ES2595442B1 - Antagonistas de los receptores nk1 derivados de hidratos de carbono, metodo de obtencion y uso medico - Google Patents

Abstract

Antagonistas de los receptores NK1 derivados de hidratos de carbono, método de obtención y uso médico.#La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general I, y a su uso en medicina, o para la fabricación de un medicamento, para el tratamiento de distintas enfermedades, preferentemente un cáncer como el melanoma, el carcinoma de pulmón o el cáncer de mama. Por ello, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto. Asimismo, otro objeto de la presente invención se refiere a un procedimiento para obtener el compuesto de fórmula general I.

Description

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DESCRIPCION

ANTAGONISTAS DE LOS RECEPTORES NK1 DERIVADOS DE HIDRATOS DE CARBONO, METODO DE OBTENCION Y USO MEDICO

Sector de la tecnica

La presente invencion va dirigida principalmente al sector farmaceutico con aplicaciones destinadas a la prevencion y/o tratamiento de enfermedades y cualquier tipo de afeccion o dano en los que se encuentre implicada la sustancia P (SP), o que aun no estando involucrada, transcurran a traves del receptor NK-1, NK-2 y NK-3.

Estado de la tecnica anterior

La SP (Figura 1), la neuroquinina A (NKA) y la neuroquinina B (NKB) son taquicininas de mamlferos que actuan al mismo tiempo como neurotransmisores y neuromoduladores [Nakanishi, S. Annu Rev Neurosci. 1991, 14, 123]. Estos peptidos ejercen sus efectos biologicos en el sistema nervioso central (SNC) a traves de la union a sus receptores acoplados a protelnas G, NK1, NK2, y NK3 [Quatara, L.; Maggi, C. A. Neuropeptides, 1998, 32, 1].

En particular, el receptor NK1 (NK1R), el receptor afln de la SP y el mas abundante de la taquicinina en el SNC de los mamlferos, esta presente en las areas del cerebro implicadas en la regulacion del comportamiento afectivo, y en la mediacion de la ansiedad, el estres y la depresion [Leroy, V.; Mauser, P.; Gao, Z.; Peet., N. P. Neurokinin Receptor Antagonists. Expert Opin. Invest. Drugs 2000, 9, 735-746].

La observacion de que la liberacion de la SP se asocia con varios procesos psicopatologicos hace que el receptor NK1 sea considerado hoy en dla una diana terapeutica de gran relevancia [(a) Bremer, A.A. and Leeman, S.E. (January 2010) Substance P. In: Encyclopedia of Life Sciences (ELS). John Wiley & Sons, Ltd: Chichester. DOI: 10.1002/9780470015902.a0000206.pub2 (b) Rupniak, N.M.J.; Kramer, M. S. Substance P and related tachykininis. Neuropsychopharmacology. The Fifth Generation of Progress. 2002. Lippincott, Williams, & Wilkins (Ed. Davis, K.L.; Charney, D.; Coyle, J.T.; Nemeroff, C.)].

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En consecuencia, los antagonistas de los receptores NK1 son considerados actualmente agentes terapeuticos potenciales para un gran numero de patologlas tales como la migrana, [Moskowitz, M. A. Trends Pharmacol. Sci. 1992, 13, 307-311] la artritis reumatoide, [Lotz, M.; Carson, D. A.; Vaughan, J. H. Science 1987, 235, 893-895] el asma, la enfermedad inflamatoria del intestino, la emesis [Dando, T: M.; Perry, C. M. DRUGS, 2004, 64, 777-794], el cancer [Folkers, K.; Feng, D. M.; Asano, N.; Hakanson, R.; Wiesenfeld-Hallin, Z.; Leander, S. Spantide II, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 4833-4835], asl como los trastornos del sistema nervioso central tales como la ansiedad, el Parkinson o la depresion [Quartara, L.; Altamura, M. Curr. Drug Targets 2006, 7, 975-992].

Resultan de especial interes, los datos obtenidos recientemente que indican que los antagonistas de los receptores NK-1 ejercen una actividad anticancerosa importante [(a) Munoz, M.; Rosso, M.; Perez, A.; Covenas, R.; Rosso, R.; Zamarriego, C; Piruat, J.I. Neuropeptides, 2005, 39, 427. (b) Munoz, M.; Perez, A.; Rosso, M.; Zamarriego, C.; Rosso, R. Melanoma Res. 2004, 14, 183. (c) Esteban, F.; Munoz, M.; Gonzalez-Moles, M.A.; Rosso, M. Cancer Metastasis Rev. 2006, 25, 137]. En este sentido, la actividad anticancerosa de los antagonistas de los receptores NK-1 resulta ser de muy amplio espectro, permitiendo el tratamiento del melanoma humano, el neuroblastoma, el linfoma de Hodgkin humano, la leucemia linfoblastica, el rabdomiosarcoma humano, el linfoma de burkit humano, el carcinoma de pulmon humano, el sarcoma humano de Edwing, el glioma humano, el osteosarcoma humano, gangliomas humanos malignos, el melanoma humano maligno invasivo, celulas metastasicas de melanoma humano y el cancer de mama humano entre otros [Munoz, M. Utilization de antagonistas no peptldicos de receptores NK1 para la production de apoptosis en celulas tumorales. N° de solicitud de patente: PCT/ES2005/000068]. En este sentido es importante destacar que, recientemente se ha demostrado que el receptor NK1 es altamente sobre-expresado en un gran numero de tumores agresivos, [(a) Hennig, I. M.; Laissue, J. A.; Horisberger, U.; Reubi, J. C. Int. J. Cancer 1995, 61, 786. (b) Singh, D.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 388] en particular de glioma, astrocitomas y glioblastomas, [(a) Palma, C.; Maggi, C.A. Life Sci. 2000, 67, 985-1001. (b) Lai, J. P., Douglas, S. D., Wang, Y. J.; Ho, W. Z. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2005, 12, 537-541], donde el nivel de expresion se correlaciona con el grado de malignidad [Yamaguchi, K.; Richardson, M. D.; Bigner, D. D.; Kwata, M. M. Cancer Chemother. Pharmacol. 2005, 56, 585].

Los primeros disenos de los antagonistas de los receptores NK1 basados sobre la estructura de la SP, han dado lugar a compuestos con estructura peptldica cuyas afinidades eran muy

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bajas y estabilidades metabolicas reducidas [(a) Enberg, G.; Svensson, T. H.; Rosell, S.; Folkers, K. Nature 1981, 293, 222. (b) Folkers, K., Hakanson, R.; Horig, J.; Jie-Cheng, X.; Leander, S.. Br. J. Pharmacol. 1984, 83, 449. (c) Folkers, K.; Feng, D. M.; Asano, N.; Hakanson, R.; Wiesenfeld-Hallin, Z.; Leander, S. Spantide II. Proc. Natl. Acad. Sci. USA

1990, 87, 4833]. El descubrimiento a principios de la decada de los 90 del siglo pasado del primer antagonista no-peptldico de los receptores NK1, el CP-96345 [Snider, R. M.; Constantine, J. W.; John A. Lowe, J. A.; Kelly P. Longo, K. P.; Lebel, W. S.; Woody, H. A.; Drozda, S. E.; Desai, M. C.; Vinick, F. J. Robin W. Spencer, R. W.; Hess. H.-J. Science

1991, 251, 435] ha impulsado la investigation en esta area, no solo en el ambito academico, sino tambien a nivel industrial, con casi todas las importantes companlas farmaceuticas trabajando en este campo con el objetivo de identificar antagonistas de NK1R selectivos y potentes [(a) Giardina, G. A.; Gagliardi, S.; Martinelli, M. IDrugs, 2003, 6, 758. (b) Huang, S.- C.; Korlipara, V. L. Exp. Pat. Opin. Ther. Pat. 2010, 20, 1019-1045]. Mas de dos decadas de amplios esfuerzos sinteticos y economicos han permitido el descubrimiento de un numero considerable de antagonistas de los receptores NK1 estructuralmente diversos, aunque ninguno de ellos con el exito terapeutico deseado.

Actualmente, tan solo hay un antagonista del receptor NK1 en el mercado, el Aprepitant (Merck), recetado para la prevencion de nauseas y vomitos inducidos por la quimioterapia, [Sankhala, K.K.; Pandya, D.M.; Sarantopoulos, J.; Soefje, S.A.; Giles, F.J.; Chawla, S.P. Exp. Opin. Drug Metbol. Toxicol. 2009, 5, 1607]. La razon principal de este hecho es que la estructura exacta del receptor NK1, que pertenece a la estructuralmente compleja superfamilia de los receptores acoplados a protelna-G, [(a) Kobilka, B. Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 6380. (b) Lefkowitz, R. J. Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 6367] es aun desconocida. Por lo tanto, el diseno y la slntesis de nuevas moleculas no-peptldicas con alta afinidad por el receptor NK1, y preferentemente con una estructura qulmica diferente de los antagonistas de receptores NK1 conocidos, es un area importante en la qulmica medica moderna.

Description de la invention

Un primer aspecto de la invencion se refiere a un compuesto de formula general I,

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imagen1

Formula general I

o uno cualquiera de sus posibles estereoisomeros, o una sal farmaceuticamente aceptable

de cualquiera de los anteriores, donde:

- Ra se selecciona entre H y CH2OR1, donde R1 se selecciona a su vez entre

hidrogeno,

un grupo alquilo C1-C20,

un grupo arilo C6-C20,

un grupo COR1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc- butilo y fenilo,

un grupo que junto a R2 forma un ciclo, y

un grupo SiR’R’’R’’’, donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, terc-butilo y fenilo;

- Rb se selecciona independientemente entre un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6- C20, OH y un grupo de formula II, donde Z se selecciona entre O y S, y el carbono contiguo a Z es quiral y puede tener la configuration R o S, preferiblemente es R;

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- X se selecciona entre OR3, NR4R5 y una cadena heteroclclica de 3 a 15 miembros, donde:

• R3 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, un grupo acilo, un grupo alquilsulfonilo, un grupo arilsulfonilo, un grupo de formula III, un grupo de formula IV, un grupo de formula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20, y un grupo que junto a R2 forma un ciclo;

• R4 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20;

• R5 se selecciona entre H, un grupo de formula III, un grupo de formula IV y un grupo de formula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20;

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formula III formula IV formula V

- Y se selecciona entre O, S y NH; y

- R2 es H, o forma un ciclo de 5 o 6 eslabones junto a R1 o R3, de tal manera que en dicho ciclo el O contiguo a R2 se encuentra separado del O contiguo a R1 o R3 por al menos un atomo de C que consiste en -C(R6)(R7)-, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.

El termino "alquilo” o "grupo alquilo” se refiere, en la presente invencion, a cadenas carbonadas alifaticas, lineales o ramificadas, saturadas o insaturadas, clclicas o heteroclclicas, que pueden tener de 1 a 50 atomos de carbono, preferiblemente estas cadenas tienen entre 1 y 20 atomos de carbono, mas preferiblemente de entre 1 y 15, o de entre 1 y 8, o de entre 1 y 6, o de entre 1 y 4 atomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo tal como se refieren en la invencion son, pero sin limitarse, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, n-pentilo, vinilo, etinilo, 1- o 2-propenilo, 1- o 2-propinilo, ciclopropilo, ciciclohexilo, 4-piperidinilo, e incluye ademas otros grupos preferidos como metilo, etilo o terc-butilo. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o mas sustituyentes tales como, pero sin limitarse a, COOH, SO4H o PO4H2.

El termino "cadena lineal” se refiere en la presente invencion a una cadena formada por un numero comprendido entre 1 y 20 atomos de carbono unidos entre si mediante enlaces covalentes C-C, complementada su estructura con uniones a hidrogenos.

El termino "cadena ramificada” se refiere en la presente invencion a una cadena carbonada, en la que existe al menos 1 atomo de carbono adicional enlazado a alguno de los atomos que constituye dicha cadena.

El termino "cadena saturada” se refiere en la presente invencion a una cadena carbonada en la que no hay ningun doble o triple enlace.

El termino "cadena insaturada” se refiere en la presente invencion a cadenas carbonadas en las que existe al menos un doble o triple enlace C-C.

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El termino "cadena dclica” se refiere en la presente invencion a una cadena formada por un numero comprendido entre 3 y 8 atomos de carbono con estructura de anillo, que se puede considerar el resultado de eliminar un hidrogeno del carbono terminal de una cadena lineal y unirlo al primer carbono de la cadena.

