ES2601104T3 - Procalcitonina para el diagnóstico de infecciones bacterianas y la guía del tratamiento antibiótico en pacientes con apoplejía aguda o accidente isquémico transitorio - Google Patents

Abstract

Procedimiento in vitro para el diagnóstico de una infección bacteriana en un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio, que comprende las etapas siguientes: (i) determinar el nivel de procalcitonina (PCT) o un fragmento de la misma de por lo menos 12 aminoácidos de longitud en una muestra obtenida de un paciente menos de 72 horas después de la aparición de la apoplejía aguda o del accidente isquémico transitorio utilizando un ensayo de detección de PCT con una sensibilidad funcional del ensayo inferior a 0,06 ng/ml; (ii) determinar si dicho paciente tiene una infección bacteriana o no por comparación de dicho nivel de PCT con un nivel umbral predeterminado.

Description

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DESCRIPCIÓN

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Procalcitonina para el diagnóstico de infecciones bacterianas y la guía del tratamiento antibiótico en pacientes con apoplejía aguda o accidente isquémico transitorio.

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Campo de la invención

La invención se encuentra en el sector de los diagnósticos clínicos. En particular, la invención se refiere a la determinación del nivel de procalcitonina (PCT) en una muestra derivada de un fluido corporal de un sujeto después de una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio. 10

Antecedentes de la invención

La apoplejía se define como un déficit neurológico focal agudo consecuencia de una enfermedad cerebrovascular. Los dos tipos principales de apoplejía son la isquémica y la hemorrágica, que contabilizan aproximadamente el 85% 15 y el 15%, respectivamente (Hickey 2003. The clinical practice of neurological and neurosurgical nursing (5ª ed.). Filadelfia: Lippincott, Williams & Wilkins). Cuando tiene lugar una apoplejía isquémica, el suministro de sangre al cerebro se interrumpe y las células cerebrales se ven privadas de glucosa y oxígeno. Aproximadamente el 45% de las apoplejías isquémicas están provocadas por un trombo arterial pequeño o grande, el 20% tienen un origen embólico y otras tienen una causa desconocida (Hickey 2003. The clinical practice of neurological and neurosurgical 20 nursing (5ª ed.). Filadelfia: Lippincott, Williams & Wilkins).

El accidente isquémico transitorio (TIA) (también denominado “miniapoplejía”) se define sobre características basadas en tejidos como un episodio transitorio de disfunción neurológica provocado por una isquemia cerebral, de la médula espinal o retinal focal, sin infarto agudo (Easton et al. 2009. Stroke 40: 2276-93). El TIA se caracteriza 25 también por una aparición súbita de síntomas neurológicos que se solucionan completamente dentro de un periodo de 24 horas. Puede informarse de un TIA en del 0,5% al 8% de la población de edad avanzada (Bots et al., 1997. Stroke 28(4): 768-73). Un paciente con un TIA tiene un riego elevado de sufrir subsiguientes acontecimientos adversos. Se ha informado que el riesgo de sufrir apoplejía en 90 días es superior al 10%, produciéndose el riesgo más elevado dentro de un periodo de los 2 primeros días (Johnston et al., 2003. Neurology 60: 1429-34). 30

La apoplejía es una de las enfermedades vasculares más importantes. La apoplejía continúa siendo la segunda causa principal de muerte a lo largo del mundo y es una de las causas principales de discapacidad en adultos y de invalidez prematura en Europa (Murray y Lopez, 1997. Lancet 349: 1269-76; Murray y Lopez 1997. Lancet 349:1498-504). En los Estados Unidos, más de 700.000 personas sufren una apoplejía cada año, de las que 550.000 son 35 primeras apoplejías (Thom et al. 2006. Circulation 113: 85-151). Por lo tanto, es un problema de salud pública importante y una carga para los profesionales de la salud y para la comunidad en general, debido al esfuerzo que tiene que invertirse en la planificación y la prestación de atención médica.

La incidencia de la apoplejía aumenta significativamente con el aumento de la edad en nuestra sociedad (Modan y 40 Wagener, 1992. Stroke 23:1230-36). La mayor parte de las apoplejías isquémicas tienen lugar entre las edades de 71 y 80 años, mientras que las apoplejías hemorrágicas aparecen en su mayor parte entre los 60 y los 70 años (Colombo et al., 1989. Rivista de Neurologia 59: 1-7).

El pronóstico del resultado para pacientes con apoplejía después de un intervalo definido puede ser funcional o 45 referido a la supervivencia del individuo. Para un pronóstico del resultado funcional, la morbilidad de un paciente después de un tiempo definido se determina utilizando un sistema de puntuación tal como la "Escala de Clasificación modificada” (mRS; Bonita y Beaglehole, 1988. Stroke 19: 1497-1500) o la “Escala de Apoplejía de los Institutos Nacionales de la Salud” (NIHSS; Adams et al., 1999. Neurology 53: 126-31). La NIHSS se considera actualmente “el patrón de referencia”. El resultado funcional también puede expresarse en términos de necesidad de servicios de 50 enfermería o con respecto a actividades de la vida diaria (ADL), por ejemplo según el Índice y la Escala de Clasificación de Barthel (Collin et al., 1988. International Disability Study 10: 61-3; Bonita y Beaglehole, 1988. Stroke 19: 1497-1500).

El pronóstico de apoplejía depende principalmente de la incidencia de complicaciones (Davenport et al. 1996. Stroke 55 27: 415-20; Johnston et al. 1998. Stroke 29: 447-53). Las infecciones, especialmente neumonías, son la tercera complicación más común de la apoplejía (Langhorne et al. 2000. Stroke 31: 1223-9; Katzan et al. 2003. Neurology 60: 620-5) y se piensa que es la causa más común de mal resultado y muerte en pacientes con apoplejía (Henon et al. 1995. Stroke 26: 392-8; Hilker et al. 2003. Stroke 34: 975-8 1; Heuschmann et al. 2004. Arch Intern Med 164: 1761-8). La frecuencia de infecciones en pacientes con apoplejía aguda es muy alta: el 21-65% de pacientes con 60 una apoplejía aguda desarrolla infecciones y el 10-22% desarrolla neumonías (Castillo et al., 1998. Stroke 29: 2455-60; Davenport et al. 1996. Stroke 27: 415-20; Georgilis et al. 1999. J Int Med 246: 203-9; Grau et al. 1999. J Neurol Sci 171: 115-20; Johnston et al. 1998. Stroke 29: 447-53; Langhorne et al. 2000. Stroke 31: 1223-9), en comparación con la incidencia de infecciones nosocomiales o asociadas a la atención médica que tienen lugar en un promedio del 7-10% de todos los pacientes (Bucher et al. 2000. Tidsskr Nor Laegeforen 120: 472-5) y aproximadamente del 3% 65 en pacientes recién operados (Smyth y Emmerson 2000. J Hosp Infect 45: 173-84). Se ha demostrado que el riesgo

de infección es el más elevado en el estado agudo de la apoplejía el primer y el segundo día después de la apoplejía (Grau et al. 1999. J Neurol Sci 171: 115-20; Kong et al. 1998. Arch Phys Med Rehabil 79: 1535-9). La alta incidencia de infecciones en pacientes con apoplejía es probablemente la consecuencia de una función inmunitaria alterada (Livingston et al., 1988. Arch Surg 123: 1309-12; Woiciechowsky et al. 1998. Nat Med 4: 808-13; Dirnagl et al. 2007. Stroke 38: 770-3). La inmunodepresión después de apoplejía puede detectarse dentro de un periodo de unas pocas 5 horas después de la inducción de isquemia y puede durar varias semanas (Dirnagl y col. 2007. Stroke 38: 770-3). Contribuyen al aumento de la susceptibilidad de pacientes con apoplejía a infecciones varios factores de riesgo: aspiración debida a somnolencia, reflejos bulbares alterados, disfagia e hipóstasis en pacientes en cama, así como la necesidad de procedimientos médicos invasivos (Perry y Love 2001. Dysphagia 16: 7-18).

