KR101769038B1

KR101769038B1 - 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101769038B1
Application number: KR1020170027636A
Authority: KR
Inventors: 이종은; 최성규; 선우철; 신수현; 이대우
Original assignee: 주식회사 더마랩
Priority date: 2017-03-03
Filing date: 2017-03-03
Publication date: 2017-08-17

Abstract

본 발명은 황금소나무 잎과 송라를 발효추출한 후, 발효액을 방짜유기 용기에서 숙성함으로써 항균활성과, 보존성이 증대된 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물을 제조하는 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물{Method for preparing fermented extract of Pinus densiflora for. aurescens leaf and Usnea longissima and cosmetic composition containing the same}

본 발명은 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 황금소나무 잎과 송라를 1차 발효한 후, 발효액을 방짜유기 소재의 그릇에서 숙성함으로써 항균활성 및 보존성을 증대시킨 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물을 제조하고 이를 화장료로 이용하는 기술에 관한 것이다.

황금소나무(Pinus densiflora for. aurescens)는 소나무(Pinus densiflora)의 한 품종으로 전 세계적으로 매우 희귀한 것으로 알려져 있다. 잎의 기저부분만 빼고는 전체적으로 황금색을 띠는 특징을 가지고 있다.

솔잎은 예로부터 한방 또는 민간 요법의 약용이나 건강식품으로 이용되고 있다. 동의보감에 의하면 솔잎은 위장병, 중풍, 고혈압, 신경통, 천식 등에 치료 효과가 있다고 알려져 있다. 솔잎의 이러한 약리작용은 솔잎에 함유되어 있는 정유 성분, 단백질, 비타민 A, 비타민 C, 비타민 K, 비타민 P(루틴), 인, 철분, 효소, 탄닌, 엽록소, 고미성 물질, 플라보노이드 등의 기능성 물질에 의해 이루어진다. 특히 비타민 P(루틴)는 혈액순환을 촉진하고 고혈압과 노화를 방지하는 데 탁월한 효과가 있다. 또한 솔잎의 휘발성 정유는 삼림욕 시 피로를 해소시켜 주는 역할을 한다.

송라(松蘿, Usnea longissima)는 노란색 또는 녹색이 도는 관목상 지의로, 긴 줄기와 뒤엉킨 실타래처럼 생긴 원판 모양의 부착기를 갖는다. 주로 한방에서 이뇨제, 해열제, 거담제로 쓴다. 온대 지방의 높은 산에서 한대에 걸쳐 자라는데 한국, 일본 등지에 분포한다.

우리나라에는 세계적으로 특이한 방짜라는 금속이 있는데, 이 방짜는 구리 78%와 주석22%의 정확한 비율로 합금하여 만든 최상질의 놋쇠로서 식기, 촛대, 향로, 소반, 대야, 악기, 불구(佛具) 등과 같은 전통적인 민속 공예재료로 가장 폭 넓게 사용되고 있다. 방짜는 스스로 살균 소독작용을 하기 때문에 식기에 가장 적합하며, 방짜로 만든 식기를 '방짜유기' 또는 '놋그릇'이라고 한다. 방짜유기 그릇은 예부터 독성이 없고 항균 및 멸균 효과가 뛰어나며, 미네랄을 생성하고 음식의 신선도를 오래 유지할 수 있는 그릇으로 알려져 있다. 방짜유기 그릇에 대한 항균 효과는 최근 연구에서 밝혀진바 있다. 즉, 방짜유기는 현대사회에서 가장 중요시하는 웰빙식기로 그 어떤 식기보다도 탁월한 식기라 할 수 있다. 한편, 천연 유래의 화장료의 경우 안전하여 장기간 사용하여도 인체에 무해하다는 장점을 가짐에 대하여, 제형 내에서 변질가능성이 커서 보존성에 있어서 문제점을 가지고 있다.

이에 본 발명자들은 상기와 같은 방짜유기의 기능성에서 착안하여, 천연유래의 황금소나무 잎과 송라를 발효 추출한 후 방짜유기 그릇에서 숙성시키면 항균활성이 증대되고, 발효추출물의 변질을 막아 보존성이 우수해 진다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

대한민국 공개특허 제10-2009-0076625호 (2009.07.13) 대한민국 공개특허 제10-2013-0073579호 (2013.07.03)

본 발명은 황금소나무 잎과 송라를 발효추출한 후, 발효액을 방짜유기 용기에서 숙성함으로써 미생물 생장 억제 효과가 증진되고, 보존성이 증대된 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명에 따르면, (A)건조된 황금소나무 잎과 송라(Usnea longissima)를 정제수로 추출하는 단계; (B)상기 추출물에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 접종하고 30~50℃에서 2~3일간 발효하는 단계; (C)80~100℃에서 실활시키는 단계; 및 (D)발효물을 방짜유기 용기에서 5~15일간 5~15℃에서 숙성하는 단계를 포함하는 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물의 제조방법이 제공된다.

