ES2610208A1 - Formulación cosmética de uso tópico para el cuidado de la piel atópica - Google Patents

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Formulación cosmética de uso tópico para el cuidado de la piel atópica. La invención versa sobre formulaciones de uso tópico que comprenden una combinación de extractos vegetales a base de Zanthoxylum, Serenoa, Maclura y ácido ximenínico, que resulta eficaz como cosmético para el cuidado de la piel atópica y como composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de la dermatitis atópica (DA).

Description

DESCRIPCIÓN
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antiinflamatorio, antioxidante, inmunosupresor, anti-prurito y/o protector de la barrera epidérmica.
Descripción de las figuras
Figura 1. Efecto inhibitorio de una realización la formulación de la invención (SCB-001) sobre la activación del factor de transcripción NF-B inducida por la citoquina proinflamatoria TNF. Se representa el porcentaje de activación de NF-B tras 6 hde incubación con SCB-001 de fibroblastos NIH-3T3-kBF-Luc a (A) y de queratinocitos HaCaT-kBF-Luc (B).
Figura 2. Efecto inhibitorio de una realización de la formulación de la invención (SCB-001) sobre la activación constitutiva del factor de transcripción NF-B (IB fosforilado: p-IB y p65 fosforilado: p-p65 de NF-B) en queratinocitos primarios no diferenciados. El efecto de SCB-001 sobre la expresión de p-IB y de p-p65 fue detectada por western blot.
Figura 3. Efecto inhibitorio de una realización de la formulación de la invención (SCB-001) sobre la producción de citoquinas en linfocitos T primarios estimulados con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD8.
Figura 4. Efecto activador de una realización de la formulación de la invención (SCB-001) sobre el factor de transcripción PPAR. Representación del número de veces de inducción de la activación de PPARα, tras la incubación células de la línea NIH-3T3 durante 6 h con SCB-001 a las concentraciones indicadas (1/50, 1/40, 1/30, 1/20) y en comparación con la actividad basal en células sin estimular (-).
Figura 5. Efecto antioxidante de una realización de la formulación de la invención (SCB-001) en queratinocitos HaCaT sometidos a estrés oxidativo con Tert-butil-hidroquinona (TBHQ). Representación del número de veces de inducción de la actividad antioxidante, mediante la medición de la producción de ROS tras 3 h de incubación de los queratinocitos con SCB-001 a las dosis indicadas (1/50, 1/40, 1/30, 1/20).
Figura 6. Efecto de una realización de la formulación de la invención (SCB-001) sobre la resistencia eléctrica trans-epitelial (TEER) en queratinocitos. Las células HaCaT fueron incubadas con SCB-001 a 1h, 24h o 72h a las concentraciones 1/50, 1/40 y 1/30, tras lo cual se añadió 10 mM de caprato sódico (C10) (B) y se midió la TEER (/cm2) en los 30 minutos posteriores.
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Ejemplo 4. Efecto de la combinación SCB-001 sobre la activación de PPAR.
La expresión PPAR se encuentra reducida en la piel de pacientes con AD. En modelos murinos de AD se ha observado que los activadores de PPAR han demostrado un importante efecto terapéutico (Staumont-Salle D et al. 2008; Hatano Y et al. 2010). Con el objetivo de comprobar si la formulación SCB-001 era capaz de inducir la activación de PPAR, se utilizó un modelo de trans-activación específico.
Para determinar los efectos de la formulación SCB-001 en la actividad transcripcional de PPAR, células de la línea NIH-3T3 (1x105 células/mL) fueron co-transfectadas de forma transitoria con los plásmidos GAL4-PPAR (10 ng/ml) y GAL4-luc (2 ng/ml) usando Roti©-Fect (Carl Roth, Alemania) y siguiendo las instrucciones del fabricante. Pasadas 24 h de la transfección, las células fueron tratadas durante 6 h con la formulación SCB-001 a las concentraciones de 1/50, 1/40, 1/30 y 1/20. Las células se lavaron dos veces con PBS y se lisaron con 100 µl de solución de lisis (25 mM Tris-phosphato pH 7.8, 8 mM MgCl2, 1 mM DTT, 1% Triton X-100, y 7% glicerol) durante 15 minutos. Tras el lisado, las células fueron centrifugadas a 13.000 rpm y los sobrenadantes recogidos y usados para determinar la actividad luciferasa como indicador de la activación de PPAR. Para ello, los lisados (75 µl) se mezclaron con 50 µl de luciferina (Promega, Madison, WI, EEUU) y la reacción enzimática fue medida en un Autolumat LB 9501 (Berthold Technologies, Alemania) durante 30 segundos. La activación específica se expresa en número de veces de inducción sobre el control (células no tratadas). Los resultados representan la media y desviación estándar de al menos tres experimentos independientes.