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La infección postapoplejía también puede afectar a pacientes con TIA y es lo más probable, tal como apoplejía isquémica y hemorrágica aguda, que esté asociada con un mal resultado a corto plazo (Kwan y Hand 2007. Acta Neurol Scand 115:331-8).

Es bien conocido que la apoplejía produce una respuesta inflamatoria con un aumento del recuento de leucocitos 15 (WBC) en la sangre periférica (Kazmierski et al. 2001. Wiad Lek 54:143-51), así como de la temperatura corporal (Boysen y Christensen 2001. Stroke 32:413-7), de la temperatura cerebral (Schwab et al. 1997. Neurology 48:762-7) y de la proteína C-reactiva (CRP) (Idicula et al. 2009. BMC Neurology 9:18). No obstante, la respuesta inflamatoria isquémica después de una apoplejía puede ser consecuencia de una respuesta al tejido necrótico mismo antes que de una infección. El tejido necrótico se elimina mediante mecanismos celulares, humorales y metabólicos, que 20 forman parte todos de la reacción inflamatoria (Kogure et al. 1996. Acta Neurochir Suppl (Viena) 66:40-3). El aumento de la temperatura corporal comienza dentro de un periodo de 24 horas a partir del acontecimiento, mientras que la fiebre debida a la infección parece tener una aparición posterior (Boysen y Christensen 2001. Stroke 32:413-7; Davalos et al. 1997. Cerebrovasc Dis 7:64-9; Castillo et al. 1999. Cerebrovasc Dis 9:22-7; Castillo et al. 1998. Stroke 29:2455-60). En pacientes con apoplejía isquémica sin evidencia de infección, la elevación de la temperatura 25 corporal y del WBC, así como de la CRP, se correlacionó significativamente con el volumen de la lesión y la gravedad inicial de la apoplejía (Audebert et al. 2004. Stroke 35: 2128-2133). Además, se demostró que la respuesta inflamatoria sistémica se atenúa mediante un tratamiento trombolítico exitoso. Por lo tanto, el rescate inducido de tejido cerebral puede ser consecuencia de la inflamación sistémica reducida, evitando una necrosis cerebral.

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La procalcitonina (PCT) se ha convertido en un biomarcador bien establecido para el diagnóstico de sepsis. La PCT refleja la gravedad de una infección bacteriana y se utiliza, en particular, para supervisar la progresión de la infección en la sepsis, la sepsis grave o el choque séptico. Es posible utilizar la PCT para medir la actividad de la respuesta inflamatoria sistémica, para controlar el éxito del tratamiento y para estimar el pronóstico (Assicot et al. 1993. Lancet 341:515-8; Clec’h C et al. 2004. Crit Care Med 32:1166-9; Lee et al. 2004. Yonsei Med J 45:29-37; Meisner et al. 35 2005. Curr Opin Crit Care 11:473-480; Wunder et al. 2004. Inflamm Res 53: 158-163). El aumento de niveles de PCT en pacientes con sepsis se correlaciona con la mortalidad (Oberhoffer et al. 1999. Clin Chem Lab Med 37:363-368).

La PCT se ha utilizado ya para guiar el tratamiento antibiótico, pero no después de una apoplejía aguda. En pacientes que se volvieron a presentar en el departamento de emergencias con síntomas de infecciones del aparato 40 respiratorio inferior se midió la PCT y solo pacientes con concentraciones de PCT > 0,25 ng/ml o > 0,5 ng/ml se trataron con antibióticos (Christ-Crain et al. 2004. Lancet 363:600-7). En pacientes con neumonía extrahospitalaria (CAP) el tratamiento antibiótico se basó en las concentraciones de PCT en suero (muy desaconsejado a concentraciones de PCT < 0,1 ng/ml; desaconsejado a concentraciones de PCT < 0,25 ng/ml; aconsejado a concentraciones de PCT > 0,25 ng/ml y muy aconsejado a concentraciones de PCT > 0,5 ng/ml) (Christ-Crain et al. 45 2006. Am J Resp Crit Care Med 174:84-93). La guía por PCT redujo sustancialmente la utilización de antibióticos en CAP sin deterioro del resultado de los pacientes. De forma similar, el tratamiento guiado por PCT utilizando los mismos umbrales de decisión que se han descrito anteriormente también redujo significativamente la utilización de antibióticos para infecciones agudas del aparato respiratorio en atención primaria sin comprometer el resultado de los pacientes (Briel et al. 2008. Arch Intern Med 168:2000-7). 50

Las directrices actuales sobre el control de la apoplejía aguda desaconsejan la administración profiláctica de antibióticos (Hacke et al. 2003. Cerebrovasc Dis 16: 311-37). Además, un ensayo clínico profiláctico aleatorizado con antibióticos proporcionó recientemente un apoyo basado en la evidencia de esta recomendación, dado que mostró que la administración intravenosa de levofloxacina no fue mejor que el placebo para prevenir infecciones en 55 pacientes con apoplejía aguda (Chamorro et al. 2005. Stroke 36: 1495-500). Por el contrario, en pacientes con apoplejía aguda grave (mRS > 3), la administración de mezlocilina más sulbactam redujo la tasa de infección y puede estar asociada con un mejor resultado clínico (Schwarz et al. 2008, Stroke 39: 1220-7). No obstante, con respecto al desarrollo de posible resistencia a antibióticos, así como de efectos secundarios inducidos por antibióticos, no se considera que sea apropiado un tratamiento profiláctico de pacientes con una apoplejía aguda y 60 las directrices actuales sobre control de apoplejía aguda desaconsejan la administración profiláctica de antibióticos (Hacke et al. 2003. Cerebrovasc Dis 16: 311-37; Ringleb et al. 2008. Cerebrovas Dis 25: 457-507).

Frente a los antecedentes de función inmunitaria alterada en pacientes con apoplejía por una parte y la respuesta inflamatoria sistémica después de apoplejía por la otra, no está nada claro si las concentraciones de PCT se 65 modifican en pacientes con infecciones postapoplejía.