El termino "cadena heterodclica” se refiere en la presente invencion a una cadena monoclclica, biclclica o triclclica de 3 a 15 miembros, que comprende atomos de carbono y al menos un heteroatomo seleccionado del grupo que consiste en nitrogeno, oxlgeno y azufre, y que esta insaturada, saturada o parcialmente saturada. Preferiblemente, la cadena heterodclica tiene de 4 a 8 miembros con uno o mas heteroatomos, mas preferiblemente de 5 a 6 miembros con uno o mas heteroatomos, y aun mas preferiblemente de 1 a 3 heteroatomos. Para el proposito de esta invencion el heterociclo puede ser un sistema monoclclico, biclclico o triclclico, que puede incluir anillos fusionados. Los atomos de nitrogeno, carbono y azufre del radical heteroclclico opcionalmente pueden estar oxidados; los atomos de nitrogeno opcionalmente pueden estar cuaternizados y el radical heteroclclico puede estar parcial o totalmente saturado o ser aromatico. Ejemplos de heterociclos pueden ser, no limitativamente: tetrahidrofurano, dioxano, piperidina y 1,2,3-triazol.

El termino "arilo” se refiere, en la presente invencion, a cadenas clclicas aromaticas o heteroclclicas aromaticas de entre 6 y 20 atomos de carbono. El termino "cadena dclica aromatica” se refiere en la presente invencion a una cadena carbonada constituida por sistemas monoclclicos o policlclicos de naturaleza aromatica. El termino "cadena heterodclica aromatica” se refiere en la presente invencion a una cadena dclica aromatica en las que uno o mas atomos del ciclo es un heteroatomo seleccionado entre N, O y S. Los grupos arilo son por ejemplo, pero sin limitarse a, fenilo o naftilo. Preferiblemente el grupo arilo tiene de 6 a 10 atomos de carbono, y mas preferiblemente el grupo arilo es un fenilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o mas sustituyentes tales como metilo, metoxi, fluor y trifluorometilo. Radicales arilo sustituidos son por ejemplo, pero sin limitarse a, tolilo o p-fluorofenilo.

El termino "acilo” se refiere a un grupo COR3a donde R3a puede ser un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20,.

Los terminos "alquilsulfonilo” y "arilsulfonilo” hacen referencia a un grupo SO2R3a, donde R3a puede ser, respectivamente, un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20.

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Debe entenderse que el termino "sal farmaceuticamente aceptable" se refiere, en esta solicitud de patente, a aquella sal que cuando se administra a un receptor es capaz de proporcionar (directamente o indirectamente) un compuesto segun se describe en el presente documento. Sin embargo, se apreciara que las sales farmaceuticamente no aceptables tambien estan dentro del alcance de la invencion ya que estas pueden ser utiles, por ejemplo, en la preparacion de sales farmaceuticamente aceptables. La preparacion de sales puede llevarse a cabo mediante metodos conocidos en la tecnica.

Segun la presente memoria, las sales farmaceuticamente aceptables de compuestos previstos en el presente documento, se pueden sintentizar mediante metodos qulmicos convencionales a partir de un compuesto inicial que contiene un resto basico o acido. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las formas de acido o base libre de los compuestos con una cantidad estequiometrica de la base o acido apropiado en agua o en un disolvente organico o en una mezcla de los dos. Generalmente, se prefieren medios no acuosos como eter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Ejemplos de sales de adicion de acidos incluyen sales de adicion de acido mineral tales como, por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, nitrato, fosfato y sales de adicion de acido organico tales como, por ejemplo, acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, malato, mandelato, metanosulfonato y p- toluenosulfonato. Ejemplos de sales de adicion de bases incluyen sales inorganicas tales como, por ejemplo, sales de sodio, potasio, calcio, amonio, magnesio, aluminio y litio, y sales de bases organicas tales como, por ejemplo, etilendiamina, etanolamina, N,N- dialquiletanolamina, trietanolamina, glucamina y sales de aminoacidos basicos.

En una realization preferida, el compuesto de formula general I que se describe en esta solicitud de patente es un compuesto donde Rb es un grupo de formula II, en el que Z se selecciona entre O y S.

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En este grupo de formula II, el carbono contiguo a Z es quiral y puede tener la configuration R o S, preferiblemente es R, de tal manera que dicho compuesto tiene la siguiente formula general:

C F 3

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Formula Ia

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donde Z, Y, X, Ra y R2 se definen como se ha indicado anteriormente.

En una realization aun mas preferida, el compuesto de formula general I de la presente invention es un compuesto de formula la donde Z es O.

En una realizacion preferida, el compuesto de formula general I o la segun cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde Y es O.

En una realizacion preferida, el compuesto de formula general I o Ia segun cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde X es OR3, y R3 tiene el significado indicado anteriormente.

En una realizacion preferida, el compuesto de formula general I o Ia segun cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde Ra es CH2OR1 y R2 forma un ciclo junto a R1, donde el atomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del atomo de O contiguo a R1 por un grupo -C(R6)(R7)-, de manera que R2 forma un ciclo de 6 eslabones junto a R1, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1- C20 y un grupo arilo C6-C20 Preferiblemente, el grupo -C(R6)(R7)- es un grupo seleccionado entre -C(CH3)2- y -CH(C6^) -.

En una realizacion preferida, el compuesto de formula general I o Ia segun una cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde Ra es CH2OR1, R1 y R2 forman un ciclo, y X es OH.

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En una realization preferida, el compuesto de formula general I o la segun cualquiera de las realizaciones que se describen en esta solicitud de patente, es un compuesto donde X es OR3 y R2 forma un ciclo junto a R3, donde el atomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del atomo de O contiguo a R3 por un grupo -C(R6)(R7)-, de manera que R2 forma un ciclo de 5 eslabones junto a R3, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20. Preferiblemente, el grupo - C(R6)(R7)- es un grupo seleccionado entre -C(CH3)2- y -CH(C6H5) -.

En una realization preferida, el compuesto de formula general I o la segun cualquiera de las realizaciones que se describen en esta solicitud de patente, es un compuesto donde X es OR3, R3 y R2 forman un ciclo, en particular un ciclo tal como se ha descrito en el parrafo anterior, y Ra puede ser H, o un grupo CH2OH opcionalmente protegido con un grupo protector de alcoholes tal como son los eteres de sililo [por ejemplo, terc-butildifenilsililo (TDBPS)]. Preferentemente Ra es H.

En una realization preferida, el compuesto de formula general I o la es un compuesto donde X es OH y R2 es H, donde el resto de sustituyentes pueden tener el significado que se describe en cualquiera de las realizaciones que se describen en la presente solicitud de patente.

En una realization aun mas preferida, el compuesto de formula general I o la es un compuesto donde X es OH, R2 es H y Ra se selecciona entre H y CH2OH.

En una realizacion preferida, el compuesto de formula general I se selecciona del grupo que consiste en:

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j)

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Segun la presente description, cualquiera de los compuestos definidos anteriormente, es decir aquellos compuestos que responden a la formula general I, incluyendo cualquiera de

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las realizaciones o ejemplos preferidos, pueden ser igualmente referidos en esta memoria como “compuesto o compuestos de la invencion”.

Los compuestos de la invencion son analogos del aprepitant y se ha comprobado que presentan actividad antagonista de los receptores NK-1 y actividad anticancerosa. Asl, los compuestos de formula general I, y sus sales farmaceuticamente aceptables, pueden ser de utilidad en medicina, para prevenir y/o tratar distintas enfermedades.

Un segundo aspecto de la invencion se refiere a una composition farmaceutica que comprende al menos un compuesto de la invencion (incluyendo al compuesto de formula general I o alguna cualquiera de sus realizaciones preferidas), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, preferiblemente en una cantidad terapeuticamente eficaz. En adelante, dicha composicion farmaceutica puede ser igualmente referida como “composicion farmaceutica de la invencion”.

La composicion puede, por ejemplo, comprender a su vez al menos un adyuvante o vehlculo farmaceuticamente aceptable, y/o al menos otro principio activo farmaceuticamente aceptable u otro excipiente conocido en el campo ademas del compuesto de formula I, para dar lugar a una composicion farmaceutica o medicamento que puede ingerir un individuo. La preparacion de dicha composicion farmaceutica puede llevarse a cabo mediante metodos convencionales conocidos por los expertos en la materia. Para su aplicacion en terapia, los compuestos de formula I se encontraran, preferentemente, en una composicion farmaceutica o forma farmaceuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmaceuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmaceuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado toxico a niveles de dosificacion normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, mas preferiblemente superiores al 70%, y todavla mas preferiblemente superiores al 90%. En una realization preferida, son superiores al 95% de compuesto de formula I.

Los adyuvantes y vehlculos farmaceuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehlculos conocidos por los tecnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboracion de composiciones terapeuticas.

Los compuestos de formula I descritos en la presente invencion, asl como las composiciones farmaceuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros

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farmacos, o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia de combination. Dichos farmacos adicionales pueden formar parte de la misma composition farmaceutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composition separada para su administration simultanea o no a la de la composition farmaceutica que comprende un compuesto de formula I.

En otra realization particular, dicha composition farmaceutica se prepara en una forma de composition solida o en una suspension acuosa, en un diluyente farmaceuticamente aceptable. La composition terapeutica proporcionada por esta invention puede ser administrada por cualquier via de administration apropiada, para lo cual dicha composition se formulara en la forma farmaceutica adecuada a la via de administration elegida. En una realization particular, la administration de la composition terapeutica proporcionada por esta invention se efectua por via oral, topica, rectal o parenteral (incluyendo subcutanea, intraperitoneal, intradermica, intramuscular, intravenosa, etc.).

La cantidad de compuesto de la invention, o de sus sales farmaceuticamente aceptables, terapeuticamente eficaz que debe administrarse (tambien referida en la presente description como cantidad terapeuticamente eficaz o efectiva), asl como su dosificacion para tratar un estado patologico con dichos compuestos, dependera de numerosos factores, entre los que se encuentra la edad, el estado del paciente, la severidad de la enfermedad, la ruta y frecuencia de administracion, el compuesto modulador a utilizar, etc.

Otro aspecto de la invention se refiere al uso de al menos un compuesto de la invention, o de una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en cualquiera de sus realizaciones y alternativas, y de las composiciones que lo comprenden, para la fabrication de una composition farmaceutica o un medicamento. Debe entenderse de la presente invention que cualquiera de estos usos en el ambito de la medicina se refieren tambien, y analogamente, a un compuesto de formula general I como el aqul descrito para su uso en medicina, asl como a un metodo, como puede ser de administration, del compuesto para la prevention y tratamiento de enfermedades. Asimismo, engloba esta invention el uso de un compuesto de formula general I para preparar una composition para su uso en medicina, en cualquiera de los casos que se van a comentar.

El compuesto de formula I de la invention, asl como la composition farmaceutica que comprende alguno de estos compuestos, pueden servir para tratamiento y/o prevention de una enfermedad, tal como puede ser, y sin limitarse a, una enfermedad relacionada con el

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sistema nervioso (preferentemente alteraciones o trastornos del sistema nervioso central tales como enfermedad de Parkinson, ansiedad y depresion), artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, cancer, adherencia abdominal post-quirurgica, migrana, inflamacion, una enfermedad pulmonar cronica, incluyendo el EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva cronica) y el asma bronquial, apnea obstructiva del sueno, una desregulacion de la funcion cardiaca, trombosis arterial, osteoporosis, obesidad, resistencia a insulina, enfermedad de Crohn, la nausea y el vomito.

Dentro de las enfermedades relacionadas con el sistema nervioso que pueden tratarse y/o prevenirse con dichos compuestos o composiciones se incluye la esquizofrenia, la enfermedad de Parkinson, el estres, la ansiedad, la depresion, la rabia, la psoriasis y el dolor patologico, tal como puede ser el dolor derivado de la inflamacion, de una lesion persistente, degenerativa y/o neuropatica.

Dentro de los tipos de cancer que pueden tratarse y/o prevenirse con dichos compuestos o composiciones se incluye por ejemplo: melanoma, neuroblastoma, glioma, linfoma de Hodgkin, leucemia linfoblastica, rabdomiosarcoma, linfoma de burkit, carcinoma de pulmon, sarcoma de Edwing, osteosarcoma, ganglioma maligno, melanoma maligno invasivo, celula metastasica de melanoma y cancer de mama.

