ES2477416T3

ES2477416T3 - Poliamino�cidos cati�nicos y usos de los mismos

Info

Publication number: ES2477416T3
Application number: ES10741313.0T
Authority: ES
Inventors: Kazunori Kataoka; Shourong Wu; Takehiko Ishii; Hyunjin Kim; Kanjiro Miyata; Nobuhiro Nishiyama
Original assignee: University of Tokyo NUC
Current assignee: University of Tokyo NUC
Priority date: 2009-02-13
Filing date: 2010-02-15
Publication date: 2014-07-16
Anticipated expiration: 2030-02-15
Also published as: EP2399948B1; EP2399948A4; WO2010093036A1; JPWO2010093036A1; US8546487B2; EP2399948A1; JP4582821B2; US20120053295A1

Abstract

Poliaminoácido catiónico, que está representado por la siguiente fórmula (1): en la que: R1 representa un grupo hidroxilo, un grupo alquiloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, un grupo alqueniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 2 a 12 átomos de carbono, un grupo alquiniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que 10 tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o un grupo imino sustituido con alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono; R2 representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o un grupo alquilcarbonilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 24 átomos de carbono; R3a y R3b representan cada uno independientemente un grupo metileno o un grupo etileno; R4a y R4b se eligen cada uno independientemente del mismo grupo o de grupos diferentes en el grupo que consiste en los siguientes grupos: -NH-(CH2)p1-[NH-(CH2)q1-]r1NH2 (i); -NH-(CH2)p2-N[-(CH2)q2-NH2]2 (ii); -NH-(CH2)p3-N{[-(CH2)q3-NH2][-(CH2)q4-NH]r2H} (iii); y -NH-(CH2)p4-N{-(CH2)q5-N[-(CH2)q6NH2]2}2 (iv), en los que: p1 a p4, q1 a q6, y r1 y r2 representan cada uno independientemente un número entero de 1 a 5; del 5 al 40% de un número total del grupo de cada uno de R4a y R4b tienen al menos un grupo amino en el que un átomo de hidrógeno está sustituido por un grupo acilo que tiene un residuo hidrocarbonado alifático saturado o insaturado, lineal o ramificado que tiene de 6 a 27 átomos de carbono, o un grupo esteroloxicarbonilo; n representa un número entero de 30 a 5.000; e y representa un número entero de 0 a 5.000, siempre que, cuando R3a y R3b representan cada uno un grupo metileno, y representa un número entero menor que n.

Description

Poliamino�cidos cati�nicos y usos de los mismos

Campo técnico

La presente invención se refiere a un poliamino�cido cati�nico que tiene un grupo hidrófobo introducido en parte de una cadena lateral. Más específicamente, la presente invención se refiere a un poliamino�cido cati�nico que tiene una cadena lateral que tiene una pluralidad de diferentes grupos funcionales amina en un resto que incluye un grupo cati�nico y que tiene un grupo hidrófobo introducido en parte de la cadena lateral, y un complejo polii�nico (PIC) del poliamino�cido y un oligo o polinucle�tido.

T�cnica anterior

La aplicación de ARNip a tratamientos m�dicos se espera cada vez más debido a que el ARNip puede silenciar ARNm diana específica y eficazmente. Sin embargo, el desarrollo de un sistema de suministro eficaz es indispensable para aplicar el ARNip a tratamientos m�dicos. En los últimos años, se ha aclarado que un efecto terapéutico de ARNip desnudo sobre la degeneración macular relacionada con la edad (CNV) a través de su administración intraocular en un ensayo cl�nico no resulta de un efecto de silenciamiento g�nico específico de secuencia inducido por ARNip sino que resulta de un efecto no específico de secuencia mediante reconocimiento por receptor de tipo Toll-3 (TLR-3) sobre la superficie celular. Se ha considerado importante desarrollar un portador que sea estable fuera de las células y que pueda suministrar con precisión ARNip al interior de células en cualquiera de las aplicaciones de ARNip in vivo.

La poli(L-lisina) o polietilenimina, que hace tiempo que se conoce como pol�mero cati�nico para formar un complejo polii�nico (PIC) con ADN para introducir un gen en células eucariotas y expresar el gen, tiene un problema porque el compuesto no presenta eficiencia de expresión g�nica muy alta o presenta alta toxicidad en las células, por ejemplo. Se han proporcionado una amplia variedad de pol�meros cati�nicos con el fin de solucionar tal problema. Por ejemplo, un derivado de poli(L-lisina) en el que se han introducido un grupo hidrófilo (por ejemplo, polietilenglicol) y un grupo hidrófobo (por ejemplo, palmito�lo) mediante un grupo !-amino de poli(L-lisina) forma una vesícula en presencia de colesterol en un medio acuoso y la vesícula agrega ADN de pl�smido que contiene genes para formar un complejo estable (documento de patente 1). Además, un PIC formado por ADN de pl�smido con un derivado de copol�mero cuya carga cati�nica y densidad de reticulación de disulfuro se han modulado mediante la tiolaci�n de un grupo !-amino de poli(L-lisina) en un copol�mero de poli(L-lisina)-polietilenglicol muestra alta estabilidad en un medio extracelular y libera de manera eficaz el ADN en un compartimento intracelular (documento no de patente 1, algunos de los inventores de la presente invención son coautores del documento no de patente 1). Además, los inventores de la presente invención han confirmado, como parte de tal investigación, que, cuando se producen poli(N-[N-(2aminoetil)-2-aminoetil]aspartamida (PAsp(DET))) que tiene una estructura de etilendiamina en una cadena lateral y un copol�mero de bloque que incluye la PAsp(DET) como un componente de bloque del copol�mero de bloque, tales pol�meros muestran baja citotoxicidad e introducen ADN de pl�smido al interior de células con alta eficacia para expresar un gen incorporado en el ADN eficazmente (véase el documento no de patente 2, documento de patente 2 y documento de patente 3).

Documentos de la técnica anterior

Documentos de patente

[Documento de patente 1] Documento WO 99/61512

[Documento de patente 2] Documento WO 2006/085664 A1

[Documento de patente 3] Documento WO 2007/099660 A1

Documentos no de patente

[Documento no de patente 1] K. Mihata et al., J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 2355-2361

[Documento no de patente 2] K. Miyata et al., J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 16287-16294

Sumario de la invención

Problema que resuelve la invención

PAsp(DET) y un copol�mero de bloque de la misma dado a conocer en los documentos de patente 2 y 3 presentan baja toxicidad y alta eficacia de introducción de genes en células diana a las que se les tiene que suministrar una molécula de ácido nucleico, pero tal como se mencion� anteriormente, puede no formar necesariamente un PIC que tiene alta estabilidad en condiciones fisiológicas con un ácido nucleico de bajo peso molecular tal como ARNip, que se espera cada vez más para su aplicación en tratamientos m�dicos. Por tanto, un objeto de la presente invención es proporcionar un material de pol�mero sintético que puede servir como portador que presenta una mayor estabilidad con un ácido nucleico de bajo peso molecular tal como ARNip en condiciones fisiológicas y que presenta

5 baja toxicidad y alta eficacia de introducción de genes en células diana a las que se les tiene que suministrar una molécula de ácido nucleico.