Una investigación de los niveles de PCT en suero en pacientes que padecen una apoplejía aguda no reveló diferencias significativas entre el día de hospitalización y el día 7 (Miyakis et al., 2004. Clin Chim Acta 350: 437-9). No se encontró ninguna correlación entre los niveles de PCT y la mortalidad o el resultado neurológico en este estudio. Molnar y sus colegas midieron la PCT en suero de pacientes con apoplejía isquémica aguda y TIA (Molnar 5 et al. 2008. J Clin Pathol 61: 1209-13). Aunque la PCT se midió de forma seriada, los autores no encontraron ninguna diferencia en niveles de PCT medidos en diferentes puntos temporales después de una apoplejía, excepto en que un ligero aumento de PCT a 72 horas indicó infecciones postapoplejía subsiguientes. Los resultados de ambos estudios podrían atribuirse a los sistemas de prueba de PCT respectivos utilizados, es decir el PCT LIA en Miyakis et al. con una sensibilidad funcional del ensayo (FAS) de 0,08 ng/ml y el PCT Kryptor en Moinar et al. con 10 una FAS de 0,06 ng/ml.

Vogelgesang et al. midieron valores de PCT en suero de pacientes con apoplejía los días 7 y 14 después del ingreso de los pacientes en el hospital como uno de tres criterios para determinar infección utilizando un valor de corte para la PCT > 0,5 ng/ml (Vogelgesang et al. 2008. Stroke 39: 237-41). 15

Un procedimiento de diagnóstico para determinar la etiología de procesos inflamatorios mediante la determinación de la concentración de PCT y determinar a partir de la presencia o la ausencia del péptido si la inflamación es de etiología infecciosa o no infecciosa se describe en el documento EP 0 80 702 B1.

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Un procedimiento para el pronóstico de un resultado o la determinación del riesgo de un paciente que ha sufrido una apoplejía o un accidente isquémico transitorio mediante la determinación del nivel de PCT se describe en los documentos EP 08167512.6 y EP 08168671.9.

Un procedimiento para el pronóstico en un paciente que tiene una enfermedad primaria no infecciosa mediante la 25 determinación del nivel de PCT y la correlación del nivel de PCT con el riesgo del paciente para contraer una enfermedad o una afección médica posterior que no se ha manifestado aún y/o no es aún sintomática se describe en el documento EP 07015271.5.

Con respecto a la alta incidencia de infecciones postapoplejía y su asociación con un resultado peor de pacientes 30 con apoplejía o TIA que padecen una infección postapoplejía/post-TIA, se debería supervisar estos pacientes para determinar si tienen una infección.

Así, los inventores de la presente invención han investigado si la medición de niveles de procalcitonina en una muestra de un fluido corporal de un paciente que ha sufrido una apoplejía isquémica o hemorrágica aguda o un 35 accidente isquémico transitorio podría usarse para guiar el diagnóstico y el tratamiento de una infección bacteriana postapoplejía o post-TIA en estos pacientes.

Sumario de la invención

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La invención se refiere a un procedimiento in vitro para el diagnóstico de una infección bacteriana en un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio. El procedimiento comprende las etapas siguientes:

(i) determinar el nivel de procalcitonina (PCT) o un fragmento de la misma de por lo menos 12 aminoácidos de 45 longitud en una muestra obtenida de un paciente menos de 72 horas después de la aparición de la apoplejía aguda o el accidente isquémico transitorio utilizando un ensayo de detección de PCT con una sensibilidad funcional del ensayo inferior a 0,06 ng/ml;

(ii) determinar si dicho paciente tiene una infección bacteriana o no por comparación de dicho nivel de PCT con 50 un nivel umbral predeterminado.

La invención se refiere también a la utilización de dicho procedimiento en el tratamiento con un antibiótico de un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio.

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Debido a la alta sensibilidad de la detección del nivel de PCT, la invención permite la detección más precoz de infecciones bacterianas y subsiguientemente un tratamiento más precoz de dichas infecciones bacterianas en un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio y, por lo tanto, la mejora del resultado del paciente. Por lo tanto, el procedimiento es particularmente adecuado de aplicar con muestras de pacientes que están en cuidado intensivo en una institución médica, tal como un hospital. Se debería tener en mente 60 que merece la pena incluso una mejora absoluta del 5% en resultado favorable debida a una identificación precoz y un tratamiento antibiótico precoz de una infección bacteriana, dado que incluso una mejora pequeña del resultado tendría implicaciones importantes en la salud pública (Lees et al. 2003. Lancet Neurology 2: 54-61). Así, el tratamiento precoz de pacientes con necesidad de ello es de gran importancia.

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Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a un procedimiento, en particular a un procedimiento in vitro para el diagnóstico de un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio (TIA). El procedimiento comprende las etapas siguientes: 5

(i) determinar el nivel de procalcitonina (PCT) o un fragmento de la misma de por lo menos 12 aminoácidos de longitud en una muestra obtenida de un paciente menos de 72 horas después de la aparición de la apoplejía aguda o el accidente isquémico transitorio utilizando un ensayo de detección de PCT con una sensibilidad funcional del ensayo inferior a 0,06 ng/ml; 10

(ii) determinar si dicho paciente tiene una infección bacteriana o no por comparación de dicho nivel de PCT con un nivel umbral predeterminado.

La sensibilidad funcional del ensayo del ensayo de detección de PCT es preferentemente inferior a 0,06 ng/ml, de 15 forma más preferida 0,04 ng/ml o inferior, de manera incluso más preferida 0,03 ng/ml o inferior, del modo más preferida 0,01 ng/ml o inferior. La sensibilidad funcional del ensayo (FAS) se define como la concentración más baja de un ensayo que puede medirse con un coeficiente de varianza (CV) interensayo del 20% (Spencer CA. 1989. J Clin Inmunoassay 12: 82-9). Dicha sensibilidad funcional del ensayo reducida permite la correlación de niveles de PCT después de apoplejía aguda o TIA con la probabilidad de que se desarrolle una infección bacteriana en un 20 paciente unos pocos días después de sufrir la apoplejía o el ITA.

La mayor parte de infecciones postapoplejía se adquieren después de la apoplejía y aparecen dentro de un periodo de 7 días después de la apoplejía. Por lo tanto, la presente invención es especialmente útil en el diagnóstico o la identificación de una infección bacteriana que se ha adquirido después de una apoplejía. Esto significa que el 25 procedimiento es especialmente útil para pacientes que acaban de sufrir una apoplejía que no han tenido una infección antes de la apoplejía. Las infecciones adquiridas después de la apoplejía pueden tener lugar como consecuencia del tratamiento de la apoplejía, la utilización de procedimientos médicos invasivos (por ejemplo, aspiración debida a somnolencia, reflejos bulbares alterados y disfagia, cateterización en pacientes inmovilizados (Perry y Love 2001. Dysphagia 16: 7-18). Las apoplejías vienen acompañadas en un 10-22% por el desarrollo de 30 neumonía dentro de un periodo de los 7 primeros días. Indredavik et al. 2008 muestra que la tasa de infección de pacientes que acaban de sufrir una apoplejía puede aumentarse adicionalmente hasta 12 semanas después de la apoplejía (Indredavik et al. 2008. Stroke 39: 414-20). La utilización del ensayo de PCT ultrasensible que tiene una sensibilidad funcional del ensayo inferior a 0,06 ng/ml posibilita la identificación de una infección en un punto temporal muy temprano y, por lo tanto, permite un tratamiento antibiótico precoz. Como consecuencia del resultado y 35 el resultado funcional puede considerarse un diagnóstico mejorado y una supervisión de pacientes que acaban de sufrir una apoplejía precoz utilizando un ensayo de PCT ultrasensible.

