ES2476594T3

ES2476594T3 - Endoprótesis liberadora de fármacos y método de uso

Info

Publication number: ES2476594T3
Application number: ES07839691.8T
Authority: ES
Inventors: Douglas R. Savage; John E. Shulze; Ronald E. Betts; Sepehr Fariabi; Shih-Horng Su
Original assignee: Biosensors International Group Ltd
Current assignee: Biosensors International Group Ltd
Priority date: 2006-10-20
Filing date: 2007-10-19
Publication date: 2014-07-15
Anticipated expiration: 2027-10-19
Also published as: US20120330406A1; EP2086606B1; PL2086606T3; KR20090090314A; IL198207A; KR101392770B1; EP2086606A2; HK1133604A1; WO2008051453A3; JP2010506666A; PT2086606E; WO2008051453A2; IL198207A0; DK2086606T3; AU2007309522B2; US9579424B2; BRPI0717442B8; BRPI0717442B1; AU2007309522A1; US10456508B2

Abstract

Un método para hacer una endoprótesis con el fin de reducir la cifra de aparición o extensión de restenosis o trombosis debidas a una lesión vascular en un sujeto respecto a la observada colocando en la zona lesionada una endoprótesis metálica desnuda expansible formada de filamentos metálicos interconectados y con una cubierta en la superficie externa de los filamentos de la endoprótesis de un polímero portador que contiene un fármaco -limus, y cuyo método comprende: -La abrasión de regiones de la superficie externa de los filamentos de la endoprótesis para una rugosidad de la superficie (Ra) de al menos unos 20 urn (0,5 μm) y un rango de rugosidad de la superficie (Rt) de 300-700 μin (7,5-17,5 μm) y -El revestimiento de las regiones rugosas de los filamentos de la endoprótesis con una cubierta sin polímero del fármaco -limus, hasta un espesor de la cubierta mayor que el rango de rugosidad de la superficie de la superficie rugosa de la endoprótesis.

Description

Endoprotesis liberadora de farmacos y metodo de uso Campo tecnico

La presente aplicacion tiene relacion con una endoprotesis que incluye una superficie texturizada o erosionada y un metodo de fabricacion de la endoprotesis.

Antecedentes

Complicaciones como la restenosis son un problema recurrente en los pacientes que han recibido tratamiento contra la arteriosclerosis en forma de intervenciones medicas como la angioplastia coronaria transluminal percutanea (ACTP). La restenosis se suele tratar mediante una intervencion conocida como implantacion de endoprotesis, en la que se coloca por medios quirurgicos un dispositivo medico en la arteria afectada con el fin de impedir que se ocluya despues de la intervencion.

La endoprotesis suele tener una forma cilindrica y esta hecha de un metal biocompatible, como el cobalto cromo o el acero quirurgico. La mayoria de las endoprotesis son colapsables y se llevan hasta la arteria ocluida por medio de un cateter transluminal. La endoprotesis se anexa al cateter y puede autoexpandirse o expandirse mediante el inflado de un globo dentro de ella que despues se retira con el cateter una vez colocada la endoprotesis.

La complicaciones que pueden surgir del tratamiento con endoprotesis son la restenosis y la trombosis. Para intentar superar estas complicaciones, las endoprotesis pueden contener una capa o cubierta de un farmaco contra la restenosis que se libere de forma controlada en el lugar en que se ha implantado. Lo habitual es que el farmaco este dentro de un polimero portador permanente o bioerosionable, segun se refiere, por ejemplo, en la patente estadounidense N.D 5.716.981 concedida a Hunter titulada «Composiciones antiangiogenas y metodos de uso». Ejemplos de tratamientos tipicos que se liberan de esta forma segun se ha propuesto son los antiproliferativos, los anticoagulantes, los antinflamatorios y los inmunodepresores, aunque hay muchas otras sustancias quimicas y biologicas que se mencionan en la literatura sobre patentes. Se ha senalado que el polimero portador y el farmaco pueden estar cubiertos de una capa biodegradable porosa que sirva para regular la liberacion controlada del farmaco en el cuerpo, como se refiere, por ejemplo, en las patentes estadounidenses

N.D 6.774.278 y 6.730.064. Recientemente se han propuesto endoprotesis que contienen un farmaco contra la restenosis en los

conductos, los surcos o los poros que puede liberarse «sin polimero», es decir, que liberan la forma pura del farmaco. Tambien se han presentado endoprotesis que tienen una superficie rugosa que pretende fijar una capa de farmaco a su superficie y liberar la forma pura del farmaco como hacen, por ejemplo, las patentes estadounidenses N.D 6.805.898 y 6.918.927. Ninguna de estas patentes muestra o indica que, con clases particulares de compuestos contra la restenosis, sea posible potenciar esta actividad mediante la seleccion de grados de rugosidad de la superficie de la endoprotesis dentro de ciertos limites.

A la luz de las complicaciones asociadas al tratamiento con las endoprotesis seria deseable desarrollar una endoprotesis que tuviera al menos una superficie rugosa o texturizada que aumentara el area superficial y que pudiera fabricarse de tal forma que maximizara su integridad estructural, su capacidad de carga de farmacos y su capacidad de liberarlos en la pared vascular de forma que se potenciara su accion terapeutica, lo que se manifestaria por un menor riesgo de aparicion o extension de restenosis tras la colocacion de la endoprotesis en la zona de la lesion vascular. RESUMEN

El invento incluye, en una sola realizacion, una mejora del metodo para reducir la cifra de aparicion o extension de restenosis o trombosis resultado de la lesion vascular en un sujeto respecto a la observada con la colocacion en el lugar de la lesion de una endoprotesis expansible de superficie lisa constituida por filamentos metalicos interconectados y con un recubrimiento de la superficie externa de estos filamentos con un polimero portador que contiene un farmaco -limus. La mejora, que pretende mantener o reducir la cifra de recidivas o la extension de la restenosis o trombosis respecto a la conseguida con una endoprotesis cubierta de polimero y liberadora de -limus, pero sin ningun polimero portador, comprende los pasos de:

a) volver rugosas regiones de la superficie externa de los filamentos de la endoprotesis con un grado de rugosidad de al menos 20 !in (0,5 !m) y un rango de rugosidad superficial (maximo entre pico y valle) de 300-700 !in (7,5-17,5 !m), y

b) revestir las regiones rugosas de los filamentos de la endoprotesis con una cubierta de farmaco -limus sin polimero, hasta un espesor de la cubierta mayor que los limites de rugosidad de la superficie de la endoprotesis rugosa, es decir, hasta un espesor que cubra la superficie rugosa.

Los filamentos de la endoprotesis pueden someterse a abrasion para disfrutar de una rugosidad superficial de entre 20 y 40 !in (0,5 a 1 !m) o unrango de rugosidad superficial de 300-500 !in (7,5-12,5 !m).

La rugosidad de la superficie puede lograrse excoriando las regiones superficiales externas de los filamentos de la endoprotesis con un chorro presurizado de particulas abrasivas, formando una mascara de pelicula de hidrocarbonos sobre la superficie externa de los filamentos de la endoprotesis, eliminando selectivamente el material de la endoprotesis expuesto a la mascara yeliminado la mascara, mediante el grabado con laser de las superficies externas de los filamentos de la endoprotesis o mediante el granallado de la superficie externa de los filamentos con el fin de imprimir un patron sobre ella.

La cubierta farmacologica puede aplicarse en forma de solucion viscosa del farmaco sobre las superficies externas del filamento de la endoprotesis y un proceso de secado que forme una cubierta farmacologica solida sobre tales filamentos. La cubierta puede aplicarse hasta obtener una cantidad final del farmaco -limus sobre la endoprotesis de entre 25 y 240 !g/cm de longitud de endoprotesis y hasta un espesor final de la cubierta de 5 y 15 !m. Una clase preferida de farmacos -limus son los compuestos 42-0-alcoxialquil -limus, cuyo ejemplo seria el compuesto 42-0-etoxietil denominado Biolimus A9.

