRR (SEQ ID No. 77) o la secuencia inversa de las mismas.

El peptido aislado comprende, preferentemente, como mlnimo un resto peptldico que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en RFWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 62), RFWQRNIRKYR (SEQ ID No. 63), PFWQRNIRKWR (SEQ ID No. 64), RFRWQRNIRKYRR (SEQ ID No. 65), RWKRINRQWF (SEQ ID No. 66), KRFCFKK (SEQ ID No. 67), KRFSFKKC (SEQ ID No. 68), KRWSWKK (SEQ ID No. 69), FRFSFKK (SEQ ID No. 70), RRFWFRR (SEQ ID No. 71), RFWQRNIRIRR (SEQ ID No. 78), RWQRNIRIRR (SEQ ID No. 79) y RRWFWRR (SEQ ID No. 86) o la secuencia inversa de las mismas.

Segun una realization adicional de la presente invention, el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FIWQRNIRKVR (SEQ ID No. 34), FIWRWRWR (SEQ ID No. 49) y RRIRINRQWF (SEQ ID No. 80) o la secuencia inversa de las mismas.

El peptido aislado de la presente invencion puede comprender un unico resto peptldico o la secuencia inversa del mismo como se ha definido anteriormente. Sin embargo, el peptido aislado puede comprender tambien una multiplicidad (como mlnimo dos, como mlnimo tres, como mlnimo cuatro, etc.) de dichos restos peptldicos unicos o restos peptldicos que tienen la secuencia inversa de los mismos. Segun una realizacion preferente muy particular de la presente invencion, el peptido aislado comprende como mlnimo dos, mas preferentemente dos, de los restos peptldicos mencionados anteriormente con la secuencia (X1)m-X2-(X3)p-X4-(X5)q-X6-(X7)s o la secuencia inversa de los mismos.

Segun una realizacion particularmente preferente de la presente invencion, el peptido de la presente invencion se selecciona entre los peptidos mostrados en la tabla 1 que tienen como mlnimo dos cadenas beta o como mlnimo dos alfa-helices o como mlnimo una cadena beta y como mlnimo una alfa-helice, estando dichas cadenas beta y/o alfa-helices separadas opcionalmente entre si por como mlnimo un giro. Se prefieren los peptidos que tienen una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID. No. 89, SEQ ID. No. 91, SEQ ID. No. 93, SEQ ID. No. 95, SEQ ID. No. 97, SEQ ID. No. 98, SEQ ID. No. 99, SEQ ID. No. 101, SEQ ID. No. 103, SEQ ID. No. 105, SEQ ID. No. 106, SEQ ID. No. 107, SEQ ID. No. 109, SEQ ID. No. 111, SEQ ID. No. 114, SEQ ID. No. 116, SEQ ID. No. 117, SEQ ID. No. 118, SEQ ID. No. 120, SEQ ID. No. 122, SEQ ID. No. 123, SEQ ID. No. 124, SEQ ID. No. 125, SEQ ID. No. 126, SEQ ID. No. 127, SEQ ID. No. 128, SEQ ID. No. 129, SEQ ID. No. 130, SEQ ID. No. 131, SEQ ID. No. 132, SEQ ID. No. 134, SEQ ID. No. 136, SEQ ID. No. 137, SEQ ID. No. 138, SEQ ID. No. 139, SEQ ID. No. 140, SEQ ID. No. 141, SEQ ID. No. 142, SEQ ID. No. 143, SEQ ID. No. 144, SEQ ID. No. 145, SEQ ID. No. 146, SEQ ID. No. 148, SEQ ID. No. 149, SEQ ID. No. 150, SEQ ID. No. 156, SEQ ID. No. 153, SEQ ID. No. 154, SEQ ID. No. 156, SEQ ID. No. 158, SEQ ID. No. 160, SEQ ID. No. 162, SEQ ID. No. 164, SEQ ID. No. 166, SEQ ID. No. 168, SEQ ID. No. 170, SEQ ID. No. 172, SEQ ID. No. 174, SEQ ID. No. 176, SEQ ID. No. 178, SEQ ID. No. 180, SEQ ID. No. 181, SEQ ID. No. 182, SEQ ID. No. 183, SEQ ID. No. 184, SEQ ID. No. 186, SEQ ID. No. 188, SEQ ID. No. 190, SEQ ID. No. 192, SEQ ID. No. 194, SEQ ID. No. 195, SEQ ID. No. 197, SEQ ID. No. 199, SEQ ID. No. 200, SEQ ID. No. 201 y SEQ ID. No. 202. La variable "X" dentro de estas secuencias puede ser de 1 a 3 (es decir, 1, 2 o 3) residuos de glicina o prolina, preferentemente 1 residuo de prolina. Los peptidos particularmente preferentes son aquellos que tienen una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID. No. 125, SEQ ID. No. 126, SEQ ID. No. 127, SEQ ID. No. 128, SEQ ID. No. 105, SEQ ID. No. 106, SEQ ID. No. 107, SEQ ID. No. 174, SEQ ID. No. 176, SEQ ID. No. 141, SEQ ID. No. 142, SEQ ID. No. 143, SEQ ID. No. 144, SEQ ID. No. 181, SEQ ID. No. 182, SEQ ID. No. 183 y SEQ ID. No. 184.

