ES2532547B1 - Extracto polifenólico sólido de uva o de un subproducto del proceso de vinificación, y su uso como agente antibacteriano y/o antifúngico - Google Patents
Extracto polifenólico sólido de uva o de un subproducto del proceso de vinificación, y su uso como agente antibacteriano y/o antifúngico Download PDFInfo
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Abstract
Extracto polifenólico sólido de uva o de un subproducto del proceso de vinificación, y su uso como agente antibacteriano y/o antifúngico.#La invención se refiere a un extracto de uva que contiene compuestos polifenólicos naturales de la vid. También se refiere a la utilización de dicho extracto como agente antibacteriano y/o antifúngico empleándolo como ingrediente en el procesado de alimentos o para evitar infecciones cutáneas.
Description
DESCRIPCIÓN
EXTRACTO POLIFENÓLICO SÓLIDO DE UVA O DE UN SUBPRODUCTO DEL PROCESO DE VINIFICACIÓN, Y SU USO COMO AGENTE ANTIBACTERIANO Y/O ANTIFÚNGICO 5
Campo de la técnica
La presente invención se encuadra en el campo de la tecnología de los alimentos, así como en el sector farmacéutico. De manera particular, se refiere a un extracto de uva con poder 10 antibacteriano y/o antifúngico que puede utilizarse para preservar los alimentos o para evitar infecciones cutáneas.
Estado de la técnica
15
La creciente preocupación en relación con la calidad y seguridad de los alimentos está provocando una serie de cambios: en el sector industrial, tiende a desarrollarse y a adoptar nuevos procesos más seguros; en el ámbito científico, se están desarrollando nuevas técnicas de evaluación analítica más sensibles; y a nivel institucional, se está implementando una legislación más estricta en el cumplimiento de las demandas. Estos 20 cambios van encaminados a ofrecer al consumidor productos frescos y saludables en los que se preserven sus propiedades originales.
Pero la vía de acceso al organismo para los microorganismos potencialmente patógenos, no sólo es la digestiva. Muchos microorganismos se encuentran en la superficie de la piel 25 humana y de los animales, y pueden provocar una infección cutánea en circunstancias concretas; por lo que resulta de interés la búsqueda de productos que sean eficaces contra dichos microorganismos, ya sea para incorporarlos a distintos alimentos y así asegurar su inocuidad y prolongar su vida útil, como para incorporarlos a productos que se apliquen por vía tópica. 30
La tendencia reciente es el uso de productos naturales para controlar esos microorganismos, lo cual requiere la exploración de fuentes alternativas de principios activos naturales seguros, eficaces y aceptables. Las plantas o sus extractos estandarizados altamente concentrados pueden proporcionar oportunidades ilimitadas para el control del 35
crecimiento microbiano, debido a su diversidad química. Muchos extractos de plantas poseen actividad antimicrobiana contra una amplia gama de bacterias, levaduras y mohos.
Algunos usos de extractos naturales que se han detectado se citan a continuación. En el documento US 2009/0191294 A1 [Law Office of Terry L. Miller. Grape cane product, and 5 method of making. Alkayali; Ahmad; (Murrieta, CA). 31-03-2009] se ha identificado un extracto obtenido de los sarmientos de la vid para su aplicación tópica de cara a mejorar la retención de humedad de la piel humana, y para prolongar la vida útil y el almacenamiento de productos, entre otros usos. Además, en un reciente estudio de la Universidad de Ghent (Bélgica), se ha demostrado que un extracto de semilla de uva puede reducir la inefectividad 10 del Norovirus, causante de la principal fuente de brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos en la Unión Europea. Dicho extracto actúa mediante la desnaturalización de la proteína de la cápside del virus, lo que produce su desactivación.
Pero no se han detectado patentes o publicaciones que manifiesten el empleo de un 15 extracto de uva con efecto antifúngico y antibacteriano.
Descripción de la invención:
El primer objeto de esta invención es un extracto polifenólico de uva (Vitis vinifera) o de un 20 subproducto del proceso de vinificación, caracterizado porque es un extracto sólido, preferiblemente en polvo, y comprende entre 5 y 70 % en peso de uno o más compuestos polifenólicos respecto al total del extracto. Estos pueden ser identificados a partir de un análisis por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).
