ES2609259T3 - Utilización tópica de un extracto peptídico de soja y/o trigo como agente fotoprotector - Google Patents
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Abstract
Composición cosmética y/o dermatológica tópica que comprende: - extractos peptídicos de soja y trigo que representan de 0,01 a 20 % del peso total de la composición, - creatina, no conteniendo dicha composición el tripéptido sintético GHK (glicidil-histidil-lisina).
Description
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DESCRIPCION
Utilizacion topica de un extracto peptidico de soja y/o trigo como agente fotoprotector
La presente invencion se refiere a una composicion cosmetica y/o dermatologica destinada a prevenir la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas por las radiaciones lummicas y, de forma mas general, a actuar como agente fotoprotector.
La composicion de la presente invencion puede pertenecer a la gama de productos protectores solares, pero tambien a la gama de productos de cuidado, como por ejemplo, las leches corporales o las cremas de dfa, barras de labios, asf como a la gama de productos de maquillaje o de tratamiento capilar.
Efectivamente, para el conjunto de esta gama de productos, se busca luchar contra los efectos perjudiciales de los rayos UVA y UVB en las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas.
Efectivamente, aunque las radiaciones lummicas con una longitud de onda comprendida entre 290 nm y 400 nm, que corresponden a los UVA (de longitud de onda comprendida entre 320 nm y 400 nm) y a los UVB (de longitud de onda comprendida entre 290 nm y 320 nm), son necesarias para el buen funcionamiento del organismo humano, tambien producen numerosos efectos negativos. De este modo, los rayos UVB ocasionan especialmente eritemas, quemaduras cutaneas, mientras que los UVA son, en principio, responsables de la formacion de radicales libres que a su vez pueden inducir una alteracion cutanea prolongada. Por tanto, estas radiaciones UV deben filtrarse.
Numerosas composiciones cosmeticas tales como, por ejemplo, productos de proteccion solar o incluso cremas de dfa garantizan la fotoproteccion (UVA y/o UVB) de la piel se han propuesto en la actualidad. Estas composiciones se presentan con bastante frecuencia en forma de una emulsion que contiene, a concentraciones diversas, uno o varios filtros solares. Existen dos tipos de filtros solares: por una parte, los filtros organicos clasicos lipofilos y/o hidrofilos que pueden absorber selectivamente las radiaciones UV nocivas. Se pueden introducir con cierta facilidad en las emulsiones por dispersion bien en la fase oleosa, bien en la fase acuosa de la emulsion (segun su caracter lipofilo o hidrofilo). El tipo de filtros y su cantidad se seleccionan dependiendo del mdice de proteccion deseado.
Por otra parte, existen los filtros minerales, que reflejan la luz, utilizados ademas o en lugar de los filtros organicos. En particular, se trata de oxidos metalicos tales como, por ejemplo, dioxido de titanio y oxido de cinc, que transmiten excelentes propiedades protectoras contra los UV y una buena tolerancia cutanea.
Sin embargo, las dos categonas de filtros solares tienen algunos inconvenientes. Los filtros organicos se deben utilizar en grandes cantidades para obtener altos indices de proteccion y pueden ocasionar, por tanto, problemas de tolerancia; ademas, se sospecha que tienen posibles actividades hormonales estrogenicas, lo que podna ser biologicamente peligrosos, en caso de confirmarse estos riesgos, especialmente entre chicos jovenes. Los filtros minerales, por su parte, tienen problemas de formulacion cosmetica. Efectivamente, los productos de proteccion solar que los incluyen se suelen presentar en forma de emulsiones mas o menos espesas, difmiles de aplicar y de distribuir, pesadas y pulverulentas. Ademas, a estos defectos se anade, con determinados filtros minerales tales como dioxido de titanio, un efecto de blanqueamiento durante su distribucion sobre la piel.
Los documentos US 5.571.503, FR 2775 185, WO 03/068184, WO 00/64472, WO 02/17862, EP 1.618.871, WO 02/45666, US 6.365.656 y FR 2758721 describen composiciones complejas que contienen un extracto de trigo y/o soja, y que tienen opcionalmente una actividad protectora con respecto a los UV, sin que esta se pueda atribuir a dicho extracto.
El documento EP 1.815.843 describe el efecto beneficioso sobre la smtesis de colageno de la asociacion de dos extractos peptfdicos de soja y un extracto peptfdico de trigo. Se suscita la posibilidad de anadirles otro compuesto que estimula la smtesis de colageno seleccionado entre una amplia lista en la que figura la creatinina, pero tambien el tripeptido Gly-His-Lys. Este documento ni describe, y ni siquiera sugiere, ningun efecto sobre la proteccion con respecto a los UvA/uVb vinculado a dichas asociaciones.
