ES2595442A1 - Antagonistas de los receptores nk1 derivados de hidratos de carbono, metodo de obtencion y uso medico - Google Patents

Abstract

Antagonistas de los receptores NK1 derivados de hidratos de carbono, método de obtención y uso médico. La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general I, y a su uso en medicina, o para la fabricación de un medicamento, para el tratamiento de distintas enfermedades, preferentemente un cáncer como el melanoma, el carcinoma de pulmón o el cáncer de mama. Por ello, la presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto. Asimismo, otro objeto de la presente invención se refiere a un procedimiento para obtener el compuesto de fórmula general I.

Description

DESCRIPCIÓN

ANTAGONISTAS DE LOS RECEPTORES NK1 DERIVADOS DE HIDRATOS DE CARBONO, MÉTODO DE OBTENCIÓN Y USO MÉDICO

5

Sector de la técnica

La presente invención va dirigida principalmente al sector farmacéutico con aplicaciones destinadas a la prevención y/o tratamiento de enfermedades y cualquier tipo de afección o daño en los que se encuentre implicada la sustancia P (SP), o que aún no estando 10 involucrada, transcurran a través del receptor NK-1, NK-2 y NK-3.

Estado de la técnica anterior

La SP (Figura 1), la neuroquinina A (NKA) y la neuroquinina B (NKB) son taquicininas de 15 mamíferos que actúan al mismo tiempo como neurotransmisores y neuromoduladores [Nakanishi, S. Annu Rev Neurosci. 1991, 14, 123]. Estos péptidos ejercen sus efectos biológicos en el sistema nervioso central (SNC) a través de la unión a sus receptores acoplados a proteínas G, NK1, NK2, y NK3 [Quatara, L.; Maggi, C. A. Neuropeptides, 1998, 32, 1]. 20

En particular, el receptor NK1 (NK1R), el receptor afín de la SP y el más abundante de la taquicinina en el SNC de los mamíferos, está presente en las áreas del cerebro implicadas en la regulación del comportamiento afectivo, y en la mediación de la ansiedad, el estrés y la depresión [Leroy, V.; Mauser, P.; Gao, Z.; Peet., N. P. Neurokinin Receptor Antagonists. 25 Expert Opin. Invest. Drugs 2000, 9, 735-746].

La observación de que la liberación de la SP se asocia con varios procesos psicopatológicos hace que el receptor NK1 sea considerado hoy en día una diana terapéutica de gran relevancia [(a) Bremer, A.A. and Leeman, S.E. (January 2010) Substance P. In: Encyclopedia 30 of Life Sciences (ELS). John Wiley & Sons, Ltd: Chichester. DOI: 10.1002/9780470015902.a0000206.pub2 (b) Rupniak, N.M.J.; Kramer, M. S. Substance P and related tachykininis. Neuropsychopharmacology. The Fifth Generation of Progress. 2002. Lippincott, Williams, & Wilkins (Ed. Davis, K.L.; Charney, D.; Coyle, J.T.; Nemeroff, C.)].

35

En consecuencia, los antagonistas de los receptores NK1 son considerados actualmente agentes terapéuticos potenciales para un gran número de patologías tales como la migraña, [Moskowitz, M. A. Trends Pharmacol. Sci. 1992, 13, 307-311] la artritis reumatoide, [Lotz, M.; Carson, D. A.; Vaughan, J. H. Science 1987, 235, 893-895] el asma, la enfermedad inflamatoria del intestino, la emesis [Dando, T: M.; Perry, C. M. DRUGS, 2004, 64, 777-794], 5 el cáncer [Folkers, K.; Feng, D. M.; Asano, N.; Hakanson, R.; Wiesenfeld-Hallin, Z.; Leander, S. Spantide II, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 4833-4835], así como los trastornos del sistema nervioso central tales como la ansiedad, el Parkinson o la depresión [Quartara, L.; Altamura, M. Curr. Drug Targets 2006, 7, 975-992].

10

Resultan de especial interés, los datos obtenidos recientemente que indican que los antagonistas de los receptores NK-1 ejercen una actividad anticancerosa importante [(a) Muñoz, M.; Rosso, M.; Pérez, A.; Coveñas, R.; Rosso, R.; Zamarriego, C; Piruat, J.I. Neuropeptides, 2005, 39, 427. (b) Muñoz, M.; Pérez, A.; Rosso, M.; Zamarriego, C.; Rosso, R. Melanoma Res. 2004, 14, 183. (c) Esteban, F.; Muñoz, M.; Gonzalez-Moles, M.A.; Rosso, 15 M. Cancer Metastasis Rev. 2006, 25, 137]. En este sentido, la actividad anticancerosa de los antagonistas de los receptores NK-1 resulta ser de muy amplio espectro, permitiendo el tratamiento del melanoma humano, el neuroblastoma, el linfoma de Hodgkin humano, la leucemia linfoblástica, el rabdomiosarcoma humano, el linfoma de burkit humano, el carcinoma de pulmón humano, el sarcoma humano de Edwing, el glioma humano, el 20 osteosarcoma humano, gangliomas humanos malignos, el melanoma humano maligno invasivo, células metastásicas de melanoma humano y el cáncer de mama humano entre otros [Muñoz, M. Utilización de antagonistas no peptídicos de receptores NK1 para la producción de apoptosis en células tumorales. Nº de solicitud de patente: PCT/ES2005/000068]. En este sentido es importante destacar que, recientemente se ha 25 demostrado que el receptor NK1 es altamente sobre-expresado en un gran número de tumores agresivos, [(a) Hennig, I. M.; Laissue, J. A.; Horisberger, U.; Reubi, J. C. Int. J. Cancer 1995, 61, 786. (b) Singh, D.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 388] en particular de glioma, astrocitomas y glioblastomas, [(a) Palma, C.; Maggi, C.A. Life Sci. 2000, 67, 985–1001. (b) Lai, J. P., Douglas, S. D., Wang, Y. J.; Ho, W. Z. Clin. Diagn. Lab. 30 Immunol. 2005, 12, 537-541], donde el nivel de expresión se correlaciona con el grado de malignidad [Yamaguchi, K.; Richardson, M. D.; Bigner, D. D.; Kwata, M. M. Cancer Chemother. Pharmacol. 2005, 56, 585].

Los primeros diseños de los antagonistas de los receptores NK1 basados sobre la estructura 35 de la SP, han dado lugar a compuestos con estructura peptídica cuyas afinidades eran muy

bajas y estabilidades metabólicas reducidas [(a) Enberg, G.; Svensson, T. H.; Rosell, S.; Folkers, K. Nature 1981, 293, 222. (b) Folkers, K., Hakanson, R.; Horig, J.; Jie-Cheng, X.; Leander, S.. Br. J. Pharmacol. 1984, 83, 449. (c) Folkers, K.; Feng, D. M.; Asano, N.; Hakanson, R.; Wiesenfeld-Hallin, Z.; Leander, S. Spantide II. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 4833]. El descubrimiento a principios de la década de los 90 del siglo pasado del 5 primer antagonista no-peptídico de los receptores NK1, el CP-96345 [Snider, R. M.; Constantine, J. W.; John A. Lowe, J. A.; Kelly P. Longo, K. P.; Lebel, W. S.; Woody, H. A.; Drozda, S. E.; Desai, M. C.; Vinick, F. J. Robin W. Spencer, R. W.; Hess. H.-J. Science 1991, 251, 435] ha impulsado la investigación en esta área, no sólo en el ámbito académico, sino también a nivel industrial, con casi todas las importantes compañías farmacéuticas 10 trabajando en este campo con el objetivo de identificar antagonistas de NK1R selectivos y potentes [(a) Giardina, G. A.; Gagliardi, S.; Martinelli, M. IDrugs, 2003, 6, 758. (b) Huang, S.-C.; Korlipara, V. L. Exp. Pat. Opin. Ther. Pat. 2010, 20, 1019-1045]. Más de dos décadas de amplios esfuerzos sintéticos y económicos han permitido el descubrimiento de un número considerable de antagonistas de los receptores NK1 estructuralmente diversos, aunque 15 ninguno de ellos con el éxito terapéutico deseado.

Actualmente, tan sólo hay un antagonista del receptor NK1 en el mercado, el Aprepitant (Merck), recetado para la prevención de náuseas y vómitos inducidos por la quimioterapia, [Sankhala, K.K.; Pandya, D.M.; Sarantopoulos, J.; Soefje, S.A.; Giles, F.J.; Chawla, S.P. 20 Exp. Opin. Drug Metbol. Toxicol. 2009, 5, 1607]. La razón principal de este hecho es que la estructura exacta del receptor NK1, que pertenece a la estructuralmente compleja superfamilia de los receptores acoplados a proteína-G, [(a) Kobilka, B. Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 6380. (b) Lefkowitz, R. J. Angew. Chem. Int. Ed. 2013, 52, 6367] es aún desconocida. Por lo tanto, el diseño y la síntesis de nuevas moléculas no-peptídicas con alta 25 afinidad por el receptor NK1, y preferentemente con una estructura química diferente de los antagonistas de receptores NK1 conocidos, es un área importante en la química médica moderna.

Descripción de la invención 30

Un primer aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula general I,

O R R R 2 O Y X F a b

Fórmula general I

o uno cualquiera de sus posibles estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, donde:

- Ra se selecciona entre H y CH2OR1, donde R1 se selecciona a su vez entre 5

hidrógeno,

un grupo alquilo C1-C20,

un grupo arilo C6-C20,

un grupo COR1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc-butilo y fenilo, 10

un grupo que junto a R2 forma un ciclo, y

un grupo SiR’R’’R’’’, donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, terc-butilo y fenilo;

- Rb se selecciona independientemente entre un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, OH y un grupo de fórmula II, donde Z se selecciona entre O y S, y el carbono 15 contiguo a Z es quiral y puede tener la configuración R o S, preferiblemente es R;

fórmula II

- X se selecciona entre OR3, NR4R5 y una cadena heterocíclica de 3 a 15 miembros, donde: 20

 R3 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, un grupo acilo, un grupo alquilsulfonilo, un grupo arilsulfonilo, un grupo de fórmula III, un grupo de fórmula IV, un grupo de fórmula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20, y un grupo que junto a R2 forma un ciclo;

 R4 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20; 25

 R5 se selecciona entre H, un grupo de fórmula III, un grupo de fórmula IV y un grupo de fórmula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20;

fórmula III fórmula IV fórmula V

- Y se selecciona entre O, S y NH; y

- R2 es H, o forma un ciclo de 5 o 6 eslabones junto a R1 o R3, de tal manera que en dicho 5 ciclo el O contiguo a R2 se encuentra separado del O contiguo a R1 o R3 por al menos un átomo de C que consiste en –C(R6)(R7)–, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.

El término “alquilo” o “grupo alquilo” se refiere, en la presente invención, a cadenas 10 carbonadas alifáticas, lineales o ramificadas, saturadas o insaturadas, cíclicas o heterocíclicas, que pueden tener de 1 a 50 átomos de carbono, preferiblemente estas cadenas tienen entre 1 y 20 átomos de carbono, más preferiblemente de entre 1 y 15, o de entre 1 y 8, o de entre 1 y 6, o de entre 1 y 4 átomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo tal como se refieren en la invención son, pero sin limitarse, n-propilo, isopropilo, n-butilo, 15 sec-butilo, n-pentilo, vinilo, etinilo, 1- ó 2-propenilo, 1- ó 2-propinilo, ciclopropilo, ciciclohexilo, 4-piperidinilo, e incluye además otros grupos preferidos como metilo, etilo o terc-butilo. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como, pero sin limitarse a, COOH, SO4H o PO4H2.

20

El término “cadena lineal” se refiere en la presente invención a una cadena formada por un número comprendido entre 1 y 20 átomos de carbono unidos entre sí mediante enlaces covalentes C-C, complementada su estructura con uniones a hidrógenos.

El término “cadena ramificada” se refiere en la presente invención a una cadena carbonada, 25 en la que existe al menos 1 átomo de carbono adicional enlazado a alguno de los átomos que constituye dicha cadena.

El término “cadena saturada” se refiere en la presente invención a una cadena carbonada en la que no hay ningún doble o triple enlace. 30

El término “cadena insaturada” se refiere en la presente invención a cadenas carbonadas en las que existe al menos un doble o triple enlace C-C.