Medios para solucionar el problema

10 En esta ocasión, los inventores de la presente invención han encontrado que un poliamino�cido cati�nico que tiene una cadena lateral que tiene una pluralidad de diferentes grupos funcionales amina en un resto que incluye un grupo cati�nico y que tiene un grupo hidrófobo introducido en parte de la cadena lateral no presenta toxicidad o presenta poca toxicidad en células diana a las que se les tiene que suministrar una molécula de ácido nucleico, y puede formar un PIC estable con un ácido nucleico de bajo peso molecular tal como también ARNip. Los inventores

15 también han encontrado que el PIC as� formado forma una asociación estable relativamente monodispersada que tiene un diámetro promedio de aproximadamente cien nm en un medio acuoso en una condición dada, se incorpora al interior de células diana con alta eficacia y ejerce un efecto que presenta inherentemente el ARNip.

Seg�n la presente invención, el problema se soluciona proporcionando un derivado de poliamino�cido, que se 20 representa mediante cada una de las siguientes fórmula (1) y fórmula (2):

en la que: R1 representa un grupo hidroxilo, un grupo alquiloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que

25 tiene de 1 a 12 átomos de carbono, un grupo alqueniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 2 a 12 átomos de carbono, un grupo alquiniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o un grupo imino sustituido con alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono;

30 R2 representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o un grupo alquilcarbonilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 24 átomos de carbono;

R3a y R3b representan cada uno independientemente un grupo metileno o un grupo etileno;

35 R4a y R4b se eligen cada uno independientemente del mismo grupo o de grupos diferentes en el grupo que consiste en los siguientes grupos:

-NH-(CH2)p1-[NH-(CH2)q1-]r1NH2 (i); 40 -NH-(CH2)p2-N[-(CH2)q2-NH2]2 (ii);

-NH-(CH2)p3-N{[-(CH2)q3-NH2][-(CH2)q4-NH]r2H} (iii); y

45 -NH-(CH2)p4-N{-(CH2)q5-N[-(CH2)q6-NH2]2}2 (iv),

en los que: p1 a p4, q1 a q6, y r1 y r2 representan cada uno independientemente un número entero de 1 a 5;

del 5 al 40% de un número total del grupo de cada uno de R4a y R4b tienen al menos un grupo amino en el que un 50 átomo de hidrógeno est� sustituido por un grupo acilo que tiene un residuo hidrocarbonado alif�tico saturado o

insaturado, lineal o ramificado que tiene de 6 a 27 átomos de carbono, o un grupo esteroloxicarbonilo; n representa un número entero de 30 a 5.000; e y representa un número entero de 0 a 5.000, siempre que, cuando R3a y R3b representan cada uno un grupo metileno, y representa un número entero menor que

n.

en la que: R2, R3a, R3b, R4a, R4b, n e y tienen los mismos significados que los definidos para la fórmula (1);

L1 representa -S-S-o un enlace de valencia;

15 L2 representa -NH-, -O-, -O(CH2)p1-NH-o -L2a-(CH2)q1-L2b-, en los que: p1 y q1 representan cada uno independientemente un número entero de 1 a 5; L2a representa OCO, OCONH, NHCO, NHCOO, NHCONH, CONH,

o COO; y L2b representa NH u O;

20 R5 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono; y m representa un número entero de 30 a 20.000.

A menos que se indique lo contrario, debe entenderse que los grupos o restos en la fórmula (1) y fórmula (2), o los grupos definidos para las mismas est�n unidos covalentemente en la direccionalidad descrita. A este respecto, sin

25 embargo, una unidad de repetición que tiene un número de repetición de n-y y una unidad de repetición que tiene un número de repetición de y en la fórmula (1) y fórmula (2) est�n dispuestas de cualquier manera adecuada, y puede aplicarse cualquier estructura adecuada tal como una estructura de bloque, una estructura al azar o una estructura alterna.

30 Breve descripción de los dibujos

[Figura 1] La figura 1 es un diagrama para ilustrar las fórmulas estructurales respectivas de PAsp(DET) (a la izquierda de la figura) y PAsp(DET)-ST preparado mediante un método según el ejemplo 1(1).

35 [Figura 2] La figura 2 es una fotografía como alternativa a un diagrama para mostrar los resultados de electroforesis en gel de poliacrilamida de un PIC de PAsp(DET)-ST al 19% y ARNip formado mediante un método según el ejemplo 1(2).

[Figura 3] La figura 3 es un gráfico que ilustra los resultados de la evaluación del diámetro de partícula y el índice de

40 polidispersidad del PIC del ejemplo 1(2) mediante dispersi�n de luz dinámica. A N/P=5,0, una micela de ST al 12% tenía un tamaño promedio de 171 nm y un índice de polidispersidad (PDI) de 0,144, mientras que un micela de ST al 19% tenía un tamaño promedio de 152 nm y un índice de polidispersidad de 0,100.

[Figura 4] La figura 4 es un gráfico que ilustra los resultados de una prueba de silenciamiento de un gen end�geno 45 Bcl-2 usando el PIC del ejemplo 2(1).

[Figura 5] La figura 5 es un gráfico que ilustra los resultados de la evaluación de citotoxicidad en la prueba de silenciamiento usando el PIC en el ejemplo 2(1).

50 [Figura 6] La figura 6 es un gráfico que ilustra los resultados de una prueba de silenciamiento de un gen end�geno de VEGF usando el PIC en el ejemplo 2(2) (evaluación de la expresión de VEGF).

[Figura 7] La figura 7 es un gráfico que ilustra los resultados de la prueba de silenciamiento del gen end�geno de VEGF usando el PIC en el ejemplo 2(2) (evaluación de VEGF a nivel proteico).

[Figura 8] La figura 8 es un diagrama conceptual que ilustra la formación de micelas de pol�mero de PEG-SSPAsp(DET)-ST y ARNip sintetizado en el ejemplo 3(1).

[Figura 9] La figura 9 es un gráfico que ilustra los resultados de una prueba de transfecci�n de ARNip usando un complejo de PEG-SS-PAsp(DET)-ST y ARNip del ejemplo 3(3).