25
Debe tenerse en cuenta que cuando se cita un intervalo de valores en la presente memoria, sus límites inferior y superior están siempre incluidos en el ámbito de la invención, como realizaciones concretas de la misma.
En una realización preferida de la presente invención, el extracto polifenólico sólido, 30 preferiblemente en polvo, presenta una capacidad antioxidante entre 0,3 y 15 µmol eq Trolox/g; un contenido en polifenoles entre 50 y 700 mg/g equivalentes de ácido gálico; y un pH entre 2 y 4.
El extracto polifenólico sólido de la presente invención puede obtenerse directamente de uva 35 tinta, blanca o mezcla de las anteriores. Adicionalmente, también puede obtenerse a partir
de subproductos del proceso de vinificación, por ejemplo, lías, orujos, hollejos, etc. así como de cualquier combinación de los mismos. Preferiblemente el extracto polifenólico sólido se obtiene a partir de los hollejos, es decir, la piel que envuelve la pulpa de la uva tras su prensado. Esta materia prima es sometida a un proceso de extracción con disolventes líquidos con un contenido preferido de alcohol entre 40-60 %, un pH entre 2 y 4 y a una 5 temperatura entre 60-75 ºC durante, al menos, 2 horas.
En otra realización preferida, la presente invención se refiere al extracto polifenólico sólido de uva o de un subproducto del proceso de vinificación, preferiblemente hollejos, que comprende uno o más polifenoles seleccionados del grupo que consiste en antocianos, 10 flavonoles, flavan-3-oles y ácidos fenólicos, así como cualquiera de sus combinaciones.
Preferiblemente, los antocianos comprendidos en el extracto polifenólico sólido de la presente invención se seleccionan del grupo consistente en malvidina, petunidina, cianidina y delfinidina y cualquier combinación de los mismos. Por otro lado, los ácidos fenólicos 15 comprendidos en el extracto se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en ácido elágico, ácido gálico, ácido ferúlico, ácido vanílico y ácido coumárico. Adicionalmente, los flavonoles comprendidos en el extracto se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en mirecitina, quercitina y kaempferol. Concretamente el ácido elágico es un polifenol que no se ha descrito como un compuesto comúnmente presente en la uva, por lo 20 que este compuesto hace único al extracto objeto de la presente invención.
Más preferentemente todavía, cualquier flavan-3-ol presente en el extracto se selecciona del grupo que consiste en catequina, epicatequina, epigalocatequina, catequina galato y cualquier combinación de los mismos. 25
En una realización aún más preferida de la invención, el extracto polifenólico sólido de uva o subproducto del proceso de vinificación, preferiblemente de hollejos, tal como se describe en esta solicitud de patente comprende entre 0 y 10 mg/g de antocianos, entre 0,02 y 20 mg/g de flavonoles, entre 0,2 y 25 mg/g de flavan-3-oles; y entre 0,01 y 10 mg/g de ácidos 30 fenólicos.
En otra realización aún más preferida de la presente invención, el extracto polifenólico sólido de uva o subproducto del proceso de vinificación tal como se describe en esta solicitud de patente comprende la siguiente concentración en peso de polifenoles, todas ellas 35 expresadas respecto al peso total del extracto seco:
Ácido elágico: entre 0,01 y 10 mg/g;
Mirecitina: entre 0,01 y 10 mg/g;
Quercitina: entre 0,01 y 10 mg/g; y
Flavan-3-oles: entre 0,22 y 25 mg/g. 5
Preferentemente, los flavan-3-oles que comprende el extracto son los siguientes, cantidades expresadas en peso respecto al peso total del extracto seco:
Catequina: entre 0,1 y 10 mg/g; 10
Epicatequina: entre 0,01 y 2 mg/g;
Epigalocatequina: entre 0,1 y 10 mg/g; y
Catequina galato: entre 0,001 y 2 mg/g.