Estos y otros aspectos y representaciones del presente invento se haran mas patentes a la luz de la siguiente descripcion detallada y los dibujos acompanantes.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1esunaimagen escaneada deunaendoprotesis vascular que tiene un cuerpo de filamentos metalicos;

La FIG. 2A es una microfotografia electronica de barrido de una superficie rugosa de una endoprotesis;

La FIG. 2B es una microfotografia electronica de barrido de lasuperficie dela FIG. 2A que muestra una cuantificacion de las crestas generadas en la superficie de la endoprotesis despues de la abrasion;

La FIG. 2C es una microfotografia electronica de barrido de la superficie de la FIG. 2A que muestra una cuantificacion de los valles generados en la superficie de la endoprotesis despues de la abrasion;

La FIG. 3A es una ilustracion de una presa neumatica tratando la superficie de una endoprotesis;

La FIG. 3B es una imagen frontal aumentada del ensamblaje de un punzon de cabezal fijo de la FIG. 3A que muestra la presa neumatica con multiples puntos;

La FIG. 3C es una imagen lateral aumentada del ensamblaje del cabezal fijo de la FIG. 3B;

La FIG. 3D es una imagen frontal aumentada de la union del cabezal fijo para el ensamblaje del punzon de la prensa neumatica de la FIG. 3A que muestra un patron de ejemplo;

La FIG. 4 es una microfotografia electronica de barrido de una endoprotesis tratada cubierta de farmaco;

La FIG. 5 es un perfil de liberacion del farmaco Biolimus A9® a partir de la endoprotesis presente y de la endoprotesis Biomatrix® II medida por el porcentaje de cantidad total de farmaco liberada a lo largo de un tiempo acumulado en horas;

La FIG. 6 es un grafico que muestra los porcentajes del farmaco Biolimus A9® liberados de la endoprotesis presente y de Biomatrix® II en un modelo de implante porcino a los tres y cuatro meses, respectivamente;

La FIG.7 es un graficoque muestra las concentracionesmaximas enng/mldel farmaco BiolimusA9® en la sangre periferica a lo largo del tiempo en horas cuando se libera de la endoprotesis presente y de una endoprotesis Biomatrix® II en un modelo de implante porcino medidas mediante espectroscopia de masas;

La FIG.8es ungraficoquemuestraelporcentaje deareadeoclusion paraunaendoprotesisqueno tiene farmaco y de una endoprotesis que tiene el farmaco Biolimus A9®;

Las FIGS. 9A-9F sonimagenes escaneadas de cortes histologicos de unvaso 28dias despues de la implantacion de una endoprotesis metalica desnuda (FIGS. 9A-9B), una endoprotesis de filamentos metalicos con una cubiertadepolimero que contiene BiolimusA9®(FIGS. 9C-9D) yunaendoprotesiscon microestructura de filamentosmetalicos con una cubierta de Biolimus A9® (FIGS. 9E-9F);

Las FIGS. 10A-10K son graficos de las caracteristicas histomorfometricas de un vaso extirpado que contiene una endoprotesis con microestructura.

DESCRIPCION DETALLADA

I. Definiciones

A menos que se indique otra cosa, los terminos que se ofrecen a continuacion tienen los siguientes

significados.

La «rugosidad de la superficie», «rugosidad media» o «Ra» es la media aritmetica de valores absolutos de desviaciones de altura del perfil medidos tomados dentro de la longitud de la muestra oarea medidos desde la linea central grafica o centro del plano (la linea o plano medio). Se mide habitualmente con un profilometro optico de superficie sin contacto, como se expone mas adelante, pero tambien puede medirse con un profilometro de contacto o estimando las alturas de crestas y valles a partir de una microfotografia de la superficie.

El «rango de rugosidad de la superficie» o «Rt» es la maxima distancia entre la cresta y el valle calculada como la suma de las medidas de la cresta maxima y el valle maximo de la rugosidad con respecto a la linea o plano centrales. Suele medirse con un profilometro optico de superficie sin contacto, pero tambien puede hacerse con los otros metodos referidos antes.

El «farmaco -limus» se refiere a un compuesto trieno macrociclico inmunodepresor que tiene la estructura general mostrada, por ejemplo, en las patentes estadounidenses N.D 4.650.803, 5.288.711, 5.516.781,

5.665.772 y 6.153.252, enla publicacionPCTN.DW097/35575, enla patente estadounidense No. 6.273.913B1 y en la aplicacion de las patentes estadounidenses N.D 60/176086, 2000/021217A1 y 2001/002935A1.

Un «farmaco -limus 42-0-alcoxialquil» se refiere al derivado 42-0 alcoxialquil de la rapamicina descrito en la aplicacion de la patente estadounidense 20050101624, publicada el 12 de mayo de 2005, que se incorpora aqui completamente. Como ejemplo, el «farmaco -limus 42-0-alcoxialquil» es 42-0-etoxietil rapamicina, tambien conocido aqui como Biolimus A9.

La «cubierta sin polimero» traduce una cubierta cuya estructura y cohesion proporciona el propio farmaco, con o sin la presencia de una o mas sustancias, enlugar de una matriz de polimero en la que el farmaco se embebe, es decir, un polimero portador.

II. Endoprotesis vascular

La Fig. 1 muestra una endoprotesis construida de acuerdo con el invento y en estado contraido. La endoprotesis incluye un miembro estructural o cuerpo con al menos una superficie parcialmente rugosa o erosionada al menos para mantener y liberar un compuesto contra la restenosis, como se describira con mayor detalle mas adelante.

En la representacion mostrada, el cuerpo de la endoprotesis se forma a partir de una serie de miembros tubulares llamados puntales 3 conectados entre si por filamentos llamados enlaces 4. Cada puntal 3 tiene una bobina de goma helicoidal en diente de sierra y en zig-zag expansible o estructura en onda sinusoidal, y las conexiones a cada enlace 4 sirven para incrementar la flexibilidad general de la endoprotesis. El diametro en estado contraido de la endoprotesis se situa aproximadamente entre 0,5 mm y 2 mm, preferiblemente entre 0,71 y 1,65 mm, y una longitud de 5 a 100 mm. El diametro de la endoprotesis expandida es de al menos el doble y hasta 8-9 veces el de la endoprotesis en su estado contraido,por ejemplo, una endoprotesis con una diametro en contraccion de 0,7 a 1,5 mm puede expandirse en sentido radial hasta un estado expandido seleccionado de 2 a 8 mm o mas. Las endoprotesis que tienen esta arquitectura general en su cuerpo de miembros tubulares expansibles y enlazados se nombran, por ejemplo, como se describe en la publicacion PCT No. W0 99/07308, que se presenta habitualmente con la presente aplicacion y se incorpora expresamente por referencia aqui.

Es preferible que la estructura de la endoprotesis se construya con un material biocompatible, como el acero inoxidable. 0tros ejemplos de materiales biocompatibles que suelen usarse en la estructura de las endoprotesis son el cromo cobalto, el niquel, el magnesio,eltantalio, el titanio, el nitinol, el oro, el platino, inconel, el iridio, la plata, el tungsteno y otros metales biocompatibles o aleaciones de ellos; carbono o fibra de carbono; acetato de celulosa, nitrato de celulosa, silicona, polietileno teraftalato, poliuretano, poliester de poliamida, poliester, poliortoester, polianhidrido, polieter sulfona, policarbonato, polipropileno, polietileno de masa molecular alta, politetrafluoroetileno u otro material polimerico biocompatible, o mezclas o copolimeros de ellos; acido poli-L-lactico, acido poli-DL-lactico, acido poliglicolico o copolimeros de ellos, un polianhidrido, policaprolactona, polihidroxibutirato valerato u otro polimero biodegradable o mezclas o copolimeros de ellos; una proteina, un componente de la matriz extracelular, colageno, fibrina u otra sustancia biologica; o una mezcla adecuada de algunos de ellos. En la patente estadounidense N.D 6.730.064 se describe un ejemplo de una endoprotesis tipica. Las dimensiones de cada endoprotesis variaran dependiendo de la luz del cuerpo en que se transporten. Por ejemplo, una endoprotesis puede tener un diametro entre unos 0.5 mm y alrededor de 25 mm y una longitud desde unos 4 mm a unos 100 mm o mas. Se describe un ejemplo de medidas de endoprotesis en la patente estadounidense compartida N.D 6.939.376, que se posee e incorpora expresamente aqui por referencia.

