ES2596659B1 - Dispositivo para la recogida, preparación y/o cultivo de una muestra - Google Patents

Dispositivo para la recogida, preparación y/o cultivo de una muestra Download PDF

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Abstract

Dispositivo para la recogida, preparación y/o cultivo de una muestra.#La invención describe un dispositivo (1) para la recogida, preparación y/o cultivo de una muestra, que comprende un tubo (2) dotado de un tapón (3) del que sobresale un hisopo (4) de recogida de muestras, donde la longitud del hisopo (4) es tal que, cuando la tapa (3) está fijada al tubo (2), su extremo libre (5) se aloja en una porción inferior del tubo (2), donde la porción inferior del tubo (2) contiene un primer medio (6) de cultivo, y que además comprende un segundo medio (7) de cultivo adherido a la pared de una porción superior del tubo (2).

Description

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DESCRIPCION
Dispositivo para la recogida, preparation y/o cultivo de una muestra OBJETO DE LA INVENCION
La presente invention pertenece al campo de la microbio^a, y mas particularmente al campo de las tecnicas de recogida, preparacion y cultivo de muestras microbiologicas.
El objeto de la presente invencion es un dispositivo especialmente disenado para llevar a cabo la recogida, preparacion y cultivo de una muestra microbiologica.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
Existen determinados procedimientos microbiologicos que exigen, tras la recogida de una muestra, la realization de un proceso de preparacion previo al cultivo. La preparacion puede consistir, por ejemplo, en un proceso de enriquecimiento con ayuda de un medio rico en nutrientes para aumentar la poblacion bacteriana que se desea detectar o un proceso de selection de una determinada especie. Posteriormente, se lleva a cabo el cultivo, cuyo proposito es la creation de colonias que permitan identificar la especie bacteriana a estudiar.
En la actualidad, la recogida, preparacion y cultivo de muestras microbiologicas se lleva a cabo normalmente empleando diferentes dispositivos. En primer lugar, para la recogida y transporte de la muestra se utiliza una torunda que se conserva en un medio de transporte. Posteriormente, se inocula la torunda en un tubo con un medio de enriquecimiento o un medio selectivo. Y por ultimo, tras la incubation en el medio liquido de enriquecimiento o en el medio selectivo, se siembra la muestra enriquecida o seleccionada en un medio solido de cultivo para visualizar la especie bacteriana a estudiar.
Por otra parte, existen diversos documentos de patente que describen dispositivos destinados a llevar a cabo de manera mas compacta una o varias de estas tecnicas. Por ejemplo, el documento US4387725 describe un dispositivo para la recogida y transporte de muestras que esta formado por un tubo y una tapa a la que esta fijada la base de un hisopo de recogida de muestras. Adicionalmente, el extremo inferior del tubo contiene un medio
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Kquido separado del resto del volumen del tubo por una membrana. Para utilizar este dispositivo, en primer lugar el usuario coge la tapa con el hisopo y recoge la muestra. A continuation, coloca la tapa cerrando el tubo con el hisopo en su interior. El extremo del hisopo puede atravesar asi la membrana y mezclarse con el medio liquido almacenado.
Sin embargo, no existe actualmente ningun dispositivo que permita llevar a cabo de una manera simple y compacta las tecnicas tanto de recogida como de preparation y cultivo.
DESCRIPCION DE LA INVENCION
La presente invention resuelve el problema anterior mediante un dispositivo especialmente disenado para llevar a cabo las tareas de recogida, preparacion y cultivo de una muestra. El dispositivo de la invencion esta definido por la revindication 1, cuyo preambulo corresponde a las caracteristicas tecnicas descritas en el documento US4387725 mencionado anteriormente.
El dispositivo de la presente invencion comprende un tubo dotado de un tapon del que sobresale un hisopo de recogida de muestras, siendo la longitud del hisopo tal que, cuando la tapa esta fijada al tubo, su extremo libre se aloja en una portion inferior del tubo. La portion inferior del tubo contiene un primer medio de cultivo, de modo que el extremo libre del hisopo queda dentro del primer medio de cultivo cuanto la tapa esta fijada al tubo. Este dispositivo se diferencia de otros dispositivos de la tecnica anterior por que adicionalmente comprende un segundo medio de cultivo adherido a la pared de una porcion superior del tubo.
En este contexto, un medio de cultivo es en general un medio que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, celulas, tejidos vegetales o incluso pequenas plantas.
Esta novedosa configuration permite llevar a cabo las tareas de recogida, preparacion y cultivo de una muestra sin necesidad de cambiar de recipiente. En primer lugar, el usuario recoge la muestra con el hisopo. A continuacion, introduce el hisopo en el tubo y fija al tubo la tapa de la que sobresale dicho hisopo. El extremo libre del hisopo, esto es, el extremo en el que se encuentra la almohadilla o algodoncillo donde se impregna la muestra, queda asi introducido en el primer medio de cultivo de la porcion inferior del tubo. Pasado el tiempo
