ES2543091T3

ES2543091T3 - Procedimiento inmunocromatográfico y sistema de ensayo para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo a analizar

Info

Publication number: ES2543091T3
Application number: ES09765237.4T
Authority: ES
Inventors: Sabine Baumgartner; Judith Rudolf; Eva Maria Binder; Johann Binder
Original assignee: Erber AG
Current assignee: DSM Austria GmbH
Priority date: 2008-06-17
Filing date: 2009-06-17
Publication date: 2015-08-14
Anticipated expiration: 2029-06-17
Also published as: EP2288916B1; BRPI0914298A2; EP2288916A1; WO2009152543A1

Abstract

Procedimiento inmunocromatográfico para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo que se debe analizar, en el cual en una membrana inmunocromatográfica situada sobre un soporte se dispone una zona de ensayo específica para el analito, en donde sobre la membrana (6), y separadas según un principio de separación inmunocromatográfica de las zonas de ensayo específicas (7, 13) para el analito (3, 10), se dispone una zona de control específica (8, 14) para el analito, y en la solución de ensayo (2) que se debe analizar hay presente y se hace reaccionar un anticuerpo (4, 11) contra el analito (3, 10) que se debe investigar, acoplado o marcado con una sustancia que desencadena una reacción cromática, caracterizado por que además de la solución de ensayo (2), se agrega una sustancia de control (12) acoplada o marcada con una sustancia que desencadena una reacción cromática, por que la membrana inmunocromatográfica (6) se sumerge durante 1 a 20 minutos en la solución de ensayo que se debe analizar, por que el analito (3, 10) y el anticuerpo (4, 11) marcado en exceso, así como eventualmente el producto de reacción del analito y el anticuerpo marcado, son captados por la membrana inmunocromatográfica (6) desde la solución de ensayo (2), y se hacen pasar por la zona de ensayo específica (7, 13) y la zona de control específica (8, 14), así como por una zona de control no específica (15), que contiene un anticuerpo contra la sustancia de control (12), por que para la valoración del procedimiento se determina, en primer lugar, la validez del resultado experimental comparando o midiendo la intensidad del color de la o las zonas de control específicas (8, 14) y/o de la zona de control no específica (15) con una carta de color, y/o por la intensidad del color de la zona de ensayo específica mediante dispositivos de medición fotométrica, y por que para la determinación cuantitativa del al menos un analito (3, 10) que se debe investigar se miden por fotometría la intensidad de la zona de ensayo (7, 14) y la de la zona de control específica (8, 14), y se comparan con una curva de calibración.

Description

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cromática se puede concluir, en la valoración del ensayo, que hay una cantidad excesiva del analito y, en consecuencia, diluir correspondientemente la solución de ensayo 2 y repetir el ensayo con una solución diluida en consonancia.

La valoración del ensayo según la Figura 2b muestra un ensayo válido, dado que la sustancia de control no específica o el anticuerpo 15 contra la sustancia de control no específica 12 no muestran reacción, en la zona de ensayo específica, concretamente en el anticuerpo 7, no tiene lugar ninguna reacción, en la zona de control específica 8 se produce una reacción con el anticuerpo contra el analito, que está acoplado con una sustancia que desencadena una reacción cromática, en la segunda zona de ensayo específica 13 no se produce ninguna reacción cromática, dado que la solución de ensayo 2 que se debe analizar tampoco contiene el segundo analito 10 que se debe investigar, y en una segunda zona de control específica 14 se puede detectar una reacción cromática, puesto que el anticuerpo 11 contra el analito 10, que está acoplado a una sustancia que desencadena una reacción cromática, se ha acoplado al analito 10 fijado en la posición 14. Por consiguiente, el ensayo según la Figura 2a es válido y también es válido con respecto al analito 3, así como también con respecto al analito 10, aunque es negativo.

Por último, la Figura 2c muestra un caso en el que el ensayo, que se lleva a cabo de la forma que se ha descrito anteriormente, es válido y positivo con respecto al analito 3 y, en relación con el analito 10, es válido y negativo, dado que este último no está contenido en la solución 2 que se analiza. Evidentemente, además de las variantes con uno y dos analitos que se deben investigar, la muestra que se analiza puede contener, por ejemplo, cinco o más analitos y, tal como ya se ha mencionado, la valoración del resultado experimental se puede llevar a cabo tanto de forma óptica, evaluando de manera puramente visual las intensidades de color de las barras de reacción obtenidas, como también a través de los correspondientes dispositivos de medición y por comparación con las curvas de calibración, por ejemplo, de manera cuantitativa.

La Figura 3a muestra una tira de ensayo sobre la que se ha aplicado una membrana inmunocromatográfica 6. En la dirección de tránsito 9 de la membrana, que se indica con una flecha, existen dos líneas de ensayo dispuestas de forma adyacente para los analitos A1/1 y A2/1 que se deben investigar, con los cuales se pueden detectar, por ejemplo, alfa-lactoalbúmina (analito A1) y caseína (analito A2).

