ES2561039T3

ES2561039T3 - Compuestos tetrazol para reducir el ácido úrico

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Publication number: ES2561039T3
Application number: ES09739797.0T
Authority: ES
Inventors: James Dennen O'neil; Shalini Sharma; Ramachandran Arudchandran
Original assignee: Wellstat Therapeutics Corp
Current assignee: Wellstat Therapeutics Corp
Priority date: 2008-04-30
Filing date: 2009-04-30
Publication date: 2016-02-24
Anticipated expiration: 2029-04-30
Also published as: US20130336949A1; HK1147446A1; CA2722624C; CN102014898B; US8889724B2; ZA201006929B; EP2282736A2; EP2282736A4; US8410154B2; RU2010148762A; RU2522458C2; WO2009134995A2; MX2010011603A; AU2009243028A1; AU2009243028B2; JP5431457B2; CN102014898A; BRPI0910541B1; JP2011519865A; WO2009134995A3

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula XLVI**Fórmula** donde x es 1 o 2; y es 0, 1, 2 o 3, R1 se selecciona entre el grupo compuesto por hidrógeno, alquilo con 1 o 2 átomos de carbono, hidroxilo, alcoxi con 1 o 2 átomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y A es 2,6-dimetilfenilo.

Description

DESCRIPCION

Compuestos tetrazol para reducir el acido urico 5

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

[0001] Las enfermedades causadas por niveles elevados de acido urico estan dentro de dos categorlas principales: trastornos causados por precipitation de cristales de acido urico y enfermedades relacionadas con los

10 efectos patologicos del acido urico soluble. La artritis gotosa es el ejemplo clasico de lo anterior. El deposito de cristales de urato en el rinon tambien es una causa comun de disfuncion renal. Los niveles elevados de acido urico se asocian con diversos trastornos, incluidas enfermedades cardiovasculares y renales.

[0002] La gota se manifiesta con mayor frecuencia como inflamacion de una o mas de las articulaciones del 15 organismo que tiene como resultado dolor leve a intenso. Estos acontecimientos pueden ser episodicos y/o cronicos.

Con el tiempo, la gota puede dar lugar a la destruction del cartllago y del hueso, desarrollo de depositos de cristales de acido urico, dolor y disfuncion renal, as! como calculos renales. La gota tambien puede afectar a otros organos.

[0003] La gota esta causada por hiperuricemia y la consecuente formation y deposito de cristales de acido 20 urico en los tejidos, articulaciones, rinones y otros organos. El acido urico procede del metabolismo celular normal y

de algunos tipos de alimentos y bebidas. Los niveles excesivos de acido urico son el resultado de una production excesiva de acido urico, aclaramiento insuficiente por los rinones (o una combination de exceso de produccion y aclaramiento insuficiente) y tambien de algunos medicamentos que se toman para otras enfermedades (son ejemplos los diureticos, pirazinamida, ciclosporina, acido acetilsalicllico a dosis bajas, acido nicotlnico y levodopa). 25 Muchos tipos de enfermedades tambien pueden contribuir a la hiperuricemia y a la gota, como alcoholismo, leucemia, linfoma, cancer de pulmon, slndrome de lisis tumoral, tabaquismo, psoriasis, obesidad, disfuncion renal, insuficiencia cardlaca congestiva, inanition, anemia, hipertension, diabetes, inmovilidad, slndrome de Lesch-Nyhan, slndrome de Down y disfunciones tiroideas y paratiroideas.

30 [0004] En general, la gota se divide en cuatro categorlas en funcion de los slntomas progresivamente mas graves:

1) Asintomatica: niveles elevados de acido urico en sangre, pero sin slntomas evidentes.

35 2) Artritis gotosa aguda: aparicion subita de los slntomas, a menudo en una unica articulation (normalmente en el dedo pulgar del pie) afectando, a continuation, a otras articulaciones. Entre los slntomas se incluyen dolor, hinchazon, enrojecimiento y fiebre.

3) Gota intercrltica: fases asintomaticas entre ataques de gota.

40

4) Gota tofacea cronica: afeccion cronica que puede incluir ataques frecuentes, dolor leve constante e inflamacion de las articulaciones, destruccion de cartllago y hueso, desarrollo de depositos de cristales de acido urico, disfuncion renal y calculos renales.

45 [0005] Entre los medicamentos utilizados actualmente para tratar los slntomas agudos de la gota se incluyen farmacos antiinflamatorios no esteroideos, colchicina y corticoesteroides. Todos estos medicamentos pueden tener efectos adversos leves a severos. Se estan estudiando otros tratamientos para estos slntomas agudos, que incluyen anticuerpos y antagonistas de citoquinas inflamatorias como la interleuquina-1.

50 [0006] Se usan otros tipos de medicamentos para intentar reducir la incidencia o gravedad de futuros ataques reduciendo los niveles de acido urico. Las tres clases de medicamentos principales son inhibidores de la xantina oxidasa (por ejemplo, alopurinol), que reduce la produccion de acido urico a partir de xantina; farmacos uricosuricos (por ejemplo, sulfinpirazona, probenecid, benzbromarona y losartan), que se pretende mejore la excretion de acido urico inhibiendo la recaptacion de acido urico secretado en los tubulos renales mediante la inhibition del 55 transportador de acido urico 1 (URAT1) (vease tambien la publication de solicitud de patente de EE. UU. N.° 2007/0010670, publicada el 11 de enero de 2007 [Japan Tobacco Inc.]) u otros elementos de recaptacion de acido urico, y uricasas, por ejemplo un uricasa pegilada como PURICASE (uricasa de mamlfero recombinante pegilada de Savient). A menudo, estos medicamentos tambien producen efectos adversos significativos y no deseados. Por ejemplo, se ha descrito que alopurinol ha producido al menos 100 casos de slndrome de Stevens-Johnson/necrolisis

toxica epidermica y aproximadamente 30 muertes cada ano en Europa (Halevy y col., Allopurinol is the most common cause of Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis in Europe and Israel), J Am Acad Dermatol. 58(1):25-32, 2008). Probenicid y benzbromarona se ha retirado del mercado en varios palses debido a los efectos adversos no deseados, como insuficiencia hepatica en el caso de benzbromarona. Se ha notificado que el 5 cumplimiento del paciente con el tratamiento con estos farmacos es muy malo (A. A. Reidel y col., «Compliance with Allopurinol Therapy among Managed Care Enrollees with Gout: A Retrospective Analysis of Administrative Claim». Journal of Rheumatology 2004; 31:1575-1581), presumiblemente debido a los efectos adversos y/o la falta de beneficios.

10 [0007] Mas de 5 millones de personas en EE. UU. tienen gota (National Health and Nutrition Examination Survey 111, 1988-1994). Se notifico que la prevalencia de hiperuricemia y gota en EE. UU. en 1999 era de 41 por 1000 y de 14 por 1000 en Reino Unido (T.R. Mikuls y col., «Gout Epidemiology: Results for the UK General Practice Research Database, 1990-1999» Annals of the Rheumatic Diseases 2005; 64:267-272). Informes posteriores indican que la prevalencia en EE. UU., en Reino Unido y en otros palses ha ido aumentando de forma constante (K. L. 15 Wallace y col., increasing Prevalence of Gout and Hyperuricemia over 10 Years Among Older Adults in a Managed Care Populations Journal of Rheumatology 2004; 31: 1582-1587). Los datos mas recientes sugieren que muchos mas de 5 millones de americanos pueden ser diagnosticados de gota en la actualidad (E. Krishnan y col., «Gout in Ambulatory Care Settings in the United States», Journal of Rheumatology 2008; 35(3): 498-501).

20 [0008] La hiperuricemia y la gota presentan problemas especialmente significativas en los receptores de

trasplante de organos (Stamp, L., y col. «Gout in solid organ transplantation: a challenging clinical problem», Drugs (2005) 65(18): 2593-2611). A menudo, el acido urico esta elevado en pacientes con trasplantes renales y los farmacos inmunodepresores normales como la ciclosporina puede producir, especialmente, hiperuricemia severa. En los pacientes trasplantados, el alopurinol esta contraindicado debido a las interacciones con algunos 25 inmunodepresores como la azatioprina, y debido a la insuficiencia de la medula osea causada por la combination. Adicionalmente, el acido urico elevado puede contribuir al rechazo del injerto (Armstrong, K.A. y col., «Does Uric Acid Have a Pathogenetic Role in Graft Dysfunction and Hypertension in Renal Transplant Patients?», Transplantation (2005) 80(11): 1565-1517). Por tanto, existe una atencion especialmente intensa sobre farmacos seguros que reduzcan la hiperuricemia en los receptores de trasplantes.

30

[0009] Las enfermedades relacionadas con niveles elevados de acido urico soluble a menudo cursan con problemas vasculares: hipertension (Sundstrom y col., Relations of serum uric acid to longitudinal blood pressure tracking and hypertension, incidence. Hypertension. 45(1):28-33. 2005), prehipertension (Syamela, S. y col., Association between serum uric acid and prehypertension among US adults. J Hypertens. 25 (8) 1583-1589, (2007),

35 aterosclerosis (Ishizaka y col., Association between serum uric acid, metabolic syndrome, and carotid atherosclerosis in Japanese individuals. Arterioscler Thromb Vase Biol. (5):1038-44, 2005), arteriopatla periferica (Shankar, A. y col., Association between serum uric acid level and peripheral artery disease. Atherosclerosis doi 10: 1016, 2007), inflamacion vascular (Zoccali y col., Uric acid and endothelial dysfunction in essential hypertension. J Am Soc Nephrol. 17(5):1466-71, 2006), insuficiencia cardlaca (Strasak, A.M. y col., Serum uric acid and risk of cardiovascular 40 mortality: A prospective, long-term study of 83,683 Austrian men, Clin Chem. 54 (2) 273-284, 2008; Pascual-Figal, Hyperuricaemia and long-term outcome after hospital discharge in acute heart failure patients. Eur J Heart Fail. 2006, oct. 23,; [publication electronica previa a la edition impresa]; Cengel, A., y col., «Serum uric Acid Levels as a Predictor of In-hospital Death in Patients Hospitalized for Decompensated Heart Failure», Acta Cardiol. (Oct. 2005) 60(5): 489-492), infartos de miocardio (Strasak, A.M. y col.; Bos y col., Uric acid is a risk factor for myocardial 45 infarction and stroke: the Rotterdam study. Stroke. Jun, 2006; 37(6): 1503-7), disfuncion renal (Cirillo y col., Uric Acid, the metabolic syndrome, and renal disease. J Am Soc Nephrol, 17(12 Supl 3):S165-8, 2006; Z. Avram y E. Krishnan, Hyperuricemia - where nephrology meets rheumatology. Rheumatology (Oxford), 47(7): 960-964, 2008) e ictus (Bos y col., 2006). El acido urico causa directamente disfuncion del endotelio (Kanellis, y col Uric acid as a mediator of endothelial dysfunction, inflammation, and vascular disease. Semin Nephrol. 25(1):39-42, 2005; Khosla y col., 50 Hyperuricemia induces endothelial dysfunction. Kidney Int, 67(5):1739-42, 2005). En ninos y adolescentes, la hipertension arterial idiopatica de aparicion temprana se asocia con niveles elevados de acido urico en suero y la reduction de acido urico con alopurinol reduce la presion arterial en estos pacientes (Feig y Johnson, The role of uric acid in pediatric hypertension. J Ren Nutrition 17(1): 79-83, 2007; D.I. Feig y col., Effect of allopurinol on blood pressure of adolescents with newly diagnosed essential hypertension. JAMA 300(8): 924-932. 2008. Feig y col. 55 tambien afirman que esta es una nueva tecnica terapeutica pero que los efectos adversos de los farmacos actuales para reducir el acido urico pueden limitar o impedir su uso. La hiperuricemia es un factor de riesgo independiente en todas estas afecciones.

[0010] Los niveles elevados de acido urico soluble tambien se asocian con, o inducen directamente,

respuestas inflamatorias. Por ejemplo, el acido urico es transportado al interior de las celulas de musculo liso vascular mediante transportadores de acidos organicos, especialmente el transportador de urato URAT1 y, a continuacion estimula la produccion en las celulas de musculo liso vascular de protelna C-reactiva, MCP-1 y otras citoquinas estimulando de este modo la proliferacion y otros cambios asociados con la aterosclerosis (Price y col., 5 Human vascular smooth muscle cells express a urate transporter. J Am Soc Nephrol. 17(7):1791-5, 2006; Kang y col., Uric acid causes vascular smooth muscle cell proliferation by entering cells via a functional urate transporter. Am J Nephrol. 2005 25(5):425-33 (2005); Yamamoto y col., Allopurinol reduces neointimal hyperplasia in the carotid artery ligation model in spontaneously hypertensive rats. Hypertens, Res, 29 (11) 915-921, 2006), estimula la produccion por las celulas mononucleares humanas de 1L-1 p, IL-6 y TNF-a, provoca un aumento notable de TNF-a 10 cuando se infunden a ratones, activa a las celulas endoteliales y a las plaquetas y aumenta la adhesividad de estas ultimas (Coutinho y col., «Associations of Serum Uric Acid with Markers of Inflammation. Metabolic Syndrome, and Subclinical Coronary Atherosclerosis». Amer. J. Hypertens. (2007) 20: 83-89; Levy, F., y col., «Uric Acid in Chronic Heart Failure: A Marker of Chronic inflammation», Eur. Heart J. (1998) 19(12): 1814-1822). Tambien se ha demostrado que el acido urico inhibe la biodisponibilidad de oxido nltrico endotelial y activa el sistema renina- 15 angiotensina (T.S. Perlstein y col., Uric acid and the state of the intrarenal renin-angiotensin system in humans. Kidney International, 66:1465-1470, 2004). Inokuchi y col. han mostrado que la interleuquina 18 (IL-18) y otros agentes inflamatorios reflejan la inflamacion local asociada con la gota y que los cristales de urato aceleran la activacion de la IL-18 (T. Inokuchi y col., Plasma IL-18 and other inflammatory cytokines in patients with gouty arthritis and monosodium urate monohydrate crystal-induced secretion of IL-18. Cytokine, 33(1): 21-27, 206), que 20 parece tener un papel causal en la insuficiencia renal. La IL-18 y otras citoquinas tambien estan significativamente elevadas en personas que no tiene gota per se, sino que simplemente tiene niveles elevados de acido urico (C. Ruggiero y col., Uric acid and inflammatory markers. European Heart Journal. 27: 1174-1181, 2006).

[0011] La hiperuricemia tambien se asocia con deterioro cognitivo y con otras formas de disfuncion del 25 sistema nervioso central (Schretlen, D.J. y col., «Serum Uric Acid and Cognitive Function in Community-Dwelling

Older Adults», Neuropsychology (ene, 2007) 21(1): 136-140, Watanabe. S., y col., «Cerebral Oxidative Stress and Mitochondrial Dysfunction in Oxonate-Induced Hyperuricemic Mice», J. Health Science (2006) 52: 730-737).

[0012] Niveles sericos elevados de acido urico tambien se asocian con aumento del riesgo de cancer y de 30 mortalidad por cancer (Strasak, AM y col. (2007) Serum uric acid and risk of cancer mortality in a large prospective

male cohort. Cancer Causes Control 18(9) 1021-1029, Strasak, AM y col. (2007). The role of serum uric acid as an antioxidant protecting against cancer: prospective study in more than 28,000 older Austrian women. Annals Oncol 18 (11) 1893-1897; Jee, SA y col. (2004) Serum uric acid and risk of death from cancer, cardiovascular disease or all causes in men Eur. J. Cardiovascular Prev. Rehab. 11 (3) 185-191).

35

[0013] Los niveles elevados de acido urico se asocian con prediabetes, resistencia a la insulina, desarrollo de diabetes de tipo 2 y aumento de la probabilidad de diversos afecciones no deseadas en personas con diabetes, como arteriopatla periferica, ictus y aumento del riesgo de mortalidad (Ioachimescu, A.G. y col., (2007) Serum uric acid, mortality and glucose control in patients with Type 2 diabetes mellitus: a PreCIS database study Diabet. Med.