Como se ve en la Fig. 2A, al menos una parte de una de las superficies de la endoprotesis tiene una microestructura aspera o erosionada o texturizada. Esta microestructura puede incluir al menos una sustancia terapeutica que se separe de la microestructura. Como se ve en las Figs. 2B-2C, la superficie aspera o texturizada proporciona intersticios o elementos que se proyectan verticalmente en la superficie o regiones menoscabadas o recesos. Se apreciara que puede depositarse una solucion que contenga una sustancia terapeutica, por ejemplo por fuerzas capilares, en tales recesos y cubra las superficies que se proyectan. De esta forma puede aumentarse el area superficial para cubrir la endoprotesis. El espesor de tal capa se denomina espesor medio de la capa, por ejemplo, profundidad media de la porcion infusible de la capa. Es preferible que, como se ve en la Fig. 2A, al menos una parte de la superficie abluminal de la endoprotesis, es decir, la superficie en contacto con el vaso tratado tras colocar la endoprotesis, incluya la reestructuracion de la superficie de la microestructura.

III. Metodos de preparacion de superficies texturizadas

En un caso, el metodo incluye el uso de una mascara para evitar que al menos una parte de la endoprotesis sea erosionada. Es preferible que la mascara sea una pelicula de hidrocarbono, como PARAFILM®, sin embargo, se apreciara que cualquier barrera adecuada a la abrasion lo sera para estos metodos. Segun esto, en una representacion de eleccion, al menos se erosiona la superficie luminal de la endoprotesis no se erosiona. En un caso, una lamina de la mascara de unos 5 mm por 60 mm se enrolla alrededor del diametro de un mandril, como puede ser un tubo capilar de vidrio de 1,4 mm. La endoprotesis se coloca sobre el mandril y se arruga con la mano en la mascara de hidrocarbono. Puede utilizarse un microscopio estereo ajustado entre 10x y 40x para asegurar que la porcion de la endoprotesis que no se va a erosionar este cubierta por la mascara. En un caso de eleccion, al menos el 80% del espesor de la pared de la endoprotesis en todas las superficies esta cubierta por una capa de pelicula de hidrocarbono.

En un caso, la superficie de la endoprotesis 5 se trata despues utilizando sistemas de microchorro, como MICR0 BLASTER® y PR0CENTER® de Comco, Inc., o uno equivalente. En una endoprotesis se usan 25 pm de un abrasivo, como oxido de aluminio, para erosionar la superficie de la endoprotesis 5. La presion se ajusta a 40 psi ± 5 psi, y un inyector se coloca a unos 2,5 cm a 5 cm de la superficie de la endoprotesis 5 y pasa multiples veces sobre ella.

En otra endoprotesis, la mascara se elimina con medios adecuados como una limpieza ultrasonica. Es habitualque el limpiador ultrasonico este lleno deagua desionizadacalentadaa45 'C. Un vialdemuestrade cloroformode grado HPLCsecalientaa 50-60 'Cenunaplacacalefactora. Unmandrilde tubo capilardevidrio con una endoprotesis tratada se incuba en un vial de cloroformo de grado HPLC a 40 'C y 50 'C durante 5 -10 minutos. El vial que contiene el cloroformo y el mandril se somete a sonicacion en agua desionizada a 45'C durante dos minutos.

Debido a la rugosidad de la superficie de la endoprotesis 5, se expresan diferentes elementos en la superficie metalica que pueden incrementar la tendencia a la corrosion. Debido a ello, la endoprotesis tratada se neutraliza siguiendo los estandares de la ASTM y se limpiaen una serie de disolventes como cloroformo, acetona

o alcohol isopropilico. En un caso, despues de eliminar la mascara y someter la endoprotesis a sonicacion, se saca del vial de cloroformo. El vial de la muestra se enjuaga en acetona y despues se rellena con ella. La endoprotesis tratada se coloca en el vial y se somete a sonicacion en el limpiador ultrasonico durante dos minutos. El vial se enjuaga en alcohol isopropilico y despues se rellena con alcohol isopropilico. La endoprotesis se somete a sonicacion en el limpiador ultrasonico durante dos minutos mas. La endoprotesis tratada se neutraliza entonces en un bano de acido nitrico al 20% en volumen a 60 'C ± 3 'C durante 30 minutos. L a endoprotesis se enjuaga despues 10 veces con una cantidad abundante de agua desionizada. La endoprotesis se coloca entonces en 600 ml de un disolvente como el alcohol isopropilico y se somete a sonicacion en el limpiador ultrasonico durante 5 minutos y se deja secar al aire.

En otro caso, la superficie de la endoprotesis se erosiona uniformemente de una forma controlada a traves de un bombardeoconmicroparticulas. La erosion de la superficie de la endoprotesis 5 se consigue usando particulas metalicas llamadas proyectiles que tienen un tamano entre 1 y 5 micrones aproximadamente y estan hechas de un elemento atomico que tiene un peso de al menos de 43 g/mol. Por ejemplo, el proyectil puede ser en forma de particulas de tantalio, tungsteno, platino, iridio, oro, bismuto, bario, circonio y aleaciones de ellas. Ejemplos de aleaciones adecuadas son una de platino y niquel y otra de platino e iridio.

En otro caso, la superficie de la endoprotesis 5 puede tratarse para crear inyectores mecanicos que tienen un tamano entre 3 y unos 10 micrones.

En otro caso, la superficie de la endoprotesis 5 puede grabarse con laser para crear patrones regulares

o irregulares de asperezas o inyectores mecanicos de unos 5 a 25 micrones.

En otro caso, la superficie de la endoprotesis puede tratarse para que adquiera una rugosidad diferente en la superficieabluminal que en la luminal. Porejemplo, toda la superficie puede tratarse por medio de alguno de los medios revelados antes. Despues se enmascarala superficie luminal de forma que unsegundo tratamiento de la superficie se dirija a la superficie abluminal. El tratamiento posterior utilizaria habitualmente el proceso texturizador mas agresivo. Las diferentes superficies asi obtenidas pueden usarse para impartir diferentes propiedades utiles a la superficie interna (es decir, luminal) que a la externa (abluminal) de la endoprotesis. En un caso, la rugosidad de la superficie luminal se optimiza para mejorar el crecimiento hacia su interior y adhesion, por ejemplo como se describe en la aplicacion de patente estadounidense N.D 2005/0211680, y la rugosidad abluminal de la superficie puede optimizarse para transferir farmaco desde la superficie abluminal de la endoprotesis a los tejidos vecinos como se describe en ella.

La superficie de la endoprotesis 5 puede tratarse situando la cantidad deseada de disparos sobre una parte predeterminada de la superficie de la endoprotesis 5 y en el patron deseado. Se aplica presion a las particulas usando placas o rodillos que produzcan mellas en la superficie de la endoprotesis 5. La rugosidad tambien puede conseguirse lanzando un chorro de particulas sobre la superficie de la endoprotesis 5 a una velocidad suficiente para producir mellas. Un ejemplo de bombardeo con microparticulas de una superficie metalica se describe en la patente estadounidense N.D 6,911,100.

En otro caso, esta rugosidad uniforme ycontrolada de la superficie tambien puede conseguirse de forma analoga a la anterior empleando un laser en lugar de proyectiles. Se aplica una serie de descargas electricas a la porcion deseada de la superficie externa o interna de la endoprotesis 5.Las descargas electricas contactan con la superficie con suficiente energia como para vaporizar el material presente en ella, lo que crea hoyuelos, llamados a veces vacios, cuyo efecto combinado es erosionar la superficie aumentando su area superficial. Un ejemplo de este proceso se describe en la patente estadounidense N.D 6,913,617.