Segun una realizacion preferente de la presente invencion, el peptido de la presente invencion tiene/comprende/consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID. No. 125, SEQ ID. No. 127, SEQ ID. No. 128, SEQ ID. No. 106 y SEQ ID. No. 141 y No.184. Por ejemplo, las SEQ ID. Nos. 128, 184 y 106, especialmente los numeros 128 y 184, son especlficamente adecuados para el tratamiento del cancer, especialmente para el tratamiento del glioblastoma y del melanoma maligno.

Por supuesto, el peptido aislado de la presente invencion puede comprender tambien una combination de como mlnimo dos de los peptidos mencionados anteriormente.

Segun una realizacion preferente de la presente invencion, como mlnimo dos peptidos que tienen una secuencia de aminoacidos como se define en el presente documento o la secuencia inversa de la misma se fusionan directamente o por medio de un enlazador, en el que dicho enlazador es, preferentemente, parte del giro.

Segun una realizacion preferente adicional de la presente invencion, dicho peptido aislado comprende como mlnimo dos, preferentemente dos, restos peptldicos con la secuencia (X1)m-X2-(Xb)p-X4-(X5)q-X6-(X7)s o la secuencia inversa de la misma (secuencia "retro") que tiene la misma secuencia de aminoacidos y que se selecciona entre los

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restos peptldicos que tienen una secuencia de aminoacidos como se ha definido anteriormente o la secuencia inversa de la misma, en la que los como mlnimo dos restos peptldicos estan fusionados uno a otro directamente o mediante un enlazador (por ejemplo, la secuencia "inversa" o "retro" X1X2X3X4 es X4X3X2X1; por ejemplo, la secuencia "retro" de PWRIRIRR es RRIRIRWP).

Dicho peptido aislado puede comprender como mlnimo dos, preferentemente dos, restos peptldicos, en los que como mlnimo un primer resto peptldico tiene una secuencia de aminoacidos como se ha definido anteriormente y el como mlnimo un segundo resto peptldico es la secuencia inversa del mismo, en la que los como mlnimo dos restos peptldicos se fusionan entre si directamente o mediante un enlazador.

El enlazador comprende, preferentemente, de 1 a 10, preferentemente de 1 a 8, mas preferentemente de 1 a 5, incluso mas preferentemente de 1 a 3, residuos de aminoacidos.

Segun una realizacion particularmente preferente de la presente invencion, el enlazador, que es preferentemente parte del giro, comprende o consiste en prolina y/o glicina, preferentemente prolina.

El peptido aislado de la presente invencion o una preparacion farmaceutica que comprende como mlnimo uno de dichos peptidos aislados puede usarse para tratar cancer de tumores solidos y no solidos, incluyendo metastasis, por lo que el cancer se selecciona, preferentemente, del grupo que consiste en melanoma, rabdomiosarcoma, glioblastoma, cancer colorrectal, cancer de mama, linfoma, cancer de prostata, cancer de pancreas, cancer renal, cancer de ovarios y cancer de pulmon. Los canceres particularmente preferidos para tratar con los peptidos de la presente invencion son glioblastoma y Melanoma, preferentemente melanoma maligno. Los peptidos de la presente invencion se administran, preferentemente, a un paciente que lo necesite en una cantidad de 100 pg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, preferentemente de 1 mg/kg de peso corporal a 50 mg/kg de peso corporal, mas preferentemente de 5 mg/kg de peso corporal a 15 mg/kg de peso corporal, en particular 10 mg/kg de peso corporal. Ademas, los peptidos de la presente invencion se administran, preferentemente, diariamente (por ejemplo, tres veces al dla, dos veces al dla o una vez al dla), cada 2, cada 3, cada 4 o cada 5 dlas.

Para obtener una composition farmaceutica con actividad anticancerosa o antitumoral incluso mejor, se anaden agentes adicionales que presentan propiedades similares a las de los peptidos segun la presente invencion. Por supuesto, tambien es posible anadir agentes con actividades distintas de los peptidos segun la presente invencion. Estas sustancias pueden ser utiles para aumentar la biodisponibilidad, tales como, por ejemplo, aumentar la estabilidad de los peptidos o su administration.

Tales composiciones segun la presente invencion pueden comprender, ademas, preferentemente, un excipiente farmaceuticamente aceptable.

La composicion farmaceutica de la presente invencion puede consistir en el peptido de la presente invencion solo o puede estar en forma de una composicion que comprende el peptido de la presente invencion y un vehlculo farmaceuticamente aceptable. El vehlculo farmaceuticamente aceptable que se puede usar no esta limitado en particular e incluye un excipiente, un aglutinante, un lubricante, un colorante, un disgregante, un tampon, un agente isotonico, un conservante, un anestesico y similares, que pueden usarse en el sector medico.

