ES2603568T3 - Nuevos fragmentos de IL-33 superactivos y sus utilizaciones - Google Patents
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Abstract
Fragmento polipeptídico aislado de la interleucina 33 humana (hIL-33), biológicamente activo, seleccionado de entre los fragmentos que tienen por secuencia los aminoácidos 95 a 270 (SEC ID nº 2), 99 a 270 (SEC ID nº 3) o 109 a 270 (SEC ID nº 4) de la interleucina 33 humana (hIL-33), siendo dichos fragmentos unos productos naturales de escisión de hIL-33 por lo menos por una proteasa de los neutrófilos humanos.
Description
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el músculo, el tejido graso y el tejido mamario (Furth et al., Anal Biochem 1992). Técnicas de microinyección, electroporación, precipitación con fosfato de calcio, formulaciones con la ayuda de nanocápsulas o de liposomas son otras técnicas disponibles. Son particularmente ventajosas unas nanopartículas de polialquilcianoacrilato biodegradables. En el caso de liposomas, la utilización de lípidos catiónicos favorece la encapsulación de ácidos nucleicos que son cargados negativamente, y facilita la fusión con las membranas celulares cargadas negativamente. De manera alternativa, el vector puede estar en forma de un virus recombinante que comprende, insertada en su genoma, una secuencia de ácido nucleico que codifica para dicho o dichos péptido(s). El vector viral se puede seleccionar preferentemente de entre un adenovirus, un retrovirus, en particular un lentivirus, así como un virus adeno-asociado (AAV), un virus del herpes, un citomegalovirus (CMV), un virus de la viruela, etc. De manera ventajosa, el virus recombinante es un virus defectivo.
El término "virus defectivo" designa un virus incapaz de replicarse en una célula diana. Generalmente, el genoma de los virus defectivos está desprovisto de por lo menos las secuencias necesarias para la replicación de dicho virus en la célula infectada. Estas regiones pueden ser o bien eliminadas, o bien convertidas en no funcionales o también sustituidas por otras secuencias y en particular por el ácido nucleico que codifica para el fragmento polipeptídico de interés. Sin embargo, preferentemente, el virus defectivo conserva a pesar de todo las secuencias de su genoma necesarias para la encapsulación de las partículas virales. En la solicitud WO 95/28 494, por ejemplo, se describe una administración direccionada de genes.
En otro aspecto, la presente invención tiene como objetivo la utilización de un fragmento polipeptídico según la invención, eventualmente obtenido mediante uno de los procedimientos de la invención, o el ácido nucleico de la invención, en combinación con otro medicamento, por ejemplo en combinación con un agente quimioterapéutico para el tratamiento del cáncer, asociado a una prótesis vascular (o stent) para el tratamiento por angioplastia de las enfermedades cardiovasculares, o como adyuvante de una vacuna contra un virus, como el virus de la influenza.
En un modo de realización preferido, el fragmento polipeptídico de la invención está combinado con un agente quimioterapéutico comprendido del grupo constituido por: los agentes alquilantes, los antimetabolitos, los alcaloides vegetales, los inhibidores de la topoisomerasa, los antibióticos antitumorales, o los venenos del huso mitótico. Por "agentes alquilantes" se consideran, entre otros, el busulfán, el carboplatino, el clorambucil, el cisplatino, la ciclofosfamida, la isofamia, le melfalán, la mecloretamina, el oxaliplatino, la uramustina, o también la temozolomida. Por "antimetabolitos" se consideran, entre otros, la azatioprina, la capecitabina, la citarabina, la floxuridina, la fludarabina, el fluorouracilo, la gemcitabina, el metotrexato, o también el pemetrexed. Los "alcaloides vegetales" son, por ejemplo la vinblastina, y la vincristina. Los "inhibidores de la topoisomerasa" son, por ejemplo el irinotecano, el topotecán, o también el etopósido. Los "antibióticos antitumorales" son, por ejemplo la bleomicina, la daunorrubicina, la doxorrubicina, la epirrubicina, la hidroxiurea, la idarrubicina, la mitomicina C, o también la mitoxantrona. Finalmente, los "venenos del huso mitótico" son, por ejemplo el docetaxel, el paclitaxel, la vinblastina, la vincristina, o también la vinorelbina.
Según otro aspecto, la presente invención tiene como objetivo la utilización de un fragmento polipeptídico aislado según la invención, eventualmente obtenido mediante uno de los procedimientos de la invención, o el ácido nucleico de la invención, para diagnosticar una infección o un traumatismo en un individuo.
El diagnóstico se puede establecer utilizando una técnica de ELISA que permite detectar específicamente los nuevos fragmentos de IL-33 (IL-33aa95-270 IL-33aa99-270 e IL-33aa109-270) en el suero o el plasma de los pacientes.
En efecto, un aumento de la cantidad de IL-33 en la sangre o el suero podría demostrar una infección, una inflamación o un traumatismo en un individuo. Por lo tanto, se puede considerar la utilización de los fragmentos polipeptídicos de la invención, que son susceptibles de ser formados in vivo por la acción de las proteasas endógenas, como marcador de un estado infeccioso o inflamatorio.
Ventajosamente, estos fragmentos particulares de IL-33 pueden ser detectados mediante anticuerpos que los reconocen específicamente.
En un último aspecto, la presente invención tiene como objetivo por lo tanto un anticuerpo monoclonal que reconoce específicamente uno de los fragmentos polipeptídicos de la presente invención, pero que no reconoce la forma entera IL-33aa1-270 ni la forma truncada IL-33aa112-270. De manera ventajosa, dicho anticuerpo es un anticuerpo conformacional, es decir un anticuerpo que reconoce un epítopo conformacional.
Un anticuerpo según la invención se puede preparar mediante las técnicas clásicas conocidas por el experto en la materia, tales como las descritas en "Antibodies: A Laboratory Manual", E. Howell y D Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988.
De manera más precisa, tal anticuerpo puede ser producido a partir de hibridomas obtenidos por fusión de linfocitos B de un animal inmunizado por uno o varios fragmentos polipeptídicos de la invención, con unos mielomas, según la técnica de Kôhler y Milstein (Nature, 1975); los hibridomas son cultivados in vitro, en particular en unos fermentadores, o producidos in vivo, en forma de ascita; alternativamente, dicho anticuerpo monoclonal puede ser
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