En la Figura 4 se observa cómo el compuesto SCB-001 es capaz de inducir la activación del factor PPAR a diferentes concentraciones. Esto indica que SCB-001 puede favorecer la diferenciación de queratinocitos y restaurar la barrera epidérmica, en la prevención y/o el tratamiento de la DA y de la piel atópica.
Ejemplo 5. Actividad antioxidante de la combinación SCB-001.
Es conocido que en pacientes de DA son más propensos a los daños causados por especies reactivas del oxígeno (ROS) u oxidantes, que los sujetos sin atopia. Además, los pacientes que sufren de DA presentan una disminución de antioxidantes, tanto enzimáticos como no enzimáticos (Sivaranjani N et al. 2013). Así, el uso de antioxidantes por vía tópica puede tener un efecto beneficioso en el tratamiento y/o prevención de los brotes en DA.
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Para comprobar si la formulación de la invención afecta a la producción intracelular de especies reactivas de oxígeno (ROS), ésta fue medida usando el reactivo 2’7’-diclorofluoresceín-acetato (H2DCF-DA; Molecular Probes). Las células HaCaT fueron sembradas en placas de 96-pocillos (de paredes negras) a una densidad de 1x105 células/pocillo e incubadas durante 24 h. Pasado este tiempo las células se pre-incubaron con la formulación SCB-001 a las concentraciones 1/50, 1/40, 1/30 y 1/20 durante 30 minutos y a continuación fueron sometidas a estrés oxidativo con 200 M de ter-butil hidroperóxido (TBHQ) durante 3 horas. La N-Acetil-Cisteína (NAC) 15 mM fue utilizada como control positivo antioxidante. Tras el tratamiento, las células fueron lavadas con PBS e incubadas con 1 M de H2DCF-DA durante 20 minutos a 37ºC. A continuación, las células fueron lavadas con PBS, incubadas en 100 µl/pocillo del mismo tampón y se midió la fluorescencia emitida a 535 nm por las células excitadas a 450 nm usando un lector de placas TECAN GENios Pro (Tecan Group Ltd, Suiza).
En la Figura 5 se muestra que la combinación de ingredientes SCB-001 tiene efecto antioxidante en un modelo celular de queratinocitos, lo que indica que este compuesto puede usarse para combatir el daño oxidativo que aparece en la DA y en la piel atópica.
Ejemplo 6. Efecto de la combinación SCB-001 sobre la resistencia eléctrica transepitelial (TEER) en queratinocitos.
La disrupción de la barrera epidérmica es característica de la DA dando como resultado a una secuencia de eventos que incluyen una alta tasa de pérdida de agua transdérmica, una menor capacidad de retención de la misma en la epidermis y una disminución en la cantidad de lípidos y ceramidas intraepidérmicas, ocasionando de esta manera una piel seca y pruriginosa.
Células HaCaT fueron sembradas a la densidad de 75x102 en insertos de placas de 24 pocillos cuyo diámetro es de 6,5 mm y el área de membrana 0,3 cm2. Las células fueron cultivadas en DMEM suplementado con 10% FCS (suero fetal de ternera), L-glutamina 2 mM, antibioticos y CaCl2 2 mM en presencia y en ausencia de la combinación SCB-001, a las concentraciones de 1/50, 1/40 y 1/30. La medición de resistencia trans-epitelial (TEER), obtenida como /cm2, se realizó con un aparato Millicell® ERS-2 a distintos tiempos (1 hora, 24 horas y 72 horas) en presencia (B) o ausencia (A) de 10 mM de caprato sódico (C10) (Sigma-Aldrich C4151) añadido 30 minutos antes de la lectura. La medición se realizó en HBSS sin rojo fenol (Sigma-Aldrich H6648), añadiendo 600 µl HBSS en la zona basolateral
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