En otro caso, la superficie de la endoprotesis se trata de forma uniforme mediante compresion. La endoprotesis se une a un mandril, que se inserta en un troquel equipado con porciones elevadas preformadas que forman mellas en la superficie de la endoprotesis 5 en la cantidad, forma, tamano y patron deseados. Las mellas pueden hacerse de varias formas como soldandolas en la superficie de la endoprotesis 5o con chorro de arena. El troquel se cierra entonces alrededor de la endoprotesis formando mellas de la profundidad deseada y cubriendo la superficie requerida. Se trata toda la superficie de la endoprotesis, o una parte de ella, dependiendo de la fabricacion del troquel. Se describe un ejemplo de este proceso en la patente estadounidense N.D 7,055,237.

En otro caso, la superficie de la endoprotesis 5 se trata con una prensa neumatica o hidraulica. Las prensas neumaticas son bien conocidas en este campo como se describio en la patente estadounidense N.D 4,079,617. Las prensas hidraulicas tambien son bien conocidas en este campo como se describe en la patente estadounidense N.D 7.033.155. Como se ve en las Figs. 3A-3D, la endoprotesis se coloca en un mandril 1 que esta quieto o rota. Se configura una prensa neumatica o hidraulica controlada por ordenador 8 para tratar la superficie de la endoprotesis en una de varias formas predeterminadas, por ejemplo, de forma aleatoria o con un patron deseado. El ensamblaje del punzon 9 de la presa puede configurarse para que contenga uno o mas puntas 10,11 definidas aqui como mecanismos creadores de mellas. En una endoprotesis de preferencia, el ensamblaje del punzon contiene varias puntas. Se apreciara que las puntas pueden ser de longitud uniforme o variada con el fin de formar una microestructura en la superficie. Cada punta 10,11 permanece en una posicion retraida hasta que el ordenador ejecuta el tratamiento programado de la superficie de la endoprotesis 5. De acuerdo con el programa seleccionado, las puntas 10,11 se proyectaran sobre la superficie de la endoprotesis 5 con suficiente fuerza como para producir una mella. El ensamblaje del punzon 9se configura generalmente para que no sea mas ancho que el de la endoprotesis deseada; por ejemplo, si el puntal de la endoprotesis 3es de 15 micrones, la pluralidad de las puntas 10,11 sumara tambien un total de no mas de 15 micrones de anchura. El numero de puntas 10,11 en un ensamblaje del punzon dado 9 variara dependiendo de la anchura de la endoprotesis. De forma analoga, el ensamblaje del punzon 9 puede configurarse para que sea un cabezal preformado fijado a la prensa con los cabezales intercambiables dependiendo del patron deseado. Ademas, el cabezal puede estar quieto y la endoprotesis girar o, alternativamente, el cabezal puede ser movil, armado este con una sola punta 10,11 fijada a la presa que realizara impresiones de forma aleatoria en la superficie de la endoprotesis 5.

En otra endoprotesis, toda la longitud de tubo usado para crear la endoprotesis, por ejemplo, tubo de 2,5 metros de longitud, se trata antes con cortes con laser en longitudes diferentes deseadas de la endoprotesis. La endoprotesis se une de forma horizontal o vertical a uno o mas mandriles 1 y se erosiona usando uno de los metodos referidos en esta aplicacion. En terminos de tecnicas de abrasion, la endoprotesis se trata de forma aleatoria, uniforme o en el patron deseado. Ademas, la longitud y los lados de la endoprotesis se tratan en toda su longitud, de forma vertical o en espiral. La superficie de la endoprotesis 5 se trata ademas moviendola sobre un mecanismo de abrasion que esta quieto o, alternativamente, toda la longitud del tubo de la endoprotesis esta quieta y el mecanismo abrasivo puede moverse sobre toda su longitud de las formas referidas, por ejemplo, de forma horizontal, vertical o espiral.

Se realizaron pruebas de corrosion potenciodinamica en la endoprotesis tratada para confirmar la idoneidad del paso de neutralizacion y su eficacia. Los datos muestran que el potencial de rotura de la endoprotesis tratada y neutralizada esta dentro de los estandares de voltaje especificados por la ASTM. Por lo tanto, despues del proceso de abrasion y neutralizacion, la endoprotesis tratada no exhibe una mayor probabilidad de corrosion cuando se compara con la endoprotesis control sin tratar, y el proceso de abrasion no incrementa el potencial de restenosis ni trombosis. Despues de la neutralizacion se observo que la biocompatibilidad de la superficie metalica microestructurada era equivalente a la observada en la endoprotesis con superficies electropulidas lisas.

El espesor aproximado de una endoprotesis tratada es generalmente de unos 0,05 mm. Como se ve en las Figs. 2B-2C, el tratamiento de la superficie de la endoprotesis 5 en la forma referida da lugar a una superficie con una media de altura de la cresta 6 de alrededor de 1,30 pm y una profundidad media del valle 7 de 2,08 pm. Para medir los efectos, si existen, que el proceso de abrasion tiene sobre la integridad estructural de la endoprotesis, se realizaron pruebas de fatiga axial y analisis a!ger sobre una endoprotesis tratada. La prueba de fatiga axial se centro en la porcion de la endoprotesis que es mas proclive a la rotura, que es el enlace 4 entre los puntales de la endoprotesis 3. Tras unos 3 millones de ciclos en condiciones fisiologicas simuladas, la endoprotesis control no tratada y la endoprotesis texturizada permanecieron intactas. Dado que una parte de la endoprotesis tratada se elimino en el proceso de abrasion, yque se ha descubierto que la endoprotesis tratadaes capaz de soportar las mismas condiciones de fatiga que la endoprotesis intacta sin tratar con mas area superficial es capaz de soportar, se entiende que el proceso de abrasion incrementa en realidad la resistencia a la fatiga de la endoprotesis debido a las estructuras microcristalinas rotas del cuerpo de la endoprotesis. Finalmente se realizo el analisis a!ger en la endoprotesis tratada para caracterizar la composicion quimica de la superficie, que revelo cocientes similares de elementos identicos en la endoprotesis erosionada y no neutralizada y en la endoprotesis erosionada y neutralizada. Esto demuestra que el proceso de neutralizacion de la endoprotesis control sin tratar en la forma referida no tiene efectos perjudiciales sobre la composicion quimica de la superficie de la endoprotesis.

El ejemplo 2 proporciona medidas de rugosidad de la superficie Ra y del factor de rugosidad Rt de las 4 endoprotesis preparadas como antes por abrasion de la superficie con un chorro de particulas presurizado. Como se ha visto, los valores de rugosidad de la superficie fueron todos de al menos 20 !in (0,5 !m), y suelen estar entre unos 20-40 !in (0,5 pm-1 !m), y tienen un rango de rugosidad de 300-700 pellizcos (7,5 a 17,5 !m), y habitualmente de 300-500 pellizcos (7,5 y 12,5 !mm). De acuerdo con un aspecto del invento, estos valores de rugosidad, y en particular los valores del rango de rugosidad, se han considerado optimos para conseguir resultados ideales frente a la restenosis.

Sin querer limitarnos a una teoria particular sobre este efecto, parece que las asperezas o proyecciones de la superficie en la cresta de 300-700 pellizcos son optimas para «inyectar» el farmaco de la cubierta farmacologica en el vaso. De este modo, por ejemplo, cuando bien por la disolucion del farmaco de la cubierta o por fracturas en la cubierta durante la colocacion de la endoprotesis se exponen las proyecciones, estas, al impactar o penetrar en el area del vaso local, pueden facilitar la entrada del farmaco en el vaso. El resultado es que el rango de rugosidad definido de la superficie de la endoprotesis, combinado con la cubierta de farmaco libre de polimero, mantiene o reduce mas la aparicion y extension de la restenosis o trombosis vistas con las endoprotesis cubiertas de polimero y liberadoras de -limus, pero sin un polimero portador, y reduce mas la cifra de aparicion y extension de restenosis o trombosis vistas con una cubierta sin polimero en una superficie menos rugosa, es decir, teniendo un menor rango de rugosidad de la superficie. Ademas, los estudios realizados en apoyo del presente invento indican que una endoprotesis que tiene caracteristicas de rugosidad en su superficie con valores de cresta-valle enel rango de 800-1.000 pellizcos (20-25 !m o mas)puede reducir peor larestenosis.