En una realización particularmente más preferida de la invención, el extracto polifenólico 15 sólido de uva o subproducto del proceso de vinificación, preferiblemente hollejos, tal como se describe en esta solicitud de patente comprende la siguiente concentración en peso de polifenoles, todas ellas expresadas respecto al peso total del extracto seco:
Ácido elágico: entre 0,1 y 5 mg/g de composición del extracto; 20
Mirecitina: entre 0,1 y 5 mg/g de composición del extracto;
Quercitina: entre 0,1 y 5 mg/g de composición del extracto; y
Flavan-3-oles: entre 0,4 y 12 mg/g de composición del extracto.
Preferentemente, en dicha realización, los flavan-3-oles comprendidos en la composición del 25 extracto son los siguientes, cantidades expresadas en peso respecto al peso total del extracto seco:
Catequina: entre 0,1 y 5 mg/g;
Epicatequina: entre 0,05 y 1 mg/g; 30
Epigalocatequina: entre 0,2 y 5 mg/g; y
Catequina galato: entre 0,01 y 1 mg/g.
En una realización todavía más preferida, el extracto polifenólico sólido de uva o suproducto del proceso de vinificación, preferiblemente hollejos, tal como se describe en esta solicitud 35
de patente comprende la siguiente concentración en peso de polifenoles, todas ellas expresadas respecto al peso total del extracto seco:
Ácido elágico: entre 1 y 5 mg/g;
Mirecitina: entre 0,5 y 4 mg/g; 5
Quercitina: entre 0,5 y 4 mg/g; y
Flavan-3-oles: entre 1,2 y 10 mg/g.
Preferiblemente, en esta realización los flavan-3-oles que comprende el extracto polifenólico sólido de la presente invención son preferentemente los siguientes, cantidades expresadas 10 en peso respecto al peso total del extracto seco:
Catequina: entre 0,5 y 5 mg/g;
Epicatequina: entre 0,1 y 1 mg/g;
Epigalocatequina: entre 0,5 y 4 mg/g; y 15
Catequina galato: entre 0,05 y 1 mg/g
En otra realización preferida, el extracto polifenólico sólido tal como se describe en esta solicitud de patente puede comprender otros componentes o moléculas presentes en la uva o subproducto del proceso de vinificación a partir del cual se obtienen. Estos compuestos 20 pueden ser, por ejemplo, fibra alimentaria o proteínas vegetales.
El extracto de uva o subproducto del proceso de vinificación aquí descrito se obtiene preferentemente a partir de una composición líquida extraída de la uva o de al menos un subproducto derivado del proceso de vinificación, sometiéndose dicha composición líquida 25 posteriormente a un proceso de secado.
En una realización aún más preferida, dicha composición líquida se obtiene a partir de los hollejos, es decir, la piel que envuelve la pulpa de la uva tras su prensado. Esta materia prima es sometida a un proceso de extracción con disolventes líquidos con un contenido 30 preferido de alcohol entre 40-60 %, un pH entre 2 y 4 y a una temperatura entre 60-75 ºC durante, al menos, 2 horas.
El secado de la composición líquida que proviene de la uva o del subproducto del proceso de vinificación, preferiblemente hollejos, para obtener el extracto sólido de la presente 35 invención se lleva a cabo preferentemente mediante una técnica seleccionada del grupo que
consiste en liofilización, atomización o secado en spray, secado en lecho fluidizado de dicha composición líquida y combinación de las anteriores. Preferiblemente, el extracto polifenólico de la invención se encuentra en forma de polvo. Más preferiblemente, con un contenido de humedad inferior a 8 % en peso.
5
En una realización especialmente preferida, el extracto polifenólico de la presente invención procede de uva tinta o de un subproducto del proceso de vinificación de dicha uva tinta, y comprende entre 3 y 3,5 mg/g de antocianos, entre 0,4 y 3,6 mg/g de flavonoles, entre 5 y 20 mg/g de flavon-3-oles; y entre 2,2 y 6 mg/g de ácidos fenólicos. Aún más preferiblemente este extracto se puede obtener a partir de hollejos de uva tinta Tempranillo del valle del 10 Duero.