Separadas de las dos líneas de ensayo A1/1 y A2/1, se aplican las correspondientes líneas de control específicas A1/1 y A2/2. Al final de la tira de ensayo 5 se encuentra la zona de control no específica 12.

Del mismo modo, la Figura 3b muestra una tarjeta de ensayo 5 en la que en la dirección de flujo 9 hay dispuestos, uno tras otro, tres pares de analitos juntos, en líneas de control específicas. De esta forma, por ejemplo A1/1 muestra el analito que se investiga, por ejemplo alfa-lactoalbúmina, la línea A1/2 muestra las líneas de control específicas correspondientes, la línea A2/1 muestra un segundo analito que se debe investigar, por ejemplo caseína, la línea A2/2 muestra la línea de control específica correspondiente, y la línea A3/1 muestra un tercer analito que se debe investigar tal como, por ejemplo, beta-lactoglobulina, y la línea A3/2 muestra la correspondiente línea de control específica. Con el número 12 se representa nuevamente la línea de control no específica.

Figura 4 muestra nuevamente una tarjeta de ensayo 5 que, a diferencia de las realizaciones anteriores, está formada por dos partes. En este caso, la tarjeta de ensayo 5 se puede separar mediante una línea perforada 16 central en dos secciones 17 y 18. En las dos secciones de la tarjeta de ensayo se pueden aplicar, respectivamente, dos pares de analitos, de manera que con una única tarjeta de ensayo 5 se puede investigar simultáneamente un total de cuatro analitos. Debido a la configuración de este tipo es posible valorar al mismo tiempo los cuatro analitos de forma cuantitativa o, según las necesidades, solamente los dos situados respectivamente en una tira de las secciones 17 o 18 de la tarjeta de ensayo 5. Además, en función de la disponibilidad de los dispositivos de valoración utilizables, el procedimiento se puede llevar a cabo de manera que se realice simultáneamente una valoración cuantitativa de los cuatro analitos en un dispositivo de lectura correspondiente o, después de separar las tiras de ensayo 5 en sus secciones 17 o 18, las cuales son portadoras, respectivamente, de una membrana inmunocromatográfica 6, efectuar la valoración por separado.

Del mismo modo, tal como se muestra en las Figuras 5a y 5b, la tarjeta de ensayo puede estar formada por múltiples secciones, por ejemplo tres. La tarjeta de ensayo 5 comprende en este caso tres secciones, 17, 18 y 19, y en cada una de las secciones de la tarjeta de ensayo 5 se aplican, respectivamente, un analito así como la correspondiente línea de control específica, a saber A1/1 o A1/2, A2/1 o A2/2 y A3/1 o A3/2.

En este caso, para una facilitar la lectura, en la Figura 5a las líneas de ensayo y de control específicas están dispuestas separadas entre sí en las tarjetas individuales 17, 18 y 19 de forma que con un sistema de este tipo, no sólo se puede lograr una mejor lectura del ensayo, sino que se consigue también una disposición más clara. Para completar el ensayo, en las tres tarjetas parciales 17, 18 y 19 de la tira de ensayo 5 existe una línea de control no específica 12.

En este caso, resulta posible, por ejemplo, después de un resultado positivo en una de las tiras, llevar a cabo un análisis adicional en otra tira para obtener un resultado perfeccionado.

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Figura 5b muestra nuevamente una tarjeta de ensayo 5 en la que se pueden investigar tres analitos diferentes entre sí, en donde la realización según la Figura 5b es especialmente adecuada para el estudio de analitos que se encuentran en una matriz; como ejemplo, se puede citar la leche que puede contener diferentes componentes alergénicos tales como alfa-lactoalbúmina, caseína o beta-lactoalbúmina. En este caso, la tarjeta de ensayo 5 5 también está dividida en tres secciones 17, 18 y 19 y en la dirección del tránsito 9 del medio líquido, todas las líneas de ensayo y control específicas, así como una línea de control no específica 12 están dispuestas a la misma altura. La tarjeta de ensayo según la Figura 5b, a diferencia de la representada en la Figura 5a, está construida de tal manera que solamente hay prevista una perforación 21 en la parte superior, especialmente en la zona por la que sujeta 20, de forma que las tiras se pueden desprender fácilmente. La zona inferior de las tiras de ensayo 17, 18 y

10 19, es decir, la región donde se lleva a cabo el ensayo, están completamente separadas entre sí y no muestran ninguna perforación.

En una realización de este tipo, las tiras 17, 18 o 19 de la tarjeta de ensayo 5 se pueden separar entre sí de forma segura y fiable, sin perjudicar el ensayo.

Evidentemente, el sistema se puede configurar de manera diferente, en donde en la tarjeta de ensayo 5 solamente

15 se detecte un analito en las diversas secciones 17, 18 o 19 de la tarjeta de ensayo; para ello, en las distintas tiras de la tarjeta de ensayo 5 se aplican concentraciones diferentes de un mismo analito, con el fin de obtener inmediatamente un resultado cuantitativo, seguro y fiable.

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Claims

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