ES2380613T3 - Inhibidores peptidomiméticos bicíclicos de aspartil-proteasas para el tratamiento de enfermedades infecciosas - Google Patents

Abstract

Los compuestos de fórmula (I) en la que: R1 es -CH(R)COR5; R es una cadena lateral de α-aminoácido; R2 es H, alquilo, arilo, alquilarilo; R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, -CH(cadena lateral de α- aminoácido)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están conectados pueden formar un ciclo de 5 a 8 miembros, opcionalmente sustituido; R5 se selecciona ente el grupo que consiste en -Oalquilo, -Oarilo, -NHalquilo, NHarilo, aminoácido, péptido; comprendiendo todas las combinaciones posibles de estereoisómeros; en la que la cadena lateral de aminoácido se refiere a diversas sustituciones, como una cadena lateral enlazada a un "aminoácido"; el término "aminoácido" incluye cada uno de los α-aminoácidos naturales de las series L o D que tiene como "cadena lateral": -H para glicina; -CH3 para alanina; -CH(CH3)2 para valina; -CH2CH(CH3)2 para leucina; -CH(CH3)CH2CH3 para isoleucina; -CH2OH para serina; -CH(OH)CH3 para treonina; -CH2SH para cisteína; -CH2CH2SCH3 para metionina; -CH2-(fenilo) para fenilalanina; -CH2-(fenil)-OH para tirosina; -CH2-(indol) para triptófano; -CH2COOH para ácido aspártico; -CH2C(O)(NH2) para asparagina; -CH2CH2COOH para ácido glutámico; -CH2CH2C(O)NH2 para glutamina; -CH2CH2CH2-N(H)C(NH2)NH para arginina; -CH2-(imidazol) para histidina; -CH2(CH2)3NH2 para lisina, comprendiendo las mismas cadenas laterales de aminoácido que portan grupos protectores adecuados; el término "aminoácido" incluye aminoácidos no naturales seleccionados entre el grupo que consiste en Ornitín (Orn), norleucina (Nle), norvalina (NVa), β-alanina, L o D α-fenilglicina (Phg), ácido diaminopropiónico, ácido diaminobutírico y ácido aminohidroxibutírico.

Description

Inhibidores peptidomiméticos bicíclicos de aspartil-proteasas para el tratamiento de enfermedades infecciosas.

Campo de la invención

[0001] La presente invención se refiere a derivados de 3-aza-biciclo[3,2,1]octano de fórmula general (I) útiles en el tratamiento enfermedades infecciosas y particularmente patologías producidas por patógenos microbianos que expresan la actividad aspartil-proteasa. Específicamente, la invención se refiere a compuestos de fórmula general (I) y sus metabolitos, como inhibidores de SAP2 de Candida albicans para el tratamiento de infecciones fúngicas, como inhibidores de proteasa del VIH para tratar infecciones por VIH, o como inhibidores de plasmepsinas o histo-aspartil proteasa (HAP) para el tratamiento de la malaria.

Estado de la técnica

[0002] Las aspartil proteasas están ampliamente distribuidas en muchos organismos y tejidos con diferentes propiedades fisiológicas y funcionales, y contienen dos restos de aspartilo en el sitio activo, uno protonado y el otro no, que actúan juntos como catalizadores ácido-base generales. Se cree que una molécula de agua unida entre dos restos de aspartato es el nucleófilo para la hidrólisis del enlace de amida, y se activa mediante el resto de ácido aspártico catalítico desprotonado. Para catalizar la hidrólisis del péptido, los dos restos aspárticos deben estar lo suficientemente próximos en la estructura terciaria de la molécula. La mayoría de las proteasas aspárticas pertenecen a la familia de la pepsina, incluyendo enzimas digestivas, tales como pepsina y quimotripsina, así como captesinas lisosomales D y enzimas procesadoras, tales como renina y ciertas proteasas fúngicas (los SAP de Candida albicans, penicilopepsina, etc). Una segunda familia comprende proteasas virales, tales como el VIH, también llamada retropepsina. En general, el sitio activo de las proteasas asparticas no contiene grupos que sean lo suficientemente nucleófilos para que puedan modificarse químicamente por un inhibidor selectivo irreversible. Por lo tanto, la mayoría de los inhibidores de proteasa aspártica desarrollados hasta ahora se unen a su enzima diana a través de interacciones no covalentes. Por tanto, estos compuestos son inhibidores reversibles y dan como resultado una inhibición eficaz cuando la enzima muestra una afinidad mayor por el inhibidor que por su sustrato natural (Tacconelli, E. et al. Curr. Med. Chem. 2004, 4,49).