Descripci�n de las realizaciones

A continuación en el presente documento, se describe la presente invención más específicamente.

Sin querer limitarse a ninguna teoría, un poliamino�cido cati�nico de la presente invención tiene una cadena lateral que tiene una pluralidad de diferentes grupos funcionales amina en un resto que incluye un grupo cati�nico y por tanto presenta pKa en una pluralidad de fases. En condiciones fisiológicas a pH 7,4, la pluralidad de grupos funcionales amina est�n cada uno en un estado parcialmente protonado y pueden formar un complejo polii�nico (PIC) a través de una interacción con un ácido nucleico. Además, puede entenderse que, cuando el PIC as� formado se capta en el interior del endosoma (pH 5,5), la protonaci�n del poliamino�cido cati�nico avanza adicionalmente debido a una disminución en el pH y la promoción de la salida del endosoma a través de un efecto tampón (o efecto de esponja de protones) disminuye el daño en las células. Mientras tanto, se entiende que, cuando se introduce un grupo hidrófobo al interior de un resto que incluye un grupo cati�nico a una razón específica, la introducción no afecta de manera adversa al efecto tampón (o efecto de esponja de protones) y el PIC se estabiliza a través de una interacción hidrófoba, y como resultado, se forma una asociación estable relativamente monodispersada que tiene un diámetro promedio de aproximadamente cien nm. Además, cuando se usa el poliamino�cido cati�nico tal como se describió anteriormente según la presente invención en forma de un copol�mero de bloque con un segmento de PEG de la misma manera que la descrita en el documento de patente 3, el copol�mero de bloque puede formar una micela de pol�mero que presenta capacidad de retención satisfactoria en la sangre en circulación mientras mantiene al menos las características poseídas por el propio poliamino�cido cati�nico.

El resto alquilo en un grupo alquilo lineal o ramificado, grupo imino sustituido con alquilo, o similares que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, que se define por R1 y R2 en la fórmula (1) y fórmula (2), puede ser, por ejemplo, un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo n-butilo, un grupo sec-butilo, un grupo tercbutilo grupo, un grupo n-hexilo, un grupo decilo y un grupo undecilo. Un resto alquenilo o alquinilo en un grupo alqueniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 2 a 12 átomos de carbono, un grupo alquiniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o similares puede mostrarse a modo de ejemplo mediante uno que incluye un doble enlace o un triple enlace en el grupo alquilo que tiene 2 o más átomos de carbono tal como se mostr� a modo de ejemplo anteriormente.

Para tal grupo o resto, un sustituyente en un caso “sustituido” puede mostrarse a modo de ejemplo por, pero sin limitarse a, un grupo alcoxilo C1-6, un grupo ariloxilo, un grupo ariloxilo C1-3, un grupo ciano, un grupo carboxilo, un grupo amino, un grupo alcoxicarbonilo C1-6, un grupo acilamida C2-7, un grupo tri-alquil-siloxilo C1-6, un grupo siloxilo

o un grupo sililamino, o puede mostrarse a modo de ejemplo por un grupo formilo acetalado, un grupo formilo o un halógeno tal como cloro o flúor. En este contexto, por ejemplo, la expresión “C1-6” significa de 1 a 6 átomos de carbono y se usa con el mismo significado en la siguiente descripción. Además, un resto alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono en el grupo alquilcarbonilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 24 átomos de carbono puede seleccionarse con referencia a los ejemplos, y un resto alquilo que tiene 13 o más átomos de carbono puede ser, por ejemplo, un grupo tridecilo, un grupo tetradecilo, un grupo pentadecilo, un grupo nonadecilo, un grupo docosanilo y un grupo tetracosilo.

Para el grupo metileno o el grupo etileno en la definición para R3a y R3b, se entiende que, cuando tanto R3a como R3b representan cada uno un grupo metileno, una unidad de repetición que implica tal definición representa una unidad derivada de poli(ácido asp�rtico), y las unidades respectivas que tienen estos grupos est�n presentes al azar. Mientras tanto, cuando tanto R3a como R3b representan cada uno un grupo etileno, una unidad de repetición que implica tal definición representa una unidad derivada de poli(ácido glut�mico), y en este caso, representa un pol�mero en el que y representa un número entero de 0 o n-y representa un número entero de 0. El primero representa, por ejemplo, una unidad derivada de poli(ácido ∀-glut�mico) obtenida mediante la polimerizaci�n de éster #-benc�lico del ácido glut�mico-anh�drido N-carbox�lico. Mientras tanto, el último representa, por ejemplo, una unidad derivada de poli(ácido #-glut�mico) producida por una cepa bacteriana que pertenece al género de bacterias Bacillus tal como Bacillus natto.

El grupo elegido del grupo que consiste en:

-NH-(CH2)p1-[NH-(CH2)q1-]r1NH2 (i);

-NH-(CH2)p2-N[-(CH2)q2-NH2]2 (ii);

-NH-(CH2)p3-N{[-(CH2)q3-NH2][-(CH2)q4-NH]r2H} (iii); y

-NH-(CH2)p4-N{-(CH2)q5-N[-(CH2)q6-NH2]2}2 (iv),

que se define para el grupo de cada uno de R4a y R4b, es preferiblemente el mismo grupo, y p1 a p4 y q1 a q6 representan independientemente cada uno preferiblemente 2 � 3, más preferiblemente 2. Mientras tanto, r1 y r2 representan independientemente cada uno preferiblemente un número entero de 1 a 3.

En el grupo de cada uno de R4a y R4b, un átomo de hidrógeno de al menos un grupo amino en el grupo que representa del 5 al 40%, preferiblemente del 10 al 30%, más preferiblemente del 15 al 25% del número total de n-y o y del grupo est� sustituido por un grupo acilo que tiene un residuo hidrocarbonado alif�tico saturado o insaturado, lineal o ramificado que tiene de 6 a 27 átomos de carbono, o un grupo esteroloxicarbonilo. Cuando el residuo hidrocarbonado alif�tico est� saturado, el residuo es equivalente a un grupo alquilo que tiene de 6 a 27 átomos de carbono y se muestra a modo de ejemplo mediante un grupo pentacosilo, un grupo hexacosilo o un grupo heptacosilo as� como el grupo alquilo. El residuo hidrocarbonado alif�tico insaturado corresponde a un grupo en el que de 1 a 5 enlaces sencillos carbono-carbono en una cadena del grupo alquilo est�n sustituidos por dobles enlaces carbono-carbono. Un grupo acilo (RCO-) que tiene tal residuo (R) puede mostrarse a modo de ejemplo por, pero sin limitarse a, ácido l�urico (o ácido dodecanoico), ácido mir�stico (o ácido tetradecanoico), ácido palm�tico (o ácido hexadecanoico), ácido palmitoleico (o ácido 9-hexadecenoico), ácido esteárico (o ácido octadecanoico), ácido oleico, ácido linoleico, ácido linol�nico, ácido eleoeste�rico (o ácido 9,11,13-octadecatrienoico), ácido araqu�dico, ácido araquid�nico, ácido beh�nico, ácido lignoc�rico, ácido nerv�nico, ácido cer�tico o ácido mont�nico.