El objetivo de la presente invencion es, por tanto, superar estos inconvenientes y proponer una composicion fotoprotectora destinada a prevenir la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas provocada por las radiaciones lummicas de tipo UVA y UVB que no incluyen, o incluyen poca cantidad, de filtros solares.
El solicitante ha comprobado que, de forma completamente sorprendente, es posible luchar eficazmente contra los efectos nocivos simultaneos de los UVA y los UVB, actuando biologicamente en las celulas de la piel y ya no mediante un filtro o una pantalla anti-UVA o anti-UVB. Ventajosamente, esta accion biologica se puede aplicar mediante sustancias biomimeticas, es decir, sustancias que tienen la estructura y/o que ejercen una funcion y/o actividad biomecanica, bioffsica, o biologica de cualquier componente cutaneo, siendo el objetivo adaptar la respuesta de las celulas de la piel a los efectos de la radiacion UVA y UVB.
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En otras palabras, el solicitante ha investigado la sustitucion de todo o parte de los filtros solares conocidos y designados a continuacion como "filtro solar externo", por componentes que garanticen una accion biologica en las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas, permitiendo proteger dichas celulas contra los efectos perjudiciales de los UVA y UVB. Esta accion biologica, que tambien se designa igualmente a continuacion como "proteccion interna", puede consistir en:
- una proteccion del ADN,
- una disminucion de la inmunosupresion,
- una accion antirradicalaria, etc...
Este nuevo enfoque ha permitido al solicitante, en un primer momento, descubrir que cuando los extractos peptfdicos de soja o trigo se aplican in vivo sobre la piel, permiten proteger bioqmmicamente a las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas contra los efectos perjudiciales de los UVA y UVB.
De este modo, la presente solicitud describe el uso topico de un extracto peptfdico de soja y/o de trigo como fotoprotector y, mas exactamente, como un agente destinado a luchar contra la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas provocada por los UVA y los UVB, ventajosamente en este segundo caso, porque dichos extractos se asocian a otros componentes garantizando la "proteccion interna" de las celulas y/o de los "filtros solares externos". Los extractos peptfdicos de la invencion no actuan, por tanto, como filtro o pantalla anti-UVA o anti-UVB en el sentido de que las celulas siguen absorbiendo dichos rayos lummicos; por el contrario, los extractos peptfdicos de la invencion intervienen biologicamente en las celulas, limitando los efectos perjudiciales de la radiacion, pero beneficiandose a la vez de sus efectos positivos.
En una realizacion particular, los extractos peptfdicos de soja y de trigo se utilizan conjuntamente, por ejemplo, en una relacion en peso respectivamente comprendida entre 80/20 y 20/80, ventajosamente comprendida entre 70/30 y 30/70, preferentemente igual a 60/40.
En la practica, los extractos peptfdicos proceden de granos de soja y trigo. Una hidrolisis enzimatica de dichos granos mediante peptidasas permite recuperar los peptidos, que tienen un tamano medio de 700 Daltons (cuando se alcanza dicho tamano promedio de los peptidos, las peptidasas se desactivan).
Preferentemente, el extracto peptfdico de soja es el extracto identificado con el numero CAS 68607-88-5; analogamente, el extracto peptfdico de trigo es el extracto identificado con el numero CAS 70084-87-6.
En la practica, los extractos peptfdicos anteriormente descritos se utilizan en una composicion cosmetica que comprende un medio fisiologicamente aceptable.
En la presente solicitud, por "medio fisiologicamente aceptable", se entiende un medio compatible con la piel, labios, cabello y mucosas.
La invencion tiene por objeto, por tanto, una composicion cosmetica y/o dermatologica topica que comprende:
- extractos peptfdicos de soja y trigo que representan de 0,01 a 20 % del peso total de la composicion,
- creatina,
no conteniendo dicha composicion el tripeptido sintetico GHK (glicidil-histidil-lisina).
Ventajosamente, los extractos peptfdicos de soja y de trigo representan de 0,1 a 10%, preferentemente de 0,2 a 0,7 % del peso total de la composicion, muy preferentemente del 0,4 %.
Ventajosamente, la creatina representa entre 0,1 y 2 %, preferentemente el 0,5 % en peso de la composicion total.
De forma caractenstica, la composicion no contiene el tripeptido sintetico GHK (glicidil-histidil-lisina; INCl: Tripeptido- 1).