El término “cadena cíclica” se refiere en la presente invención a una cadena formada por un número comprendido entre 3 y 8 átomos de carbono con estructura de anillo, que se puede considerar el resultado de eliminar un hidrógeno del carbono terminal de una cadena lineal y unirlo al primer carbono de la cadena.

5

El término “cadena heterocíclica” se refiere en la presente invención a una cadena monocíclica, bicíclica o tricíclica de 3 a 15 miembros, que comprende átomos de carbono y al menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre, y que está insaturada, saturada o parcialmente saturada. Preferiblemente, la cadena heterocíclica tiene de 4 a 8 miembros con uno o más heteroátomos, más preferiblemente de 10 5 a 6 miembros con uno o más heteroátomos, y aún más preferiblemente de 1 a 3 heteroátomos. Para el propósito de esta invención el heterociclo puede ser un sistema monocíclico, bicíclico o tricíclico, que puede incluir anillos fusionados. Los átomos de nitrógeno, carbono y azufre del radical heterocíclico opcionalmente pueden estar oxidados; los átomos de nitrógeno opcionalmente pueden estar cuaternizados y el radical heterocíclico 15 puede estar parcial o totalmente saturado o ser aromático. Ejemplos de heterociclos pueden ser, no limitativamente: tetrahidrofurano, dioxano, piperidina y 1,2,3-triazol.

El término “arilo” se refiere, en la presente invención, a cadenas cíclicas aromáticas o heterocíclicas aromáticas de entre 6 y 20 átomos de carbono. El término “cadena cíclica 20 aromática” se refiere en la presente invención a una cadena carbonada constituida por sistemas monocíclicos o policíclicos de naturaleza aromática. El término “cadena heterocíclica aromática” se refiere en la presente invención a una cadena cíclica aromática en las que uno o más átomos del ciclo es un heteroátomo seleccionado entre N, O y S. Los grupos arilo son por ejemplo, pero sin limitarse a, fenilo o naftilo. Preferiblemente el grupo 25 arilo tiene de 6 a 10 átomos de carbono, y más preferiblemente el grupo arilo es un fenilo. Los radicales arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como metilo, metoxi, flúor y trifluorometilo. Radicales arilo sustituidos son por ejemplo, pero sin limitarse a, tolilo o p-fluorofenilo.

30

El término “acilo” se refiere a un grupo COR3a donde R3a puede ser un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20,.

Los términos “alquilsulfonilo” y “arilsulfonilo” hacen referencia a un grupo SO2R3a, donde R3a puede ser, respectivamente, un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20. 35

Debe entenderse que el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere, en esta solicitud de patente, a aquella sal que cuando se administra a un receptor es capaz de proporcionar (directamente o indirectamente) un compuesto según se describe en el presente documento. Sin embargo, se apreciará que las sales farmacéuticamente no aceptables también están dentro del alcance de la invención ya que éstas pueden ser útiles, 5 por ejemplo, en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. La preparación de sales puede llevarse a cabo mediante métodos conocidos en la técnica.

Según la presente memoria, las sales farmacéuticamente aceptables de compuestos previstos en el presente documento, se pueden sintentizar mediante métodos químicos 10 convencionales a partir de un compuesto inicial que contiene un resto básico o ácido. Generalmente, tales sales se preparan, por ejemplo, haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de los compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico o en una mezcla de los dos. Generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o 15 acetonitrilo. Ejemplos de sales de adición de ácidos incluyen sales de adición de ácido mineral tales como, por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, nitrato, fosfato y sales de adición de acido orgánico tales como, por ejemplo, acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartrato, malato, mandelato, metanosulfonato y p-toluenosulfonato. Ejemplos de sales de adición de bases incluyen sales inorgánicas tales 20 como, por ejemplo, sales de sodio, potasio, calcio, amonio, magnesio, aluminio y litio, y sales de bases orgánicas tales como, por ejemplo, etilendiamina, etanolamina, N,N-dialquiletanolamina, trietanolamina, glucamina y sales de aminoácidos básicos.

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I que se describe en esta 25 solicitud de patente es un compuesto donde Rb es un grupo de fórmula II, en el que Z se selecciona entre O y S.

fórmula II

30

En este grupo de fórmula II, el carbono contiguo a Z es quiral y puede tener la configuración R o S, preferiblemente es R, de tal manera que dicho compuesto tiene la siguiente fórmula general:

O Z R R 2 O Y X F C F 3 C F 3 C H 3 a

Fórmula Ia 5

donde Z, Y, X, Ra y R2 se definen como se ha indicado anteriormente.

En una realización aún más preferida, el compuesto de fórmula general I de la presente invención es un compuesto de fórmula Ia donde Z es O.

10

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia según cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde Y es O.

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia según cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde X es OR3, y R3 tiene el significado 15 indicado anteriormente.

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia según cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto donde Ra es CH2OR1 y R2 forma un ciclo junto a R1, donde el átomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del átomo de O 20 contiguo a R1 por un grupo –C(R6)(R7)–, de manera que R2 forma un ciclo de 6 eslabones junto a R1, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20 Preferiblemente, el grupo –C(R6)(R7)– es un grupo seleccionado entre –C(CH3)2– y –CH(C6H5) –.

25

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia según una cualquiera de las realizaciones que se describen, es un compuesto dónde Ra es CH2OR1, R1 y R2 forman un ciclo, y X es OH.

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia según cualquiera de las realizaciones que se describen en esta solicitud de patente, es un compuesto donde X es OR3 y R2 forma un ciclo junto a R3, donde el átomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del átomo de O contiguo a R3 por un grupo –C(R6)(R7)–, de manera que R2 forma un ciclo de 5 eslabones junto a R3, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente 5 entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20. Preferiblemente, el grupo –C(R6)(R7)– es un grupo seleccionado entre –C(CH3)2– y –CH(C6H5) –.

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia según cualquiera de las realizaciones que se describen en esta solicitud de patente, es un compuesto donde X es 10 OR3, R3 y R2 forman un ciclo, en particular un ciclo tal como se ha descrito en el párrafo anterior, y Ra puede ser H, o un grupo CH2OH opcionalmente protegido con un grupo protector de alcoholes tal como son los éteres de sililo [por ejemplo, terc-butildifenilsililo (TDBPS)]. Preferentemente Ra es H.

15

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia es un compuesto donde X es OH y R2 es H, donde el resto de sustituyentes pueden tener el significado que se describe en cualquiera de las realizaciones que se describen en la presente solicitud de patente.

20

En una realización aún más preferida, el compuesto de fórmula general I o Ia es un compuesto donde X es OH, R2 es H y Ra se selecciona entre H y CH2OH.

En una realización preferida, el compuesto de fórmula general I se selecciona del grupo que consiste en: 25

a) b)

30

c) d)

e) f)

5

g) h)

i) j) 10

Según la presente descripción, cualquiera de los compuestos definidos anteriormente, es decir aquellos compuestos que responden a la fórmula general I, incluyendo cualquiera de

las realizaciones o ejemplos preferidos, pueden ser igualmente referidos en esta memoria como “compuesto o compuestos de la invención”.

Los compuestos de la invención son análogos del aprepitant y se ha comprobado que presentan actividad antagonista de los receptores NK-1 y actividad anticancerosa. Así, los 5 compuestos de fórmula general I, y sus sales farmacéuticamente aceptables, pueden ser de utilidad en medicina, para prevenir y/o tratar distintas enfermedades.

Un segundo aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la invención (incluyendo al compuesto de fórmula 10 general I o alguna cualquiera de sus realizaciones preferidas), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, preferiblemente en una cantidad terapéuticamente eficaz. En adelante, dicha composición farmacéutica puede ser igualmente referida como “composición farmacéutica de la invención”.

15

La composición puede, por ejemplo, comprender a su vez al menos un adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, y/o al menos otro principio activo farmacéuticamente aceptable u otro excipiente conocido en el campo además del compuesto de fórmula I, para dar lugar a una composición farmacéutica o medicamento que puede ingerir un individuo. La preparación de dicha composición farmacéutica puede llevarse a cabo mediante métodos 20 convencionales conocidos por los expertos en la materia. Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula I se encontrarán, preferentemente, en una composición farmacéutica o forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir, que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no incluyendo material considerado tóxico a 25 niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para el principio activo son preferiblemente superiores al 50%, más preferiblemente superiores al 70%, y todavía más preferiblemente superiores al 90%. En una realización preferida, son superiores al 95% de compuesto de fórmula I.

30

Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos conocidos por los técnicos en la materia y utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas.

Los compuestos de fórmula I descritos en la presente invención, así como las 35 composiciones farmacéuticas que los contienen pueden ser utilizados junto con otros

fármacos, o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia de combinación. Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de una composición separada para su administración simultánea o no a la de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I. 5

En otra realización particular, dicha composición farmacéutica se prepara en una forma de composición sólida o en una suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición terapéutica proporcionada por esta invención puede ser administrada por cualquier vía de administración apropiada, para lo cual dicha composición 10 se formulará en la forma farmacéutica adecuada a la vía de administración elegida. En una realización particular, la administración de la composición terapéutica proporcionada por esta invención se efectúa por vía oral, tópica, rectal o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica, intramuscular, intravenosa, etc.).

15

La cantidad de compuesto de la invención, o de sus sales farmacéuticamente aceptables, terapéuticamente eficaz que debe administrarse (también referida en la presente descripción como cantidad terapéuticamente eficaz o efectiva), así como su dosificación para tratar un estado patológico con dichos compuestos, dependerá de numerosos factores, entre los que se encuentra la edad, el estado del paciente, la severidad de la enfermedad, la ruta y 20 frecuencia de administración, el compuesto modulador a utilizar, etc.

Otro aspecto de la invención se refiere al uso de al menos un compuesto de la invención, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en cualquiera de sus realizaciones y alternativas, y de las composiciones que lo comprenden, para la fabricación de una 25 composición farmacéutica o un medicamento. Debe entenderse de la presente invención que cualquiera de estos usos en el ámbito de la medicina se refieren también, y análogamente, a un compuesto de fórmula general I como el aquí descrito para su uso en medicina, así como a un método, como puede ser de administración, del compuesto para la prevención y tratamiento de enfermedades. Asimismo, engloba esta invención el uso de un 30 compuesto de fórmula general I para preparar una composición para su uso en medicina, en cualquiera de los casos que se van a comentar.

El compuesto de fórmula I de la invención, así como la composición farmacéutica que comprende alguno de estos compuestos, pueden servir para tratamiento y/o prevención de 35 una enfermedad, tal como puede ser, y sin limitarse a, una enfermedad relacionada con el

sistema nervioso (preferentemente alteraciones o trastornos del sistema nervioso central tales como enfermedad de Parkinson, ansiedad y depresión), artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, cáncer, adherencia abdominal post-quirúrgica, migraña, inflamación, una enfermedad pulmonar crónica, incluyendo el EPOC (enfermedad pulmonar obstructiva crónica) y el asma bronquial, apnea obstructiva del sueño, una desregulación de 5 la función cardiaca, trombosis arterial, osteoporosis, obesidad, resistencia a insulina, enfermedad de Crohn, la naúsea y el vómito.

Dentro de las enfermedades relacionadas con el sistema nervioso que pueden tratarse y/o prevenirse con dichos compuestos o composiciones se incluye la esquizofrenia, la 10 enfermedad de Parkinson, el estrés, la ansiedad, la depresión, la rabia, la psoriasis y el dolor patológico, tal como puede ser el dolor derivado de la inflamación, de una lesión persistente, degenerativa y/o neuropática.

Dentro de los tipos de cáncer que pueden tratarse y/o prevenirse con dichos compuestos o 15 composiciones se incluye por ejemplo: melanoma, neuroblastoma, glioma, linfoma de Hodgkin, leucemia linfoblástica, rabdomiosarcoma, linfoma de burkit, carcinoma de pulmón, sarcoma de Edwing, osteosarcoma, ganglioma maligno, melanoma maligno invasivo, célula metastásica de melanoma y cáncer de mama.