40 24 (12) 1369-1374; Perry, I.J. y col. (1995) Prospective study of risk factors for development of non-insulin dependent diabetes in middle aged British men BMJ 310 (6979) 560-564; Chien, K-L y col. (2008) Plasma uric acid and the risk of Type 2 diabetes in a Chinese community Clin. Chem. 54 (2) 310-316; Sautin, Y. Y. y col. (2007) Adverse effects of the classic antioxidant uric acid in adipocytes: NADPH oxidase-mediated oxidative/nitrosative stress Am. J. Physiol. Cell Physiol.293: C584-C596; Tseng, C.H. (2004) Independent association of uric acid levels with peripheral artery 45 disease in Taiwanese patients with Type 2 diabetes, Diabet. Med. 21 (7) 724-729; Lehto, S. y col. (1998) Serum uric acid is a strong predictor of stroke in patients with non-insulin dependent diabetes mellitus Stroke 29: 635-639.

[0014] Los niveles elevados de acido urico son una caracterlstica definitoria del slndrome de Lesh-Nyhan. Personas con apnea del sueno o trastornos respiratorios durante el sueno presentan niveles elevados de acido urico

50 (Saito H. y col. Tissue hypoxia in sleep apnea syndrome assessed by uric acid and adenosine. Chest 122: 16861694. 2002; Verhulst, S.L., y col., Sleep-disordered breathing and uric acid in overweight and obese children and adolescents. Chest 132: 76-80. 2007).

[0015] Los niveles elevados de acido urico se asocian con preeclampsia (Bainbridge, S.A. y Roberts, J.M. Uric 55 acid as a pathogenic factor in preeclampsia. Placenta Dic. 17 2007, publicacion electronica previa a la edicion

impresa).

[0016] «El acido urico es un factor contribuyente importante de la respuesta inflamatoria desencadenada por P. falciparum en celulas mononucleares de sangre periferica de humanos. La reaccion inflamatoria inducida por P.

falciparum se considera una causa principal de la patogenesis de la malaria...» PLoS ONE 2009:4(4):e51941. Publicacion electronica 2099, 17 de abr.

Existe una necesidad medica significativa de nuevos medicamentos que puedan tratar y prevenir de forma segura, 5 conveniente y eficaz trastornos relacionados con la elevacion del acido urico en sangre, ya sean enfermedades debidas a la cristalizacion del acido urico o a los efectos de niveles supranormales (ya sea a valores individuales o en funcion de la poblacion).

RESUMEN DE LA INVENCION

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[0017] Esta invencion proporciona un compuesto segun se define en las reivindicaciones. Tambien se describe un compuesto representado por la formula

imagen1

15

[0018] En la formula I, x es 1 o 2: y es 0, 1, 2 o 3; R1 se selecciona a partir del grupo compuesto por hidrogeno, alquilo que tiene 1 o 2 atomos de carbono, hidroxi, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino. A es fenilo, sin sustituir o sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados entre el grupo compuesto por halo, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, perfluorometilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, y 20 perfluorometoxi; o cicloalquilo que tiene un anillo de 3 a 6 atomos donde el cicloalquilo no esta sustituido o uno o dos carbonos del anillo estan independientemente monosustituidos por metilo o etilo; o un anillo heteroaromatico de 5 o 6 atomos que tiene 1 o 2 heteroatomos del anillo seleccionados entre N, S y O y el anillo heteroaromatico esta unido covalentemente al resto del compuesto a traves de un carbono del anillo.

25 [0019] Esta invencion proporciona un procedimiento para reducir la concentracion de acido urico en sangre de un sujeto mamlfero o aumentar su excrecion de acido urico, que comprende administrar al sujeto un compuesto de esta invencion en una cantidad eficaz para reducir la concentracion de acido urico en la sangre del sujeto o aumentar su excrecion de acido urico. Esta invencion proporciona un compuesto de esta invencion para su uso en la reduccion de la concentracion de acido urico en la sangre de un mamlfero o aumentar su excrecion de acido urico. 30 Esta invencion proporciona el uso de un compuesto de esta invencion en la fabricacion de un medicamento para reducir la concentracion de acido urico en la sangre de un mamlfero o aumentar su excrecion de acido urico. Esta invencion proporciona una composition farmaceutica para su uso en la reduccion de la concentracion de acido urico en sangre de un sujeto mamlfero o aumentar su excrecion de acido urico, que comprende un compuesto de esta invencion en una cantidad eficaz para reducir la concentracion en la sangre del sujeto o aumentar su excrecion de 35 acido urico. Esta invencion proporciona un kit que comprende una o mas unidades de dosis orales de un compuesto de esta invencion, e instrucciones para la administration del compuesto para reducir la concentracion de acido urico en la sangre de un sujeto mamlfero o aumentar su excrecion de acido urico.

[0020] La reduccion del acido urico segun se describe en este documento puede utilizarse para tratar o 40 prevenir diversas afecciones como la gota (cualquiera o todas las gotas asintomaticas, artritis gotosa aguda, gota

intercrltica y gota tofacea cronica), hiperuricemia, niveles elevados de acido urico que no alcanzan los niveles que habitualmente justifican un diagnostico de hiperuricemia, disfuncion renal, calculos renales, enfermedad cardiovascular, riesgo de desarrollar enfermedad cardiovascular y otras consecuencias se hiperuricemia, deterioro cognitivo, hipertension arterial idiopatica de aparicion temprana e inflamacion inducida por Plasmodium falciparum.

45

[0021] Esta invencion se basa en la observation de que los compuestos de esta invencion inhiben URAT1 in vitro, como se muestra en el ejemplo 7. La inhibition de URAT1 es un modelo establecido in vitro de reduccion del acido urico in vivo.

DESCRIPCION DE LAS FIGURAS

[0022]

5 Figura 1: Efectos inhibidores dependientes de concentration del compuesto EB sobre la captation de 14Curate en celulas hURATI-HEK.

Figura 2: Efectos inhibidores dependientes de concentracion del compuesto EC sobre la captacion de 14Curate en celulas hURATI-HEK.

10

Figura Figura 15 Figura Figura Figura

20

Figura Figura 25

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION DEFINICION

30 [0023] Un resto 1H-tetrazolil-5-ilo y el correspondiente resto 2H-tetrazolil-5-ilo pueden existir como tautomeros. En este documento los compuestos se nombran y sus formulas estructurales se escriben en referencia al tautomero 1H. Debe entenderse que todas estas referencias incluyen ambas formas tautomericas. Asl, por ejemplo, «5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1H-tetrazol» incluye tanto 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1H-tetrazol como 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-2H-tetrazol. Y la formula incluye tanto la formula 1 mostrada anteriormente como su 35 forma tautomerica 2H-tetrazolil-5-ilo, mostrada a continuation en la formula 1'.

3: Concentracion del compuesto EB en el plasma de raton.

4: Curva de calibration del compuesto EB en el plasma de rata, CL-EM 5: Concentracion del compuesto EB en el plasma de rata.

6: Curva de calibracion del compuesto EC en el plasma de ratas, CL-EM 7: Concentracion del compuesto EC en el plasma de rata.

8: Curva de calibracion del compuesto EC en el plasma de rata, CL-EM 9: Concentracion del compuesto EG en el plasma de rata.

imagen2

[0024] Segun se usa en este documento, el termino «alquilo» significa un grupo alquilo de cadena lineal o 40 ramificada. Un grupo alquilo identificado como con un determinado nUmero de atomos de carbono significa cualquier grupo alquilo que tiene el nUmero especificado de carbonos. Por ejemplo, un alquilo con tres atomos de carbono puede ser propilo o isopropilo, y un alquilo con cuatro atomos de carbono puede ser n-butilo, 1-metilpropilo, 2- metilpropilo o t-butilo.

45 [0025] SegUn se usa en este documento, el termino «halo» se refiere a uno o mas de fluoro, cloro, bromo y yodo.

[0026] SegUn se usa en este documento, el termino «perfluoro» como en perfluorometilo o perfluorometoxi, significa que el grupo en cuestion tiene atomos de flUor en lugar de todos los atomos de hidrogeno.

[0027] En este documento se hace referenda a determinados compuestos qulmicos por su nombre qulmico o por el codigo de dos letras que se muestran a continuacion. Los compuestos EB a EI y el compuesto BD se incluyen dentro del objetivo de la formula I mostrada anteriormente.

5 EB 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1 H-tetrazol

EC 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)bencil)-1 H-tetrazol

ED 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibencil)-1 H-tetrazol

10

EF 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenetil)-1 H-tetrazol EG 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metilbencil)-1 H-tetrazol 15 BD 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)bencil)-1 H-tetrazol

EH 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbencil)-1 H-tetrazol EI 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxibencil)-1 H-tetrazol

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[0028] Segun se usa en este documento el termino de transicion «que comprende» es ilimitado. Una reivindicacion que utilice este termino puede contener elementos ademas de los enumerados en dicha reivindicacion.

25 [0029] Segun se usa en las reivindicaciones, la palabra «o» significa «y/o» siempre que dicha interpretation no tenga sentido en el contexto. As! por ejemplo, la frase «que reduce la concentration de acido urico en sangre de un sujeto mamlfero o aumentando su excretion de acido urico» es equivalente a «que reduce la concentracion de acido urico en sangre de un sujeto mamlfero y/o aumentando su excrecion de acido urico».

30 COMPUESTOS DE LA INVENCION

[0030] En una realization del compuesto, procedimiento, uso o composition farmaceutica descritos en el resumen anterior, el compuesto esta representado por la formula XLVI.

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imagen3

donde x, y, R1 y A son como se define en las reivindicaciones.

[0031] En una realizacion adicional de esta invention el compuesto esta representado por la formula XLVII. 40

imagen4

donde x, y y A son como se define en las reivindicaciones y uno de entre R2 y R3 es hidrogeno y el otro se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxi, alquilo con 1 o 2 5 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino.

[0032] En una realization de esta invention, en la formula I, XLVI o XLVII, x es 1. Tambien se describen compuestos donde A es fenilo, sin sustituir o sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados entre el grupo compuesto por halo, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, perfluometilalcoxi con 1 o 2 atomos de carbono y 10 perfluorometoxi. En una realizacion mas especlfica A es 2,6-dimetilfenilo. Tambien se describe un compuesto donde A es 2,6-difluorofenilo. Preferiblemente, A es 2,6-dimetilfenilo.

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20

25

[0033] En una realizacion de esta invencion el compuesto esta representado por la formula XLVII.

imagen5

donde y es 0, 1, 2 o 3; uno de entre R2 y R3 es hidrogeno y el otro se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxi, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y R4 y R5 se seleccionan independientemente entre el grupo compuesto por metilo, fluoro y cloro.

[0034] Tambien se describen los compuestos representados por las formulas I, XLVI, XLVII o XLVIII, donde y es 0, 1 o 2. En una realizacion de esta invencion, en las formulas XLVII o XLVIII, R3 es hidrogeno y R2 se selecciona a partir del grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxi, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino. Tambien se describen compuestos donde R3 es hidrogeno y R3 se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, metilo y metoxi. Tambien se describen las formulas XLVII o XLVIII, donde R2 es hidrogeno y R3 se selecciona entre el grupo compuesto por alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxi, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino, mas especlficamente R2 es hidrogeno y R3 se selecciona entre el grupo compuesto por metilo y metoxi. Tambien se describe la formula XLVIII, donde tanto R4 como R5 son metilo o ambos son fluoro, preferiblemente ambos son metilo.

[0035] En realizaciones especlficas de esta invencion, el compuesto se selecciona entre el grupo compuesto

por 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1H-tetrazol; 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)bencil)-1H-tetrazol; 5-(3-(2,6-

dimetilbenciloxi)-4-metoxibencil)-1H-tetrazol; 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenetil)-1H-tetrazol; 5-(342,6-dimetilbenciloxi)-

4-metilbencil)-1H-tetrazol; 54442 ,6-difluorobenciloxi)bencil)-1H-tetrazol; 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-25-metilbencil)- 1 H-tetrazol y 5-(3-(2,64)dimetilbenciloxi)-2-metoxibencil)-1 H-tetrazol.

[0036] En una realizacion del compuesto de esta invencion, el compuesto esta en forma sustancialmente pura 5 (al menos el 98%).

ESQUEMAS DE REACCION

[0037] El compuesto de formula I donde x es 1 o 2, y es 0 a 3, R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi 10 con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono, es decir, compuestos de formula:

imagen6

donde A descrito como anteriormente, puede prepararse mediante la reaccion del esquema 1. En la reaccion del

15 esquema 1, A, x, y y R1 son como anteriormente. L es un grupo saliente.

[0038] El compuesto de formula II pueden convertirse en el compuesto de formula V mediante reaccion de la etapa (a) usando la condensacion de Mitsunobu de II con III usando trifenilfosfina o azodicarboxilato de dietilo o azodicarboxilato de diisopropilo. La reaccion se lleva a cabo en un solvente adecuado por ejemplo, tetrahidrofurano.

20 Cualquiera de las condiciones convencionalmente utilizadas en las reacciones de Mitsunobu puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (a).

[0039] El compuesto de formula V tambien puede prepararse mediante eterificacion o alquilacion del compuesto de formula II con el compuesto de formula IV como en la reaccion de la etapa (a) usando una base

25 adecuada, por ejemplo, carbonato de potasio, trietilamina, piridina y similares. La reaccion se lleva a cabo en solventes no proticos, por ejemplo N,N-dimetilformamida, acetonitrilo, diclorometano y similares. En el compuesto de formula IV, L incluye, pero sin limitaciones, mesiloxi, tosiloxi, cloro, bromo, yodo y similares. Puede utilizarse cualquier metodo convencional de eterificacion de un grupo hidroxilo mediante reaccion con un haluro y grupo saliente para llevar a cabo la reaccion de la etapa (a).

30

[0040] El compuesto de formula V puede convertirse en el compuesto de formula I mediante reaccion de la etapa (b) haciendo reaccionar el nitrilo con una azida, por ejemplo, trimetilsilil azida o con azida metalica, por ejemplo, azida sodica, azida potasica, azida de litio, siendo la azida preferida la azida sodica en presencia de acido de Lewis, por ejemplo, cloruro de cinc, cloruro de magnesio, cloruro de aluminio, tetracloruro de estano y similares.

35 La reaccion se lleva a cabo en el solvente, por ejemplo, N,N-dimetilformamida a una temperatura que oscila de 80 °C a 145 °C durante 6 a 60 horas. La reaccion ideal utiliza la reaccion del nitrilo con azida sodica/cloruro de amonio/N,N-dimetilformamida a 120 °C durante 24 horas. Los productos pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraccion, evaporacion, cromatografla y recristalizacion.

40 [0041] Si A es un fenilo sustituido por 1 o 2 grupos hidroxilo, se prefiere generalmente proteger los grupos hidroxilo. El grupo protector adecuado puede describirse en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene. El grupo protector puede estar desprotegido tras la reaccion del etapa (b) utilizando reactivos de desproteccion adecuados como los descritos en «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene.

45 Esquema de reaccion 1

imagen7

[0042]

formula:

5

El compuesto de formula I donde x es 1 o 2, y es 0 o 3, R1 es hidroxilo, por ejemplo, compuestos de

imagen8

donde A se describe como anteriormente, puede prepararse mediante la reaccion de esquema 2. En la reaccion del esquema 2, A, x e y son como anteriormente.

10

[0043] El compuesto de formula V puede convertirse en el compuesto de formula VI mediante reaccion de la etapa (c) tratando el compuesto de formula V con tribromuro de boro o tricloruro de boro usando como solvente, por ejemplo, diclorometano durante 4 a 48 horas a los intervalos de temperatura de -72 °C a 0 °C. Puede utilizarse cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de desmetilacion para llevar a cabo la reaccion 15 de la etapa (c).

[0044] El compuesto de formula VI puede convertirse al compuesto de formula I donde R1 es hidroxilo mediante reaccion de la etapa (d) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (b). Los productos pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraccion, evaporacion, 20 cromatografla y recristalizacion.

Esquema de reaccion 2

: - _________/V

1 <CHj»>-CN V: — W // ft----N

CHGHji.A: O-fCH?)'* CMCHii.-A

<V>: <v» (f)

[0045] El compuesto de formula I donde x es 1 o 2, y es 0 o 3. R1 es amino, es decir, compuestos de formula:

5

imagen9

donde A descrito como anteriormente, puede prepararse mediante la reaccion de esquema 3. En la reaccion del esquema 3, A, x e y son como anteriormente. P es un grupo protector.

