JP5431457B2 - 尿酸を減少させるテトラゾール化合物 - Google Patents

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Description

尿酸値上昇が原因の疾患は、２つの主要な範疇、すなわち、尿酸結晶の沈殿が原因の障害と、可溶性尿酸の病理学的効果に関連する疾患とに分けられる。痛風性関節炎は、前者の古典的な例である。腎臓中の尿酸結晶の堆積も、腎機能不全の一般的原因である。可溶性尿酸値上昇は、心血管疾患及び腎疾患など、さまざまな障害を伴う。
痛風は、体内の１又は複数の関節の炎症として最も普通に現れ、その結果、軽度から重度の疼痛が生じる。こうした事象は、突発性及び／又は慢性である場合がある。時間の経過と共に、痛風は、軟骨及び骨の破壊、尿酸結晶堆積物の発達、腎臓痛及び腎機能不全並びに腎臓結石をもたらすことがある。痛風は、他の器官にも影響することがある。
痛風は、高尿酸血症、並びに、組織、関節、腎臓及び他の器官中での結果的な尿酸結晶の形成及び堆積が原因である。尿酸は、正常な細胞の代謝により、又、ある種の食品及び飲料により生じる。過剰な尿酸値は、余分な尿酸の生成、腎臓によるクリアランス障害（又は、過剰生成とクリアランス障害との組合せ）の結果、さらには、他の健康状態のために摂取されるある形態の薬物による結果である。（例としては、利尿薬、ピラジナミド、シクロスポリン、低用量アスピリン、ニコチン酸及びレボドパが挙げられる）。アルコール依存症、白血病、リンパ腫、肺癌、腫瘍溶解症候群、喫煙、乾癬、肥満、腎機能不全、うっ血性心不全、飢餓、貧血症、高血圧症、糖尿病、不動、レッシュ−ナイハン症候群、ダウン症候群、並びに、甲状腺及び副甲状腺の機能不全など多くの種類の健康状態が、高尿酸血症及び痛風の一因となることもある。
痛風は、一般に、進行性に悪化する症状に基づき４つの範疇に分けられる：
１）無症候性。血中尿酸値は上昇しているが、明白な症状はない。
２）急性通風性関節炎：多くの場合は単一の関節（普通は足の親指）において症状が突然生じ、次いで、他の関節が冒される。症状としては、疼痛、腫張、発赤及び発熱が挙げられる。
３）間欠期痛風：痛風発作間の無症候性の段階。
４）慢性結節性痛風：慢性の状態であり、頻繁な発作、関節の持続的で軽度の疼痛及び炎症、軟骨及び骨の破壊、尿酸結晶堆積物の発達、腎機能不全及び腎臓結石が含まれる場合がある。
痛風の急性症状を治療するために現在使用されている薬物としては、非ステロイド性抗炎症薬、コルヒチン及びコルチコステロイドが挙げられる。こうした薬物は全て、軽度から重度の副作用を生じる場合がある。インターロイキン１などの炎症性サイトカインに対する抗体及びアンタゴニストを含め、こうした急性症状用の他の治療薬が研究されている。
尿酸値を低下させることにより将来的な発作の発生又は重症度の低下を試みるには、他の種類の薬物が使用される。３つの主要なクラスの薬物は、キサンチンからの尿酸の生成を減少させるキサンチンオキシダーゼ阻害薬（例えばアロプリノール）；尿酸輸送体１（ＵＲＡＴ１，uric acid transporter 1）の阻害により腎尿細管中での分泌された尿酸の再取込みを阻害することにより尿酸の排出を高めることを意図した尿酸排泄剤（例えば、スルフィンピラゾン、プロベネシド、ベンズブロマロン及びロサルタン）（米国特許出願公開第２００７／００１０６７０号明細書、２００７年１月１１日公開（日本たばこ産業株式会社）も参照）、又は、尿酸再取込みの他の要素；及びウリカーゼ、例えば、PURICASE（Savient社製のペグ化した組換え哺乳動物ウリカーゼ）などのペグ化ウリカーゼである。こうした薬物は、顕著で望ましくない副作用をもたらすことも多い。例えば、アロプリノールは、これが原因で欧州において毎年少なくとも１００症例のスティーブンス・ジョンソン／中毒性表皮壊死症が発症し、およそ３０名が死亡していると報告されている（Halevy et al., Allopurinol is the most common cause of Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis in Europe and Israel. J Am Acad Dermatol. 58(1):25-32, 2008）。プロベニシド（Probenicid）及びベンズブロマロンは、ベンズブロマロンの症例における肝不全など、望ましくない副作用を理由に、いくつかの国の市場から排除されている。こうした薬物の摂取における患者の服薬遵守は、報告によれば非常に乏しく（A. A. Reidel et al. "Compliance with Allopurinol Therapy among Managed Care Enrollees with Gout: A Retrospective Analysis of Administrative Claims." Journal of Rheumatology 2004; 31:1575-1581）、おそらくそれは、副作用、及び／又は、利益のなさが理由であろう。
米国においては５００万名超の人々が痛風に罹患している（National Health and Nutrition Examination Survey 111, 1988-1994）。１９９９年の米国における高尿酸血症及び痛風の有病数は、１，０００名当たり４１名、英国においては１，０００名当たり１４名と報告された（T.R. Mikuls et al., "Gout Epidemiology: Results for the UK General Practice Research Database, 1990-1999." Annals of the Rheumatic Diseases 2005; 64:267-272）。その後の報告により、米国、英国及び他の国々における有病数は着実に上昇していることが示されている。（K. L. Wallace et al., "Increasing Prevalence of Gout and Hyperuricemia over 10 Years Among Older Adults in a Managed Care Population." Journal of Rheumatology 2004; 31: 1582-1587）。さらに最近のデータからは、現在では５００万名をはるかに超える米国人が、診断可能な痛風に罹患していることが示唆される（E. Krishnan et al., "Gout in Ambulatory Care Settings in the United States." Journal of Rheumatology 2008; 35(3): 498-501）。
高尿酸血症及び痛風は、臓器移植のレシピエントにおいてとりわけ重大な問題である（Stamp, L., et al, "Gout in solid organ transplantation: a challenging clinical problem", Drugs (2005) 65(18): 2593-2611）。尿酸は、腎移植を受けている患者において上昇していることが多く、シクロスポリンなど一般的な免疫抑制薬が原因で、とりわけ重度の高尿酸血症が生じる場合がある。アザチオプリンなどいくつかの免疫抑制剤との相互作用があること、又、組合せにより骨髄不全が生じることから、移植患者においてはアロプリノールは禁忌である。さらに、尿酸上昇は、移植片不全（graft failure）の一因となる場合がある（Armstrong, K.A. et al., "Does Uric Acid Have a Pathogenetic Role in Graft Dysfunction and Hypertension in Renal Transplant Patients?" Transplantation (2005) 80(11): 1565-1571）。したがって、移植レシピエントにおいて高尿酸血症を減少させる安全な薬剤については、とりわけ急を要する需要がある。
可溶性尿酸上昇に関連する疾患は、血管の問題を伴うことが多い：高血圧症（Sundstrom et al., Relations of serum uric acid to longitudinal blood pressure tracking and hypertension incidence. Hypertension. 45(1):28-33, 2005）、高血圧前症（Syamela, S. et al., Association between serum uric acid and prehypertension among US adults. J Hypertens. 25 (8) 1583-1589, (2007)、アテローム性硬化症（Ishizaka et al., Association between serum uric acid, metabolic syndrome, and carotid atherosclerosis in Japanese individuals. Arterioscler Thromb Vasc Biol. (5):1038-44, 2005）、末梢動脈疾患（Shankar, A. et al., Association between serum uric acid level and peripheral artery disease. Atherosclerosis doi 10: 1016, 2007）、血管炎症（Zoccali et al., Uric acid and endothelial dysfunction in essential hypertension. J Am Soc Nephrol. 17(5):1466-71, 2006）、心不全（Strasak, A.M. et al., Serum uric acid and risk of cardiovascular mortality: A prospective, long-term study of 83,683 Austrian men, Clin Chem. 54 (2) 273-284, 2008; Pascual-Figal, Hyperuricaemia and long-term outcome after hospital discharge in acute heart failure patients. Eur J Heart Fail. 2006 Oct 23; [Epub ahead of print]; Cengel, A., et al., "Serum uric Acid Levels as a Predictor of In-hospital Death in Patients Hospitalized for Decompensated Heart Failure." Acta Cardiol. (Oct. 2005) 60(5): 489-492）、心筋梗塞（Strasak, A.M. et al.; Bos et al., Uric acid is a risk factor for myocardial infarction and stroke: the Rotterdamstudy. Stroke. 2006 Jun; 37(6):1503-7）、腎機能不全（Cirillo et al., Uric Acid, the metabolic syndrome, and renal disease. J Am Soc Nephrol. 17(12 Suppl 3):S165-8, 2006; Z. Avram and E. Krishnan, Hyperuricemia - where nephrology meets rheumatology. Rheumatology (Oxford), 47(7): 960-964, 2008）、及び脳卒中（Bos et al., 2006）。尿酸は、内皮機能不全の直接の原因となる（Kanellis, et al., Uric acid as a mediator of endothelial dysfunction, inflammation, and vascular disease. Semin Nephrol. 25(1):39-42, 2005; Khosla et al, Hyperuricemia induces endothelial dysfunction. Kidney Int. 67(5):1739-42, 2005）。小児及び青年においては、早発性本態性高血圧症は血清尿酸上昇を伴い、アロプリノールを用いて尿酸を減少させると、こうした患者における血圧が低下する（Feig and Johnson, The role of uric acid in pediatric hypertension. J Ren Nutrition 17(1): 79-83, 2007; D.I. Feig et al., Effect of allopurinol on blood pressure of adolescents with newly diagnosed essential hypertension. JAMA 300(8): 924-932, 2008。さらに、Feig et al.は、これは新しい治療的アプローチであるが、尿酸を減少させるための既存の薬物の副作用から、その使用が制限又は妨げられることがあるとも述べている。高尿酸血症は、このような状態の全てにおける独立したリスク因子である。
可溶性尿酸上昇も、炎症応答を伴うか、又は炎症応答を直接誘導する。例えば、尿酸は、有機酸輸送体、特に尿酸輸送体ＵＲＡＴ１により血管の平滑筋細胞中に輸送された後、血管の平滑筋細胞を刺激してＣ反応性タンパク質ＭＣＰ−１及び他のサイトカインを産生させることにより、増殖、及び、アテローム性硬化症に関連する他の変化を刺激し（Price et al., Human vascular smooth muscle cells express a urate transporter. J Am Soc Nephrol. 17(7):1791-5, 2006; Kang et al., Uric acid causes vascular smooth muscle cell proliferation by entering cells via a functional urate transporter. Am J Nephrol. 2005 25(5):425-33 (2005); Yamamoto et al., Allopurinol reduces neointimal hyperplasia in the carotid artery ligation model in spontaneously hypertensive rats. Hypertens. Res. 29 (11) 915-921, 2006）、ヒト単核細胞を刺激してＩＬ−１β、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αを産生させ、マウスの体内に注入するとＴＮＦ−αの顕著な増加の原因となり、内皮細胞及び血小板を活性化させ、血小板の接着性を増加させる（Coutinho et al., "Associations of Serum Uric Acid with Markers of Inflammation, Metabolic Syndrome, and Subclinical Coronary Atherosclerosis", Amer. J. Hypertens. (2007) 20: 83-89; Levya, F., et al., "Uric Acid in Chronic Heart Failure: A Marker of Chronic Inflammation", Eur. Heart J. (1998) 19(12): 1814-1822．）。尿酸は、内皮の一酸化窒素の生体利用性を阻害し、レニン・アンギオテンシン系を活性化することも示されている。（T.S. Perlstein et al., Uric acid and the state of the intrarenal renin-angiotensin system in humans. Kidney International. 66:1465-1470, 2004）。Inokuchi et al.は、インターロイキン１８（ＩＬ−１８，Interleukin 18）及び他の炎症性物質は、痛風を伴う局所的な炎症を反映すること、並びに、尿酸結晶は、腎不全を発症させる役割を有すると思われるＩＬ−１８の活性化を加速させることを示した（T. Inokuchi et al., Plasma IL-18 and other inflammatory cytokines in patients with gouty arthritis and monosodium urate monohydrate crystal-induced secretion of IL-18． Cytokine. 33(1): 21-27, 206）。ＩＬ−１８及び他のサイトカインは、痛風自体には罹患しておらず尿酸値が上昇しているにすぎない人においても、顕著に上昇している（C. Ruggiero et al. Uric acid and inflammatory markers.(C. Ruggiero et al., Uric acid and inflammatory markers. European Heart Journal. 27: 1174-1181, 2006)。
高尿酸血症は、認知障害及び他の形態の中枢神経系機能不全とも関連がある。（Schretlen, D.J. et al., "Serum Uric Acid and Cognitive Function in Community-Dwelling Older Adults", Neuropsychology (Jan. 2007) 21(1): 136-140; Watanabe, S., et al., "Cerebral Oxidative Stress and Mitochondrial Dysfunction in Oxonate-Induced Hyperuricemic Mice", J. Health Science (2006) 52: 730-737）。
血清尿酸値上昇は、癌のリスク及び癌による死亡数の増加とも関連がある。（Strasak, AM et al. (2007) Serum uric acid and risk of cancer mortality in a large prospective male cohort. Cancer Causes Control 18 (9) 1021-1029; Strasak, AM et al. (2007) The role of serum uric acid as an antioxidant protecting against cancer: prospective study in more than 28,000 older Austrian women. Annals Oncol 18 (11) 1893-1897; Jee, SA et al. (2004) Serum uric acid and risk of death from cancer, cardiovascular disease or all causes in men Eur. J. Cardiovascular Prev. Rehab. 11 (3) 185-191）。