[0003] Se ha propuesto que estructuras estables que se parecen al estado de transición de una reacción catalizada por enzimas deben unir la enzima más estrechamente que el sustrato. En consecuencia, una estrategia que ha sido muy satisfactoria para el diseño de inhibidores de aspartil proteasa eficaces se basa en la incorporación de un isóstero en estado de transición en una estructura peptidomimética.

[0004] Candida albicans es un patógeno fúngico oportunista que produce infecciones sistémicas graves especialmente en individuos inmunodeficientes. Aunque cierto número de agentes antifúngicos están disponibles, la necesidad de nuevos fármacos contra C. albicans está aumentando debido tanto a la extensa aparición de infecciones sistémicas y mucosas producidas por Candida, como al desarrollo de resistencia a los fármacos disponibles (Shao, P. -L. et al. Int. J. Antimicrob. Agents 2007, 30, 487). De hecho, a pesar de la disponibilidad de fármacos, Candida albicans destaca como una causa muy frecuente de morbilidad, coste de hospitalización y mortalidad (Pfaller MA & D:J:Diekema. Epidemiology of invasive Candidiasis: a persistent public health Problem. Clin. Microbiol. Rev. 2007;20:133-163). Aunque la capacidad de producir una enfermedad es probablemente un proceso complejo que implica interacciones múltiples entre Candida y el huésped, la actividad de las Aspartil Proteasas Secretadas (SAP) parece ser un factor de virulencia principal y por tanto ofrece una posible diana para la intervención del fármaco en infecciones. Las cepas de Candida expresan al menos nueve genes distintos (SAP1-9) en el transcurso de la misma enfermedad pero en diferentes etapas de infección, indicando que las diferentes SAP tienen funciones diferentes (Schaller, M. et al. J. Invest. Dermatol. 2000, 114, 712); particularmente, entre ellas, la SAP2 es una de las enzimas más expresadas, implicadas en la invasión y colonización persistente en el huésped.

[0005] Otras pruebas consistentes de la necesidad de inhibidores de la actividad de la aspartil proteasa se deben a los siguientes aspectos:

-

Los pacientes inmudeficientes que padecen infecciones producidas por Candida albicans pueden desarrollar candidiasis sistémica y también resistencia a productos terapéuticos comunes.

-

Los virus VIH y HTLV dependen de sus aspartil proteasas para la maduración vírica.

-

Plasmodium falciparum utiliza las plasmepsinas I y II para procesar hemoglobina. Recientemente, se ha demostrado la actividad inhibidora de inhibidores de proteasa del VIH (VIH-IP) frente a microorganismos patógenos en los que las aspartil proteasas desempeñan una función clave (Tacconelli et al., Curr. Med. Chem., 2004,4,49). Particularmente, los VIH-IP muestran actividad micromolar hacia las aspartil proteasas de Candida albicans (Cassone et al., J. Infect. Dis., 1999, 180, 448) y las plasmepsinas II y IV de la malaria (Andrews et al., Antimicrob. Agents Chemother. 2006, 639). Tales resultados armonizan con la flexibilidad de estas moléculas y alguna analogía estructural entre la aspartil proteasas del VIH-1 y la SAP2 de Candida

albicans.

[0006] Por lo tanto, nuevos compuestos que tengan actividad inhibidora hacia las aspartil proteasas pueden actuar como inhibidores de SAP2 de Candida albicans para tratar infecciones fúngicas, como inhibidores de la proteasa del VIH para tratar infecciones por VIH, como inhibidores de plasmepsinas o de histoaspartil proteasa (HAP) para tratar la malaria.

Los compuestos de fórmula (I)

en la que:

R1 se selecciona ente el grupo que consiste en H, bencilo, p-metoxibencilo, benzhidrilo; preferiblemente bencilo;

15 R2 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo, arilo, alquilarilo; preferiblemente H, bencilo, metilo, isobutilo.R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, -CH(cadena lateral de !aminoácido)CH2OH; preferiblemente H, hidroxietilo, propargilo, -CH(cadena lateral de Leu)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos para formar un ciclo, eventualmente sustituido;

20 preferiblemente piperidina, 4-hidroxietil-piperazina, 4-carboetoxi-piperazina, morfolina; incluyendo todas las combinaciones posibles de estereoisómeros; son conocidos.