10 [0046] El compuesto de formula VII puede convertirse en el compuesto de formula VIII mediante reaccion de la etapa (e) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (a). El compuesto de formula VIII puede convertirse en el compuesto de formula IX mediante reaccion de la etapa (f) reduciendo el grupo nitro a amina. Los agentes reductores pueden ser metales, por ejemplo, Zn, Sn o Fe y similares, y acido. El grupo nitro tambien puede reducirse mediante hidrogenacion catalltica para obtener la amina. El 15 procedimiento de reduccion preferido es la hidrogenacion catalltica. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de reduccion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (f).

[0047] El compuesto de formula IX puede convertirse en el compuesto de formula X mediante reaccion de la etapa (g) protegiendo el grupo amino. El grupo protector adecuado puede describirse en el texto «Grupos 20 protectores en la slntesis organica» de T. Greene. El compuesto de formula X puede convertirse en el compuesto de formula XI mediante reaccion de la etapa (h) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (b). El compuesto de formula XI puede convertirse en el compuesto de formula I donde R1 es amino mediante la etapa de reaccion de (i), mediante desproteccion del grupo amino protegido. Los reactivos de desproteccion adecuados pueden describirse en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene. 25 Los productos pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraccion, evaporacion, cromatografla y recristalizacion.

Esquema de reaccion 3

imagen10

(CH^-CN

CHCH^-A

(CH,),-CN

CMCH2k-A

0-(CHi]k^A

ivm

(VIII)

(IX t

O-'CHjk-A

(XU

5

[0048] El compuesto de formula II donde y es de 1 a 3, R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con de 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono, es decir, compuestos de formula:

imagen11

y el compuesto de formula VII donde y es 1 a 3, es decir, compuestos de formula:

imagen12

puede prepararse mediante la reaccion del esquema 4. En la reaccion del esquema 4, R3 es hidrogeno, fluoro,

bromo, cloro, nitro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. P es un grupo protector hidroxi. R2 es grupo alquilo que tiene de 1 a 2 atomos de carbono. Y es un haluro.

[0049] El compuesto de formula XII puede convertirse en el compuesto de formula XIII mediante la reaccion 5 de la etapa (j) mediante la proteccion, en primer lugar, de los grupos carboxllico e hidroxi utilizando grupos

protectores adecuados como los descritos en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene.

[0050] El compuesto de formula XIII puede reducirse al compuesto de formula XIV donde R3 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono utilizando un reactivo

10 reductor convencional que convierte el grupo ester en un alcohol mediante la reaccion de la etapa (k). Para llevar a cabo esta reaccion generalmente se prefiere, pero sin limitaciones, utilizar hidruro de litio y aluminio. La reaccion se lleva a cabo en un solvente adecuado como tetrahidrofurano y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (k).

15 [0051] El compuesto de formula XIII puede reducirse al compuesto de formula XIV donde R3 es nitro utilizando los reactivos reductores que convierten el ester en un alcohol pero no reducen el grupo nitro de, por ejemplo, BH3- THF, NaBH4-AlCl3 y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de reduction puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (k). El compuesto de formula XIV puede convertirse en el compuesto de formula XV desplazando el grupo hidroxi con un halogeno, siendo el halogeno preferido bromo o 20 cloro. Entre los reactivos de halogenacion apropiados se incluyen, pero sin limitaciones, cloruro de tionilo, cloruro de oxalilo, bromuro, tribromuro de fosforo, tetrabromuro de carbono y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de halogenacion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (I).

[0052] El compuesto de formula XV puede convertirse en el compuesto de formula XVI mediante la reaccion 25 del XV con un cianuro de metal alcalino, por ejemplo, cianuro de sodio o potasio o cianuro de cobre. La reaccion puede llevarse a cabo en un solvente adecuado, por ejemplo, dimetilsulfoxido, N, N-dimetilformamida y similares. Cualquiera de las condiciones convencionalmente utilizadas en la preparation de nitrilos a partir de haluros puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (m).

30 [0053] El compuesto de formula XVI puede convertirse en el compuesto de formula XVII mediante la reaccion de la etapa (n) mediante la elimination del grupo protector hidroxi, utilizando reactivos de desproteccion adecuados como los descritos en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene. El compuesto de formula XVII es el compuesto de formula II donde y es 1 y R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. El compuesto de formula XVII es tambien el compuesto de formula 35 VII donde y es 1 y R3 es nitro. El compuesto de formula XVI puede convertirse en el compuesto de formula XVIII mediante reaccion de la etapa (o) mediante hidrolisis acida o basica. Para la realizacion de esta reaccion, generalmente se prefiere utilizar hidrolisis basica, por ejemplo, hidroxido sodico acuoso en etanol y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en la hidrolisis de nitrilos en un acido carboxllico puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (o).

40

[0054] El compuesto de formula XVIII puede reducirse para obtener el compuesto de formula XIX mediante la reaccion de la etapa (p). Esta reaccion puede llevarse a cabo de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (k). El compuesto de formula XIX puede convertirse en el compuesto de formula XX mediante la reaccion de la etapa (q) de la misma forma que se describe antes en este documento en la 45 reaccion de la etapa (I). El compuesto de formula XX puede convertirse en el compuesto de formula XXI mediante la reaccion de la etapa (r) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (m). El compuesto de formula XXI puede convertirse en el compuesto de formula XXII mediante la reaccion de la etapa (s) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (n).

50 [0055] El compuesto de formula XXII es el compuesto de formula II donde y es 2 y R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. El compuesto de formula XVII es tambien el compuesto de formula VII donde y es 2 y R3 es nitro.

[0056] El compuesto de formula XXI puede hidrolizarse de la misma forma que se describe antes en este 55 documento en la reaccion de la etapa (o) para obtener el compuesto de formula XXIII mediante la reaccion de la

etapa (t).

[0057] El compuesto de formula XXIII puede reducirse para obtener el compuesto de formula XXIV mediante la reaccion de la etapa (u). Esta reaccion puede llevarse a cabo de la misma forma que se describe antes en este

documento en la reaccion de la etapa (k). El compuesto de formula XXIV puede convertirse en el compuesto de formula XXV mediante la reaccion de la etapa (v) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (I). El compuesto de formula XXV puede convertirse en el compuesto de formula XXVI mediante la reaccion de la etapa (w) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa 5 (m). El compuesto de formula XXVI puede convertirse en el compuesto de formula XXVII mediante la reaccion de la etapa (x) de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (n). El compuesto de formula XXVII es el compuesto de formula II donde y es 3 y R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. El compuesto de formula XXVII es tambien el compuesto de formula VII donde y es 3 y R3 es nitro.

10

[0058] Los productos pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraction, evaporation, cromatografla y recristalizacion.

Esquema de reaccion 4

imagen13

CffeOH

IN iv i

(xnn

CHjCHjY

CHjCHjQH

CHjCN

(XVI >

(XVIII)

ch2cn

CHaCHjCN

OH

(XXII)

I^CHjCHjOH

CHjCHjCOjH

-jr-CHoCH^CH^G N

(XXVI

(XXIV)

(XXI III

(XXVII)

(XXVI)

El compuesto de formula II donde y es 0, R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o 5 alquilo con 1 a 2 atomos de carbono, es decir, compuestos de formula:

imagen14

y el compuesto de formula VII donde y es 0, es decir, compuestos de formula:

imagen15

5 puede prepararse mediante el esquema de reaccion 5. En la reaccion del esquema 5, R3 es hidrogeno, nitro, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. P es un grupo protector hidroxi. R2 es grupo alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. R4 es H, cloro o bromo.

[0059] El compuesto de formula XXIII puede convertirse en el compuesto de formula XXIX mediante la

10 reaccion de la etapa (y) mediante la proteccion, en primer lugar, del grupo hidroxi utilizando grupos protectores

adecuados como los descritos en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene e hidrolizando, a continuation, el ester para obtener el compuesto de formula XXIX donde R4 es H.

[0060] El compuesto de formula XXVIII puede convertirse en el compuesto de formula XXIX donde R4 es cloro

15 o bromo haciendo reaccionar el compuesto de formula de la etapa (y) con un reactivo de halogenacion, por ejemplo,

cloruro de tionilo, pentacloruro de fosforo, tricloruro de fosforo, bromuro, tetrabromuro de carbono y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de halogenacion de acidos carboxllico puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (z).

20 [0061] El compuesto de formula XXIX puede convertirse en el compuesto de formula XXX mediante la reaccion de (a') haciendolo reaccionar directamente con amonlaco directamente o haciendo reaccionar primero el compuesto de formula XXIX con el reactivo de conjugation, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida, hexafluorofosfato de benzotriazoliloxi-tris(dimetilamino)fosfonio y, a continuacion, haciendolo reaccionar con amonlaco y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en la acilacion del amonlaco puede utilizarse para llevar a cabo la 25 reaccion de la etapa (a'). El compuesto de formula XXX puede convertirse en el compuesto de formula XXXI mediante la reaccion de la etapa (b) mediante deshidratacion utilizando reactivos como, por ejemplo, cloruro de tionilo, pentoxido de fosforo, pentacloruro de fosforo, oxicloruro de fosforo, tetracloruro de carbono-trifenilfosfina, cloruro cianurico y similares. La reaccion se lleva a cabo sin mezcla o en un solvente adecuado, por ejemplo, N,N- dimetilformamida y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en esta reaccion de deshidratacion 30 puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (b').

[0062] El compuesto de formula XXXI puede convertirse en el compuesto de formula XXXII mediante la reaccion de la etapa (c') eliminando el grupo protector hidroxi utilizando reactivos de desproteccion adecuados como los descritos en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene. El compuesto de formula XXXII 35 es el compuesto de formula II donde y es 0 y R1 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. El compuesto de formula XXXII es tambien el compuesto de formula VII donde y es 0 y R3 es nitro. Los productos pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraction, evaporation, cromatografla y recristalizacion.

40 Esquema de reaccion 5

[0063]

imagen16

5 A-(CH2)xOH

y el compuesto de formula IV, donde x es 1 o 2, es decir, compuestos de formula:

A-(CH2)xL

10

puede prepararse mediante la reaccion del esquema 6. En la reaccion del esquema 6, A es como anteriormente. L es un grupo saliente o haluro. El compuesto de formula XXXIII puede reducirse al compuesto de formula XXXIV mediante la reaccion de la etapa (d'). La reaccion se realiza utilizando un agente reductor convencional, por ejemplo, un hidruro de metal alcalino como hidruro de litio y aluminio. La reaccion se lleva a cabo en un solvente adecuado, 15 como tetrahidrofurano. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de reduccion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (d').

[0064] El compuesto de formula XXXIV es el compuesto de formula III donde x es 1.

20 [0065] El compuesto de formula XXXIV puede convertirse en el compuesto de formula XXXV desplazando el

grupo hidroxilo con un grupo saliente o un haluro, siendo el grupo preferido bromo o cloro. Entre los reactivos de halogenacion apropiados se incluyen, pero sin limitaciones, cloruro de tionilo, cloruro de oxalilo, bromuro, tribromuro de fosforo, tetrabromuro de carbono y similares. Entre los grupos salientes se incluyen toxilato, mesilato y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de 25 la etapa (e'). El compuesto de formula XXXV es el compuesto de formula IV donde x es 1.

[0066] El compuesto de formula XXXV puede convertirse en el compuesto de formula XXXVI mediante la reaccion de XXXV con un cianuro de metal alcalino, por ejemplo, cianuro de sodio o potasio. La reaccion se lleva a cabo en un solvente adecuado, por ejemplo, etanol, dimetilsulfoxido, N,N-dimetilformamida y similares. Cualquiera

30 de las condiciones convencionalmente utilizadas en la preparacion de nitrilos puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (f').

[0067] El compuesto de formula XXXVI puede convertirse en el compuesto de formula XXXVII mediante reaccion de la etapa (g') mediante hidrolisis acida o basica. Para la realization de esta reaccion, generalmente se

35 prefiere utilizar hidrolisis basica, por ejemplo, hidroxido sodico acuoso. Cualquiera de las condiciones convencionalmente utilizadas en la hidrolisis de nitrilo puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (g').

[0068] El compuesto de formula XXVII puede reducirse para obtener el compuesto de formula XXXVIII mediante la reaccion de la etapa (h'). Esta reaccion puede llevarse a cabo de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (d'). El compuesto de formula XXXVIII es el compuesto de formula III

5 donde x es 2.

[0069] El compuesto de formula XXXVIII puede convertirse en el compuesto de formula XXXIX mediante la reaccion de la etapa (i') de la misma forma que se describe antes en este documento en la reaccion de la etapa (e'). El compuesto de formula XXXIX es el compuesto de formula IV donde x es 2.

10

[0070] Los productos pueden aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraction, evaporation, cromatografla y recristalizacion. Si A es un fenilo sustituido por 1 o 2 grupos hidroxilo, se prefiere generalmente proteger el grupo hidroxilo del compuesto de formula XXXIII. El grupo protector adecuado puede describirse en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene.

15

Esquema de reaccion 6

«f)

A-COjH ---------

(xxxni)

U*»

A-CH2-Ctl,-Y -----

(XXXIX)

(h’>

A-CHyCIU-OH ----------

{XXXVIII)

< c-)

A-CHh-OH -----------ArtlHj-Y

(XXXIV) (XXXV)

A-C11:-C02H --------

(XXX VII)

V

A-0:1 ,-CN (XXXVI);

20 [0071] El compuesto de formula XXVIII donde R3 es hidrogeno, fluoro, bromo, cloro, alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono o alquilo con 1 a 2 atomos de carbono, R2 es un grupo alquilo con 1 a 2 atomos de carbono, es decir, compuestos de formula:

imagen17

25

puede prepararse mediante la reaccion del esquema 7. En la reaccion del esquema 7. R2 y R3 son como anteriormente.

[0072] El compuesto de formula XII puede convertirse en el compuesto de formula XXVIII mediante la 30 reaccion de la etapa (j') mediante esterification del compuesto de formula XII con metanol o etanol. La reaccion puede llevarse a cabo usando catalizadores, por ejemplo H2SO4, TsOH y similares o usando un agente deshidratante, por ejemplo, diciclohexilcarbodiimida y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de esterificacion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (j'). El producto puede aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraccion, evaporacion, cromatografla y recristalizacion.

Esquema de reaccion 7

imagen18

[0073] El compuesto de formula XII, donde R3 es cloro, bromo o fluoro, es decir, compuestos de formula:

imagen19

estan disponibles en el mercado o pueden prepararse segun el procedimiento descrito en la literatura del siguiente modo:

10 1. 3-Br o F-2-OHC6H3CO2H

Canadian Journal of Chemistry (2001). 79(11) 1541-1545.

2. 4-Br-2-OHCaH3CO2H 15

Documentos WO 9916747 o JP 04154773.

3. 2-Br-6-OHC6H3CO2H 20 Documento JP 47039101.

4. 2-Br-3-OHC6H3CO2H

Documento WO 9628423.

25

5. 4-Br-3-OHC6H3CO2H Documento WO 2001002388.

30 6. 3-Br-5-OHC6H3CO2H

Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals (1992), 31 (3), 175-82.

7. 2-Br-5-OHC6H3CO2H y 3-Cl-4-OHC6H3CO2H 35

Documentos WO 9405153 y US 5519133.

8. 2-Br-4-OHC6H3CO2H y 3-Br-4-OHC6H3CO2H 40 Documento WO 20022018323.

9. 2-CI-6-OHC6H3CO2H Documento JP 06293700.

5 10. 2-CP3-OHC6H3CO2H

Proceedings of the Indiana Academy of Science (1983), Fecha del volumen 1982. 92, 145-51. 11. 3-CI-5-OHC6H3CO2H

10

Documentos WO 2002000633 y WO 2002044145.

12. 2-CP5-OHC6H3CO2H

15 Documento WO 9745400.

[0074] El compuesto de formula XII, donde R3 es alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono, es decir, compuestos de formula:

20

puede prepararse mediante la reaccion del esquema 8. En la reaccion del esquema 8, R2 es un grupo alquilo con 1 a 2 atomos de carbono. P es un grupo protector hidroxilo. El compuesto de formula XL puede convertirse en el compuesto de formula XLI mediante la reaccion de la etapa (k') protegiendo el grupo fenol mediante un grupo 25 protector adecuado. Las condiciones adecuadas para el grupo protector pueden estar descritas en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene.