Otro aspecto de la presente invention se refiere al procedimiento de obtencion de un compuesto de formula general I como se describe, en cualquiera de sus variantes, que comprende al menos las siguientes etapas:

a. Obtener un tioglicosido de formula VIII, donde Ra se define tal como se indica para un compuesto de formula I, R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, X’ se selecciona entre un grupo OH y un grupo N3, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH;

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b. Hacer reaccionar el tioglicosido de formula VIII con reactivos de protection de

alcoholes tales como, por ejemplo, haluro de trialquilsililo, haluro de dialquil aril sililo,

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dialquilcetonas o sus dialquilacetales, arilaldehidos o sus dialquilacetales u oxido de dialquilestano; esta reaccion puede tener lugar en una o varias etapas, para obtener el compuesto de formula IX, donde unicamente el grupo en posicion 2 del carbohidrato esta desprotegido;

donde:

- A’’ se selecciona entre H y CH2OP1, donde P1 se selecciona entre

un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20,

un grupo COP1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc- butilo y fenilo,

un grupo que junto a P2 forma un ciclo, y

un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

- R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20,

- X’’ se selecciona entre un grupo N3 y un grupo OP3, donde P3 es un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P2,

- Y se selecciona entre O, S y NH,

- P2 se selecciona entre

un grupo SiR’R’’R’’’ donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

un grupo que forma un ciclo de 6 eslabones junto a P1, y un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P3,

de tal manera que en el ciclo el O contiguo a P2 se encuentra separado del O contiguo a P1 o P3 por un atomo de C que consiste en -C(R6)(R7)-, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-

c. Hacer reaccionar el compuesto de formula IX con un haluro o un tosilato de p- fluorobencilo para obtener el compuesto de formula X, en donde A’’, R, X’’ y P2 se definen como anteriormente, e Y se selecciona entre O, S y NH;

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X"

formula IX

C20;

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imagen18

formula X

F

d. Transformar el compuesto X obtenido en la etapa anterior en un compuesto donador de glicosilo de formula XI, donde W se selecciona entre OH, un grupo sulfoxido SOR, un grupo fosfito O(OR)2, y un grupo tricloracetimidato; y

imagen19

F

e. Transformar el compuesto XI obtenido en la etapa anterior en un compuesto de formula general I tal como se describe en cualquiera de las realizaciones de esta solicitud de patente, a traves de una reaccion de glicosidacion.

La transformation del compuesto XI en el compuesto de formula I (etapa e) puede realizarse mediante un proceso de varias etapas que comprende una reaccion de glicosidacion, preferentemente pero sin limitarse, a traves de la metodologla del tricloroacetimidato, y varios procesos de protection y desproteccion de los grupos en position 3, 4, 5 y 6 del anillo tetrahidropiranilo.

En una realization preferida, el procedimiento de obtencion del compuesto de formula general I, conforme a aquellas realizaciones descritas en esta solicitud de patente donde Rb es el grupo de formula II, comprende hacer reaccionar el compuesto XI con 2,2,2- tricloroacetonitrilo, en presencia de cantidades catallticas de 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7- eno (DBU); y posteriormente hacer reaccionar el producto que se obtiene con 1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etanol y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo.

En otras realizaciones preferidas, el procedimiento de obtencion del compuesto de formula I tal como se describe en esta solicitud de patente adicionalmente comprende la proteccion y/o desproteccion selectiva de grupos en posicion 3, 4, 5 y/o 6 del anillo tetrahidropiranilo.

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En otras realizaciones preferidas alternativas, el procedimiento comprende adicionalmente la reduction y/o alquilacion, acilacion o reaction 1,3-dipolar de Huisgen para obtener compuestos de formula I donde X es NR4R5 o una cadena heteroclclica.

En una realization preferida, el procedimiento de obtencion del compuesto de formula I tal como se describe en esta solicitud de patente, ademas comprende al menos una de las siguientes etapas:

f. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa e del procedimiento con un agente reductor de azidas, cuando en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de formula VIII donde X’ es un grupo N3;

g. Hacer reaccionar compuesto obtenido en cualquiera de las etapas e o f con fluoruro de tetrabutil amonio en THF;

h. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas e, f o g con una cantidad catalltica de acido 10-camforsulfonico en metanol;

i. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas g o h con un dimetoximetil derivado de formula CH3O-C(R6)(R7)-OCH3, en donde R6 y R7 se definen tal como se indica para un compuesto de formula I, si en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de formula VIII donde Ra es CH2OH;

j. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas f, g o h, con un haluro de alquilo de formula R8-X o un haluro de acilo de formula R9-CO-X, en donde R8 es un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, o un grupo de formula III o de formula IV segun se define para un compuesto de formula I, y donde R9 es un grupo de formula V segun se define como para un compuesto de formula I.

En una realizacion preferida, la obtencion del tioglicosido de formula VIII donde X' es OH (etapa a) en el procedimiento de obtencion del compuesto de formula general I que se describe en esta solicitud de patente comprende:

a.1. Hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado con formula VI, donde Ra se define tal como se ha indicado anteriormente, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH;

Ra .O AcO

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OAc

OAc

YAc

formula VI 17

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con un tiol que tiene una formula RSH, donde R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, en presencia de un callizador tipo acido de Lewis, tal como, por ejemplo acido trifuloroboroeterato o trimetilsililo triflurometanosulfonato, para obtener un tioglicosido que tiene la formula VII, donde Ra, Y y R tienen el mismo significado establecido anteriormente;

a.2. Obtener el tioglicosico de formula VIII mediante reaccion de desacetilacion del tioglicosido peracetilado de formula VII con catalisis acida o basica.

La presente solicitud de patente tambien se refiere a un procedimeinto alternativo para la obtencion del compuesto de formula I de la invention. Este procedimento comprende:

a. Obtener, preferentemente segun las etapas a.1 y a.2 descritas anteriormente, un tioglicosido de VIIIa, donde Ra se define tal como se ha descrito en relation a un compuesto de formula I, R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH.

b1. Derivatizar de forma selectiva el grupo hidroxilo en la position 3 del anillo, en una o varias etapas. Preferentemente, la derivatizacion comprende la formation del derivado de dioxaestannileno intermedio entre los hidroxilos de las posiciones 3 y 4, y posterior apertura del mismo por tratamiento con un reactivo electrofilo, por ejemplo, con haluros (cloruros, bromuros o yoduros) de alquilo, haluros de acilo, o haluros o anhldridos de alquil o arilsulfonilo, para obtener un compuesto de formula XII:

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OAc

formula VII

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OH

focr mula VIIIa

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S-R YH

OR3 formula XII

donde Ra se define como anteriormente, R se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20 y arilo C6-C20, R3 se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20, arilo C6-C20, acilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, un grupo de formula III, un grupo de formula IV y un grupo de formula V.

b2. Hacer reaccionar el tioglicosido de formula XII con reactivos de protection de alcoholes tales como, por ejemplo, haluro de trialquilsililo, haluro de dialquil aril sililo, dialquilcetonas o sus dialquilacetales, arilaldehidos o sus dialquilacetales u oxido de dialquilestano; esta reaction puede tener lugar en una o varias etapas, para obtener el compuesto de formula XII, donde unicamente el grupo en position 2 del carbohidrato esta desprotegido;

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formula XIII

donde:

- A’’ se selecciona entre H y CH2OP1, donde P1 se selecciona entre

un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20,

un grupo COP1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc- butilo y fenilo,

un grupo que junto a P2 forma un ciclo, y

un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

- R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20,

- R3 se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20, arilo C6-C20, acilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, un grupo de formula III, un grupo de formula IV y un grupo de formula V;

- Y es un grupo O, S o NH,

- P2 se selecciona entre

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un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, te/f-butilo y fenilo, y

un grupo que forma un ciclo de 6 eslabones junto a P1, de tal manera que en dicho ciclo el O contiguo a P2 se encuentra separado del O contiguo a P1 por un atomo de C que consiste en -C(R6)(R7)-, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20;

c'. Hacer reaccionar el compuesto de formula XIII con un haluro o un tosilato de p- fluorobencilo para obtener el compuesto de formula XIV, en donde A’’, R, R3 y P2 se definen como anteriormente, e Y se selecciona entre O, S y NH;

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formula XIV

d'. Transformar el compuesto XIV obtenido en la etapa anterior en un compuesto donador de glicosilo de formula XV, donde W se selecciona entre OH, un grupo sulfoxido SOR, un grupo fosfito O(OR)2, y un grupo tricloracetimidato;

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F

e'. Transformar el compuesto XV obtenido en la etapa anterior en un compuesto de formula general I tal como se describe en la presente solicitud de patente, a traves de una reaccion de glicosidacion.

La transformation del compuesto XV en el compuesto de formula I (etapa e') puede realizarse mediante un proceso de varias etapas que comprende una reaction de glicosidacion, preferentemente pero sin limitarse, a traves de la metodologla del tricloroacetimidato, y varios procesos de protection y desproteccion de los grupos en position 3, 4, 5 y 6 del anillo tetrahidropiranilo.

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Breve descripcion de las figuras

FIG 1. Secuencia de aminoacidos que componen la sustancia P (SP).

FIG 2. Curvas dosis-respuesta de los antagonistas NK-1 de referencia CP-96345 y L- 732,138 determinadas por inhibicion de la sustancia P (SP) a traves del test IPone.

FIG 3. Curvas dosis-respuesta de los derivados 2, 4 y 5 determinadas por inhibicion de la sustancia P (SP) a traves del test IPone.

FIG 4. Datos de inhibicion de la actividad de la SP con los derivados 3, 6 y de los antagonistas de referencia CP-96345 y L-732,138, obtenidos a una concentration del ligando de 10"6M.

Ejemplos

EJEMPLO 1. Procedimiento de obtencion de compuestos de formula XIV.

1.1. Preparation de tioglicosidos.

Fenil 2,3,4,6-tetra-0-acetil-1-tio-p-D-galactopiranosido, 12

Ac0^r°YSPh Accry ''OAc

OAc

12

Sobre una disolucion de pentaacetato de D-galactosa (3,90 g, 10,00 mmol) en diclorometano anhidro (40 mL), a 0°C, se adiciona gota a gota trifluoruro de boro eterato (5,00 mL, 40 mmol). Tras 15 min. de agitation a temperatura ambiente se anade bencenotiol (1,07 mL, 10,50 mmol). La reaction se mantiene bajo agitacion a temperatura ambiente durante una noche tras lo cual se observa mediante cromatografla en capa fina que se consume el producto de partida. A continuation, se adiciona una disolucion acuosa saturada de NaHCO3, se separan las dos fases y se extrae la fase acuosa con CH2Cl2 (2x40mL) y los

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extractos organicos reunidos se lavan con disolucion saturada de NaCl. La fase organica se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora a vado. El residuo obtenido es de un alto grado de pureza aunque se purifica mediante cromatografia en columna, usando acetato de etilo-hexano en proporcion 1:4 como eluyente, obteniendose el producto 12 (3,96 g, 9,00 mmol) como un solido blanco con un rendimiento del 90%. P.f.: 115-116°C.1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.52-7.50 (m, 2H), 7.32-7.31 (m, 3H), 5.42 (d, J=2.7 Hz, 1H), 5.24 (t, J=10.0 Hz, 1H), 5.05 (dd, J=3.3 y 9.9 Hz, 1H), 4.72 (d, J=, 10.0 Hz, 1H), 4.19 (dd, J=6.9 y 11.4 Hz, 1H), 4.12 (dd, J=6.2 y 11.3 Hz, 1H), 3.94 (t, J=6.9 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.97 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCh) 5 170.5, 170.4, 170.2, 169.6,

132.7, 132.6, 129.0, 128.3, 86.8, 72.1, 67.3, 67.4, 61.8, 21.0, 20.8. EMAR: calculado para C20H25O9S: [M+H]+ 441.1219 encontrado 441.1200 (-4.4 ppm).

Fenil 2,3,4-tri-0-acetil-1-tio-a-L-arabinopiranosido, 13.

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparation de 12, partiendo de tetraacetato de p-L-arabinosa (5,24 g, 16,48 mmol), trifluoruro de boro eterato (8,27 mL, 65,90 mmol) y bencenotiol (1,77 mL, 17,30 mmol), obteniendo el producto 10 (6,00 g, 16,30 mmol) como un aceite de color naranja con rendimiento cuantitativo, que se utiliza directamente en la reaction siguiente sin purification previa. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.49-7.47 (m, 2H), 7.29-7.24 (m, 3H), 5.26-5.24 (m, 1H), 5.22 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.11 (dd, J=3.4 y 8.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J=, 7.9 Hz, 1H), 4.10 (dd, J=3.6 y 12.3 Hz, 1H), 3.65 (dd, J=1.9 y 12.7 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.98 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 169.8, 169.5, 169.0, 132.0, 129.1, 128.8, 128.7, 127.7, 125.2, 86.3, 70.3, 68.3,

67.4, 65.1, 20.6, 20.5, 20.3. [a]20D: +24.70 (c 1, cloroformo).