尿酸値上昇は、糖尿病前症、インスリン抵抗性、２型糖尿病の発症、及び糖尿病罹患者におけるさまざまな望ましくない状態（末梢動脈疾患、脳卒中、及び、死亡リスク増加など）の可能性の増加と関連がある（Ioachimescu, A.G. et al. (2007) Serum uric acid, mortality and glucose control in patients with Type 2 diabetes mellitus: a PreCIS database study Diabet. Med. 24 (12) 1369-1374; Perry, I.J. et al (1995) Prospective study of risk factors for development of non-insulin dependent diabetes in middle aged British men BMJ 310 (6979) 560-564; Chien, K-L et al. (2008) Plasma uric acid and the risk of Type 2 diabetes in a Chinese community Clin. Chem. 54 (2) 310-316; Sautin, Y. Y. et al. (2007) Adverse effects of the classic antioxidant uric acid in adipocytes: NADPH oxidase-mediated oxidative/nitrosative stress Am. J. Physiol. Cell Physiol.293: C584-C596; Tseng, C.H. (2004) Independent association of uric acid levels with peripheral artery disease in Taiwanese patients with Type 2 diabetes Diabet. Med. 21 (7) 724-729; Lehto, S. et al. (1998) Serum uric acid is a strong predictor of stroke in patients with non-insulin dependent diabetes mellitus Stroke 29: 635-639。
尿酸値上昇は、レッシュ−ナイハン症候群の決定的な特徴である。睡眠時無呼吸又は睡眠呼吸障害の罹患者も、尿酸が上昇している（Saito, H. et al., Tissue hypoxia in sleep apnea syndrome assessed by uric acid and adenosine. Chest 122: 1686-1694, 2002; Verhulst, S.L., et al., Sleep-disordered breathing and uric acid in overweight and obese children and adolescents. Chest 132: 76-80, 2007）。
尿酸上昇は、子癇前症と関連がある（Bainbridge, S.A. and Roberts, J.M., Uric acid as a pathogenic factor in preeclampsia. Placenta Dec. 17 2007 epub ahead of print）。
「尿酸は、ヒト末梢血単核細胞中の熱帯熱マラリア原虫（P. falciparum）により引き起こされる炎症応答の主要な一因である。…熱帯熱マラリア原虫により誘導される炎症反応は、マラリア発病の主因と考えられる。…」PLoS ONE 2009;4(4):e5194. Epub 2009 Apr 17。
米国特許出願公開第２００７／００１０６７０号明細書
Halevy et al., Allopurinol is the most common cause of Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis in Europe and Israel. J Am Acad Dermatol. 58(1):25-32, 2008 A. A. Reidel et al. "Compliance with Allopurinol Therapy among Managed Care Enrollees with Gout: A Retrospective Analysis of Administrative Claims." Journal of Rheumatology 2004; 31:1575-1581 National Health and Nutrition Examination Survey 111, 1988-1994 T.R. Mikuls et al., "Gout Epidemiology: Results for the UKGeneral Practice Research Database, 1990-1999." Annals of the Rheumatic Diseases 2005; 64:267-272 K. L. Wallace et al., "Increasing Prevalence of Gout and Hyperuricemia over 10 Years Among Older Adults in a Managed Care Population." Journal of Rheumatology 2004; 31: 1582-1587 E. Krishnan et al., "Gout in Ambulatory Care Settings in the United States." 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該当する疾患が尿酸の結晶化によるものであるか、又は正常を超える（個人ベースの標準によるか集団ベースの標準によるかを問わない）可溶性尿酸値の効果によるものであるかに関わらず、血中尿酸の上昇に関連する障害を安全、手軽及び効果的に治療及び防止することができる新しい薬物に対する重大な医学的必要性がある。
本発明は、式Ｉ
により表される化合物を提供する。
式Ｉ中、ｘは１又は２であり、ｙは０、１、２又は３であり、Ｒ１は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択される。Ａは、置換されていないフェニル、又は、ハロ、１若しくは２個の炭素原子を有するアルキル、ペルフルオロメチル、１若しくは２個の炭素原子を有するアルコキシ及びペルフルオロメトキシからなる群から選択される１、２若しくは３つの基により置換されているフェニルであるか、或いは、３〜６個の環原子を有する、置換されていないシクロアルキル、又は、３〜６個の環原子を有する、１若しくは２個の環炭素がメチル若しくはエチルにより独立に一置換されているシクロアルキルであるか、或いは、Ｎ、Ｓ及びＯから選択される１若しくは２個の環状ヘテロ原子を有し、環炭素により該化合物の残部と共有結合している５若しくは６環員の芳香族ヘテロ環である。
本発明は、哺乳動物対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該対象からの尿酸排出を増加させる方法であって、本発明の化合物を、該対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該対象からの尿酸排出を増加させるのに有効な量で該対象に投与することを含む方法を提供する。本発明は、哺乳動物の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該動物からの尿酸排出を増加させるうえで使用するための本発明の化合物を提供する。本発明は、哺乳動物の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該動物からの尿酸排出を増加させるための医薬の製造における本発明の化合物の使用を提供する。本発明は、哺乳動物対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該対象からの尿酸排出を増加させる際に使用するための医薬組成物であって、該対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該対象からの尿酸排出を増加させるのに有効な量で本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。本発明は、１又は複数単位の経口用量の本発明の化合物と、哺乳動物対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該対象からの尿酸排出を増加させるための該化合物を投与するための取扱説明書とを含むキットを提供する。
尿酸を減少させることは、本明細書中に記載の場合、痛風（無症候性痛風、急性通風性関節炎、間欠期痛風及び慢性結節性痛風のいずれか又は全て）、高尿酸血症、高尿酸血症と診断することが慣例的に正しいとされるレベルに満たない尿酸値上昇、腎機能不全、腎臓結石、心血管疾患、心血管疾患発症リスク、及び、高尿酸血症のそれ以外の結果、認知障害、早発性本態性高血圧症及び熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）誘導性炎症などさまざまな状態を治療又は防止するために用いることができる。
本発明は、実施例７に示すように、本発明の化合物がインビトロでＵＲＡＴ１を阻害したという観察に基づく。ＵＲＡＴ１の阻害は、インビボで尿酸を低下させるための確立されたインビトロモデルである。
化合物ＥＢが、ｈＵＲＡＴ１−ＨＥＫ細胞中の１４Ｃ−尿酸取込みに及ぼす濃度依存性の阻害効果を示すグラフである。 化合物ＥＣが、ｈＵＲＡＴ１−ＨＥＫ細胞中の１４Ｃ−尿酸取込みに及ぼす濃度依存性の阻害効果を示すグラフである。 マウス血漿中の化合物ＥＢの濃度を示すグラフである。 ラット血漿中の化合物ＥＢの較正曲線を示すグラフである（ＬＣ−ＭＳ）。 ラット血漿中の化合物ＥＢの濃度を示すグラフである。 ラット血漿中の化合物ＥＣの較正曲線を示すグラフである（ＬＣ−ＭＳ）。 ラット血漿中の化合物ＥＣの濃度を示すグラフである。 ラット血漿中の化合物ＥＧの較正曲線を示すグラフである（ＬＣ−ＭＳ）。 ラット血漿中の化合物ＥＧの濃度を示すグラフである。
定義
１Ｈ−テトラゾリル−５−イル部分及び対応する２Ｈ−テトラゾリル−５−イル部分は、互変異性体として存在することがある。本文書においては、１Ｈ−互変異性体を基準にして、化合物名を呼び、構造式を書いてある。そのような基準は全て、両方の互変異性形態を含むものとして理解されたい。したがって、例えば、「５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール）は、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール及び５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−２Ｈ−テトラゾールを両方とも包含する。又、式Ｉは、上に示したような式Ｉ、及び、下記の式Ｉ’
に示すその２Ｈ−テトラゾリル−５−イル互変異性形態を両方とも包含する。
本明細書中で使用する場合、用語「アルキル」は、直鎖状又は分岐状のアルキル基を意味する。一定数の炭素原子を有すると同定されているアルキル基は、その特定数の炭素を有する任意のアルキル基を意味する。例えば、３個の炭素原子を有するアルキルはプロピル又はイソプロピルであってもよく、４個の炭素原子を有するアルキルは、ｎ−ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル又はｔ−ブチルであってもよい。
本明細書中で使用する場合、用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードのうち１又は複数を指す。
本明細書中で使用する場合、ペルフルオロメチル又はペルフルオロメトキシにあるような用語「ペルフルオロ」は、当該基が、水素原子全ての代わりにフッ素原子を有することを意味する。
ある種の化学化合物は、本明細書中では、その化学名、又は以下に示す２文字のコードで呼ぶ。化合物ＥＢからＥＩ及び化合物ＢＤは、上に示す式Ｉの範囲内に包含される。
ＥＢ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール
ＥＣ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ＥＤ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ＥＦ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェネチル）−１Ｈ−テトラゾール
ＥＧ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ＢＤ ５−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ＥＨ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ＥＩ ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
本明細書中で使用する場合、移行語「〜を含む（comprising）」は、非制限的なものである。この用語を用いる特許請求の範囲は、当該特許請求の範囲中に列挙されているものに追加して要素を含有できる。
特許請求の範囲中で使用する場合、単語「又は（or）」は、そのように読んでは文脈中で意味をなさない場合を除き、「及び／又は」を意味する。したがって、例えば、「哺乳動物対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は該対象からの尿酸排泄を増加させる」という語句は、「哺乳動物対象の血中の尿酸濃度を低下させ、及び／又は該対象からの尿酸排泄を増加させる」と同義である。
本発明の化合物
前記の「課題を解決するための手段」に記載の化合物、方法、使用又は医薬組成物の一実施形態においては、この化合物は、式XLVI
（式中、ｘ、ｙ、Ｒ１及びＡは、式Ｉについて先に記載のとおりである）
で表される。
本発明のさらなる一実施形態においては、この化合物は、式XLVII
（式中、ｘ、ｙ及びＡは、式Ｉについて先に記載のとおりであり、Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、他方は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択される）
で表される。
本発明の一実施形態においては、式Ｉ、XLVI又はXLVII中、ｘは１である。別の実施形態においては、Ａは、置換されていないか、又は、ハロ、１若しくは２個の炭素原子を有するアルキル、ペルフルオロメチル、１若しくは２個の炭素原子を有するアルコキシ及びペルフルオロメトキシからなる群から選択される１、２若しくは３つの基により置換されているフェニルである。より具体的な実施形態においては、Ａは２，６−ジメチルフェニル又は２，６−ジフルオロフェニルである。好ましくは、Ａは２，６−ジメチルフェニルである。
本発明の実施形態においては、この化合物は、式XLVIII
（式中、ｙは０、１、２又は３であり、Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、他方は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、Ｒ４及びＲ５は、メチル、フルオロ及びクロロからなる群から独立に選択される）
で表される。
本発明の一実施形態においては、式Ｉ、XLVI、XLVII又はXLVIII中、ｙは０、１又は２である。本発明の一実施形態においては、式XLVII又はXLVIII中、Ｒ３は水素であり、Ｒ２は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択される。より具体的な一実施形態においては、Ｒ３は水素であり、Ｒ２は、水素、メチル及びメトキシからなる群から選択される。本発明の異なる一実施形態においては、式XLVII又はXLVIII中、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択される。より具体的な一実施形態においては、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、メチル及びメトキシからなる群から選択される。式XLVIIIのさらなる一実施形態においては、Ｒ４及びＲ５は両方ともメチルであるか、又は両方ともフルオロである。好ましくは、両方ともメチルである。
本発明の特定の実施形態においては、この化合物は、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェネチル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール及び５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾールからなる群から選択される。
本発明の化合物の一実施形態においては、この化合物は、実質的には（少なくとも９８％）純粋な形態をしている。
反応スキーム
式Ｉ（式中、ｘは１又は２であり、ｙは０〜３であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物、すなわち、式：
（式中、Ａは先に記載のとおりである）の化合物は、スキーム１の反応により調製できる。スキーム１の反応においては、Ａ、ｘ、ｙ及びＲ１は前述のとおりである。Ｌは脱離基である。
式IIの化合物は、トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジエチル又はアゾジカルボン酸ジイソプロピルを用いた、IIのIIIとのMitsunobu縮合を用いたステップ（ａ）の反応により、式Ｖの化合物に変換できる。この反応は、適当な溶媒（例えばテトラヒドロフラン）中で実施する。ステップ（ａ）の反応を実施するには、Mitsunobu反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式Ｖの化合物は、適当な塩基、例えば、炭酸カリウム、トリエチルアミン、ピリジンなどを用いることによるステップ（ａ）の反応におけるのと同様、式IIの化合物を式IVの化合物でエーテル化又はアルキル化することにより調製してもよい。この反応は、非プロトン性溶媒（例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジクロロメタンなど）中で実施する。式IVの化合物においては、Ｌは、メシロキシ、トシロキシ、クロロ、ブロモ、ヨードなどが挙げられるが、これらに限定されない。ステップ（ａ）の反応を実施するには、ハロゲン化物又は脱離基を用いた反応によるヒドロキシル基のエーテル化のいずれの従来法を利用してもよい。