Preferentemente, la relacion ponderal de extracto peptfdico de soja/extracto peptfdico de trigo esta comprendida entre 80/20 y 20/80, ventajosamente comprendida entre 70/30 y 30/70, preferentemente igual a 60/40.
Como ya se ha mencionado, el solicitante ha comprobado que los extractos peptfdicos de soja o de trigo, solos o mezclados, permiten luchar contra la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas provocada por los UVA y UVB, en mayor medida cuando dichos extractos estan asociados a filtros solares externos y/o a otros componentes garantizando la "proteccion interna" de las celulas.
El solicitante ha demostrado de esta forma que algunos componentes que ejercen una actividad biologica in vivo sobre las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas sometidos a irradiacion UVA y UVB, actuan de forma sinergica con filtros solares organicos o minerales que permitan garantizar, por una parte, "una proteccion interna", y
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por otra "una proteccion solar externa" reflejando o absorbiendo la luz. De esto resulta que la cantidad de filtros utilizada se puede disminuir, rebajando de hecho los riesgos anteriormente citados.
En otras palabras, en una realizacion particular, la composicion de la invencion comprende ademas un filtro solar seleccionado entre filtros minerales, filtros organicos o sus mezclas.
Todos los filtros minerales conocidos por sf mismos por su actividad fotoprotectora externa mediante reflexion de la luz son de utilidad en la presente invencion. En una realizacion de la invencion, se trata de oxidos metalicos, que se puede seleccionar especialmente entre oxidos de titanio (dioxido de titanio amorfo o cristalizado en forma de rutilo y/o anatasa), oxidos de cinc, oxidos de hierro, oxidos de circonio, oxidos de cerio o sus mezclas.
Estos oxidos metalicos pueden estar en forma de partfculas con un tamano micrometrico o nanometrico (nanopigmentos). En una realizacion particular, se utilizan nanopigmentos, y su tamano promedio esta comprendido, por ejemplo, entre 5 nm y 100 nm. Estos filtros minerales tambien pueden estar revestidos.
En una realizacion particular de la invencion, se utilizan nanooxidos de titanio revestidos hidrofobos que pueden estar en forma de carga solida o en forma de dispersion en un medio adecuado para su revestimiento.
Analogamente todos los filtros organicos de UVA et UVB habitualmente utilizados en el campo cosmetico, y conocidos por su actividad fotoprotectora externa mediante absorcion de la luz, son de utilidad en la presente invencion.
Como filtros UVA, se pueden citar, por ejemplo, los derivados de dibenzoilmetano, los derivados de benzofenona, los antranilatos, los derivados de triazina, y las mezclas de dichos filtros.
Como filtros UVB, se pueden citar, por ejemplo, los derivados de acidos salidlico, los derivados de acido cinamico, los derivados de p,p'-difenilacrilato lfquido, los derivados del acido p-aminobenzoico, el 4-metil bencilideno alcanfor, el acido 2-fenilbencimidazol-5-sulfonico, los derivados de 1,3,5-triazina, y las mezclas de dichos filtros.
Segun el resultado buscado, se puede usar una mezcla de filtros UVA y UVB.
La composicion de la invencion puede incluir de 0,5 a 50 % en peso de filtro solar con respecto al peso total de la composicion, aunque el objetivo sea que contenga una cantidad de filtro menor, de forma que se disminuyan los efectos secundarios anteriormente citados.
En una realizacion particular, el contenido de filtro solar esta comprendido entre 1 y 20 %.
En otra realizacion, comprende entre 2 % y 15 % con respecto al peso total de la composicion, ventajosamente entre 7 y 10 %.
El solicitante ha demostrado especialmente que la aplicacion de oxido de titanio, a razon de 2 a 5 %, o de octilsalicilato de butilo, a razon de 7 a 10% en peso de la composicion total, proporciona buenos resultados en terminos de SPF (factor de proteccion solar, mdice que permite apreciar la eficacia de proteccion de un producto solar, cuanto mayor es el SPF mejor sera la proteccion).