[0075] El compuesto de formula XLI puede convertirse en el compuesto de formula XLII mediante oxidacion del aldehldo a acido carboxllico. La reaccion puede llevarse a cabo usando reactivos oxidantes adecuados como,

30 por ejemplo, clorocromato de piridinio, permanganato de potasio, permanganato sodico y similares. Cualquiera de las condiciones adecuadas en estas reacciones de oxidacion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (l').

[0076] El compuesto de formula XLII puede convertirse en el compuesto de formula XII mediante la reaccion 35 de la etapa (m') donde R3 es alcoxi que tiene un atomo de carbono debido a la desproteccion del grupo protegido. La

condition de desproteccion adecuada puede estar descrito en el texto Grupos protectores en la slntesis organica de T. Greene.

imagen20

[0077] El compuesto de formula XLII puede convertirse en el compuesto de formula XLIII tratando el 40 compuesto de formula XLII con tribromuro de boro o tricloruro de boro usando como solvente, por ejemplo,

diclorometano durante 4 a 48 horas a una temperatura de -72 °C a 0 °C. Puede utilizarse cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de desmetilacion para llevar a cabo la reaccion de la etapa (n').

[0078] El compuesto de formula XLIII puede convertirse en el compuesto de formula XLIV mediante 45 esterification del compuesto de formula XLIII con metanol o etanol. La reaccion puede llevarse a cabo usando

catalizadores, por ejemplo, H2SO4, TsOH y similares, o usando un agente de deshidratacion como, diciclohexilcarbodiimida y similares. Cualquiera de las condiciones convencionales en estas reacciones de esterificacion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (o').

50 [0079] El compuesto de formula XLIV puede convertirse en el compuesto de formula XLV eterificando o alquilando el compuesto de formula XLIV con haluro de etilo usando bases adecuadas, por ejemplo, carbonato de potasio, hidruro sodico, piridina y similares. La reaccion puede llevarse a cabo en solventes convencionales, como, tetrahidrofurano, N,N-dimetilformamida, diclorometano y similares. Generalmente, la reaccion se lleva a cabo a

temperaturas de 0 °C a 40 °C. Cualquiera de las condiciones adecuadas en estas reacciones de alquilacion puede utilizarse para llevar a cabo la reaccion de la etapa (p').

[0080] El compuesto de formula XLV puede convertirse en el compuesto de formula XII mediante la reaccion 5 de la etapa (q') donde R3 es alcoxi que tiene 2 atomos de carbono debido a la desproteccion del grupo protector. Las condiciones de desproteccion adecuadas pueden estar descritos en el texto «Grupos protectores en la slntesis organica» de T. Greene. El producto puede aislarse y purificarse mediante tecnicas como extraccion, evaporacion, cromatografla y recristalizacion.

10 Esquema de reaccion 8

imagen21

[0081] El compuesto de formula XII, donde R3 es alcoxi con 1 a 2 atomos de carbono, es decir, compuestos 15 de formula:

imagen22

estan disponibles 20 siguiente modo:

en el mercado o pueden prepararse segun los

procedimientos descritos en la literatura del

1. 2-OMe-4-OHC6H3CO2H

Documentos US 2001034343 o WO 9725992. 25

2. 5-OMe-3-OHCaH3CO2H

J.O.C. (2001), 66(23), 7883-88.

3. 2-OMe-5-OHC6H3CO2H 5

Documento US 6194406 (pagina 96) y Journal of the American Chemical Society (1985), 107(8), 2571-3.

4. 3-OEt-5-OHC6H3CO2H

10 Taiwan Kexue (1996), 49(1), 51-56.

5. 4-OEt-5-OHC6H3CO2H

Documento WO 9626176.

15

6. 3-OEt-4-OHC6H3CO2H

Takeda Kenkyusho Nempo (1965), 24,221-8. Documento JP 07070025.

20 7. 3-OEt-4-OHC6H3CO2H Documento WO 9626176.

[0082] El compuesto de formula XII, donde R3 es alquilo con de 1 a 2 atomos de carbono, es decir, 25 compuestos de formula:

imagen23

estan disponibles en el mercado o pueden prepararse segun el procedimiento descrito en la literatura del siguiente 30 modo:

1. 5-Me-3-OHC6HaCO2H y 2-Me-5-OHC6HaCO2H

Documento WO 9619437.

35

J.O.C. 2001, 66, 7883-88.

2. 5-Me-4-OHC6H3CO2H 40 Documento WO 8503701.

3. 3-Et-2-OHC6H3CO2H y 5-Et-2-OHC6H3CO2H

J. Med. Chem. (1971), 14(3), 265.

45

4. 4-Et-2-OHC6H3CO2H

Yaoxue Xuebao (1998), 33(1), 67-71.

50 5. 5-Et-6-OHC6H3CO2H y 2-n-Pr-6-OHC6H3CO2H

J. Chem. Soc., Perkin Trans J (1979), (8), 2069-78.

6. 2-Et-3-OHC6HaCO2H

5 Documentos JP 10087489 y WO 9628423.

7. 4-Et-3-OHC6H3CO2H J.O.C. 2001, 66, 7883-88.

10

Documento WO 9504046.

8. 2-Et-5-OHC6H3CO2H

15 J.A.C.S (1974), 96(7), 2121-9.

9. 2-Et-4-OHC6H3CO2H y 3-Et-4-OHC6H3CO2H Documento JP 04282345.

20

10. 1. 3-Et-5-OHC6H3CO2H

Slntesis adaptadas de J.O.C. 2001, 66, 7883-88 usando 2-etilacroleina.

25 USO EN PROCEDIMIENTOS DE TRATAMIENTO

[0083] Esta invencion proporciona un procedimiento para reducir los niveles de acido unico en sujetos mamlferos o aumentar la excrecion de acido urico de un sujeto mamlfero. El nivel de acido urico en un mamlfero puede determinarse usando cualquier medida convencional. Tlpicamente, se determina el nivel de acido urico en

30 sangre. El acido urico tambien puede depositarse en los tejidos, lo que da lugar a depositos (p. ej., tofos) que pueden verse afectados por la elevacion o reduccion de las concentraciones de acido urico en sangre y que, en consecuencia, pueden contribuir al acido urico en circulacion. El procedimiento de este invencion para reducir el acido urico pueden usarse para tratar o prevenir diversas afecciones como gota, hiperuricemia, niveles elevados de acido urico que no alcanzan los niveles que habitualmente justifican un diagnostico de hiperuricemia, calculos 35 renales, enfermedad cardiovascular, factor de riesgo cardiovascular y deterioro cognitivo. Reduciendo los niveles de acido urico, la administration de los compuestos de esta invencion ralentizan la progresion de la enfermedad renal. Un nivel de acido urico elevado se ha identificado como un factor de riesgo de enfermedad cardiovascular. Se ha encontrado una correlation significativa entre el acido urico elevado y el deterioro cognitivo en adultos de mas edad (Schretlen, D.J. y col., «Serum Uric Acid and Cognitive Function in Community-Dwelling Older Adults». 40 Neuropsychology (Jan. 2007) 21(1): 136-140). Por consiguiente, el procedimiento de esta invencion para reducir el acido urico puede usarse para tratar o prevenir el deterioro cognitivo, incluido el deterioro cognitivo en adultos de mayor edad. Es bien sabido que las personas con el slndrome de Lesch-Nyhan presentan niveles elevados de acido urico y sufren las numerosas consecuencias de esta hiperuricemia, incluida la gota. Por tanto, esta invencion para reducir los niveles en sangre y aumentar la elimination de acido urico puede usarse para tratar a personas con 45 slndrome de Lesch-Nyhan.

[0084] El intervalo normal de acido urico en sangre esta entre 3,4 mg/dl y 7,0 mg/dl en varones, entre 2,4 mg/dl y 6,0 mg/dl en mujeres premenopausicas y de 2,5 mg/dl a 5,5 mg/dl en ninos. La formacion/precipitacion de cristales de urato normalmente se produce en varones a niveles de 6,6 mg/ml o superiores y en mujeres a niveles

50 de 6,0 mg/dl o superiores. Esto demuestra que los niveles de acido urico que estan dentro del denominado intervalo normal pueden tener consecuencias sobre la salud no deseables incluso inducir gota. Ademas, lo que puede estar en el intervalo normal para la poblacion en su conjunto puede ser elevado para el individuo. Las consecuencias cardiovasculares y de otro tipo del acido urico elevado pueden producirse con niveles en sangre que esten bien dentro de estos intervalos «normales». Por tanto, un diagnostico de hiperuricemia no es necesariamente un requisito 55 para los efectos beneficiosos de los compuestos de la invencion.

[0085] Esta invencion incluye el tratamiento de la hiperuricemia asociada con gota, hipertension, inflamacion vascular, insuficiencia cardlaca, enfermedades arteriovenosas, infarto de miocardio, ictus, preeclampsia, eclampsia, apnea del sueno, disfuncion renal (incluidas insuficiencia renal y enfermedad renal en fase terminal [ERFT]),

trasplante de organos, diureticos, tiazidas, ciclosporina, acido acetilsalicllico, vitamina C, acido nicotinico, levodopa (L-DOPA), farmacos citotoxicos y determinados agentes antibacterianos (como pirozinamida), cirrosis, disfuncion tiroidea, disfuncion paratiroidea, cancer de pulmon, anemia, leucemia, linfoma, mieloma multiple, slndrome de lisis tumoral, disfuncion tiroidea o paratiroidea, slndrome de Lesch-Nyhan, tabaquismo, consumo de alcohol y psoriasis. 5 Esta invencion incluye el tratamiento de la hiperuricemia que puede inducir gota, formacion de cristales de urato, disfuncion renal, rechazo del injerto o el organo tras el trasplante, trastornos endoteliales (como inflamacion), insuficiencia cardlaca cronica, trastornos arteriovenosos, preeclampsia, eclampsia, hipertension y deterioro cognitivo. En realizaciones del procedimiento de esta invencion para el tratamiento de la gota, los depositos tisulares de acido urico, incluyendo pero sin limitaciones los tofos, se reducen y la incidencia e intensidad de los ataques de gota 10 tambien se reducen.

[0086] Los compuestos de esta invencion pueden administrarse mediante cualquier via convencional de administracion sistemica. Preferiblemente se administran por via oral. Por consiguiente, se prefiere que el medicamento este formulado para administracion oral. Tambien pueden usarse otras vlas de administracion segun

15 esta invencion incluyendo por via rectal, parenteral, mediante inyeccion (p. ej., inyeccion intravenosa, subcutanea, intramuscular o intraperitoneal) o nasal.

[0087] Realizaciones adicionales de cada uno de los usos y sus usos en tratamiento de esta invencion comprenden la administracion de una cualquiera de las realizaciones de los compuestos descritos anteriormente. En

20 interes de evitar redundancias innecesarias, no se repite cada compuesto o grupo de compuestos, sino que se incorporan a esta description de usos o usos en tratamiento si se repitieron.

[0088] Puede tratarse tanto a sujetos mamlferos humanos como no humanos segun el tratamiento usado en esta invencion. La dosis optima de un compuesto en particular de la invencion para un sujeto en particular puede

25 determinarse en el ambito cllnico por un medico experto, en el caso de la administracion oral del compuesto de esta invencion generalmente administrado a adultos: en una dosis diaria de 1 mg a 2500 mg, mas preferiblemente de 1 mg a 1200 mg. En otras realizaciones de esta invencion, el compuesto se administra a una dosis de 400 mg a 1000 mg, de 600 mg a 800 mg, de 600 mg a 1000 mg o de 100 a 300 mg administrados una o dos veces al dla. El peso corporal medio de un adulto tlpico es de 60 a 70 kilogramos, por lo que los intervalos de dosis apropiados 30 expresados como mg/kg son aproximadamente de 0,015 a 42 mg/kg, de 0,015 a 20 mg/kg, de 6,6 a 13 mg/kg, de 10 a 13 mg/kg, de 10 a 16 mg/kg o de 1,67 a 4,3 mg/kg, administrado una o dos veces al dla. Cuando se trata a ninos, el medico del paciente determina la dosis optima. En el caso de administracion oral a un raton, el compuesto de esta invencion se administra generalmente a una dosis diaria de 1 a 300 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal.

35

[0089] El compuesto de esta invencion puede administrarse en combination con otros farmacos que reducen el acido urico. En estos casos, la dosis del compuesto de esta invencion es como se describe anteriormente. Puede utilizarse cualquier farmaco reductor de acido urico convencional o en investigation en combinacion con el compuesto de esta invencion. Entre los ejemplos de estos farmacos se incluyen inhibidores de la xantina oxidasa

40 como el alopurinol (de 100 mg/dla a 1000 mg/dla; mas tlpicamente de 100 mg/dla a 300 mg/dla), febuxostat (de 40 mg/dla a 120 mg/dla; mas especlficamente de 60 mg/dla a 80 mg/dla) y oxipurinol; Puricasa/PEG-uricasa (de 4 mg a 12 mg cada dos semanas mediante infusion); farmacos uricosuricos como sulfinpirazona (de 100 mg/dla a 800 mg/dla), probenecid (500 mg/dla), losartan (de 25 mg/dla a 200 mg/dla, mas tlpicamente de 50 mg/dla a 100 mg/dla), fenolibrato, JTT-552 (un inhibidor de URAL-1), benzbromarona (de 70 mg/dla a 150 mg/dla) y estatinas 45 como la atorvastatina (LIPITOR®). El otro farmaco reductor del acido urico puede administrarse en su cantidad habitual o en una cantidad menor que la habitual administrando dosis menores de dicho otros farmaco o reduciendo su frecuencia de administracion.

[0090] Los compuestos de esta invencion pueden administrarse junto con otros farmacos utilizados para 50 disminuir el dolor asociado con los ataques de gota, por ejemplo, farmacos antiinflamatorios no esteroides (AINE),

colchicina, corticoesteroideos y otros analgesicos.

[0091] En el transcurso de la reduction de los niveles de acido urico en sangre se espera que los compuestos de esta invencion aumenten los niveles de acido urico en la orina. Para aumentar el pH de la orina y mejorar de este

55 modo la solubilidad del acido urico, puede administrarse, por ejemplo, citrato o bicarbonato, junto con en compuesto de esta invencion.

[0092] Puede administrarse al sujeto una mezcla del compuesto de esta invencion o su sal con uno o mas de otros farmacos reductores del acido urico, analgesicos y agentes que aumentan el pH. Alternativamente, el

compuesto de esta invencion o su sal y el uno o mas de otros farmacos reductores del acido urico, analgesicos y agentes que aumentan el pH no se mezclan para formar una mezcla sino que se administran al sujeto de forma independiente. Cuando no se mezclan los principios activos para obtener una mezcla o composicion unica es conveniente proporcionarlos en forma de un kit que comprenda uno o mas dosis unitarias orales de un compuesto 5 de esta invencion, una o mas dosis unitarias orales de una o mas de otros farmacos reductores de acido urico, analgesicos o agentes que aumentan el pH, y las instrucciones para la administracion del compuesto de esta invencion en combinacion con los otros principios activos. Preferiblemente los componentes del kit estan empaquetados conjuntamente, tal como en una caja o en un blister.

10 COMPOSICIONES FARMACEUTICAS

[0093] Esta invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de esta invencion y, opcionalmente, un vehlculo farmaceuticamente aceptable. Realizaciones adicionales de la composicion farmaceutica de esta invencion comprenden una cualquiera de las realizaciones de los compuestos descritos

15 anteriormente. En interes de evitar redundancias innecesarias, no se repite cada compuesto y grupo de compuestos, sino que se incorporan a esta descripcion de composiciones farmaceuticas como si se repitiesen.