Por lo tanto, se recomienda una supervisión de hasta 7 días, preferentemente de hasta 12 semanas, de forma más preferida de hasta 6 meses, de forma más preferida de hasta 1 año. 40

En una realización de la presente divulgación, la infección bacteriana es asintomática (por ejemplo, una infección bacteriana que no ha mostrado aún síntomas clínicos) en un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio (TIA).

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El término “nivel”, en el contexto de la presente divulgación, se refiere a la concentración (preferentemente expresada como peso/volumen; p/v) de PCT (o un fragmento/precursor) en una muestra tomada de un sujeto.

El término “paciente”, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un organismo humano o no humano vivo que está recibiendo atención médica o que debería recibir atención médica debido a una enfermedad. Esto 50 incluye personas con enfermedades no definidas que están siendo investigadas para detectar signos de patología. Por lo tanto, los procedimientos y los ensayos descritos en la presente memoria se pueden aplicar tanto a enfermedades humanas como veterinarias.

Preferentemente, la muestra se tomó del paciente menos de 72 horas después de la aparición de los síntomas de 55 apoplejía aguda o TIA. Además, se prefiere que la muestra se tome del paciente no más tarde de 60 horas, 48 horas, 24 horas, 18 horas, 12 horas o 6 horas, del modo más preferido no más tarde de 3 horas, después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda o TIA. Según el procedimiento, pueden diagnosticarse infecciones postapoplejía que incluyen infecciones nosocomiales o asociadas a la atención médica.

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La expresión “infección postapoplejía”, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una infección bacteriana que tiene lugar después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda o de TIA. Las infecciones se consideran nosocomiales o asociadas a la atención médica si aparecen por primera vez 48 horas o más después del ingreso en el hospital o dentro de un periodo de 30 días después del alta como consecuencia del tratamiento en un hospital o una unidad de servicios de atención médica. La expresión “infección asociada a atención médica” (HAI) se 65 define en Horan et al. (Horan et al. 2008. Am J Infect Control 36: 309-32).

Por lo tanto, un objeto de la invención es un procedimiento para diagnosticar una infección bacteriana en un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio que comprende las etapas siguientes:

(i) determinar el nivel de procalcitonina (PCT) o un fragmento de la misma de por lo menos 12 aminoácidos de 5 longitud en una muestra obtenida de un paciente menos de 72 horas después de la aparición de la apoplejía aguda o el accidente isquémico transitorio utilizando un ensayo de detección PCT con una sensibilidad funcional del ensayo inferior a 0,06 ng/ml;

(ii) determinar si dicho paciente tiene una infección bacteriana o no por comparación de dicho nivel de PCT con 10 un nivel umbral predeterminado.

El término “muestra”, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una muestra de fluido corporal obtenida con fines de diagnóstico, pronóstico o evaluación de un sujeto de interés, tal como un paciente. Las muestras de ensayo preferidas incluyen sangre, suero, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, saliva, esputo y efusiones 15 pleurales. Además, un experto en la técnica se percatará de que algunas muestras de prueba se analizarán más fácilmente después de un procedimiento de fraccionamiento o purificación, por ejemplo separación de sangre completa en componentes de suero o plasma.

Por lo tanto, en una realización preferida de la presente divulgación, la muestra se selecciona del grupo que consiste 20 en una muestra de sangre, una muestra de suero, una muestra de plasma, una muestra de líquido cefalorraquídeo, una muestra de saliva y una muestra de orina o un extracto de cualquiera de las muestras mencionadas anteriormente. Preferentemente, la muestra es una muestra de sangre, de la forma más preferida una muestra de suero o una muestra de plasma.

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La expresión apoplejía aguda, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere tanto a una apoplejía isquémica como a una apoplejía hemorrágica.

Como se ha mencionado la presente memoria en el contexto de proteínas o péptidos, el término “fragmento” se refiere a proteínas pequeñas o péptidos pequeños que pueden derivarse de proteínas o péptidos más grandes, que 30 por lo tanto comprenden una secuencia parcial de la proteína o el péptido más grande. Dichos fragmentos se pueden derivar de las proteínas o los péptidos más grandes mediante saponificación de uno o más de sus enlaces peptídicos.

Procalcitonina, en el contexto de la presente invención, se refiere preferentemente a un péptido que abarca los 35 residuos de aminoácidos 1-116, 2-116 o 3-116 o fragmentos de los mismos. Así, la longitud de fragmentos de procalcitonina es por lo menos de 12 aminoácidos, preferentemente de más de 50 aminoácidos, de forma más preferida de más de 110 aminoácidos. La PCT puede comprender modificaciones postraduccionales tales como glicosilación, liposidación o derivatización. La PCT misma es un precursor de calcitonina y catacalcina. La secuencia de aminoácidos de la PCT 1-116 se proporciona en la SEC ID NO:1. 40

Según el procedimiento, se diagnostica al paciente que tiene una infección bacteriana latente cuando dicho nivel de PCT determinado es superior al nivel de umbral predeterminado. Preferentemente, el nivel umbral predeterminado se encuentra entre 0,02 ng/ml y 0,5 ng/ml, de forma más preferida entre 0,02 ng/ml y 0,25 ng/ml, de manera incluso más preferida entre 0,02 ng/ml y 0,1 ng/ml, de manera incluso más preferida entre 0,02 ng/ml y 0,06 ng/ml, del modo 45 más preferida entre 0,02 ng/ml y (menos de) 0,05 ng/ml.

La determinación del nivel de PCT o un fragmento o un precursor o fragmento del mismo se realiza en la presente memoria utilizando un procedimiento de detección y/o un ensayo de diagnóstico.