式Ｖの化合物は、ルイス酸（例えば、塩化亜鉛、塩化マグネシウム、塩化アルミニウム、四塩化スズなど）の存在下で、ニトリルをアジド（例えばトリメチルシリルアジド）と、又は金属アジド（例えば、アジ化ナトリウム、アジ化カリウム、アジ化リチウム、好ましいアジドはアジ化ナトリウムである）と反応させることにより、ステップ（ｂ）の反応により式Ｉの化合物に変換できる。この反応は、溶媒（例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中で、８０℃〜１４５℃の範囲の温度で６〜６０時間実施する。理想の反応は、ニトリルをアジ化ナトリウム／塩化アンモニウム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドと１２０℃で２４時間反応させることを利用する。この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
Ａが、ヒドロキシル基の１つ又は２つの基により置換されているフェニルである場合は、ヒドロキシル基を保護することが一般に好ましい。適当な保護基は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されている可能性がある。保護基は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載のものなど、適当な脱保護試薬を利用してステップ（ｂ）の反応後に脱保護できる。
式Ｉ［式中、ｘは１又は２であり、ｙは０〜３であり、Ｒ１はヒドロキシルである］の化合物、すなわち、式：
（式中、Ａは先に記載のとおりである）の化合物は、スキーム２の反応により調製できる。スキーム２の反応において、Ａ、ｘ、及びｙは前述のとおりである。
式Ｖの化合物は、−７２℃〜０℃の範囲の温度で４〜４８時間、溶媒（例えばジクロロメタン）を用いて式Ｖの化合物を三臭化ホウ素又は三塩化ホウ素で処理することによるステップ（ｃ）の反応により、式VIの化合物に変換できる。ステップ（ｃ）の反応を実施するには、そのような脱メチル化反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式VIの化合物は、ステップ（ｂ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｄ）の反応により、式Ｉ（式中、Ｒ１はヒドロキシルである）の化合物に変換できる。この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
式Ｉ（式中、ｘは１又は２であり、ｙは０〜３であり、Ｒ１はアミノである）の化合物、すなわち、式：
（式中、Ａは先に記載のとおりである）の化合物は、スキーム３の反応により調製できる。スキーム３の反応において、Ａ、ｘ及びｙは前述のとおりである。Ｐは保護基である。
式VIIの化合物は、ステップ（ａ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｅ）の反応により、式VIIIの化合物に変換できる。式VIIIの化合物は、ニトロ基をアミンに還元することによるステップ（ｆ）の反応により、式IXの化合物に変換できる。還元剤は、金属（例えばＺｎ、Ｓｎ又はＦｅなど）及び酸であってもよい。ニトロ基を触媒水素化により還元してアミンを得ることもできる。好ましい還元法は、触媒水素化である。ステップ（ｆ）の反応を実施するには、そのような還元反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式IXの化合物は、アミノ基を保護することによるステップ（ｇ）の反応により、式Ｘの化合物に変換できる。適当な保護基は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されている可能性がある。式Ｘの化合物は、ステップ（ｂ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｈ）の反応により、式XIの化合物に変換できる。式XIの化合物は、アミノ保護基を脱保護することによる（ｉ）の反応ステップにより、式Ｉ（式中、Ｒ１はアミノである）の化合物に変換できる。適当な脱保護試薬は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されている可能性がある。この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
式II（式中、ｙは１〜３であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物、すなわち、式：
の化合物及び式VII（式中、ｙは１〜３である）の化合物、すなわち、式：
の化合物は、スキーム４の反応により調製できる。スキーム４の反応においては、Ｒ３は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、ニトロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである。Ｐはヒドロキシ保護基である。Ｒ２は、１〜２個の炭素原子を有するアルキル基である。Ｙはハロゲン化物である。
式XIIの化合物は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載のもののような適当な保護基を利用することによりカルボキシル基及びヒドロキシ基を最初に保護することによるステップ（ｊ）の反応により、式XIIIの化合物に変換できる。
式XIIIの化合物は、ステップ（ｋ）の反応によりエステル基をアルコールに変換する従来の還元試薬を利用することにより、式XIV（式中、Ｒ３は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物に還元できる。この反応を実施するうえでは、水酸化リチウムアルミニウムを利用することが一般に好ましいが、これに限定するものではない。この反応は、適当な溶媒（テトラヒドロフランなど）中で実施する。ステップ（ｋ）の反応を実施するには、そのような還元反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XIIIの化合物は、エステルをアルコールに変換するがニトロ基を還元しない還元試薬（例えば、ＢＨ３−ＴＨＦ、ＮａＢＨ４−ＡｌＣｌ３など）を利用することにより、式XIV（式中、Ｒ３はニトロである）の化合物に還元できる。ステップ（ｋ）の反応を実施するには、そのような還元反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。式XIVの化合物は、ヒドロキシ基をハロゲン（好ましいハロゲンはブロモ又はクロロである）で置換することにより、式XVの化合物に変換できる。適切なハロゲン化試薬としては、塩化チオニル、塩化オキサリル、臭素、三臭化リン、四臭化炭素などが挙げられるが、これらに限定されない。ステップ（ｌ）の反応を実施するには、そのようなハロゲン化反応において従来用いられるいずれの条件を利用してもよい。
式XVの化合物は、XVを、アルカリ金属シアン化物、例えば、シアン化ナトリウム又はシアン化カリウム又はシアン化銅と反応させることにより、式XVIの化合物に変換できる。この反応は、適当な溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど）中で実施できる。ステップ（ｍ）の反応を実施するには、ハロゲン化物からのニトリルの調製において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XVIの化合物は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されているものなど適当な脱保護試薬を利用してヒドロキシ保護基を除去することによるステップ（ｎ）の反応により、式XVIIの化合物に変換できる。式XVIIの化合物は、式II（式中、ｙは１であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物である。式XVIIの化合物は、式VII（式中、ｙは１であり、Ｒ３はニトロである）の化合物でもある。式XVIの化合物は、酸性又は塩基性の加水分解によるステップ（ｏ）の反応により、式XVIIIの化合物に変換できる。この反応を実施するうえでは、塩基性加水分解、例えばエタノール中の水性水酸化ナトリウムなどを利用することが一般に好ましい。ステップ（ｏ）の反応を実施するには、ニトリルのカルボン酸への加水分解において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XVIIIの化合物をステップ（ｐ）の反応により還元して、式XIXの化合物を得ることができる。この反応は、ステップ（ｋ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式で実施できる。式XIXの化合物は、ステップ（ｌ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｑ）の反応により、式XXの化合物に変換できる。式XXの化合物は、ステップ（ｍ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｒ）の反応により、式XXIの化合物に変換できる。式XXIの化合物は、ステップ（ｎ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｓ）の反応により、式XXIIの化合物に変換できる。
式XXIIの化合物は、式II（式中、ｙは２であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物である。式XVIIの化合物は、式VII（式中、ｙは２であり、Ｒ３はニトロである）の化合物でもある。
式XXIの化合物をステップ（ｏ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式で加水分解して、ステップ（ｔ）の反応により式XXIIIの化合物を得ることができる。
式XXIIIの化合物を還元して、ステップ（ｕ）の反応により式XXIVの化合物を得ることができる。この反応は、ステップ（ｋ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式で実施できる。式XXIVの化合物は、ステップ（ｌ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｖ）の反応により、式XXVの化合物に変換できる。式XXVの化合物は、ステップ（ｍ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｗ）の反応により、式XXVIの化合物に変換できる。式XXVIの化合物は、ステップ（ｎ）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｘ）の反応により、式XXVIIの化合物に変換できる。式XXVIIの化合物は、式II（式中、ｙは３であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物である。式XXVIIの化合物は、式VII（式中、ｙは３であり、Ｒ３はニトロである）の化合物でもある。
この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
式II（式中、ｙは０であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物、すなわち、式：
の化合物及び式VII（式中、ｙは０である）の化合物、すなわち、式：
の化合物は、スキーム５の反応により調製できる。スキーム５の反応においては、Ｒ３は、水素、ニトロ、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである。Ｐはヒドロキシ保護基である。Ｒ２は、１〜２個の炭素原子を有するアルキル基である。Ｒ４は、Ｈ、クロロ又はブロモである。
式XXVIIIの化合物は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載のもののような適当な保護基を利用することによりヒドロキシ基を最初に保護し、次に、式XXIX（式中、Ｒ４はＨである）の化合物を得るためにエステルを加水分解することによるステップ（ｙ）の反応により、式XXIXの化合物に変換できる。
式XXVIIIの化合物は、ステップ（ｙ）からの式の化合物を、ハロゲン化試薬、例えば、塩化チオニル、五塩化リン、三塩化リン、臭素、四臭化炭素などと反応させることにより、式XXIX（式中、Ｒ４はクロロ又はブロモである）の化合物に変換できる。ステップ（ｚ）の反応を実施するには、カルボン酸のそのようなハロゲン化反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XXIXの化合物は、アンモニアと直接反応させることによる、又は、式XXIXの化合物の化合物をカップリング試薬、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ベンゾトリアゾリルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートで最初に処理してからアンモニアなどと反応させることによる（ａ'）の反応により、式XXXの化合物に変換できる。ステップ（ａ'）の反応を実施するには、アンモニアのアシル化において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。式XXXの化合物は、試薬、例えば、塩化チオニル、五酸化リン、五塩化リン、オキシ塩化リン、四塩化炭素−トリフェニルホスフィン、塩化シアヌルなどを利用する脱水によるステップ（ｂ'）の反応により、式XXXIの化合物に変換できる。この反応は、純粋に、又は、適当な溶媒（例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど）中のいずれかで実施する。ステップ（ｂ'）の反応を実施するには、そのような脱水反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XXXIの化合物は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されているものなど適当な脱保護試薬を利用してヒドロキシ保護基を除去することによるステップ（ｃ’）の反応により、式XXXIIの化合物に変換できる。式XXXIIの化合物は、式II（式中、ｙは０であり、Ｒ１は、水素、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物である。式XXXIIの化合物は、式VII（式中、ｙは０であり、Ｒ３はニトロである）の化合物でもある。この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
式III（式中、ｘは１又は２である）の化合物、すなわち、式：
Ａ−（ＣＨ２）ｘＯＨ
の化合物及び式IV（式中、ｘは１又は２である）の化合物、すなわち、式：
Ａ−（ＣＨ２）ｘＬ
の化合物は、スキーム６の反応により調製できる。スキーム６の反応において、Ａは前述のとおりである。Ｌは脱離基又はハロゲン化物である。式XXXIIIの化合物は、ステップ（ｄ'）の反応により式XXXIVの化合物に還元できる。この反応は、従来の還元剤、例えば、水酸化リチウムアルミニウムなどのアルカリ金属水素化物を利用して実施する。この反応は、適当な溶媒（テトラヒドロフランなど）中で実施する。ステップ（ｄ'）の反応を実施するには、そのような還元反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XXXIVの化合物は、式III（式中、ｘは１である）の化合物である。
式XXXIVの化合物は、ヒドロキシル基を脱離基又はハロゲン化物で置換することにより式XXXVの化合物に変換でき、好ましい基は、ブロモ又はクロロである。適切なハロゲン化用試薬としては、塩化チオニル、塩化オキサリル、臭素、三臭化リン、四臭化炭素などが挙げられるが、これらに限定されない。脱離基としては、トシル基、メシル基などが挙げられる。ステップ（ｅ'）の反応を実施するには、そのような反応において従来用いられるいずれの条件を利用してもよい。式XXXVの化合物は、式IV（式中、ｘは１である）の化合物である。
式XXXVの化合物は、XXXVをアルカリ金属シアン化物、例えば、シアン化ナトリウム又はシアン化カリウムと反応させることにより、式XXXVIの化合物に変換できる。この反応は、適当な溶媒（エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなど）中で実施する。ステップ（ｆ'）の反応を実施するには、ニトリルの調製において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XXXVIの化合物は、酸性又は塩基性の加水分解による反応ステップ（ｇ'）により、式XXXVIIの化合物に変換できる。この反応を実施するうえでは、塩基性加水分解、例えば水性水酸化ナトリウムを利用することが一般に好ましい。ステップ（ｇ'）の反応を実施するには、ニトリルの加水分解において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XXXVIIの化合物を還元して、ステップ（ｈ'）の反応により式XXXVIIIの化合物を得ることができる。この反応は、ステップ（ｄ'）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式で実施できる。式XXXVIIIの化合物は、式III（式中、ｘは２である）の化合物である。
式XXXVIIIの化合物は、ステップ（ｅ'）の反応において本明細書中で先に記載のものと同じ様式のステップ（ｉ'）の反応により、式XXXIXの化合物に変換できる。式XXXIXの化合物は、式IV（式中、ｘは２である）の化合物である。
この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。Ａが、１又は２つのヒドロキシル基により置換されているフェニルである場合は、式XXXIIIの化合物のヒドロキシル基を保護することが一般に好ましい。適当な保護基は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されている可能性がある。
式XXVIII（式中、Ｒ３は、水素、ニトロ、フルオロ、ブロモ、クロロ、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシ又は１〜２個の炭素原子を有するアルキルであり、Ｒ２は、１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物、すなわち式：
の化合物は、スキーム７の反応により調製できる。スキーム７の反応において、Ｒ２及びＲ３は前述のとおりである。
式XIIの化合物は、メタノール又はエタノールで式XIIの化合物をエステル化することによるステップ（ｊ'）の反応により、式XXVIIIの化合物に変換できる。この反応は、触媒（例えば、Ｈ２ＳＯ４、ＴｓＯＨなど）を使用するか、又は脱水剤（例えばジシクロヘキシルカルボジイミドなど）を使用することのいずれかにより実施できる。ステップ（ｊ’）の反応を実施するには、そのようなエステル化反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