La composicion de la presente invencion puede administrarse, dependiendo del cancer que se va a tratar, local o sistematicamente mediante inyeccion (subcutanea, intracutanea, intravenosa, intraperitoneal, etc.), gotas oculares, instilacion, administracion percutanea, administracion oral, inhalation, etc. Los peptidos de la presente invencion tambien se pueden inyectar directamente en el tumor/cancer que se va a tratar.

Asimismo, la forma de dosificacion, tal como preparaciones inyectables (soluciones, suspensiones, emulsiones, solidos a disolver cuando se usan, etc.), comprimidos, capsulas, granulos, polvos, llquidos, inclusiones de liposomas, unguentos, geles, polvos externos, pulverizaciones, polvos inhaladores, gotas oculares, unguentos para los ojos, supositorios, pesarios y similares pueden seleccionarse apropiadamente dependiendo del procedimiento de administracion y la composicion de la presente invencion se pueden formular en consecuencia.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere al uso de un peptido como se ha definido anteriormente para la fabrication de un medicamento para tratar el cancer en un mamlfero, en particular en un paciente humano.

Un aspecto adicional de la presente divulgation se refiere a un procedimiento para tratar a un mamlfero, en particular a un paciente humano, que sufre cancer mediante la administracion a dicho mamlfero de una cantidad eficaz de un peptido como se ha definido anteriormente.

Tal como se utiliza en el presente documento, la expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" o “cantidad eficaz” significa que a un mamlfero se administra una cantidad del peptido de la presente invencion, que permite la reduction de las celulas tumorales dentro del cuerpo de como mlnimo 10%, preferentemente como mlnimo 20%, mas preferentemente como mlnimo 50%, y, mas preferentemente, suficiente para reducir en un 90%. Generalmente, la dosificacion variara con la edad, la afeccion y el sexo y puede determinarla un experto en la materia. En caso de

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cualquier contraindication, el medico de cada paciente individual puede ajustar la dosificacion. En cualquier caso, la eficacia del tratamiento puede determinarse mediante el control de la presencia de las celulas cancerosas dentro del cuerpo.

Segun una realization particularmente preferente de la presente invention, el peptido de la presente invention tiene/comprende/consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID. No. 125, SEQ ID. No. 127, SEQ ID. No. 128, SEQ ID. No. 106 y SEQ ID. No. 141 y se utiliza en el tratamiento del glioblastoma y el melanoma, preferentemente el melanoma maligno. El peptido de la presente invencion puede administrarse inyectando directamente el peptido en el tumor/cancer.

Preferentemente, la presente divulgation se define como en los siguientes aspectos:

1. Un peptido aislado que se utilizara en el tratamiento de cancer, que consiste en 12 a 50 residuos de aminoacidos que comprenden

- como mlnimo dos cadenas beta, o

- como mlnimo dos alfa-helices, o

- como mlnimo una cadena beta y como mlnimo una alfa-helice,

en las que dichas cadenas beta y/o alfa-helices estan, preferentemente, separadas entre si por como mlnimo un giro, en el que el peptido tiene una carga positiva neta de +7 o mas.

2. Peptido para su utilization segun la realizacion 1, en el que el peptido comprende como mlnimo 5 residuos de aminoacidos hidrofobos.

3. Peptido para su utilizacion segun la realizacion 1 o 2, en el que dicho peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos ((X1)m-X2-(X3)p-X4-(X5)q-X6-(X7)s o la secuencia inversa de la misma, en la que

X2 es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

Q es 1 o 2,

P es 2 o 3, y

S es 1, 2, 3 o 4 con la condition de que si (Xs)q es Arg-Arg S es 1.

4. Peptido para su utilizacion segun la realizacion 3, en el que como mlnimo un resto peptldico tiene una

secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FWQRIRKVR (SEQ ID No. 1), FWQRRIRKVRR (SEQ ID No. 2), FWQRKIRKVRK (SEQ ID No. 3), FWQRNIRIRR (SEQ ID No. 4), FWQRNIRKVR (SEQ ID No. 5), FWQRNIRVR (SEQ ID No. 6), FWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 7),

FWQRNIRKVKK (SEQ ID No. 8), FWQRNIRKVRRR (SEQ ID No. 9), FWQRNIRKVKKK (SEQ ID No. 10), FWQRNIRKVRRRR (SEQ ID No. 11), FWQRNIRKVRRRI (SEQ ID No. 12), FWQRNIRKVKKKK (SEQ ID No. 13), FWQRNIRKVKKKI (SEQ ID No. 14), FWQRNIRKIR (SEQ ID No. 15), FWQRNIRKLR (SEQ ID No. 16), FWQRNIRKWR (SEQ ID No. 17), FWQRNWRKVR (SEQ ID No. 18), FWQRNFRKVR (SEQ ID No. 19), FWQRNYRKVR (SEQ ID No. 20), FWQRNIRKVS (SEQ ID No. 21), FWQRRIRIRR (SEQ ID No. 22), FWQRPIRKVR (SEQ ID No. 23), FWQRRIRKWR (SEQ ID No. 24), FWPRNIRKVR (SEQ ID No. 26),

FWARNIRKVR (SEQ ID No. 27), FWIRNIRKVR (SEQ ID No. 28), FWLRNIRKVR (SEQ ID No. 29),

FWVRNIRKVR (SEQ ID No. 30), FWQRNIFKVR (SEQ ID No. 31), FWQRNIYKVR (SEQ ID No. 32),

FAWQRNIRKVR (SEQ ID No. 33), FLWQRNIRKVR (SEQ ID No. 35) y FVWQRNIRKVR (SEQ ID No. 36) o la secuencia inversa de las mismas.

5. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 4, en el que como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (Xr)M,-X2'-(X3')p'-(X4')Q'-(X5')T,-(X6')R'-(X7')s' o la secuencia inversa de la misma, en la que

X2’ es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X3’ se selecciona del grupo que consiste en glicina (Gly), asparagina (Asn), isoleucina (Ile) y fenilalanina (Phe), X4’ es isoleucina (Ile) o triptofano (Trp),

X5, es arginina (Arg) o lisina (Lys),

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X6’ es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en isoleucina (Ile), triptofano (Trp) y valina (Val) y X7’ es arginina (Arg), y en la que M' es 1 o 2,

T' es 1 o 2,

R' es 0 o 1,

P' es 1, 2 o 3,

Q' es 1, y S' es 0, 1 o 2.

6. Peptido para su utilizacion segun la realizacion 5, en el que como mlnimo un resto peptldico tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FWRIRKWR (SEQ ID No. 37), FWRIRKVR (SEQ ID No. 38), FWRWRR (SEQ ID No. 39), FWRRWRR (SEQ ID No. 40), FWRRWIRR (SEQ ID No. 41), FWRGWRIRR (SEQ ID No. 42), FWRRFWRR (SEQ ID No. 43), FWRWRWR (SEQ ID No. 44), FWRIWRWR (SEQ ID No. 45), FWRIWRIWR (SEQ ID No. 46), FWRNIRKWR (SEQ ID No. 47) y FWRRRIRIRR (SEQ ID No. 48) o la secuencia inversa de las mismas.

7. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 6, en el que como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (X1")m"-X2"-(X3")p"-(X4")q"-(X5")r"-(X6")s" o la secuencia inversa de la misma, en la que

X2" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X4" se selecciona del grupo que consiste en arginina (Arg) y aspartato (Asp),

W se selecciona del grupo que consiste en arginina (Arg), lisina (Lys), isoleucina (Ile), serina (Ser), y aspartato (Asp), y en la que M" es 0, 1, 2 o 3,

Q" es 0, 1, 2 o 3,

R" es 1 o 2,

P" es 1, 2 o 3, y S" es 1, 2 o 3.

8. Peptido para su utilizacion segun la realizacion 7, en el que como mlnimo un resto peptldico tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en PFWRWRIWR (SEQ ID No. 50), PFWRIRIRR (SEQ ID No. 51), PFWRQRIRR (SEQ ID No. 52), PFWRARIRR (SEQ ID No. 53), PFWRKRIRR (SEQ ID No. 54), PFWRKRLRR (SEQ ID No. 55), PFWRKRWRR (SEQ ID No. 56), PFWRRRIRR (SEQ ID No. 57), PFWRRRWRR (SEQ ID No. 58), PFWRIRIRRD (SEQ ID No. 59), PFFWRIRIRR (SEQ ID No. 60), PWRIRIRR (SEQ ID No. 61), PFWRRQIRR (SEQ ID No. 81), PFWRKKLKR (SEQ ID No. 82), PWRRIRR (SEQ

ID No. 83), PWRRKIRR (SEQ ID No. 84) y PFWRRIRIRR (SEQ ID No. 85) o la secuencia inversa de las

mismas.

9. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 8, en el que como mlnimo un resto peptldico que tiene la secuencia de aminoacidos (X1"')m",-(X2"')o"-X3"—(X4"')p"—(X5"')q"—(X6"')t"— (X7""")r"""-(X8"")s" o la secuencia inversa de la misma, en la que

X1"' es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en prolina (Pro) y fenilalanina (Phe),

X2", es un aminoacido basico, preferentemente arginina (Arg),

X3m es un aminoacido hidrofobo, preferentemente triptofano (Trp),

X4"' se selecciona del grupo que consiste en (Ala), arginina (Arg), glutamina (Gln),asparagina (Asn) y lisina (Lys), X5'" se selecciona del grupo que consiste en isoleucina (Ile), fenilalnina (Phe) y triptofano (Trp),

X6'" se selecciona del grupo que consiste en glutamina (Gln), arginina (Arg) y asparagina (Asn),

X7" es un aminoacido hidrofobo, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en isoleucina (Ile), triptofano (Trp) y fenilalanina (Phe), y Xs" es arginina (Arg), y en la que M'" es 0, 1, 2 o 3,

T'" es 0, 1, 2 o 3,

O"' es 0 o 1,

P'" es 1, 2 o 3,

Q''' es 1 o 2, y

R"' y S'" son 0, 1 o 2.