[0094] Preferiblemente la composicion se adapta para su administracion oral, por ejemplo, en forma de comprimido, comprimido recubierto, grageas, capsulas de gelatina duras o blandas, solucion, emulsion o

20 suspension. En general, la composicion oral comprendera de 1 mg a 2500 mg, mas preferiblemente, de 1 mg a 1200 mg del compuesto de esta invencion. En realizaciones mas especlficas de esta invencion, la composicion oral comprendera de 400 mg a 1000 mg, de 600 mg a 800 mg, de 600 mg a 1000 mg o de 100 a 300 mg del compuesto de esta invencion. Es conveniente que el sujeto trague uno o dos comprimidos, comprimidos recubiertos, grageas o capsulas de gelatina al dla. No obstante, la composicion tambien puede adaptarse para su administracion mediante 25 cualquier otro medio convencional de administracion sistemica, incluido por via rectal, por ejemplo, en forma de supositorios, parenteral, por ejemplo, en forma de soluciones para inyeccion, o nasal.

[0095] Los principios activos se pueden procesar con vehlculos farmaceuticamente inertes, inorganicos u organicos para la produccion de composiciones farmaceuticas. Pueden usarse lactosa, almidon de malz o sus

30 derivados, talco, acido estearico o sus sales, y similares, por ejemplo, como vehlculos para comprimidos, comprimidos recubiertos y capsulas de gelatina duras. Los vehlculos adecuados para las capsulas de gelatina blandas son, por ejemplo, aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semisolidos y liquidos y similares. No obstante, dependiendo de la naturaleza del principio activo, normalmente no son necesarios vehlculos en el caso de las capsulas de gelatina blandas, excepto la propia gelatina blanda. Los vehlculos adecuados para la produccion de 35 soluciones y jarabes son, por ejemplo, agua, polioles, glicerol, aceites vegetales y similares. Los vehlculos adecuados para los supositorios son, por ejemplo, aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas, polioles semiliquidos o liquidos y similares.

[0096] Las composiciones farmaceuticas pueden, ademas, contener conservantes, solubilizadores, 40 estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, potenciadores del sabor, sales para

variar la presion osmotica, tampones, agentes de recubrimiento o antioxidantes.

[0097] La invencion se entendera mejor en referencia al siguiente ejemplo que ilustra, pero sin limitaciones, la invencion descrita en este documento.

45

EJEMPLOS EJEMPLO 1 50 [0098]

imagen24

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1H-tetrazol 5 Etapa A: Preparacion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)benzonitrilo:

[0099] Una solucion de alcohol 2,6-dimetilbencllico (6,27 g; 46,1 mmoles) y azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD; 9,24 g, 45,7 mmoles) en THF seco (30 ml) se anadio gota a gota a una solucion de 3-hidroxibenzonitrilo (5 g; 37 mmoles) y trifenilfosfina (TPP 11,99 g; 45,7 mmoles) en THF (100 ml) a 0 °C. La mezcla de reaccion se calento a

10 temperatura ambiente durante 4 horas o hasta que se consumio la materia prima, se diluyo con eter y se lavo con agua (2X). La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo como un solido de color blanco.

15 Etapa B: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1 H-tetrazilo:

[0100] Una mezcla de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)benzonitrilo (etapa A; 3 g; 11,8 mmoles), azida sodica (847 g; 13 mmoles) y cloruro de amonio (0,697 g; 13 mmoles) en dimetilformamida seca (30 ml) se calento bajo atmosfera de argon a 110 °C durante 14 horas y hasta que se consumio toda la materia prima. Se anadio agua a la mezcla de

20 reaccion para disolver todos los solidos; la solucion se recogio en salmuera y se extrajo con acetato de etilo (2X). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (cloroformo:metanol 95:5) para obtener el compuesto del tltulo como un solido de color blanco.

25 [0101] RMN 1H (400 MHz (CDa)2SO), 2,4 (s, 6H); 5,15 (s, 2H); 7,1 (d, 2H); 7,15 (m, 1H); 7,3 (dd, 1 H); 7,5 (t, 1H); 7,65 (m, 1H); 7,7 (m, 1H).

EJEMPLO 2

30 [0102]

imagen25

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)bencil)-1H-tetrazol

35

Etapa A: Preparacion de 2-(3-hidroxifenil)acetonitrilo:

[0103] A una solucion de 2-(3-metoxifenil)acetonitrilo (3,6 g; 25,4 mmoles) en cloruro de metileno seco (20 ml) se anadio BBr3 (55 ml 1M en CH2O2, 55 mmoles) a -78°C bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se 40 calento a temperatura ambiente durante 48 horas, se amortiguo con hielo picado y se extrajo con cloruro de metileno. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (CH2CL:acetato de etilo 4:1) para obtener el compuesto del tltulo como un aceite.

Etapa B: Preparacion de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)acetonitrilo:

[0104] Una solucion de 2-(3-hidroxifenil)acetonitrilo (etapa A, 5 g, 37 mmoles) y azodicarboxilato de 5 diisopropilo (DIAD; 3,38 g; 16,7 mmoles) en THF seco (20 ml) se anadio gota a gota a una solucion de alcohol 2,6-

dimetilbencllico (2,25 g; 16,5 mmoles) y trifenilfosfina (TPP; 4,3 g; 16,4 mmoles) en THF (30 ml) a 0 °C bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima. Se anadio gel de sllice (25 g) a la mezcla, los solventes se eliminaron a presion reducida, se cargo en una columna de gel de sllice y se eluyo con cloruro de metileno:hexano (1:1) para obtener un 10 solido cristalino de color amarillo claro.

Etapa C: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)bencil)-1H-tetrazol

[0105] Una mezcla de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)acetonitrilo (etapa B; 3,2 g; 12,7 mmoles), azida sodica 15 (1,28 g; 16,7 mmoles) y cloruro de amonio (1,8 g; 20,2 mmoles) en dimetilformamida seca (30 ml) se calento bajo

atmosfera de argon a 90 °C durante 9 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, y la mezcla de reaccion se concentro a presion reducida. La mezcla de reaccion se recogio en acetato de etilo y se lavo con agua (2X), se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (cloruro de metileno:metanol 9:1) para obtener el producto oleoso. El aceite se agito con acetato de etilo, 20 hexano 1:2 durante 10 minutos y el solido se filtro para obtener el producto como un solido de color blanco.

[0106] RMN 1H (400 MHz, (CDa)2SO): 2,3 (s, 6H); 4,25 (s, 2H); 5,15 (s, 2H); 6,84 (d, 1H); 6,96 (m, 2H); 7,08 (d, 2H); 7,18 (m, 1H); 7,28 (m, 1H).

25 EJEMPLO 3

[0107]

imagen26

30

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibencil)-1H-tetrazol

Etapa A: Preparacion de 3-hidroxi-4-metoxibenzoato de etilo:

35 [0108] Una solucion de acido 3-hidroxi-4-metoxibenzoico (25 g; 148,67 mmoles) y acido p-toluensulfonico monohidrato (3,17 g; 16,66 mmoles) en etanol absoluto (300 ml) se calento a reflujo durante 6 horas o hasta que se consumio toda la materia prima. La mezcla de reaccion se concentro, se diluyo con EtOAc (60 ml) y se lavo con agua (20 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

40

Etapa B: Preparacion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibenzoato de etilo:

[0109] Una solucion de 3-hidroxi-4-metoxibenzoato de etilo (etapa A; 9,10 g; 46,4 mmoles) y azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD; 10,23 g; 50 mmoles) en THF seco (20 ml) se anadio gota a gota a una solucion de alcohol 45 2,6-dimetilbencllico (6,94 g; 51 mmoles) y trifenilfosfina (TpP; 13,27 g; 50 mmoles) en THF (60 ml) a 0 °C bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente durante 4 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, se diluyo con eter y se lavo con agua (2X). La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

50

Etapa C: Preparacion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxifenil)metanol:

[0110] A una solucion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibenzoato de etilo (etapa B; 6,04 g; 19,23 mmoles) en THF seco (30 ml) se le anadio LiAlhU (1 M en THF 0,803 g; 21,16 mmoles) gota a gota a 0°C bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se agito durante 4 horas o hasta que se consumio toda la materia prima; despues, se

5 amortiguo lentamente con HCl 1 N. Se anadio EtOAc (20 ml) a la mezcla de reaccion. La mezcla de reaccion se filtro y el precipitado se lavo con EtOAc (25 ml x 2). La capa organica combinada se lavo con HCl 1N y salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 4:1) para obtener el compuesto del tltulo.

10 Etapa D: Preparacion de 2-((5-(bromometil)-2-metoxifenoxi)metil)-1,3-dimetilbenceno:

[0111] A una solucion de (3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxifenil)metanol (etapa C, 5,23 g, 20,4 mmoles) y CBr4 (10,16 g. 30,6 mmoles) en CH2O2 seco (20 ml) se le anadio trifenilfosfina en porciones (8,03 g, 30,64 mmoles) a 0°C. La mezcla de reaccion se agito durante 1,5 horas, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla

15 ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex: acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

[0112] RMN 1H (400 MHz, (CDCla): 2,43 (s, 6H); 3,83 (s, 3H); 4,53 (s, 2H); 5,08 (s, 2H); 6,84 (d, 1H): 7,0- 7,03 (dd, 1H); 7,06-7,09 (m, 3H); 7,14-7,18 (m, 1H).

20 Etapa E: Preparacion de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxifenil)acetonitrilo:

[0113] La solucion de 2-((5-(bromometil)-2-metoxifenoxi)metil)-1,3-dimetilbenceno (etapa D, 3,28 g, 9,7 mmoles) y NaCN (0,624 g; 12,7 mmoles) en DMF seca (20 ml) se calento a 120°C durante 2,5 horas, a continuacion, se enfrio y diluyo con EtOAc (50 ml). La capa organica se lavo con agua (30 ml) y salmuera, se seco sobre Na2SO4,

25 se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

Etapa F: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibencil)-1H-tetrazol:

30 [0114] Una mezcla de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxifenil)acetonitrilo (etapa E; 2,17 g; 7,5 mmoles), azida sodica (0,590 g; 9,1 mmoles) y cloruro de amonio (0,486 g; 9,1 mmoles) en DMF seca (20 ml) se calento bajo atmosfera de argon a 90 °C durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, la mezcla de reaccion se enfrio, se diluyo con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x 4). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de 35 sllice (cloroformo:metanol 95:5) para obtener un producto semisolido. El semisolido se agito con acetato de etilo:hexano 1:2 (15 ml) durante 10 minutos y se filtro para obtener el producto como un solido de color blanco.

[0115] RMN 1H (400 MHz, (CDa)2SO): 2,3 (s, 6H); 3,68 (s, 3H); 4,22 (s, 2H): 4,98 (s, 2H); 6,78-6,81 (dd, 1H); 6,91-6,93 (d, 1H); 7,05-7,07 (d, 2H); 7,13-7,16 (m, 2H). EM: m/z 325,2 [M + H]+.

40

EJEMPLO 4

[0116]

45

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenetil)-1H-tetrazol

Etapa A: Preparacion de 3-(3-metoxifenil)propanonitrilo:

50

[0117] La solucion de 1-(2-bromoetil)-3-metoxibenceno (10 g, 46,4 mmoles), NaCN (2,73 g; 55,8 mmoles) en

imagen27

DMF seca (20 ml) se calento a 90°C durante 6 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, la reaccion se enfrio, se diluyo con EtOAc (60 ml) y se lavo con agua (20 ml x 3) y salmuera, la capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo como un aceite.

5

Etapa B: Preparacion de 3-(3-hidroxifenil)propanonitrilo:

[0118] A una solucion en agitacion de 3-(3-metoxifenil)propanonitrilo (etapa A; 1,71 g; 10,6 mmoles) en CH2O2 seco (20 ml) se le anadio BBr3 (1 M en CH2O2; 5,32 g; 21,2 mmoles) a - 78°C bajo atmosfera de argon. La

10 mezcla de reaccion se agito a la misma temperatura durante 2 horas y, a continuacion, a 0 °C durante 4 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, se amortiguo con hielo, se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), la capa organica combinada se lavo cuidadosamente con NaHCO3 saturado y salmuera, y se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

15

Etapa C: Preparacion de 3-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)propanonitrilo:

[0119] Una solucion de 3-(3-hidroxifenil)propanonitrilo (etapa B; 1,25 g; 8,5 mmoles) y azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD; 1,87 g; 9,26 mmoles) en THF seco (10 ml) se anadio gota a gota a una solucion de alcohol 2,620 dimetilbencilo (1,27 g, 9,3 mmoles) y trifenilfosfina (TPP; 2,43 g; 9,26 mmoles) en THF seco (30 ml) a 0°C bajo

atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente durante 4 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, se diluyo con eter y se lavo con agua (2X). La capa organica se seco sobre Na3SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

25

Etapa D: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenetil)-1H-tetrazol

[0120] Una mezcla de 3-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)propanonitrilo (etapa C; 2,62 g; 9,9 mmoles), azida sodica (0,899 g; 13,8 mmoles) y cloruro de amonio (0,740 g; 13,8 mmoles) en DMF seca (20 ml) se calento bajo

30 atmosfera de argon a 90 °C durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, la mezcla de reaccion se enfrio, se diluyo con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x 4). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (cloroformo:metanol 95:5 a 92,5: 7,5) para obtener un producto semisolido. El semisolido se agito con acetato de etilo:hexano 1:2 (15 ml) durante 10 minutos, y se filtro para obtener el producto como un solido de color blanco.

35

[0121] RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO): 2,48 (s, 6H); 3,02 (t, 2H); 3,19 (t, 2H); 4,98 (s, 2H); 6,80-6,81 (d, 1H); 6,86-6,89 (m, 2H); 7,05-7,07 (d, 2H); 7,14-7,23 (m, 2H). EM: m/z 309,2 [M + H]+.

EJEMPLO 5

40

[0122]

imagen28

45 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibencil)-1 H-tetrazol

Etapa A: Preparacion de 2-(3-hidroxi-4-metilfenil)acetonitrilo:

[0123] A una solucion en agitacion de 2-(3-metoxi-4-metilfenil)acetonitrilo (5 g, 31 mmoles) en CH2O2 seco 50 (20 ml) se le anadio BBr3 (1 M en CH2O2; 10,02 g; 40 mmoles) gota a gota a -78°C bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se agito a la misma temperatura durante 2 horas y, a continuacion, a 0 °C durante 5 horas o

hasta que se consumio toda la materia prima, se amortiguo con hielo, se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), la capa organica combinada se lavo cuidadosamente con NaHCO3 saturado y salmuera, y se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de metilo 4:1^CH2Cl2:hex 1:1) ) para obtener el compuesto del tltulo como un solido blanquecino.

5

Etapa B: Preparacion de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metilfenil)acetonitrilo:

[0124] A una solucion en agitacion de 2-(3-hidroxi-4-metilfenil)acetonitrilo (etapa A; 2,18 g; 14,8 mmoles), K2CO3 (2,66 g; 19,2 mmoles) en DMF seca (20 ml) se le anadio cloruro de 2,6-dimetilbencilo (2,97 g; 19,2 mmoles) a

10 temperatura ambiente bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se agito durante 16 horas, se diluyo con EtOAc (40 ml) y se lavo con agua (20 ml) y salmuera. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo como un solido de color blanco.

15 Etapa C: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metilbencil)-1H-tetrazol:

[0125] Una mezcla de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metilfenil)acetonitrilo (etapa B, 1,12 g; 4,2 mmoles), azida sodica (0,400 g; 6,1 mmoles) y cloruro de amonio (0,350 g; 6,5 mmoles) en DMF seca (15 ml) se calento bajo atmosfera de argon a 90 °C durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, la mezcla de reaccion

20 se enfrio, se diluyo con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x 4). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida. El semisolido se agito con acetato de etilo:hexano 1:2 (15 ml) durante 10 minutos y se filtro para obtener el producto como un solido de color blanco.

25 [0126] RMN 1H (400 MHz, (CDa)2SO): 2,0 (s, 3H); 2,35 (s, 6H); 4,27 (s, 2H); 5,0 (s, 2H); 6,73-6,75 (dd, 1H); 7,08-7,1 (m, 3H); 7,15-7,19 (m, 2H). EM: m/z 309,2 [M + H]+.

