ES2601191T3 - Método para someter a prueba a un sujeto que se cree que está predispuesto a presentar un cáncer metastásico que utiliza las isoformas delta133p53 - Google Patents

Abstract

Método de someter a prueba a un sujeto que se cree que presenta una predisposición a presentar un cáncer metastásico que comprende la etapa de: i) analizar una muestra biológica seleccionada de entre el grupo que consiste en médula ósea, suero, plasma, sangre, linfa o células de tejido canceroso o presuntamente canceroso o tejido adyacente del mismo de dicho sujeto para detectar la presencia de una isoforma p53 seleccionada en el grupo que consiste en Δ133p53ß, Δ133p53 y Δ133p53 γ, siendo la presencia de dicha isoforma p53 indicativa de una predisposición a un cáncer metastásico.

Description

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enzima ligada) al antígeno unido (de estar presente) formando un sándwich de anticuerpo-antígeno-anticuerpo. Los ejemplos de enzimas que pueden ligarse al anticuerpo son: fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano, luciferasa, ureasa y 3-galactosidasa. El anticuerpo ligado a enzima reacciona con un sustrato para generar un producto de una reacción de color para el que se puede someter a ensayo.

En una "ELISA competitiva", se incuba el anticuerpo con una muestra que contenga antígeno (es decir, un péptido de la isoforma p53). Entonces la mezcla de antígeno-anticuerpo se pone en contacto con una fase sólida recubierta con antígeno (es decir, una placa de microvaloración). A mayor antígeno presente en la muestra, menos anticuerpo libre estará disponible para unirse a la fase sólida. Entonces se agrega un anticuerpo secundario marcado (es decir, enzima ligada) a la fase sólida para determinar la cantidad de anticuerpo primario unido a la fase sólida.

En un "ensayo de inmunohistoquímica" se somete a prueba una sección de tejido para proteínas específicas exponiendo el tejido a anticuerpos que sean específicos para la proteína que se esté sometiendo a prueba. Entonces, se visualizan los anticuerpos por medio de una variedad de métodos para determinar la presencia y cantidad de proteína presente. Los ejemplos de los métodos usados para visualizar anticuerpos son, por ejemplo, a través de enzimas ligadas a anticuerpos (es decir, luciferasa, fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano o Pgalactosidasa), o métodos químicos (por ejemplo, sustrato/cromágeno DAB) o anticuerpos marcados oro, fluorescentes por cualquiera de muchos diferentes métodos conocidos por los expertos en la materia.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para cribar compuestos antimetastásicos potenciales, que comprenden las etapas de:

a) poner en contacto el compuesto que se va a someter a prueba con una célula que se sabe que expresa una isoforma p53 seleccionada en el grupo que consiste en ∆133p53, ∆133p53γ y ∆133p53β,

b) determinar la presencia de dicha isoforma p53 por un método de detección de dicha isoforma p53 como se describe anteriormente; y

c) seleccionar dicho compuesto como un compuesto para el cáncer antimetastásico potencial si la isoforma p53 no está expresada en la célula.

Opcionalmente, dicho método de cribado puede incluir una etapa adicional d) de someter a prueba el compuesto seleccionado en la etapa c) sobre células, preferentemente células metastásicas, para confirmar las propiedades antimetastásicas del compuesto seleccionado.

Por ejemplo, dicha etapa d) también puede corresponder con el método divulgado en la solicitud de patente internacional WO 2006/134305, es decir, un método que comprende la etapa de: poner en contacto células tumorales que no expresan E-cadherina en su membrana celular con el compuesto seleccionado, y determinar la presencia de E-cadherina en la superficie celular, siendo dicha presencia indicativa de actividad antimetastásica.

Dicha etapa d) también puede corresponder al método divulgado en Smith HW, Marra P, Marshall CJ.J Cell Biol. 25 Ago 2008; 182(4):777-90, es decir, un método para someter a prueba la invasión de células tumorales en matriz de colágeno tridimensional en la presencia del compuesto seleccionado.

Preferentemente, los compuestos que van a ser sometidos a prueba son ARN antisentido o ARN de interferencia (ARNi).

En otro aspecto, la presente divulgación se refiere a un método para la producción de anticuerpos policlonales que reconocen específicamente un polipéptido de la isoforma p53 que consiste en polipéptido ∆133p53, ∆133p53γ y ∆133p53β, en el que dicho método incluye la etapa de:

a) inmunizar un animal mamífero con una cantidad inmunológicamente efectiva de un polipéptido de la isoforma p53 seleccionado en un grupo que consiste en ∆133p53, ∆133p53γ y ∆133p53β, o contra un fragmento de epítopo específico de por lo menos una longitud de 9 aminoácidos de dicho polipéptido, opcionalmente con la preparación de mejora del transportador;

b) opcionalmente, determinar in vitro la presencia de anticuerpos específicos en el suero o plasma del animal; y

c) purificar o aislar el polipéptido específico de anti-∆133p53, anti-∆133p53γ y anti-∆133p53β a partir del suero

o plasma del animal.

También forma parte de la presente divulgación, un método para la producción de una célula de hibridoma que puede secretar anticuerpos monoclonales que reconocen específicamente una isoforma de p53 seleccionada en el grupo que consiste en polipéptidos de ∆133p53, ∆133p53γ y ∆133p53β, en el que dicho método incluye la etapa de:

a) inmunizar un animal mamífero con una cantidad inmunológicamente efectiva de una isoforma p53

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Claims (1)

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