10. Peptido para su utilizacion segun la realizacion 9, en el que el como mlnimo un resto peptldico tiene una

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secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FWRNIRIRR (SEQ ID No. 72), FWQRIRIRR (SEQ ID No. 73), FWRWRIWR (SEQ ID No. 74), FWRIRIRR (SEQ ID No. 75), FWRNIRIWRR (SEQ ID No. 76) y FWRNIRIRR (SEQ ID No. 77) o la secuencia inversa de las mismas.

11. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 10, en el que el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en RFWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 62), RFWQRNIRKYR (SEQ ID No. 63), PFWQRNIRKWR (SEQ ID No. 64), RFRWQRNIRKYRR (SEQ ID No. 65), RWKRINRQWF (SEQ ID No. 66), KRFCFKK (SEQ ID No. 67), KRFSFKKC (SEQ ID No. 68), KRWSWKK (SEQ ID No. 69), FRFSFKK (SEQ ID No. 70), RRFWFRR (SEQ ID No. 71), RFWQRNIRIRR (SEQ ID No. 78), RWQRNIRIRR (SEQ ID No. 79) y RRWFWRR (SEQ ID No. 86) o la secuencia inversa de las mismas.

12. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 11, en el que el peptido aislado comprende como mlnimo un resto peptldico que tiene una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en FIWQRNIRKVR (SEQ ID No. 34), FIWRWRWR (SEQ ID No. 49) y RRIRINRQWF (SEQ ID No. 80) o la secuencia inversa de las mismas.

13. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 12, en el que como mlnimo dos restos peptldicos que tienen una secuencia de aminoacidos como se define en una cualquiera de las realizaciones 4 a 13 o la secuencia inversa de la misma se fusionan entre si directamente o a traves de un enlazador.

14. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 12, en el que dicho peptido aislado comprende como mlnimo dos, preferentemente dos, restos peptldicos que tienen la misma secuencia de aminoacidos y que se seleccionan entre los restos peptldicos que tienen una secuencia de aminoacidos como se define en una cualquiera de las realizaciones 4 a 13 o la secuencia inversa de la misma, en la que los como mlnimo dos restos peptldicos estan fusionados uno al otro directamente o mediante un enlazador.

15. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 12, en el que dicho peptido aislado comprende como mlnimo dos, preferentemente dos, restos peptldicos, en el que como mlnimo un primer resto peptldico tiene una secuencia de aminoacidos como se define en una cualquiera de las realizaciones 4 a 13 y el como mlnimo segundo resto peptldico es la secuencia inversa del mismo, en el que los como mlnimo dos restos peptldicos se fusionan uno al otro directamente o por medio de un enlazador.

16. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 13 a 15, en el que el enlazador comprende de 1 a 10, preferentemente de 1 a 8, mas preferentemente de 1 a 5, incluso mas preferentemente de 1 a 3, residuos de aminoacidos.

17. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 13 a 16, en el que el enlazador comprende residuos de prolina y/o glicina.

18. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 13 a 17, en el que el enlazador consiste en uno, dos o tres, preferentemente uno, residuos de prolina.

19. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 18, en el que el cancer se selecciona de tumores solidos y no solidos, incluyendo metastasis.

20. Peptido para su utilizacion segun cualquiera de las realizaciones 1 a 19, en el que el cancer se selecciona del grupo que consiste en melanoma, rabdomiosarcoma, glioblastoma, cancer colorrectal, cancer de mama, linfoma, cancer de prostata, cancer de pancreas, cancer renal, cancer de ovarios y cancer de pulmon.

21. Utilizacion de un peptido como se define en una cualquiera de las realizaciones 1 a 18 para la fabricacion de un medicamento para tratar el cancer en un mamlfero, en particular en un paciente humano.

22. Procedimiento para tratar a un mamlfero, en particular un paciente humano, que sufre cancer mediante la administracion a dicho mamlfero de una cantidad eficaz de un peptido como se define en una cualquiera de las realizaciones 1 a 18.

La presente invencion se ilustra ademas mediante los siguientes ejemplos y figuras, aunque sin quedar restringida a los mismos.

La figura 1 muestra las estructuras secundarias de PEP-322 (A) y R-DIM-P-PEP-322 (B) en tampon Hepes (primera barra) o presencia de SDS y DPC a relaciones entre el peptido y el surfactante de 1:25 y 1:100, determinadas usando espectroscopia de CD. En la parte inferior se muestra el contenido a-helicoidal en gris oscuro; el segundo desde abajo muestra la lamina b en gris claro; el tercero desde abajo muestra giros en gris medio; las estructuras enrolladas aleatorias se muestran en gris oscuro en la parte superior.

La figura 2 muestra las estructuras secundarias de DIM-PEP-318 (A) y R-DIM-P-PEP-322 (B) en ausencia y presencia de SDS y DPC a relaciones entre el peptido y el surfactante de 1:25 y 1:100, determinadas usando espectroscopia de CD. En la parte inferior se muestra el contenido a-helicoidal en gris oscuro; el segundo desde abajo muestra la lamina b en gris claro; el tercero desde abajo muestra giros en gris medio; las estructuras enrolladas aleatorias se muestran en gris oscuro en la parte superior.