EJEMPLO 6

30 [0127]

imagen29

5-(4-(2,6-difluorobenciloxi)bencil)-1H-tetrazol

35

Etapa A: Preparacion de 2-(4-(2,6-difluorobenciloxi)fenil)acetonitrilo:

[0128] A una solucion de 2-(4-hidroxifenil)acetonitrilo (5 g; 37,5 mmoles) y K2CO3 (6,74 g; 48,8 mmoles) en DMF seca (20 ml) se le anadio bromuro de 2,6-difluorobencilo (7,77 g; 37,5 mmoles). La mezcla de reaccion se agito

40 durante 4 horas a temperatura ambiente y se concentro al vaclo. El residuo sin procesar se obtuvo en EtOAc y se lavo con agua y salmuera. La capa acuosa se lavo una vez mas con EtOAc. La capa organica combinada se seco sobre Na2SO4, se filtro y concentro para obtener el compuesto del tltulo como un solido blanco.

[0129] 1H RMN (270 MHz, CDCls): 3,65 (s, 2H); 5,1 (s, 2H); 6,9-7,0 (m, 4H); 7,2-7,4 (m, 3H).

45

Etapa B: Preparacion de 5-(4-(2,6-difluorobenciloxi)bencil)-1H-tetrazol:

[0130] Una mezcla de 2-(4-(2,6-difluorobenciloxi)fenil)acetonitrilo (etapa A; 5 g; 19,3 mmoles), azida sodica (1,3 g; 20 mmoles) y cloruro amonico (1,06 g; 20 mmoles) en DMF seca (60 ml) se calento a 90°C durante 16 horas.

50 Se elimino el solvente al vaclo y el residuo oleoso se repartio entre EtOAc y agua (acidificada a pH 1 con HCl concentrado). La capa organica se lavo con agua, se seco sobre Na2SO4, se filtro y concentro hasta obtener un semisolido de color marron. La purification se realizo mediante cromatografla ultrarrapida en columna de gel de sllice (cloroformo:metanol, 9:1) para obtener el compuesto del tltulo como un solido cremoso claro.

55 [0131] RMN 1H (270 MHz, CDCls): 4,0 (s, 2H); 5,1 (s, 2H); 6,7-6,9 (m, 4H); 7,0 (d, 2H); 7,2 (m, 1H).

EJEMPLO 7

[0132]

5

imagen30

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbencil)-1H-tetrazol

10 Etapa A: Preparacion de 3-hidroxi-2-metilbenzoato de etilo:

[0133] Una solucion de acido 3-hidroxi-2-metilbenzoico (5,04 g; 33,12 mmoles) y acido p-toluensulfonico monohidrato (0,741 g; 3,89 mmoles) en etanol absoluto (150 ml) se calento a reflujo durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima. La mezcla de reaccion se concentro, se diluyo con EtOAc (30 ml) y se lavo con 15 agua (20 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

Etapa B: Preparacion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbenzoato de etilo:

20 [0134] A una solucion en agitacion de 3-hidroxi-2-metilbenzoato de etilo (etapa A; 3,1 g; 17,22 mmoles), K2CO3 (3,09 g; 22,38 mmoles) en DMF seca (15 ml) se le anadio cloruro de 2,6-dimetilbencilo (3,19 g; 20,66 mmoles) a temperatura ambiente bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se agito durante 16 horas, se diluyo con EtOAc (40 ml) y se lavo con agua (20 ml) y salmuera. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 4:1) 25 para obtener el compuesto del tltulo como un solido de color blanco.

Etapa C: Preparacion de (3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilfenil)metanol:

[0135] A una solucion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbenzoato de etilo (etapa B; 5,94 g; 19,93 mmoles) 30 THF seco (35 ml) se le anadio LiAlH4 (1 M en THF; 0,832 g; 21,92 mmoles) gota a gota a 0°C bajo atmosfera de

argon. La mezcla de reaccion se agito durante 4 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, despues, se amortiguo lentamente con HCl 0,1 N a 0 °C y se anadio EtOAc (20 ml) a la mezcla de reaccion. La mezcla de reaccion se filtro y el precipitado se lavo con EtOAc (25 ml x 2). La capa organica combinada se lavo con HCl 0,1N y salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna 35 de gel de sllice (hex: acetato de etilo 2:1) para obtener el compuesto del tltulo.

Etapa D: Preparacion de 1-(bromometil)-3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbenceno:

[0136] A una solucion de (3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilfenil)metanol (etapa C; 3,68 g; 14,87 mmoles) y CBr4 40 (5,25 g; 15,8 mmoles) en CH2O2 seco (20 ml) se le anadio trifenilfosfina en porciones (4,14 g; 15,8 mmoles) a 0°C.

La mezcla de reaccion se agito durante 4 horas, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 4:1) para obtener el compuesto del tltulo. El solido se mantuvo al vaclo durante 6 horas mas hasta que se seco.

45 Etapa E: Preparacion de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilfenil)acetonitrilo:

[0137] La solucion de 1-(bromometil)-3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbenceno (etapa D; 4,28 g; 13,41 mmoles) y NaCN (0,789 g; 16,10 mmoles) en DMF seca (20 ml) se calento a 120°C durante 3 horas, a continuacion, se enfrio y diluyo con EtOAc (50 ml). La capa organica se lavo con agua (30 ml) y salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro,

50 concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 4:1) para obtener el compuesto del tltulo.

Etapa F: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbencil)-1H-tetrazol:

[0138] Una mezcla de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilfenil)acetonitrilo (etapa E; 2,70 g; 10,19 mmoles), azida sodica (0,795 g; 12,23 mmoles) y cloruro de amonio (0,653 g; 12,22 mmoles) en DMF seca (20 ml) se calento

5 bajo atmosfera de argon a 90 °C durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, la mezcla de reaccion se enfrio, se diluyo con agua y se extrajo con EtOAc (30 ml x 4). La capa organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre Na2SO4, se filtro, concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (cloroformo:metanol 92,5:7,5) para obtener un producto semisolido. El semisolido se agito con acetato de etilo:hexano 1:2 (15 ml) durante 10 minutos, y se filtro para obtener el producto como un solido de color 10 blanco.

[0139] RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO): 2,01 (s, 3H); 2,32 (s, 6H); 4,24 (s, 2H); 5,01 (s, 2H); 6,78-6,79 (dd, 1H); 7,06-7,08 (d, 2H); 7,12-7,19 (m, 3H).

15 EJEMPLO8

[0140]

imagen31

20

5-(3-(2,6)-dimetilbenciloxi)-2-metoxibencil)-1H-tetrazol

Etapa A: Preparacion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxibenzaldehldo:

25 [0141] La solucion de 3-hidroxi-2-metoxibenzaldehldo (5,06 g; 32,7 mmoles), cloruro de 2,6-dimetilbencilo (5,04 g; 33,1 mmoles) y K2CO3 (4,78 g; 34,6 mmoles) en DMF seca (15 ml) se agito a temperatura ambiente bajo atmosfera de argon durante 16 horas, a continuacion se diluyo con EtOAc (40 ml) y se lavo con agua (20 ml). La capa organica se concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:acetato de etilo 4:1) para obtener el compuesto del tltulo como un solido blanquecino.

30

Etapa B: Preparacion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxifenil)metanol:

[0142] A una solucion de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxibenzaldehldo (etapa B; 10,6 g; 32,7 mmoles) en THF seca (40 ml) se le anadio LiAlH4 (1 M en THF; 0,95 g; 23,7 mmoles) gota a gota a 0°C bajo atmosfera de argon.

35 La mezcla de reaccion se agito durante 1 hora o hasta que se consumio toda la materia prima, despues, se amortiguo anadiendo agua lentamente, seguido de la adicion de HCl 1 N (5 ml), agua (10 ml) y EtOAc (20 ml) a la mezcla de reaccion. La mezcla de reaccion se concentro y se paso a traves de una columna de gel de sllice usando acetato de etilo para obtener el compuesto del tltulo como un solido blanquecino.

40 Etapa C: Preparacion de metanosulfonato de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxibencilo:

[0143] A una solucion de (3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxifenil)metanol (etapa B; 9,5 g; 32,7 mmoles) y trietilamina (5,80 g; 57,4 mmoles) en CH2O seco (100 ml) se le anadio cloruro de metanosulfonilo (3,5 ml; 45 mmoles) gota a gota a 0°C bajo atmosfera de argon. La mezcla de reaccion se calento a temperatura ambiente

45 durante 6 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, se neutralizo con Na2CO3 al 10% frlo y se extrajo con CH2O2. La capa organica se concentro y purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (hex:cloruro de metileno 2:1) para obtener el compuesto del tltulo como un aceite de color amarillo claro.

Etapa D: Preparacion de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxifenil)acetonitrilo:

50

[0144] La solucion de metanosulfonato de 3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxibencilo (etapa C; 8,8 g; 30,26 mmoles) y NaCN (1,60 g; 32,6 mmoles) en DMF seca (40 ml) se calento a 85°C durante 18 horas, a continuacion, se

enfrio y diluyo con EtOAc (50 ml). La capa organica se lavo con agua (30 ml), se concentro y se paso a traves de una columna de gel de sllice corta usando cloruro de metileno para obtener el compuesto del tltulo como un solido de color amarillo.

5 Etapa E: Preparacion de 5-(3-(2,6-dimetilbencil)-1H-tetrazol

[0145] Una mezcla de 2-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxifenil)acetonitrilo (etapa D; 3,2 g; 12,7 mmoles), azida sodica (0,86 g; 13,2 mmoles) y cloruro de amonio (0,696 g; 13,0 mmoles) en DMF seca (10 ml) se calento bajo atmosfera de argon a 90 °C durante 16 horas o hasta que se consumio toda la materia prima, la mezcla de reaccion

10 se enfrio, se concentro a presion reducida y se purifico mediante cromatografla ultrarrapida en una columna de gel de sllice (cloroformo:metanol 9:1) para obtener un producto semisolido. El semisolido se agito con acetato de etilo:hexano 1:2 (1,5 ml) durante 10 minutos y se filtro para obtener el producto como un solido de color blanco.

[0146] RMN 1H (400 MHz, (CDa)2SO): 2,33 (s, 6H): 3,5 (s, 3H); 4,21 (s, 2H); 5,04 (s, 2H); 6,83-6,85 (dd, 1H); 15 7,03-7,09 (m, 3H); 7,15-7,23 (m, 2H).

EJEMPLO 9: Ensayo de inhibicion de URAT1

[0147] URAT1 (transportador de acido urico 1) se expresa en la membrana apical de los tubulos renales. 20 Media en la recaptacion de acido urico desde la orina a la sangre. La inhibicion de URAT1 induce un aumento de la

excrecion de acido urico en la orina y es, por tanto, un posible modo de accion de farmacos que reducen las concentraciones sericas de acido urico. Probenecid y benzbromarona, por ejemplo, se han usado a nivel cllnico para el tratamiento de la gota y la hiperuricemia y ambos actuan sobre URAT1 reduciendo la recaptacion de acido urico. No obstante, la benzbromarona se retiro del mercado debido a su hepatotoxicidad a traves de mecanismos 25 independientes de URAT1, y el probenecid actua sobre numerosas protelnas transportadoras, lo que tiene como resultado interacciones con diversos farmacos.

[0148] Un ensayo de URAT1 in vitro es util para identificar los compuestos con posible actividad en la reduccion del acido urico en suero. Un ensayo adecuado supone la transfeccion de celulas (p. ej., celulas renales

30 embrionarias humanas; «HEK») con un vector que codifica el URAT1 humano, seguido de la determinacion de la capacidad de las celulas transfectadas para captar acido urico marcado radiactivamente. La actividad de los compuestos como inhibidores de URAT1 se evalua mediante su capacidad para bloquear la captacion de acido urico por las celulas transfectadas.

35 Compuestos de ensayo y compuestos qulmicos:

[0149] Benzbromarona (Sigma, N.° de cat. B5774). Probenecid (Sigma. N.° de cat. P8761). DMSO (Sigma, N.° de cat. D-2650)- [8-14C] Urato (50-60 mCi/mmoles: American Radio Chemicals, N.° de cat. ARC0513).

40 Subclonaje de hURAT1 en el vector de expresion:

[0150] El vector plasmldico pCMV6-XL5 que contiene el ADNc de hURAT1 (N.° de cat. SC 125624) y el vector de expresion pCMV6-Neo (N.° de cat. pCMVNEO) se obtuvieron de OriGene Technologies, Inc. El ADNc de hURATI de longitud completa se obtuvo a partir del vector pCMV6-XL5 y se subclono en el vector de expresion pCMV6-Neo

45 para obtener el plasmido de expresion de hURAT1 pCMV6-hURAT1. Las secuencias se verificaron mediante secuenciacion de ADN automatica.

Cultivo celular, transfeccion de los plasmidos de expresion de URAT1 y establecimiento de celulas HEK que expresan hURAT1 de forma estable:

50

[0151] Las celulas renales embrionarias humanas 293 (HEK) (ATTCC, N.° de cat. CRL-1573) se cultivaron en medio EMEM suplementado con SBF al 10% y L-glutamina 2 mM, y se incubaron a 37°C y CO2 al 5%. Para los experimentos de transfeccion, las celulas se dispusieron en placas de 60 mm en 1 ml de medio por placa. Despues de 18-24 horas de incubacion, las celulas se transfectaron con el plasmido pCMV6-hURAT1 o el vector de expresion

55 pCMV6-Neo, usando el agente de transfeccion lipofectina siguiendo las instrucciones del fabricante (Invitrogen, N.° de cat. 18292). Tras las transfeccion se crecieron en medio EMEM durante 72 horas y, a continuacion, anadiendo geneticina 1 mg/ml (GIBCO, N.° cat. 10131) se seleccionaron transfectantes estables que expresaban hURAT1 (denominadas a partir de ahora como celulas hURAT1-HEK) o celulas que tienen solo el vector de expresion pCMV6-Neo (denominadas a partir de ahora celulas mock-HEK [simuladas]) se verificaron usando procedimientos

de reaccion en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR).

Ensayo de captacion de [8-14C] Urato:

5 [0152] Las celulas hURATI-HEK y las celulas mock-HEK se dispusieron en placas para cultivo celular de 24 pocillos recubiertas con poli-D-lisina (Becton Dickinson, N.° de cat. 354414) a una concentracion de 3x105 en medio EMEM y se incubaron durante la noche. Las soluciones de reaccion que contiene [8-14C] urato (55 mCi/mmoles) a una concentracion final de 50 pM se preparamos con o sin compuestos de ensayo en solucion salina equilibrada de Hanks (HBSS) que contiene: gluconato sodico 125 mM, gluconato potasico 4,8 mM, calcio 1,3 mM, glucosa 5,6 mM, 10 sulfato de magnesio 1,2 mM, KH2PO4 1,2 mM y HEPES 25 mM (pH 7,4). Antes de iniciar el ensayo de captacion, se elimino el medio de cultivo y las celulas se incubaron durante 5 min en 0,6 ml de HBSS. Tras eliminar el HBSS, se anadieron las soluciones de reaccion preparadas a cada pocillo y se incubaron durante 5 min a temperatura ambiente. A continuacion se elimino la solucion de reaccion, las celulas se lavaron dos veces con 0,6 ml de HBSS frlo y se lisaron con 0,2 ml de NaOH 0,1 M durante 20 min. Los lisados celulares se transfirieron a los viales de 15 centelleo que contenlan 1 ml de llquido de centelleo (Opti Phase Super MIX. PerkinElmer, N.° de cat.: 1200-439) y la radioactividad se conto en el contador Microbeta (1450, Wallac Jet, PerkinElmer). Los compuestos de ensayo se disolvieron en DMSO y se anadio la misma concentracion de DMSO a los pocillos de las celulas mock-HEK y de las celulas hURAT1-HEK que no contenlan compuestos de ensayo. Para cada compuesto de ensayo, el ensayo de captacion se realizo 2 veces y por triplicado. La captacion de urato de las celulas para cada condicion de ensayo se 20 presento como el porcentaje medio de inhibicion en comparacion con el control DMSO. Los valores de radioactividad obtenidos para los pocillos que contenlan DMSO se consideraron como el 100% de captacion de las celulas. Los datos de concentracion - porcentaje de inhibicion observados se ajustaron a un modelo de concentracion-efecto sigmoidal, donde:

25 % de inhibicion = (100 * Conc. A Pendiente)/(CI50 A Pendiente + Conc. A Pendiente)

30

35

[0153] La CI50 y la pendiente estimadas con sus llmites de confianza del 95% fueron determinadas mediante un analisis de regresion de mlnimos cuadrados no lineal usando Data Analysis Toolbox' (MDL Information Systems, San Leandro, CA, EE. UU.).