De acuerdo con otra caractenstica de la invencion, la composicion cosmetica y/o dermatologica contiene al menos uno o todos los componentes siguientes que ejercen una actividad biologica in vivo sobre las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas sometidos a radiacion UVA y UVB en presencia o ausencia de filtro solar, respectivamente:
- un agente antirradicalario que conserva las estructuras celulares, tal como, por ejemplo, la vitamina E y/o sus derivados liposolubles o hidrosolubles, especialmente sus isomeros tocotrienol y/o tocoferol, que representa por ejemplo entre 0,001 y 10 %, ventajosamente entre 0,02 y 2 %, preferentemente de aproximadamente un 0,04 % por ciento en peso de la composicion total,
- un agente que limite la inmunosupresion, tal como, por ejemplo, la vitamina PP, que representa por ejemplo entre 0,001 y 1 %, ventajosamente de 0,01 % a 0,3 % en peso de la composicion total,
- un agente protector de la protema p53, tal como, por ejemplo, el galato de epigalocatequina (EGCG), que representa por ejemplo entre 0,001 y 0,1 %, ventajosamente de 0,005 % a 0,05 % en peso de la composicion total,
- un agente que limite la accion de los iones hierro, implicados en la formacion de los radicales libres, tales como por ejemplo EDTA, que representa por ejemplo entre 0,01 y 1 %, ventajosamente entre 0,2 % y 0,5 % en peso de la composicion total.
La composicion de la invencion tambien puede incluir adyuvantes tales como los habitualmente utilizados en el campo de la cosmetica, tales como principios activos, conservantes, antioxidantes, agentes complejantes, disolventes, perfumes, cargas, bactericidas, electrolitos, absorbentes de olores, colorantes e incluso vesfculas
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lipfdicas. La seleccion de estos adyuvantes, as^ como sus concentraciones, deben determinarse de tal forma que no modifiquen las propiedades y las ventajas buscadas para la composicion de la presente invencion.
La composicion de la invencion esta destinada a una aplicacion topica y mas especialmente a una aplicacion sobre la piel, labios, cabello y/o mucosas.
La composicion de la invencion se puede presentar en cualquiera de las formas farmaceuticas habitualmente utilizadas en los campos cosmetico y dermatologico, como por ejemplo, aunque no de forma limitativa, en forma de una solucion acuosa opcionalmente gelificada, una dispersion de tipo locion, que puede ser bifasica, de una emulsion (O/W) o inversamente (W/O), mas o menos fluida, o de una emulsion multiple como, por ejemplo, una emulsion triple (W/O/W o O/W/O), o incluso en forma de una dispersion vesicular de tipo ionico (liposomas) y/o no ionico. Estas composiciones se preparan de acuerdo con los metodos habituales conocidos por el experto en la materia.
La invencion tiene tambien por objeto un procedimiento de tratamiento cosmetico para evitar la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas provocada por los UVA y UVB, caracterizado por que consiste en aplicar sobre la piel, labios, cabello y/o mucosas las composiciones anteriormente descritas.
La invencion tiene tambien por objeto una composicion de acuerdo con la invencion, especialmente una composicion topica que comprende:
- extractos peptidicos de soja y trigo,
- creatina,
no conteniendo dicha composicion el tripeptido sintetico GHK (glicidil-histidil-lisina), para su uso en el tratamiento de la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas provocada por los UVA y los UVB.
Ventajosamente, una composicion de acuerdo con la invencion para este uso es tal como se describe anteriormente.
La invencion y sus ventajas demostradas se evidencian en los ejemplos siguientes.
Eficacia fotoprotectora
Ejemplo 1: Eficacia fotoprotectora de una mezcla de extractos peptidicos de soja y trigo utilizados solos, con respecto a los UVA
El objetivo de este primer ensayo es demostrar que los extractos peptidicos de soja y trigo descritos en la presente solicitud permiten por sf mismos luchar contra los efectos nocivos de la radiacion UVA actuando sobre el genoma de las celulas. Los ensayos se realizan in vitro.
Extracto denominado EV
Los extractos peptidicos se obtienen mediante hidrolisis enzimatica de granos de soja o de trigo mediante peptidasas, donde los peptidos obtenidos tienen un tamano medio de 700 Daltons. Los peptidos de soja y de trigo se solubilizan al 10 % en una relacion 60/40, dicha disolucion se diluye a continuacion y se ensaya a una concentracion 1 %. Los extractos utilizados corresponden a los numeros CAS 68607-88-5 (extracto peptidico de soja) y CAS 70084-87 (extracto peptidico de trigo).
La eficacia fotoprotectora de la mezcla de extractos de acuerdo con la invencion se ha analizado segun el plan experimental descrito a continuacion.
Se analizo la capacidad de fotorreaccion interna del extracto vegetal EV por su accion sobre el genoma contra los rayos UVA a 365 nm. La evaluacion se realizo mediante el ensayo de cometas sobre primocultivos de melanocitos humanos normales (metodo descrito en la patente FR 2774395 y en la publicacion -Evaluation of Sunscreen protection in human melanocytes exposed to UVA or UVB irradiation using the alkaline cornet assay; Photochemistry and Photobiology, vol 74, n.° 3, P417 423- (2001)).