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necesario, el usuario puede quitar la tapa y distribuir cuidadosamente la muestra enriquecida por la superficie del segundo medio de cultivo adherida a la pared del tubo. El cultivo se realiza asi directamente en el mismo tubo donde se ha llevado a cabo la preparation.
En principio, el primer medio de cultivo empleado en la presente invention puede ser suficientemente consistente como para no requerir de ningun elemento de contention que impida que escape de la portion inferior del tubo. Por ejemplo, puede estar en forma de gel o similar. Sin embargo, de acuerdo con una realization preferida de la invencion la porcion inferior del tubo esta separada por una membrana de la porcion superior del tubo. El uso de esta membrana permite utilizar un primer medio de cultivo en estado liquido.
La membrana debera tener una resistencia suficiente como para evitar que el primer medio de cultivo se salga de dicha porcion inferior del tubo, pero al mismo tiempo ser suficientemente blanda como para que el hisopo la perfore. Por ejemplo, podria tratarse de una membrana hecha de aluminio, un polimero o silicona autosellable. En este ultimo caso, la membrana de silicona autosellable podria tener un esfmter en su zona central que impida el reflujo del primer medio de cultivo. Alternativamente, la membrana podria tener menor grosor en su zona central para facilitar la puncion por parte del hisopo.
El primer medio de cultivo es preferiblemente un medio de enriquecimiento. En este contexto, un medio de enriquecimiento es un medio de cultivo que contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. Ciertos organismos no crecen en medios de cultivo ordinarios, sino que requieren ingredientes que promueven el crecimiento, como la sangre, glucosa, suero, huevo, entre otros. Los medios de enriquecimiento contienen ingredientes que aumentan las cualidades estimulantes del medio propiciando un crecimiento elevado. Los medios de enriquecimiento tambien pueden contener componentes quimicos que inhiben ciertos tipos de microorganismos, lo que permite obtener un sub-cultivo de una colonia aislada.
En principio, el medio de enriquecimiento puede ser cualquiera de los habitualmente usados en la tecnica, aunque preferentemente se elige de la siguiente lista: caldo Todd Hewitt, tioglicolato, caldo LIM, infusion de cerebro-corazon, caldo selenito, caldo preston, y agua peptona alcalina.
En otra realizacion preferida, el primer medio de cultivo es un medio selectivo o de
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seleccion. En el contexto de la presente invencion, un medio de selectivo o de seleccion es un medio de cultivo que tiene componentes que inhiben el crecimiento de microorganismos cuyo crecimiento no interesa, permitiendo aislar una o determinadas especies. Un ejemplo, aunque sin limitarnos, de medio selectivo podria ser utilizar un medio rico en un antibiotico para posibilitar el crecimiento de bacterias resistentes a este.
El medio selectivo puede en principio ser cualquiera, aunque preferentemente comprende al menos un antibiotico.
El segundo medio de cultivo debera tener una consistencia suficiente como para permanecer adherido a las paredes del tubo, por lo que estara normalmente en estado solido o en forma de gel. En principio, puede utilizarse cualquier medio de cultivo conocido en la tecnica, aunque preferentemente se trata de un agar. Mas preferentemente, el agar se elige de la siguiente lista: agar granada, agar sangre, agar chocolate, agar macconkey, agar SS, agar Campy, agar cromogenico para MRSA, agar cromogenico para BLEE, agar cromogenico para carbapenemasa, y agar Sabouraud.
Una realizacion especialmente preferida de la invencion esta espedficamente dirigida al uso de agar granada para el cribado del Estreptococo del Grupo B (EGB) en mujeres embarazadas. En efecto, ell agar granada es un medio de cultivo selectivo y diferencial espedfico para estreptococo grupo B (EGB, Streptococcus agalactiae). Tras 24-48 horas de incubacion en agar granada a 35-37 °C, preferentemente en anaerobiosis, las cepas hemolrticas de EGB se desarrollan como colonias naranjas o rojas. Preferiblemente el agar granada se usa en estado solido o de gel, aunque tambien existe forma liquida. La composicion del medio agar granada se describe, aunque sin limitarnos, en De la Rosa et al., 1992. J Clin Microbiol 30: 1019-1021.
En otra realizacion preferida del dispositivo de la invencion, la zona de la pared del tubo situada frente a aquella donde esta adherido el segundo medio de cultivo comprende un elemento de aumento de la superficie de dicho segundo medio de cultivo. Este elemento puede configurarse, por ejemplo, como un aumento selectivo de grosor de la pared del esa zona del tubo para formar una especie de lupa longitudinal. De ese modo, el usuario podra apreciar con mayor facilidad si se producen colonias en la superficie del segundo medio de cultivo.