式XII（式中、Ｒ３は、クロロ、ブロモ又はフルオロである）の化合物、すなわち式：
の化合物は、商業的に入手できるか、又は以下のような文献中に記載の方法により調製できるかいずれかである：
１． ３−Ｂｒ又はＦ−２−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
Canadian Journal of Chemistry (2001), 79(11) 1541-1545。
２． ４−Ｂｒ−２−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９９１６７４７又はＪＰ０４１５４７７３。
３． ２−Ｂｒ−６−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＪＰ４７０３９１０１。
４． ２−Ｂｒ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９６２８４２３。
５． ４−Ｂｒ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ２００１００２３８８。
６． ３−Ｂｒ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
Journal of labelled Compounds and Radiopharmaceuticals (1992), 31 (3), 175-82。
７． ２−Ｂｒ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ及び３−Ｃｌ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９４０５１５３及びＵＳ５５１９１３３。
８． ２−Ｂｒ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ及び３−Ｂｒ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ２００２２０１８３２３
９． ２−Ｃｌ−６−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＪＰ０６２９３７００
１０． ２−Ｃｌ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
Proceedings of the Indiana Academy of Science (1983), Volume date 1982, 92, 145-51。
１１． ３−Ｃｌ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ２００２０００６３３及びＷＯ２００２０４４１４５。
１２． ２−Ｃｌ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９７４５４００。
式XII（式中、Ｒ３は、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシである）の化合物、すなわち、式：
の化合物は、スキーム８の反応により調製できる。スキーム８の反応においては、Ｒ２は、１〜２個の炭素原子を有するアルキルである。Ｐはヒドロキシル保護基である。式XLの化合物は、適当な保護基によりフェニル基を保護することによるステップ（ｋ’）の反応により、式XLIの化合物に変換できる。保護基のための適当な条件は、T. GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載してある可能性がある。
式XLIの化合物は、アルデヒドをカルボン酸に酸化することにより、式XLIIの化合物に変換できる。この反応は、適当な酸化試薬、例えば、ピリジニウムクロロクロメート、過マンガン酸カリウム、過マンガン酸ナトリウムなどを使用することにより実施できる。ステップ（ｌ’）の反応を実施するには、そのような酸化反応において適当な条件のいずれを利用してもよい。
式XLIIの化合物は、保護基の脱保護により、ステップ（ｍ’）の反応による式XII（式中、Ｒ３は、１個の炭素原子を有するアルコキシである）の化合物に変換できる。適当な脱保護条件は、T GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されている可能性がある。
式XLIIの化合物は、溶媒（例えばジクロロメタン）を−７２℃〜０℃の温度で４〜４８時間使用して式XLIIの化合物を三臭化ホウ素又は三塩化ホウ素で処理することにより、式XLIIIの化合物に変換できる。ステップ（ｎ’）の反応を実施するには、そのような脱メチル反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XLIIIの化合物は、メタノール又はエタノールで式XLIIIの化合物をエステル化することにより、式XLIVの化合物に変換できる。この反応は、触媒（例えば、Ｈ２ＳＯ４、ＴｓＯＨなど）を使用するか、又は脱水剤（例えばジシクロヘキシルカルボジイミドなど）を使用することのいずれかにより実施できる。ステップ（ｏ’）の反応を実施するには、そのようなエステル化反応において従来用いられる条件のいずれを利用してもよい。
式XLIVの化合物は、適当な塩基、例えば、炭酸カリウム、水素化ナトリウム、ピリジンなどを用いることにより、式XLIVの化合物をハロゲン化エチルでエーテル化又はアルキル化することにより、式XLVの化合物に変換できる。この反応は、従来の溶媒（テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンなど）中で実施できる。この反応は、０℃〜４０℃の温度で一般に実施する。ステップ（ｐ’）の反応を実施するには、そのようなアルキル化反応において適当な条件のいずれを利用してもよい。
式XLVの化合物は、保護基の脱保護により、ステップ（ｑ’）の反応による式XII（式中、Ｒ３は、２個の炭素原子を有するアルコキシである）の化合物に変換できる。適当な脱保護条件は、T GreeneによるProtective Groups in Organic Synthesis中に記載されている可能性がある。この生成物は、抽出、蒸発、クロマトグラフィー及び再結晶化などの手法により単離及び精製できる。
式XII（式中、Ｒ３は、１〜２個の炭素原子を有するアルコキシである）の化合物、すなわち、式：
の化合物は、商業的に入手できるか、又は以下のような文献中に記載の方法により調製できるかいずれかである：
１． ２−ＯＭｅ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＵＳ２００１０３４３４３又はＷＯ９７２５９９２。
２． ５−ＯＭｅ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
J.O.C (2001), 66(23), 7883-88。
３． ２−ＯＭｅ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＵＳ６１９４４０６（９６ページ）及びJournal of the American Chemical Society (1985), 107(8), 2571-3。
４． ３−ＯＥｔ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
Taiwan Kexue (1996), 49(1), 51-56。
５． ４−ＯＥｔ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９６２６１７６
６． ２−ＯＥｔ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
Takeda Kenkyusho Nempo (1965), 24,221-8。
ＪＰ０７０７００２５。
７． ３−ＯＥｔ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９６２６１７６。
式XII（式中、Ｒ３は、１〜２個の炭素原子を有するアルキルである）の化合物、すなわち、式：
の化合物は、商業的に入手できるか、又は、以下のような文献中に記載の方法により調製できるかいずれかである：
１． ５−Ｍｅ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ及び２−Ｍｅ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ９６１９４３７。
J.O.C. 2001, 66, 7883-88。
２． ２−Ｍｅ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＷＯ８５０３７０１。
３． ３−Ｅｔ−２−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ及び５−Ｅｔ−２−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
J. Med. Chem. (1971), 14(3), 265。
４． ４−Ｅｔ−２−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
Yaoxue Xuebao (1998), 33(1), 67-71。
５． ２−Ｅｔ−６−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ及び２−ｎ−Ｐｒ−６−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
J. Chem. Soc., Perkin Trans 1 (1979), (8), 2069-78。
６． ２−Ｅｔ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＪＰ１００８７４８９及びＷＯ９６２８４２３。
７． ４−Ｅｔ−３−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
J.O.C. 2001, 66, 7883-88。
ＷＯ９５０４０４６。
８． ２−Ｅｔ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
J.A.C.S (1974), 96(7), 2121-9。
９． ２−Ｅｔ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ及び３−Ｅｔ−４−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
ＪＰ０４２８２３４５。
１０． １．３−Ｅｔ−５−ＯＨＣ６Ｈ３ＣＯ２Ｈ
２−エチルアクロレインを使用することにより、J.O.C. 2001, 66, 7883-88からの合成を適合する。
治療法における使用
本発明は、哺乳動物対象における尿酸値を低下させ、又は哺乳動物対象からの尿酸排泄を増加させる方法を提供する。哺乳動物における尿酸値は、任意の従来の測定を用いて定量できる。典型的には、血中尿酸値を定量する。尿酸は、組織中に堆積又は沈殿する結果、蓄積部（例えば痛風結節）となる場合もあり、その蓄積部は血中尿酸濃度を上昇又は低下させることにより影響を受けることもあり、逆に尿酸の循環の一因となることもある。尿酸を減少させるための本発明の方法は、痛風、高尿酸血症、高尿酸血症と診断することが慣例的に正しいとされるレベルに満たない尿酸値上昇、腎臓結石、腎機能不全、心血管疾患、心血管リスク因子及び認知障害などさまざまな状態を治療又は防止するために用いることができる。本発明の化合物を投与すると、尿酸値を低下させることにより、腎臓疾患の進行が遅くなる。尿酸値上昇は心血管疾患のリスク因子として同定されている。高齢者においては、尿酸上昇と認知障害との間に有意な相関が示されている。（Schretlen, D.J. et al., "Serum Uric Acid and Cognitive Function in Community-Dwelling Older Adults", Neuropsychology (Jan. 2007) 21(1): 136-140）。したがって、尿酸を減少させるための本発明の方法は、高齢者における認知障害を含めた認知障害を治療又は防止するために使用できる。レッシュ−ナイハン症候群罹患者は尿酸値が上昇しており、こうした高尿酸血症の多数の結果（痛風など）を患うことはよく知られている。したがって、血中尿酸値を低下させ尿酸の排出を増加させるための本発明は、レッシュ−ナイハン症候群罹患者を治療するために使用できる。
血中尿酸の正常範囲は、男性においては３．４ｍｇ／ｄＬ〜７．０ｍｇ／ｄＬの間、閉経前の女性においては２．４ｍｇ／ｄＬ〜６．０ｍｇ／ｄＬの間、小児においては２．５ｍｇ／ｄＬ〜５．５ｍｇ／ｄＬの間である。尿酸結晶の形成／沈殿は、典型的には、男性においては６．６ｍｇ／ｄＬ以上の値で、女性においては６．０ｍｇ／ｄＬ以上の値で生じる。このことから、いわゆる正常範囲内にある尿酸値であっても、望ましくない健康上の結果を有することが（痛風を生じさせることすら）あることが示される。さらに、全体の集団にとっては正常範囲であると思われる値であっても、個人にとっては上昇している場合がある。尿酸上昇による心血管及び他の結果は、こうした「正常な」範囲内の血中濃度を伴って生じる場合が相当ある。したがって、高尿酸血症の診断は、本発明の化合物の有益な効果にとっては必ずしも予め必要なものではない。
本発明は、痛風、高血圧症、血管炎症、心不全、動静脈障害、心筋梗塞、脳卒中、子癇前症、子癇、睡眠時無呼吸、腎機能不全（腎不全、末期腎疾患［ＥＳＲＤ，end stage renal disease］など）、臓器移植、利尿薬、チアジド、シクロスポリン、アスピリン、ビタミンＣ、ニコチン酸、レボドパ（Ｌ−ＤＯＰＡ，levodopa）、細胞傷害薬及びある種の抗菌剤（ピロジナミド（pyrozinamide）など）、肝硬変、甲状腺機能不全、副甲状腺機能不全、肺癌、貧血症、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、腫瘍溶解症候群、甲状腺又は副甲状腺の機能不全、レッシュ−ナイハン症候群、喫煙、アルコール消費及び乾癬に伴う高尿酸血症の治療を包含する。本発明は、痛風、尿酸結晶の形成、腎機能不全、移植後の生着不全又は臓器不全、内皮障害（炎症など）、慢性心不全、動静脈障害、子癇前症、子癇、高血圧症及び認知障害をもたらす可能性のある高尿酸血症の治療を包含する。痛風を治療するための本発明の方法の実施形態においては、尿酸の組織蓄積部（痛風結節を含むがこれに限定されるものではない）は減少し、痛風の発作の発生及び重症度も低下する。
本発明の化合物は、任意の従来の全身投与経路により投与できる。好ましくは、この化合物又はその塩は経口投与される。したがって、この医薬は経口投与用に製剤化されることが好ましい。本発明により用いることができる他の投与経路としては、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内又は腹膜内の注射）による経直腸的、非経口的な経路、又は経鼻的な経路が挙げられる。
本発明の治療の使用及び方法のそれぞれのさらなる実施形態は、前述の化合物の実施形態のいずれか１つを投与することを含む。不必要に冗長になることを避けるため、そのような化合物及び化合物群はそれぞれ繰り返さないが、そうした薬剤及び薬剤群は、繰り返された場合と同様に、治療の使用及び方法のこの説明中に組み込まれる。
ヒト及び非ヒトの哺乳動物対象は両方とも、本発明の治療方法により治療できる。特定の対象のための本発明の特定の化合物の最適用量は、熟練の臨床家により臨床の場において決定できる。経口投与の場合においては、本発明の化合物は、一般に、成人に対し一日用量が１ｍｇ〜２５００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜１２００ｍｇで投与する。本発明の他の一実施形態においては、この化合物は、４００ｍｇ〜１０００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜１０００ｍｇ、又は１００〜３００ｍｇの用量で、１日当たり１回又は２回投与する。典型的な成人の平均体重は６０〜７０キログラムであることから、ｍｇ／ｋｇとして表される適切な用量範囲は、およそ０．０１５〜４２ｍｇ／ｋｇ、０．０１５〜２０ｍｇ／ｋｇ、６．６〜１３ｍｇ／ｋｇ、１０〜１３ｍｇ／ｋｇ、１０〜１６ｍｇ／ｋｇ、又は１．６７〜４．３ｍｇ／ｋｇであり、１日当たり１回又は２回投与する。小児を治療するときは、最適用量は患者の医師が決定する。マウスへの経口投与の場合においては、本発明の化合物は、一般には、体重１キログラム当たりの化合物の一日用量１〜３００ｍｇで投与する。
本発明の化合物は、他の尿酸低下薬と組み合わせて投与できる。そのような場合における本発明の化合物の用量は、前述のとおりである。本発明の化合物と組み合わせて、従来の、又は治験用の任意の尿酸低下薬を利用できる。そのような薬物の例としては、以下が挙げられる：キサンチンオキシダーゼ阻害薬（アロプリノール（１００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日、より典型的には１００ｍｇ／日〜３００ｍｇ／日）、フェブキソスタット（４０ｍｇ／日〜１２０ｍｇ／日、より具体的には６０ｍｇ／日〜８０ｍｇ／日）及びオキシプリノールなど）；Puricase／ＰＥＧ−ウリカーゼ（注射により２週間毎に４ｍｇ〜１２ｍｇ）；尿酸排泄剤（スルフィンピラゾン（１００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日）、プロベネシド（５００ｍｇ／日）、ロサルタン（２５ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日、より典型的には５０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日）、フェノフィブレート、JTT-552（ＵＲＡＴ−１阻害薬）、ベンズブロマロン（７０ｍｇ／日〜１５０ｍｇ／日）など）及びスタチン（アトルバスタチン（LIPITOR（登録商標））など）。他の尿酸低下薬は、そのような他の薬物の用量の方を低くして投与するか、そのような他の薬物の頻度を低くして投与するか、いずれかにより、その通常量又は通常量未満の量で投与してもよい。
本発明の化合物は、痛風発作に伴う疼痛を低下させるために使用される他の薬物、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ，nonsteroidal antiinflammatory drug）、コルヒチン、コルチコステロイド及び他の鎮痛薬と共に投与できる。
血中尿酸値を低下させる過程においては、本発明の化合物により尿中の尿酸値が高まると考えられる。尿のｐＨを高め、それにより尿酸の可溶性を高めるために、例えば、クエン酸塩又は炭酸水素塩を、本発明の化合物と組み合わせて投与してもよい。