En otra realización especialmente preferida, el extracto polifenólico de la presente invención procede de uva blanca o de un subproducto del proceso de vinificación de dicha uva blanca, y comprende entre 0,2 y 0,3 mg/g de flavonoles, entre 2,6 y 6,8 mg/g de flavon-3-oles; y 15 entre 0,05 y 0,2 mg/g de ácidos fenólicos. Aún más preferiblemente este extracto se puede obtener a partir de hollejos de uva blanca de la variedad Verdejo del valle del Duero.
Un segundo objeto de la presente invención es una composición que comprende el extracto polifenólico sólido tal como se describe en el primer objeto de esta solicitud de patente. Esta 20 composición puede comprender uno o más excipientes habituales en el sector de la alimentación para facilitar su fabricación, su estabilidad o su aplicación posterior al alimento.
Preferiblemente, la composición de la presente invención es una composición sólida. Más preferiblemente, la composición que comprende el extracto polifenólico de la presente 25 invención se encuentra en forma de polvo.
Diluyentes que pueden estar comprendidos en la composición de la presente invención son, entre otros, maltodextrina, el dióxido de silicio, la goma xantana, almidón, lecitina de soja o dextrosa. 30
La composición sólida descrita en esta solicitud de patente se puede obtener por métodos habituales en la industria alimentaria, en particular en la industria de la fabricación de complementos alimentarios. Preferiblemente, la composición que comprende el extracto polifenólico de la presente invención puede obtenerse mediante secado por una técnica 35
seleccionada del grupo que consiste en liofilización, atomización, secado en lecho fluidificado y una combinación de las anteriores.
En vista de lo anterior, la presente invención cubre asimismo un proceso de obtención del extracto de uva aquí descrito, que comprende someter a secado una composición líquida 5 extraída de la uva o de al menos un subproducto del proceso de vinificación que comprende uno o más compuestos polifenólicos, hasta obtener un producto sólido que comprende al menos uno de los compuestos polifenólicos en un porcentaje en peso del total comprendido entre 5% y 70%, incluidos ambos límites. Como ya se ha afirmado, dicho proceso de secado se lleva a cabo preferentemente mediante liofilización y/o atomización (secado en spray) y/o 10 lecho fluidizado de la composición líquida. En dicho secado se puede emplear un excipiente, un diluyente o un portador, como pueden ser por ejemplo la maltodextrina, el dióxido de silicio, la goma xantana, almidón, lecitina de soja, dextrosa, etc.
Un tercer objeto de la presente invención es la utilización del extracto polifenólico de uva o 15 de subproducto del proceso de vinificación tal como se describe en el primer objeto de la invención, o una composición de éste tal como se describe en el segundo objeto de esta solicitud de patente, como agente antibacteriano, antifúngico o una combinación de ambos.
En una realización preferida, el extracto polifenólico de uva o de subproducto del proceso de 20 vinificación tal como se describe en el primer objeto de la invención, o una composición de éste tal como se describe en el segundo objeto de la invención, se utiliza para inhibir la formación de al menos un hongo responsable del deterioro en alimentos. Preferiblemente, el hongo se selecciona del grupo que consiste en Botrytis cinerea, Penicillium sp. y A. flavus.
25
En otra realización preferida, el extracto polifenólico de uva o de subproducto del proceso de vinificación tal como se describe en el primer objeto de la invención, o una composición de éste tal como se describe en el segundo objeto de la invención, se utiliza para inhibir la formación de al menos una bacteria responsable del deterioro en alimentos. Preferiblemente, donde la bacteria se selecciona del grupo que consiste en S. aureus, M. 30 luteus, L. innocua, P. mirabilis y P. aeruginosa.
Preferiblemente, el alimento es un producto de panificación.
La presente invención también se refiere al uso del extracto polifenólico de uva o de 35 subproducto del proceso de vinificación tal como se describe en el primer objeto de la
invención, para fabricar una composición farmacéutica, preferiblemente para administración tópica, para prevenir una infección cutánea provocada por al menos un hongo, al menos una bacteria o una combinación de ambos.