상기 (A)단계에서, 황금소나무 잎과 송라는 건조 중량으로 1~5:1의 비율로 혼합하는 것이며, 더욱 바람직하게는 3:1로 혼합하는 것이다. 상기 (D)단계에서 발효물을 방짜유기 용기에서 10일간 10℃에서 숙성하는 것이 더욱 바람직하다.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 상기 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물을 조성물 전체 중량의 0.05~10중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 화장료 조성물은 항균용 화장료조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 방법으로 제조된 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물은 항균활성이 우수하며, 미생물 생장 억제 효과를 증진시켜 화장료 조성물의 변질을 감소시키는 효과가 있다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명에 따르면, (A)건조된 황금소나무 잎과 송라(Usnea longissima)를 정제수로 추출하는 단계; (B)상기 추출물에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 접종하고 30~50℃에서 2~3일간 발효하는 단계; (C)80~100℃에서 실활시키는 단계; 및 (D)발효물을 방짜유기 용기에서 5~15일간 5~15℃에서 숙성하는 단계를 포함하는 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물의 제조방법이 제공된다.

각 단계를 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 먼저 황금소나무 잎과 송라를 혼합하여 용매로 추출한다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 황금소나무 잎과 송라를 건조 중량으로 1~5:1 비율로 혼합하여 정제수로 추출한다. 더욱 바람직하게는 황금소나무 잎과 송라를 3:1로 혼합하여 추출하는 경우에 항균활성 및 보존성이 더욱 우수하였다.

이어서, 추출물에 미생물을 접종하여 발효시킨다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 추출물에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 접종하고 30~50℃에서 2~3일간 발효시킨다. 더욱 바람직하게는 40℃의 항온조에서 2일간 발효시킨다.

위와 같이 발효공정을 진행한 후, 80~100℃에서 발효균을 실활시킨다. 이어서 상기 발효물을 방짜유기 용기에 담아 숙성시킨다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 발효물을 방짜유기 용기에서 5~15일간 5~15℃에서 숙성시킨다. 더욱 바람직하게는 10일간 10℃에서 숙성한다.

이와 같이 방짜유기 용기에 담아 숙성시켜 제조되는 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물은 잡균 번식을 억제함으로써 발효물의 변질을 막아주고 항균효과를 증진시키는 것을 확인할 수 있었다.

활성성분으로서의 상기 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물은 조성물 전체중량에 대하여 0.05~10중량% 함유된다. 상기 혼합발효추출물은 그 자체로써 아토피 피부염을 악화시키는 대표적인 그람양성세균인 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 여드름 원인균으로 잘 알려진 세균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균활성이 우수하므로 항균용 화장료 조성물로 사용될 수 있다. 또한, 상기 혼합발효추출물은 잡균 번식을 억제할 수 있어 방부제 대신에 사용될 수 있으므로 방부제의 사용을 줄이고, 다양한 기능성 화장료 조성물에 적용될 수 있다는 장점을 가진다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 방짜유기 그릇에서 후숙성한 발효추출물 제조

건조된 황금소나무 잎과 송라를 3:1의 중량비로 혼합한 뒤 10배 중량의 정제수에 넣고 65℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출액에 1×10⁶ CFU/mL의 Bacillus subtilis를 접종한 후 40℃의 항온조에서 48시간 발효하였다. 상기 발효물을 80~100℃에서 30분 동안 실활시킨 후 상온으로 냉침하였다. 이 후 상기 발효물을 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과하였다. 그리고 방짜유기 그릇에 넣고 10일간 10℃에서 숙성시켰다. 숙성시킨 발효 추출물을 60℃ 이하에서 감압 농축하여 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물을 제조하였다.

비교예 1: 방짜유기 후숙성과정을 거치지 않은 발효추출물 제조

건조된 황금소나무 잎과 송라를 3:1의 중량비로 혼합한 뒤 10배 중량의 정제수에 넣고 65℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출액에 1×10⁶ CFU/mL의 Bacillus subtilis를 접종한 후 40℃의 항온조에서 48시간 발효하였다. 상기 발효물을 80~100℃에서 30분 동안 실활시킨 후 상온으로 냉침하였다. 이 후 상기 발효물을 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과한 후 여액을 60℃ 이하에서 감압 농축하여 황금소나무 잎과 송라의 혼합발효추출물을 제조하였다.

비교예 2: 항아리 후숙성과정을 거친 발효추출물 제조

건조된 황금소나무 잎과 송라를 3:1의 중량비로 혼합한 뒤 10배 중량의 정제수에 넣고 65℃에서 3시간 동안 환류 추출하였다. 추출액에 1×10⁶ CFU/mL의 Bacillus subtilis를 접종한 후 40℃의 항온조에서 48시간 발효하였다. 상기 발효물을 80~100℃에서 30분 동안 실활시킨 후 상온으로 냉침하였다. 이 후 상기 발효물을 여과지(Qualitive Filter Paper No.2)를 이용하여 여과한 후 항아리에 넣고 10일간 10℃에서 숙성시켰다. 숙성시킨 발효 추출물을 60℃ 이하에서 감압농축하여 황금소나무 잎과 송라의 혼합추출물을 제조하였다.