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En otra realization preferida mas, la pared de la portion superior del tubo a la que esta adherido el segundo medio de cultivo es extrafole del tubo. Por ejemplo, el tubo puede estar constituido por una unica pieza de vidrio o plastico en cuyo interior se fija una pieza adicional dotada de una cara plana sobre la que esta adherido el segundo medio de cultivo. La fijacion de esta pieza adicional al tubo puede realizarse mediante rebordes y orificios que cooperan para conseguir una fijacion a presion. Ello permite extraer esta pieza adicional del interior del propio tubo para llevar a cabo otras intervenciones adicionales.
Por otra parte, en otra realizacion preferida de la invention la forma de la section transversal del tubo es alargada. El proposito es tambien facilitar al usuario una mejor visibilidad del segundo medio de cultivo donde se formaran colonias de la muestra que se ha sembrado con anterioridad. La forma alargada abarca cualquier forma que se aparte de la forma circular convencional para dar lugar a al menos una zona de menor curvatura, o incluso plana, que facilite la visibilidad al disminuir la distorsion. Por ejemplo, puede incluir formas de tipo rectangular, ovaladas, o elipticas, asi como combinaciones de las mismas para dar lugar a formas con lados planos y curvos. En este caso, el segundo medio de cultivo preferentemente esta adherido a una zona de la pared del tubo situada frente a aquella que tiene menor curvatura.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
Las Figs. 1a-1c muestran respectivamente sendas vistas en alzado, planta y perfil del dispositivo de la presente invencion.
Las Figs. 2a-2e muestran los pasos de un procedimiento de recogida, enriquecimiento y cultivo de una muestra con el dispositivo de la presente invencion.
REALIZACIONES PREFERENTES DE LA INVENCION
Las Figs. 1a-1c muestran el dispositivo (1) de la presente invencion. El tubo (2) tiene forma de prisma recto de seccion ovalada con un extremo inferior cerrado y un extremo superior abierto. Una tapa (3) esta configurada para cerrar el extremo abierto del tubo. La Fig. 1b muestra una imagen esquematica de la planta del dispositivo (1) donde se aprecia su forma ovalada. La forma ovalada de la seccion transversal de este tubo (1) impide que el mecanismo de fijacion de la tapa (3) funcione a rosca, por lo que se emplea una fijacion a
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presion.
La cara interior de la tapa (3) tiene fijado en perpendicular un hisopo (4) para la recogida de muestras. El hisopo (4) esta formado por un vastago o bastoncillo recto en cuyo extremo libre (5) se encuentra una almohadilla o algodoncillo destinado a impregnarse en la muestra en cuestion. Como se puede apreciar, la longitud del hisopo (4) esta calculada para que cuando la tapa (3) esta puesta, la almohadilla que contiene la muestra quede alojada en una porcion inferior del tubo (2). La porcion inferior del tubo (2) esta separada de la porcion superior mediante una membrana (8) y contiene un medio (6) de enriquecimiento destinado a enriquecer la muestra recogida mediante el hisopo (4). Ademas, una de las paredes del tubo (2) con menor curvatura tiene adherido un medio (7) de cultivo.
Las Figs. 2a-2e muestran esquematicamente un procedimiento de recogida, enriquecimiento y cultivo de una muestra microbiologica utilizando el dispositivo (1) de la presente invention. En primer lugar, como se muestra en la Fig. 2a, se maneja el hisopo (4) para impregnar la almohadilla de su extremo libre (5) de la muestra microbiologica en cuestion. A continuation, se introduce el hisopo (4) en el tubo (2) y se fija la tapa (3) al tubo (2). En esta position, como se muestra en la Fig. 2c, el extremo libre (5) del hisopo queda dentro de la porcion inferior del tubo (2) donde se encuentra el medio (6) de enriquecimiento. Para ello, habra debido atravesar la membrana (8) que separa dichas porciones inferior y superior del tubo (2). Transcurrido el tiempo necesario, la Fig. 2d muestra como se quita la tapa (3) del tubo (2) para extraer el extremo libre (5) del hisopo (4) del medio (6) de enriquecimiento y, como se aprecia en la Fig. 2e, se pone en contacto dicho extremo libre (5) con el medio (7) de cultivo adherido a la pared del tubo (2). El proceso continua con el cultivo de la muestra y el estudio de los resultados obtenidos. Al estar el medio (7) de cultivo adherido a una de las paredes de menor curvatura, el usuario puede observar el crecimiento de los microorganismos en cuestion mas claramente y sin las deformaciones que provocaria un tubo de seccion circular convencional.
Ejemplo de aplicacion
Este nuevo dispositivo (1) es directamente aplicable al cribado del Estreptococo del Grupo B (EGB) en mujeres embarazadas, recomendado internacionalmente por los Centers for Diseases Control and Prevention (CDC), para la prevention de sepsis neonatal por el EGB.
Se realizo una prueba utilizando un dispositivo (1) con caldo Todd-Hewit como medio (6) de enriquecimiento y agar Granada solido como medio (7) de cultivo. Se realizo un pilotaje con 199 muestras de las cuales 43 fueron positivas. La concordancia con el metodo tradicional fue del 100%, y ademas se obtuvieron 3 positivos adicionales que con dicho metodo 5 tradicional no se habian detectado. El tiempo necesario para el crecimiento de la bacteria coincide con el metodo tradicional.