Preferiblemente, el hongo se selecciona del grupo que consiste en Botrytis cinerea, 5 Penicillium sp. y A. flavus; y la bacteria se selecciona del grupo que consiste en S. aureus, M. luteus, L. innocua, P. mirabilis y P. aeruginosa.
Debe entenderse que también forma parte de la presente solicitud de patente cuando se refiere al extracto polifenólico de uva o de subproducto del proceso de vinificación tal como 10 se describe en el primer objeto de la invención, o una composición farmacéutica que comprende este extracto, preferiblemente una composición para administración tópica, de uso para prevenir una infección cutánea provocada por al menos un hongo, al menos una bacteria o una combinación de ambos.
15
También debe entenderse que forma parte de esta solicitud de patente, un método para prevenir una infección cutánea provocada por al menos un hongo, al menos una bacteria o una combinación de ambos que comprende administrar una cantidad efectiva del extracto polifenólico de uva o de subproducto del proceso de vinificación tal como se describe en el primer objeto de la invención, o de una composición farmacéutica que comprende este 20 extracto. Preferiblemente la composición se administra de forma tópica.
Esta composición farmacéutica puede obtenerse mediante procedimientos ampliamente conocidos por el experto galénico. Preferiblemente es una composición adecuada para administración tópica como gel, crema, ungüento, etc. Dependiendo de la forma elegida, 25 puede comprender diferentes excipientes también ampliamente conocidos por el experto galénico.
Breve descripción de las figuras:
30
Figura 1: Actividad del extracto tinto frente a Botritis spp a distintas concentraciones de extracto. 1A: concentración: 1/500, 1B: concentración 1/100 y 1C: concentración 1/50.
Figura 2: Placa control de Botritis cinerea
35
Ejemplos:
Ejemplo 1. Preparación del extracto polifenólico de uva blanca y tinta.
Como materia prima del extracto se utilizó uva tinta Tempranillo y uva blanca Verdejo, del valle del Duero. Se emplearon los hollejos concretamente, es decir, la piel que envuelve la 5 pulpa de la uva tras su prensado.
Para la obtención de una composición líquida que se va a emplear como materia prima del extracto de uva seco; se someten los hollejos a un proceso de extracción con disolventes líquidos, con un contenido preferido de alcohol entre 40-60 %, un pH entre 2 y 4 y a una 10 temperatura entre 60-75 ºC durante, al menos, 2 horas.
El extracto polifenólico obtenido también comprende otros componentes y moléculas procedentes de la uva de origen como fibras, proteínas vegetales, azúcares.
15
Posteriormente la composición líquida de la uva es sometida a un proceso de atomización de secado (secado en spray) y/o liofilización y/o lecho fluidizado, para obtener el extracto en polvo de uva de la presente invención.
Ejemplo 2. Caracterización del extracto sólido de uva tinta obtenido a partir del 20 método descrito en el ejemplo 1.
La composición polifenólica del extracto de uva tinta en polvo se detalla a continuación:
Antocianos 300-350 mg/100 g 25
Ácido gálico 20-350 mg/100 g
Ácido elágico: 200-250 mg/100 g
Mirecitina: 20-150 mg/100 g
Quercitina: 20-310 mg/100 g
Flavan-3-oles: 30
Catequina: 230-640 mg/100 g
Epicatequina: 70-560 mg/100 g
Epigalocatequina 160-370 mg/100 g
Catequina galato: 20-240mg/100 g
35
Ejemplo 3. Caracterización del extracto sólido de uva blanca obtenido a partir del método descrito en el ejemplo 1.
La composición polifenólica del extracto de uva tinta en polvo se detalla a continuación:
5
Ácido gálico 300-350 mg/100 g
Ácido elágico: 5-20 mg/100g
Quercitina: 20-30 mg/100 g
Flavan-3-oles:
Catequina: 200-550 mg/100 g 10
Epicatequina: 40-100 mg/100 g
Catequina galato: 20-30 mg/100 g
Ejemplo 4. Ensayos de actividad del extracto sólido de uva tinta y de uva blanca obtenido a partir del método descrito en el ejemplo 1 y caracterizado en los ejemplos 15 2 y 3 frente a bacterias.