El esterol usado en el presente documento significa un compuesto natural, semisint�tico o sintético basado en un anillo de ciclopentanona-hidrofenantreno (C17H28) y derivados del mismo. Por ejemplo, un esterol natural se muestra a modo de ejemplo por, pero sin limitarse a, colesterol, colestanol, dihidrocolesterol, ácido cólico, campesterol o sitosterol. Compuestos semisint�ticos o sintéticos del mismo pueden ser, por ejemplo, precursores sintéticos de estos productos naturales (si es necesario, que abarcan un compuesto en el que parte o todos, si est�n presentes, de determinados grupos funcionales, grupos hidroxilo se han protegido con un grupo protector de hidroxilo convencional, o un compuesto en el que se ha protegido un grupo carboxilo con protección de carboxilo). Además, el derivado de esterol significa que, por ejemplo, sin afectar de manera adversa al objeto de la presente invención, puede introducirse un grupo alquilo C1-12, un átomo de halógeno tal como cloro, bromo o flúor en un anillo de ciclopentanona-hidrofenantreno, y el sistema de anillos puede estar saturado o parcialmente insaturado. Un residuo del derivado de esterol es preferiblemente un grupo en el que se ha eliminado un átomo de hidrógeno de un grupo hidroxilo en la posición 3 de colesterol, colestanol o dihidroxicolesterol. El residuo es más preferiblemente un grupo en el que se ha eliminado un átomo de hidrógeno de un grupo hidroxilo en la posición 3 de colesterol. Un esterol del grupo esteroloxicarbonilo se muestra a modo de ejemplo por uno de origen de aceite animal o vegetal tal como colesterol, colestanol, dihidrocolesterol, ácido cólico, campesterol o sitosterol.

n, que representa el número de unidades de repetición de un amino�cido, puede representar de 30 a 5.000, y en vista de conveniencia en la síntesis, puede representar de 30 a 300, preferiblemente de 60 a 150, más preferiblemente de 60 a 100. Además, y puede representar de 0 a 5.000, y en vista de conveniencia en la síntesis, puede representar de 30 a 300, preferiblemente de 60 a 150, más preferiblemente de 60 a 100.

Seg�n la presente invención, también puede proporcionarse un copol�mero de bloque representado por la fórmula (2). En la fórmula (2), R2, R3a, R3b, R4a, R4b, n e y en la fórmula tienen los mismos significados que los definidos para la fórmula (1) y descritos anteriormente.

L1 representa -S-S-o un enlace de valencia. Mientras tanto, L2 representa -NH-, -O-, -O(CH2)p1-NH-o -L2a-(CH2)q1-L2b-, en los que: p1 y q1 representan cada uno independientemente un número entero de 1 a 5; L2a representa OCO, OCONH, NHCO, NHCOO, NHCONH, CONH o COO; y L2b representa NH u O. L1 y L2 necesitan combinarse entre s� de modo que puedan formar un grupo de unión. Por ejemplo, cuando L2 representa -NH-, L1 no representa -S-Ssino un enlace de valencia. -L1-L2-preferido es uno que forma un grupo de unión en el caso en el que L1 representa -S-S-.

R5 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono. Como ejemplos del mismo, se aplican los descritos para R1. m, que representa el número de unidades de repetición de etilenglicol (u oxietileno), representa un número entero de 30 a 20.000, preferiblemente de 200 a 2.000, más preferiblemente de 500 a 1.000.

El poliamino�cido representado por la fórmula (1) puede prepararse, por ejemplo: sometiendo un poli(éster de amino�cido), que se prepara mediante la polimerizaci�n de un anh�drido N-carbox�lico convencional derivado a partir de un éster de ácido asp�rtico o un éster de ácido glut�mico, a aminolisis usando una poliamina que corresponde a un residuo de poliamina del grupo de cada uno de R4a y R4b, para introducir el residuo de poliamina en una cadena lateral del poliamino�cido; y sometiendo un grupo amino de un resto poliamina as� introducido a reacción con una cantidad apropiada de un ácido carbox�lico activado, que se obtiene mediante la activación de un grupo carboxilo de

un ácido carbox�lico que corresponde a un grupo acilo que tiene el residuo hidrocarbonado alif�tico, si se requiere. El copol�mero de bloque de la fórmula (2) puede prepararse según un método de unión convencional para un segmento de polietilenglicol y el poliamino�cido preparado tal como se describió anteriormente, o puede prepararse según el método descrito en el documento no de patente 3 que incluye preparar un copol�mero de bloque que tiene el residuo de poliamina libre de un grupo hidrófobo y entonces llevar a cabo una reacción con un ácido carbox�lico activado. La introducción de un grupo hidrófobo excluyendo el grupo acilo también puede llevarse a cabo mediante una reacción convencional de un grupo amino y un producto esterificado de carbonato activo que porta el grupo hidrófobo.

Los pol�meros de la fórmula (1) y la fórmula (2) que pueden proporcionarse tal como se describió anteriormente presentan los pKa en una pluralidad de fases, y por tanto pueden formar un complejo polii�nico (PIC) con un compuesto que puede cargarse con aniones en condiciones fisiológicas. El compuesto que puede cargarse con aniones puede ser una proteína, un lípido, un p�ptido o un ácido nucleico. En particular, se forma de manera conveniente un PIC con un ácido nucleico. Por tanto, a continuación en el presente documento, se describe un PIC de un ácido nucleico y un poliamino�cido cati�nico de la presente invención o un copol�mero de bloque del mismo con el fin de simplificar la descripción.