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Como se ha mencionado en la presente memoria, un “ensayo” o un “ensayo de diagnóstico” puede ser de cualquier tipo aplicado en el sector de los diagnósticos. Dicho ensayo puede basarse en la unión de un analito que se va a detectar a una o más sondas de captura con una determinada afinidad. Con respecto a la interacción entre moléculas de captura y moléculas diana o moléculas de interés, la constante de afinidad es preferentemente superior a 108 M-1. 55

En el contexto de la presente divulgación, “moléculas de captura” son moléculas que pueden utilizarse para que se unan a moléculas diana o moléculas de interés, es decir, analitos (es decir, en el contexto de la presente invención el o los péptidos cardiovasculares) de una muestra. Las moléculas de captura deben tener, por lo tanto, la forma adecuada, tanto espacialmente como con respecto a características superficiales, tales como carga superficial, 60 hidrofobicidad, hidrofilicidad, presencia o ausencia de donantes y/o aceptores de Lewis, para unirse específicamente a las moléculas diana o moléculas de interés. Para ello, la unión puede estar mediada, por ejemplo por interacciones iónicas, de van der Waals, pi-pi, sigma-pi, hidrofóbicas o de enlace de hidrógeno o una combinación de dos o más de las interacciones mencionadas anteriormente entre las moléculas de captura y las moléculas diana o moléculas de interés. En el contexto de la presente divulgación pueden seleccionarse moléculas de captura, por ejemplo, del 65 grupo que comprende una molécula de ácido nucleico, una molécula de carbohidrato, una molécula de ARN, una

proteína, un anticuerpo, un péptido o una glicoproteína. Preferentemente, las moléculas de captura son anticuerpos, incluidos fragmentos de los mismos con una afinidad suficiente por una diana o molécula de interés, e incluyen anticuerpos recombinantes o fragmentos de anticuerpos recombinantes, así como derivados modificados químicamente y/o bioquímicamente de dichos anticuerpos o fragmentos derivados de la cadena variante con una longitud de por lo menos 12 aminoácidos de la misma. 5

Los procedimientos de detección preferidos comprenden inmunoensayos en diversos formatos tales como, por ejemplo, radioinmunoensayo (RIA), inmunoensayos de quimioluminiscencia y fluorescencia, inmunoensayos ligados a enzima (ELISA), matrices de microesferas basadas en Luminex, ensayos de micromatrices proteicas y formatos de ensayo rápido tales como, por ejemplo, ensayos de tira inmunocromatográfica. 10

Los ensayos pueden ser ensayos homogéneos o heterogéneos, ensayos competitivos y no competitivos. En una realización particularmente preferida, el ensayo se realiza en forma de un ensayo sándwich que es un inmunoensayo no competitivo en el que la molécula que se va a detectar y/o cuantificar se une a un primer anticuerpo y a un segundo anticuerpo. El primer anticuerpo puede unirse a una fase sólida, por ejemplo una 15 microesfera, una superficie de un pocillo u otro recipiente, un copo o una tira, y el segundo anticuerpo es un anticuerpo que está marcado, por ejemplo, con un colorante, con un radioisótopo, o un resto reactivo o catalíticamente activo. La cantidad de anticuerpo marcado unido al analito se mide después mediante un procedimiento apropiado. La composición general y los procedimientos implicados en los “ensayos sándwich” están bien establecidos y son conocidos por el experto (The Immunoassay Handbook, Ed. David Wild, Elsevier LTD, 20 Oxford; 3ª ed. (mayo de 2005), ISBN-13: 978-0080445267; Hultschig C et al., Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb; 10(1):4-10. PMTD: 16376134, incorporado al presente documento por referencia).

En una realización particularmente preferida, el ensayo comprende dos moléculas de captura, preferentemente anticuerpos que están ambos presentes como dispersiones en una mezcla de reacción líquida, en la que un primer 25 componente de marcado se une a la primera molécula de captura, en la que dicho primer componente de marcado es parte de un sistema de marcado basado en inactivación o amplificación por fluorescencia o quimioluminiscencia, y un segundo componente de marcado de dicho sistema de marcado se une a la segunda molécula de captura, de modo que después de la unión de ambas moléculas de captura al analito se genere una señal medible que permita la detección del complejo sándwich formado en la solución que comprende la muestra. 30

De manera incluso más preferida, dicho sistema de marcado comprende criptatos de tierras raras o quelatos de tierras raras en combinación con colorante fluorescente o colorante quimioluminiscente, en particular un colorante del tipo cianina.

35

En el contexto de la presente divulgación, los ensayos basados en fluorescencia comprenden la utilización de colorantes, que pueden seleccionarse, por ejemplo, del grupo que comprende FAM (5- o 6-carboxifluoresceína), VIC, NED, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína (FITC), IRD-700/800, colorantes de cianina, tales como CY3, CY5, CY3.5, CY5.5, Cy7, xanteno, 6-carboxi-2’,4’,7’,4,7-hexaclorofluoresceína (HEX), TET, 6-carboxi-4‘,5‘-dicloro-2’,7‘-dimetoxi-fluoresceína (JOE), N,N,N’,N‘-tetrametil-6-carboxi-rodamina (TAMRA), 6-carboxi-X-rodamina (ROX), 5-40 carboxi-rodamina-6G (R6G5), 6-carboxi-rodamina-6G (RG6), rodamina, verde de rodamina, rojo de rodamina, rodamina 110, colorantes BODIPY, tales como BODIPY TMR, verde de Oregón, cumarinas tales como umbeliferona, bencimidas, tales como Hoechst 33258; fenantridinas, tales como rojo de Texas, Yakima Yellow, Alexa Fluor, PET, bromuro de etidio, colorantes de acridinio, colorantes de carbazol, colorantes de fenoxazina, colorantes de porfirina, colorantes de polimetina y similares. En el contexto de la presente divulgación los ensayos basados en 45 quimioluminiscencia comprenden la utilización de colorantes, en base a los principios físicos descritos para materiales quimioluminiscentes por Kirk Othmer, Encyclopedia of chemical technology, 4ª ed.; director ejecutivo, J. I. Kroschwitz; editor, M. Howe-Grant, John Wiley & Sons, 1993, vol. 15, p. 518-562, incorporada al presente documento por referencia, incluidas las citas de las páginas 551-562. Son colorantes quimioluminiscentes preferidos los ésteres de acridinio. 50

Lo más preferido es la utilización de sistemas de ensayo de PCT comercialmente disponibles con una sensibilidad funcional del ensayo de 0,007 ng/ml tal como se describe por Morgenthaler et al. (Morgenthaler et al. 2002. Clin Chem 48:788-790) en el procedimiento de la invención.

55

La infección bacteriana que puede diagnosticarse con el procedimiento de la invención puede tratarse con un antibiótico adecuado, como sabe el experto en la técnica. Posibles clases de antibióticos se seleccionan del grupo que consiste en penicilina (por ejemplo, flucloxacilina, amoxicilina, ampicilina, mezlocilina), cefalosporina (por ejemplo, cefazolina, cefuroxima, cefotaxima, cefaclor, cefalexina), inhibidor de -lactamasa (por ejemplo, sulbactam, tazobactam), tetraciclina (por ejemplo, doxiciclina, minociclina, tetraciclina, oxitetraciclina), aminoglicósido (por 60 ejemplo, gentamicina, neomicina, estreptomicina), antibióticos macrólidos (por ejemplo, azitromicina, claritromicina, eritromicina, roxitromicina, espiramicina, clindamicina), lincosamida (por ejemplo, lincomicina), inhibidor de girasa (por ejemplo, ciprofloxacina, ofloxacina, norfloxacina), sulfonamidas, trimetoprima, antibióticos glicopeptídicos (por ejemplo, vancomicina), antibióticos polipeptídicos (por ejemplo, colistina, polimixina) y anfenicol (por ejemplo, cloranfenicol). 65

El procedimiento puede comprender adicionalmente la etapa de administrar un antibiótico al paciente antes de que el paciente muestre síntomas clínicos de una infección bacteriana.