Se han realizado ensayos de actividad antimicrobiana de los extractos polifenólicos frente a las siguientes bacterias:
20
Gram negativas: Escherichia coli (ATCC 35218), Proteus mirabilis (aislada de una muestra de agua residual), Salmonella sp. (aislada de una muestra de agua residual), Pseudomonas aeruginosa (CECT 532).
Gram positivas: Bacillus subtillis (aislada de la superficie de una poyata de laboratorio), 25 Micrococcus luteus (ATCC 10240, CECT 245), Staphylococcus aureus (ATCC 29213), Listeria inocua (ATCC 33090).
Los cultivos bacterianos para los ensayos preliminares de actividad, en placa Petri, se obtuvieron en Caldo Nutritivo durante 24 horas a 30ºC. La concentración del inóculo se 30 comprobó midiendo la densidad óptica de los cultivos (dilución 1/10).
Los ensayos preliminares de actividad antibacteriana se llevaron a cabo en placas de Agar Mueller Hinton. 0,1 ml de cada uno de los cultivos bacterianos. La inoculación se realizó mediante hisopo estéril sobre la superficie del agar y se dejaron secar durante 10 minutos. 35 Sobre los cultivos se colocaron los discos con los controles y 4 pocillos de acero estériles
donde se depositaron 100 μL de diluciones 1/5 de cada uno de los extractos. Las placas se dejaron a temperatura ambiente durante 30 minutos para permitir la difusión del compuesto problema. Como control positivo se utilizaron discos impregnados en Gentamicina. Después de 18 horas de incubación se midieron los diámetros de los halos de inhibición. Los resultados se presentan en la Tabla I. 5
Tabla I. Actividad antibacteriana de los extractos en dilución 1/5. (Ø halo de inhibición en mm)
10
El Extracto Blanco caracterizado en el ejemplo 3 (dilución 1/5) produce halos de inhibición frente a las 4 bacterias Gram positivas ensayadas y frente a una de las Gram negativas (P. mirabilis).
15
El Extracto Tinto caracterizado en el ejemplo 2 (dilución 1/5) produce halos de inhibición frente a las 4 bacterias Gram positivas ensayadas y frente a 3 de las Gram negativas (P.mirabilis, P.aeruginosa y Salmonella sp.)
Posteriormente se procedió a determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) mediante 20 ensayos en cultivo líquido (1ml) y posterior recuento de colonias. En el caso de los microorganismos se partió de un cultivo puro en Caldo Nutritivo obtenido por incubación a 37ºC en agitación durante 24h. Para el inóculo, distintas diluciones de los extractos fueron inoculadas con 1 mL de cada cultivo microbiano (hasta concentración comprendida entre 103-104 /mL). Se ensayaron las diluciones 1/10, 1/50, 1/100 y 1/500 en caldo Mueller-Hinton 25 de las extractos. Las muestras se incubaron durante 24 h en agitación a 37ºC. El recuento de microorganismos se realizó por siembra en agar Mueller-Hinton por extensión en
superficie del microorganismo, incubación a 37ºC, lectura a las 18-24h. Como control positivo se utilizó Gentamicina (CN 10 μg).
Ejemplo 5. Ensayos de actividad frente a hongos filamentosos del extracto sólido de uva tinta y de uva blanca obtenido a partir del método descrito en el ejemplo 1 y 5 caracterizado en los ejemplos 2 y 3.