[0154] Para la evaluacion de la actividad de los compuestos como inhibidores de URAT1, el porcentaje de inhibicion de la captacion de acido urico se evaluo normalmente a una concentracion de farmaco de 10 micromolar (tabla 1). Se probaron concentraciones de farmaco adicionales de algunos compuestos para determinar los valores de CI50 (tabla 2). En este ejemplo, los compuestos no se probaron necesariamente de forma simultanea.

Tabla 1: Efectos inhibitorios de los compuestos de ensayo a la concentracion de 10 pM sobre la captacion de 14C

urato en celulas hURAT1-HEK.

Compuesto de ensayo % de inhibicion % de DE D.T.

__________Compuesto de ensayo____________inhibicion___________________________________________

EB: 90,0 0,29

EC: 95,2 0,67

ED: 96 0,7

EF: 92 0,6

EG: 95,57 0,39

BD: 56,57 2,64

EH: 80,00 1,29

EI: 44,00 1,53

: Tabla 2:

Compuesto: Valor de CI50 (pM)

EB: 0,93

EC: 0,24

ED: 0,25

EF: 0,74

EG: 0,13

Benzbromarona: 0,75

Probenecid: 174

EJEMPLO 10: Estudio farmacocinetico de dosis unica oral en raton con el compuesto EB.

[0155] Determinacion del perfil plasmatico del compuesto EB tras una administration oral unica mediante 5 sonda a ratones machos:

[0156] Los compuestos de ensayo se resuspendieron en HPMC al 1% usando un homogeneizador de tejidos para minimizar las partlculas y maximizar la uniformidad de la suspension, y se conservaron a 4 °C. Las formulaciones se mezclaron bien justo antes de su administracion. Se administro una dosis oral unica mediante

10 sonda de 100 mg/kg del compuesto EB o del vehlculo (HPMC al 1%) a ratones machos. Tras la administracion los ratones se colocaron en colectores de orina durante 5 horas y se recogio la production de orina total durante las 5 horas. Las muestras se congelaron a -80 °C hasta su analisis usando CL/EM-Em.

[0157] A los puntos temporales de 0, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas despues de la dosis, se extrajeron muestras 15 de sangre (0,4 ml) del seno orbital en tubos con EDTA K3. Las muestras de sangre se centrifugaron antes de los

30 minutos de su extraction con refrigeration (2-8 °C) durante 7 minutos a 6000 rpm. Tras la centrifugation, el plasma se transfirio a un unico tubo por animal y punto temporal e inmediatamente se congelo a -80 °C hasta su analisis usando CL/EM-EM.

20 [0158] Los datos se sometieron a analisis farmacocinetico usando el programa WinNonlin Standard (v2.1, Pharsight Corporation) y EXCEL de Microsoft.

Protocolo:

25 A. Plasma

[0159]

1. Los ratones recibieron una unica dosis oral mediante sonda del compuesto EB, 100 mg/kg, y se recogio el plasma 30 en puntos temporales determinados.

2. El plasma se conservo a -80 °C hasta el dla del analisis.

3. Las muestras se descongelaron en un bano a 37 °C durante 5 min y se agitaron a velocidad maxima durante 10 s. 35

4. El plasma de raton, 0,1 ml, se mezclo con 0,2 ml de acetonitrilo, se agito 1 min, se centrifugo a 400 rpm, 17000 g, a 4 °C durante 25 min.

5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometres 40 (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 13 microlitros y se resolvieron en una columna en fase inversa Luna

3 micrometres, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° Serie: 259151-7) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 0,25 ml/min, 100 bares, temperatura de columna 37 °C, procedimiento 406975M1, Secuencia 1029-08A, Agilent 1100 CL-EM.

45

[0160] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y los espectrogramas de ionization negativa y positiva.

B. Curva de calibration 50

[0161]

Etapa 1. El plasma de los animales «vehlculo» (combinado), 0,095 ml, se mezclo con 0,005 ml de solution madre 20x del compuesto EB en metanol hasta obtener concentraciones de 500 microM, 250 microM, 125 microM, etc., del 55 compuesto Eb en plasma. Por ejemplo: 95 microlitros de plasma + 5 microlitros de compuesto EB 10 mM en metanol = 0,1 ml de plasma con compuesto Eb 500 microM.

Etapa 2. Las muestras de la etapa 1 se agitaron durante 10 s a velocidad maxima.

Etapa 3. Se anadieron 0,2 ml de acetonitrilo a todas las muestras de la etapa 2 y todos los viales se agitaron a maxima velocidad durante 1 min.

Etapa 4. Todas las muestras de la etapa 3 se centrifugaron a 14000 rpm, 17000 g, a 4 °C durante 25 min.

5

Etapa 5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE, 4 mm y 0,45 micrometros (Phenomenex, N.° AF0-3102-52). Se inyectaron 13 microlitros y se separaron en una columna en fase inversa Luna 3 micrometros, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 2591517) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 10 0,25 ml/min, 100 bares, temperatura de la columna 37 °C, procedimiento 406975M1, Agilent 1100 CL-EM. Todas las muestras se desarrollaron por duplicado, absorbancias 210 nm y 230 nm, registros de espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

Condiciones de HPLC:

15

[0162] ___________________________________________________________

Tabla 3. Gradiente de HPLC

Tiempo: Solvente C Solvente D

Min: % %

0: 60 40

2: 60 40

5,2: 31 69

58: 31 69

60
60: 40

75: 60 40

Solvente C: Solvente D:: 0,1% de acido formico en agua 0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol

Resultados:

20

[0163] El compuesto EB se detecto facilmente en el plasma de raton. Los tiempos de retencion y la masa se confirmaron en modos de ionizacion positivos y negativos. AGILENT CL-EM Secuencia 1029-08A.

«M-» = 279,2 100%,

25

«M+» = 281,2 100%.

Peso segun la formula = 280. Tiempo de retencion medio = 26,5 min.

Tabla 4. Concentracion del compuesto EB en el plasma de animales individuales

N.° de muestra de plasma de raton: Tiempo de sangrado (h) Concentracion del compuesto EB (|jg/ml)

1: 0 0

2: 0 0

3: 6 0

6: 0,5 206,5

7: 0,5 207,5

8: 0,5 134,2

9: 1 210

10: 1 139,7

11: 1 157,6

12: 2 139,9

13: 2 187,6

14: 2 82,4

15: 4 74,9

16: 4 92,1

17: 4 39,6

18: 6 58,7

19: 6 79,9

20: 6 48

21: 8 18,2

22: 8 10,7

23: 8 0

24
24: 0

25: 24 0

26: 24 0

5 _____Tabla 5. Concentracion del compuesto EB en el plasma, media. (Vease tambien la figura 3).

Tiempo (h): Media (jg/ml)

0
0

0,5: 183

1: 169

2: 137

4: 69

6: 62

8: 10

24: 3

AUC0-24: 796 jg/ml Cmax: 210 jg/ml

[0164] Componentes lineales en la representacion semilogarltmica: t1/2 (1-4h): 2,27

10

t1/2 (6-8h): 0,74 t1/2 (8-24h): 9,39

15 EJEMPLO 11: Estudio farmacocinetico piloto de dosis unica oral en rata con el compuesto EB.

[0165] Determinacion del perfil plasmatico del compuesto EB tras una administracion mediante sonda oral simple a ratas macho.

[0166] El compuesto de ensayo se resuspenden en HPMC al 1% usando un homogeneizador de tejidos para minimizar las particulas y maximizar la uniformidad de la suspension, y se conservaron a 4 °C. Las formulaciones se mezclaron bien justo antes de su administracion. Se administro una dosis oral unica mediante sonda de 100 mg/kg

5 de compuesto de ensayo o de vehiculo (HPMC al 1%) a ratas macho Sprague-Dawley. En los puntos temporales de las 0, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas despues de la dosis, se extrajeron muestras de sangre (0,4 ml) del seno orbital en tubos con EDTA K3. Las muestras de sangre se centrifugaron antes de los 30 minutos de su extraction con refrigeration (2-8 °C) durante 7 minutos a 6000 rpm. Tras la centrifugation, el plasma se transfirio a un unico tubo por animal y punto temporal e inmediatamente se congelo a -80 °C hasta su analisis usando CL/EM-EM. Los datos 10 seriados de tiempo de concentration en plasma se sometieron a analisis farmacocinetico usando el programa WinNonlin Standard (v2.1. Pharsight Corporation) y EXCEL de Microsoft.

Protocolo:

15 A. Plasma

[0167]

1. Las ratas recibieron una unica dosis oral mediante sonda de compuesto EB, 100 mg/kg, y se recogio el plasma en 20 puntos temporales determinados.

2. El plasma se conservo a -80 °C hasta el dia del analisis.

3. Las muestras se descongelaron en un bano a 37 °C durante 5 min y se agitaron a velocidad maxima durante 10 s. 25

4. El plasma de rata, 0,1 ml, se mezclo con 0,2 ml de acetonitrilo, se agito 1 min y se centrifugo a 14000 rpm, 17000 g a 4 °C durante 23 min.

5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometres 30 (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 13 microlitros y se resolvieron en una columna en fase inversa Luna

3 micrometres, 100A de poro, C8 (2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 259151-7) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 0,25 ml/min, 100 bares, temperatura de la columna 37 °C, procedimiento 406975M1, secuencia AGILENT 1015-08A. Agilent CL/EM 1100.

35

[0168] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y 230 nm y los espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

B. Curva de calibration 40

[0169]

Etapa 1. El plasma de los animales «vehiculo» (combinado), 0,19 ml, se mezclo con 0,01 ml de solution madre 20x de PN2107 en metanol hasta obtener concentraciones de 500 microM, 250 microM, 125 microM, etc., del compuesto 45 EB en plasma.

Por ejemplo: 190 microlitros de plasma + 10 microlitros del compuesto EB 10 mM en metanol = 0,2 ml de plasma con compuesto EB 500 microM.

50 Etapa 2. Las muestras de la etapa 1 se agitaron durante 10 s a velocidad maxima.

Etapa 3. Se anadieron 0,4 ml de acetonitrilo a todas las muestras de la etapa 2 y todos los viales se agitaron a maxima velocidad durante 1 min.

55 Etapa 4. Todas las muestras de la etapa 3 se centrifugaron a 14 000 rpm, 17 000 g, a 4 °C, durante 25 min.

Etapa 5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometres (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 13 microlitros y se separaron en una columna en fase inversa Luna 3 micrometres, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 259151-

7) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 0,25 ml/min, 100 bares, temperatura de la columna 37 °C.

[0170] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y 230 nm 5 y los espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

Tabla 6. Condiciones de HPLC

Gradiente de HPLC

tiempo: solvente C solvente D

min: % %

0: 60 40

2: 60 40

52: 31 69

58: 31 69

60
60: 40

75: 60 40

Solvente C: 0,1% de acido formico en agua Solvente D: 0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol

Resultados:

10

[0171]

1. La curva de calibration se realizo con un R2 ajustado a linealidad = 0,9994 (figura 4).

15 2. El compuesto EB se detectaba facilmente en el plasma de ratas. Los tiempos de retention y la masa se confirmaron en modos de ionizacion positivos y negativos.

«M-» = 279,2 100%.

20 «M+» = 281,2 100%.

Peso segun la formula = 280. Tiempo de retencion medio = 26,5 min.

[0172] En la Tabla 7 se recogen los datos sin procesar y los calculos.

25

En la Tabla 8 se recogen las concentraciones de compuestos en el plasma.

Tabla 7.

N.° de animal: Tiempo de sangrado Compuesto EB

Area del pico a 210 nm: Concentr. en plasma, microM

experimento 1: experimento 2 Media

rata 1 A: 15 min 5588 5530 5559 159

rata 1 B: 2 h 7110 7168 7139 206

rata 1 C: 8 h 7040 6968 7004 202

rata 2 A: 15 min 6446 6363 6404,5 184

rata 2 B: 2 h 2699 2710 2704,5 75

rata 2 C: 8 h 2581 2563 2572 72

rata 3 A: 30 min 1382 1413 1397,5 37

rata 3 B: 4 h 923 960 941,5 24

rata 3 C: 24 h 153 103 128 0

rata 4 A: 30 min 4433 4328 4380,5 125

rata 4 B: 4 h 3944 3980 3962 112

rata 4 C: 24 h 715 723 719 17

rata 5 A: 1 h 13094 13441 13267,5 386

rata 5 B: 6 h 1028 1022 1025 26

rata 6 A: 1 h 3636 3633 3634,5 103

rata 6 B: 6 h 3243 3298 3270,5 92

5

Tabla 8.

Rata, macho, Sprague-Dowley, dosis oral unica con sonda, compuesto EB 100 mg/kg


: Compuesto EB, peso segun formula 280

Animal N.°: Tiempo de extraccion de sangre Concentration en plasma, microM

rata 1: 15 min 159

rata 1: 2 h 206

rata 1: 8 h 202

rata 2: 15 min 184

rata 2: 2 h 75

rata 2: 8 h 72

rata 3: 30 min 37

rata 3: 4 h 24

rata 3: 24 h 0

rata 4: 30 min 125

rata 4: 4 h 112

rata 4: 24 17

rata 5: 1 h 386

rata 5: 6 h 26

rata 6: 1 h 103

rata 9: 6 h 92

Tabla 9. Concentraciones del compuesto EB, medias. (Vease tambien la figura 5).

Tiempo: Compuesto EB jM Compuesto EB jg/ml

0
0
0

0,25: 171,5 48,02

0,5: 81,0 22,68

1: 244,5 68,46

2: 140,5 39,34

4: 68,0 19,04

6: 59,0 16,52

8: 137,0 38,36

24: 8,5 2,38

T1X del compuesto EB = 3,99 h AUC 0-24 del compuesto EB = 566 |jg/ml * h Cmax del compuesto EB = 108,08 jg/ml.

5 EJEMPLO 12: Estudio farmacocinetico piloto de dosis unica oral en rata con el compuesto EC.

[0173] Determinacion del perfil plasmatico del compuesto EC tras una administracion mediante sonda oral simple a ratas macho.

10 [0174] El compuesto de ensayo se resuspende en HPMC al 1% usando un homogeneizador de tejidos para minimizar las partlculas y maximizar la uniformidad de la suspension, y se conservaron a 4°C. Las formulaciones se mezclaron bien justo antes de su administracion. Se administro una dosis oral unica mediante sonda de 100 mg/kg del compuesto de ensayo o del vehlculo (HPMC al 1%) a ratas macho Sprague-Dawley. En los puntos temporales de 0,1, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas despues de dosis, se extrajeron muestras de sangre (0,4 ml) del seno orbital en tubos 15 con EDTA K3. Las muestras de sangre se centrifugaron antes de 36 minutos desde su extraccion con refrigeracion (2-8 °C) durante 7 minutos a 6000 rpm. Tras la centrifugacion, el plasma se transfirio a un unico tubo por animal y punto temporal y se congelo inmediatamente a -80 °C hasta su analisis usando CL/EM-EM. Los datos seriados de tiempo de concentracion en plasma se sometieron a analisis farmacocineticos usando el programa WinNonlin Standard (v2.1, Pharsight Corporation) and Microsoft EXCEL.

20

Protocolo:

A. Plasma 25 [0175]

1. Las ratas recibieron una unica dosis oral mediante sonda de compuesto EC, 100 mg/kg y se recogieron muestras de plasma a determinados puntos temporales.

30 2. El plasma se conservo a -80 °C hasta el dla del analisis.

3. Las muestras se descongelaron en un bano a 37 °C durante 5 min y se agitaron a velocidad maxima durante 10 s.

4. El plasma de rata, 0,1 ml, se mezclo con 0,2 ml de acetonitrilo, se agito 1 min, se centrifugo a 14 000 rpm, 17 000 35 g a 4 °C durante 25 min.

5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometres (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 15 microlitros y se resolvieron en una columna en fase inversa Luna 3 micrometres, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 259151-7) en

40 gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 0,25 ml/min, 107 bares, temperatura de la columna 37 °C, procedimiento 406975MI, secuencia AGILENT 0226-09A, Agilent 1100 CL-EM.