La figura 3 muestra la toxicidad peptldica-captacion de PI de las llneas de celulas cancerosas y no cancerosas: (A) Actividad citotoxica dependiente de la concentracion de PEP-322 (•) y R-DIM-P-PEP-322 (▼) frente a la llnea celular de melanoma SBcl- 2 despues de 8 horas de incubacion con peptidos; (B) Actividad citotoxica dependiente de la concentracion frente a cultivos primarios de melanocitos no tumorigenicos diferenciados despues de 8 horas de incubacion con peptidos; (C) especificidad de peptidos a una concentracion de los peptidos 20 pM despues de 8 horas de incubacion mostrada como la relacion de la captacion de PI de SBcl-2 frente a melanocitos y WM164 frente a melanocitos.

La figura 4 muestra la captacion de PI de diversas llneas celulares cancerosas y no cancerosas tras la incubacion

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con peptido 20pM. Se muestra la actividad citotoxica dependiente del tiempo de PEP-322 (•), R-DIM-P-PEP-322 (▼), PEP-318 (A) y DIM-PEP-318 (■) frente a la linea celular de melanoma SBcl-2 (A), metastasis de melanoma WM164 (B), linea celular de rabdomiosarcoma TE671 (C), lineas celulares de melanocitos no tumorigenicos diferenciados (D) y linea celular de fibroblastos dermicos humanos normales NHDF (E) a una concentracion peptidica de 20 pM.

La figura 5 muestra la citotoxicidad de los peptidos despues de 8 horas de incubacion contra la linea celular de melanoma SBcl-2, metastasis de melanoma WM164, linea celular de rabdomiosarcoma TE671, linea celular melanocitica no tumorigenica diferenciada y linea celular de fibroblastos dermicos humanos normales NHDF.

La figura 6 muestra la actividad citotoxica de PEP-322 (A), R-DIM-P-PEP-322 (B) y DIM-PEP-318 (C) determinada mediante el ensayo de proliferacion de celulas MTS contra la linea celular de melanoma SBcl-2, la metastasis de melanoma WM164 y los fibroblastos dermicos humanos no cancerosos (NHDF). Las celulas se mantuvieron en el medio apropiado durante el tiempo de incubacion de 24 horas.

La figura 7 muestra el analisis espectrofluorimetrico de la actividad de la caspasa 3/7 de la linea celular de melanoma SBcl-2 tras incubacion de 4 horas con diferentes concentraciones (5 pM, 10 pM, 20 pM, 40 pM, 80 pM) del peptido R-DIM-P-PEP-322 (negro) y DIM-PEP-318 (blanco).

Las figuras 8 a 11 muestra la citotoxicidad de los peptidos despues de 1 hora, 2 horas, 4 horas y 8 horas de incubacion, respectivamente, contra la linea celular de melanoma SBcl-2, metastasis de melanoma WM164, linea celular de rabdomiosarcoma TE671, linea celular melanocitica no tumorigenica diferenciada y linea celular de fibroblastos dermicos humanos normales NHDF.

La figura. 12 muestra la citotoxicidad de peptidos especificos R-DIM-P-PEP-322 y R-DIM-PEP-316 y de peptidos menos especificos R-DIM-PEP-337 y DIM-PEP-318 y la lactoferricina humana debilmente activa (hLFcina) (3761), que contiene dos cisteinas (Cys3 y Cys20) conectadas a traves de un enlace disulfuro, despues de 8 horas de incubacion, respectivamente, contra la linea celular de glioblastoma U87 mg, la linea celular de melanoma A375 y la linea celular de fibroblastos dermicos humanos normales NHDF-c y predicciones de estructura secundaria pEp- FOLD de peptidos.

La figura 13 muestra las predicciones de la estructura secundaria de los peptidos PEP-322 (A), R-DIM-P-PEP-322 (B), R-DIM-P-PEP-334 (C), R-DIM-PEP-316 (D), R-DIM-PEP-337 (E), DIM-PEP-324 (F) y DIM-318 (G), analizados por el programa PEP - FOLD.

La figura 14 muestra la citotoxicidad de los peptidos R-DIM-P-PEP-316, DIM-PEP-317, DIM-PEP-318, DIM- PEP-322, R-DIM-PEP-322, R-DIM-P-PEP-322, R-DIM-PEP-323, DIM-PEP-324, R-DIM-P-PEP-324, R-DIM- P-PEP-330, R-DIM-P-PEP-332, R-DIM-P-PEP-334 y R-DIM-PEP-337 y lactoferricina humana (hLFcina) (3761) despues de 1 hora, 2 horas, 4 horas y 8 horas de incubacion, respectivamente, contra la linea celular de melanoma A375.

La figura 15 muestra la citotoxicidad de los peptidos R-DIM-P-PEP-316, DIM-PEP-317, DIM-PEP-318, DIM- PEP-322, R-DIM-PEP-322, R-DIM-P-PEP-322, R-DIM-PEP-323, DIM-PEP-324, R-DIM-P-PEP-324, R-DIM- P-PEP-330, R-DI M-P-PEP-332, R-DIM-P-PEP-334 y R-DIM-PEP-337 y lactoferricina humana (hLFcina) (3761) despues de 1 hora, 2 horas, 4 horas y 8 horas de incubacion, respectivamente, contra la linea celular de glioblastoma U87 mg.