1.2. Desacetilacion Zemplen para la sintesis de derivados polihidroxilados.

Fenil 1-tio-p-D-galactopiranosido, 14

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OAc

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i 'r

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14

Sobre una disolucion del compuesto 12 (3,96 g, 9,00 mmol) en metanol (45 mL) se adiciona otra de metoxido de sodio 1 M en metanol (36 mL, 3,60 mmol). Tras agitar durante 30 min., la reaccion se neutraliza con resina acida y se filtra obteniendose el producto 14 (2,40 g, 8,82 mmol) como un solido blanco con un rendimiento cuantitativo, que es utilizado directamente en la siguiente reaccion sin necesidad de purificar. P.f.: 114-115°C. 1H-RMN (500MHz, MeOD): 5 7.56-7.54 (m, 2H), 7.30-7.27 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 4.59 (d, J=9.8 Hz, 1H), 3.90 (d, J=3.0 Hz, 1H), 3.78-3.74 (m, 1H), 3.72-3.69 (m, 1H), 3.61 (t, J=9.5 Hz, 1H), 3.57 (t, J=6.1 Hz, 1H), 3.50 (dd, J=3.3 y 9.2 Hz, 1H). 13C RMN (500 MHz, MeOD) 5 136.1,

132.2, 129.8, 128.0, 90.3, 80.6, 76.4, 71.0, 70.4, 62.6. EMAR: calculado para C12H16O5NaS: [M+Na]+ 295.0616 encontrado 295.0605 (3.6 ppm).

Fenil 1-tio-a-L-arabinopiranosido, 15.

SPh

OH OH

15

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparacion de 14, partiendo de 13 (6,00 g, 16,30 mmol) y metoxido sodico en metanol 1M (10,00 mL, 10,00 mmol), obteniendo 15 (3,91 g, 16,15 mmol) como un solido rojo con rendimiento cuantitivo y se utiliza directamente en la siguiente reaccion sin purification previa. P.f.: 114-115°C. 1H- RMN (500MHz, MeOD): 5 7.53-7.50 (m, 2H), 7.31-7.22 (m, 3H), 4.64 (d, J=8.1 Hz, 1H), 3.98 (dd, J=3.6 y 12.2 Hz, 1H), 3.89 (td, J=1.9 y 3,4 Hz, 1H), 3.70 (t, J=8.2 Hz, 1H), 3.60-6.56 (m, 2H). 13C RMN (500 MHz, MeOD) 5 136.1, 132.4, 129.8, 128.1, 90.4, 74.9, 71.6, 69.5 (2). [a]20D: +15.05 (c 1, cloroformo).

1.3. Preparacion de 3,4-O-isopropiliden-acetales.

Fenil 3,4-0-isopropiliden-1-tio-p-D-galactopiranosido, 16.

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Sobre una suspension del derivado polihidroxilado 14 (2,21 g, 8,12 mmol) en 60 mL de 2,2- dimetoxipropano (2,2-DMP), a temperatura ambiente y bajo atmosfera de argon, se adiciona una cantidad catalltica de acido 10-camforsulfonico (CSA) (60,35 mg, 0,26 mmol) y la mezcla se deja agitando durante 48 horas. Transcurrido ese tiempo, la reaccion se neutraliza con trietilamina, se filtra para eliminar la sal de amonio formada y el disolvente se evapora a vaclo. El residuo obtenido se disuelve en la minima cantidad posible de tolueno y se evapora a vaclo, tras repetir este proceso dos veces, se obtiene el acetal mixto, junto con una pequena cantidad del diol deseado. El crudo obtenido se disuelve en la minima cantidad posible de metanol, se trata con una cantidad catalltica de CSA (60,35 mg, 0,26 mmol) a 0°C y se agita a temperatura ambiente durante 5 min. A continuation se neutraliza con trietilamina, se filtra la sal de amonio formada y el disolvente se evapora a vaclo. El residuo obtenido se disuelve en tolueno y se evapora repitiendose este proceso dos veces, obteniendo 16 (2,16 g, 6,92 mmol) como un solido blanco con un rendimiento del 85%. P.f.: 92-93°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.48-7.46 (m, 2H), 7.25-7.18 (m, 3H), 4.45 (d, J=10.0 Hz, 1H), 4.08-4.03 (m, 2H), 3.91-3.87 (m, 1H), 3.81-3.78 (m, 1H), 3.76-3.72 (m, 1H), 3.58 (bs, 1H), 3.55-3.51 (m, 1H), 3.17 (bs, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.26 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 132.5, 131.7, 128.8, 127.5, 110.0, 87.1, 79.3, 76.9, 73.6, 71.2, 62.0, 27.8, 26.1. EMAR: calculado para C15H21O5S: [M+H]+ 313.1110 encontrado 313.1107 (-0.9 ppm).

Fenil 3,4-0-isopropiliden-1-tio-a-L-arabinopiranosido, 17.

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Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparation de 16, partiendo de 15 (3,91 g, 16,15 mmol), 2,2-dimetoxipropano (120 mL, 969,00 mmol) y acido 10-canforsulfonico (0,26 mg, 1,13 mmol), obteniendo el producto 17 (3,85 g, 13,63 mmol)

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como un solido blanco con un rendimiento del 85%. P.f.: 92-93°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.56-7.53 (m, 2H), 7.33-7.28 (m, 3H), 4.53 (d, J=9.2 Hz, 1H), 4.28-4.24 (m, 2H), 4.14-4.19 (m, 1H), 3.82-3.78 (m, 1H), 3.67-3.36 (m, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H).13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 132.8, 129.1, 128.2, 110.3, 88.3, 78.3, 73.0, 71.7, 65.8, 28.0. [a]20D: +17.56 (c 1, cloroformo).

1.4. Proteccion selectiva del hidroxilo primario.

Fenil 3,4-0-isopropiliden-6-O-terc-butildifenilsilil-1-tio-p-D-galactopiran6sido, 18

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Sobre una disolucion de 16 (103,10 mg, 0,33 mmol) en DMF (66,20 mL, 2 mL/mmol 13) se adiciona cloruro de te/f-butildifenilsilano (TBDPSCl) (0,11 mL, 0,41 mmol) e imidazol (56,34 mg, 0,83 mmol). Tras agitar durante 5 horas, la reaccion se diluye con acetato de etilo (20 mL), se neutraliza con disolucion saturada de NH4Cl y la fase acuosa se extrae con n- pentano (3x20mL). Los extractos organicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vaclo. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografla en columna, usando acetato de etilo-hexano en proportion 1:4. Se obtiene el producto 15 (174,49 mg, 0,32 mmol) como un solido blanco con un rendimiento del 96%. P.f.: 50°C. 1H- RMN (500MHz, CDCfe): 5 7.73-7.70 (m, 4H), 7.54-7.53 (m, 2H), 7.45-7.35 (m, 6H), 7.28-7.27 (m, 3H), 4.44 (d, J=10.3 Hz, 1H), 4.28 (dd, J=1.9 y 5.4 Hz, 1H), 4.08 (t, J=6.2 Hz, 1H), 4.003.89 (m, 3H), 3.55 (ddd, J=2.2, 7.1 y 10.1 Hz, 1H), 1.41 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.06 (s, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCh) 5 135.8, 134.9, 133.5, 133.4, 132.6, 132.4, 129.9, 129.2, 128.1, 127.9, 127.8, 110.3, 88.5, 79.1, 76.9, 73.4, 71.7, 63.1, 28.3, 26.9, 26.7, 26.4, 19.4. EMAR: calculado para C31H38O5SSiNa: [M+Na]+ 573.2107 encontrado 573.2123 (2.8 ppm).

1.5. Reaccion del hidroxilo en posicion 2 con p-fluorobencil derivados.

Fenil 2-0-(p-fluorobencil)-3,4-0-isopropiliden-6-0-terc-butildifenilsilil-1-tio-p-D- galactopiranosido, 19

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TBDPSC

imagen33

F

Sobre una disolucion de 18 (4,00 g, 6,07 mmol) en THF (80 mL) se anade otra de hidruro de sodio (0,73 g, 18,21 mmol) en THF (10 mL) y se deja en agitacion durante 1 hora. Transcurrido ese tiempo se adiciona IN(Bu)4 (0,90 g, 2,43 mmol) y tras 30 min. en agitacion se adiciona una disolucion de cloruro de p-fluorobencilo (1,10 mL, 9,11 mmol) en de THF (5 mL). La reaccion se deja en agitacion durante 48 horas y posteriormente se neutraliza con disolucion acuosa saturada de cloruro de amonio y la fase acuosa se extrae con acetato de etilo (3x40 mL). Los extractos organicos se lavan con disolucion saturada de cloruro de sodio y se secan sobre sulfato de sodio anhidro. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografla en columna usando acetato de etilo-hexano en proporcion 1:8, obteniendose 19 (3,60 g, 5,46 mmol) como un aceite amarillo con un rendimiento del 90%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.78-7.74 (m, 4H), 7.58-7.56 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, 9H), 7.29-7.25 (m, 2H), 7.10-7.04 (m, 2H), 4.84 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.69 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.65 (d, J=9.7 Hz, 1H), 4.34 (dd, J=2.0 y 5.6 Hz, 1H), 4.28 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.03-3.98 (m, 2H), 3.92 (td, J=1.9 y 6.5 Hz, 1H), 3.55 (dd, J=6.4 y 9.7 Hz, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.12 (bs, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.5, (d, JCF=244.1 Hz), 135.8, 135.7, 135.4, 134.9, 134.0, 133.9, (d, Jcf=3.1 Hz), 133.5 (2C), 131.8, 130.1, (d, JCF=8.4 Hz), 129.8, 129.7, 129.0, 127.8 (2C), 127.4, 115.2 (d, Jcf=21.4 Hz), 110.0, 86.6, 79.8, 78.4, 76.9, 73.6, 72.8, 63.1, 28.0, 26.9,

26.7, 26.4, 19.3. EMAR: calculado para C38H43O5NaSFSi: [M+Na]+ 681.2482 encontrado 681.2479 (-0.5 ppm).

Fenil 2-0-(p-fluorobencil)-3,4-0-isopropiliden-1-tio-a-L-arabinopiranosido, 20.

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparation de 19, partiendo de 17 (3,85 g, 13,63 mmol), hidruro de sodio (1,00 g, 41,50 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (2,00 g, 5,45 mmol) y cloruro de p-fluorobencilo (2,43 mL, 20,45 mmol), obteniendose 20 (4,60 g, 12,40 mmol) como un aceite amarillo con un rendimiento del 91%.

imagen34

5

10

15

20

25

30

1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.52-7.50 (m, 2H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.31-7.24 (m, 3H), 7.057.00 (m, 2H), 4.79 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.78 (d, J=11.4 Hz, 1H), 4.31-4.28 (m, 1H), 4.23 (t, J=6.1 Hz, 1H), 4.20 (dd, J=3.8 y 13.2 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=3.8 y 13.0 Hz, 1H), 3.59 (dd, J=6.1 y 8.0 Hz, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.6 (d, Jcf=245.7 Hz), 131.1, 133.7 (d, Jcf=3.1 Hz), 132.0, 130.1 (d, Jcf=8.1 Hz), 129.0, 127.6,

115.3 (d, Jcf=21.4 Hz), 110.1, 86.5, 78.4, 72.8, 72.7, 64.9, 27.9, 26.3. [a]20D: -9.95 (c 1, cloroformo).

