ES2602260T3 - Cepa CNCM I-4437 de Lactobacillus johnsonii deficiente en producción de ácido D-láctico y con un tiempo de almacenamiento mejorado - Google Patents

Cepa CNCM I-4437 de Lactobacillus johnsonii deficiente en producción de ácido D-láctico y con un tiempo de almacenamiento mejorado Download PDF

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Abstract

Cepa CNCM I-4437 de Lactobacillus johnsonii depositada en la Colección nacional de cultivos de microorganismos (CNCM, Instituto Pasteur).

Description

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Como disolventes utilizables en la presente invención se pueden mencionar los alcoholes inferiores, sobre todo el etanol y el isopropanol, y el propilenglicol.
La composición de la presente invención también puede contener ventajosamente un agua de manantial y/o mineral, elegida concretamente entre el agua de Vittel, las aguas de la cuenca de Vichy y el agua de la Roche Posay.
Como agentes gelificantes hidrófilos se pueden citar polímeros carboxílicos tales como los carbomer, copolímeros acrílicos tales como los de acrilato/acrilato de alquilo, poliacrilamidas y en particular la mezcla de poliacrilamida, isoparafina C13-14 y Laureth-7 comercializada con la marca Sepigel 305® por la compañía SEPPIC, polisacáridos, por ejemplo derivados tales como las hidroxialquilcelulosas y en particular hidroxipropilcelulosa e hidroxietilcelulosa, gomas naturales como la goma guar, la goma de algarrobo, la goma garrofín y xantana, y arcillas.
Como agentes gelificantes lipófilos se pueden citar arcillas modificadas tales como las bentonas, sales metálicas de ácidos grasos como los estearatos de aluminio y sílice hidrófoba, o también etilcelulosa y polietileno.
Las composiciones según la presente invención también pueden ser preparaciones sólidas en forma de jabones o barras de limpieza.
También se pueden usar para el cuero cabelludo en forma de soluciones, cremas, geles, emulsiones o espumas, o alternativamente en forma de composiciones de aerosol, que además contienen un propelente presurizado.
Para la administración oral conforme a la presente invención se prefiere el uso de un soporte o vehículo ingerible. El soporte o vehículo ingerible puede ser de distinta naturaleza, dependiendo del tipo de composición considerada.
La leche, el yogur, las leches fermentadas, los productos lácteos fermentados, los helados, los productos basados en cereales o cereales fermentados, los cereales para el desayuno, las barras de cereales o granola, los productos lácteos en polvo, las fórmulas infantiles y para bebés, los productos alimenticios de repostería, chocolate o cereales, la comida de animales, en particular para animales domésticos, las tabletas, las cápsulas de gelatina o las pastillas masticables, las suspensiones bacterianas líquidas, los suplementos orales en forma seca y en forma líquida son especialmente adecuados para usar como soporte o vehículo ingerible.
La composición de administración oral conforme a la presente invención se puede formular por ejemplo en forma de tabletas recubiertas, cápsulas de gelatina, geles, emulsiones, tabletas, cápsulas, hidrogeles, barras alimenticias, polvos compactos o sueltos, suspensiones o soluciones líquidas, productos de repostería, leches fermentadas, quesos fermentados, chicles, pasta dentífrica, soluciones atomizables o vehículos alimentarios.
Las tabletas o pastillas masticables, los suplementos orales en forma seca y en forma líquida son adecuados para usar como soportes o vehículos farmacéuticos o alimentarios.
La composición puede ser, por ejemplo, un suplemento alimenticio que se puede formular mediante los procesos habituales para producir en particular tabletas recubiertas de azúcar, cápsulas de gelatina, geles, emulsiones, tabletas, cápsulas e hidrogeles que permitan una liberación controlada.
En particular, un microorganismo de acuerdo con la presente invención se puede incorporar a todas las formas de suplementos o productos alimenticios enriquecidos, por ejemplo barras alimenticias o polvos compactos o sueltos. Los polvos se pueden diluir en agua, soda, productos lácteos o derivados de soja, o se pueden incorporar a barras alimenticias.
Asimismo un microorganismo de la presente invención o una fracción y/o metabolito del mismo se puede formular con los excipientes y componentes usuales para tales composiciones orales o suplementos alimenticios, es decir, en concreto, componentes lípidos y/o acuosos, humectantes, espesantes, conservantes, agentes texturizantes, agentes saborizantes y/o de recubrimiento, antioxidantes y colorantes habituales en el sector alimentario.
Los agentes y excipientes para formulaciones orales y en particular para los suplementos alimenticios son conocidos en este campo y no serán aquí objeto de una descripción detallada.
En las aplicaciones terapéuticas, las composiciones se administran en una cantidad suficiente para curar al menos parcialmente o detener los síntomas de una enfermedad y sus complicaciones. Una cantidad adecuada para lograrlo se define como una “dosis terapéuticamente efectiva”. Las cantidades efectivas para este fin dependen de varios factores conocidos de los especialistas en la materia, como la gravedad de la enfermedad y el peso y estado general del paciente.
En las aplicaciones profilácticas las composiciones según la presente invención se administran a un paciente con predisposición o riesgo de contraer una determinada enfermedad, en una cantidad suficiente para reducir al menos parcialmente el riesgo de desarrollar la enfermedad. Dicha cantidad se define como una “dosis profilácticamente