本発明の化合物又は塩と、１又は複数の他の尿酸低下薬、鎮痛薬及びｐＨ上昇剤との混合物を対象に投与してもよい。或いは、本発明の化合物又は塩、及び、１又は複数の他の尿酸低下薬、鎮痛薬及びｐＨ上昇剤は、共に混合されて混合物を形成するのではなく、対象に独立に投与される。活性成分を共に混合して単一の混合物又は組成物を形成しないときは、活性成分を、１又は複数単位の経口用量の本発明の化合物と、１又は複数単位の経口用量の１又は複数の他の尿酸低下薬と、鎮痛薬及びｐＨ上昇剤と、本発明の化合物を他の活性成分と組み合わせて投与するための取扱説明書とを備えるキットの形態で提供すると便利である。好ましくは、キットの構成要素は、箱又はブリスターパックなどに入った形で、一緒に包装される。
医薬組成物
本発明は、本発明の化合物と、任意選択で薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物のさらなる実施形態は、前述の化合物の実施形態のいずれか１つを含む。不必要に冗長になることを避けるため、そのような化合物及び化合物群はそれぞれ繰り返さないが、そうした薬剤及び薬剤群は、繰り返された場合と同様に、医薬組成物のこの説明中に組み込まれる。
好ましくは、この組成物は、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、ハード又はソフトタイプのゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤又は懸濁剤の形態で経口投与用に構成される。一般に、この経口組成物は、１ｍｇ〜２５００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜１２００ｍｇの本発明の化合物を含むことになる。本発明のより具体的な実施形態においては、この経口組成物は、４００ｍｇ〜１０００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜１０００ｍｇ、又は１００〜３００ｍｇの本発明の化合物を含むことになる。対象にとっては、１日当たり１又は２個の錠剤、コーティング錠、糖衣錠又はゼラチンカプセル剤を飲みこむことは手軽である。しかし、この組成物は、例えば坐剤の形態での経直腸投与、例えば注射液剤の形態での非経口投与、又は経鼻投与など、任意の他の従来の全身投与手段による投与用に構成することもできる。
この活性成分は、医薬組成物の作製のために、薬学上不活性な無機又は有機の担体を用いて加工してもよい。乳糖、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩などを、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠及びハードゼラチンカプセル剤用のそのような担体として使用できる。ソフトゼラチンカプセル剤用の適当な担体は、例えば、植物油、蝋、脂肪、半固体及び液体のポリオールなどである。しかし、活性成分の性質によっては、ソフトゼラチンカプセルの場合においては、ソフトゼラチン自体以外の担体は通常必要ではない。液剤及びシロップ剤の作製用の適当な担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油などである。坐剤用の適当な担体は、例えば、天然又は硬化タイプの油、蝋、脂肪、半液体又は液体のポリオールなどである。
この医薬組成物は、さらに、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、コーティング剤又は抗酸化剤を含有してもよい。
本発明は、以下の実施例を参照することによりさらによく理解されると思われるが、この実施例は、本明細書中に記載の本発明を例証するものであるが、これを限定するものではない。
［実施例］
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンゾニトリルの調製：
乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の２，６−ジメチルベンジルアルコール（６．２７ｇ、４６．１ｍｍｏｌ）及びアゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ、９．２４ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（１００ｍｌ）中の３−ヒドロキシベンゾニトリル（５ｇ、３７ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（ＴＰＰ、１１．９９ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で滴加した。この反応混合物を、４時間又は出発物質が全て消費されるまで室温に温め、エーテルで希釈し、水（２Ｘ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固形物としての標題化合物を得た。
ステップＢ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）中の３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンゾニトリル（ステップＡ、３ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．８４７ｇ、１３ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．６９７ｇ、１３ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下で１１０℃にて１４時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱した。この反応混合物に水を加えて、固形物を全て溶解させ、この溶液をブライン中に取り、酢酸エチル（２Ｘ）で抽出した。有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９５：５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固形物としての標題化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．４（ｓ，６Ｈ）；５．１５（ｓ，２Ｈ）；７．１（ｄ，２Ｈ）；７．１５（ｍ，１Ｈ）；７．３（ｄｄ，１Ｈ）；７．５（ｔ，１Ｈ）；７．６５（ｍ，１Ｈ）；７．７（ｍ，１Ｈ）。
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：２−（３−ヒドロキシフェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥塩化メチレン（２０ｍｌ）中の２−（３−メトキシフェニル）アセトニトリル（３．６ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン雰囲気下で−７８℃にてＢＢｒ３（５５ｍｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍ、５５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を４８時間かけて周囲温度に温め、破砕した氷でクエンチし、塩化メチレンで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ＣＨ２Ｃｌ２：酢酸エチル、４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、油としての標題化合物を得た。
ステップＢ：２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の２−（３−ヒドロキシフェニル）アセトニトリル（ステップＡ、５ｇ、３７ｍｍｏｌ）及びアゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ、３．３８ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の２，６−ジメチルベンジルアルコール（２．２５ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（ＴＰＰ、４．３ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で０℃にて滴加した。この反応混合物を、室温で１６時間又は出発物質が全て消費されるまで撹拌した。この混合物にシリカゲル（２５ｇ）を加え減圧下で溶媒を除去し、これをシリカゲルカラム上に載せ、塩化メチレン：ヘキサン（１：１）で溶出させて、淡黄色の結晶性の固形物を得た。
ステップＣ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）中の２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）アセトニトリル（ステップＢ、３．２ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（１．２８ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（１．０８ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下、９０℃にて９時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応混合物を減圧下で濃縮した。この反応混合物を酢酸エチル中に取り、水（２Ｘ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（塩化メチレン：メタノール、９：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、油状の生成物を得た。この油を１：２の酢酸エチル：ヘキサンと共に１０分間撹拌し、固形物を濾過して、白色の固形物としての生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．３（ｓ，６Ｈ）；４．２５（ｓ，２Ｈ）；５．１５（ｓ，２Ｈ）；６．８４（ｄ，１Ｈ）；６．９６（ｍ，２Ｈ）；７．０８（ｄ，２Ｈ）；７．１８（ｍ，１Ｈ）；７．２８（ｍ，１Ｈ）。
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：エチル３−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾエートの調製：
無水エタノール（３００ｍｌ）中の３−ヒドロキシ−４−メトキシ安息香酸（２５ｇ、１４８．６７ ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３．１７ｇ、１６．６６ｍｍｏｌ）の溶液を、６時間又は出発物質が全て消費されるまで環流させた。この反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＢ：エチル３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンゾエートの調製：
乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中のエチル３−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾエート（ステップＡ、９．１０ｇ、４６．４ｍｍｏｌ）及びアゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ、１０．２３ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（６０ｍｌ）中の２，６−ジメチルベンジルアルコール（６．９４ｇ、５１ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（ＴＰＰ、１３．２７ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で０℃にて滴加した。この反応混合物を４時間又は出発物質が全て消費されるまで室温に温め、エーテルで希釈し、水（２Ｘ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＣ：（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシフェニル）メタノールの調製：
乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中のエチル３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンゾエート（ステップＢ、６．０４ｇ、１９．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で０℃にてＬｉＡｌＨ４（ＴＨＦ中１Ｍ、０．８０３ｇ、２１．１６ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応混合物を、４時間又は出発物質が全て消費されるまで撹拌してから、０．１Ｎ ＨＣｌ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）でゆっくりクエンチして反応混合物に加えた。この反応混合物を濾過し、沈殿物をＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ×２）で洗浄した。有機層を合わせたものを０．１Ｎ ＨＣｌ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＤ：２−（（５−（ブロモメチル）−２−メトキシフェノキシ）メチル）−１，３−ジメチルベンゼンの調製：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）中の（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシフェニル）メタノール（ステップＣ、５．２３ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ４（１０．１６ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフェニルホスフィン（８．０３ｇ、３０．６４ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ加えた。この反応混合物を１．５時間撹拌し、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤＣｌ３）：２．４３（ｓ，６Ｈ）；３．８３（ｓ，３Ｈ）；４．５３（ｓ，２Ｈ）；５．０８（ｓ，２Ｈ）；６．８４（ｄ，１Ｈ）；７．０〜７．０３（ｄｄ，１Ｈ）；７．０６〜７．０９（ｍ，３Ｈ）；７．１４〜７．１８（ｍ，１Ｈ）。
ステップＥ：２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシフェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の２−（（５−（ブロモメチル）−２−メトキシフェノキシ）メチル）−１，３−ジメチルベンゼン（ステップＤ、３．２８ｇ、９．７ｍｍｏｌ）及びＮａＣＮ（０．６２４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液を、１２０℃で２．５時間加熱してから冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈した。有機層を水（３０ｍｌ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＦ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシフェニル）アセトニトリル（ステップＥ、２．１７ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．５９０ｇ、９．１ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．４８６ｇ、９．１ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下で９０℃にて１６時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応混合物を冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×４）で抽出した。有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９５：５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半固形の生成物を得た。この半固形物を１：２の酢酸エチル：ヘキサン（１５ｍｌ）と共に１０分間撹拌し、濾過して、白色の固形物としての生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．３（ｓ，６Ｈ）；３．６８（ｓ，３Ｈ）；４．２２（ｓ，２Ｈ）；４．９８（ｓ，２Ｈ）；６．７８〜６．８１（ｄｄ，１Ｈ）；６．９１〜６．９３（ｄ，１Ｈ）；７．０５〜７．０７（ｄ，２Ｈ）；７．１３〜７．１６（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３２５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェネチル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：３−（３−メトキシフェニル）プロパンニトリルの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の１−（２−ブロモエチル）−３−メトキシベンゼン（１０ｇ、４６．４ｍｍｏｌ）、ＮａＣＮ（２．７３ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃で６時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応を冷却し、ＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ×３）、ブラインで洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、油としての標題化合物を得た。