Tal como se describió anteriormente, el poliamino�cido cati�nico de la presente invención tiene un grupo hidrófobo en su cadena lateral, y por tanto el poliamino�cido cati�nico también puede formar un PIC con un ácido nucleico de bajo peso molecular en condiciones fisiológicas para proporcionar una vesícula o una asociación estable. El ácido nucleico que puede proporcionar un PIC según la presente invención usando el poliamino�cido cati�nico de la fórmula (1) o copol�mero de bloque de la fórmula (2) significa un poli u oligonucle�tido que incluye como unidad básica nucleótidos formados por una base de purina o pirimidina, una pentosa y ácido fosf�rico, y ejemplos del mismo pueden incluir oligo-o poli-ARN bicatenario, oligo-o poli-ADN bicatenario, oligo-o poli-ADN monocatenario, y oligo-o poli-ARN monocatenario. Además, también se incluyen oligo-o poli-ácido nucleico bicatenario y oligo-o poli�cido nucleico monocatenario en cada uno de los cuales existen ARN y ADN en un estado mixto en la misma cadena. Además, el nucleótido contenido en el ácido nucleico puede ser de tipo natural o de tipo no natural modificado químicamente, o puede tener añadido al mismo un grupo amino, un grupo tiol, un compuesto fluorescente o cualquier otra molécula. El ácido nucleico no est� limitado pero puede estar formado por de 4 a

20.000 bases, preferiblemente de 10 a 10.000 bases, más preferiblemente de 18 a 30 bases. Además, en consideración de funciones o acciones, pueden facilitarse ADN de pl�smido, ARNip, micro-ARN, ARNhp, un ácido nucleico antisentido, un ácido nucleico señuelo, un apt�mero y una ribozima.

Como ARNip, por ejemplo, pueden usarse todos de los designados para un gen o un polinucle�tido de interés mediante un método convencional. Para la longitud de cadena de ARNip, un resto para formar una hebra doble puede tener una longitud de preferiblemente de 15 a 50 bases, más preferiblemente de 18 a 30 bases, y se abarcan compuestos convencionales y todos los nucleótidos que tienen las mismas acciones o funciones que aquellos compuestos. Pueden diseñarse ejemplos específicos del ARNip con referencia a un gen que puede servir como diana de una terapia g�nica, pero no se limitan a los mismos. Los ejemplos de tales genes pueden incluir, pero no se limitan a, PKC∀ relacionado con una enfermedad tal como carcinoma de pulmón de células no pequeñas, BCL-2 relacionado con una enfermedad tal como melanoma maligno, ICAM-1 relacionado con enfermedad de Crohn, VHC relacionado con hepatitis de tipo C, TNF∀ relacionado con artritis reumatoide o psoriasis, receptor de adenosina AI relacionado con asma, c-raf cinasa relacionada con una enfermedad tal como cáncer de ovario, H-ras relacionada con una enfermedad tal como cáncer de páncreas, c-myc relacionada con arteriopat�a coronaria, PKA Ria relacionada con cáncer de intestino grueso, VIH relacionado con SIDA, ADN metil transferasa relacionada con cáncer sólido, receptor de VEGF relacionado con cáncer, enzima de reducción de ribonucle�tidos relacionada con cáncer de ri��n, CMV IE 2 relacionado con retinitis por CMV, MMP-9 relacionada con cáncer de pr�stata, TGF∃2 relacionado con glioma maligno, CD 49 d relacionado con esclerosis múltiple, PTP-1B relacionada con diabetes, cmyb relacionada con cáncer, EGFR relacionado con una enfermedad tal como cáncer de mama, y mdr1, autotaxina y gen de GLUT-1 relacionados con cáncer. En cuanto al ácido nucleico antisentido, pueden emplearse aquellos conocidos en la técnica o todos los que tienen las mismas funciones o acciones que aquellos como diana para formar un PIC según la presente invención.

Por tanto, el PIC del ácido nucleico y el compuesto representado por la fórmula (1) o la fórmula (2) tal como se describieron anteriormente, se proporciona como otro aspecto de la presente invención. Tal PIC del compuesto de la fórmula (1) o la fórmula (2) y, por ejemplo, ARNip, puede ser estable en condiciones fisiológicas generalmente cuando la razón de N/P es de 2 a 60.

Puede aplicarse la definición de la razón de N/P =[número total de grupo amino y grupo amino sustituido del resto policati�nico en la cadena lateral]/[número total de grupo fosfato en el ácido nucleico].

En cuanto al compuesto de la fórmula (1), una razón de N/P óptima varía dependiendo de la razón del grupo hidrófobo en el grupo amino total y por tanto no puede especificarse. Sin embargo, en general cuando se forma un PIC con ARNip de modo que la razón de N/P es de 5 o más, preferiblemente de 7 o más, puede proporcionarse una asociación estable que tiene un tamaño de diámetro de partícula promedio de aproximadamente cien y varias decenas de nm en condiciones fisiológicas tal como en la sangre en circulación. Tal PIC puede prepararse mezclando el compuesto de la fórmula (1) y ARNip en una disolución acuosa tamponada según sea necesario para

lograr la razón de N/P. Cuando se usa el copol�mero de bloque de la fórmula (2), y en particular, se aumenta la razón de un grupo hidrófobo, existe una tendencia de que tal copol�mero solo se asocie de manera autónoma en una disolución acuosa para formar una micela polim�rica. Por tanto, puede formarse un PIC estable en un intervalo más amplio de razones de N/P en comparación con el caso de usar el compuesto de la fórmula (1).

A continuación en el presente documento, se describe adicionalmente la presente invención mediante ejemplos específicos. Sin embargo, estos ejemplos se proporcionan únicamente con fines ilustrativos.

Ejemplo de producción 1

S�ntesis de octadecanoato de N-succinimidilo

Se sintetizó octadecanoato de N-succinimidilo según el siguiente artículo [N. M. Howarth, W. E. Lindsell, E. Murray,

P. N. Preson, Tetrahedron 61 (2005) 8875-8887]. Se disolvieron ácido esteárico (1,87 g, 6,56 mmol) y Nhidroxisuccinimida (0,76 g, 6,56 mmol) en 80 ml de diclorometano (DCM) y se sometieron a reacción con clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida (WSC) (1,25 g, 6,56 mmol) durante 48 horas. Entonces se lav� el producto de reacción con agua, se extrajo con DCM dos veces y se secó sobre MgSO2 para proporcionar un polvo blanco (1,4 g, rendimiento del 56%). Se calcul� la tasa de conversión de un grupo carboxilo en ácido esteárico mediante 1H-RMN y se encontr� que era del 96%.