EJEMPLO 2. Glicosidacion

2.1. Desproteccion selectiva de la posicion anomerica.

2-0-(p-fluorobencil)-3,4-0-isopropiliden-6-0-terc-butildifenilsilil-a,p-D-galactopiranosa, 21

imagen35

Sobre una disolucion de 19 (3,02 g, 4,59 mmol) en acetona (120 mL) al 99%, en ausencia de luz, a -15°C, se adiciona N-bromosuccinimida (NBS) (1,03 g, 5, 78 mmol) y se mantiene en agitacion durante 30 min. Transcurrido ese tiempo, la reaccion se trata con disolucion acuosa saturada de NaHCO3 y la fase acuosa se extrae con diclorometano (3x40mL). Los extractos organicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vaclo. El residuo obtenido se purifica por columna cromatografica usando acetato de etilo- hexano en proporcion 1:8, obteniendose un sirupo amarillo 18 (2,37g, 4,18 mmol) como una mezcla de los dos anomeros a:p en proporcion 2:1 y con un rendimiento del 91%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.71-7.66 (m, 4Ha, 4Hb), 7.43-7.31 (m, 8Ha, 8Hb), 7.05-7.00 (m, 2Ha, 2Hb), 5.15 (dd, J=3.7 y 5.0 Hz, 1Ha), 4.78-4.73 (m, 1Ha, 1Hb), 4.67-4.64 (m, 1Ha, 1Hb), 4.41-4.28 (m, 2Ha, 2Hb), 4.23 (t, J=6.1 Hz, 1Hb), 3.96-3.80 (m, 2Ha, 2Hb), 3.55 (dd, J=7.2 y 5.9 Hz, 1Ha), 3.37 (t, J=6.5 Hz, 1Hb), 2.98 (d, J=6.4 Hz, 1Hb), 2.92 (d, J=4.1 Hz, 1Ha), 1.41 (s, 3Hb), 1.40 (s, 3Ha), 1.36 (s, 3Ha, 3Hb), 1.05 (s, 9Ha, 9Hb). 13C RMN (500 MHz, CDCh) 5

162.7, (d, Jcf=245.6 Hz), 135.8, 135.7 (2C), 133.9, (d, Jcf=3.5 Hz), 133.8, 133.7, 133.6, (d, Jcf=3.2 Hz), 133.6, 133.4, 130.0, (d, Jcf=8.2 Hz), 129.9, (d, Jcf=8.5 Hz), 129.8 (2C), 127.8, 127.7 (2C), 115.5 (d, Jcf=21.3 Hz), 115.3, (d, Jcf=21.1 Hz), 110.0, 109.4, 96.2, 91.0, 80.0, 78.0, 76.3, 74.7, 73.2, 72.9, 72.7, 72.5, 72.1, 68.5, 62.9, 62.8, 27.8, 27.7, 26.9, 26.0, 19.4. EMAR: calculado para C32H39O6NaSiF: [M+Na]+ 589.2398 encontrado 589.2398 (0.1 ppm).

5

10

15

20

25

2-0-(p-fluorobencil)-3,4-0-isopropiliden-a,p-L-arabinopiran6sido, 22.

.OH

imagen36

22

F

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparaci6n de 21, partiendo de 17 (4,60 g, 12,40 mmol) y NBS (8,50 g, 47,23 mmol), obteniendose 22 (3,16 g, 11, 30 mmol) como una mezcla de ambos an6meros a y p, en proporci6n 2:1 como un sirupo de color amarillo, con un rendimiento del 91%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.32-7.26 (m, 2Ha, 2Hb), 6.98-6.94 (m, 2Ha, 2Hb), 5.12 (d, J=2.5 Hz, 1Ha), 4.72-4.69 (m, 1Ha, 2Hb), 4.63-4.60 (m, 1Ha, 1Hb), 4.32 (t, J=6.3 Hz, 1Ha), 4.17-4.10 (m, 2Ha, 3Hb), 3.82 (d, J=13.2 Hz, 1Ha), 3.73 (dd, J=2.9 y 13.2 Hz, 1Hb), 3.49 (dd, J=3.3 y 6.7 Hz, 1Ha), 3.37 (t, J=6.5 Hz, 1Hb), 1.39 (s, 3Hb), 1.38 (s, 3Ha), 1.30 (s, 3Ha, 3Hb). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.5, (d, Jcf=245.6 Hz), 162.4 (d, Jcf=244.8 Hz), 134.0 (d, Jcf=2.9 Hz), 133.7 (d, Jcf=2.9 Hz), 129.9 (d, Jcf=9.4 Hz), 129.8 (d, Jcf=8.3 Hz), 115.3, (d, Jcf=21.1 Hz), 115.1, (d, Jcf=19.8 Hz), 109.9, 109.0, 96.0, 90.9, 80.1, 77.8, 76.4, 74.8, 73.1, 73.0, 72.4, 71.7, 62.7, 60.4, 27.8, 27.7, 26.0, 25.7.

2.2. Formacion del tricloroacetimidato.

Tricloroacetimidato de 2-0-(p-fluorobencil)-3,4-0-isopropiliden-6-0-terc-butildifenilsilil-a,p-D- galactopiran6sido, 23

imagen37

Sobre una disoluci6n de 21 (2,12g, 3,74 mmol) en una mezcla de ciclohexano/diclorometano (50 mL) en proporci6n 4:1 como disolvente se adiciona gota a gota 2,2,2-tricloroacetonitrilo al 98% (0,96 mL, 9,35 mmol) y cantidades catallticas de 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) al 98% (0,23 mL, 1,50 mmol). La reacci6n se deja en agitaci6n durante una noche. Transcurrido ese tiempo, se adiciona agua, la fase organica se lava con disoluci6n acuosa saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se evapora a vaclo.

5

10

15

20

25

Se obtiene un sirupo amarillo de alta pureza 23 (2,58 g, 3,63 mmol) como una mezcla de los dos anomeros a:p en proportion 3:1 y con un rendimiento del 97%. El producto obtenido se utiliza inmediatamente en la siguiente reaction.

Tricloroacetimidato de 2-0-(p-fluorobencil)-3,4-0-isopropiliden-a,p-L-arabinopiranosido, 24.

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparacion de 23, partiendo de 22 (3,16 g, 11,20 mmol), 2,2,2-tricloroacetonitrilo al 98% (2,90 mL, 28,25 mmol) y DBU 98% (0,70 mL, 4,52 mmol), obteniedno el producto 24 (4,85 g, 11,00 mmol) como un aceite amarillo de alta pureza constituido por la mezcla de ambos anomeros a y p con un rendimiento del 97%, que se utiliza directamente en la siguiente reaccion.

2.2. Glicosidacion del tricloroacetimidato.

Derivados de galactosa 25 y 26:

Sobre una disolucion de 23 (0,16g, 0,22 mmol) y (1R)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol (0,17g, 0,67 mmol) en eter (7 mL), bajo atmosfera de argon, con 200 mg de tamiz molecular (4A) y a 0°C, se adiciona trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (2,8 mL, 0,015 mmol). La reaccion se agita durante una hora a temperatura ambiente. Transcurrido ese tiempo, se adiciona NaHCO3, se filtra sobre celita y se evapora el disolvente a vaclo. Se obtiene un sirupo amarillo como una mezcla de los dos anomeros a:p en proporcion 3:1. Tras purification por columna cromatografica usando acetato de etilo-hexano en proporcion 1:15, se obtiene el anomero a (106,51 mg, 0,13 mmol) como producto mayoritario con un rendimiento del 60 % y el anomero minoritario p (48,41 mg, 0,06 mmol) con un rendimiento del 25 %.

Anomero a: (R)-{1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-0-p-fluorobencil-3,4-0-isopropiliden-6- 0-terc-butil difenilsilil-a-D-galactopiranosido, 25

imagen38

imagen39

1H-RMN (500MHz, CDCI3): 5 7.86 (bs, 2H), 7.82 (bs, 1H), 7.73-7.70 (m, 4H), 7.47-7.37 (m, 6H), 7.21-7.18 (m, 2H), 6.97-6.92 (m, 2H), 4.91 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.61 (d, J=3.1 Hz, 2H), 4.58 (d, J=3.6 Hz, 1H), 4.42 (dd, J=5.5 y 7.8 Hz, 1H), 4.29 (dd, J=2.5 y 5.5 Hz, 1H), 4.18 (td, 5 J=2.4 y 6.4 Hz, 1H), 3.98-3.89 (m, 2H), 3.42 (dd, J=3.7 y 7.8 Hz, 1H), 1.49 (d, J=6.6 Hz, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.10 (s, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.5, (d, JCF=244.8 Hz), 145.8, 135.8 (2C), 133.9, (d, JCF=3.2 Hz), 133.7, 133.6, 132.1, (c, JCF=33.5 Hz), 129.9, 129.6, (d, JCF=8.3 Hz), 127.9, 127.8, 126.9 (d, JCF=2.4 Hz), 123.5 (c, JCF=272.9 Hz), 121.8,

115.3 (d, JCF=21.4 Hz), 109.3, 94.9, 76.2, 76.1, 73.5, 72.6, 71.5, 68.9, 63.3, 28.3, 27.0, 26.5, 10 24.4, 22.8, 19.4. EMAR: calculado para C42H45O6F7SiNa: [M+Na]+ 829.2771 encontrado

829.2811 (4.1 ppm).

15

Anomero p: (R)-{1-[3,5-bis-(trifIuorometiI)feniI]etiI} 2-0-p-fIuorobenciI-3,4-0-isopropiIiden-6- O-terc-butil difenilsilil-p-D-galactopiranosido, 26.

imagen40

1H-RMN (500MHz, CDCI3): 5 7.85 (bs, 1H), 7.79-7.74 (m, 3H), 7.66-7.61 (m, 4H), 7.43-7.32 (m, 7H), 7.05-7.00 (m, 2H), 4.97 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.46 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.25 (dd, J=1.7 y 5.5 Hz, 1H), 4.17 (dd, J=5.8 y 6.7 Hz, 1H), 3.87 (dd, J=6.0 y 8.5 Hz, 1H), 3.7720 3.71 (m, 2H), 3.42 (t, J=7.5 Hz, 1H), 1.50 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.02

(s, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCI3) 5 162.6, (d, Jcf=245.2 Hz), 148.4, 146.3, 135.7, 135.6,

134.1, (d, Jcf=3.1 Hz), 133.5, 133.3, 131.9, (c, Jcf=33.1 Hz), 131.6, (c, Jcf=33.1 Hz), 129.9, (d, Jcf=8.2 Hz), 129.8, 127.8, 127.5, 125.8 (d, Jcf=2.2 Hz), 123.5 (c, Jcf=272.3 Hz), 121.4,

115.3 (d, Jcf=21.5 Hz), 110.1, 100.7, 79.7, 79.3, 74.9, 73.6, 73.3, 73.0, 62.6, 28.0, 26.8,

5

10

15

20

25

26.4, 25.8, 22.3, 19.3. EMAR: calculado para C^H^OeFrSiNa: [M+Na]+ 829.2771 encontrado 829.2809 (4.5 ppm).

Derivados de L-arabinosa 8 y 7:

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparation de los derivados de galactosa 25 y 26, partiendo de 24 (4,85 g, 11,00 mmol), (1R)-1-[3,5- bis(trifluorometil)fenil]etanol (8,50 g, 33,00 mmol) y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (0,14 mL, 0,77 mmol). Se obtiene un aceite amarillo como una mezcla de los dos anomeros a:p en proportion 2:1. Tras purification por columna cromatografica usando acetato de etilo- hexano en proporcion 1:4, se obtiene el anomero p (1,47 g, 2,75 mmol) como producto minoritario con un rendimiento del 25 % y el anomero mayoritario a (3,55 g, 6,60 mmol) con un rendimiento del 60 %.

(R)-{1-3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-0-p-fluorobencil-3,4-0-isopropiliden-p-L-

arabinopiranosido, 8.

imagen41

1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 8.04 (bs, 2H), 7.96 (bs, 1H), 7.24-7.22 (m, 2H), 6.99-6.94 (m, 2H), 4.99 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.66 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.57 (bs, 2H), 4.37 (dd, J=5.7 y 7.8 Hz, 1H), 4.32 (dd, J=2.5 y 5.6 Hz, 1H), 4.11 (dd, J=2.9 y 13.4 Hz, 1H), 3.90 (d, J=13.4 Hz, 1H), 3.44 (dd, J=3.4 y 7.9 Hz, 1H), 1.51 (d, J=6.6 Hz, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.32 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCI3) 5 163.8, (d, Jcf=244.4 Hz), 148.0, 135.3 (d, Jcf=3.2 Hz), 132.9 (c, Jcf=32.9 Hz), 130.8 (d, Jcf=8.2 Hz), 128.2, 128.1, 124.9 (c, Jcf=272.2 Hz), 122.4 (c, Jcf=3.9 Hz), 115.9 (d, Jcf=21.3 Hz), 110.0, 96.4, 77.8, 76.6, 74.9, 72.2, 60.2, 28.4, 26.5, 24.5. [a]20D: +57.00 (c 1, cloroformo).