시험예 1: 항균 활성 측정 분석

방짜유기 후숙성과정을 거친 발효추출물의 항균력을 확인하기 위해 고상배지를 활용하는 항균시험을 수행하였다. 이를 위하여 그람음성세균의 대표적인 세균으로 이 콜라이(E. coli)를 선택하였으며, 아토피 피부염이 있는 피부 병변에 과증식하여 아토피 피부염을 악화시키는 대표적인 그람양성세균인 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 그리고 여드름 원인균으로 잘 알려진 세균으로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 사용하여 plate paper difusion 항균테스트를 시험하였다. 페트리디쉬에 각 균주를 접종하고 그 위에 8mm 페이퍼 디스크(paper disk)를 올려놓은 후, 적절한 농도로 준비한 시료를 떨어뜨려 디스크에 흡수시킨 후, 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하여 생성된 미생물 생장 억제환의 직경을 측정하여 평가하였다. 대조군으로는 방짜유기 후숙성 과정을 거치지 않은 비교예 1과 항아리 후숙성 과정을 거친 비교예 2를 사용하였으며, 각 발효추출물의 항균 시험 농도를 1000ug/disk로 한정하여 수행한 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

시료	Bacterial growth inhibition zone (mm)
시료	E.Coli	S.aureus	P.acnes
실시예 1	6	8	5
비교예 1	3	4	2
비교예 2	5	6	4

상기 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 모든 혼합발효추출물에서 미생물 생장억제효과가 나타났으며, 방짜유기 후숙성 과정을 거친 실시예 1의 발효추출물에서 모든 균에 대하여 가장 우수한 생장 억제 효과를 나타내었다. 이를 통하여 방짜유기 후숙성 공정을 통하여 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물의 항균 활성이 증대됨을 알 수 있었다.

시험예 2: 세포독성 측정 시험

세포독성은 3-(4,5-dimethythiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide(MTT) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하였다. 쥐 유래 멜라닌 세포 B16F10를 2×10⁴cells/well 농도로 96 well plate에 접종한 후, 각 well 에 시료를 투여하여 CO₂배양기에서 24시간 배양하였다. MTT 용액(5ug/ml)을 첨가하고 4시간 후 원심 분리하여 상층액을 제거하고, 10ul acid-iso-propanol(0.04N acid in iso-propanol)를 첨가한 후 푸른색의 formazan이 용출되도록 하여 microplate reader로 556nm에서 흡광도를 측정하였다.

시료 농도 (㎍/㎖)	세포 생존율(%)
시료 농도 (㎍/㎖)	실시예 1	비교예 1	비교예 2
100	100	99.5	100
200	100	94.3	99.4
500	99.5	89.6	96.8
1000	97.4	84.1	91.0

상기 표 2의 결과에서 보는 바와 같이, 방짜유기 그릇에서 후숙성과정을 거친 실시예 1의 농도별 시료 처리군에서 우수한 세포 생존율을 나타내었다. 이는 방짜유기 그릇에서의 후숙성 과정을 통해 독성이 감소됨을 나타낸다.

시험예 3: 발효추출물 보존력 측정 실험

상기 실시예 1과 비교예 1, 2 발효추출물의 보존력을 측정하였다.

각 시료를 용기에 넣은 뒤 시간 경과에 따른 변질 정도를 하기 표 3의 기준에 따라 평가하였으며, 각 시료는 평가기간 동안 20℃를 유지하도록 하였다.

평가기준	변질 정도
-	변색 및 변취 없음
+	미미한 변색 및 변취
++	심한 변색 및 변취
+++	매우 심한 변색 및 변취

경과 일수	평가 결과
경과 일수	실시예 1	비교예 1	비교예 2
3일	-	-	-
6일	-	++	-
9일	-	+++	+
12일	+	+++	+
15일	+	+++	++

상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 방짜유기 그릇에서 후숙성 과정을 거친 실시예 1 시료에서 변질없이 가장 긴 시간동안 보존됨을 확인할 수 있었다.

Claims

(A)건조된 황금소나무 잎과 송라(Usnea longissima)를 정제수로 추출하는 단계;
(B)상기 추출물에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 접종하고 30~50℃에서 2~3일간 발효하는 단계;
(C)80~100℃에서 실활시키는 단계; 및
(D)발효물을 방짜유기 용기에서 5~15일간 5~15℃에서 숙성하는 단계를 포함하는 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물의 제조방법.
제1항에 있어서, (A)단계에서, 황금소나무 잎과 송라는 건조 중량으로 1~5:1의 비율로 혼합되는 것임을 특징으로 하는 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물의 제조방법.
제1항에 있어서, (D)단계에서 상기 발효물을 방짜유기 용기에서 10일간 10℃에서 숙성하는 것임을 특징으로 하는 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물의 제조방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 의하여 제조된 상기 황금소나무 잎과 송라 혼합발효추출물을 조성물 전체 중량에 대해서 0.05~10중량% 함유하는 화장료 조성물.
제4항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항균용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.