Ejemplo 1

(1): Síntesis de PAsp(DET) con grupo estearo�lo introducido (PAsp(DET)-ST)

Se sometió L-aspartato de ∃-bencilo-anh�drido N-carbox�lico (BLA-NCA) a polimerizaci�n por escisión usando nbutilamina como iniciador para sintetizar poli(L-aspartato de ∃-bencilo) (PBLA) (grado de polimerizaci�n: 110). A continuación, se liofilizó PBLA (513 mg) a partir de benceno y entonces se disolvió en 25 ml de N-metil-2-pirrolidona (NMP). Se mezcl� un equivalente de 50 veces de dietilentriamina (DET) con respecto a una cadena lateral de PBLA con 13,5 ml de NMP. Entonces, bajo argón a 10�C, se a�adi� la disolución de DET a la disolución de PBLA y se sometió la mezcla a reacción durante 1 hora. Tras esto, se a�adi� el producto resultante a una disolución acuosa de HCl 0,01 N, se dializ� frente a HCl 0,01 N dos veces, se dializ� frente a agua a 4�C y entonces se recogió por liofilización. Se ha realizado la confirmación de que la PAsp(DET) (a la izquierda de la figura 1) as� sintetizada tiene una alta capacidad de tampón mientras que tiene una actividad de daño a la membrana celular en respuesta a un entorno de pH bajo, y puede transportar ADN de pl�smido al interior del citoplasma eficazmente (véase el documento no de patente 2). A continuación, se disolvieron PAsp(DET) (100 mg, 0,366 mmol en cuanto al número molar de una unidad de Asp (DET)) y DIPEA (638 ml, 3,66 mmol) en 6 ml de metanol y se sometieron a reacción con octadecanoato de N-succinimidilo (27,8 mg, 0,073 mmol) disuelto en 6 ml de DCM a 4�C durante 24 horas. Tras la reacción, se volvió a precipitar el producto de reacción en dietil éter y se filtr�. Se disolvió la muestra resultante en metanol/agua (1:1 v/v) y entonces se dializ� a 4�C frente a una disolución acuosa de HCl 0,01 M tres veces y agua destilada una vez. Tras esto, se recogió el producto resultante mediante liofilización para sintetizar PAsp(DET)-ST que tenía un grupo estearo�lo introducido en una cadena lateral (a la derecha de la figura 1). El rendimiento del pol�mero fue del 90% o más.

(2): Formaci�n del complejo de PAs p(DET)-ST y ARNip

Se disolvió PAsp(DET)-ST que tenía una tasa de introducción de grupo estearo�lo del 0, el 12 o el 19% en un tampón HEPES 10 mM (pH 7,3) o una disolución de etanol al 50% (etanol/tampón Hepes 10 mM, 1:1 v/v) y se mezcl� con ARNip (20 %M, tampón HEPES 10 mM (pH 7,3)) a diferentes razones de N/P. Se confirm� la formación del complejo mediante electroforesis con poliacrilamida (la figura 2 ilustra los resultados de electroforesis de complejos de PAsp(DET)-ST al 19% y ARNip). Como resultado, en el caso de usar cualquier pol�mero, desapareció una banda de ARNip libre a una razón de N/P igual o superior a un valor específico (razón de N/P de 2,5 o más en el caso de PAsp(DET)-ST al 19%), sugiriendo que se produjo la formación del complejo de ARNip con PAsp(DET) o PAsp(DET)-ST. A continuación, Se evalu� PAsp(DET)-ST/ARNip para determinar su diámetro de partícula y su índice de polidispersidad (PDI) mediante dispersi�n de luz dinámica (aparato Zetasizer de dispersi�n de luz dinámica (Malvern Instruments, Worcestershire, R.U.)) (figura 3). Como resultado, se form� un agregado grande que tenía un tamaño de 200 nm o más a una razón de N/P relativamente baja (razón de N/P de 1,4 a 2,5 en el caso de PAsp(DET) y razón de N/P de 2,0 a 3,5 en el caso de PAsp(DET)-ST), mientras que se form� una asociación relativamente monodispersada que tenía un tamaño de 150 a 170 nm sólo en el caso de PAsp(DET)-ST a una razón de N/P de 3,5 a 4,0 o más. Por otro lado, en el caso de PAsp(DET), la intensidad de la luz dispersada era débil y no se confirm� la formación de asociación.

Los resultados mencionados anteriormente sugieren que la introducción de un grupo estearo�lo como grupo hidrófobo en una cadena lateral de PAsp(DET) condujo a la estabilizaci�n del complejo a través de una interacción hidrófoba y formación de nanopart�culas.

Ejemplo 2

(1): Silenciamiento del gen end�geno Bcl-2 con complejo PAsp(DET)-ST/ARNip

Se sembraron células Panc-1 de cáncer de páncreas humano en una placa de 6 pocillos (100.000 células/pocillo) y se cultivaron durante la noche. Entonces, se form� un complejo de ARNip dirigido frente a Bcl-2 y cada uno de PAsp(DET) y PAsp(DET)-ST tal como se describió anteriormente y se cultiv� con las células durante 48 horas (concentración de ARNip: 100 nM). Tras esto, se recogieron las células mediante tripsinizaci�n y se recogió el ARN total con un kit Rneasy Mini (Qiagen). A continuación, se prepar� ADNc usando un kit de reactivo PrimeScript RT de TAKARA y se evaluaron las cantidades de ARNm de Bcl-2 y GADPH (gen de mantenimiento como patrón interno) mediante PCR en tiempo real (ABI7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.)) usando un kit de PCR QuantiTect SYBR Green (Qiagen). En este caso, se us� la siguiente secuencia como ARNip dirigido frente a Bcl-2 (5’-CAG GAC CUC GCC GCU GCA GAC-3’; 3’-CGG UCC UGG AGC GGC GAC GUC UG-5’) (referencia 1). Los resultados revelaron que PAsp(DET)-ST al 12% y PAsp(DET)-ST al 19% podían silenciar ARNm de Bcl-2, que era un gen end�geno y era supresor de la apoptosis, a una razón de N/P de 7,5 o más y a cualquier razón de N/P, respectivamente (figura 4). Además, se evalu� la citotoxicidad no específica en las células Panc-1 debida a la transfecci�n con ARNip (cultivo durante 40 horas) usando el kit Cell Counting-8 (Dojindo, Japón). Como resultado, no se observ� citotoxicidad a ninguna tasa de introducción de grupo estearo�lo ni razón de N/P (figura 5).