(R)-{1-3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-0-p-fluorobencil-3,4-0-isopropiliden-a-L-

arabinopiranosido, 7.

imagen42

1H-RMN (500MHz, CDCI3): 5 7.95 (bs, 2H), 7.84 (bs, 1H), 7.44-7.40 (m, 2H), 7.08-7.03 (m, 2H), 5.03 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.82 (bs, 2H), 4.61 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.24-4.21 (m, 1H), 4.17 (t, J=6.5 Hz, 1H), 3.86 (dd, J=3.1 y 13.2 Hz, 1H), 3.68 (dd, J=3.6 y 13.1 Hz, 1H), 3.47-3.43 (m, 5 1H), 1.53 (d, J=6.5 Hz, 3H) 1.36 (s, 3H), 1.32 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCh) 5 163.8,

(d, Jcf=243.0 Hz), 149.0, 135.7 (d, JCF=3.2 Hz), 132.6 (c, JCF=33.0 Hz), 131.1 (d, JCF=7.9 Hz), 127.7 (2), 124.9 (c, JCF=272.3 Hz), 121.9 (c, JCF=3.9 Hz), 115.9 (d, JCF=21.8 Hz), 111.0, 102.6, 81.0, 79.6, 76.8, 74.5, 73.6, 63.7, 28.1, 26.2, 23.0. [a]20D: +10.99 (c 1, cloroformo).

10 EJEMPLO 3. Desproteccion selectiva de la posicion 6.

Procedimiento general

Sobre una disolucion de 25 o 26 (1 equiv.) en tetrahidrofurano y bajo atmosfera de argon se 15 adiciona fluoruro de tetrabutil amonio 1M (5 equiv.). Tras agitar durante 1h, se adiciona eter y disolucion saturada de NaCl. La fase acuosa se extrae con acetato de etilo, los residuos organicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vaclo. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografla en columna, usando como eluyente acetato de etilo-hexano en proporcion 1:4.

20

Anomero alfa: (R)-{1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-0-p-fluorobencil-3,4-0-isopropiliden- a-D-galactopiranosido, 27.

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5

10

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20

25

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 25 (0,70 g, 0,87 mmol) en THF (20 mL) y fluoruro de tetrabutil amonio 1M (4,34 mL, 4,34 mmol). Se obtiene 27 (0,40 g 0,70 mmol) como un sirupo amarillo. Rendimiento: 80%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.91 (bs, 2H), 7.83 (bs, 1H), 7.20-7.17 (m, 2H), 6.97-6.92 (m, 2H), 4.92 (c, J=6.7 Hz, 1H), 4.64 (d, J=3.5 Hz, 1H), 4.60 (d, J=11.3 Hz, 2H), 4.47 (dd, J=5.6 y 7.9 Hz, 1H), 4.30 (dd, J=2.7 y 5.6 Hz, 1H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.97, (dd, J=6.0 y 11.8 Hz, 1H), 3.87 (dd, J=3.9 y 11.8 Hz, 1H), 3.42 (dd, J=3.6 y 8.0 Hz, 1H), 1.52 (d, J=6.7 Hz, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.4, (d, Jcf=244.2 Hz), 145.5, 133.5 (d, Jcf=3.1 Hz), 131.9, (c, Jcf=33.3 Hz), 129.5, (d, Jcf=8.1 Hz), 126.7, 123.3, (c, Jcf=272.8 Hz), 121.7, 115.1 (d, Jcf=21.4 Hz), 109.5, 95.1, 76.1, 75.5, 74.5, 72.9, 71.3, 67.9, 62.8, 28.0, 26.4, 22.7. EMAR: calculado para C26H27F7O6: [M]+ 568.1792 encontrado 568.1790 (0.5 ppm).

Anomero beta: (R)-{1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-0-p-fluorobencil-3,4-0-isopropiliden- p-D-galactopiranosido, 28

imagen44

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 26 (0,70 g, 0,87 mmol) en THF (20 mL) y fluoruro de tetrabutil amonio 1M (4,34 mL, 4,34 mmol). Se obtienen 0,37 g de 28 (0,65 mmol) como un sirupo amarillo. Rendimiento: 75%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.84 (bs, 2H), 7.79 (bs, 1H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.05-7.00 (m, 2H), 4.98 (c, J=6.4 Hz, 1H), 4.82 (bs, 2H), 4.49 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4.19 (dd, J=5.8 y 6.7 Hz, 1H), 4.13-4.09 (m, 2H), 3.80-3.76 (m, 1H), 3.72-3.70, (m, 1H), 3.44 (dd, J=7.0 y 7.8 Hz, 1H), 1.54 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.6, (d, JCF=245.6 Hz), 146.5, 134.0 (d, Jcf=3.0 Hz), 131.7, (c, Jcf=33.4 Hz), 129.9, (d, Jcf=8.2 Hz), 126.5, 123.5, (c, Jcf=273.0 Hz),

121.5, 115.3 (d, Jcf=21.5 Hz), 110.4, 101.5, 79.6, 79.4, 76.3, 73.9, 73.6, 73.0, 62.3, 27.8,

26.4, 22.8. EMAR: calculado para C26H27F7O6: [M]+ 568.1792 encontrado 568.1789 (0.5 ppm).

EJEMPLO 4. Desproteccion de las posiciones 3 y 4.

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Procedimiento general

Sobre una disolucion del 3,4-isopropilidenderivado 27, 28, 7 6 8 (1 equiv.) en metanol se adiciona una cantidad catalltica de CSA y se deja en agitacion durante toda la noche. Transcurrido ese tiempo el disolvente se evapora a vaclo y el residuo obtenido se purifica mediante filtracion con silica usando acetato de etilo como eluyente.

Derivados de Galactosa 4 y 3:

Anomero alfa: (R)-{1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-a-D-galactopiranosido, 4

imagen45

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 27 (0,50 g, 0,88 mmol) en metanol (20 mL). Se obtiene 4 (0,46 g, 0,87 mmol) como un solido blanco. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.89 (bs, 2H), 7.84 (bs, 1H), 7.17-7.14 (m, 2H), 6.98-6.94 (m, 2H), 4.92 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.79 (d, J=3.5 Hz, 1H), 4.53 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.34 (d, J=11.8 Hz, 1H) 4.16-4.10 (m, 2H), 4.02-3.88 (m, 3H), 3.69 (dd, J=3.5 y 9.8 Hz, 1H), 2.79 (bs, 1H), 2.34 (d, J=2.6 Hz, 1H), 2.30 (dd, J=3.6 y 7.1 Hz, 1H), 3.07 (d, J=6.7 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.7, (d, Jcf=244.0 Hz), 145.8, 133.4 (d, Jcf=3.5 Hz), 132.2, (c, Jcf=33.4 Hz), 129.8, (d, Jcf=7.9 Hz), 126.8 (2), 123.4, (c, Jcf=271.8 Hz), 122.0 (2), 115.7 (d, Jcf=21.0 Hz),

95.1, 75.9, 73.3, 72.1, 70.8, 69.9, 69.1, 63.5, 24.4. EMAR: calculado para C23H23F7O6: [M+Na]+ 551.1281 encontrado 551.1264 (-3.0 ppm).

Anomero beta: (R)-{1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-p-D-galactopiranosido, 3

imagen46

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 28 (0,50 g, 0,88 mmol) en metanol (20 mL). Se obtiene 3 (0,45 g, 0,85 mmol) como un solido blanco.Rendimiento: cuantitativo. 1H-RMN (500MHz, CDCla): 5 7.81 (bs, 2H), 7.79 (bs, 1H), 7.36-7.33 (m, 2H), 7.07-7.02 (m, 2H), 4.99 (c, J=6.4 Hz, 1H), 4.88 (d, J=11.5 Hz, 1H), 4.71 (d, J=11.5 Hz, 1H), 5 4.59 (d, J=6.2 Hz, 1H), 3.91 (dd, J=3.6 y 5.9 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=3.9 y 12.6 Hz, 1H), 3.72

(dd, J=3.4 y 8.0 Hz, 2H), 3.58 (dd, J=6.3 y 8.0 Hz, 1H), 3.46 (dd, J=2.0 y 12.8 Hz, 1H), 2.70 (bs, 1H), 2.49 (bs, 1H), 1.53 (d, J=6.4 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCh) 5 162.7, (d, Jcf=247.0 Hz), 146.0, 134.0 (d, Jcf=2.9 Hz), 131.8, (c, Jcf=33.4 Hz), 129.8, (d, Jcf=8.2 Hz),

126.4, 123.0, (c, Jcf=272.7 Hz), 121.7, 115.6 (d, Jcf=21.2 Hz), 101.0, 78.6, 75.2, 73.7, 72.1, 10 67.4, 64.7, 22.1. EMAR: calculado para C23H23F7O6: [M+Na]+ 551.1281 encontrado 551.1262

(-3.0 ppm).

Derivados de arabinosa 6 y 5:

(R)-{1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-p-L-arabinopiranosido, 6.

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Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 8 (1,47 g, 2,75 mmol) en metanol (60 mL). Se obtiene 6 (1,35 g, 2,72 mmol) como un aceite marron con rendimiento cuantitavo. 1H-RMN (300MHz, CDCl3): 5 7.89 (bs, 2H), 7.83 (bs, 1H), 7.19-7.15 (m, 2H), 7.00-6.94 (m, 2H), 4.92 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.73 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.53 (d, J=11.7 Hz, 1H), 20 4.32 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.16-4.09 (m, 1H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.78 (dd, J=1.8 y 12.4 Hz,

1H), 3.67 (dd, J=3.4 y 9.5 Hz, 1H) 1.54 (d, J=6.6 Hz, 3H). [a]20D: +12.02 (c 1, cloroformo).

(R)-{1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-a-L-arabinopiranosido, 5.

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Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 7 (3,55 g, 6,60 mmol) en metanol (160 mL). Se obtiene 5 (3,36 g, 6,55 mmol) como un aceite naranja con rendimiento cuantitativo. 1H-RMN (500MHz, CDCfe): 5 7.81 (bs, 2H), 7.79 (bs, 1H), 7.36-7.32 (m, 2H), 7.06-7.02 (m, 2H), 4.98 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.88 (d, J=11.4 Hz, 1H), 4.71 (d, J=11.6 Hz, 1H), 4.58 (d, J=6.3 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=3.9 y 12.6 Hz, 1H), 3.71 (dd, J=3.6 y 8.1 Hz, 1H) 3.58 (dd, J=6.4 y 8.0 Hz, 1H), 3.47-3.43 (m, 2H), 1.53 (d, J=6.5 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.6, (d, Jcf=246.7 Hz), 146.1, 134.0 (d, Jcf=3.1 Hz), 131.8 (c, Jcf=33.2 Hz), 129.8 (d, Jcf=8.1 Hz), 126.4, 123.4 (c, Jcf=274.8 Hz), 121.6, 115.6 (c, Jcf=21.3 Hz), 101.1, 78.7, 75.2, 73.8, 72.1, 67.5, 64.8, 22.1. [a]20p: +8.07 (c 1, cloroformo).

EJEMPLO 5.

Sobre una disolucion de 3 o 4 (1 equiv.) en dimetilformamida (DMF) se adiciona dimetoximetil benceno (1,1 equiv.) y una cantidad catalltica de CSA. La reaccion se deja rotar a 40°C en el rotavapor durante 1h. Transcurrido ese tiempo se neutraliza con disolucion saturada de NaHCO3, la fase acuosa se extrae con diclorometano, los extractos organicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vaclo. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografla en columna usando acetato de etilo- hexano en proporcion 1:4.