El procedimiento es particularmente adecuado cuando la infección bacteriana es una infección del aparato respiratorio, incluidas neumonía y traqueobronquitis, una infección del aparato urinario o una sepsis. Como sabe un 5 experto en la técnica, las neumonías pueden estar provocadas por un abanico de diferentes organismos. Por lo tanto, se prefiere la utilización de un antibiótico de banda ancha que se administre al paciente para prevenir que la infección bacteriana muestre síntomas clínicos: cloranfenicol, tetraciclina, estreptomicina, amoxicilina, levofloxacina, gatifloxacina, moxifloxacina.

10

Pueden determinarse otros marcadores para diagnosticar o identificar una infección bacteriana asintomática. Estos marcadores pueden seleccionarse del grupo que consiste en: proteína C-reactiva (CRP), neopterina, recuento de leucocitos (WBC), temperatura corporal, neutrófilos, velocidad de sedimentación de eritrocitos (ESR).

En otro aspecto, la presente divulgación se refiere a la utilización del procedimiento descrito para proporcionar una 15 orientación de tratamiento para la administración de un antibiótico a un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio.

En otro aspecto, la invención se refiere a la utilización del procedimiento descrito para el tratamiento preventivo de un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio con un antibiótico. 20

Además, la divulgación se refiere a la utilización de un kit que comprende uno o más anticuerpos dirigidos contra PCT o un fragmento de la misma o contra un precursor de PCT o un fragmento del mismo para el diagnóstico de una infección bacteriana postapoplejía en pacientes que han sufrido una apoplejía isquémica o hemorrágica aguda o TIA. 25

Figuras:

Figura 1: Concentraciones de PCT a lo largo del tiempo en pacientes con apoplejía aguda o TIA (ingresados en el hospital y primera extracción de sangre dentro de un periodo de 12 horas después de la aparición 30 de síntomas de apoplejía aguda o TIA) con y sin infección

Figura 2: Concentraciones de PCT a lo largo del tiempo en pacientes con apoplejía aguda o TIA (ingresados en el hospital y primera extracción de sangre dentro de un periodo de 24 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda o TIA) con y sin infección 35

Ejemplos

Ejemplo 1: Descripción del estudio clínico

40

El estudio se estableció en la clínica de emergencias y neurológica y neuroquirúrgica del Hospital Universitario de Basilea. Todos los pacientes consecutivos que ingresaron en el departamento de emergencias con una apoplejía isquémica o hemorrágica o un accidente isquémico transitorio (TIA) según criterios de la Organización Mundial de la Salud con aparición de síntomas dentro de un periodo de los últimos 3 días se incluyeron en el estudio. Los pacientes sin un consentimiento con conocimiento de causa se excluyeron 45

La recogida de datos de línea base en pacientes contenía:

a) edad,

50

b) sexo,

c) índice de masa corporal (IMC),

d) historial médico: historial real que precedió a la hospitalización; puntuación ABCD (Rothwell et al. 2005. 55 Lancet 366: 29-36) en pacientes con accidente isquémico transitorio; historial familiar; comorbilidades relevantes también evaluadas mediante el índice de Charlson (Goldstein et al. 2004. Stroke 35: 1941-5) (es decir, hipertensión, apoplejía previa, TIA previo, cardiopatía isquémica, fibrilación auricular, diabetes mellitus, disfunción renal y hepática, insuficiencia cardiaca congestiva, dislipidemia, comorbilidades con el riesgo de hiponatremia (hipotiroidismo grave, insuficiencia de glucocorticoides, neoplasia, infección por VIH), historial 60 de tabaquismo (cajetillas-años) y estado (cajetillas por día); medicación actual; consumo de alcohol (vasos y gramos por día); tiempo desde la aparición de síntomas al ingreso.

e) Lugar de residencia: es decir, vida independiente, definida como vida en casa o en una residencia de ancianos con o sin apoyo del círculo familiar y/o cuidados profesionales (el círculo familiar consiste en el 65 cónyuge y/o otras personas importantes que viven junto con el paciente; vida dependiente, definida como

departamento de larga estancia en una casa de reposo para ancianos, otro hospital.

f) Variables clínicas: examen físico, incluido el estado neurológico, NIHSS (para evaluar la gravedad de la apoplejía) y escala de coma de Glasgow (GCS; Adams et al. 1999. Neurology 53: 126-31), tensión arterial, frecuencia del pulso, peso, estado volumétrico (incluyendo la turgencia cutánea, la distensión venosa yugular, 5 auscultación, si hay disponibilidad un diagrama de flujo de captación y pérdida de fluido), temperatura corporal; en pacientes neuroquirúrgicos presión intracerebral si se realiza dentro de la gestión clínica rutinaria.

g) Se evaluaron síntomas clínicos de hiponatremia en el ingreso y en caso de desequilibrio de sodio en 10 pacientes neurológicos. En pacientes sometidos a cirugía intracraneal evaluaremos síntomas clínicos diariamente. Específicamente, realizaremos una supervisión de la presencia de cefalea, anorexia, náuseas, vómitos, calambres y dolores musculares, convulsiones, confusión, desarrollo apático o letárgico.

h) Pruebas de laboratorio rutinarias/estándar: muestreo de sangre rutinario, que incluye: hematocrito, nitrógeno 15 de urea en sangre, bicarbonato, proteína total, albúmina, ácido úrico, electrolitos en suero y orina, osmolalidad de la orina y del suero, creatinina, lípidos, TSH, fT4, T3 y cortisol basal. Todos los muestreos de sangre se realizaron antes de consumir comida, o de fumar, si era factible. Alternativamente, se supervisaron factores de influencia.

20

i) Toma de imágenes: Tomografía computerizada o MRI de neurocráneo (T1, T2, secuencia de imágenes pesadas por difusión, con o sin contraste), si indicó angiografía por resonancia magnética o angiografía cerebral convencional. Registramos los puntos temporales de aplicación de agente de contraste. Los pacientes con apoplejía también se clasificaron sobre la base del territorio vascular de la lesión isquémica del modo siguiente: síndrome de circulación anterior total (TACS), síndrome de circulación anterior parcial 25 (PACS), síndrome de circulación lacunar (LACS), síndrome de circulación posterior (POCS).

j) Otras investigaciones: Los pacientes con apoplejía se sometieron a neurosonografía, ecocardiografía, electrocardiografía estándar de 12 derivaciones y electrocardiografía de 24 horas y se clasificaron después mediante la etiología de apoplejías según la clasificación de subtipos de apoplejía Trial of Org 10172 in acute 30 Treatment (TOAST), que diferencia entre aterosclerosis de grandes arterias, cardioembolismo, oclusión de pequeñas arterias, otra etiología y etiología indeterminada.