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efectiva”. De nuevo las cantidades necesarias dependen de varios factores específicos del paciente, tales como su estado de salud y peso.
Las composiciones de la presente invención comprenden al menos un derivado natural de la cepa CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii y/o del sobrenadante de cultivo libre de células según la presente invención en una dosis terapéutica o profilácticamente efectiva.
Los especialistas en la materia tienen la capacidad de ajustar correspondientemente la dosis.
Por ejemplo, la composición puede contener el derivado natural de la cepa CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii según la presente invención en una cantidad de 106-1012 ufc, por ejemplo de 108 a 1010 ufc por dosis diaria.
Los trabajos anteriores también han demostrado que el L. johnsonii CNCM I-1225 no replicante se puede usar en el tratamiento o prevención de trastornos relacionados con el sistema inmunitario, incluyendo las infecciones; véase la patente WO 2010/133475, incorporada aquí en su totalidad por referencia. Se halló que el L. johnsonii CNCM I-1225 induce fuertemente la expresión constitutiva de la hBD1 y que el L. johnsonii CNCM I-1225 tratado térmicamente regula al alza la hBD1 más fuertemente que su equivalente vivo.
Por consiguiente el derivado natural de la cepa CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii según la presente invención también puede estar en una forma no replicante.
Los derivados naturales “no replicantes” de la cepa CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii incluyen derivados que han sido tratados térmicamente. Ello incluye derivados naturales de la cepa CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii que están inactivados, muertos, no son viables y/o se hallan en forma de fragmentos tales como ADN, metabolitos, compuestos citoplasmáticos y/o materiales de la pared celular.
“No replicante” significa que por métodos clásicos de cultivo en placa no se puede detectar ninguna célula viable y/o ninguna unidad formadora de colonias. Estos métodos clásicos de cultivo en placa están resumidos en el libro de microbiología: James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden. 2005. Modern food microbiology. 7ª edición, Springer Science, Nueva York, N.Y. 790 p. Normalmente la ausencia de células viables se puede demostrar del modo siguiente: ninguna colonia visible en placas de agar o ningún incremento de turbidez en el medio líquido de cultivo tras la inoculación con distintas concentraciones de preparaciones bacterianas (muestras “no replicantes”) y la incubación en condiciones apropiadas (en atmósfera aeróbica y/o anaeróbica durante al menos 24h).
Obviamente los microorganismos no replicantes no forman colonias; por tanto este término debe entenderse como la cantidad de microorganismos no replicantes que se obtiene a partir de 106 y 1012 ufc/g de bacterias replicantes.
La composición también puede comprender el derivado natural de la cepa CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii según la presente invención en una cantidad de 0,005 mg -5000 mg, por ejemplo de 0,5 mg hasta 50 mg, por dosis diaria.
Los especialistas en la materia entenderán que pueden combinar libremente todas las características de la presente invención aquí descritas, sin apartarse del ámbito de la presente invención tal como está descrita. En particular las características descritas para los usos de la presente invención se pueden aplicar a los productos alimenticios de la presente invención y viceversa.
Otras ventajas y características de la presente invención resultan evidentes a partir de los siguientes ejemplos y figuras.
Figura 1: muestra la “curva de supervivencia” del Lactobacillus johnsonii CNCM I-1225 tratado con etil-metansulfonato. Figura 2: muestra el proceso molecular de mutaciones naturales, desde la oxidación de una base G hasta la segregación de las cadenas de ADN, dando una mezcla de tipos de ADN original y modificado, y una colonia mixta de organismos originales y modificados. Figura 3: muestra la secuencia genética del gen de D-lactato deshidrogenasa del Lactobacillus johnsonii CNCM I-1225 (SEQ ID NO: 1) y los cambios identificados en el respectivo gen del Lactobacillus johnsonii CNCM I-4437, señalados con un círculo. También se muestra el enzima D-lactato deshidrogenasa traducido (SEQ ID NO: 2) con los cambios correspondientes al Lactobacillus johnsonii CNCM I-4437. Figura 4A: muestra la secuencia genética del gen de D-lactato deshidrogenasa del Lactobacillus johnsonii CNCM I-4437 (SEQ ID NO: 6) con la base en posición 230 encuadrada y alterada en comparación con la cepa original CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii (G). Figura 4B: muestra la secuencia proteica del enzima D-lactato deshidrogenasa del Lactobacillus johnsonii CNCM I-4437 (SEQ ID NO: 7) con el aminoácido en position 77 encuadrado y alterado en comparación con la cepa original CNCM I-1225 de Lactobacillus johnsonii (R).
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ES12713934.3T 2011-03-29 2012-03-29 Cepa CNCM I-4437 de Lactobacillus johnsonii deficiente en producción de ácido D-láctico y con un tiempo de almacenamiento mejorado Active ES2602260T3 (es)

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