Cultivo de melanocitos
Los cultivos de melanocitos humanos normales (MHN) se realizan a partir de prepucios de ninos y recien nacidos sometidos a fimosis. Los melanocitos obtenidos a partir de fragmentos de piel se introdujeron en el medio MCDB 153 (Sigma St Louis, MO, EE.UU.) al que se habfan anadido 30 pg/ml de extracto de pituitaria bovina (BPE) (Life Technologies, Paisley, Inglaterra), 2% de suero de feto bovino (SVF) (Dominique Dutscher, Brumath, Francia), forbol-12-miristato-13-acetato 16 nM (Sigma), 5 pg/ml de insulina y de hidrocortisona 1,1 pM (Sigma). Los cultivos se mantuvieron en una incubadora a 37°C y en una atmosfera que contema un 5 % de CO2. Los cultivos puros de melanocitos se obtuvieron al cabo de 2 a 3 semanas.
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Preparacion de los portaobjetos e irradiacion de las celulas
Despues de un tratamiento con una mezcla de tripsina / EDTA (0,05 % / 0,02 %) durante 2 a 3 minutos, las celulas se recuperaron mediante centrifugacion y se introdujeron en tampon PBS sin Ca2+ ni Mg2+ (Sigma). Despues de una segunda centrifugacion, las celulas (cuyo numero esta comprendido entre 4,5 x 104 y 5,0 x 104) se pusieron en suspension en 0,5 % de agarosa de bajo punto de fusion, LMP (Sigma). La mezcla se deposito directamente sobre portaobjetos de microscopio revestidos de una precapa de agarosa (1,6%) seca durante la noche a temperatura ambiente y recientemente prerrevestida con una segunda capa de agarosa (0,8 %). Finalmente, se deposito una tercera capa de agarosa LMP para atrapar a los queratinocitos.
La radiacion UVA se genero mediante un aparato de irradiacion UV Bio-Sun (Vilbert Lourmat, Marne la Vallee). Este aparato esta provisto de lamparas monocromaticas que emiten a longitudes de onda de 365 nm. Las lamparas suministran una energfa calculada mediante un radiometro de tipo RMW-365/312 de 4,0 mW/cm2 para los UVA: las energfas suministradas son, por tanto, de 0,8 J/cm2. Las celulas se irradiaron con los UVA sobre un bano de hielo, y el ensayo de cometas se realizo inmediatamente despues de la exposicion.
Ensayo de cometas (tecnica de los portaobjetos secos)
El protocolo de ensayo de los cometas es el de De Meo y Coll (Meo M, Laget M, Castegnaro M, Dumenil G.; Genotoxic activity of potassium permanganate in acidic solutions; Mutation Res. 1991; 260; 295-306) incorporando la tecnica de los "portaobjetos secos" (Klaude M, Ericksson S, Nygren J, Annstrom G. The cornet assay: mechanism and technical consideration. Mutation Res. 1996; 363; 89-96). Los portaobjetos se introdujeron, despues de la irradiacion, en un bano de lisis que contema NaCl 2,5 M, Na2EDTA 100 mM, Tris-HCl 10 mM pH 10, 1 % de sarcosinato de sodio, 1 % de Triton X-100 y 10 % de DMSO. La lisis celular se realiza a 4 °C durante 60 min seguida por la desnaturalizacion del ADN a temperatura ambiente durante 20 minutos en una solucion fuertemente alcalina que comprende Na2EDTA 1 mM y NaoH 300 mM a un pH superior a 13,0. Despues de electroforesis (25 V, 300 mA) durante 20 min, los portaobjetos se neutralizaron con el tampon Tris-HCl (0,4 M; pH 7,4) y se deshidrataron en etanol o metanol absoluto.
Observacion al microscopio y analisis de imagenes
Los portaobjetos se tineron mediante una solucion de bromuro de etidio, y se observaron con un microscopio de fluorescencia BH2-RFL (Olympus, Japon) provisto de un filtro dicroico 20BG-W (excitacion: 515-560 nm; emision: 590 nm) y un objetivo Apo D-Plan 20x. El analisis de imagenes se realiza con una camara CCD monocromatica de alta sensibilidad (Cohu 4912-5000) acoplada a una tarjeta de adquisicion Matrox IP-8. El conjunto esta controlado por el programa informatico Fenestra Komet (Kinetic Imaging, Liverpool, RU, version 3.1).