20

Otro aspecto de la presente invención se refiere al procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula general I como se describe, en cualquiera de sus variantes, que comprende al menos las siguientes etapas:

a. Obtener un tioglicósido de fórmula VIII, donde Ra se define tal como se indica para un compuesto de fórmula I, R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, 25 X’ se selecciona entre un grupo OH y un grupo N3, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH;

fórmula VIII

30

b. Hacer reaccionar el tioglicósido de fórmula VIII con reactivos de protección de alcoholes tales como, por ejemplo, haluro de trialquilsililo, haluro de dialquil aril sililo,

dialquilcetonas o sus dialquilacetales, arilaldehidos o sus dialquilacetales ú óxido de dialquilestaño; esta reacción puede tener lugar en una o varias etapas, para obtener el compuesto de fórmula IX, donde únicamente el grupo en posición 2 del carbohidrato está desprotegido;

5

fórmula IX

donde:

- A’’ se selecciona entre H y CH2OP1, donde P1 se selecciona entre

un grupo alquilo C1-C20,

un grupo arilo C6-C20, 10

un grupo COP1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc-butilo y fenilo,

un grupo que junto a P2 forma un ciclo, y

un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo, 15

- R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20,

- X’’ se selecciona entre un grupo N3 y un grupo OP3, donde P3 es un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P2,

- Y se selecciona entre O, S y NH,

- P2 se selecciona entre 20

un grupo SiR’R’’R’’’ donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

un grupo que forma un ciclo de 6 eslabones junto a P1, y

un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P3,

de tal manera que en el ciclo el O contiguo a P2 se encuentra separado del O 25 contiguo a P1 o P3 por un átomo de C que consiste en –C(R6)(R7)–, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20;

c. Hacer reaccionar el compuesto de fórmula IX con un haluro o un tosilato de p-30 fluorobencilo para obtener el compuesto de fórmula X, en donde A’’, R, X’’ y P2 se definen como anteriormente, e Y se selecciona entre O, S y NH;

imagen1

fórmula X

d. Transformar el compuesto X obtenido en la etapa anterior en un compuesto donador de glicosilo de fórmula XI, donde W se selecciona entre OH, un grupo sulfóxido 5 SOR, un grupo fósfito O(OR)2, y un grupo tricloracetimidato; y

imagen2

fórmula XI

e. Transformar el compuesto XI obtenido en la etapa anterior en un compuesto de 10 fórmula general I tal como se describe en cualquiera de las realizaciones de esta solicitud de patente, a través de una reacción de glicosidación.

La transformación del compuesto XI en el compuesto de fórmula I (etapa e) puede realizarse mediante un proceso de varias etapas que comprende una reacción de glicosidación, 15 preferentemente pero sin limitarse, a través de la metodología del tricloroacetimidato, y varios procesos de protección y desprotección de los grupos en posición 3, 4, 5 y 6 del anillo tetrahidropiranilo.

En una realización preferida, el procedimiento de obtención del compuesto de fórmula 20 general I, conforme a aquellas realizaciones descritas en esta solicitud de patente donde Rb es el grupo de fórmula II, comprende hacer reaccionar el compuesto XI con 2,2,2-tricloroacetonitrilo, en presencia de cantidades catalíticas de 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU); y posteriormente hacer reaccionar el producto que se obtiene con 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo. 25

En otras realizaciones preferidas, el procedimiento de obtención del compuesto de fórmula I tal como se describe en esta solicitud de patente adicionalmente comprende la protección y/o desprotección selectiva de grupos en posición 3, 4, 5 y/o 6 del anillo tetrahidropiranilo.

En otras realizaciones preferidas alternativas, el procedimiento comprende adicionalmente la reducción y/o alquilación, acilación o reacción 1,3-dipolar de Huisgen para obtener compuestos de fórmula I donde X es NR4R5 o una cadena heterocíclica.

5

En una realización preferida, el procedimiento de obtención del compuesto de fórmula I tal como se describe en esta solicitud de patente, además comprende al menos una de las siguientes etapas:

f. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa e del procedimiento con un agente reductor de azidas, cuando en la primera etapa del procedimiento se obtiene un 10 compuesto de fórmula VIII donde X’ es un grupo N3;

g. Hacer reaccionar compuesto obtenido en cualquiera de las etapas e o f con fluoruro de tetrabutil amonio en THF;

h. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas e, f o g con una cantidad catalítica de ácido 10-camforsulfónico en metanol; 15

i. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas g o h con un dimetoximetil derivado de fórmula CH3O–C(R6)(R7)–OCH3, en donde R6 y R7 se definen tal como se indica para un compuesto de fórmula I, si en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de fórmula VIII donde Ra es CH2OH;

j. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas f, g o h, con 20 un haluro de alquilo de fórmula R8-X o un haluro de acilo de fórmula R9-CO-X, en donde R8 es un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, o un grupo de fórmula III o de fórmula IV según se define para un compuesto de fórmula I, y donde R9 es un grupo de fórmula V según se define como para un compuesto de fórmula I.

25

En una realización preferida, la obtención del tioglicósido de fórmula VIII donde X´ es OH (etapa a) en el procedimiento de obtención del compuesto de fórmula general I que se describe en esta solicitud de patente comprende:

a.1. Hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado con fórmula VI, donde Ra se define tal como se ha indicado anteriormente, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH; 30

imagen3

fórmula VI

con un tiol que tiene una fórmula RSH, donde R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, en presencia de un callizador tipo acido de Lewis, tal como, por ejemplo ácido trifuloroboroeterato o trimetilsililo triflurometanosulfonato, para obtener un tioglicósido que tiene la fórmula VII, donde Ra, Y y R tienen el mismo significado establecido 5 anteriormente;

imagen4

fórmula VII

a.2. Obtener el tioglicósico de fórmula VIII mediante reacción de desacetilación del 10 tioglicósido peracetilado de fórmula VII con catálisis ácida o básica.

La presente solicitud de patente también se refiere a un procedimeinto alternativo para la obtención del compuesto de fórmula I de la invención. Este procedimento comprende:

a. Obtener, preferentemente según las etapas a.1 y a.2 descritas anteriormente, un 15 tioglicósido de VIIIa, donde Ra se define tal como se ha descrito en relación a un compuesto de fórmula I, R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH.

imagen5

fórmula VIIIa 20

b1. Derivatizar de forma selectiva el grupo hidroxilo en la posición 3 del anillo, en una o varias etapas. Preferentemente, la derivatización comprende la formación del derivado de dioxaestannileno intermedio entre los hidroxilos de las posiciones 3 y 4, y posterior apertura del mismo por tratamiento con un reactivo electrófilo, por ejemplo, con haluros (cloruros, 25 bromuros o yoduros) de alquilo, haluros de acilo, o haluros o anhídridos de alquil ó arilsulfonilo, para obtener un compuesto de fórmula XII:

imagen6

fórmula XII

donde Ra se define como anteriormente, R se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20 y arilo C6-C20, R3 se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20, arilo C6-C20, acilo, alquilsulfonilo, 5 arilsulfonilo, un grupo de fórmula III, un grupo de fórmula IV y un grupo de fórmula V.

b2. Hacer reaccionar el tioglicósido de fórmula XII con reactivos de protección de alcoholes tales como, por ejemplo, haluro de trialquilsililo, haluro de dialquil aril sililo, dialquilcetonas o sus dialquilacetales, arilaldehidos o sus dialquilacetales ú óxido de 10 dialquilestaño; esta reacción puede tener lugar en una o varias etapas, para obtener el compuesto de fórmula XII, donde únicamente el grupo en posición 2 del carbohidrato está desprotegido;

imagen7

fórmula XIII 15

donde:

- A’’ se selecciona entre H y CH2OP1, donde P1 se selecciona entre

un grupo alquilo C1-C20,

un grupo arilo C6-C20,

un grupo COP1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc-20 butilo y fenilo,

un grupo que junto a P2 forma un ciclo, y

un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

- R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, 25

- R3 se selecciona entre un grupo alquilo C1-C20, arilo C6-C20, acilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, un grupo de fórmula III, un grupo de fórmula IV y un grupo de fórmula V;

- Y es un grupo O, S o NH,

- P2 se selecciona entre

un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo, y

un grupo que forma un ciclo de 6 eslabones junto a P1, de tal manera que en dicho ciclo el O contiguo a P2 se encuentra separado del O contiguo a P1 por un átomo de C que consiste en –C(R6)(R7)–, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un 5 grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20;

c´. Hacer reaccionar el compuesto de fórmula XIII con un haluro o un tosilato de p-fluorobencilo para obtener el compuesto de fórmula XIV, en donde A’’, R, R3 y P2 se definen como anteriormente, e Y se selecciona entre O, S y NH; 10

imagen8

fórmula XIV

d´. Transformar el compuesto XIV obtenido en la etapa anterior en un compuesto donador de glicosilo de fórmula XV, donde W se selecciona entre OH, un grupo sulfóxido 15 SOR, un grupo fósfito O(OR)2, y un grupo tricloracetimidato;

imagen9

fórmula XV

e´. Transformar el compuesto XV obtenido en la etapa anterior en un compuesto de 20 fórmula general I tal como se describe en la presente solicitud de patente, a través de una reacción de glicosidación.

La transformación del compuesto XV en el compuesto de fórmula I (etapa e´) puede realizarse mediante un proceso de varias etapas que comprende una reacción de 25 glicosidación, preferentemente pero sin limitarse, a través de la metodología del tricloroacetimidato, y varios procesos de protección y desprotección de los grupos en posición 3, 4, 5 y 6 del anillo tetrahidropiranilo.

Breve descripción de las figuras

FIG 1. Secuencia de aminoácidos que componen la sustancia P (SP).

FIG 2. Curvas dosis-respuesta de los antagonistas NK-1 de referencia CP-96345 y L-5 732,138 determinadas por inhibición de la sustancia P (SP) a través del test IPone.

FIG 3. Curvas dosis-respuesta de los derivados 2, 4 y 5 determinadas por inhibición de la sustancia P (SP) a través del test IPone.

10

FIG 4. Datos de inhibición de la actividad de la SP con los derivados 3, 6 y de los antagonistas de referencia CP-96345 y L-732,138, obtenidos a una concentración del ligando de 10-6M.

Ejemplos 15

EJEMPLO 1. Procedimiento de obtención de compuestos de fórmula XIV.

1.1. Preparación de tioglicósidos.

20

Fenil 2,3,4,6-tetra-O-acetil-1-tio--D-galactopiranósido, 12

12

Sobre una disolución de pentaacetato de D-galactosa (3,90 g, 10,00 mmol) en 25 diclorometano anhidro (40 mL), a 0C, se adiciona gota a gota trifluoruro de boro eterato (5,00 mL, 40 mmol). Tras 15 min. de agitación a temperatura ambiente se añade bencenotiol (1,07 mL, 10,50 mmol). La reacción se mantiene bajo agitación a temperatura ambiente durante una noche tras lo cuál se observa mediante cromatografía en capa fina que se consume el producto de partida. A continuación, se adiciona una disolución acuosa saturada 30 de NaHCO3, se separan las dos fases y se extrae la fase acuosa con CH2Cl2 (2x40mL) y los

extractos orgánicos reunidos se lavan con disolución saturada de NaCl. La fase orgánica se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora a vacío. El residuo obtenido es de un alto grado de pureza aunque se purifica mediante cromatografía en columna, usando acetato de etilo-hexano en proporción 1:4 como eluyente, obteniéndose el producto 12 (3,96 g, 9,00 mmol) como un sólido blanco con un rendimiento del 90%. P.f.: 115-116°C.1H-RMN 5 (500MHz, CDCl3):  7.52-7.50 (m, 2H), 7.32-7.31 (m, 3H), 5.42 (d, J=2.7 Hz, 1H), 5.24 (t, J=10.0 Hz, 1H), 5.05 (dd, J=3.3 y 9.9 Hz, 1H), 4.72 (d, J=, 10.0 Hz, 1H), 4.19 (dd, J=6.9 y 11.4 Hz, 1H), 4.12 (dd, J=6.2 y 11.3 Hz, 1H), 3.94 (t, J=6.9 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.97 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 170.5, 170.4, 170.2, 169.6, 132.7, 132.6, 129.0, 128.3, 86.8, 72.1, 67.3, 67.4, 61.8, 21.0, 20.8. EMAR: calculado para 10 C20H25O9S: [M+H]+ 441.1219 encontrado 441.1200 (-4.4 ppm).

Fenil 2,3,4-tri-O-acetil-1-tio--L-arabinopiranósido, 13.