El estudio se aprobó por el comité de ética de Basilea (Ethikkommission beider Basel). Este fue un estudio de exploración y de observación; la única intervención relacionada con el estudio fue la afirmación de 7,5 ml de plasma 35 obtenidos durante el muestreo de sangre realizado de forma rutinaria. Por lo tanto, los pacientes proporcionaron un consentimiento con conocimiento de causa escrito en el que estaban de acuerdo con la utilización de sus datos para fines científicos. En pacientes en los que no fue factible un "consentimiento con conocimiento de causa" debido a la secuela de una lesión aguda del SNC (siendo este último un requisito previo para la inclusión), los familiares más próximos al paciente firmaron un formulario de aceptación para indicar el presunto deseo del paciente. En caso de 40 que los familiares más próximos no estuvieran disponibles, el médico tratante, que no estaba implicado en el estudio, certificó que no había objeciones para su inclusión en el estudio desde su punto de vista. Solo después de estos procedimientos de consentimiento con conocimiento de causa se incluyó al paciente en el estudio.

Gestión de participantes a lo largo del ensayo: 45

Etapa 1. Todos los pacientes elegibles en el departamento de urgencias o la sala de neurología se incluyeron en el estudio.

Etapa 2. Se recogieron todos los datos de línea base. 50

Etapa 3. Durante la hospitalización, las variables clínicas que incluyen peso, tensión arterial, frecuencia del pulso, estado volumétrico y temperatura corporal se evaluaron mediante revisión de la historia clínica hasta el alta.

55

- tratamiento de fluidos y fármacos

- síntomas potenciales de hiponatremia, es decir, cefalea, náuseas, vómitos, calambres y dolores musculares, anorexia, conciencia alterada, convulsiones.

60

- pruebas de laboratorio realizadas de forma rutinaria (quimiograma, glucosa en plasma, osmolalidad del suero, osmolalidad de la orina, sodio en orina, hematocrito) se muestrearon cuando en los puntos temporales en los que se realizó el muestreo de sangre de forma rutinaria en las salas.

65

Etapa 4. En todos los pacientes, el día 5 de la hospitalización se realizó un examen clínico con NTHSS, índice y

escala de clasificación de Barthel (Collin et al. 1988. International Disability Study 10: 61-3; Bonita y Beaglehole. 1988. Stroke 19: 1497-1500). Se evaluó el futuro lugar de residencia (es decir, vida dependiente frente a vida independiente).

Etapa 5. En pacientes con apoplejía isquémica se realizó un seguimiento telefónico con respecto a la 5 morbimortalidad (evaluado mediante el índice y la escala de clasificación de Barthel) que se obtuvo después de 3 meses. Un resultado desfavorable se definió como un índice de Barthel < 85 o una escala de clasificación modificada de 3 a 6.

Ejemplo 2: Medición de procalcitonina 10

La PCT se midió utilizando un sistema de prueba disponible comercialmente ultrasensible con una sensibilidad funcional del ensayo de 0,007 ng/ml como se describe por Morgenthaler et al., (Morgenthaler et al. 2002. Clin Chem 48:788-790). Sucintamente, se obtuvieron anticuerpos de oveja contra el resto de calcitonina de PCT y se obtuvo un anticuerpo monoclonal de ratón contra el resto de catacalcina de PCT. Se recubrieron tubos con el anticuerpo anti-15 catacalcina. El anticuerpo anti-calcitinina se marcó con MACN éster de acridinio (InVent GmbH, Hennigsdorf, Alemania) y sirvió como trazador. Se utilizaron diluciones de PCT recombinante en suero de caballo normal como calibradores. Se incubaron 100 μl de muestra o de patrón en los tubos recubiertos durante 30 minutos, se añadieron 200 μl de trazador. Después de otra incubación durante 2 h los tubos se lavaron 4 veces con 1 ml de solución de lavado LIA (BRAHMS AG, Hennigsdorf, Alemania), y se midió la quimioluminiscencia ligada utilizando un 20 luminómetro LB952T (Berthold, Wildbad, Alemania).

Resultados

Se determinó el nivel de procalcitonina en muestras de sangre de pacientes a los que se ha diagnosticado que 25 padecen una apoplejía (o bien isquémica o bien hemorrágica) o un accidente isquémico transitorio. En un primer enfoque los pacientes se incluyeron en el análisis cuando ingresaron en el hospital dentro de un periodo de las primeras 12 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda o de TIA (n=376). Se determinaron concentraciones de procalcitonina de línea base (en el ingreso en el hospital) y el día 1 (24 - 36 h), 3 (72 - 84 h) y 5 (120 - 132 h) después del ingreso. 24 de estos 376 pacientes desarrollaron una infección bacteriana (por ejemplo, 30 neumonía, infección del aparato urinario) después de la aparición de apoplejía/TIA. Las concentraciones de PCT a lo largo del tiempo para pacientes (ingresados en el hospital dentro de un periodo de 12 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda y TIA) con y sin una infección bacteriana se muestran en la figura 1. Los análisis de regresión logística revelaron una asociación entre el aumento de concentración de PCT y la presencia de infección bacteriana (p=0,12 en el ingreso (0-12 h); p=0,067 el día 1 (24-36 h); p=0,0042 el día 3 (72-84 h) y p=0,011 el día 5 35 (120-132 h). Se utilizaron diferentes valores de corte para determinar la sensibilidad y la especificidad correspondientes (Tabla 1). A un valor de corte de PCT de 0,06 ng/ml la sensibilidad y la especificidad en el ingreso del paciente dentro de un periodo de 12 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda/TIA fueron el 9,1 y el 94,1%, respectivamente. Si este valor de corte se biseca a 0,03 ng/ml, la sensibilidad toma un valor superior al doble (22,7%) con una disminución moderada en la especificidad (85,7%). Si la PCT se midió dentro de un 40 periodo de 24 a 36 horas después de la aparición de los síntomas, la sensibilidad y la especificidad fueron el 28,2 y el 94,6 %, respectivamente, a un valor de corte de PCT de 0,06 ng/ml, mientras que a un valor de corte de PCT de 0,03 ng/ml la sensibilidad aumentó hasta el 33,3% a una especificidad del 82,9%.