Anomero alfa: (R)-{1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-0-p-fluorobencil-(R)-[4,5-0-benciliden]- a-D-galactopiranosido, 2

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Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 4 (0,10 g, 0,19 mmol) en DMF (15 mL) y dimetoximetil benceno (0,32 mL, 0,21 mmol). Se obtiene 2 (0,11 g, 0,18 mmol) como un solido blanco. Rendimiento: 95%. P.f.: 158-159°C. 1H-RMN (500MHz, CDCh): 5 7.90 (bs, 2H), 7.84 (bs, 1H), 7.47-7.43 (m, 2H), 7.39-7.34 (m, 3H), 7.16-7.13 (m, 2H), 6.95-6.90 (m, 2H), 4.93 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.80 (d, J=3.5 Hz, 1H), 4.52 (d, J=2.5 Hz, 2H), 4.36-4.35 (m, 1H), 4.32 (dd, J=1.4 y 12.6 Hz, 1H), 4.28-4.23 (m, 1H), 4.14 (dd, J=1.8 y 12.7 Hz, 1H), 3.84

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(bs, 1H), 3.75 (dd, J=3.6 y 10.0 Hz, 1H), 2.33 (d, J=8.8 Hz, 1H), 1.53 (d, J=6.6 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) 5 162.6, (d, Jcf=246.1 Hz), 145.6, 137.5, 133.6 (d, Jcf=3.0 Hz),

132.1, (c, Jcf=33.6 Hz), 129.7, (d, Jcf=8.2 Hz), 129.4, 128.4, 126.9, 126.4, 123.4, (c, Jcf=272.1 Hz), 122.0, 115.4 (d, Jcf=21.8 Hz), 101.5, 96.0, 76.3, 76.1, 73.3, 72.6, 69.4, 68.8, 63.3, 24.3. EMAR: calculado para C30H27O6NaF7: [M+Na]+ 639.1594 encontrado 639.1565 (4.5 ppm).

Anomero beta: (R)-{1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil1etil) 2-0-p-fluorobencil-(R)-[4,5-0-benciliden]- p-D-galactopiranosido, 1

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Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 3 (0,10 g, 0,19 mmol) en DMF (15 mL) y de dimetoximetil benceno (0,32 mL, 0,21 mmol). Se obtiene 1 (0,10 g, 0,17 mmol) como un solido blanco. Rendimiento: 92%. P.f.: 131°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): 5 7.90 (bs, 2H), 7.80 (bs, 1H), 7.49-7.47 (m, 2H), 7.39-7.36 (m, 5H), 7.06-7.01 (m, 2H), 5.03 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.93 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.79 (d, J=11.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.19 (dd, J=1.0 y 3.9 Hz, 1H), 4.08 (dd, J=1.4 y 12.5 Hz, 1H), 3.98 (dd, J=1.9 y 12.5 Hz, 1H), 3.74 (td, J=3.8 y 8.9 Hz, 1H), 3.67-3.64 (m, 1H), 3.57-3.35 (m, 1H), 2.45 (d, J=8.4 Hz, 1H), 1.56 (d, J=6.6 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCh) 5 162.6, (d, Jcf=246.6 Hz), 146.6, 137.7, 134.4 (d, Jcf=2.8 Hz), 131.6, (c, Jcf=33.4 Hz), 129.7, (d, Jcf=8.1 Hz), 129.4, 128.4, 126.7,

126.6, 123.6, (c, Jcf=272.7 Hz), 121.4, 115.4 (d, Jcf=21.5 Hz), 101.9, 101.6, 79.8, 76.1, 75.5,

74.6, 73.0, 69.0, 66.7, 22.8. EMAR: calculado para C30H27OaNaF7: [M+Na]+ 639.1594 encontrado 639.1563 (-4.3 ppm).

EJEMPLO 6. Actividad antagonista de los receptores NK-1 de los derivados de carbohidratos sintetizados.

Se ha determinado experimentalmente la capacidad de modulacion del receptor NK-1 por parte de los derivados de carbohidratos sintetizados a traves del test Ipone y de estudios de afinidad a traves del desplazamiento de la SP marcada ([125I]BH-SP).

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6.1. Resultados obtenidos.

6.1.1. Resultados del test IPone: Se muestran como ejemplo los resultados del estudio de la actividad antagonista del receptor NK-1 a traves del test IPone de derivados de carbohidratos sintetizados 2, 3, 4, 5 y 6, ademas de la de los antagonistas comerciales L- 732,138 y CP-96345 (primer antagonista NK-1 no peptldico), que han sido usados como referencia. Para obtener un control positivo del ensayo hemos utilizando la SP.

imagen51

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Todos los compuestos ensayados antagonizan la SP a traves del receptor NK-1. Destacamos los derivados 2, 4 y 5, que han resultado ser excelentes inhibidores de la actividad de la SP, con valores de Kinact muy cercanos a los del antagonista de referencia (figuras 2 y 3):

Kact SP: 1,64E-08 ± 0,6,2 M; Kinact L-732,138: 8,37E-08 ± 2,63 M; Kinact CP-96345: 3,65E-09 ± 0,55 M; Kinact 2: 2,37E-07 ± 1,16 M; Kinact 4: 7,37E-07 ± 2,71 M; Kinact 5: 5,60E-07 ± 0,53 M

De todos ellos, el derivado 2 resulto ser el de mayor actividad antagonista.

Los porcentajes de inhibicion se han obtenido a una concentration del ligando de 10"6M (figura 4):

L-732,138: 69 % inhibicion SP; Derivado 3: 60 % inhibicion SP; Derivado 6: 48 % inhibicion SP.

6.1.2. Resultados del estudio del desplazamiento de la SP marcada. Se muestran como ejemplo la afinidad de los derivados de hidratos de carbono sintetizados 2, 4, 5 y 8.

Resumen de los resultados de afinidad:

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Compuesto

Concentracion (M) % Inhibicion de la afinidad especlfica control

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6,0E-05 >100

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6,0E-05 >100

5

6,0E-05 >100

8

6,0E-05 >100

Los compuestos mostrados tienen una afinidad por los receptores NK-1 mayor que la SP.

6.2. Procedimiento general para la determinacion de la actividad antagonista de los receptores NK-1.

6.2.1. Test Ipone:

Cultivo celular y transfeccion. Las llneas celulares se obtuvieron de la Coleccion de Cultivos Tipo Americanos (Manassas, Virginia, EEUU). Los medios de cultivo, el suero fetal bovino (FBS) y los aditivos fueron proporcionados por Invitrogen.

Las celulas CHO se cultivaron en un medio Dulbecco’s modified Eagle’s con un suplemento de FBS del 10%, penicilina/estreptomicina, 100U/ml y L-glutamina 2 mM a 37°C en una atmosfera humeda de 95% aire y 5% CO2. Tambien se anadieron al medio aminoacidos no esenciales (Invitrogen).

La transfeccion transitoria de las llneas celulares se llevo a cabo por electroporacion en un volumen de 300 pL con un total de 10 pg de ADN (pRK5 Neo-NK1 wild type) plasmldico (utilizando hasta 500 ng de pRK5como ADN portador para alcanzar 10 pg) y con 107 celulas en el buffer de electroporacion (50 mM K2HPO4, 20 mM CH3COOK, 20 mM KOH y 26 mM MgSO4, pH 7.4). Tras la electroporacion (280 V, 1mF, GeneZapper 450/2500; IBI, New Haven, Connecticut, EEUU), las celulas se suspendieron en un medio completo y se sembraron en placas de cultivo de pocillos con una densidad de 105 por pocillo. Las placas de cultivo de 96 pocillos se cubrieron primero con poliornitina diluida en PBS, luego se incubaron a 37°C durante 30 minutos y, finalmente, se lavaron con PBS antes de sembrarlas.

ELISA. Para medir la expresion de los receptores transfectados, las celulas se transfectaron con pRK5-NK1-6His. Veinticuatro horas despues de la electroporacion, las celulas se fijaron

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con paraformaldehido al 4% en PBS durante 5 minutos y se lavaron 3 veces con PBS. Se realizo un bloqueo de 30 minutos con PBS +1% FBS no complementado antes de la incubacion con el anticuerpo primario anti-6 His (0,5 pg/ml) durante 30 minutos. A continuation, las celulas se lavaron tres veces con PBS +1% FBS durante 5 minutos y se incubaron durante 30 minutos con un anticuerpo anti raton conjugado con una peroxidasa de rabano (1/1000; Amersham, Orsay, Francia). Las celulas se lavaron 3 veces con PBS +1% FBS y tres veces con PBS. Despues, se anadieron a los pocillos 60 pl de PBS y 20 pl de Supersignal ELISA Femto (Perbio-Pierce, Brebieres, Francia). La luminiscencia se leyo usando un Wallac Victor2 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Courtaboeuf, Francia).

Acumulacion de Segundo Mensajero (IP!). La activation e inhibition de la ruta del IP por los agonistas y antagonistas del receptor NK1, respectivamente, se determino usando el kit dinamico IP-One (Cisbio Bioassays, Bagnols-sur-Ceze, Francia). Tras la transfection, 105 celulas se distribuyeron en 100 pl de un medio completo a una placa de ensayo de 96 pocillos (Greiner Bio-One, Courtaboeuf, Francia). Tras 24 horas, el medio se elimino y se reemplazo por 40 pl de medio de incubacion que contenla el agonista y/o antagonista en la concentration adecuada.El ensayo homogeneo de fluorescencia resuelta en el tiempo- fluorescencia de transferencia de energla de resonancia (homogeneous time-resolved fluorescence-fluorescence resonance energy transfer, HTRF-FRET) se realizo segun se indica en la literatura (Maurel, D.; Kniazeff, J.; Mathis, G.; Tinquet, E.; Pin, J.P.; Ansanay, H. Anal Biochem. 2004, 329, 253) El efecto inhibidor del antagonista no-peptldico NK-1, en la acumulacion de IP1 inducida por la SP se estudio de la misma manera que Arunlakshana and Schild (1959) (Arunlakshana, O.; Schild, H.O. Br J Pharmacol. 1959, 14, 48). A la preincubacion durante 10 minutos le siguio la incubacion de 30 minutos con el antagonista y la SP.

Analisis estadistico. La signification estadlstica de las diferencias entre los grupos experimentales se determino mediante analisis de varianza one-way o two-way seguido de un test post hoc de rango multiple de Duncan para realizar comparaciones por pares entre las medias. Tambien se realizo el test t de Student.

6.2.2. Desplazamiento de la Sustancia P marcada:

Para los estudios de desplazamiento se ha utilizado una concentracion de 0.15 nM para la SP marcada y de 10"6 M para los productos de la invention. El tiempo de incubacion ha sido

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de 60 min. a temperatura ambiente y como ligando de referenda se ha utilizado [Sar9, Met(O2)11]-SP con una IC50=0.29 nM (Heuillet, E. J. Neurochem. 1993, 60, 868-876).

Ejemplo 7. Actividad anticancerosa selectiva de los nuevos antagonistas NK-1 derivados de carbohidratos.

7.1. Resultados obtenidos.

A modo de ejemplo se muestran los resultados de los estudios de actividad anticancerosa en cancer de pulmon para los derivados 1, 2, 5, 7, 8,9 y 10. Como referencia se han utilizando dos antagonistas NK-1 comerciales, CP-96345 y Aprepitant. Como control positivo se ha usado el farmaco de referencia utilizado en terapia de cancer de pulmon, cisplatino.

imagen53

N

O

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NH

N

H

Para todos ellos se determino la IC50 a traves del ensayo MTT, tanto en celulas cancerosas de pulmon (A549) como en celulas sanas de pulmon (MRC-5) para determinar la selectividad de los compuestos.La siguiente tabla muestra los valores de IC50 para las llneas celulares MRC-5 y A549 correspondientes al cisplatino.

Control positivo: Cisplatino

ic50

MRC-5 A549

Promedio

115,71 11,67

Desviacion

85,66 7,10

n

4 4

Error

42,83 3,55

5

10

15

20

25

30

35

La siguiente tabla muestra los valores de IC50 para las ilneas celulares MRC-5 y A549 correspondientes a los antagonistas comerciales Aprepitant y CP-96345 y a los nuevos antagonistas de los receptores NK-1 sintetizados.

IC50±SEM (|1M)

Compuestos

MRC-5 A549 P

1

141,1611,82 28,00+6,85 0,0047

2

120,10±3,45 19,34+7,93 0,0046

5

50,41+3,27 20,82+4,02 0,0061

7

- 59,32±11,04 -

8

500,99162,03 133,52+35,13 0,0159

9+10 (1:1)

192,18127,85 42,88+9,19 0,0082

Aprepitant

22,03+6,92 15,66+3,46 >0,05

CP-96345

57,90+8,07 46,33+3,89 0,4100

Todos nuestros compuestos no solo mostraron una clara actividad anticancerosa si no que ademas resultaron ser selectivos para celulas cancerosas de pulmon, al contrario que los antagonistas NK-1 comerciales Aprepitant y CP-96345. De entre todos ellos destacamos el derivado 7, con una selectividad muy superior a la del resto. Excepto en el caso del derivado 8, todos presentaron mayor actividad frente a la llnea cancerosa que el Aprepitant y el CP- 96345. Los derivados mas activos fueron 1, 2 y 5.