15

13

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de 12, partiendo de tetraacetato de -L-arabinosa (5,24 g, 16,48 mmol), trifluoruro de boro eterato (8,27 mL, 65,90 mmol) y bencenotiol (1,77 mL, 17,30 mmol), obteniendo el producto 10 (6,00 g, 16,30 mmol) como un aceite de color naranja con rendimiento cuantitativo, que se 20 utiliza directamente en la reacción siguiente sin purificación previa. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.49-7.47 (m, 2H), 7.29-7.24 (m, 3H), 5.26-5.24 (m, 1H), 5.22 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5.11 (dd, J=3.4 y 8.5 Hz, 1H), 4.82 (d, J=, 7.9 Hz, 1H), 4.10 (dd, J=3.6 y 12.3 Hz, 1H), 3.65 (dd, J=1.9 y 12.7 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.98 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 169.8, 169.5, 169.0, 132.0, 129.1, 128.8, 128.7, 127.7, 125.2, 86.3, 70.3, 68.3, 25 67.4, 65.1, 20.6, 20.5, 20.3. [α]20D: +24.70 (c 1, cloroformo).

1.2. Desacetilación Zemplen para la síntesis de derivados polihidroxilados.

30

Fenil 1-tio--D-galactopiranósido, 14

14

Sobre una disolución del compuesto 12 (3,96 g, 9,00 mmol) en metanol (45 mL) se adiciona otra de metóxido de sodio 1 M en metanol (36 mL, 3,60 mmol). Tras agitar durante 30 min., la reacción se neutraliza con resina ácida y se filtra obteniéndose el producto 14 (2,40 g, 5 8,82 mmol) como un sólido blanco con un rendimiento cuantitativo, que es utilizado directamente en la siguiente reacción sin necesidad de purificar. P.f.: 114-115°C. 1H-RMN (500MHz, MeOD):  7.56-7.54 (m, 2H), 7.30-7.27 (m, 2H), 7.24-7.21 (m, 1H), 4.59 (d, J=9.8 Hz, 1H), 3.90 (d, J=3.0 Hz, 1H), 3.78-3.74 (m, 1H), 3.72-3.69 (m, 1H), 3.61 (t, J=9.5 Hz, 1H), 3.57 (t, J=6.1 Hz, 1H), 3.50 (dd, J=3.3 y 9.2 Hz, 1H). 13C RMN (500 MHz, MeOD) δ 136.1, 10 132.2, 129.8, 128.0, 90.3, 80.6, 76.4, 71.0, 70.4, 62.6. EMAR: calculado para C12H16O5NaS: [M+Na]+ 295.0616 encontrado 295.0605 (3.6 ppm).

Fenil 1-tio-α-L-arabinopiranósido, 15.

15

15

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de 14, partiendo de 13 (6,00 g, 16,30 mmol) y metóxido sódico en metanol 1M (10,00 mL, 10,00 mmol), obteniendo 15 (3,91 g, 16,15 mmol) como un sólido rojo con rendimiento cuantitivo y se utiliza directamente en la siguiente reacción sin purificación previa. P.f.: 114-115°C. 1H-20 RMN (500MHz, MeOD): δ 7.53-7.50 (m, 2H), 7.31-7.22 (m, 3H), 4.64 (d, J=8.1 Hz, 1H), 3.98 (dd, J=3.6 y 12.2 Hz, 1H), 3.89 (td, J=1.9 y 3,4 Hz, 1H), 3.70 (t, J=8.2 Hz, 1H), 3.60-6.56 (m, 2H). 13C RMN (500 MHz, MeOD) δ 136.1, 132.4, 129.8, 128.1, 90.4, 74.9, 71.6, 69.5 (2). [α]20D: +15.05 (c 1, cloroformo).

25

1.3. Preparación de 3,4-O-isopropiliden-acetales.

Fenil 3,4-O-isopropiliden-1-tio--D-galactopiranósido, 16.

16

Sobre una suspensión del derivado polihidroxilado 14 (2,21 g, 8,12 mmol) en 60 mL de 2,2-dimetoxipropano (2,2-DMP), a temperatura ambiente y bajo atmósfera de argón, se adiciona 5 una cantidad catalítica de ácido 10-camforsulfónico (CSA) (60,35 mg, 0,26 mmol) y la mezcla se deja agitando durante 48 horas. Transcurrido ese tiempo, la reacción se neutraliza con trietilamina, se filtra para eliminar la sal de amonio formada y el disolvente se evapora a vacío. El residuo obtenido se disuelve en la mínima cantidad posible de tolueno y se evapora a vacío, tras repetir este proceso dos veces, se obtiene el acetal mixto, junto con 10 una pequeña cantidad del diol deseado. El crudo obtenido se disuelve en la mínima cantidad posible de metanol, se trata con una cantidad catalítica de CSA (60,35 mg, 0,26 mmol) a 0C y se agita a temperatura ambiente durante 5 min. A continuación se neutraliza con trietilamina, se filtra la sal de amonio formada y el disolvente se evapora a vacío. El residuo obtenido se disuelve en tolueno y se evapora repitiéndose este proceso dos veces, 15 obteniendo 16 (2,16 g, 6,92 mmol) como un sólido blanco con un rendimiento del 85%. P.f.: 92-93°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.48-7.46 (m, 2H), 7.25-7.18 (m, 3H), 4.45 (d, J=10.0 Hz, 1H), 4.08-4.03 (m, 2H), 3.91-3.87 (m, 1H), 3.81-3.78 (m, 1H), 3.76-3.72 (m, 1H), 3.58 (bs, 1H), 3.55-3.51 (m, 1H), 3.17 (bs, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.26 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 132.5, 131.7, 128.8, 127.5, 110.0, 87.1, 79.3, 76.9, 73.6, 71.2, 62.0, 27.8, 26.1. 20 EMAR: calculado para C15H21O5S: [M+H]+ 313.1110 encontrado 313.1107 (-0.9 ppm).

Fenil 3,4-O-isopropiliden-1-tio-α-L-arabinopiranósido, 17.

25

17

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de 16, partiendo de 15 (3,91 g, 16,15 mmol), 2,2-dimetoxipropano (120 mL, 969,00 mmol) y ácido 10-canforsulfónico (0,26 mg, 1,13 mmol), obteniendo el producto 17 (3,85 g, 13,63 mmol)

como un sólido blanco con un rendimiento del 85%. P.f.: 92-93°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): δ 7.56-7.53 (m, 2H), 7.33-7.28 (m, 3H), 4.53 (d, J=9.2 Hz, 1H), 4.28-4.24 (m, 2H), 4.14-4.19 (m, 1H), 3.82-3.78 (m, 1H), 3.67-3.36 (m, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H).13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 132.8, 129.1, 128.2, 110.3, 88.3, 78.3, 73.0, 71.7, 65.8, 28.0. [α]20D: +17.56 (c 1, cloroformo). 5

1.4. Protección selectiva del hidroxilo primario.

Fenil 3,4-O-isopropiliden-6-O-terc-butildifenilsilil-1-tio--D-galactopiranósido, 18

10

18

Sobre una disolución de 16 (103,10 mg, 0,33 mmol) en DMF (66,20 mL, 2 mL/mmol 13) se adiciona cloruro de tert-butildifenilsilano (TBDPSCl) (0,11 mL, 0,41 mmol) e imidazol (56,34 mg, 0,83 mmol). Tras agitar durante 5 horas, la reacción se diluye con acetato de etilo (20 15 mL), se neutraliza con disolución saturada de NH4Cl y la fase acuosa se extrae con n-pentano (3x20mL). Los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vacío. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna, usando acetato de etilo-hexano en proporción 1:4. Se obtiene el producto 15 (174,49 mg, 0,32 mmol) como un sólido blanco con un rendimiento del 96%. P.f.: 50°C. 1H-20 RMN (500MHz, CDCl3):  7.73-7.70 (m, 4H), 7.54-7.53 (m, 2H), 7.45-7.35 (m, 6H), 7.28-7.27 (m, 3H), 4.44 (d, J=10.3 Hz, 1H), 4.28 (dd, J=1.9 y 5.4 Hz, 1H), 4.08 (t, J=6.2 Hz, 1H), 4.00-3.89 (m, 3H), 3.55 (ddd, J=2.2, 7.1 y 10.1 Hz, 1H), 1.41 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.06 (s, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 135.8, 134.9, 133.5, 133.4, 132.6, 132.4, 129.9, 129.2, 128.1, 127.9, 127.8, 110.3, 88.5, 79.1, 76.9, 73.4, 71.7, 63.1, 28.3, 26.9, 26.7, 26.4, 19.4. EMAR: 25 calculado para C31H38O5SSiNa: [M+Na]+ 573.2107 encontrado 573.2123 (2.8 ppm).

1.5. Reacción del hidroxilo en posición 2 con p-fluorobencil derivados.

Fenil 2-O-(p-fluorobencil)-3,4-O-isopropiliden-6-O-terc-butildifenilsilil-1-tio--D-30 galactopiranósido, 19

19

Sobre una disolución de 18 (4,00 g, 6,07 mmol) en THF (80 mL) se añade otra de hidruro de sodio (0,73 g, 18,21 mmol) en THF (10 mL) y se deja en agitación durante 1 hora. Transcurrido ese tiempo se adiciona IN(Bu)4 (0,90 g, 2,43 mmol) y tras 30 min. en agitación se adiciona una disolución de cloruro de p-fluorobencilo (1,10 mL, 9,11 mmol) en de THF (5 5 mL). La reacción se deja en agitación durante 48 horas y posteriormente se neutraliza con disolución acuosa saturada de cloruro de amonio y la fase acuosa se extrae con acetato de etilo (3x40 mL). Los extractos orgánicos se lavan con disolución saturada de cloruro de sodio y se secan sobre sulfato de sodio anhidro. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna usando acetato de etilo-hexano en proporción 1:8, obteniéndose 10 19 (3,60 g, 5,46 mmol) como un aceite amarillo con un rendimiento del 90%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.78-7.74 (m, 4H), 7.58-7.56 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, 9H), 7.29-7.25 (m, 2H), 7.10-7.04 (m, 2H), 4.84 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.69 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.65 (d, J=9.7 Hz, 1H), 4.34 (dd, J=2.0 y 5.6 Hz, 1H), 4.28 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.03-3.98 (m, 2H), 3.92 (td, J=1.9 y 6.5 Hz, 1H), 3.55 (dd, J=6.4 y 9.7 Hz, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.12 (bs, 9H). 13C RMN 15 (500 MHz, CDCl3) δ 162.5, (d, JCF=244.1 Hz), 135.8, 135.7, 135.4, 134.9, 134.0, 133.9, (d, JCF=3.1 Hz), 133.5 (2C), 131.8, 130.1, (d, JCF=8.4 Hz), 129.8, 129.7, 129.0, 127.8 (2C), 127.4, 115.2 (d, JCF=21.4 Hz), 110.0, 86.6, 79.8, 78.4, 76.9, 73.6, 72.8, 63.1, 28.0, 26.9, 26.7, 26.4, 19.3. EMAR: calculado para C38H43O5NaSFSi: [M+Na]+ 681.2482 encontrado 681.2479 (-0.5 ppm). 20

Fenil 2-O-(p-fluorobencil)-3,4-O-isopropiliden-1-tio--L-arabinopiranósido, 20.

20

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de 19, 25 partiendo de 17 (3,85 g, 13,63 mmol), hidruro de sodio (1,00 g, 41,50 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (2,00 g, 5,45 mmol) y cloruro de p-fluorobencilo (2,43 mL, 20,45 mmol), obteniendose 20 (4,60 g, 12,40 mmol) como un aceite amarillo con un rendimiento del 91%.

1H-RMN (500MHz, CDCl3): δ 7.52-7.50 (m, 2H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.31-7.24 (m, 3H), 7.05-7.00 (m, 2H), 4.79 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.78 (d, J=11.4 Hz, 1H), 4.31-4.28 (m, 1H), 4.23 (t, J=6.1 Hz, 1H), 4.20 (dd, J=3.8 y 13.2 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=3.8 y 13.0 Hz, 1H), 3.59 (dd, J=6.1 y 8.0 Hz, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.6 (d, JCF=245.7 Hz), 131.1, 133.7 (d, JCF=3.1 Hz), 132.0, 130.1 (d, JCF=8.1 Hz), 129.0, 127.6, 5 115.3 (d, JCF=21.4 Hz), 110.1, 86.5, 78.4, 72.8, 72.7, 64.9, 27.9, 26.3. [α]20D: -9.95 (c 1, cloroformo).