EJEMPLOS:

Procedimientos experimentales Materiales y sfntesis peptidica

1,2-dihexadecanoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC), 1-hexadecanoil-2-(9Z-octadecenoil)-sn-glicero-3- fosfocolina (POPC), 1,2-dihexadecanoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (sal de Na) (DPPS) y 1-hexadecanoil-2-(9Z- octadecenoil)-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (sal de Na) (POPS) se adquirieron en la firma Avanti Polar Lipids, Inc. (EE.UU.), y se utilizaron sin purification adicional. Se prepararon soluciones madre de DPPC y POPC en CHCI3/CH3Oh (2:1, v/v), se prepararon soluciones madre de DPPS y POPS en CHCl3/CH3OH (9:1, v/v) y se almacenaron a -18°C.

Los peptidos amidados PEP-322 (PFWRIRIRR-NH2, M=1298,6 g/mol, DIM-PEP-322 (2580,2), M= g/mol, R-DIM- PEP-322 (2580,2), M= g/mol, R-DIM-P-PEP-322 (PFWRIRIRRPRRIRIRWFP-NH2, M= 2677,4 g/mol), PEP-318 (FWQRRIRRWRR-NH2, M= 1715,0 g/mol), DIM-PEP-318 (FWQRRIRRWRRFWQRRIRRWRR-NH2, M= 3413,1 g/mol), PEP-324 (PFFWRIRIRR-NH2, M= 1445,8 g/mol), DIM-PEP-324 (PFFWRIRIRRPFFWRIRIRR-NH2, M= 2874,6 g/mol), PEP-316 (RWKRINRQWF-NH2, M= 1488,8 g/mol) y R-DIM-PEP-316

(RWKRINRQWFFWQRNIRKWR-NH2, M= 2960,5 g/mol) se adquirieron en la firma NeoMPS, Inc. (San Diego, CA, EE.UU.). la lactoferricina humana (hLFcina) (37-61) (TKCFQWQRNMRKVRGPPVSCIKRDS (SEQ ID NO: 207), M = 3020,5 g/mol) se adquirio en la firma Anaspec, Inc (Fremont, CA, EE.UU.). Las purezas fueron > 95%, determinadas mediante RP - HPLC. Los peptidos se disolvieron en acido acetico (0,1%, v/v) a una concentracion de 3 mg/ml. Las soluciones peptidicas se almacenaron a 4°C y las concentraciones se determinaron fotometricamente a 280 nm.

ANTS (acido 8-aminonaftaleno-1,3,6-trisulfonico, sal de disodio) y DPX (bromuro de p-xileno-bis-piridinio) utilizados para los estudios de permeabildiad se adquirieron en la firma Molecular Probes (Eugene, OR).

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Peptido aislado para su utilizacion en el tratamiento de cancer que consiste en de 12 a 50 residuos de aminoacidos que comprenden como minimo dos restos peptidicos, en el que dichos como minimo dos restos peptidicos son:

- como minimo dos cadenas beta, o

- como minimo dos alfa-helices, o

- como minimo una cadena beta y como minimo una alfa-helice,

- en el que dichas cadenas beta y/o alfa-helices estan separadas entre si por como minimo un giro;

- en el que el peptido tiene una carga positiva neta de +7 o mas;