Se han realizado ensayos de actividad antimicrobiana de los extractos polifenólicos frente a las siguientes hongos filamentosos: Botrytis cinerea B98 (aislada de fresas), Penicillium spp. (aislada de piel de naranja), Aspergillus flavus (CECT 2686). 10
Los hongos se cultivaron en Agar Patata Dextrosa durante 7 días a temperatura entre 20-25 ºC. Los ensayos de actividad se realizaron con las esporas. Se partió de cultivos puros en placa de agar Patata Dextrosa (PDA) que se habían dejado los días suficientes (>7) para que el microorganismo cubriese toda la superficie y el cultivo estuviera esporulado. 15
Los ensayos de actividad antifúngica se realizaron por triplicado, en placa, en medio de cultivo agar PDA Cloranfenicol adicionado de distintas concentraciones de los extractos. Se prepararon placas de medio de cultivo que contenían concentraciones 1/50, 1/100 y 1/500 de cada extracto. 20
Las distintas placas se inocularon con una misma cantidad del hongo diana esporulado en agar PDA, para ello se recortaron cilindros en condiciones estériles de 0,5 cm de diámetro con la ayuda de un sacabocados y se depositaron boca abajo en el centro de cada una de las distintas placas preparadas con medio de cultivo adicionado de extracto. Los controles 25 se incubaron en agar PDA Cloranfenicol sin extracto añadido. Las placas se incubaron a 25 ºC hasta que el control (o cualquier otro de los cultivos) cubriese toda la superficie (8,5 cm de diámetro), en ese punto se anotaron las mediciones del resto de placas. Se calcularon los porcentajes de inhibición o aumento del crecimiento midiendo el diámetro de la zona de crecimiento y comparándola con el control. Las mediciones se presentan en la tabla II y los 30 resultados de actividad en la tabla III.
En las figura 1a, 1b y 1c se presentan imágenes donde se observa el efecto de los extractos caracterizados en los ejemplos 2 y 3; diluidos 1/50, 1/100 y 1/500 veces frente a Botrytis cinerea, así como el crecimiento del hongo sin extracto (figura 2). 35
Tabla II. Ensayos de actividad antifúngica. Medidas del crecimiento de hongos
- Hongos filamentosos
- Control (diámetro en cm) diámetro en cm
- Extracto Blanco
- Extracto Tinto
- 1/50
- 1/100 1/500 1/50 1/100 1/500
- Botrytis cinerea
- 5 6 6,8 8,5 7 7,5 7,5
- % RC vs C
- - - - 60 40
- % AC vs C
- 20 36 70 40 50 50
- Penicillium sp.
- 6,5 4,4 5 8,5 1,9 1,9 5
- % RC vs C
- 32,3 23,1 - 70,8 70,8 23,1
- % AC vs C
- - - 30,1 - 7,7 30,1
- A. flavus
- 2,5 2,8 2,6 4 1,6 1,8 2,9
- % RC vs C
- - - - 64 72 -
- % AC vs C
- 12 4 60 - - 16
- -
- % RC vs C=
- Porcentaje de reducción de crecimiento frente al control
- % AC vs C=
- Porcentaje de aumento de crecimiento frente al control
Tabla III. Actividad frente a Hongos filamentosos (Concentración de los extractos y % de 5 inhibición del crecimiento).
- Botrytis cinerea Penicillium sp. A. flavus
- Concentración del extracto
- % RC vs C=Porcentaje de reducción de crecimiento frente al control
- EXTRACTO BLANCO
- 1/50
- 32,3
- 1/100
- 23,1
- 1/500
- EXTRACTO TINTO
- 1/50
- 60 70,8 64
- 1/100
- 40 70,8 72
- 1/500
- 23,1
Se confirma el efecto inhibitorio del extracto tinto sobre los hongos filamentosos ensayados a concentraciones 1/50 y 1/100 para el extracto tinto.
Tabla VI. Resumen de los resultados de CMI de los extractos frente a las Bacterias ensayadas
- Microorganismos
- EXTRACTO BLANCO EXTRACTO TINTO
- S. aureus
- >1/10 1/100-1/500
- M. luteus
- >1/500 1/10-1/50
- L. innocua
- 1/100-1/500 1/100-1/500
- P. mirabilis
- 1/10-1/50 1/100-1/500
- P. aeruginosa
- >1/10 1/100-1/500
En el caso del extracto blanco puede observarse que tiene efecto inhibitorio del crecimiento de M. luteus y L. innocua. El extracto tinto inhibe el crecimiento las bacterias resaltadas en la 5 tabla VI., donde se engloban bacterias tanto gram positivas como gram negativas.
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