EJEMPLO 2. Glicosidación

10

2.1. Desprotección selectiva de la posición anomérica.

2-O-(p-fluorobencil)-3,4-O-isopropiliden-6-O-terc-butildifenilsilil-,-D-galactopiranosa, 21

21

Sobre una disolución de 19 (3,02 g, 4,59 mmol) en acetona (120 mL) al 99%, en ausencia 15 de luz, a -15C, se adiciona N-bromosuccinimida (NBS) (1,03 g, 5, 78 mmol) y se mantiene en agitación durante 30 min. Transcurrido ese tiempo, la reacción se trata con disolución acuosa saturada de NaHCO3 y la fase acuosa se extrae con diclorometano (3x40mL). Los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vacío. El residuo obtenido se purifica por columna cromatográfica usando acetato de etilo-20 hexano en proporción 1:8, obteniéndose un sirupo amarillo 18 (2,37g, 4,18 mmol) como una mezcla de los dos anómeros  en proporción 2:1 y con un rendimiento del 91%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.71-7.66 (m, 4Ha, 4Hb), 7.43-7.31 (m, 8Ha, 8Hb), 7.05-7.00 (m, 2Ha, 2Hb), 5.15 (dd, J=3.7 y 5.0 Hz, 1Ha), 4.78-4.73 (m, 1Ha, 1Hb), 4.67-4.64 (m, 1Ha, 1Hb), 4.41-4.28 (m, 2Ha, 2Hb), 4.23 (t, J=6.1 Hz, 1Hb), 3.96-3.80 (m, 2Ha, 2Hb), 3.55 (dd, J=7.2 y 25 5.9 Hz, 1Ha), 3.37 (t, J=6.5 Hz, 1Hb), 2.98 (d, J=6.4 Hz, 1Hb), 2.92 (d, J=4.1 Hz, 1Ha), 1.41 (s, 3Hb), 1.40 (s, 3Ha), 1.36 (s, 3Ha, 3Hb), 1.05 (s, 9Ha, 9Hb). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.7, (d, JCF=245.6 Hz), 135.8, 135.7 (2C), 133.9, (d, JCF=3.5 Hz), 133.8, 133.7, 133.6, (d, JCF=3.2 Hz), 133.6, 133.4, 130.0, (d, JCF=8.2 Hz), 129.9, (d, JCF=8.5 Hz), 129.8 (2C), 127.8, 127.7 (2C), 115.5 (d, JCF=21.3 Hz), 115.3, (d, JCF=21.1 Hz), 110.0, 109.4, 96.2, 91.0, 80.0, 30 78.0, 76.3, 74.7, 73.2, 72.9, 72.7, 72.5, 72.1, 68.5, 62.9, 62.8, 27.8, 27.7, 26.9, 26.0, 19.4. EMAR: calculado para C32H39O6NaSiF: [M+Na]+ 589.2398 encontrado 589.2398 (0.1 ppm).

2-O-(p-fluorobencil)-3,4-O-isopropiliden--L-arabinopiranósido, 22.

22

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de 21, partiendo de 17 (4,60 g, 12,40 mmol) y NBS (8,50 g, 47,23 mmol), obteniendose 22 (3,16 g, 5 11, 30 mmol) como una mezcla de ambos anómeros  y , en proporción 2:1 como un sirupo de color amarillo, con un rendimiento del 91%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3): δ 7.32-7.26 (m, 2Ha, 2Hb), 6.98-6.94 (m, 2Ha, 2Hb), 5.12 (d, J=2.5 Hz, 1Ha), 4.72-4.69 (m, 1Ha, 2Hb), 4.63-4.60 (m, 1Ha, 1Hb), 4.32 (t, J=6.3 Hz, 1Ha), 4.17-4.10 (m, 2Ha, 3Hb), 3.82 (d, J=13.2 Hz, 1Ha), 3.73 (dd, J=2.9 y 13.2 Hz, 1Hb), 3.49 (dd, J=3.3 y 6.7 Hz, 1Ha), 3.37 (t, J=6.5 Hz, 10 1Hb), 1.39 (s, 3Hb), 1.38 (s, 3Ha), 1.30 (s, 3Ha, 3Hb). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.5, (d, JCF=245.6 Hz), 162.4 (d, JCF=244.8 Hz), 134.0 (d, JCF=2.9 Hz), 133.7 (d, JCF=2.9 Hz), 129.9 (d, JCF=9.4 Hz), 129.8 (d, JCF=8.3 Hz), 115.3, (d, JCF=21.1 Hz), 115.1, (d, JCF=19.8 Hz), 109.9, 109.0, 96.0, 90.9, 80.1, 77.8, 76.4, 74.8, 73.1, 73.0, 72.4, 71.7, 62.7, 60.4, 27.8, 27.7, 26.0, 25.7. 15

2.2. Formación del tricloroacetimidato.

Tricloroacetimidato de 2-O-(p-fluorobencil)-3,4-O-isopropiliden-6-O-terc-butildifenilsilil-,-D-galactopiranósido, 23 20

23

Sobre una disolución de 21 (2,12g, 3,74 mmol) en una mezcla de ciclohexano/diclorometano (50 mL) en proporción 4:1 como disolvente se adiciona gota a gota 2,2,2-tricloroacetonitrilo al 98% (0,96 mL, 9,35 mmol) y cantidades catalíticas de 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno 25 (DBU) al 98% (0,23 mL, 1,50 mmol). La reacción se deja en agitación durante una noche. Transcurrido ese tiempo, se adiciona agua, la fase orgánica se lava con disolución acuosa saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se evapora a vacío.

Se obtiene un sirupo amarillo de alta pureza 23 (2,58 g, 3,63 mmol) como una mezcla de los dos anómeros : en proporción 3:1 y con un rendimiento del 97%. El producto obtenido se utiliza inmediatamente en la siguiente reacción.

Tricloroacetimidato de 2-O-(p-fluorobencil)-3,4-O-isopropiliden--L-arabinopiranósido, 24. 5

24

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de 23, partiendo de 22 (3,16 g, 11,20 mmol), 2,2,2-tricloroacetonitrilo al 98% (2,90 mL, 28,25 mmol) y DBU 98% (0,70 mL, 4,52 mmol), obteniedno el producto 24 (4,85 g, 11,00 mmol) como un aceite amarillo de alta pureza constituido por la mezcla de ambos anómeros  y  con un 10 rendimiento del 97%, que se utiliza directamente en la siguiente reacción.

2.2. Glicosidación del tricloroacetimidato.

Derivados de galactosa 25 y 26: 15

Sobre una disolución de 23 (0,16g, 0,22 mmol) y (1R)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol (0,17g, 0,67 mmol) en éter (7 mL), bajo atmósfera de argón, con 200 mg de tamiz molecular (4Å) y a 0°C, se adiciona trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (2,8 mL, 0,015 mmol). La reacción se agita durante una hora a temperatura ambiente. Transcurrido ese tiempo, se adiciona NaHCO3, se filtra sobre celita y se evapora el disolvente a vacío. Se obtiene un 20 sirupo amarillo como una mezcla de los dos anómeros : en proporción 3:1. Tras purificación por columna cromatográfica usando acetato de etilo-hexano en proporción 1:15, se obtiene el anómero  (106,51 mg, 0,13 mmol) como producto mayoritario con un rendimiento del 60 % y el anómero minoritario  (48,41 mg, 0,06 mmol) con un rendimiento del 25 %. 25

Anómero  (R)-1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-3,4-O-isopropiliden-6-O-terc-butil difenilsilil--D-galactopiranósido, 25

25

1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.86 (bs, 2H), 7.82 (bs, 1H), 7.73-7.70 (m, 4H), 7.47-7.37 (m, 6H), 7.21-7.18 (m, 2H), 6.97-6.92 (m, 2H), 4.91 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.61 (d, J=3.1 Hz, 2H), 4.58 (d, J=3.6 Hz, 1H), 4.42 (dd, J=5.5 y 7.8 Hz, 1H), 4.29 (dd, J=2.5 y 5.5 Hz, 1H), 4.18 (td, J=2.4 y 6.4 Hz, 1H), 3.98-3.89 (m, 2H), 3.42 (dd, J=3.7 y 7.8 Hz, 1H), 1.49 (d, J=6.6 Hz, 3H), 5 1.33 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.10 (s, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.5, (d, JCF=244.8 Hz), 145.8, 135.8 (2C), 133.9, (d, JCF=3.2 Hz), 133.7, 133.6, 132.1, (c, JCF=33.5 Hz), 129.9, 129.6, (d, JCF=8.3 Hz), 127.9, 127.8, 126.9 (d, JCF=2.4 Hz), 123.5 (c, JCF=272.9 Hz), 121.8, 115.3 (d, JCF=21.4 Hz), 109.3, 94.9, 76.2, 76.1, 73.5, 72.6, 71.5, 68.9, 63.3, 28.3, 27.0, 26.5, 24.4, 22.8, 19.4. EMAR: calculado para C42H45O6F7SiNa: [M+Na]+ 829.2771 encontrado 10 829.2811 (4.1 ppm).

Anómero : (R)-1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-3,4-O-isopropiliden-6-O-terc-butil difenilsilil--D-galactopiranósido, 26.

15

26

1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.85 (bs, 1H), 7.79-7.74 (m, 3H), 7.66-7.61 (m, 4H), 7.43-7.32 (m, 7H), 7.05-7.00 (m, 2H), 4.97 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.46 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.25 (dd, J=1.7 y 5.5 Hz, 1H), 4.17 (dd, J=5.8 y 6.7 Hz, 1H), 3.87 (dd, J=6.0 y 8.5 Hz, 1H), 3.77-3.71 (m, 2H), 3.42 (t, J=7.5 Hz, 1H), 1.50 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.02 20 (s, 9H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.6, (d, JCF=245.2 Hz), 148.4, 146.3, 135.7, 135.6, 134.1, (d, JCF=3.1 Hz), 133.5, 133.3, 131.9, (c, JCF=33.1 Hz), 131.6, (c, JCF=33.1 Hz), 129.9, (d, JCF=8.2 Hz), 129.8, 127.8, 127.5, 125.8 (d, JCF=2.2 Hz), 123.5 (c, JCF=272.3 Hz), 121.4, 115.3 (d, JCF=21.5 Hz), 110.1, 100.7, 79.7, 79.3, 74.9, 73.6, 73.3, 73.0, 62.6, 28.0, 26.8,

26.4, 25.8, 22.3, 19.3. EMAR: calculado para C42H45O6F7SiNa: [M+Na]+ 829.2771 encontrado 829.2809 (4.5 ppm).

Derivados de L-arabinosa 8 y 7:

Se sintetiza siguiendo un procedimiento similar al descrito para la preparación de los 5 derivados de galactosa 25 y 26, partiendo de 24 (4,85 g, 11,00 mmol), (1R)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol (8,50 g, 33,00 mmol) y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (0,14 mL, 0,77 mmol). Se obtiene un aceite amarillo como una mezcla de los dos anómeros : en proporción 2:1. Tras purificación por columna cromatográfica usando acetato de etilo-hexano en proporción 1:4, se obtiene el anómero  (1,47 g, 2,75 mmol) como producto 10 minoritario con un rendimiento del 25 % y el anómero mayoritario  (3,55 g, 6,60 mmol) con un rendimiento del 60 %.

(R)-1-3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-3,4-O-isopropiliden--L-arabinopiranósido, 8. 15

1H-RMN (500MHz, CDCl3): δ 8.04 (bs, 2H), 7.96 (bs, 1H), 7.24-7.22 (m, 2H), 6.99-6.94 (m, 2H), 4.99 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.66 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.57 (bs, 2H), 4.37 (dd, J=5.7 y 7.8 Hz, 1H), 4.32 (dd, J=2.5 y 5.6 Hz, 1H), 4.11 (dd, J=2.9 y 13.4 Hz, 1H), 3.90 (d, J=13.4 Hz, 1H), 20 3.44 (dd, J=3.4 y 7.9 Hz, 1H), 1.51 (d, J=6.6 Hz, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.32 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 163.8, (d, JCF=244.4 Hz), 148.0, 135.3 (d, JCF=3.2 Hz), 132.9 (c, JCF=32.9 Hz), 130.8 (d, JCF=8.2 Hz), 128.2, 128.1, 124.9 (c, JCF=272.2 Hz), 122.4 (c, JCF=3.9 Hz), 115.9 (d, JCF=21.3 Hz), 110.0, 96.4, 77.8, 76.6, 74.9, 72.2, 60.2, 28.4, 26.5, 24.5. [α]20D: +57.00 (c 1, cloroformo). 25

(R)-1-3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-3,4-O-isopropiliden--L-arabinopiranósido, 7.