De este modo, en un aspecto, el invento pretende mejorar la eficacia en terminos de menor incidencia y extension de restenosis en el tratamiento de la lesion vascular con una endoprotesis liberadora de farmacos, por ejemplo, una endoprotesis liberadora de -imus. La mejora comprende los pasos de abrasion de al menos las porciones de superficie abluminal de la endoprotesis hasta una rugosidad de la superficie de al menos unos 20 !in (0,5 !m) y un rango de rugosidad de la superficie entre unos 300 y 700 !in (7,5-17,5 !m), y el revestimiento de las regiones rugosas de los filamentos de la endoprotesis con una cubierta sin polimero de farmacos -limus, hasta un espesor de la cubierta mayor que el rango de rugosidad de la superficie de la superficie rugosa de la endoprotesis, es decir, hasta un espesor que forme una cubierta farmacologica sustancialmente integra.

Es preferible que el IFA (es decir, el ingrediente farmaceutico activo), como el antiproliferativo Biolimus A9®, se aplique al menos a la porcion abluminal de la endoprotesis. El IFA puede aplicarse a la superficie de la endoprotesis por cualquier medio adecuado como la pulverizacion de la superficie tratada de la endoprotesis con una solucion del IFA. La solucion del IFA tambien puede aplicarse sumergiendo toda la endoprotesis en el IFA deseado o aplicandolo directamente y de forma manual en la superficie de la endoprotesis 5. Biolimus A9® tiene una estructura de amorfa a semicristalina que no se agrieta ni fractura como algunos otros compuestos cristalinos -limus. Por tanto, las propiedades de Biolimus A9® permiten su adhesion a la superficie rugosa tratada de la endoprotesis en el estado sin expandir y en el estado expandido.

Es preferible que el material del IFA se aplique a la porcion abluminal de la endoprotesis por medio de autopipeteado como se describio en la patente estadounidense compartida N.D 6.939.376. Se preparara una solucion con una concentracion de 100 mg/ml a 200 mg/ml disolviendo el IFA deseado en un disolvente apropiado, como etil acetato o acetonitrilo. La solucion se coloca en un reservorio con una bomba disenada para administrar la solucion a una velocidad predeterminada. La bomba estacontrolada por un microcontrolador, como 4-Axis Dispensing Robot Model disponible en l&J Fisnar Inc. A la parte inferior del reservorio se une un tubo de dispensacion de la solucion para transportar la mezcla de disolvente a la superficie de la endoprotesis 5. El reservorio y el tubo de dispensacion se montan en un soporte movil que mueve el tubo de dispensacion del disolvente de forma continua o en pequenos pasos, por ejemplo, 0,2 mm por paso a lo largo del eje longitudinal.

Se afianza una endoprotesis sin cubierta en una prensa de sujecion que rota y contacta con la superficie interna de la endoprotesis al menos en un extremo. La rotacion axial de la endoprotesis se consigue rotandola continuamente, o en pequenos pasos de grado, como 0,5 grados por paso. El tubo tambien puede sujetarse en una posicion fija y, ademas del movimiento de rotacion, la endoprotesis se mueve a lo largo de su direccion longitudinal para conseguir completar el proceso de revestimiento.

Antes de su uso, los tubos de dispensacion de la solucion se sacan y modelan con un mechero de Bunsen para formar una pequena abertura afilada en su punta y facilitar la aplicacion precisa de la mezcla del farmaco y el disolvente, que puede aplicarse entonces a lo largo de la longitud y los laterales de la endoprotesis con la punta modelada del tubo. Esta contemplado que el invento utilice mas de un tipo de tubos dispensadores de liquido trabajando en concierto para formar la cubierta o que utilice mas de un reservorio movil equipado con diferentes puntas o que contenga soluciones de diferente viscosidad o diferente composicion quimica en el mismo proceso para formar la cubierta.

En otra endoprotesis se aplica una capa no porosa de parileno, derivado de parileno u otro polimero biocompatible a la superficie tratada de la endoprotesis, y el IFA deseado se aplica o deposita sobre ella. Una opcion es aplicar una capa adicional de polimero ligeramente no poroso directamente sobre el IFA, lo que ayuda a que se produzca una liberacion controlada a lo largo del tiempo. De acuerdo con el presente invento, la endoprotesis comprende al menos una capa de un IFA sobre su superficie, y las otras superficies no contendran IFA o uno o mas IFA diferentes. De esta forma, pueden liberarse uno o mas IFA al torrente sanguineo desde la superficie luminal de la endoprotesis, mientras se liberan diferentes tratamientos para diferentes trastornos en la zona de la lesion vascular desde la superficie de la endoprotesis.

En otro caso, la endoprotesis puede cubrirse con una molecula de IFA sin necesidad de un polimero. Como se ve en la Fig. 4, el proceso de abrasion de toda la endoprotesis o de una porcion de ella con uno de los metodos referidos antes permite al IFA adherirse directamente a lasuperficie de la endoprotesis tratada 14. Enun caso general, el IFA es un farmaco -limus, como el descrito en las patentes estadounidenses N.D 4.650.803, 5.288.711, 5.516.781, 5.665.772 y 61.53.252, en la publicacion PCT N.D W0 97/35575, en la patente estadounidense N.D 6.273.913B1 y en las aplicaciones de patentes estadounidenses N.D 60/176086, 2000/021217A1 y 2001/002935A1. Farmacos -limus ejemplo son los farmacos 42-0-alcoxialquil, como Biolimus A9. 0tros farmacos IFA que pueden emplearse, solos o combinados con un farmaco -limus, son los antiagregantes o antitromboticos o los antinflamatorios, como la dexametasona, el acetato de dexametasona, el fosfato sodico de dexametasona u otro derivado de la dexametasona o un esteroide antinflamatorio. Tambien pueden utilizarse las superficies interna o externa de la endoprotesis para administrar otros tipos de moleculas de IFA como tromboliticos, vasodilatadores, antihipertensivos, antimicrobianos o antibioticos, antimitoticos, antiproliferativos, antisecretorios, antinflamatorios no esteroideos, inmunodepresores, factores de crecimiento y antagonistas de factores de crecimiento, antitumorales y antineoplasicos, antipolimerasas, antiviricos, terapeuticos fotodinamicos, anticuerpos, profarmacos, hormonas sexuales, captadores de radicales libres, antioxidantes, biologicos, radioterapeuticos, radiopacos y radiomarcados.

La endoprotesis puede estar incluida en un ensamblaje que consista en un cuerpo de endoprotesis rodeado de un globo desinflado sujeto a la porcion distal de un cateter que se usa para implantar la endoprotesis en el lugar de la lesion vascular. La endoprotesis se introduce dentro del sistema cardiovascular de un paciente a traves de laarteria braquialo femoral usando elcateter. Elensamblaje delcateter se hace avanzar a traves delos vasos coronarios hasta que la combinacion del globo desinflado y la endoprotesis se coloca a traves del lugar de lesion vascular o del estrechamiento vascular. El globo se infla entonces hasta alcanzar un tamano predeterminado para que expanda la endoprotesis hasta un diametro suficientemente grande para que quede en contacto continuo con la luz. Entonces se desinfla el globo hasta alcanzar un perfil menor que permita retirar el cateter de los vasos del paciente, dejando la endoprotesis en su sitio. Un ejemplo de intervencion tipica para la implantacion de una endoprotesis se describe en la patente estadounidense N.D 6.913.617.