Segun estos resultados obtenidos, podemos equiparar nuestro derivado 2, en cuanto actividad y selectividad se refiere, con el cisplatino. Por ese motivo, se han realizado estudios de actividad anticancerosa con este ligando 2 sobre otras llneas celulares.

En total, se ha evaluado la posible actividad anticancerosa del compuesto 2 en tres modelos de cancer in vitro: cancer de mama, cancer de pulmon y melanoma. En los tres modelos, este compuesto demostro ser mas citotoxico para las celulas cancerosas que para las celulas normales. Esta selectividad fue observada desde las concentraciones mas bajas ensayadas y se observo durante varias concentraciones, por lo que podrlamos decir que este compuesto presenta una actividad citotoxica selectiva. En concreto, ha resultado ser unas 4, 6 y 12 veces mas selectivo para celulas de melanoma, cancer de pulmon y mama respectivamente, con respecto a las correspondientes celulas normales.

5

10

15

20

25

30

35

La siguiente tabla muestra los valores de IC50 para las llneas celulares MCF7 (celulas humanas de adenocarcinoma de mama) y MCF10 (celulas humanas no malignas de mama) asl como para las llneas UACC-62 (celulas humanas de melanoma) y VH-10 (celulas humanas no malignas de piel) para el compuesto 2.

IC50±SEM (p,M)

Compuesto

MCF7 MCF10 P

2

23,91+4,99 291,32152,56 0,04057

UACC-62

VH-10 P

31,93+6,01

117,90+12,31 0,01692

7.2. Procedimiento general para la determinacion de la actividad anticancerosa selectiva de los nuevos antagonistas de los receptores NK-1.

Llneas celulares. Las celulas humanas de adenocarcinoma de pulmon A549, las celulas humanas no malignas de pulmon MRC5 y las celulas humanas de melanoma UACC-62 fueron obtenidas de la Coleccion Europea de Cultivos celulares (ECACC). Las celulas humanas de adenocarcinoma de mama MCF7 y las celulas humanas no malignas de mama MCF10 fueron generosamente cedidas por el Dr. Ruano y la Dra. Daza (Universidad de Sevilla, Espana). Las celulas humanas no malignas de piel VH-10 fueron generosamente cedidas por el Dr. Helleday (Instituto Karolinska, Suecia).

Todos los medios de cultivo utilizados se suplementaron con 2 mM de glutamina, 50 pg/ml penicilina, 50 pg/ml estreptomicina y 10% de suero fetal bovino. Una excepcion fue el medio utilizado para el cultivo de las celulas MCF10 que fue una mezcla al 1:1 de medio DMEM y HAM’s F12 suplementada con 2 mM de glutamina, 50 pg/ml penicilina, 50 pg/ml estreptomicina, 20 ng/ml factores crecimiento, 100 ng/ml toxina colerica, 10 pg/ml insulina, 500 ng/ml hidrocortisona y 5% suero de caballo.

Todas las llneas celulares fueron cultivadas a 37°C, 5% CO2 y humedad controlada en un incubador.

Todos los productos utilizados para el cultivo celular se obtuvieron del laboratorio PAA, a excepcion del medio para las MCF10 que fue cedido por la Dra. Navarro.

Ensayo de viabilidad celular. Las celulas fueron expuestas a los compuestos durante 48 h Finalizado el tratamiento, el medio se retiro y las celulas se incubaron durante 3-5 horas con

43

125 pl MTT (1mg/ml MTT en medio de cultivo). Posteriormente, se anadieron 80 pl de 20 % SDS en 0,02 M HCl para solubilizar los cristales de formazan-MTT y las placas se incubaron toda la noche en un incubador a 37°C y 5% CO2. Finalmente, se realizo la lectura de las placas en un espectrofotometro lector de placas a 540 nm. La absorbancia se relaciono de 5 forma directamente proporcional con la viabilidad celular, la cual se expreso en porcentaje con respecto al control. Todos los resultados se obtuvieron de al menos tres experimentos independientes y se expresaron como la media ± el error estandar de la media (SEM).

Claims (22)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   REIVINDICACIONES

   1. Compuesto de formula general I,

   imagen1

   Formula general I

   o uno cualquiera de sus posibles estereoisomeros, o una sal farmaceuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, donde:

   - Ra se selecciona entre H y CH2OR1, donde R1 se selecciona a su vez entre

   hidrogeno,

   un grupo alquilo C1-C20,

   un grupo arilo C6-C20,

   un grupo COR1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc- butilo y fenilo,

   un grupo que junto a R2 forma un ciclo, y

   un grupo SiR’R’’R’’’, donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo;

   - Rb se selecciona independientemente entre un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6- C20, OH y un grupo de formula II, donde Z se selecciona entre O y S, y el carbono contiguo a Z es quiral y tiene configuration R o S;

   imagen2

   - X se selecciona entre OR3, NR4R5 y una cadena heteroclclica de 3 a 15 miembros, donde:

   • R3 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, un grupo acilo, un grupo alquilsulfonilo, un grupo arilsulfonilo, un grupo de formula III, un

   5

   10

   15

   20

   25

   30

   grupo de formula IV, un grupo de formula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20, y un grupo que junto a R2 forma un ciclo;

   • R4 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20;

   • R5 se selecciona entre H, un grupo de formula III, un grupo de formula IV y un grupo de formula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20;

   imagen3

   formula III formula IV formula V

   - Y se selecciona entre O, S y NH; y

   - R2 es H, o forma un ciclo de 5 o 6 eslabones junto a R1 o R3, de tal manera que en dicho ciclo el O contiguo a R2 se encuentra separado del O contiguo a R1 o R3 por al menos un atomo de C que consiste en -C(R6)(R7)-, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.
2. 2. Compuesto segun la reivindicacion 1, donde Rb es el grupo de formula II en el que Z se selecciona entre O y S.

   imagen4
3. 3. Compuesto segun la reivindicacion 2, donde Z es O.
4. 4. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde Y es O.
5. 5. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde X es OR3, y R3

   se define tal como se describe en la reivindicacion 1.
6. 6. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde Ra es CH2OR1 y R2 forma un ciclo junto a R1, donde el atomo de O contiguo a R2 se encuentra separado

   del atomo de O contiguo a R1 por un grupo -C(R6)(R7)-, de manera que R2 forma un ciclo de

   5

   10

   15

   20

   25

   6 eslabones junto a R1, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.
7. 7. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde Ra es CH2OR1, R1 y R2 forman un ciclo, y X es OH.
8. 8. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde X es OR3 y R2 forma un ciclo junto a R3, donde el atomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del atomo de O contiguo a R3 por un grupo -C(R6)(R7)-, de manera que R2 forma un ciclo de 5 eslabones junto a R3, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.
9. 9. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 u 8, donde X es OR3, R3 y R2 forman un ciclo, y Ra es H.
10. 10. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde X es OH y R2 es H.
11. 11. Compuesto segun la reivindicacion 10, donde Ra se selecciona entre H y CH2OH.
12. 12. Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que se selecciona del grupo que consiste en:

    a) b)

    imagen5

    imagen6

    c)

    imagen7

    d)

    imagen8

    e)

    5

    imagen9

    imagen10

    imagen11

    h)

    cf3

    imagen12

    i)

    imagen13

    j)

    imagen14
13. 13. Composition farmaceutica caracterizada porque comprende al menos un compuesto

    definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

    5

    10

    15

    20

    25

    30
14. 14. Uso de al menos un compuesto definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o de una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabrication de una composition farmaceutica.
15. 15. Uso de al menos un compuesto definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o de una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para la fabricacion de una composicion farmaceutica para tratamiento y/o prevention de una enfermedad.
16. 16. Uso segun la reivindicacion 15, donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en: un trastorno del sistema nervioso central seleccionado entre enfermedad de Parkinson, ansiedad y depresion, artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, adherencia abdominal post-quirurgica, migrana, inflamacion, una enfermedad pulmonar cronica seleccionada entre asma bronquial o enfermedad pulmonar obstuctiva cronica (EPOC), apnea obstructiva del sueno, una desregulacion de la funcion cardiaca, trombosis arterial, osteoporosis, obesidad, resistencia a insulina, enfermedad de Crohn, emesis, y un cancer seleccionado entre melanoma, neuroblastoma, glioma, linfoma de Hodgkin, leucemia linfoblastica, rabdomiosarcoma, linfoma de burkit, carcinoma de pulmon, sarcoma de Edwing, osteosarcoma, ganglioma maligno y cancer de mama.
17. 17. Uso segun la reivindicacion 16, donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en: melanoma, carcinoma de pulmon y cancer de mama.
18. 18. Procedimiento de obtencion de un compuesto de formula I segun se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado por que comprende al menos las siguientes etapas:

    a. Obtener un tioglicosido de formula VIII, donde Ra se define igual que en una cualquiera de las reivindicaciones 1, 6 o 7, R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, X’ se selecciona entre un grupo OH y un grupo N3, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH;

    imagen15

    5

    10

    15

    20

    25

    30

    b. Hacer reaccionar el tioglicosido de formula VIII con reactivos de proteccion de alcoholes para obtener el compuesto de formula IX;

    - A’’ se selecciona entre H y CH2OP1, donde P1 se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20,

    un grupo arilo C6-C20,

    un grupo COP1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc- butilo y fenilo,

    un grupo que junto a P2 forma un ciclo, y

    un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

    - R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un grupo alquilo C1-C20,

    - X’’ se selecciona entre un grupo N3 y un grupo OP3, donde P3 es un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P2,

    - Y se selecciona entre un O, S y NH,

    - P2 se selecciona entre

    un grupo SiR’R’’R’’’ donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

    un grupo que forma un ciclo de 6 eslabones junto a P1, y un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P3,

    de tal manera que en el ciclo el O contiguo a P2 se encuentra separado del O contiguo a P1 o P3 por un atomo de C que consiste en -C(R6)(R7)-, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20;

    c. Hacer reaccionar el compuesto de formula IX con un haluro o un tosilato de p- fluorobencilo para obtener el compuesto de formula X, en donde A’’, R, X’’ y P2 se definen como anteriormente, e Y se selecciona entre O, S y NH;

    imagen16

    X'

    formula IX

    donde:

    5

    10

    15

    20

    25

    imagen17

    formula X

    d. Transformar el compuesto X obtenido en la etapa anterior en un compuesto donador de glicosilo de formula XI, donde W se selecciona entre OH, un grupo sulfoxido SOR, un grupo fosfito O(OR)2 y un grupo tricloracetimidato; y

    imagen18

    F

    e. Transformar el compuesto XI obtenido en la etapa anterior en un compuesto de formula general I tal como se describe una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, a traves de una reaccion de glicosidacion.
19. 19. Procedimiento segun la reivindicacion 18, caracterizado porque cuando Rb en el compuesto de formula I es el grupo de formula II, dicho procedimiento comprende hacer reaccionar el compuesto de formula XI con 2,2,2-tricloroacetonitrilo, en presencia de cantidades catallticas de 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU); y posteriormente hacer reaccionar el producto que se obtiene con 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo.
20. 20. Procedimiento segun la reivindicacion 19, que comprende adicionalmente la

    protection y/o desproteccion selectiva de grupos en position 3, 4, 5 y/o 6 del anillo tetrahidropiranilo.
21. 21. Procedimiento segun la reivindicacion 19, que comprende adicionalmente la

    reduction y/o alquilacion, acilacion o reaccion 1,3-dipolar de Huisgen para obtener compuestos de formula I donde X es NR4R5 o una cadena heteroclclica.
22. 22. Procedimiento segun una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, que ademas comprende al menos una de las siguientes etapas:

    f. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa e con un agente reductor de azidas, cuando en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de formula

    5 VIII donde X’ es un grupo N3;

    g. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa e o f con fluoruro de tetrabutil amonio en THF;

    h. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas e, f o g con una cantidad catalltica de acido 10-camforsulfonico en metanol;

    10 i. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas g o h con un

    dimetoximetil derivado de formula CH3O-C(R6)(R7)-OCH3, en donde R6 y R7 se definen como en la reivindicacion 1, si en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de formula VIII donde Ra es CH2OH;

    j. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas f, g o h, con 15 un haluro de alquilo de formula R8-X o un haluro de acilo de formula R9-CO-X, en donde R8 es un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, o un grupo de formula III o de formula IV segun se definen en la reivindicacion 1, y donde R9 es un grupo de formula V segun se define en la reivindicacion 1.