1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.95 (bs, 2H), 7.84 (bs, 1H), 7.44-7.40 (m, 2H), 7.08-7.03 (m, 2H), 5.03 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.82 (bs, 2H), 4.61 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.24-4.21 (m, 1H), 4.17 (t, J=6.5 Hz, 1H), 3.86 (dd, J=3.1 y 13.2 Hz, 1H), 3.68 (dd, J=3.6 y 13.1 Hz, 1H), 3.47-3.43 (m, 1H), 1.53 (d, J=6.5 Hz, 3H) 1.36 (s, 3H), 1.32 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 163.8, 5 (d, JCF=243.0 Hz), 149.0, 135.7 (d, JCF=3.2 Hz), 132.6 (c, JCF=33.0 Hz), 131.1 (d, JCF=7.9 Hz), 127.7 (2), 124.9 (c, JCF=272.3 Hz), 121.9 (c, JCF=3.9 Hz), 115.9 (d, JCF=21.8 Hz), 111.0, 102.6, 81.0, 79.6, 76.8, 74.5, 73.6, 63.7, 28.1, 26.2, 23.0. [α]20D: +10.99 (c 1, cloroformo).

EJEMPLO 3. Desprotección selectiva de la posición 6. 10

Procedimiento general

Sobre una disolución de 25 ó 26 (1 equiv.) en tetrahidrofurano y bajo atmósfera de argón se adiciona fluoruro de tetrabutil amonio 1M (5 equiv.). Tras agitar durante 1h, se adiciona éter 15 y disolución saturada de NaCl. La fase acuosa se extrae con acetato de etilo, los residuos orgánicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vacío. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna, usando como eluyente acetato de etilo-hexano en proporción 1:4.

20

Anómero alfa: (R)-1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-3,4-O-isopropiliden--D-galactopiranósido, 27.

27

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 25 (0,70 g, 0,87 mmol) en THF (20 mL) y fluoruro de tetrabutil amonio 1M (4,34 mL, 4,34 mmol). Se obtiene 27 (0,40 g 0,70 mmol) como un sirupo amarillo. Rendimiento: 80%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.91 (bs, 2H), 7.83 (bs, 1H), 7.20-7.17 (m, 2H), 6.97-6.92 (m, 2H), 4.92 (c, J=6.7 Hz, 1H), 4.64 (d, J=3.5 Hz, 1H), 4.60 (d, J=11.3 Hz, 2H), 4.47 (dd, J=5.6 y 7.9 Hz, 1H), 4.30 (dd, J=2.7 y 5.6 5 Hz, 1H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.97, (dd, J=6.0 y 11.8 Hz, 1H), 3.87 (dd, J=3.9 y 11.8 Hz, 1H), 3.42 (dd, J=3.6 y 8.0 Hz, 1H), 1.52 (d, J=6.7 Hz, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.4, (d, JCF=244.2 Hz), 145.5, 133.5 (d, JCF=3.1 Hz), 131.9, (c, JCF=33.3 Hz), 129.5, (d, JCF=8.1 Hz), 126.7, 123.3, (c, JCF=272.8 Hz), 121.7, 115.1 (d, JCF=21.4 Hz), 109.5, 95.1, 76.1, 75.5, 74.5, 72.9, 71.3, 67.9, 62.8, 28.0, 26.4, 22.7. EMAR: 10 calculado para C26H27F7O6: [M]+ 568.1792 encontrado 568.1790 (0.5 ppm).

Anómero beta: (R)-1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-3,4-O-isopropiliden--D-galactopiranósido, 28

15

28

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 26 (0,70 g, 0,87 mmol) en THF (20 mL) y fluoruro de tetrabutil amonio 1M (4,34 mL, 4,34 mmol). Se obtienen 0,37 g de 28 (0,65 mmol) como un sirupo amarillo. Rendimiento: 75%. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.84 (bs, 2H), 7.79 (bs, 1H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.05-7.00 (m, 2H), 4.98 (c, J=6.4 Hz, 1H), 4.82 20 (bs, 2H), 4.49 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4.19 (dd, J=5.8 y 6.7 Hz, 1H), 4.13-4.09 (m, 2H), 3.80-3.76 (m, 1H), 3.72-3.70, (m, 1H), 3.44 (dd, J=7.0 y 7.8 Hz, 1H), 1.54 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.6, (d, JCF=245.6 Hz), 146.5, 134.0 (d, JCF=3.0 Hz), 131.7, (c, JCF=33.4 Hz), 129.9, (d, JCF=8.2 Hz), 126.5, 123.5, (c, JCF=273.0 Hz), 121.5, 115.3 (d, JCF=21.5 Hz), 110.4, 101.5, 79.6, 79.4, 76.3, 73.9, 73.6, 73.0, 62.3, 27.8, 25 26.4, 22.8. EMAR: calculado para C26H27F7O6: [M]+ 568.1792 encontrado 568.1789 (0.5 ppm).

EJEMPLO 4. Desprotección de las posiciones 3 y 4.

Procedimiento general

Sobre una disolución del 3,4-isopropilidenderivado 27, 28, 7 ó 8 (1 equiv.) en metanol se adiciona una cantidad catalítica de CSA y se deja en agitación durante toda la noche. Transcurrido ese tiempo el disolvente se evapora a vacío y el residuo obtenido se purifica 5 mediante filtración con sílica usando acetato de etilo como eluyente.

Derivados de Galactosa 4 y 3:

Anómero alfa: (R)-1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil--D-galactopiranósido, 4

10

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 27 (0,50 g, 0,88 mmol) en metanol (20 mL). Se obtiene 4 (0,46 g, 0,87 mmol) como un sólido blanco. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.89 (bs, 2H), 7.84 (bs, 1H), 7.17-7.14 (m, 2H), 6.98-6.94 (m, 2H), 4.92 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.79 (d, J=3.5 Hz, 1H), 4.53 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.34 (d, J=11.8 Hz, 1H) 15 4.16-4.10 (m, 2H), 4.02-3.88 (m, 3H), 3.69 (dd, J=3.5 y 9.8 Hz, 1H), 2.79 (bs, 1H), 2.34 (d, J=2.6 Hz, 1H), 2.30 (dd, J=3.6 y 7.1 Hz, 1H), 3.07 (d, J=6.7 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.7, (d, JCF=244.0 Hz), 145.8, 133.4 (d, JCF=3.5 Hz), 132.2, (c, JCF=33.4 Hz), 129.8, (d, JCF=7.9 Hz), 126.8 (2), 123.4, (c, JCF=271.8 Hz), 122.0 (2), 115.7 (d, JCF=21.0 Hz), 95.1, 75.9, 73.3, 72.1, 70.8, 69.9, 69.1, 63.5, 24.4. EMAR: calculado para C23H23F7O6: 20 [M+Na]+ 551.1281 encontrado 551.1264 (-3.0 ppm).

Anómero beta: (R)-1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil--D-galactopiranósido, 3

25

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 28 (0,50 g, 0,88 mmol) en metanol (20 mL). Se obtiene 3 (0,45 g, 0,85 mmol) como un sólido blanco.Rendimiento: cuantitativo. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.81 (bs, 2H), 7.79 (bs, 1H), 7.36-7.33 (m, 2H), 7.07-7.02 (m, 2H), 4.99 (c, J=6.4 Hz, 1H), 4.88 (d, J=11.5 Hz, 1H), 4.71 (d, J=11.5 Hz, 1H), 4.59 (d, J=6.2 Hz, 1H), 3.91 (dd, J=3.6 y 5.9 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=3.9 y 12.6 Hz, 1H), 3.72 5 (dd, J=3.4 y 8.0 Hz, 2H), 3.58 (dd, J=6.3 y 8.0 Hz, 1H), 3.46 (dd, J=2.0 y 12.8 Hz, 1H), 2.70 (bs, 1H), 2.49 (bs, 1H), 1.53 (d, J=6.4 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.7, (d, JCF=247.0 Hz), 146.0, 134.0 (d, JCF=2.9 Hz), 131.8, (c, JCF=33.4 Hz), 129.8, (d, JCF=8.2 Hz), 126.4, 123.0, (c, JCF=272.7 Hz), 121.7, 115.6 (d, JCF=21.2 Hz), 101.0, 78.6, 75.2, 73.7, 72.1, 67.4, 64.7, 22.1. EMAR: calculado para C23H23F7O6: [M+Na]+ 551.1281 encontrado 551.1262 10 (-3.0 ppm).

Derivados de arabinosa 6 y 5:

(R)-1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil--L-arabinopiranósido, 6.

15

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 8 (1,47 g, 2,75 mmol) en metanol (60 mL). Se obtiene 6 (1,35 g, 2,72 mmol) como un aceite marrón con rendimiento cuantitavo. 1H-RMN (300MHz, CDCl3):  7.89 (bs, 2H), 7.83 (bs, 1H), 7.19-7.15 (m, 2H), 7.00-6.94 (m, 2H), 4.92 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.73 (d, J=3.3 Hz, 1H), 4.53 (d, J=11.7 Hz, 1H), 4.32 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.16-4.09 (m, 1H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.78 (dd, J=1.8 y 12.4 Hz, 20 1H), 3.67 (dd, J=3.4 y 9.5 Hz, 1H) 1.54 (d, J=6.6 Hz, 3H). [α]20D: +12.02 (c 1, cloroformo).

(R)-1-[3,4-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil--L-arabinopiranósido, 5.

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 7 (3,55 g, 6,60 mmol) en metanol (160 mL). Se obtiene 5 (3,36 g, 6,55 mmol) como un aceite naranja con rendimiento cuantitativo. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.81 (bs, 2H), 7.79 (bs, 1H), 7.36-7.32 (m, 2H), 7.06-7.02 (m, 2H), 4.98 (c, J=6.5 Hz, 1H), 4.88 (d, J=11.4 Hz, 1H), 4.71 (d, J=11.6 Hz, 1H), 4.58 (d, J=6.3 Hz, 1H), 3.77 (dd, J=3.9 y 12.6 Hz, 1H), 3.71 (dd, J=3.6 y 8.1 Hz, 1H) 3.58 5 (dd, J=6.4 y 8.0 Hz, 1H), 3.47-3.43 (m, 2H), 1.53 (d, J=6.5 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.6, (d, JCF=246.7 Hz), 146.1, 134.0 (d, JCF=3.1 Hz), 131.8 (c, JCF=33.2 Hz), 129.8 (d, JCF=8.1 Hz), 126.4, 123.4 (c, JCF=274.8 Hz), 121.6, 115.6 (c, JCF=21.3 Hz), 101.1, 78.7, 75.2, 73.8, 72.1, 67.5, 64.8, 22.1. [α]20D: +8.07 (c 1, cloroformo).

10

EJEMPLO 5.

Sobre una disolución de 3 ó 4 (1 equiv.) en dimetilformamida (DMF) se adiciona dimetoximetil benceno (1,1 equiv.) y una cantidad catalítica de CSA. La reacción se deja rotar a 40°C en el rotavapor durante 1h. Transcurrido ese tiempo se neutraliza con 15 disolución saturada de NaHCO3, la fase acuosa se extrae con diclorometano, los extractos orgánicos se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se evapora a vacío. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna usando acetato de etilo-hexano en proporción 1:4.