[0176] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y 230 nm

y los espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

B. Curva de calibracion 5 [0177]

Etapa 1. El plasma de los animales "vehlculo" (combinado), 0,19 ml, se mezclo con 0,01 ml de solucion madre 20x del compuesto EC en metanol hasta obtener concentraciones de 500 microM, 250 microM, 125 microM, concentraciones del compuesto EC en plasma.

10

Por ejemplo: 190 microlitros de plasma + 10 microlitros de compuesto EC 10 mM en metanol = 0,2 ml de plasma con compuesto EC 500 microM.

15

Etapa 4. Todas las muestras de la etapa 3 se centrifugaron a 14 000 rpm, 17 000g, a 4 °C durante 25 min.

20

Etapa 5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometros (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 15 microlitros y se resolvieron en una columna en fase inversa Luna 3 micrometros, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 2591517) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 25 0,25 ml/min, 107 bares, temperatura de la columna 37 °C.

[0178] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y 230 nm y los espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

30 Tabla 10. Condiciones de HPLC

Gradiente de HPLC

tiempo (min): solvente C % solvente D %

0: 60 40

2: 60 40

52: 31 69

58: 31 69

60
60: 40

75: 60 40

Resultados:

35 [0179]

1 La curva de calibracion se realizo con un R2 ajustada a linealidad = 0,9984 (vease la figura 6).

2. El compuesto EC se detecto facilmente en el plasma. Los tiempos de retencion y la masa se confirmaron en 40 modos de ionizacion positivos y negativos. (vease la figura 7).

«M-» = 293,2 100%, 527,265%

«M+» =295,2 100%, Peso segun la formula = 294. Tiempo de retencion medio = 23 min.

Tabla 11.: AGILENT CL-EM Secuencia 0226-09A

N.° de plasma de rata: Tiempo de sangrado (h) Compuesto ED PF 294

Area del pico a 210 nm: Concentracion en plasma, microM

experimento 1: experimento 2 Media

7-a: 0,25 2012 1993 2002,5 67

7-b: 2 979 963 971 29

7-c: 8 3059 3061 3060 107

8-a: 0,25 3263 3252 3257,5 114

8-b: 2 19470 10416 10443 384

8-c: 8 7201 7180 7190,5 262

9-a: 0,5 1401 1405 1403 45

9-b: 4 1156 1134 1145 35

9-c: 24 0 0 0 0

10-a: 0,5 864 862 863 25

10-b: 4 495 509 502 11

10-c: 24 147 170 158,5 0

11-a: 1 661 650 655,5 17

11-b: 6 2479 2471 2475 85

12-a: 1 6137 6119 6128 222

12-b: 6 2119 2167 2143 73

12-c: 6 1846 1865 1855,5 62

Tabla 12. Concentracion del compuesto EC en el plasma de rata.

Tiempo de „er er , Microgramos de Microgramos de . ", ... 1er sangrado 2° sangrado 3er sangrado extraccion (h) media media/ml: C max

0,25: 67 114 90,5 27

0,5: 45 25 35 10

1: 17 222 119,5 35

2: 29 384 206,5 61

4: 35 11 23 7

6: 85 73 62 73,33333 22

8: 107 262 184,5 54

24: 0 0 0 0

5

Tabla 13.

Concentracion del compuesto EC en el plasma de rata.

Tiempo de extraccion (h): Microgramos de media/ml

0
0

0,25: 27

0,5: 10

1: 35

2: 61

4: 7

6: 22

8: 54

24: 0

Cmax del compuesto EC =61 (pg/ml) AUC del compuesto EC 0-24 =672,3 (pg*h/ml)

EJEMPLO 13: Estudio farmacocinetico piloto de dosis unica oral en rata con el compuesto EG.

5

[0180] Determinacion del perfil plasmatico del compuesto EG tras una administracion oral unica mediante sonda a ratas macho.

[0181] El compuesto de ensayo se resuspendio en HPMC al 1% usando un homogeneizador de tejidos para 10 minimizar las partlculas y maximizar la uniformidad de la suspension, y se conservo a 4°C. Las formulaciones se

mezclaron bien justo antes de su administracion. Se administro una dosis oral unica mediante sonda de 100 mg/kg del compuesto de ensayo o del vehlculo (HPMC al 1%) a ratas macho Sprague-Dawley. En los puntos temporales de las 0, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas despues de la dosis, se extrajeron muestras de sangre (0,4 ml) del seno orbital en tubos con EDTA K3. Las muestras de sangre se centrifugaron antes de los 30 minutos de su extraction con 15 refrigeration (2-8°C) durante 7 minutos a 6000 rpm. Tras la centrifugation, el plasma se transfirio a un unico tubo por animal y punto temporal e inmediatamente se congelo a -80°C hasta su analisis usando CL/EM-EM. Los datos seriados de tiempo de concentration en plasma se sometieron a analisis farmacocinetico usando los programas WinNonlin Standard (v2.1, Pharsight Corporation) y EXCEL de Microsoft.

20 Protocolo:

A. Plasma

[0182]

25

1. Las ratas recibieron una dosis oral unica mediante sonda del compuesto EG, 100 mg/kg y se recogio el plasma en puntos temporales determinados.

2. El plasma se conservo a -80 °C hasta el dla del analisis.

30

3. Las muestras se descongelaron en un bano a 37°C durante 5 min y se agitaron a velocidad maxima durante 10 s.

4. El plasma de rata, 0,1 ml, se mezclo con 0,2 ml de acetonitrilo, se agito 1 min y se centrifugo a 14 000 rpm, 17 000 g a 4 °C durante 25 min.

35

5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometres (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 15 microlitros y se resolvieron en una columna en fase inversa Luna 3 micrometres, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 259151-7) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 0,25

40 ml/min, 107 bares, temperatura de la columna 37 °C, procedimiento 406975M1, Secuencia 1029-08A, Agilent 1100 CL-EM.

[0183] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y 230 nm y los espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

B. Curva de calibracion 5

[0184]

Etapa 1: El plasma de los animales «vehlculo» (combinado), 0,19 ml, se mezclo con 0,01 ml de solucion madre 20x del compuesto EG en metanol hasta obtener concentraciones de 500 microM, 250 microM, 125 microM, etc. del 10 compuesto EG en plasma.

Por ejemplo: 190 microlitros de plasma + 10 microlitros del compuesto EG 10 mM en metanol = 0,2 ml de plasma con compuesto EG 500 microM.

15 Etapa 2. Las muestras de la etapa 1 se agitaron durante 10 s a velocidad maxima.

20 Etapa 4. Todas las muestras de la etapa 3 se centrifugaron a 14 000 rpm, 17 000g, a 4 °C, durante 25 min.

Etapa 5. Los sobrenadantes se filtraron a traves de un filtro de jeringa de membrana de PTFE de 4 mm y 0,45 micrometros (Phenomenex N.° AF0-3102-52), se inyectaron 15 microlitros y se resolvieron en una columna en fase inversa Luna 3 micrometros, 100A de poro, C8(2) de 150 x 3 mm (Phenomenex N.° 00F-4248-YO, N.° serie: 25915125 7) en gradiente lineal de 50 min del 40 al 69% de (0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol) a 0,25 ml/min, 107 bares, temperatura de la columna 37 °C.

[0185] Todas las muestras se desarrollaron por duplicado. Se registraron las absorbancias a 210 nm y 230 nm y los espectrogramas de ionizacion negativa y positiva.

30

Tabla 14. Condiciones de HPLC

Gradiente de HPLC

tiempo (min): solvente C % solvente D %

0: 60 40

2: 60 40

52: 31 69

58: 31 69

60
60: 40

75: 60 40

Solvente: 0,1% de acido formico en agua Solvente D: 0,1% de acido formico, 89,9% de acetonitrilo, 10% de metanol

Resultados:

35

[0186]

1 La curva de calibracion se realizo con un R2 ajustada a linealidad = 0,9997 (vease la figura 8).

40 2. El compuesto EG se detecto facilmente en plasma. Los tiempos de retencion y la masa se confirmaron en modos de ionizacion positivos y negativos (vease la figura 9).

«M-» = 307,2 100%.

45 «M+» = 309,2 100°%, Peso segun formula = 308, Tiempo de retencion medio = 30 min.

Datos sin procesar y calculos.

Tabla 15. Concentracion del compuesto EG en el plasma de rata.

Compuesto EG: Compuesto EG, peso segun formula 308

N.° de plasma de rata: Tiempo de sangrado (h) Area del pico a 210 nm Concentr. en plasma, microM

experimento 1: experimento 2 Media

13-a: 0,25 1484 1410 1447 27

13-b: 2 2799 2739 2759 50

13-c: 8 172 191 181,5 5

14-a: 0,25 1023 992 1007,5 19

14-b: 2 1390 1362 1376 25

14-c: 8 989 1029 1009 19

15-a: 0,5 1533 1596 1564,5 29

15-b: 4 702 764 733 14

15-c: 24 0 0 0 2

16-a: 0,5 966 979 972,5 18

16-b: 4 1234 1206 1220 23

16-c: 24 0 0 0 0

17-a: 1 5424 5478 5451 101

17-b: 6 520 472 496 10

18-a: 1 2364 2322 2343 42

18-b: 6 :887 937 912 17

Tabla 16. Concentracion del compuesto EG en el plasma de rata.

Tiempo de recogida (h): 1er sangrado 2° sangrado Media de microgramos Media de microgramos/ml

0,25: 27 19 23 7

0,5: 29 18 24 7

1: 101 42 72 22 C max

2: 25 50 38 12

4: 14 23 19 6

6: 10 17 14 4

8: 5 19 12 4

24: 2 0 1 0

5

Tabla 17.

Concentration del compuesto EG en el plasma de rata.

Tiempo de extraction (h): Media de microgramos/ml

0
0

0,25: 7

0,5: 7

1: 22

2: 12

4: 6

6: 4

8: 4

24: 0

Cmax del compuesto EG PF308 = 22 (pg/ml) AUC8-24 del compuesto EG PF308= 94,9 (pg*h/ml)

Claims

1.

5

imagen1

REIVINDICACIONES

Un compuesto representado por la formula XLVI

donde

x es 1 o 2;

10

y es 0, 1, 2 o 3,

R1 se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y 15

20

imagen2

A es 2,6-dimetilfenilo.

2. El compuesto de la reivindicacion 1, representado por la formula XLVII

donde

x es 1 o 2;

25

y es 0, 1, 2 o 3

uno de R2 y R3 es hidrogeno y el otro se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y 30 A es 2,6-dimetilfenilo.

3. El compuesto de la reivindicacion 1 o 2, donde x es I.

4. El compuesto de la reivindicacion 3, representado por la formula XLVIII

imagen3

donde

5

y es 0, 1 o 2;

uno de R2 y R3 es hidrogeno y el otro se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y

10

R1 es metilo y R3 es metilo.

5. El compuesto de la reivindicacion 4 donde R3 es hidrogeno; R2 se selecciona a partir del grupo compuesto por hidrogeno, metilo y metoxi:

15

preferiblemente donde el compuesto se selecciona entre el grupo compuesto por:

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenil)-1H-tetrazol;

20 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)bencil)-1 H-tetrazol;

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metoxibencil)-1H-tetrazol;

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)fenetil)-1 H-tetrazol y 25

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-4-metilbencil)-1H-tetrazol.

6. El compuesto de la reivindicacion 4 seleccionado entre el grupo compuesto por:

30 5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metilbencil)-1H-tetrazol y

5-(3-(2,6-dimetilbenciloxi)-2-metoxibencil)-1H-tetrazol.

7. Un compuesto representado por la formula XLVI para su uso en la reduccion de la concentracion de 35 acido urico en la sangre de un sujeto mamlfero o en el aumento de su excrecion de acido urico.

imagen4

donde

5 x es 1 o 2; y es 0, 1, 2 o 3;

R1 se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxilo, alcoxi con 10 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y

A es fenilo, sin sustituir o sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados entre el grupo compuesto por halo, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, perfluometilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono y perfluorometoxi.

15 8. El compuesto para el uso de la reivindicacion 7, en el que el compuesto esta representado por el

compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

9. Un compuesto para su uso segun cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8, en el que dicho compuesto esta en la forma de una composicion farmaceutica.

20

10. El compuesto para el uso de la reivindicacion 7 o la composicion farmaceutica para su uso segun la

reivindicacion 9, en el que el uso tiene como resultado el tratamiento o prevencion de una afeccion seleccionada

entre el grupo compuesto por gota, hiperuricemia, niveles elevados de acido urico que no alcanzan los niveles que habitualmente justifican un diagnostico de hiperuricemia, disfuncion renal, calculos renales, enfermedad

25 cardiovascular, riesgo de desarrollo de enfermedad cardiovascular, slndrome de lisis tumoral, deterioro cognitivo, hipertension arterial idiopatica de aparicion temprana e inflamacion inducida por Plasmodium falciparum.

11. El compuesto para el uso de la reivindicacion 7 o la composicion farmaceutica para su uso segun la reivindicacion 9, en el que el compuesto se administra en combination con uno o mas farmacos distintos reductores

30 de acido urico en una cantidad combinada eficaz para reducir la concentration de acido urico en la sangre del sujeto o aumentar su excretion de acido urico;

preferiblemente, en el que el otro farmaco reductor de acido urico se selecciona entre el grupo compuesto por un inhibidor de la xantina oxidasa, un agente uricosurico, un inhibidor del transportador de urato 1, una uricasa y una 35 estatina;

preferiblemente, en el que el otro farmaco reductor de acido urico se administra en una cantidad que es inferior a la dosis terapeutica habitual cuando se administra solo;

40 preferiblemente, en el que el compuesto y el uno o mas farmacos distintos reductores de acido urico se mezclan en forma de mezcla o

preferiblemente, en el que el compuesto y el uno o mas farmacos distintos reductores de acido urico no se mezclan en forma de mezcla.

45

12. Uso de un compuesto representado por la formula XLVI para la fabrication de un medicamento para

reducir la concentracion de acido urico en la sangre de un sujeto mamlfero o aumentar su excrecion de acido urico.

imagen5

5 donde x es 1 o 2; y es 0, 1, 2 o 3,

10

R1 se selecciona entre el grupo compuesto por hidrogeno, alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, hidroxilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono, fluoro, cloro, bromo y amino; y

A es fenilo, sin sustituir o sustituido por uno, dos o tres grupos seleccionados entre el grupo compuesto por halo, 15 alquilo con 1 o 2 atomos de carbono, perfluometilo, alcoxi con 1 o 2 atomos de carbono y perfluorometoxi.

13. El uso de la reivindicacion 12, en el que el compuesto esta representado por el compuesto segun

cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

20 14. El uso de la reivindicacion 12, en el que se selecciona una cantidad de modo que la administracion del

medicamento a un sujeto mamlfero tiene como resultado el tratamiento o prevencion de una afeccion seleccionada entre el grupo compuesto por gota, hiperuricemia, niveles elevados de acido urico que no alcanzan los niveles que habitualmente justifican un diagnostico de hiperuricemia, insuficiencia renal, calculos renales, enfermedad cardiovascular, riesgo de desarrollo de enfermedad cardiovascular, slndrome de lisis tumoral, deterioro cognitivo, 25 hipertension arterial idiopatica de aparicion temprana e inflamacion inducida por Plasmodium falciparum.

15. El uso de la reivindicacion 14, en el que el medicamento se formula para su administracion en combinacion con uno o mas farmacos distintos reductores de acido urico en una cantidad combinada eficaz para reducir la concentracion de acido urico en la sangre del sujeto o aumentar su excrecion de acido urico;

30

preferiblemente, en el que el otro farmaco reductor de acido urico se selecciona entre el grupo compuesto por un inhibidor de la xantina oxidasa, un agente uricosurico, un inhibidor del transportador de urato -1, una uricasa y una estatina; o

35 preferiblemente, en el que el otro farmaco reductor de acido urico se administra en una cantidad que es menor a la dosis terapeutica habitual cuando se administra solo; o

preferiblemente, en el que el medicamento comprende el compuesto y el uno o mas farmacos distintos reductores de acido urico se mezclan en forma de mezcla; o 40

16. El compuesto o composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11 o su uso 45 segun cualquiera de la reivindicaciones 12 a 15.

17. El compuesto o composicion farmaceutica segun cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11 o su uso segun cualquiera de la reivindicaciones 12 a 15 donde el sujeto es un humano.