Claims (15)

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    REIVINDICACIONES
    1. Dispositivo (1) para la recogida, preparation y/o cultivo de una muestra, que comprende:
    un tubo (2) dotado de un tapon (3) del que sobresale un hisopo (4) de recogida de muestras,
    donde la longitud del hisopo (4) es tal que, cuando la tapa (3) esta fijada al tubo (2), su extremo libre (5) se aloja en una portion inferior del tubo (2);
    donde la porcion inferior del tubo (2) contiene un primer medio (6) de cultivo; caracterizado por que ademas comprende un segundo medio (7) de cultivo adherido a la pared de una porcion superior del tubo (2).
  2. 2. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicacion 1, donde la porcion inferior del tubo (2) esta separada por una membrana (8) de la porcion superior del tubo (2).
  3. 3. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicacion 2, donde la membrana (8) esta hecha de aluminio, un polimero o silicona autosellable.
  4. 4. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-3, donde el primer medio (6) de cultivo es liquido.
  5. 5. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el primer medio (6) de cultivo es un medio (6) de enriquecimiento.
  6. 6. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicacion 5, donde el medio (6) de enriquecimiento se elige de la siguiente lista: caldo Todd Hewitt, tioglicolato, caldo LIM, infusion de cerebro- corazon, caldo selenito, caldo preston, y agua peptona alcalina.
  7. 7. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde el primer medio (6) de cultivo es un medio (6) selectivo.
  8. 8. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicacion 7, donde el medio selectivo comprende al menos un antibiotico.
  9. 9. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el segundo medio (7) de cultivo es un agar.
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  10. 10. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicacion 9, donde el agar se elige de la siguiente lista: agar Granada, agar sangre, agar chocolate, agar macconkey, agar SS, agar Campy, agar cromogenico para MRSA, agar cromogenico para BLEE, agar cromogenico para carbapenemasa, y agar Sabouraud.
  11. 11. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la pared de la porcion superior del tubo (2) a la que esta adherido el segundo medio (7) de cultivo es extraible del tubo (2).
  12. 12. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la zona de la pared del tubo (2) situada frente a aquella donde esta adherido el segundo medio (7) de cultivo comprende un elemento de aumento de la superficie de dicho segundo medio (7) de cultivo.
  13. 13. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la forma de la seccion transversal del tubo (2) es alargada.
  14. 14. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicacion 13, donde la forma alargada de la seccion transversal del tubo (2) se elige de la siguiente lista: ovalada, eliptica, rectangular, y una combination de las anteriores.
  15. 15. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde el segundo medio (7) de cultivo esta adherido a una zona de la pared del tubo (2) situada frente a aquella que tiene menor curvatura.
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