20

Anómero alfa: (R)-1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-(R)-[4,5-O-benciliden]--D-galactopiranósido, 2

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 4 (0,10 g, 0,19 mmol) en DMF (15 25 mL) y dimetoximetil benceno (0,32 mL, 0,21 mmol). Se obtiene 2 (0,11 g, 0,18 mmol) como un sólido blanco. Rendimiento: 95%. P.f.: 158-159°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.90 (bs, 2H), 7.84 (bs, 1H), 7.47-7.43 (m, 2H), 7.39-7.34 (m, 3H), 7.16-7.13 (m, 2H), 6.95-6.90 (m, 2H), 4.93 (c, J=6.6 Hz, 1H), 4.80 (d, J=3.5 Hz, 1H), 4.52 (d, J=2.5 Hz, 2H), 4.36-4.35 (m, 1H), 4.32 (dd, J=1.4 y 12.6 Hz, 1H), 4.28-4.23 (m, 1H), 4.14 (dd, J=1.8 y 12.7 Hz, 1H), 3.84 30

(bs, 1H), 3.75 (dd, J=3.6 y 10.0 Hz, 1H), 2.33 (d, J=8.8 Hz, 1H), 1.53 (d, J=6.6 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.6, (d, JCF=246.1 Hz), 145.6, 137.5, 133.6 (d, JCF=3.0 Hz), 132.1, (c, JCF=33.6 Hz), 129.7, (d, JCF=8.2 Hz), 129.4, 128.4, 126.9, 126.4, 123.4, (c, JCF=272.1 Hz), 122.0, 115.4 (d, JCF=21.8 Hz), 101.5, 96.0, 76.3, 76.1, 73.3, 72.6, 69.4, 68.8, 63.3, 24.3. EMAR: calculado para C30H27O6NaF7: [M+Na]+ 639.1594 encontrado 639.1565 (-5 4.5 ppm).

Anómero beta: (R)-1-[3,5-bis-(trifluorometil)fenil]etil} 2-O-p-fluorobencil-(R)-[4,5-O-benciliden]--D-galactopiranósido, 1

10

Se sintetiza siguiendo el procedimiento general a partir de 3 (0,10 g, 0,19 mmol) en DMF (15 mL) y de dimetoximetil benceno (0,32 mL, 0,21 mmol). Se obtiene 1 (0,10 g, 0,17 mmol) como un sólido blanco. Rendimiento: 92%. P.f.: 131°C. 1H-RMN (500MHz, CDCl3):  7.90 (bs, 2H), 7.80 (bs, 1H), 7.49-7.47 (m, 2H), 7.39-7.36 (m, 5H), 7.06-7.01 (m, 2H), 5.03 (c, 15 J=6.6 Hz, 1H), 4.93 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.79 (d, J=11.2 Hz, 1H), 4.57 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.19 (dd, J=1.0 y 3.9 Hz, 1H), 4.08 (dd, J=1.4 y 12.5 Hz, 1H), 3.98 (dd, J=1.9 y 12.5 Hz, 1H), 3.74 (td, J=3.8 y 8.9 Hz, 1H), 3.67-3.64 (m, 1H), 3.57-3.35 (m, 1H), 2.45 (d, J=8.4 Hz, 1H), 1.56 (d, J=6.6 Hz, 3H). 13C RMN (500 MHz, CDCl3) δ 162.6, (d, JCF=246.6 Hz), 146.6, 137.7, 134.4 (d, JCF=2.8 Hz), 131.6, (c, JCF=33.4 Hz), 129.7, (d, JCF=8.1 Hz), 129.4, 128.4, 126.7, 20 126.6, 123.6, (c, JCF=272.7 Hz), 121.4, 115.4 (d, JCF=21.5 Hz), 101.9, 101.6, 79.8, 76.1, 75.5, 74.6, 73.0, 69.0, 66.7, 22.8. EMAR: calculado para C30H27O6NaF7: [M+Na]+ 639.1594 encontrado 639.1563 (-4.3 ppm).

EJEMPLO 6. Actividad antagonista de los receptores NK-1 de los derivados de 25 carbohidratos sintetizados.

Se ha determinado experimentalmente la capacidad de modulación del receptor NK-1 por parte de los derivados de carbohidratos sintetizados a través del test Ipone y de estudios de afinidad a través del desplazamiento de la SP marcada ([125I]BH-SP). 30

6.1. Resultados obtenidos.

6.1.1. Resultados del test IPone: Se muestran como ejemplo los resultados del estudio de la actividad antagonista del receptor NK-1 a través del test IPone de derivados de 5 carbohidratos sintetizados 2, 3, 4, 5 y 6, además de la de los antagonistas comerciales L-732,138 y CP-96345 (primer antagonista NK-1 no peptídico), que han sido usados como referencia. Para obtener un control positivo del ensayo hemos utilizando la SP.

10

Todos los compuestos ensayados antagonizan la SP a través del receptor NK-1. Destacamos los derivados 2, 4 y 5, que han resultado ser excelentes inhibidores de la actividad de la SP, con valores de Kinact muy cercanos a los del antagonista de referencia (figuras 2 y 3):

15

Kact SP: 1,64E-08 ± 0,6,2 M; Kinact L-732,138: 8,37E-08 ± 2,63 M; Kinact CP-96345: 3,65E-09 ± 0,55 M; Kinact 2: 2,37E-07 ± 1,16 M; Kinact 4: 7,37E-07 ± 2,71 M; Kinact 5: 5,60E-07 ± 0,53 M

De todos ellos, el derivado 2 resultó ser el de mayor actividad antagonista.

Los porcentajes de inhibición se han obtenido a una concentración del ligando de 10-6M 20 (figura 4):

L-732,138: 69 % inhibición SP; Derivado 3: 60 % inhibición SP; Derivado 6: 48 % inhibición SP.

6.1.2. Resultados del estudio del desplazamiento de la SP marcada. Se muestran como 25 ejemplo la afinidad de los derivados de hidratos de carbono sintetizados 2, 4, 5 y 8.

Resumen de los resultados de afinidad:

Compuesto Concentración (M) % Inhibición de la afinidad específica control

2 6,0E-05 100

4 6,0E-05 100

5 6,0E-05 100

8 6,0E-05 100 5

Los compuestos mostrados tienen una afinidad por los receptores NK-1 mayor que la SP.

6.2. Procedimiento general para la determinación de la actividad antagonista de los receptores NK-1. 10

6.2.1. Test Ipone:

Cultivo celular y transfección. Las líneas celulares se obtuvieron de la Colección de Cultivos Tipo Americanos (Manassas, Virginia, EEUU). Los medios de cultivo, el suero fetal 15 bovino (FBS) y los aditivos fueron proporcionados por Invitrogen.

Las células CHO se cultivaron en un medio Dulbecco’s modified Eagle’s con un suplemento de FBS del 10%, penicilina/estreptomicina, 100U/ml y L-glutamina 2 mM a 37ºC en una atmósfera húmeda de 95% aire y 5% CO2. También se añadieron al medio aminoácidos no 20 esenciales (Invitrogen).

La transfección transitoria de las líneas celulares se llevó a cabo por electroporación en un volumen de 300 L con un total de 10 g de ADN (pRK5 Neo-NK1 wild type) plasmídico (utilizando hasta 500 ng de pRK5como ADN portador para alcanzar 10 g) y con 107 células 25 en el buffer de electroporación (50 mM K2HPO4, 20 mM CH3COOK, 20 mM KOH y 26 mM MgSO4, pH 7.4). Tras la electroporación (280 V, 1mF, GeneZapper 450/2500; IBI, New Haven, Connecticut, EEUU), las células se suspendieron en un medio completo y se sembraron en placas de cultivo de pocillos con una densidad de 105 por pocillo. Las placas de cultivo de 96 pocillos se cubrieron primero con poliornitina diluida en PBS, luego se 30 incubaron a 37ºC durante 30 minutos y, finalmente, se lavaron con PBS antes de sembrarlas.

ELISA. Para medir la expresión de los receptores transfectados, las células se transfectaron con pRK5-NK1-6His. Veinticuatro horas después de la electroporación, las células se fijaron 35

con paraformaldehido al 4% en PBS durante 5 minutos y se lavaron 3 veces con PBS. Se realizó un bloqueo de 30 minutos con PBS +1% FBS no complementado antes de la incubación con el anticuerpo primario anti-6 His (0,5 µg/ml) durante 30 minutos. A continuación, las células se lavaron tres veces con PBS +1% FBS durante 5 minutos y se incubaron durante 30 minutos con un anticuerpo anti ratón conjugado con una peroxidasa de 5 rábano (1/1000; Amersham, Orsay, Francia). Las células se lavaron 3 veces con PBS +1% FBS y tres veces con PBS. Después, se añadieron a los pocillos 60 µl de PBS y 20 µl de Supersignal ELISA Femto (Perbio-Pierce, Brebières, Francia). La luminiscencia se leyó usando un Wallac Victor2 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Courtaboeuf, Francia).

10

Acumulación de Segundo Mensajero (IP1). La activación e inhibición de la ruta del IP por los agonistas y antagonistas del receptor NK1, respectivamente, se determinó usando el kit dinámico IP-One (Cisbio Bioassays, Bagnols-sur-Cèze, Francia). Tras la transfección, 105 células se distribuyeron en 100 µl de un medio completo a una placa de ensayo de 96 pocillos (Greiner Bio-One, Courtaboeuf, Francia). Tras 24 horas, el medio se eliminó y se 15 reemplazó por 40 µl de medio de incubación que contenía el agonista y/o antagonista en la concentración adecuada.El ensayo homogéneo de fluorescencia resuelta en el tiempo- fluorescencia de transferencia de energía de resonancia (homogeneous time-resolved fluorescence-fluorescence resonance energy transfer, HTRF-FRET) se realizó según se indica en la literatura (Maurel, D.; Kniazeff, J.; Mathis, G.; Tinquet, E.; Pin, J.P.; Ansanay, H. 20 Anal Biochem. 2004, 329, 253) El efecto inhibidor del antagonista no-peptídico NK-1, en la acumulación de IP1 inducida por la SP se estudió de la misma manera que Arunlakshana and Schild (1959) (Arunlakshana, O.; Schild, H.O. Br J Pharmacol. 1959, 14, 48). A la preincubación durante 10 minutos le siguió la incubación de 30 minutos con el antagonista y la SP. 25

Análisis estadístico. La significación estadística de las diferencias entre los grupos experimentales se determinó mediante análisis de varianza one-way o two-way seguido de un test post hoc de rango múltiple de Duncan para realizar comparaciones por pares entre las medias. También se realizó el test t de Student. 30

6.2.2. Desplazamiento de la Sustancia P marcada:

Para los estudios de desplazamiento se ha utilizado una concentración de 0.15 nM para la SP marcada y de 10-6 M para los productos de la invención. El tiempo de incubación ha sido 35

de 60 min. a temperatura ambiente y como ligando de referencia se ha utilizado [Sar9, Met(O2)11]-SP con una IC50=0.29 nM (Heuillet, E. J. Neurochem. 1993, 60, 868-876).

Ejemplo 7. Actividad anticancerosa selectiva de los nuevos antagonistas NK-1 derivados de carbohidratos. 5

7.1. Resultados obtenidos.

A modo de ejemplo se muestran los resultados de los estudios de actividad anticancerosa en cáncer de pulmón para los derivados 1, 2, 5, 7, 8,9 y 10. Como referencia se han 10 utilizando dos antagonistas NK-1 comerciales, CP-96345 y Aprepitant. Como control positivo se ha usado el fármaco de referencia utilizado en terapia de cáncer de pulmón, cisplatino.

15

Para todos ellos se determinó la IC50 a través del ensayo MTT, tanto en células cancerosas de pulmón (A549) como en células sanas de pulmón (MRC-5) para determinar la selectividad de los compuestos.La siguiente tabla muestra los valores de IC50 para las líneas celulares MRC-5 y A549 correspondientes al cisplatino.

20

imagen10

25

La siguiente tabla muestra los valores de IC50 para las líneas celulares MRC-5 y A549 correspondientes a los antagonistas comerciales Aprepitant y CP-96345 y a los nuevos antagonistas de los receptores NK-1 sintetizados.

imagen11

5

10

15

Todos nuestros compuestos no sólo mostraron una clara actividad anticancerosa si no que además resultaron ser selectivos para células cancerosas de pulmón, al contrario que los antagonistas NK-1 comerciales Aprepitant y CP-96345. De entre todos ellos destacamos el 20 derivado 7, con una selectividad muy superior a la del resto. Excepto en el caso del derivado 8, todos presentaron mayor actividad frente a la línea cancerosa que el Aprepitant y el CP-96345. Los derivados más activos fueron 1, 2 y 5.

Según estos resultados obtenidos, podemos equiparar nuestro derivado 2, en cuanto 25 actividad y selectividad se refiere, con el cisplatino. Por ese motivo, se han realizado estudios de actividad anticancerosa con este ligando 2 sobre otras líneas celulares.