IV. Metodos de uso

Este apartado describe los metodos de tratamiento vascular acordes con el invento y el rendimiento de las endoprotesis construidas segun el.

Los metodos del invento se han disenado para minimizar el riesgo o extension de restenosis en un paciente que ha sufrido una lesion vascular localizada o que esta en riesgo de oclusion vascular debido a la presencia de una enfermedad ateroesclerotica avanzada. Lo habitual es que la lesion vascular se produzca durante una intervencion angiografica para abrir un vaso parcialmente ocluido, como una arteria coronaria o una periferica. La endoprotesis tambien puede introducirse en una zona de estrechamiento vascular y expandirse usando el globo para abrir directamente la porcion estrecha del vaso (es decir, el lugar de la lesion vascular). En la primera intervencion angiografica mencionada, primero se coloca un cateter con un globo en el extremo distal en el lugar ocluido y se infla y desinfla una o mas veces para forzar que el vaso ocluido se abra. Esta expansion vascular, que produce en particular un traumatismo en la superficie de la pared vascular donde puede desprenderse una placa, produce a menudo suficiente lesion localizada para que el vaso responda al cabo del tiempo con una proliferacion celular y vuelva a ocluirse en la vecindad de la endoprotesis implantada. No es sorprendente que la aparicion o intensidad de la restenosis se relacione a menudo con el grado de estiramiento vascular producido en la angioplastia. En particular, cuando el estiramiento es del 10% o mas, la restenosis se produce con una frecuencia alta y a menudo con una intensidad sustancial, es decir, con una oclusion vascular. En la segunda intervencion mencionada de colocacion directa de la endoprotesis sin una angioplastia previa (es decir, «implantacion directa de la endoprotesis») hay no obstante una lesion vascular inducida por la expansion de la endoprotesis y el globo en la zona de la lesion vascular que da lugar a una restenosis y una proliferacion celular en la zona de implantacion de intensidad muy similar a la observada en la primera intervencion mencionada.

El presente invento esta disenado para usarlo sin limitaciones en cualquier metodo particular de tratamiento y lesion de una zona vascular, y puede utilizarse con las tecnicas descritas antes o con tecnicas alternativas conocidas para la enfermedad yla lesion vascular. Con el presente invento, la endoprotesis se coloca en su estado contraido en el extremo distal de un cateter, bien dentro de la luz del cateter, o en un estado contraido en un globo situado en el extremo distal. El extremo distal del cateter se lleva entonces hasta el lugar de la lesion, o el lugar de posible oclusion, y se libera del cateter, por ejemplo, tirando hacia atras de una vaina que cubra la endoprotesis para liberarla en el lugar, si la endoprotesis es autoexpansible, o expandiendo la endoprotesis sobre el globo mediante su inflado, hasta que la endoprotesis contacte con las paredes vasculares implantando asi la endoprotesis en el sitio de la pared tisular.

Una vez desplegada en su sitio, la endoprotesis cubierta de farmaco comienza a liberar el compuesto activo (IFA) en las celulas que recubren la zona vascular, para inhibir asi la proliferacion celular o inducir otros beneficios terapeuticos como una reduccion de la inflamacion, una limitacion de la formacion de la trombosis, una reduccion de la apoptosis celular, etc. La Fig. 5 muestra la cinetica de liberacion de Biolimus A9® de dos endoprotesis, una con el farmaco cubriendo una superficie texturizada y la otra una endoprotesis Biomatrix® con un polimero de cubierta que contiene Biolimus A9®.

La Fig. 6 muestra el porcentaje de farmaco liberado de Biolimus A9® de una cubierta de polimero y una endoprotesis texturizada. Como se ve en el grafico, despues de tan solo dos meses, el 100% de Biolimus A9® se ha liberado de la endoprotesis texturizada. Por el contrario, pasados tres meses, alrededor del 30% del farmaco permanecia en la endoprotesis con cubierta de polimero.

La Fig. 7 muestra la concentracion sanguinea maxima de Biolimus A9® medida mediante espectroscopia de masas con Biomatrix® II cubierta de polimero y con la endoprotesis sin polimero texturizada. Como se ve en la figura, la concentracion sanguinea con Biolimus A9® alcanza su valor maximo al cabo de unas cuatro horas con la endoprotesis texturizada. La concentracion sanguinea maxima de Biolimus A9® con Biomatrix® II cubierta de polimero se produce a los dos meses aproximadamente.

Las Figs. 9A-9F muestran en un corte transversal una region vascular que tiene una endoprotesis metalica desnuda implantada (Figs. 9A-9B), una endoprotesis metalica Biomatrix® II que tiene una cubierta de polimero de 225 !g de PLA y 225 pg de Biolimus A9® (Figs. 9C-9D) y una endoprotesis texturizada con 225 !g de Biolimus A9® (Figs. 9E-9F), en la que se ven los filamentos con la cubierta. La figura ilustra la liberacion del compuesto antirrestenotico de cada region del filamento en la region vecina de la pared vascular. Con el tiempo, las celulas musculares lisas que forman la pared vascular empiezan a crecer hacia el interior y a traves del enrejado o las aberturas helicoidales en la endoprotesis y forman finalmente una capa celular continua que engulle la endoprotesis por ambos lados. Si la implantacion de la endoprotesis ha tenido exito, la extension de la oclusion vascular tardia en la zona sera menor del 50%, es decir, que el diametro transversal del conducto de flujo que queda dentro del vaso sera al menos el 50% del diametro de la endoprotesis expandida en el momento de la implantacion.

Ensayos realizados en un modelo animal porcino de restenosis animal como han descrito de forma general Schwartz y cols. («Restenosis After Balloon Angioplasty-A Practical Proliferative Model in Porcine Coronary Arteries», Circulation 82:(6) 2190-2200, Dec 1990.). Se han realizado estudios en el modelo porcino que demuestran la capacidad de la endoprotesis de este invento de limitar la extension de la restenosis y las otras ventajas de la endoprotesis sobre las endoprotesis propuestas y estudiadas en la actualidad. Los estudios se resumen en el Ejemplo 3.

Brevemente, los estudios comparan la extension de la restenosis a los 28 dias en un modelo animal tras la implantacion de la endoprotesis, en endoprotesis metalicas desnudas, endoprotesis cubiertas de polimero y endoprotesis texturizadas.

Las Figs. 9A-9F muestran que tanto las endoprotesis cubiertas de polimero como las texturizadas reducen mucho las cifras de restenosis. En general, los vasos con endoprotesis cubiertas con polimero y farmaco

y las endoprotesis texturizadas parecen curar bien con una capa endotelial bien establecida. Hay signos de una curacion y una homeostasis vascular completas a los 28 dias de la implantacion. 0tros ensayos demuestran la capacidad de las endoprotesis descritas aqui de limitar la extension de la restenosis en un periodo amplio de la menos tres meses. Los estudios se resumen en el Ejemplo 4.

Brevemente, los estudios comparan la extension de la restenosis a los 3 meses de la implantacion de endoprotesis metalicas desnudas (BMS) y endoprotesis sin polimero liberadoras de farmaco (pfDES). Los datos histomorfometricos mostrados en la Tabla 4 muestran que la pfDES redujo mucho las cifras de restenosis comparada con la BMS.

Los siguientes ejemplos ilustran varios aspectos de la construccion y uso de las endoprotesis aqui mostradas. No pretenden limitar el ambito del invento.

Ejemplo 1

Liberacion in vitro de Biolimus A9® de la endoprotesis

El estudio de liberaci6n farmacol6gica in vitro se realizo con la endoprotesis Biomatrix® II cubierta de un polimero que contiene el farmaco antiproliferativo Biolimus A9® y con la endoprotesis que contiene una microestructura abluminal queincluye Biolimus A9® en unmedio conPBS apH 7,4/Tween a37 'C. Se tomaron muestras periodicas y se midio la cantidad total de Biolimus A9® por HPLC. La Fig. 5 ilustras la liberacion del farmaco de la endoprotesis Biomatrix® II y la microestructura de la endoprotesis.