Se analizaron un total de 100 celulas por muestra (50 celulas por porta). El parametro utilizado fue el "Olive Tail Moment" (OTM, que se ha definido como el producto del porcentaje de ADN en la cola del cometa por la longitud de esta expresada en pm). En cada conjunto de experimentos se ha incluido un control negativo (celulas no irradiadas) y un control positivo (celulas irradiadas sin filtro).
La fotoproteccion interna se midio despues de un tratamiento de 120 min a 37°C. La dosis de irradiacion fue 0,8 J/cm2 para la radiacion UVA (365 nm). El ensayo de cometas se realizo inmediatamente despues de la irradiacion. Los controles negativos inclrnan melanocitos no tratados y no irradiados, asf como melanocitos tratados con las dos mezclas y no irradiados. El parametro medido era el coeficiente de proteccion genomica para el UVA (CPGuva).
Los resultados se resumen en la Tabla 1.
Tabla 1: Proteccion interna del extracto vegetal EV, 1 %
- Portaobjetos n. °
- Condicion Pro ± DE Med OTMx2±DE CPGuva
- 1-2
- NI 1,08±0,10 0,89 2,15±0,15 100 %
- 3-4
- UVA 8,05±0,54 6,58 8,71±0,42 0 %
- 5-6
- EV/NI 1,76±0,24 1,16 2,09±0,01 -
- 7-8
- EV/UVA 5,86±0,38 4,95 7,49±0,26 17,7 %*
- NI: celulas no irradiadas.
- UVA: celulas irradiadas con radiacion UVA (0,8 J/cm2).
- EV/NI: celulas tratadas directamente en el medio con el extracto vegetal (1 %) durante dos horas a 37°C.
- EV/UVA: celulas tratadas directamente en el medio con el extracto vegetal (1 %) durante dos horas a 37°C e irradiadas a continuacion con radiacion UVA (0,8 J/cm2).
- Probabilidad con:
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40
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50
- NS: no significativa; *: P < 0,05; **: P < 0,01; ***: P < 0,001
- Pro: promedio de OTM
- Mediana OTM: valor de la mediana del Olive Tail Moment
- OTM%2: parametro calculado por regresion de las distribuciones de OTM segun una funcion %2 (vease: Bauer et Coll (Bauer E, Recknagel RD, Fiedler U, Wollweber L, Bock C, Greulich KO; the distribution of the tail moments in single cell electrophoresis (cornet assay) obeys a chi-square (%2) not a gaussian distribution; Mutation Res. 1998; 398: 101-110)).
- CPGuva: coeficiente de proteccion genomica para el UVA
Los coeficientes de proteccion genomica (CPGuva) se calculan con la formula:
O O OO OO
Para % OTMe: % OTM de la muestra; % OTMce: % OTM del control no irradiado de la muestra; % OTMc-: % OTM del control no irradiado; %2 OTMc+: %2 OTM del control irradiado.
Cuanto mayor es el valor de CGP, mayor es la proteccion. Por el contrario, se cumple la inversa para el OTM. Conclusion:
El CPGuva de EV es del 17,7 %, lo que demuestra claramente que los extractos solos tienen una actividad protectora del genoma con respecto a los UVA.
Se debe resaltar que el ensayo de cometas se realizo con respecto a los UVB, pero no fue conclusivo. Sin embargo, no es que el extracto EV este completamente desprovisto de eficacia con respecto a los UVB; por el contrario, se demuestra en el ejemplo 4 in vivo que el extracto Ev tiene actividad con respecto a los UVB, probablemente por el sesgo de otra via distinta a la proteccion del genoma.
Ejemplo 2: Eficacia fotoprotectora de una mezcla de extractos peptidicos de soja y trigo utilizados junto con filtros, con respecto a los UVA
El objetivo de este ensayo es demostrar que el extracto EV del ejemplo 1 conserva su accion sobre el genoma con respecto a los UVA cuando esta asociado a los filtros UVA y UVB de una crema solar.
La eficacia fotoprotectora, segun el ensayo de cometas de la mezcla de extractos de acuerdo con la invencion se midio segun el mismo plan experimental que el del ejemplo 1.
La capacidad de fotoproteccion interna con respecto a los UVA a 365 nm del extracto vegetal EV se midio solo y mezclado con un producto solar de SPF 15 que contiene una proporcion importante de filtros UVA. (Crema Sun Trainer LST, ref: 03E.24EG31.1)
Los resultados se resumen en la Tabla 2.
Tabla 2: Proteccion interna del extracto vegetal EV, 1 % y fotoproteccion del producto solar LST contra la irradiacion UVA.