En total, se ha evaluado la posible actividad anticancerosa del compuesto 2 en tres modelos de cáncer in vitro: cáncer de mama, cáncer de pulmón y melanoma. En los tres modelos, 30 este compuesto demostró ser más citotóxico para las células cancerosas que para las células normales. Esta selectividad fue observada desde las concentraciones más bajas ensayadas y se observó durante varias concentraciones, por lo que podríamos decir que este compuesto presenta una actividad citotóxica selectiva. En concreto, ha resultado ser unas 4, 6 y 12 veces más selectivo para células de melanoma, cáncer de pulmón y mama 35 respectivamente, con respecto a las correspondientes células normales.

La siguiente tabla muestra los valores de IC50 para las líneas celulares MCF7 (células humanas de adenocarcinoma de mama) y MCF10 (células humanas no malignas de mama) así como para las líneas UACC-62 (células humanas de melanoma) y VH-10 (células humanas no malignas de piel) para el compuesto 2.

5

imagen12

10

7.2. Procedimiento general para la determinación de la actividad anticancerosa selectiva de los nuevos antagonistas de los receptores NK-1.

Líneas celulares. Las células humanas de adenocarcinoma de pulmón A549, las células 15 humanas no malignas de pulmón MRC5 y las células humanas de melanoma UACC-62 fueron obtenidas de la Colección Europea de Cultivos celulares (ECACC). Las células humanas de adenocarcinoma de mama MCF7 y las células humanas no malignas de mama MCF10 fueron generosamente cedidas por el Dr. Ruano y la Dra. Daza (Universidad de Sevilla, España). Las células humanas no malignas de piel VH-10 fueron generosamente 20 cedidas por el Dr. Helleday (Instituto Karolinska, Suecia).

Todos los medios de cultivo utilizados se suplementaron con 2 mM de glutamina, 50 μg/ml penicilina, 50 μg/ml estreptomicina y 10% de suero fetal bovino. Una excepción fue el medio utilizado para el cultivo de las células MCF10 que fue una mezcla al 1:1 de medio DMEM y HAM’s F12 suplementada con 2 mM de glutamina, 50 μg/ml penicilina, 50 μg/ml 25 estreptomicina, 20 ng/ml factores crecimiento, 100 ng/ml toxina colérica, 10 μg/ml insulina, 500 ng/ml hidrocortisona y 5% suero de caballo.

Todas las líneas celulares fueron cultivadas a 37ºC, 5% CO2 y humedad controlada en un incubador. 30

Todos los productos utilizados para el cultivo celular se obtuvieron del laboratorio PAA, a excepción del medio para las MCF10 que fue cedido por la Dra. Navarro.

Ensayo de viabilidad celular. Las células fueron expuestas a los compuestos durante 48 h 35 Finalizado el tratamiento, el medio se retiró y las células se incubaron durante 3-5 horas con

125 µl MTT (1mg/ml MTT en medio de cultivo). Posteriormente, se añadieron 80 µl de 20 % SDS en 0,02 M HCl para solubilizar los cristales de formazan-MTT y las placas se incubaron toda la noche en un incubador a 37ºC y 5% CO2. Finalmente, se realizó la lectura de las placas en un espectrofotómetro lector de placas a 540 nm. La absorbancia se relacionó de forma directamente proporcional con la viabilidad celular, la cual se expresó en porcentaje 5 con respecto al control. Todos los resultados se obtuvieron de al menos tres experimentos independientes y se expresaron como la media ± el error estándar de la media (SEM).

Claims (22)

1. REIVINDICACIONES

   1. Compuesto de fórmula general I,

   5

   Fórmula general I

   o uno cualquiera de sus posibles estereoisómeros, o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de los anteriores, donde:

   - Ra se selecciona entre H y CH2OR1, donde R1 se selecciona a su vez entre 10

   hidrógeno,

   un grupo alquilo C1-C20,

   un grupo arilo C6-C20,

   un grupo COR1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc-butilo y fenilo, 15

   un grupo que junto a R2 forma un ciclo, y

   un grupo SiR’R’’R’’’, donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo;

   - Rb se selecciona independientemente entre un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, OH y un grupo de fórmula II, donde Z se selecciona entre O y S, y el carbono 20 contiguo a Z es quiral y tiene configuración R o S;

   fórmula II

   - X se selecciona entre OR3, NR4R5 y una cadena heterocíclica de 3 a 15 miembros, 25 donde:

    R3 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, un grupo acilo, un grupo alquilsulfonilo, un grupo arilsulfonilo, un grupo de fórmula III, un

   grupo de fórmula IV, un grupo de fórmula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20, y un grupo que junto a R2 forma un ciclo;

    R4 se selecciona entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20;

    R5 se selecciona entre H, un grupo de fórmula III, un grupo de fórmula IV y un grupo de fórmula V donde R’’’’ es un grupo alquilo C1-C20 o un grupo arilo C6-C20; 5

   fórmula III fórmula IV fórmula V

   - Y se selecciona entre O, S y NH; y 10

   - R2 es H, o forma un ciclo de 5 o 6 eslabones junto a R1 o R3, de tal manera que en dicho ciclo el O contiguo a R2 se encuentra separado del O contiguo a R1 o R3 por al menos un átomo de C que consiste en –C(R6)(R7)–, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.

   15
2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, donde Rb es el grupo de fórmula II en el que Z se selecciona entre O y S.

   fórmula II

   20
3. 3. Compuesto según la reivindicación 2, donde Z es O.
4. 4. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde Y es O.
5. 5. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde X es OR3, y R3 25 se define tal como se describe en la reivindicación 1.
6. 6. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde Ra es CH2OR1 y R2 forma un ciclo junto a R1, donde el átomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del átomo de O contiguo a R1 por un grupo –C(R6)(R7)–, de manera que R2 forma un ciclo de 30

   6 eslabones junto a R1, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.
7. 7. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde Ra es CH2OR1, R1 y R2 forman un ciclo, y X es OH. 5
8. 8. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde X es OR3 y R2 forma un ciclo junto a R3, donde el átomo de O contiguo a R2 se encuentra separado del átomo de O contiguo a R3 por un grupo –C(R6)(R7)–, de manera que R2 forma un ciclo de 5 eslabones junto a R3, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo 10 alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20.
9. 9. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 u 8, donde X es OR3, R3 y R2 forman un ciclo, y Ra es H.

   15
10. 10. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde X es OH y R2 es H.
11. 11. Compuesto según la reivindicación 10, donde Ra se selecciona entre H y CH2OH.

    20
12. 12. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que se selecciona del grupo que consiste en:

    a) b)

    25

    c) d)

    e) f)

    5

    g) h)

    i) j)

    10
13. 13. Composición farmacéutica caracterizada porque comprende al menos un compuesto definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
14. 14. Uso de al menos un compuesto definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de una composición farmacéutica.
15. 15. Uso de al menos un compuesto definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 5 a 12, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de una composición farmacéutica para tratamiento y/o prevención de una enfermedad.
16. 16. Uso según la reivindicación 15, donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en: un trastorno del sistema nervioso central seleccionado entre enfermedad de 10 Parkinson, ansiedad y depresión, artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, adherencia abdominal post-quirúrgica, migraña, inflamación, una enfermedad pulmonar crónica seleccionada entre asma bronquial o enfermedad pulmonar obstuctiva crónica (EPOC), apnea obstructiva del sueño, una desregulación de la función cardiaca, trombosis arterial, osteoporosis, obesidad, resistencia a insulina, enfermedad de Crohn, 15 emesis, y un cáncer seleccionado entre melanoma, neuroblastoma, glioma, linfoma de Hodgkin, leucemia linfoblástica, rabdomiosarcoma, linfoma de burkit, carcinoma de pulmón, sarcoma de Edwing, osteosarcoma, ganglioma maligno y cáncer de mama.
17. 17. Uso según la reivindicación 16, donde la enfermedad se selecciona del grupo que 20 consiste en: melanoma, carcinoma de pulmón y cáncer de mama.
18. 18. Procedimiento de obtención de un compuesto de fórmula I según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado por que comprende al menos las siguientes etapas: 25

    a. Obtener un tioglicósido de fórmula VIII, donde Ra se define igual que en una cualquiera de las reivindicaciones 1, 6 o 7, R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un alquilo C1-C20, X’ se selecciona entre un grupo OH y un grupo N3, e Y se selecciona entre un grupo OH, S y NH;

    30

    fórmula VIII

    b. Hacer reaccionar el tioglicósido de fórmula VIII con reactivos de protección de alcoholes para obtener el compuesto de fórmula IX;

    fórmula IX

    donde: 5

    - A’’ se selecciona entre H y CH2OP1, donde P1 se selecciona entre

    un grupo alquilo C1-C20,

    un grupo arilo C6-C20,

    un grupo COP1a, donde R1a se selecciona independientemente entre metilo, terc- butilo y fenilo, 10

    un grupo que junto a P2 forma un ciclo, y

    un grupo SiR’R’’R’’’ en donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo,

    - R se selecciona entre un grupo arilo C6-C20 y un grupo alquilo C1-C20,

    - X’’ se selecciona entre un grupo N3 y un grupo OP3, donde P3 es un grupo que forma 15 un ciclo de 5 eslabones junto a P2,

    - Y se selecciona entre un O, S y NH,

    - P2 se selecciona entre

    un grupo SiR’R’’R’’’ donde R’, R’’ y R’’’ se seleccionan independientemente entre metilo, etilo, tert-butilo y fenilo, 20

    un grupo que forma un ciclo de 6 eslabones junto a P1, y

    un grupo que forma un ciclo de 5 eslabones junto a P3,

    de tal manera que en el ciclo el O contiguo a P2 se encuentra separado del O contiguo a P1 o P3 por un átomo de C que consiste en –C(R6)(R7)–, y donde R6 y R7 se seleccionan independientemente entre H, un grupo alquilo C1-C20 y un grupo arilo C6-C20; 25

    c. Hacer reaccionar el compuesto de fórmula IX con un haluro o un tosilato de p-fluorobencilo para obtener el compuesto de fórmula X, en donde A’’, R, X’’ y P2 se definen como anteriormente, e Y se selecciona entre O, S y NH;

    30

    imagen1

    fórmula X

    d. Transformar el compuesto X obtenido en la etapa anterior en un compuesto 5 donador de glicosilo de fórmula XI, donde W se selecciona entre OH, un grupo sulfóxido SOR, un grupo fósfito O(OR)2 y un grupo tricloracetimidato; y

    imagen2

    fórmula XI 10

    e. Transformar el compuesto XI obtenido en la etapa anterior en un compuesto de fórmula general I tal como se describe una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, a través de una reacción de glicosidación.

    15
19. 19. Procedimiento según la reivindicación 18, caracterizado porque cuando Rb en el compuesto de fórmula I es el grupo de fórmula II, dicho procedimiento comprende hacer reaccionar el compuesto de fórmula XI con 2,2,2-tricloroacetonitrilo, en presencia de cantidades catalíticas de 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU); y posteriormente hacer reaccionar el producto que se obtiene con 1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etanol y 20 trifluorometanosulfonato de trimetilsililo.
20. 20. Procedimiento según la reivindicación 19, que comprende adicionalmente la protección y/o desprotección selectiva de grupos en posición 3, 4, 5 y/o 6 del anillo tetrahidropiranilo. 25
21. 21. Procedimiento según la reivindicación 19, que comprende adicionalmente la reducción y/o alquilación, acilación o reacción 1,3-dipolar de Huisgen para obtener compuestos de fórmula I donde X es NR4R5 o una cadena heterocíclica.
22. 22. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 21, que además comprende al menos una de las siguientes etapas:

    f. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa e con un agente reductor de azidas, cuando en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de fórmula VIII donde X’ es un grupo N3; 5

    g. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa e o f con fluoruro de tetrabutil amonio en THF;

    h. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas e, f o g con una cantidad catalítica de ácido 10-camforsulfónico en metanol;

    i. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas g o h con un 10 dimetoximetil derivado de fórmula CH3O–C(R6)(R7)–OCH3, en donde R6 y R7 se definen como en la reivindicación 1, si en la primera etapa del procedimiento se obtiene un compuesto de fórmula VIII donde Ra es CH2OH;

    j. Hacer reaccionar el compuesto obtenido en cualquiera de las etapas f, g o h, con un haluro de alquilo de fórmula R8-X o un haluro de acilo de fórmula R9-CO-X, en donde R8 15 es un grupo alquilo C1-C20, un grupo arilo C6-C20, o un grupo de fórmula III o de fórmula IV según se definen en la reivindicación 1, y donde R9 es un grupo de fórmula V según se define en la reivindicación 1.