Ejemplo 2

Banco de prueba del factor de rugosidad

La superficie externa de una endoprotesis de corona Bioflex II 6 se trato con un abrasivo para crear una superficie externa microestructurada de forma selectiva para potenciar su capacidad de carga de un farmaco, llamada endoprotesis Bio-Freedom (FS). La sustancia terapeutica puede anadirse directamente en la superficie microestructurada de forma selectiva de la endoprotesis.

El factor de rugosidad de FS se caracterizo usando un sistema comercial Veeco Metrology Group (Tucson, Ariz.) WYK0 NT-2000, que es un profilometro optico sin contacto. Modo VSI (interferomedidor de barrido vertical) con programa Vision 32, terminos de extraccion del cilindro e inclinacion de modo que la superficie de la endoprotesis aparezca plana. Se utiliza un filtro de paso bajo que elimina los efectos de la rugosidad espacial alta, suavizando caracteristicas que son menores que una ventana denueve pixeles. Enla tabla siguiente se ofrecen los resultados de cuatro endoprotesis diferentes cuya rugosidad de superficie se produce con chorro de arena, donde Ra es la rugosidad media de la superficie y Rt es el rango de rugosidad de la superficie, como se definieron anteriormente.

Chorro de arena 3 en !pulgadas: Chorro de arena 4 en !pulgadas Chorro de arena 5 en !pulgadas Chorro de arena 6

Ra: 30,2 25,4 25 28,3

Rt: 688,8 336,8 406,9 358,9

Ejemplo 3

Pruebas de implantacion en animales

Las endoprotesis texturizadas del Ejemplo 2 con y sin Biolimus A9® se implantaron en crias de cerdo cruzadas. Se utilizo un cateter con globo para colocar la endoprotesis de acuerdo con el modelo de estiramiento porcino estandar con un 10-20% de sobrestiramiento. Los vasos diana de los cerdos se dilataron mediante tecnicas de angioplastia conocidas antes de colocar la endoprotesis.

Pasados 28 dias se sacrifico a los animales siguiendo protocolos aprobados y se extrajeron el corazon y el tejido vecino.

Se utilizo un microscopio con una camara digital para generar imagenes de alta resolucion de las secciones transversales de los vasos que se habian montado en portas i con los resultados mostrados en las Figs. 9A-9F. Las imagenes se sometieron a analisis histomorfometricos mediante el procedimiento siguiente:

Se disecaron la endoprotesis y la arteria y un histologo las corto en el microtomo. Las muestras se tineron en busca de varias senales de crecimiento, proliferacion celular y otros restos celulares. Se tomaron medidas histomorfometricas:

Area de la arteria en mm2 (Fig. 10A), I EL (Fig. 10B), area de la intima en mm2 (Fig. 10C), area de la luz en mm2 (Fig. 10D), espesor de la intima en micrones (Fig. 10E), % de area de estenosis (Fig. 10F), grado histologico en funcion de la lesion y la inflamacion (Fig. 10G), grado histologico basado en matriz extracelular en

5 la intima y reaccion EB/GC (Fig. 10H), grado histologico basado en la endotelizacion y la fibrina en la intima (Fig. 101), grado histologico basado en la inflamacion medial, la necrosis y la fibrosis (Fig. 10J) y grado histologico basado en la inflamacion y la fibrosis de la adventicia (Fig. 10K).

La siguiente tabla muestra los resultados del efecto terapeutico obtenido a los 28 dias de seguimiento.

10 Los datos de las tablas que se ofrecen a continuacion bajo el encabezado de la columna «Area de la luz mm2» ofrecen los resultados del analisis morfometrico de la endoprotesis y los vasos extraidos de los cerdos a los 28 dias de seguimiento:

Tabla 1: Resultados histomorfometricos

Endoprotesis: Area arterial en mm2 Cociente luz/arteria Puntuacion de la lesion Area de luz en mm2

Endoprotesis texturizada sin BA9 (superficie texturizada por eliminacion): 7,76 mm2 1,08 0,57 3,35±0,66

Endoprotesis texturizada con superficie texturizada por eliminacion y 225 !g de Biolimus A9®: 8,49 mm2 1,08 0,50 5,68±0,68

La Fig. 8 muestra el grafico del % de area de oclusion para cada endoprotesis con superficie texturizada y la endoprotesis con superficie texturizada y 225!g de Biolimus A9® .

20 Ejemplo 4

Estudio del implante porcino a los tres meses

A. Implantacion de la endoprotesis

25 En un modelo de cerdos de granja cruzados se implantaron la endoprotesis BioMatrix sin polimero tratada con chorro de arena como en el Ejemplo 2 y con 225 !g de Biolimus A9® o la endoprotesis desnuda BioFlex II segun se muestra en la tabla 3.

30 Tabla 3. Matriz de implante animal para endoprotesis en arteria coronaria porcina

Cerdo N°: Localizacion/tipo de endoprotesis Duracion

DAI: CCI ACD

1: pf DES pf DES pf DES Muerte temprana

2: BMS pf DES pf DES 3 meses

3: BMS n/a* pf DES 3 meses

4: pf DES pf DES BMS 3 meses

5: BMS pf DES pf DES 3 meses

BMS= endoprotesis metalica desnuda, pf DES= endoprotesis liberadora de farmaco sin polimero *No se coloco ninguna endoprotesis en la arteria circunfleja debido a su tamano inadecuado.

35 CV Path Institute, Inc., recibio corazones de 5 cerdos. Se colocaron endoprotesis sin solapamiento en 5 cerdos que se extrajeron para su analisis con microscopia optica a los tres meses. El animal 1 murio a los 2 meses, antes del seguimiento programado a los tres meses, por razones no relacionadas con la colocacion de la endoprotesis. La arteria coronaria circunfleja izquierda (CCI) del animal #3 no recibio la endoprotesis por un tamano inadecuado de la arteria.

B. Materiales y metodos de microscopia optica

Para la microscopia optica, los segmentos vasculares que tenian la endoprotesis se embebieron en plastico de metillmetacrilato y se cortaron secciones de las porciones proximal, media y distal de la endoprotesis, 45 se montaron en portas cargados y se tineron con hematoxilina y eosina y Elastic Van Gieson (EVG). Las secciones proximal y distal sin la endoprotesis de la arteria se embebieron en parafina, se cortaron en cuatro a cinco micrones y se tineron con hematoxilina y eosina y EVG. Todas las secciones se examinaron con

microscopia optica en busca de inflamacion, trombos, formacion de neointima y lesiones de la pared vascular. El programa Morphometry Analysis Morphometric (IP Lab for Macintosh, Scanalytics, Roc�ville, MD) se calibro usando micrometros de microscopia NIST de facil seguimiento de 2 mm lineales y circulos de 2 mm de diametro con todos los objetivos. Klarmann Rulings, Inc., (Manchester, New Hampshire) certifico todas las graduaciones micrometricas. Las zonas que se midieron fueron la LEE (lamina elastica externa), la LEI (lamina elastica interna) y la luz. El espesor de neointima se midio en los puntales de la endoprotesis y entre ellos y se promedio para cada animal. Al restar la LEI a la LEE se determino el area medial.

El porcentaje de estenosis se obtuvo de la formula �1-(area de luz/area de endoprotesis)� x l00. La puntuacion de lesion vascularse determino usando el metodo de Schwartz (Schwartz RS et al., J Am Coll Cardiol 1992; 19:267-274). Se generaron puntuaciones de inflamacion, fibrina y lesion en cada seccion en funcion de un analisis graduado de 0 (ninguna inflamacion/fibrina/lesion) a 3 (inflamacion/fibrina/lesion acentuadas). Se otorgo una puntuacion de inflamacion de 4 a las secciones con 2 o mas reacciones granulomatosas. La cobertura endotelial se semicuantifico y expreso como porcentaje de la circunferencia luminal.