ステップＢ：３−（３−ヒドロキシフェニル）プロパンニトリルの調製：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）中の３−（３−メトキシフェニル）プロパンニトリル（ステップＡ、１．７１ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下で−７８℃にてＢＢｒ３（ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍ、５．３２ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、同じ温度で２時間、次いで０℃で４時間又は出発物質が全て消費されるまで撹拌し、氷でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×３）で抽出し、有機層を合わせたものを飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで慎重に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＣ：３−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）プロパンニトリルの調製：
乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の３−（３−ヒドロキシフェニル）プロパンニトリル（ステップＢ、１．２５ｇ、８．５ｍｍｏｌ）及びアゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ、１．８７ｇ、９．２６ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下で０℃にて、乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の２，６−ジメチルベンジルアルコール（１．２７ｇ、９．３ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（ＴＰＰ、２．４３ｇ、９．２６ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。この反応混合物を、４時間又は出発物質が全て消費されるまで室温に温め、エーテルで希釈し、水（２Ｘ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＤ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェネチル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の３−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）プロパンニトリル（ステップＣ、２．６２ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．８９９ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．７４０ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下で９０℃にて１６時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応混合物を冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×４）で抽出した。有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９５：５→９２．５：７．５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半固形の生成物を得た。この半固形物を、１：２の酢酸エチル：ヘキサン（１５ｍｌ）と共に１０分間撹拌し、濾過して、白色の固形物としての生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．４８（ｓ，６Ｈ）；３．０２（ｔ，２Ｈ）；３．１９（ｔ，２Ｈ）；４．９８（ｓ，２Ｈ）；６．８０〜６．８１（ｄ，１Ｈ）；６．８６〜６．８９（ｍ，２Ｈ）；７．０５〜７．０７（ｄ，２Ｈ）；７．１４〜７．２３（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３０９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：２−（３−ヒドロキシ−４−メチルフェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）中の２−（３−メトキシ−４−メチルフェニル）アセトニトリル（５ｇ、３１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下で−７８℃にて、ＢＢｒ３（ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍ、１０．０２ｇ、４０ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応混合物を、同じ温度で２時間、次いで０℃で５時間又は出発物質が全て消費されるまで撹拌し、氷でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×３）で抽出し、有機層を合わせたものを飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで慎重に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、４：１→ＣＨ２Ｃｌ２：ｈｅｘ、１：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、オフホワイトの固形物としての標題化合物を得た。
ステップＢ：２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルフェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の２−（３−ヒドロキシ−４−メチルフェニル）アセトニトリル（ステップＡ、２．１８ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．６６ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下で室温にて、２，６−ジメチルベンジルクロリド（２．９７ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１６時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（４０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ）及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固形物としての標題化合物を得た。
ステップＣ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ＤＭＦ（１５ｍｌ）中の２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルフェニル）アセトニトリル（ステップＢ、１．１２ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．４００ｇ、６．１ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．３５０ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下で９０℃にて１６時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応混合物を冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×４）で抽出した。有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９５：５→９２．５：７．５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半固形の生成物を得た。この半固形物を１：２の酢酸エチル：ヘキサン（１５ｍｌ）で１０分間撹拌し、濾過して、白色の固形物としての生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．０（ｓ，３Ｈ）；２．３５（ｓ，６Ｈ）；４．２７（ｓ，２Ｈ）；５．０（ｓ，２Ｈ）；６．７３〜６．７５（ｄｄ，１Ｈ）；７．０８〜７．１（ｍ，３Ｈ）；７．１５〜７．１９（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ：ｍ／ｚ ３０９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
５−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：２−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）フェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の２−（４−ヒドロキシフェニル）アセトニトリル（５ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（６．７４ｇ、４８．８ｍｍｏｌ）の溶液に、２，６−ジフルオロベンジルブロミド（７．７７ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を４時間室温で撹拌し、真空中で濃縮した。粗残留物をＥｔＯＡｃ中に取り、水及びブラインで洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで再度洗浄した。有機層を合わせたものをＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、白色の固形物としての標題化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：３．６５（ｓ，２Ｈ）；５．１（ｓ，２Ｈ）；６．９〜７．０（ｍ，４Ｈ）；７．２〜７．４（ｍ，３Ｈ）。
ステップＢ：５−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ＤＭＦ（６０ｍｌ）中の２−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）フェニル）アセトニトリル（ステップＡ、５ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（１．３ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（１．０６ｇ、２０ｍｍｏｌ）の混合物を、９０℃で１６時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、油状の残留物をＥｔＯＡｃと水との間で分離させた（高濃度ＨＣｌを用いてｐＨ１に酸性化した）。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、茶色の半固形物とした。精製は、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより行って、淡いクリーム色の固形物としての標題化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：４．０（ｓ，２Ｈ）；５．１（ｓ，２Ｈ）；６．７〜６．９（ｍ，４Ｈ）；７．０（ｄ，２Ｈ）；７．２（ｍ，１Ｈ）。
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：エチル３−ヒドロキシ−２−メチルベンゾエートの調製：
無水エタノール（１５０ｍｌ）中の３−ヒドロキシ−２−メチル安息香酸（５．０４ｇ、３３．１２ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．７４１ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、１６時間又は出発物質が全て消費されるまで還流させた。この反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＢ：エチル３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンゾエートの調製：
乾燥ＤＭＦ（１５ｍｌ）中のエチル３−ヒドロキシ−２−メチルベンゾエート（ステップＡ、３．１ｇ、１７．２２ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３．０９ｇ、２２．３８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、アルゴン下で室温にて、２，６−ジメチルベンジルクロリド（３．１９ｇ、２０．６６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１６時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（４０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ）及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色の固形物としての標題化合物を得た。
ステップＣ：（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルフェニル）メタノールの調製：
乾燥ＴＨＦ（３５ｍｌ）中のエチル３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンゾエート（ステップＢ、５．９４ｇ、１９．９３ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で０℃にてＬｉＡｌＨ４（ＴＨＦ中１Ｍ、０．８３２ｇ、２１．９２ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応混合物を４時間又は出発物質が全て消費されるまで撹拌してから、０℃にて０．１Ｎ ＨＣｌでゆっくりクエンチし、この反応混合物にＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）を加えた。この反応混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ×２）で沈殿物を洗浄した。有機層を合わせたものを０．１Ｎ ＨＣｌ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＤ：１−（ブロモメチル）−３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンゼンの調製：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）中の（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルフェニル）メタノール（ステップＣ、３．６８ｇ、１４．３７ｍｍｏｌ）及びＣＢｒ４（５．２５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でトリフェニルホスフィン（４．１４ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。この反応混合物を４時間撹拌し、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。この固形物を真空下で６時間、さらに乾燥させ続けた。
ステップＥ：２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルフェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の１−（ブロモメチル）−３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンゼン（ステップＤ、４．２８ｇ、１３．４１ｍｍｏｌ）及びＮａＣＮ（０．７８９ｇ、１６．１０ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃で３時間加熱してから冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈した。有機層を水（３０ｍｌ）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
ステップＦ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルフェニル）アセトニトリル（ステップＥ、２．７０ｇ、１０．１９ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．７９５ｇ、１２．２３ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．６５３ｇ、１２．２２ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下で９０℃にて１６時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応混合物を冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ×４）で抽出した。有機層を合わせたものをブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９２．５：７．５）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半固形の生成物を得た。この半固形物を１：２の酢酸エチル：ヘキサン（１５ｍｌ）と共に１０分間撹拌し、濾過して、白色の固形物としての生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．０１（ｓ，３Ｈ）；２．３２（ｓ，６Ｈ）；４．２４（ｓ，２Ｈ）；５．０１（ｓ，２Ｈ）；６．７８〜６．７９（ｄｄ，１Ｈ）；７．０６〜７．０８（ｄ，２Ｈ）；７．１２〜７．１９（ｍ，３Ｈ）。
５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
ステップＡ：３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンズアルデヒドの調製：
乾燥ＤＭＦ（１５ｍｌ）中の３−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアルデヒド（５．０６ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）、２，６−ジメチルベンジルクロリド（５．０４ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．７８ｇ、３４．６ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下で室温にて１６時間撹拌してから、ＥｔＯＡｃ（４０ｍｌ）で希釈し、水（２０ｍｌ）で洗浄した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：酢酸エチル、４：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、オフホワイトの固形物としての標題化合物を得た。