- Portaobjetos n. °
- Condicion Pro ± DE Med otm%2±de CPGuva
- 1-2
- Nl 1,08±0,10 0,89 2,15±0,15 100 %
- 3-4
- UVA 8,05±0,54 6,58 8,71±0,42 0 %
- 5-6
- EV/NI 1,76±0,24 1,16 2,09±0,01 -
- 7-8
- EV/UVA 5,86±0,38 4,95 7,49±0,26 17,7 %*
- 9-10
- LST/UVA 3,07±0,25 2,49 4,40±0,12 65,7 %***
- 11-12
- LST/EV/UVA 2,73±0,24 2,04 3,36±0,12 80,6 %***
- LST/UVA: 10 pl de crema Sun Trainer SPF 15 depositada sobre un porta de cuarzo (5 cm x 5 cm) despues, celulas irradiadas con radiacion UVA (1,2 J/cm2).
- LST/EV/UVA: celulas tratadas directamente en el medio con el extracto vegetal (1 %) durante 2 horas a 37°C despues irradiadas con UVA (0,8 J/cm2) a traves de un porta de cuarzo (5 cm x 5 cm) sobre el que se ha depositado un volumen de 10 pl de la crema Sun Trainer.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Conclusion:
El CPGuva del EV es del 17,7%. El CPGuva de la fotoproteccion externa del LST es del 65,7%. La suma de la fotoproteccion interna del EV (1 %) y de la fotoproteccion externa del LST es del 80,6 %. Estos resultados muestran, por tanto, que el efecto fotoprotector de los extractos se mantiene incluso en presencia de los filtros UVA y UVB presentes en la crema Sun Trainer.
Ejemplo 3: determinacion del SPF in vitro e in vivo de la mezcla de extractos EV del ejemplo 1 diluida al 4 % en lugar del 1 %
Se realizaron ensayos para demostrar la eficacia de los extractos peptidicos de soja y trigo descritos en la presente invencion cuando se utilizan in vivo: determinacion del SPF in vitro (realizado de acuerdo con el metodo descrito en la publicacion de la revista Cosmetics and Toiletries, vol 118, N.° 10/Octubre de 2003: Determination of the in vitro SPF) y determinacion del SPF in vivo (realizado de acuerdo con el metodo COLIPA (The European Cosmetic Toiletry and Perfumery Association), CTFA (Cosmetic, Toiletry & Fragrance Association of South Africa), JCIA (Japan Cosmetic Industry association): International Sun protection factor (SPF) Test method. febrero de 2003), con un extracto vegetal al 4 %.
La formula sometida a ensayo (Base + EV al 4 %) es la siguiente, y los resultados obtenidos se representan en la tabla 3.
Carbonato de dicaprilo (Cetiol CC) 17,00 %
acrilato Na/copolfmero de acriloilo Na-taurato de dimetilo isodecano polisorbato (Simulgel EG) 3,00 %
Agua 2,40 %
Peptido de trigo de acuerdo con la invencion 0,15 %
Peptidos de soja de acuerdo con la invencion 0,25 %
Agua, en cantidad suficiente 100%
Conservantes (Phenonip) 0,45 %
Tabla 3
- Condicion
- SPF in vitro SPF in vivo
- Base + EV al 4 %
- 1,0 16,0
El SPF o factor de proteccion solar es un mdice que permite apreciar la eficacia de proteccion de un producto solar. Cuanto mayor es el SPF mejor sera la proteccion.
El valor 1 para el SPF in vitro demuestra que el extracto no tiene ninguna actividad anti-UVA o anti-UVB sobre la piel in vitro. En cambio, se obtiene un efecto biologico del extracto vegetal in vivo que se caracteriza por un SPF de 16. Por tanto, es evidente la existencia de un efecto del extracto con respecto a las celulas de la piel in vivo que se activan en respuesta a la radiacion UVA/UVB.
Ejemplo 4 Proteccion solar EV + filtro
Se realizaron ensayos para demostrar la eficacia de los extractos EV del ejemplo 1 diluidos al 1 % o 4 %: determinacion del SPF in vitro (realizado de acuerdo con el metodo descrito en la publicacion de la revista Cosmetics and Toiletries, vol 118, N.° 10/octubre de 2003: Determination of the in vitro SPF) y determinacion del SPF in vivo de acuerdo con el metodo anteriormente citado.
La tabla 4 ilustra los resultados obtenidos para las formulaciones que comprenden en extracto peptfdico vegetal EV y un oxido mineral
Tabla 4.