(2): Silenciamiento de gen end�geno de VEGF con complejo PAsp(DET)-ST/ARNip

Se cultivaron los complejos preparados mezclando PAsp(DET)-ST al 19% y ARNip a diferentes razones de N/P con células HeLa de cáncer de cuello uterino humano durante 48 horas, y se determin� cuantitativamente la cantidad de ARNm de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) mediante PCR en tiempo real (usando actina como patrón interno) de la misma manera a la anteriormente descrita (figura 6). En este caso, la secuencia de ARNip dirigida contra VEGF usada fue tal como se describe a continuación (GGA GUA CCC UGA UGA GAU CdTdT; GAU CUC AUC AGG GUA CUC CdTdT). Como resultado, PAsp(DET)-ST al 19% silenci� significativamente la expresión de VEGF a cualquier razón de N/P, y la actividad era similar a la de Lipofectamine 2000 usado como control positivo (figura 6). Por otro lado, PEI (ExGen) no dio ningún efecto de silenciamiento g�nico significativo (figura 6). A continuación, se evalu� la cantidad de expresión de VEGF a nivel proteico mediante un ELISA (kit de inmunoensayo de tipo s�ndwich (DVE00, VEGF humano Quantkine(R), R&D Systems, Minneapolis, MN)). Los resultados revelaron que PAsp(DET)-ST al 19% también suprimía la cantidad de expresión de VEGF de una manera específica de secuencia a nivel proteico (figura 7).

Ejemplo 3

(1) Síntesis de PEG-SS-PAsp(DET)-ST

Se sintetizó PEG-SS-PAsp(DET), en el que se unieron polietilenglicol (PEG) y PAsp(DET) a través de un enlace disulfuro (SS) que experimenta escisión en un organismo vivo, según la referencia 2. Específicamente, se sometió BLA-NCA a polimerizaci�n por apertura de anillo usando PEG-SS-NH2 como iniciador en cloruro de metileno para proporcionar PEG-SS-PBLA que tenía un grado de polimerizaci�n de PBLA de 59 y 98. A continuación, se disolvió PEG-SS-PBLA en NMP y se sometió a reacción con DET a 5�C durante 40 minutos. Tras esto, se neutralizó el producto de reacción con una disolución acuosa de ácido acético al 25%, se dializ� frente a HCl 0,01 N a 4�C y se liofilizó adicionalmente para sintetizar 0,27 g de PEG-SS-PAsp(DET).

A continuación, se llev� a cabo una reacción de introducción de un grupo estearo�lo en una cadena lateral de PAsp(DET) de PEG-SS-PAsp(DET). Se llev� a cabo la reacción de introducción de un grupo estearo�lo mediante una reacción con octadecanoato de N-succinimidilo de la misma manera que en el ejemplo 1. En este caso, se sometieron pol�meros de PEG-SS-PAsp(DET) que tenían grados de polimerizaci�n de PAsp(DET) de 59 y 98, respectivamente, a reacción con octadecanoato de N-succinimidilo en una cantidad correspondiente al 20% de un grupo amino primario de cadena lateral. Como resultado, se sintetizaron pol�meros de PEG-SS-PAsp(DET)-ST que tenían grupos estearo�lo introducidos en la cadena lateral al 17% y 19%, respectivamente. Se disolvieron estos pol�meros en un tampón HEPES 10 mM (pH 7,3) y se mezclaron con ARNip para lograr N/P=5,0 para formar complejos. Es concebible que cada uno de los complejos as� formados tengan una estructura de micela de pol�mero en la que un complejo PAsp(DET)-ST/ARNip est� recubierto con una cubierta externa de PEG biocompatible. Además, PEG se desprende gradualmente en un organismo vivo y por tanto es concebible que se logren simultáneamente tanto la alta estabilidad en la sangre como la introducción de ARNip eficaz en un tejido diana en el suministro de ARNip mediante administración sist�mica (figura 8).

(2) Evaluación de la captación intracelular de complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip

Se estima que un complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip (N/P=5,0) tiene una estructura de bicapa en la que una superficie est� recubierta con una envoltura externa de PEG, y por tanto tiene la posibilidad de experimentar una captación intracelular diferente de un complejo PAsp(DET)-ST/ARNip que tiene una superficie cati�nica. En vista de lo anterior, se form� un complejo usando ARNip marcado con un colorante fluorescente Cy5 y se evalu� parar determinar su cantidad de captación intracelular. Se cultivaron células HeLa (100.000 células/pocillo) en una placa múltiple de 6 pocillos y se cultivaron con complejo PAsp(DET)-ST/ARNip y complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip durante 3 horas. Tras esto, se llev� a cabo la tripsinizaci�n y se evalu� la intensidad de fluorescencia promedio de Cy5 captado en el interior de las células mediante citometr�a de flujo (cit�metro de flujo BD™ LSR II). La tabla 1 muestra los resultados.

[Tabla 1]

Concentraci�n ARNip: de PAsp(DET)-ST PEG (10 (59)-ST k)-SS-PAsp(DET) PEG (10(98)-ST k)-SS-PAsp(DET)

100 nM: 9215,47 1688,86 1265,89

300 nM: 6079,30 4542,10

500 nM: 13935,21 7071,59

Los resultado revelaron que, cuando la concentración de ARNip era de 100 nM, la cantidad de captación intracelular

10 del complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip era menor que la de PAsp(DET)-ST/ARNip, pero el complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip se captaba al interior de las células en una cantidad similar a la de PAsp(DET)-ST/ARNip aumentando la concentración del complejo.

(3) Transfecci�n de ARNip con complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip

15 Se sembraron células Huh-7 de cáncer hepático humano en una placa de 24 micropocillos (20.000 células/pocillo) y se cultivaron durante la noche. Tras esto, se introdujo ADN de pl�smido que podía expresar luciferasa de luciérnaga y luciferasa de Renilla al interior de las células usando Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Tras 4 horas, se a�adi� cada uno de los complejos de ARNip formados a partir de PAsp(DET)-ST al 19%, PEG-SS-PAsp(DET) (59)-ST al 17% y

20 PEG-SS-PAsp(DET) (98)-ST al 19%, que portaban cada uno ARNip dirigido frente a luciferasa de luciérnaga, a un medio y se cultivaron durante 48 horas. Tras esto, se calcul� la eficacia de silenciamiento g�nico con ARNip basándose en la cantidad de expresión de luciferasa de luciérnaga con respecto a luciferasa de Renilla usando un kit de ensayo indicador de luciferasa doble (Promega). Como resultado, en ARNip 100 nM, el complejo PEG-SS-PAsp(DET)-ST/ARNip no mostr� ningún efecto de silenciamiento g�nico significativo, mientras que en ARNip 300 y

25 500 nM, el complejo mostr� una actividad de silenciamiento g�nico dependiente de la concentración (figura 9). Los resultados concuerdan bien con los resultados de una captación intracelular en la tabla 1. Por tanto, es concebible que un complejo que tiene una estructura de micela de pol�mero se capta en el interior de las células y entonces sale eficazmente del endosoma, lo que permite que una función de ARNip se exprese eficazmente en el citoplasma.