ステップＢ：（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシフェニル）メタノールの調製：
乾燥ＴＨＦ（４０ｍｌ）中の３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンズアルデヒド（ステップＢ、１０．６ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で０℃にてＬｉＡｌＨ４（ＴＨＦ中１Ｍ、０．９５ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応混合物を１時間又は出発物質が全て消費されるまで撹拌してから水をゆっくり加え、次いで１Ｎ ＨＣｌ（５ｍｌ）、水（１０ｍｌ）を加えることによりクエンチし、この反応混合物にＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）を加えた。この反応混合物を濃縮し、酢酸エチルを用いた短いシリカゲルカラムを通過させて、オフホワイトの固形物としての標題化合物を得た。
ステップＣ：３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジルメタンスルホネートの調製：
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）中の（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシフェニル）メタノール（ステップＢ、９．５ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５．８０ｇ、５７．４ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下で０℃にて塩化メタンスルホニル（３．５ｍｌ、４５ｍｍｏｌ）を滴加した。この反応混合物を６時間又は出発物質が全て消費されるまで室温に温め、１０％の冷Ｎａ２ＣＯ３で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘ：塩化メチレン、２：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、淡黄色の油としての標題化合物を得た。
ステップＤ：２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシフェニル）アセトニトリルの調製：
乾燥ＤＭＦ（４０ｍｌ）中の３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジルメタンスルホネート（ステップＣ、８．８ｇ、３０．２６ｍｍｏｌ）及びＮａＣＮ（１．６０ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）の溶液を、８５℃で１８時間加熱してから冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈した。有機層を水（３０ｍｌ）で洗浄し、濃縮し、塩化メチレンを用いた短いシリカゲルカラムを通過させて、黄色の固形物としての標題化合物を得た。
ステップＥ：５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾールの調製：
乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）中の２−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシフェニル）アセトニトリル（ステップＤ、３．２ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（０．８６ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．６９６ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）の混合物を、アルゴン下で９０℃にて１６時間又は出発物質が全て消費されるまで加熱し、この反応混合物を冷却し、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール、９：１）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半固形の生成物を得た。この半固形物を１：２の酢酸エチル：ヘキサン（１５ｍｌ）と共に１０分間撹拌し、濾過して、白色の固形物としての生成物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）：２．３３（ｓ，６Ｈ）；３．５（ｓ，３Ｈ）；４．２１（ｓ，２Ｈ）；５．０４（ｓ，２Ｈ）；６．８３〜６．８５（ｄｄ，１Ｈ）；７．０５〜７．０９（ｍ，３Ｈ）；７．１５〜７．２３（ｍ，２Ｈ）。
ＵＲＡＴ１阻害アッセイ
ＵＲＡＴ１（尿酸輸送体１，Uric Acid Transporter 1）は、腎尿細管中の頂端膜上で発現する。ＵＲＡＴ１は、尿から血中への尿酸の再取込みを媒介する。ＵＲＡＴ１を阻害すると、尿中の尿酸の排泄の増加、したがって、血清尿酸濃度を低下させる薬物に対する潜在的様式の作用がもたらされる。例えば、プロベネシド及びベンズブロマロンは、痛風及び高尿酸血症の治療に臨床的に使用されており、これらの薬物は両方ともＵＲＡＴ１に作用して尿酸の再取込みを減少させる。しかし、ベンズブロマロンは、ＵＲＡＴ１とは無関係の機序による肝毒性を理由に市場から引き揚げられ、プロベネシドは、多数の輸送タンパク質に作用する結果、さまざまな他の薬物と相互作用する。
インビトロでのＵＲＡＴ１アッセイは、血清尿酸の減少において強力な活性を有する化合物を同定するには有用である。適当なアッセイには、細胞（例えば、ヒト胚腎細胞「ＨＥＫ，human embryonic kidney」）に、ヒトＵＲＡＴ１をコードするベクターを形質移入し、次いで、放射線標識した尿酸を取り込む形質移入細胞の能力を定量することが含まれる。ＵＲＡＴ１阻害薬としての化合物の活性は、形質移入細胞による尿酸取込みを遮断する能力により評価される。
試験化合物及び化学薬品：
ベンズブロマロン（Sigma社製, Cat.No.B5774）、プロベネシド（Sigma社製, Cat.No.P8761）、ＤＭＳＯ（Sigma社製, Cat.No.D-2650）、［８−１４Ｃ］尿酸（５０〜６０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ、American Radio Chemicals社製, Cat. No. ARC0513）。
発現ベクター中へのｈＵＲＡＴ１のサブクローニング：
ｈＵＲＡＴ１ ｃＤＮＡを含有するプラスミドベクターｐＣＭＶ６−ＸＬ５（Cat. No. SC125624）と、発現ベクターｐＣＭＶ６−Ｎｅｏ（Cat. No.pCMVNEO）とをOriGene Technologies, Inc.社から入手した。完全長のｈＵＲＡＴ１ ｃＤＮＡをベクターｐＣＭＶ６−ＸＬ５から得て、これを発現ベクターｐＣＭＶ６−Ｎｅｏ中にサブクローニングして、ｈＵＲＡＴ１発現プラスミドｐＣＭＶ６−ｈＵＲＡＴ１を創出した。自動ＤＮＡ配列決定法により配列を検証した。
ＵＲＡＴ１発現プラスミドの細胞培養、形質移入、及び、ｈＵＲＡＴｌを安定して発現するＨＥＫ細胞の確立：
１０％ＦＢＳ及び２ｍＭ Ｌ−グルタミンを添加したＥＭＥＭ中でヒト胚腎２９３（ＨＥＫ，Human embryonic kidney）細胞（ATTCC, Cat No. CRL-1573）を培養し、３７℃、５％ ＣＯ２の条件でインキュベートした。形質移入実験のために、６０ｍｍの皿上に１皿当たり培地１ｍｌで細胞を播いた。１８〜２４時間のインキュベーション後、メーカーの取扱説明書に従ってリポフェクチン形質移入剤を用いて（Invitrogen社製, Cat.No.18292）、細胞にプラスミドｐＣＭＶ６−ｈＵＲＡＴ１又は発現ベクターｐＣＭＶ６−Ｎｅｏを形質移入した。形質移入後、ＥＭＥＭ培地中で７２時間細胞を培養し、次いで、１ｍｇ／ｍｌのゲネチシン（GIBCO社製, Cat. No 10131）を加えることにより、安定な形質移入体を選抜した。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ，reverse transcription polymerase chain reaction）法を用いて、ｈＵＲＡＴ１を発現する安定な形質移入体（以後、本明細書中ではｈＵＲＡＴ１−ＨＥＫ細胞と呼ぶ）、又は、発現ベクターｐＣＭＶ６−Ｎｅｏのみを有する細胞（以後、本明細書中ではｍｏｃｋ−ＨＥＫ細胞と呼ぶ）を検証した。
［８−１４Ｃ］尿酸取込みアッセイ：
ｈＵＲＡＴ１−ＨＥＫ細胞及びｍｏｃｋ−ＨＥＫ細胞を、ＥＭＥＭ培地中３×１０５の濃度でポリ−Ｄ−リシン細胞培養２４ウェルプレート（Becton Dickinson社製, Cat. No.354414）中に播き、一晩インキュベートした。［８−１４Ｃ］尿酸（５５ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を含有する反応溶液を最終濃度５０μＭで、１２５ｍＭグルコン酸ナトリウム、４．８ｍＭグルコン酸カリウム、１．３ｍＭカルシウム、５．６ｍＭグルコース、１．２ｍＭ硫酸マグネシウム、１．２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４及び２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有するハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ，Hanks' balanced salt solution）中の、試験化合物を入れたものと入れないものとを調製した。取込みアッセイが開始する前に、培養培地を除去し、細胞をＨＢＳＳ０．６ｍｌ中で５分間インキュベートした。その後ＨＢＳＳを除去し、調製済の反応溶液を各ウェル中に加え、室温で５分間インキュベートした。次いで反応溶液を除去し、冷ＨＢＳＳ０．６ｍｌで細胞を２回洗浄し、０．１Ｍ ＮａＯＨ０．２ｍｌで２０分間溶解させた。シンチレーション液（Opti Phase SuperMIX, PerkinElmer社製, Cat No. 1200-439）１ｍｌの入ったシンチレーションバイアル中に細胞溶解物を移し、Microbeta計数装置（1450, Wallac Jet, PerkinElmer社製）中で放射能を計数した。試験化合物をＤＭＳＯ中で溶解させ、試験化合物の入っていないｍｏｃｋ−ＨＥＫ細胞及びｈＵＲＡＴ１−ＨＥＫ細胞のウェル中に同じ濃度のＤＭＳＯを加えた。各試験化合物について、取込みアッセイを２回実施し、３連で実施した。各試験条件についての細胞の尿酸取込みを、ＤＭＳＯ対照と比較した平均阻害率（％）として示した。ＤＭＳＯの入っているウェルについて得た放射能値を、細胞の１００％取込みとして採用した。観察された濃度−阻害率（％）データをＳ字濃度−効果モデル：
阻害率（％）＝（１００＊濃度＾勾配）／ＩＣ５０＾勾配］＋濃度＾勾配）
に当てはめた。
Data Analysis Toolbox（商標）（MDL Information Systems社製、San Leandro, CA, USA）を用いた非線形最小二乗回帰分析により、ＩＣ５０及び勾配の推定値並びにそれらの９５％信頼限界を定量した。
ＵＲＡＴ１阻害薬としての化合物の活性を評価するために、尿酸取込みの阻害率（％）を、典型的には、１０マイクロモルの薬物濃度で評価した（表１）。ＩＣ−５０値の定量のために、いくつかの化合物の追加的な薬物濃度を試験した（表２）。この実施例においては、化合物を必ずしも同時に試験しなかった。
化合物ＥＢを用いたマウスでの経口単回用量薬物動態試験
オスのマウスに単回経口胃管投与した後の化合物ＥＢの血漿プロファイルの定量：
試験化合物は、組織ホモジナイザーを用いて１％ＨＰＭＣ中で懸濁させて粒子を最小化し懸濁液の均一性を最大化してから、４℃で保存した。この調合物は、投与直前に徹底的に混合した。１００ｍｇ／ｋｇの用量の化合物ＥＢ又は媒体（１％ＨＰＭＣ）をオスのマウスに単回経口胃管投与により投与した。マウスは、投与後、尿採取装置中に５時間配置し、５時間分の全尿排出量を収集した。試料は、ＬＣ／ＭＳ−ＭＳを用いて分析するまで−８０℃で冷凍した。
投与時の０時間後、０．５時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後及び２４時間後の時点で、Ｋ３ＥＤＴＡ管中に眼窩洞から出血させることにより血液試料（０．４ｍＬ）を採取した。血液試料は、採取の３０分以内に、冷蔵下（２〜８℃）にて７分間、６０００ｒｐｍで遠心分離にかけた。遠心分離後、血漿を各時点で各動物用の単一管中に回収し、−８０℃で即時に冷凍し、追ってＬＣ／ＭＳ−ＭＳを用いて分析した。
データは、WinNonlin Standard（v2.1、Pharsight Corporation社製）及びMicrosoft EXCELを用いた薬物動態分析に供した。
プロトコール：
Ａ．血漿。
１．マウスに、化合物ＥＢ１００ｍｇ／ｋｇを単回経口胃管投与し、血漿を一定回数採取した。
２．血漿は、分析日まで−８０℃で保存した。
３．試料は３７℃の浴槽で５分間解凍し、１０秒間最高速度でボルテックスした。
４．マウス血漿０．１ｍＬをアセトニトリル０．２ｍＬと混合し、１分ボルテックスし、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
５．０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１３マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍＬ／分、１００バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた：方法406975M1, Sequence 1029-08A, Agilent社製、1100 LC-MS。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
Ｂ．較正曲線。
ステップ１．「媒体」動物由来の血漿（プールしておいたもの）０．０９５ｍＬを、メタノール中の化合物ＥＢの２０倍ストック０．００５ｍＬと混合して、血漿中の５００マイクロＭ、２５０マイクロＭ、１２５マイクロＭ、…、の濃度の化合物ＥＢを作製した。
例：メタノール中の血漿９５マイクロＬ＋１０ｍＭ化合物ＥＢ５マイクロＬ＝５００マイクロＭ化合物ＥＢの入った血漿０．１ｍＬ。
ステップ２．ステップ１の試料を最高速度で１０秒間ボルテックスした。
ステップ３．ステップ２の全ての試料にアセトニトリル０．２ｍＬを加え、全てのバイアルを最高速度で１分間ボルテックスした。
ステップ４．ステップ３の全ての試料を、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
ステップ５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１３マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍｌ／分、１００バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた：方法406975M1, Agilent社製、1100 LC-MS。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
ＨＰＬＣ条件：
結果：
化合物ＥＢはマウス血漿中で容易に検出できた。正負のイオン化モードにおいて保持時間及び質量を確認した。AGILENT LC-MS sequence 1029-08A。
「Ｍ−」＝２７９．２ １００％
「Ｍ＋」＝２８１．２ １００％
式量２８０。保持時間平均＝２６．５分。
ＡＵＣ０〜２４：７９６μｇ／ｍＬ
最高血中濃度：２１０μｇ／ｍＬ
セミログプロットについての線形成分：
半減期（１〜４時間）：２．２７
半減期（６〜８時間）：０．７４
半減期（８〜２４時間）：９．３９
化合物ＥＢを用いたラットでの経口単回用量薬物動態パイロット試験
オスのラットに単回経口胃管投与した後の化合物ＥＢの血漿プロファイルの定量：
試験化合物は、組織ホモジナイザーを用いて１％ＨＰＭＣ中で懸濁させて粒子を最小化し懸濁液の均一性を最大化してから、４℃で保存した。この調合物は、投与直前に徹底的に混合した。１００ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物又は媒体（１％ＨＰＭＣ）をオスのSprague-Dawleyラットに単回経口胃管投与により投与した。投与時の０時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後及び２４時間後の時点で、Ｋ３ＥＤＴＡ管中に眼窩洞から出血させることにより血液試料（０．４ｍＬ）を採取した。血液試料は、採取の３０分以内に、冷蔵下（２〜８℃）にて７分間、６０００ｒｐｍで遠心分離にかけた。遠心分離後、血漿を各時点で各動物用の単一管中に回収し、−８０℃で即時に冷凍し、追ってＬＣ／ＭＳ−ＭＳを用いて分析した。血漿濃度時間の連続データは、WinNonlin Standard（v2.1、Pharsight Corporation社製）及びMicrosoft EXCELを用いた薬物動態分析に供した。
プロトコール：
Ａ．血漿。
１．ラットに、化合物ＥＢ１００ｍｇ／ｋｇを単回経口胃管投与し、血漿を一定回数採取した。
２．血漿は、分析日まで−８０℃で保存した。
３．試料は３７℃の浴槽を用いて５分間解凍し、最高速度で１０秒間ボルテックスした。
４．ラット血漿０．１ｍＬをアセトニトリル０．２ｍＬと混合し、１分ボルテックスし、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１３マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍ、逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍＬ／分、１００バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた：方法406975M1, AGILENT Sequence 1015-08A Agilent社製、1100 LC-MS。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
Ｂ．較正曲線。
ステップ１．「媒体」動物由来の血漿（プールしておいたもの）０．１９ｍＬを、メタノール中のPN2107の２０倍ストック０．０１ｍＬと混合して、血漿中の５００マイクロＭ、２５０マイクロＭ、１２５マイクロＭ、…、の濃度の化合物ＥＢを作製した。
例：メタノール中の血漿１９０マイクロＬ＋１０ｍＭ化合物ＥＢ１０マイクロＬ＝５００マイクロＭ化合物ＥＢの入った血漿０．２ｍＬ。
ステップ２．ステップ１の試料を最高速度で１０秒間ボルテックスした。