- en el que los restos peptidicos tienen una secuencia de aminoacidos, seleccionada del grupo que consiste en FWQRIRKVR (SEQ ID No. 1), FWQRRIRKVRR (SEQ ID No. 2), FWQRKIRKVRK (SEQ ID No. 3), FWQRNIRIRR (SEQ ID No. 4), FWQRNIRKVR (SEQ ID No. 5), FWQRNIRVR (SEQ ID No. 6), FWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 7), FWQRNIRKVKK (SEQ ID No. 8), FWQRNIRKVRRR (SEQ ID No. 9), FWQRNIRKVKKK (SEQ ID No. 10), FWQRNIRKVRRRR (SEQ ID No. 11), FWQRNIRKVRRRI (SEQ ID No. 12), FWQRNIRKVKKKK (SEQ ID No. 13), FWQRNIRKVKKKI (SEQ ID No. 14), FWQRNIRKIR (SEQ ID No. 15), FWQRNIRKLR (SEQ ID No. 16), FWQRNIRKWR (SEQ ID No. 17), FWQRNWRKVR (SEQ ID No. 18), FWQRNFRKVR (SEQ ID No. 19), FWQRNYRKVR (SEQ ID No. 20), FWQRNIRKVS (SEQ ID No. 21), FWQRRIRIRR (SEQ ID No. 22), FWQRPIRKVR (SEQ ID No. 23), FWQRRIRKWR (SEQ ID No. 24), FWPRNIRKVR (SEQ ID No. 26), FWARNIRKVR (SEQ ID No. 27), FWIRNIRKVR (SEQ ID No. 28), FWLRNIRKVR (SEQ ID No. 29), FWVRNIRKVR (SEQ ID No. 30), FWQRNIFKVR (SEQ ID No. 31), FWQRNIYKVR (SEQ ID No. 32), FAWQRNIRKVR (SEQ ID No. 33), FIWQRNIRKVR (SEQ ID No. 34), FLWQRNIRKVR (SEQ ID No. 35), FVWQRNIRKVR (SEQ ID No. 36), FWRIRKWR (SEQ ID No. 37), FWRIRKVR (SEQ ID No. 38), FWRWRR (SEQ ID No. 39), FWRRWRR (SEQ ID No. 40), FWRRWIRR (SEQ ID No. 41), FWRGWRIRR (SEQ ID No. 42), FWRRFWRR (SEQ ID No. 43), FWRWRWR (SEQ ID No. 44), FWRIWRWR (SEQ ID No. 45), FWRIWRIWR (SEQ ID No. 46), FWRNIRKWR (SEQ ID No. 47), FWRRRIRIRR (SEQ ID No. 48), FIWRWRWR (SEQ ID No. 49), PFWRWRIWR (SEQ ID No. 50), PFWRIRIRR (SEQ ID No. 51), PFWRQRIRR (SEQ ID No. 52), PFWRARIRR (SEQ ID No. 53), PFWRKRIRR (SEQ ID No. 54), PFWRKRLRR (SEQ ID No. 55), PFWRKRWRR (SEQ ID No. 56), PFWRRRIRR (SEQ ID No. 57), PFWRRRWRR (SEQ ID No. 58), PFWRIRIRRD (SEQ ID No. 59), PFFWRIRIRR (SEQ ID No. 60), PWRIRIRR (SEQ ID No. 61), RFWQRNIRKVRR (SEQ ID No. 62), RFWQRNIRKYR (SEQ ID No. 63), PFWQRNIRKWR (SEQ ID No. 64), RFRWQRNIRKYRR (SEQ ID No. 65), RWKRINRQWF (SEQ ID No. 66), KRFCFKK (SEQ ID No. 67), KRFSFKKC (SEQ ID No. 68), KRWSWKK (SEQ ID No. 69), FRFSFKK (SEQ ID No. 70), RRFWFRR (SEQ ID No. 71), FWRNIRIRR (SEQ ID No. 72), FWQRIRIRR (SEQ ID No. 73), FWRWRIWR (SEQ ID No. 74), FWRIRIRR (SEQ ID No. 75), FWRNIRIWRR (SEQ ID No. 76) and FWRNIRIRR (SEQ ID No. 77), RFWQRNIRIRR (SEQ ID No. 78), RWQRNIRIRR (SEQ ID No. 79), RRIRINRQWF (SEQ ID No. 80), PFWRRQIRR (SEQ ID No. 81), PFWRKKLKR (SEQ ID No. 82), PWRRIRR (SEQ ID No. 83), PWRRKIRR (SEQ ID No. 84), PFWRRIRIRR (SEQ ID No. 85), and RRWFWRR (SEQ ID No. 86), FWQRRIRRWRR (SEQ ID No. 112), PFWRRRIRIRR (SEQ ID No. 193), RRWFFWRR (SEQ ID No. 198) y las secuencias inversas de las mismas; y

- en el que dicho peptido carece de enlaces disulfuro intramoleculares.
2. Peptido para su utilizacion, segun la reivindicacion 1, estando dicho peptido seleccionado, preferentemente, del grupo que consiste en PFWRIRIRRXRRIRIRWFP (SEQ ID. No. 128), PWRIRIRRXRRIRIRWP (SEQ ID No.184), RWKRINRQWFFWQRNIRKWR (SEQ ID. No. 106), PFWRIRIRRPFWRIRIRR (SEQ ID. No. 125), PFFWRIRIRRPFFWRIRIRR (SEQ ID. No. 141) y PFWRIRIRRRRIRIRWFP (SEQ ID. No. 127), especialmente las SEQ ID. Nos. 128, 184 y 106, en la que "X" es prolina (Pro) y/o glicina (Gly)1-3.
3. Peptido para su utilizacion, segun la reivindicacion 1 o 2, en el que el peptido esta desprovisto de residuos de cisteina.
4. Peptido para su utilizacion, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el peptido aislado comprende como minimo dos, preferentemente dos, restos peptidicos que tienen la misma secuencia de aminoacidos, en el que los como minimo dos restos peptidicos se fusionan uno a otro directamente o a traves de un enlazador.
5. Peptido para su utilizacion, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el peptido aislado comprende como minimo dos, preferentemente dos, restos peptidicos, en el que como minimo un segundo resto peptidico es la secuencia inversa del mismo, en el que los como minimo dos restos peptidicos se fusionan uno a otro directamente o a traves de un enlazador.
6. Peptido para su utilizacion, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el cancer se selecciona de tumores solidos y no solidos, incluyendo metastasis, seleccionados, preferentemente, del grupo que consiste en melanoma, rabdomiosarcoma, glioblastoma, cancer colorrectal, cancer de mama, linfoma, cancer de prostata, cancer de pancreas, cancer renal, cancer de ovarios y cancer de pulmon.