En un segundo enfoque los pacientes se incluyeron en el análisis cuando ingresaron en el hospital dentro de un 45 periodo de las primeras 24 horas después de la aparición de síntomas (n=432). Se determinaron concentraciones de procalcitonina de línea base (en el ingreso en el hospital) y el día 1 (24 - 48 h), 3 (72 - 96 h) y 5 (120 - 144 h) después del ingreso. 26 de estos 432 pacientes desarrollaron una infección bacteriana (por ejemplo, neumonía, infección del aparato urinario) después de la aparición de apoplejía/TIA. Las concentraciones de PCT a lo largo del tiempo para pacientes con y sin una infección bacteriana se muestran en la figura 2. Los análisis de regresión 50 logística revelaron una asociación entre el aumento de concentración de PCT y la presencia de infección bacteriana (p=0,035 en el ingreso (0-24 h); p=0,029 el día 1 (24-48 h); p=0,0005 el día 3 (72-96 h) y p=0,01 el día 5 (120-144 h). Se utilizaron diferentes valores de corte para determinar la sensibilidad y la especificidad correspondientes (Tabla 2). A un valor de corte de PCT de 0,06 ng/ml la sensibilidad y la especificidad en el ingreso del paciente dentro de un periodo de 24 horas después de la aparición de síntomas de apoplejía aguda/TIA fueron el 16,7 y el 94,4%, 55 respectivamente. Si este valor de corte se biseca a 0,03 ng/ml, la sensibilidad toma un valor de casi el doble (29,2%) con una disminución moderada en la especificidad (85,3%). Si la PCT se midió dentro de un periodo de 24 a 48 horas después de la aparición de los síntomas, la sensibilidad y la especificidad fueron el 31,8 y el 93,5%, respectivamente, a un valor de corte de PCT de 0,06 ng/ml, mientras que a un valor de corte de PCT de 0,03 ng/ml la sensibilidad aumentó hasta el 40,9% a una especificidad del 81,5%. 60

Para considerar la alta calidad de procalcitonina se ha tenido en cuenta que el diagnóstico de infecciones después de apoplejía en este estudio se llevó a cabo según criterios estándar: temperatura > 37,5 °C, recuento de leucocitos > 11.000/ml o < 4000/ml, infiltración pulmonar en radiografía de tórax o cultivos positivos para un patógeno. Este diagnóstico estándar de referencia de infección subestima el número real de infecciones en una gran medida, dando 65 como resultado un número bastante elevado de falsos negativos (lo que significa que pacientes con apoplejía aguda

o TIA con una infección bacteriana real pueden asignarse falsamente al subgrupo no infeccioso). Con el sistema de pruebas descrito en la presente invención para la detección ultrasensible de procalcitonina puede diagnosticarse correctamente que estos falsos negativos tienen una infección bacteriana y, por lo tanto, pueden tratarse adecuadamente con antibióticos.

5

Secuencia

SEC ID NO:1 (secuencia de aminoácidos de PCT):

1 APFRSALESS PADPATLSED EARLLLAALV QDYVQMKASE LEQEQEREGS 10

51 SLDSPRSKRC GNLSTCMLGT YTQDFNKFHT FPQTAIGVGA PGKKRDMSSD

101 LERDHRPHVS MPQNAN

Tabla 1: Sensibilidades y especificidades (en %) para diferentes valores de corte de PCT a diferentes puntos temporales de medición para pacientes con apoplejía aguda y TIA que ingresaron en el hospital dentro de 15 un periodo de 12 horas después de la aparición de síntomas.

Valor de corte de PCT

0-12 h 24-36 h 72-84 h 120-132 h

(ng/ml)

Sens. (%) Espec. (%) Sens. (%) Espec. (%) Sens. (%) Espec. (%) Sens. (%) Espec. (%)

0,03

22,7 85,7 33,3 82,9 46,7 81,6 56,3 71,9

0,045

13,6 92,2 28,6 91,1 46,7 89,3 56,3 84,8

0,06

9,1 94,1 28,2 94,6 40,0 92,7 31,3 93,3

0,1

9,1 96,1 9,5 96,2 13,3 97,0 31,3 96,4

Tabla 2: Sensibilidades y especificidades (en %) para diferentes valores de corte de PCT a diferentes puntos temporales de medición para pacientes con apoplejía aguda y TIA que ingresaron en el hospital dentro de 20 un periodo de 24 horas después de la aparición de síntomas

Valor de corte de PCT

0-24 h 24-48 h 72-96 h 120-144 h

(ng/ml)

Sens. (%) Espec. (%) Sens. (%) Espec. (%) Sens. (%) Espec. (%) Sens. (%) Espec. (%)

0,03

29,2 85,3 40,9 81,5 52,9 81,8 55,6 72,9

0,045

20,8 91,7 31,8 90,5 52,9 89,1 55,6 85,4

0,06

16,7 94,4 31,8 93,5 47,1 92,3 33,3 92,7

0,1

12,5 96,1 13,7 95,8 17,7 96,8 33,3 96,0

Claims (12)

12

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento in vitro para el diagnóstico de una infección bacteriana en un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio, que comprende las etapas siguientes:

5

(i) determinar el nivel de procalcitonina (PCT) o un fragmento de la misma de por lo menos 12 aminoácidos de longitud en una muestra obtenida de un paciente menos de 72 horas después de la aparición de la apoplejía aguda o del accidente isquémico transitorio utilizando un ensayo de detección de PCT con una sensibilidad funcional del ensayo inferior a 0,06 ng/ml;

10

(ii) determinar si dicho paciente tiene una infección bacteriana o no por comparación de dicho nivel de PCT con un nivel umbral predeterminado.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la muestra se tomó de dicho paciente menos de 48 horas, de manera incluso más preferida hasta 24 horas, del modo más preferido hasta 12 horas después de la aparición de los 15 síntomas de apoplejía aguda o de accidente isquémico transitorio.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que dicha muestra es un fluido corporal, en particular sangre, suero, plasma, líquido cefalorraquídeo, orina, saliva o una efusión pleural.

20

4. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 3, en el que la apoplejía aguda es una apoplejía isquémica o una apoplejía hemorrágica.

5. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 4, en el que el fragmento de PCT o el fragmento de un precursor de PCT tiene una longitud de por lo menos 12 residuos de aminoácidos. 25

6. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 5, en el que el nivel umbral predeterminado está comprendido entre 0,02 ng/ml y 0,5 ng/ml, de manera más preferida entre 0,02 ng/ml y 0,25 ng/ml, de manera incluso más preferida entre 0,02 ng/ml y 0,1 ng/ml, de manera incluso más preferida entre 0,02 ng/ml y 0,06 ng/ml, del modo más preferido entre 0,02 ng/ml y (menos de) 0,05 ng/ml. 30

7. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho paciente tiene una infección bacteriana cuando dicho nivel de PCT determinado es superior al nivel umbral predeterminado.

8. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicha infección bacteriana se puede tratar con un 35 antibiótico.

9. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicha infección bacteriana es una neumonía.

10. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 9, en el que dicha infección bacteriana es asintomática (sin 40 síntomas clínicos de una infección bacteriana).

11. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 10, que además comprende la etapa siguiente:

determinar el nivel de por lo menos un marcador adicional, tal como proteína C-reactiva (CRP), neopterina, 45 recuento de leucocitos (WBC), temperatura corporal, neutrófilos, velocidad de sedimentación de eritrocitos (ESR).

12. Antibiótico para su utilización en el tratamiento de un paciente que ha sufrido una apoplejía aguda o un accidente isquémico transitorio, en el que el procedimiento según las reivindicaciones 1 a 11 se utiliza para identificar un 50 paciente para dicho tratamiento.