- Condicion Base + EV al 4 %
- SPF in vitro SPF in vivo Mejora proporcionada por el extracto vegetal
- Oxido de titanio solo 3 %
- 6,1 6,4
- EV al 4 %
- 1,0 16,0
- Oxido de titanio 3 % + extracto EV al 1 %
- 6,4 10,2 59 %
- Oxido de titanio 3 % + extracto EV al 4 %
- 5,8 25,5 298 %
Los resultados obtenidos muestran que existe una mejora sinergica de la proteccion solar cuando el extracto vegetal se asocia con el oxido mineral (el SPF de cada uno de los elementos tomados independientemente es,
respectivamente, de 6.4 y 16.0, mientras que el SPF obtenido con el conjunto es de 25,5, lo que supera la suma de los SPF de ambos elementos, es decir 22,4).
Por otra parte, sabiendo que un SPF de 6 corresponde a aproximadamente un 100 % de absorcion de los UVA si no 5 hay absorcion UVB, y que un SPF superior caracteriza obligatoriamente una filtracion complementaria de los UVB, la tabla 3 muestra que el extracto de la invencion tiene tambien un efecto sobre los UVB cuando se aplica in vivo.
Ejemplo 5: Composicion de acuerdo con la invencion a base de componentes de accion biologica (proteccion interna) y un filtro (proteccion externa)
10
La composicion sometida a ensayo en este ejemplo comprende el nucleo de principios activos siguientes en % en peso:
- Octilsalicilato de butilo (BHB)
- 8 %
- Peptido de trigo
- 0,075 %
- Peptidos de soja
- 0,125 %
- Tocotrienol (oryza tocotrienol 90)
- 0,3 %
- Creatina
- 0,5 %
- Vit PP
- 0,3 %
- Galato de epigalocatequina
- 0,05 %
- EDTA
- 0,2 %
- Fosfato de alquilo C20-22 y alcoholes C20-22 (Sensanov WR)
- 3,0 %
- Palmitato de etilo hexilo-2-hexilo
- 7,0 %
- Nacol16-98
- 1,0 %
- BHT
- 0,1 %
- Agua
- 70,12
- NaOH
- 0,08 %
- Copolfmero de hidroxietil acrilato/acriloildimetil taurato de sodio y escualano y polisorbato 60 (Simugel NS)
- 3,0 %
- Agua
- Qsp100
15 Se realizaron ensayos para demostrar la eficacia de esta formula: determinacion del SPF in vivo de acuerdo con el mismo metodo que se ha indicado anteriormente.
El SPF de esta formulacion es igual a 9,2 y esto, a pesar de la escasa proporcion del extracto y de filtro. Esto muestra, por tanto, el efecto del conjunto de activos ademas del filtro, sobre las celulas con respecto a los UVA y 20 UVB.
Claims (8)
- 5101520253035REIVINDICACIONES1. Composicion cosmetica y/o dermatologica topica que comprende:- extractos peptfdicos de soja y trigo que representan de 0,01 a 20 % del peso total de la composicion,- creatina,no conteniendo dicha composicion el tripeptido sintetico GHK (glicidil-histidil-lisina).
- 2. Composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizada por que los extractos peptfdicos de soja y de trigo representan de 0,1 a 10 % en peso, preferentemente de 0,2 a 0,7 % del peso total de la composicion.
- 3. Composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, caracterizada por que la creatina representa entre 0,1 y 2 % en peso de la composicion total.
- 4. Composicion de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que la relacion ponderal de extracto peptfdico de soja/extracto peptfdico de trigo esta comprendida entre 80/20 y 20/80, ventajosamente comprendida entre 70/30 y 30/70, siendo preferentemente igual a 60/40.
- 5. Composicion de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que los extractos peptfdicos se obtienen por hidrolisis enzimatica de granos de soja o de trigo mediante peptidasas, donde los peptidos obtenidos tienen un tamano medio de 700 Daltons.
- 6. Composicion de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que la composicion comprende ademas al menos un filtro solar seleccionado entre los filtros minerales, filtros organicos o sus mezclas.
- 7. Composicion topica que comprende:- extractos peptfdicos de soja y trigo,- creatina,no conteniendo dicha composicion el tripeptido sintetico GHK (glicidil-histidil-lisina), para su uso en el tratamiento de la alteracion de las celulas de la piel, labios, cabello y/o mucosas provocada por los UVA y los UVB.
- 8. Composicion para su uso de acuerdo con la reivindicacion 7, caracterizada por que la composicion es tal como se define en las reivindicaciones 1 a 6.
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