30 (Referencia 1)

M. Ocker, D. Neureiter, M. Lueders, S. Zopf, M. Ganslmayer, E. G. Hahn, C. Herold, D. Schuppan, Gut 54: 12981308 (2005)

35 (Referencia 2)

S. Takae, Y. Akiyama, Y. Yamasaki, Y. Nagasaki, K. Kataoka, Colloidal Au replacement assay for highly sensitive quantification of low molecular weight analytes by surface plasmon resonance. Bioconjugate Chem. 18 (4): 12411245 (2007)

Lista de secuencias

<110> The University of Tokyo

45 <120> Poliamino�cido cati�nico y uso el mismo

<130> LT0901W

<150> Documento JP2009-031799 50 <151>

<160> 4

<210> 1 55 <211> 21

<212> ARN

<213> Secuencia artificial

<220> 60 <223> hebra sentido de ARNip de Homo sapiens para Bc1-2

<400> 1

caggaccucg ccgcugcaga c: 21

5: <210> 2 <211> 23 <212> ARN <213> Secuencia artificial

10: <220> <223> hebra antisentido de ARNip de Homo sapiens para Bc1-2

<400> 2

15: gucugcagcg gcgagguccu ggc 23

20: <210> 3 <211> 21 <212> ARN <213> Secuencia artificial

<220> <223> hebra antisentido de ARNip de Homo sapiens para el gen de VEGF

25: <400> 3

ggaguacccu gaugagauct t: 21

30: <210> 4 <211> 21 <212> ARN <213> Secuencia artificial

35: <220> <223> hebra sentido de ARNip de Homo sapiens para el gen de VEGF

<400> 4

40: gaucucauca ggguacucct t 21

Claims

REIVINDICACIONES

1. Poliamino�cido cati�nico, que est� representado por la siguiente fórmula (1):

en la que: R1 representa un grupo hidroxilo, un grupo alquiloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, un grupo alqueniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 2 a 12 átomos de carbono, un grupo alquiniloxilo no sustituido o sustituido, lineal o

10 ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o un grupo imino sustituido con alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono;

R2 representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, o un grupo alquilcarbonilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado 15 que tiene de 1 a 24 átomos de carbono;

R3a y R3b representan cada uno independientemente un grupo metileno o un grupo etileno;

R4a y R4b se eligen cada uno independientemente del mismo grupo o de grupos diferentes en el grupo que 20 consiste en los siguientes grupos:

-NH-(CH2)p1-[NH-(CH2)q1-]r1NH2 (i);

-NH-(CH2)p2-N[-(CH2)q2-NH2]2 (ii); 25 -NH-(CH2)p3-N{[-(CH2)q3-NH2][-(CH2)q4-NH]r2H} (iii); y

-NH-(CH2)p4-N{-(CH2)q5-N[-(CH2)q6NH2]2}2 (iv),

30 en los que: p1 a p4, q1 a q6, y r1 y r2 representan cada uno independientemente un número entero de 1 a 5;

del 5 al 40% de un número total del grupo de cada uno de R4a y R4b tienen al menos un grupo amino en el que un átomo de hidrógeno est� sustituido por un grupo acilo que tiene un residuo hidrocarbonado alif�tico 35 saturado o insaturado, lineal o ramificado que tiene de 6 a 27 átomos de carbono, o un grupo esteroloxicarbonilo;

n representa un número entero de 30 a 5.000; e

40 y representa un número entero de 0 a 5.000,

siempre que, cuando R3a y R3b representan cada uno un grupo metileno, y representa un número entero menor que n.

45 2. Poliamino�cido cati�nico según la reivindicación 1, en el que R3a y R3b representan cada uno independientemente un grupo metileno en la fórmula (1).
3. Poliamino�cido cati�nico según la reivindicación 1, en el que R3a representa un grupo etileno e y representa

0 en la fórmula (1). 50
4. Poliamino�cido cati�nico según la reivindicación 1 � 2, en el que: R4a y R4b representan cada uno independientemente el siguiente grupo:

-NH-(CH2)p1-[NH-(CH2)q1-]r1NH2 (i)

en el que: p1 y q1 representan cada uno independientemente 2 � 3; y r1 representa un número entero de 1

5

a 3; y

del 10 al 30% de un número total del grupo de cada uno de R4a y R4b tienen un grupo amino en el que un

�tomo de hidrógeno est� sustituido por un grupo acilo que tiene un residuo hidrocarbonado alif�tico

saturado o insaturado, lineal o ramificado que tiene de 6 a 27 átomos de carbono.

10
5.

Poliamino�cido cati�nico según la reivindicación 3, en el que:

R4a representa el siguiente grupo:

15

-NH-(CH2)p1-[NH-(CH2)q1-]r1NH2 (i)

en el que: p1 y q1 representan cada uno independientemente 2 � 3; y r1 representa un número entero de 1

a 3; y

20

del 10 al 30% de un número total del grupo de R4a tienen un grupo amino en el que un átomo de hidrógeno

est� sustituido por un grupo acilo que tiene un residuo hidrocarbonado alif�tico saturado o insaturado, lineal

o ramificado que tiene de 6 a 27 átomos de carbono.
6.

Copol�mero de bloque, que est� representado por la siguiente fórmula (2):

25

en la que: R2, R3a, R3b, R4a, R4b, n e y tienen los mismos significados que los definidos para la fórmula (1) según la reivindicación 1; 30 L1 representa -S-S-o un enlace de valencia;

L2 representa -NH-, -O-, -O(CH2)p1-NH-, o -L2a-(CH2)q1-L2b-, en los que: p1 y q1 representan cada uno independientemente un número entero de 1 a 5; L2a representa OCO, OCONH, NHCO, NHCOO, NHCONH, 35 CONH o COO; y L2b representa NH u O;

R5 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo no sustituido o sustituido, lineal o ramificado que tiene de 1 a 12 átomos de carbono; y m representa un número entero de 30 a 20.000.

40 7. Complejo polii�nico que comprende a) o b):

a) polamino�cido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un ácido nucleico

b) copol�mero de bloque según la reivindicación 6 y un ácido nucleico. 45
8. Complejo polii�nico según la reivindicación 7, alternativa a), en el que el ácido nucleico se elige del grupo que consiste en ADN de pl�smido, ARNip, micro-ARN, un ácido nucleico antisentido, un ácido nucleico señuelo, un apt�mero y una ribozima.

50 9. Complejo polii�nico según la reivindicación 8, en el que el ácido nucleico se elige del grupo que consiste en ADN de pl�smido, ARNip, micro-ARN, un ácido nucleico antisentido, un ácido nucleico señuelo, un apt�mero y una ribozima.