ステップ３．ステップ２の全ての試料にアセトニトリル０．４ｍＬを加え、全てのバイアルを最高速度で１分間ボルテックスした。
ステップ４．ステップ３の全ての試料を、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
ステップ５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１３マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍｌ／分、１００バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
結果：
１．直線度＝０．９９９４へのＲ＾２フィットを用いて較正曲線を作成した（図４）。
２．化合物ＥＢはラット血漿中で容易に検出でき、正負のイオン化モードにおいて保持時間及び質量を確認した。
「Ｍ−」＝２７９．２ １００％。
「Ｍ＋」＝２８１．２ １００％
式量２８０、保持時間平均＝２６．５分。
生データ及び計算値を表７に記載する。
血漿中の化合物濃度を表８に記載する。
化合物ＥＢの半減期＝３．９９時間
化合物ＥＢのＡＵＣ０〜２４＝５６６μｇ／ｍＬ＊時間
化合物ＥＢの最高血中濃度＝１０８．０８μｇ／ｍＬ
化合物ＥＣを用いたラットでの経口単回用量薬物動態パイロット試験
オスのラットに単回経口胃管投与した後の化合物ＥＣの血漿プロファイルの定量。
試験化合物は、組織ホモジナイザーを用いて１％ＨＰＭＣ中で懸濁させて粒子を最小化し懸濁液の均一性を最大化してから、４℃で保存した。この調合物は、投与直前に徹底的に混合した。１００ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物又は媒体（１％ＨＰＭＣ）をオスのSprague-Dawleyラットに単回経口胃管投与により投与した。投与時の０時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後及び２４時間後の時点で、Ｋ３ＥＤＴＡ管中に眼窩洞から出血させることにより血液試料（０．４ｍＬ）を採取した。血液試料は、採取の３０分以内に、冷蔵下（２〜８℃）にて７分間、６０００ｒｐｍで遠心分離にかけた。遠心分離後、血漿を各時点で各動物用の単一管中に収集し、−８０℃で即時に冷凍し、追ってＬＣ／ＭＳ−ＭＳを用いて分析した。血漿濃度時間の連続データは、WinNonlin Standard（v2.1、Pharsight Corporation社製）及びMicrosoft EXCELを用いた薬物動態分析に供した。
プロトコール：
Ａ．血漿。
１．ラットに、化合物ＥＣ１００ｍｇ／ｋｇを単回経口胃管投与し、血漿を一定回数採取した。
２．血漿は、分析日まで−８０℃で保存した。
３．試料は３７℃の浴槽で５分間解凍し、１０秒間最高速度でボルテックスした。
４．ラット血漿０．１ｍＬをアセトニトリル０．２ｍＬと混合し、１分ボルテックスし、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１５マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍＬ／分、１０７バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた：方法406975M1, AGILENT sequence 0226-09A, Agilent社製、1100 LC-MS。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
Ｂ．較正曲線。
ステップ１．「媒体」動物由来の血漿（プールしておいたもの）０．１９ｍＬを、メタノール中の化合物ＥＣの２０倍ストック０．０１ｍＬと混合して、血漿中の５００マイクロＭ、２５０マイクロＭ、１２５マイクロＭの濃度の化合物ＥＣを作製した。
例：メタノール中の血漿１９０マイクロＬ＋１０ｍＭの化合物ＥＣ１０マイクロＬ＝５００マイクロＭの化合物ＥＣの入った血漿０．２ｍＬ。
ステップ２．ステップ１の試料を最高速度で１０秒間ボルテックスした。
ステップ３．ステップ２の全ての試料にアセトニトリル０．４ｍＬを加え、全てのバイアルを最高速度で１分間ボルテックスした。
ステップ４．ステップ３の全ての試料を、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
ステップ５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１５マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍＬ／分、１０７バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
結果：
１．直線度＝０．９９８４へのＲ＾２フィットを用いて較正曲線を作成した（図６を参照）。
２．化合物ＥＣは血漿中で容易に検出できた。正負両方のイオン化モードにおいて保持時間及び質量を確認した（図７を参照）。
「Ｍ−」＝２９３．２ １００％、５２７．２ ６５％
「Ｍ＋」＝２９５．２ １００％。式量２９４。保持時間平均＝２３分。
化合物ＥＧを用いたラットでの経口単回用量薬物動態パイロット試験
オスのラットに単回経口胃管投与した後の化合物ＥＧの血漿プロファイルの定量。
試験化合物は、組織ホモジナイザーを用いて１％ＨＰＭＣ中で懸濁させて粒子を最小化し懸濁液の均一性を最大化してから、４℃で保存した。この調合物は、投与直前に徹底的に混合した。１００ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物又は媒体（１％ＨＰＭＣ）をオスのSprague-Dawleyラットに単回経口胃管投与により投与した。投与時の０時間後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後及び２４時間後の時点で、Ｋ３ＥＤＴＡ管中に眼窩洞から出血させることにより血液試料（０．４ｍＬ）を採取した。血液試料は、採取の３０分以内に、冷蔵下（２〜８℃）にて７分間、６０００ｒｐｍで遠心分離にかけた。遠心分離後、血漿を各時点で各動物用の単一管中に収集し、−８０℃で即時に冷凍し、追ってＬＣ／ＭＳ−ＭＳを用いて分析した。血漿濃度時間の連続データは、WinNonlin Standard（v2.1、Pharsight Corporation社製）及びMicrosoft EXCELを用いた薬物動態分析に供した。
プロトコール：
Ａ．血漿。
１．ラットに、化合物ＥＧ１００ｍｇ／ｋｇを単回経口胃管投与し、血漿を一定回数採取した。
２．血漿は、分析日まで−８０℃で保存した。
３．試料は３７℃の浴槽で５分間解凍し、１０秒間最高速度でボルテックスした。
４．ラット血漿０．１ｍＬをアセトニトリル０．２ｍＬと混合し、１分ボルテックスし、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１５マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍＬ／分、１０７バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた：方法406975M1, AGILENT sequence 0226-09A, Agilent社製、1100 LC-MS。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
Ｂ．較正曲線。
ステップ１．「媒体」動物由来の血漿（プールしておいたもの）０．１９ｍＬを、メタノール中の化合物ＥＧの２０倍ストック０．０１ｍＬと混合して、血漿中の５００マイクロＭ、２５０マイクロＭ、１２５マイクロＭ、…、の濃度の化合物ＥＧを作製した。
例：メタノール中の血漿１９０マイクロＬ＋１０ｍＭの化合物ＥＧ１０マイクロＬ＝５００マイクロＭの化合物ＥＧの入った血漿０．２ｍＬ。
ステップ２．ステップ１の試料を最高速度で１０秒間ボルテックスした。
ステップ３．ステップ２の全ての試料にアセトニトリル０．４ｍＬを加え、全てのバイアルを最高速度で１分間ボルテックスした。
ステップ４．ステップ３の全ての試料を、４℃で２５分間、１４０００ｒｐｍ、１７０００ｇで沈降させた。
ステップ５． ０．４５ミクロン、４ｍｍのＰＴＦＥ膜シリンジフィルター（Phenomenex社製、#AF0-3102-52）を通して上澄みを濾過し、１５マイクロＬを注射し、Luna ３ミクロン、細孔１００Ａ、Ｃ８（２）、１５０×３ｍｍの逆相カラム（Phenomenex社製、#00F-4248-YO, SN#259151-7）を、５０分で４０％〜６９％の直線的濃度勾配の（０．１％ギ酸、８９．９％アセトニトリル、１０％メタノール）で用い、０．２５ｍＬ／分、１０７バール、カラム温度３７℃の条件で分離させた。
全ての試料は２回試行し、吸光度２１０ｎｍ及び２３０ｎｍでの正負のイオン化のスペクトログラムを記録した。
結果：
１．直線度＝０．９９９７へのＲ＾２フィットを用いて較正曲線を作成した（図８を参照）。
２．化合物ＥＧは血漿中で容易に検出できた。正負両方のイオン化モードにおいて保持時間及び質量を確認した（図９を参照）。
「Ｍ−」＝３０７．２ １００％
「Ｍ＋」＝３０９．２ １００％。式量３０８。保持時間平均＝３０分。
生データ及び計算

Claims (24)

  1. 式XLVIで表される化合物
    （式中、
    ｘは１又は２であり、
    ｙは０、１、２又は３であり、
    Ｒ１は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ａは、２，６−ジメチルフェニルである）。
  2. 式XLVIIで表される、請求項１に記載の化合物
    （式中、
    ｘは１又は２であり、
    ｙは０、１、２又は３であり、
    Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、他方は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ａは、２，６−ジメチルフェニルである）。
  3. ｘが１である、請求項１又は２に記載の化合物。
  4. 式XLVIIIで表される、請求項３に記載の化合物
    （式中、
    ｙは０、１又は２であり、
    Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、他方は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ｒ４及びＲ５は、メチルである）。
  5. Ｒ３が水素であり、Ｒ２が、水素、メチル及びメトキシからなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
  6. ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェネチル）−１Ｈ−テトラゾール；及び
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
    からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
  7. ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール及び
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
    からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
  8. 哺乳動物対象の血中の尿酸濃度を低下させる、又は前記対象からの尿酸排出を増加させる際に使用するための医薬組成物であって、薬学的に許容される担体と、前記対象の血中の尿酸濃度を低下させる、又は前記対象からの尿酸排出を増加させるのに有効な量の式Ｉで表される化合物とを含む医薬組成物
    （式中、
    ｘは１又は２であり、
    ｙは０、１、２又は３であり、
    Ｒ１は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ａは、置換されていないフェニル、又は、ハロ、１若しくは２個の炭素原子を有するアルキル、ペルフルオロメチル、１若しくは２個の炭素原子を有するアルコキシ及びペルフルオロメトキシからなる群から選択される１、２若しくは３つの基により置換されているフェニルであるか、或いは、
    ３〜６個の環原子を有する、置換されていないシクロアルキル、又は、３〜６個の環原子を有する、１若しくは２個の環炭素がメチル若しくはエチルにより独立に一置換されているシクロアルキルであるか、或いは、
    Ｎ、Ｓ及びＯから選択される１若しくは２個の環ヘテロ原子を有し、環炭素により前記化合物の残部と共有結合している５若しくは６環員の芳香族ヘテロ環である）。
  9. 化合物が、式XLVIで表される、請求項８に記載の医薬組成物
    （式中、
    ｘは１又は２であり、
    ｙは０、１、２又は３であり、
    Ｒ１は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ａは、置換されていないフェニル、又は、ハロ、１若しくは２個の炭素原子を有するアルキル、ペルフルオロメチル、１若しくは２個の炭素原子を有するアルコキシ及びペルフルオロメトキシからなる群から選択される１、２若しくは３つの基により置換されているフェニルであるか、或いは、
    ３〜６個の環原子を有する、置換されていないシクロアルキル、又は、３〜６個の環原子を有する、１若しくは２個の環炭素がメチル若しくはエチルにより独立に一置換されているシクロアルキルであるか、或いは、
    Ｎ、Ｓ及びＯから選択される１若しくは２個の環ヘテロ原子を有し、環炭素により前記化合物の残部と共有結合している５若しくは６環員の芳香族ヘテロ環である）。
  10. 化合物が、式XLVIIで表される、請求項９に記載の医薬組成物
    （式中、
    ｘは１又は２であり、
    ｙは０、１、２又は３であり、
    Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、他方は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ａは、置換されていないフェニル、又は、ハロ、１若しくは２個の炭素原子を有するアルキル、ペルフルオロメチル、１若しくは２個の炭素原子を有するアルコキシ及びペルフルオロメトキシからなる群から選択される１、２若しくは３つの基により置換されているフェニルであるか、或いは、
    ３〜６個の環原子を有する、置換されていないシクロアルキル、又は、３〜６個の環原子を有する、１若しくは２個の環炭素がメチル若しくはエチルにより独立に一置換されているシクロアルキルであるか、或いは、
    Ｎ、Ｓ及びＯから選択される１若しくは２個の環ヘテロ原子を有し、環炭素により前記化合物の残部と共有結合している５若しくは６環員の芳香族ヘテロ環である）。
  11. ｘが１である、請求項８〜１０のいずれかに記載の医薬組成物。
  12. Ａが、置換されていないフェニル、又は、ハロ、１若しくは２個の炭素原子を有するアルキル、ペルフルオロメチル、１若しくは２個の炭素原子を有するアルコキシ及びペルフルオロメトキシからなる群から選択される１、２若しくは３つの基により置換されているフェニルである、請求項８〜１０のいずれかに記載の医薬組成物。
  13. Ａが２，６−ジメチルフェニル又は２，６−ジフルオロフェニルである、請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 化合物が、式XLVIIIで表される、請求項１２に記載の医薬組成物
    （式中、
    ｙは０、１又は２であり、
    Ｒ２及びＲ３の一方は水素であり、他方は、水素、１又は２個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシ、１又は２個の炭素原子を有するアルコキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ及びアミノからなる群から選択され、
    Ｒ４及びＲ５は、メチル、フルオロ及びクロロからなる群から独立に選択される）。
  15. Ｒ３が水素であり、Ｒ２が、水素、メチル及びメトキシからなる群から選択され、Ｒ４がメチルであり、Ｒ５がメチルである、請求項１０又は１４に記載の医薬組成物。
  16. 化合物が、
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェニル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）フェネチル）−１Ｈ−テトラゾール；及び
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−４−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
    からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 化合物が、
    ５−（４−（２，６−ジフルオロベンジルオキシ）ベンジル）−１Ｈ−テトラゾール；
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メチルベンジル）−１Ｈ−テトラゾール；及び
    ５−（３−（２，６−ジメチルベンジルオキシ）−２−メトキシベンジル）−１Ｈ−テトラゾール
    からなる群から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
  18. 痛風、高尿酸血症、高尿酸血症と診断することが慣例的に正しいとされるレベルに満たない尿酸値上昇、腎機能不全、腎臓結石、心血管疾患、心血管疾患発症リスク、腫瘍溶解症候群、認知障害、早発性本態性高血圧症及び熱帯熱マラリア原虫誘導性炎症からなる群から選択される状態を治療又は防止するうえで使用するための、請求項８に記載の医薬組成物。
  19. 対象の血中の尿酸濃度を低下させ、又は前記対象からの尿酸排出を増加させるのに有効な組合せ量で１又は複数の他の尿酸低下薬と組み合わせて投与されるように製剤化される、請求項８に記載の医薬組成物。
  20. 他の尿酸低下薬が、キサンチンオキシダーゼ阻害薬、尿酸排泄剤、尿酸輸送体−１阻害薬、ウリカーゼ及びスタチンからなる群から選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 他の尿酸低下薬が、単独で投与される場合の通常の治療用量未満の量で投与される、請求項１９に記載の医薬組成物。
  22. 医薬が、化合物と１又は複数の他の尿酸低下薬とを、混合物の形態で共に混合された状態で含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
  23. 化合物と１又は複数の他の尿酸低下薬とが、混合物の形態で共に混合されていない、請求項１９に記載の医薬組成物。
  24. 経口投与用に製剤化される、請求項８に記載の医薬組成物。
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