C. Análisis estadistico

Los datos morfometricos continuos se expresaron en forma de media ± DE. El analisis estadistico de los parametros con una distribucion normal se realizo mediante la prueba de la t de Student. La prueba de Wilcoxon se utilizo en el analisis de los parametros sin una distribucion normal o de valores discretos. La normalidad de la distribucion de analizo con la prueba de Wil�-Shapiro. Se considero estadisticamente significativo un valor de � �0,05.

D. �allazgos radiogr�ficos

Todas las endoprotesis aparecieron amplia y uniformemente expandidas sin signos de fractura ni doblez.

E. Observaciones con microscopia optica

1. DES sin polimero

Todas las endoprotesis estaban ampliamente expandidas y permeables sin signos de trombosis a los 3 meses de su implantacion. La formacion de neointima fue leve con un espesor medio de 0,16 mm y se componia de celulas musculares lisas agrupadas de forma laxa y una matriz rica en proteoglucano. La lesion vascular era leve. Se observo un deposito leve de fibrina localizado alrededor de los puntales. Aunque se observo una respuesta granulomatosa en la CCI del animal #5, la inflamacion fue minima en general en los otros vasos. Se observaron ocasionalmente y registraron celulas gigantes. La endotelizacion fue completa sin celulas inflamatorias luminales ni adhesion de plaquetas. Resulta notable la observacion de una calcificacion densa en la neointima en la seccion proximal de la CCI del animal #2 que contenia una endoprotesis metalica desnuda.

2. BMS

Todas las endoprotesis estaban ampliamente expandidas y permeables sin signos de trombosis a los 3 meses de la implantacion. La formacion de neointima fue leve con un espesor medio de 0.21 mm y se componia de celulas musculares lisas agrupadas de forma laxa. Se observo una ruptura medial en la arteria coronaria descendente anterior izquierda (DAI) del animal #2. Este vaso mostro una inflamacion intensa sobre todo alrededor de los puntales debido probablemente a la lesion creada por la implantacion. Sin embargo, excepto en este animal, la lesion vascular y la inflamacion fueron leves en general. No se observaron deposito de fibrina ni mala aposicion en ninguna de las endoprotesis. La endotelizacion era completa sin presencia de celulas inflamatorias luminales ni adhesion de plaquetas.

�. �istomorfometria

Tabla 4. Comparacion morfometrica de la BMS y la PES sin polimero a los 3 meses

Tratamiento DES sin polimero (n=7) BMS (n=4) Valor �

Area de LEE (mm2) 9,52±1,27 7,32±0 ,86 0 ,0 1

Area de LEI (mm2) 8,16±1,0 9 6,15±0 ,81 0 ,0 1

Area luminal (mm2) 6,27±1,59 4,17±0 ,98 0 ,0 4

*Valor � derivado de analisis estadistico con prueba de Wilcoxon

Los resultados de este estudioanimal demostraron un incremento significativo del area luminal (es decir, una reduccion de la restenosis) a los 3 meses de la implantacion de una endoprotesis liberadora de farmaco sin polimero (DES) en un modelo porcino comparada con una endoprotesis metalica desnuda control (BMS).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un metodo para hacer una endoprotesis con el fin de reducir la cifra de aparicion o extension de restenosis o trombosis debidas a una lesion vascular en un sujeto respecto a la observada colocando en la zona lesionada una endoprotesis metalica desnuda expansible formada de filamentos metalicos interconectados y con una cubierta en la superficie externa de los filamentos de la endoprotesis de un polimero portador que contiene un farmaco -limus, y cuyo metodo comprende:

-

La abrasion de regiones de la superficie externa de los filamentos de la endoprotesis para una rugosidad de la superficie (Ra) de al menos unos 20 urn (0,5 !m) y un rango de rugosidad de la superficie (Rt) de 300-700 !in (7,5-17,5 !m) y

-

El revestimiento de las regiones rugosas de los filamentos de la endoprotesis con una cubierta sin polimero del farmaco -limus, hasta un espesor de la cubierta mayor que el rango de rugosidad de la superficie de la superficie rugosa de la endoprotesis.
2.

Un metodo para hacer endoprotesis expansibles formadas de filamentos metalicos interconectados para la administracion de farmacos contra la restenosis, cuyo metodo comprende;

-La abrasion de las regiones superficiales externas de los filamentos de la endoprotesis hasta una rugosidad de superficie (Ra) de al menos 20 !in (0,5 urn) aproximadamente y un rango de rugosidad de la superficie (Rt) de 300-700 !in (7,5-17,5 !m); y elrevestimiento de la superficie externa de la endoprotesis con un farmaco -limus sin polimero.
3.

El metodo de acuerdo, con las reivindicaciones 1 o 2, por el que los filamentos de la endoprotesis se vuelven rugosos hasta una rugosidad de la superficie de 20-40 !in (0,5 a 1 !m).
4.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por el que la rugosidad mencionada se produce erosionando las regiones superficiales externas de los filamentos de la endoprotesis con un chorro presurizado de particulas abrasivas.
5.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por el que la rugosidad mencionada se lleva a cabo formando una mascara de pelicula de hidrocarbono sobre las regiones superficiales externas de los filamentos de la endoprotesis, eliminando selectivamente el material de la endoprotesis expuesto por la mascara y la mascara.
6.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por el que la rugosidad mencionada se produce mediante el grabado con laser de las regiones superficiales externas de los filamentos de la endoprotesis.
7.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por el que la rugosidad mencionada se lleva a cabo granando las regiones superficiales externas de los filamentos para imprimir un patron sobre ellas.
8.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por el que la cubierta mencionada se anade aplicando una solucion viscosa del farmaco sobre las superficies externas del filamento de la endoprotesis y secando la solucion aplicada para formar una cubierta farmacologica solida sobre los filamentos de la endoprotesis.
9.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por el que la cubierta mencionada se realiza aplicando una cantidad final de farmaco -limus sobre la endoprotesis de entre 80 y 240 !g /cm de longitud de la endoprotesis.
10.

El metodo, de acuerdo con la reivindicacion 9, por el que el recubrimiento mencionada se aplica para obtener una cubierta final con un espesor de entre 5 y 15 !m.
11.

El metodo, de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, por elque la cubierta de farmaco -limus de la endoprotesis mencionada es Biolimus A9.
12.

Una endoprotesis expansible para reducir la cifra de aparicion y extension de restenosis o trombosis, sin la respuesta inflamatoria producida por una endoprotesis que tuviera una cubierta de polimero liberadora de farmaco -limus, cuando la endoprotesis se coloca en el lugar de la lesion vascular, y que comprende:

-

Una endoprotesis expansible formada de filamentos metalicos interconectados y con una superficie externa rugosa de estos filamentos caracterizada por una rugosidad de la superficie(Ra) deal menos unos 20 !in (0,5 !m) y un rango de rugosidad de la superficie (Rt) de 300-700 !in (7,5-17,5 !m) y

-

Sobre las regiones rugosas de los filamentos de la endoprotesis, una cubierta sin polimero del farmaco -limus que tiene un espesor mayor del rango de rugosidad de la superficie rugosa de la endoprotesis.
13.

La endoprotesis, de acuerdo con la reivindicacion 12, en la que sus filamentos estan erosionados hasta adquirir una rugosidad de la superficie (Ra) de 20-40 !in (0,5 a 1 !m).
14.

La endoprotesis, de acuerdo con la reivindicacion 12, en la que sus filamentos estan erosionados para tener un rango de rugosidad de la superficie (Rt) de 300-500 uin (7,5-12,5 !m).

5 15. La endoprotesis, de acuerdo con la reivindicacion 12, en la que el farmaco -limus es Biolimus A9.
16.

La endoprotesis, de acuerdo con la reivindicacion 12, en la que la cubierta sin polimero del farmaco -limus cubre entre 80 y 240 !g/cm de longitud de laendoprotesis.
17.

La endoprotesis, de acuerdo con la reivindicacion 12, en la que la cubierta sin polimero del farmaco -limus tiene un espesor de entre 5 y 1 5 !m.

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