[0007] Su preparación se ha indicado en J. Org. Chem. 1999, 64, 7347; J. Org. Chem. 2002, 67, 7483; Bioorg. Med. Chem. 2001, 9, 1625; Eur. J. Org. Chem. 2002, 873; J. Org. Chem. 2002, 67, 7483; C. R. Chimie 2003, 631; J. 25 Comb. Chem. 2007, 9, 454.

[0008] Su uso en composiciones farmacéuticas para el tratamiento de patologías relacionadas con déficit de actividad de neurotrofinas se ha descrito en el documento WO2004/000324. El documento US 2006/258648 desvela compuestos bicíclicos relacionados estructuralmente como inhibidores de aspartil proteasas útiles para tratar

30 infecciones fúngicas.

[0009] Por lo tanto, el objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos alternativos para la preparación de medicamentos para el tratamiento de patologías relacionadas con la actividad de las aspartil proteasas, y específicamente de la SAP2, y más específicamente para el tratamiento de infecciones sistémicas

35 resistentes a fármacos de Candida albicans en pacientes inmunodeprimidos.

Descripción resumida de las figuras

[0010]

40 FIGURA 1 – Infección vaginal con C. albicans SA40 en ratas tratadas por vía intravaginal con APG12 después de la exposición (1, 24, 48 h) FIGURA 2 – Infección vaginal con C. albicans AIDS 68 en ratas tratadas por vía intravaginal con APG12 después de la exposición (1, 24, 48 h)

Descripción detallada de la invención

[0011] La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I)

en la que:

R1 es a-CH(R)COR5; R es una cadena lateral de !-aminoácido, preferiblemente dicho !-aminoácido se selecciona entre el grupo que consiste en Gly, Leu, Val, lie, Ala, Phe, Phg, Nle, Nva; R2 es H, alquilo, arilo, alquilarilo, preferiblemente H, bencilo, metilo, isobutilo; R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, -CH(cadena lateral de !aminoácido)CH2OH; preferiblemente H, hidroxietilo, propargilo, -CH(cadena lateral de Leu)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos pueden formar un ciclo de 5 a 8 miembros, eventualmente sustituido; preferiblemente piperidina, 4-hidroxietil-piperazina, 4-carboetoxi-piperazina, 4-bencilpiperazina, 4-fenetil-piperazina, morfolina; R5 se selecciona ente el grupo que consiste en -Oalquilo, -Oarilo, -NHalquilo, NHarilo, aminoácido, péptido; preferiblemente-OCH3, NHCH2CH(OH)CH2CONHBu;

incluyendo todas las posibles combinaciones de estereoisómeros.

[0012] Sorprendentemente, se ha descubierto que los compuestos de fórmula (I)

en la que:

R1 se selecciona entre el grupo que consiste en bencilo, fenilo, -CH(R)COR5; preferiblemente bencilo, - CH(R)COR5; R es una cadena lateral de !-aminoácido; preferiblemente dicho !-aminoácido se selecciona entre el grupo que consiste en Gly, Leu, Val, lie, Ala, Phe, Phg, Nle, Nva; R2 es H, alquilo, arilo, alquilarilo, preferiblemente H, bencilo, metilo, isobutilo; R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, -CH(cadena lateral de !aminoácido)CH2OH; preferiblemente H, hidroxietilo, propargilo, -CH(cadena lateral de Leu)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos pueden formar un ciclo de 5 a 8 miembros, eventualmente sustituido; preferiblemente piperidina, 4-hidroxietil-piperazina, 4-carboetoxi-piperazina; R5 se selecciona ente el grupo que consiste en -Oalquilo, -Oarilo, -NHalquilo, NHarilo, !-aminoácido, péptido; preferiblemente -OCH3, NHCH2CH(OH)CH2CONHBu;

incluyendo todas las posibles combinaciones de estereoisómeros;

son inhibidores potentes, tanto in vitro, como in vivo de SAP2, por tanto, pueden usarse para la preparación de medicamentos para tratar enfermedades infecciosas, preferiblemente relacionadas con Candida albicans, VIH, HTLV, Plasodium falciparum.

[0013] Un aspecto de la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen al menos un compuesto de fórmula (I), en la que R1 es -CH(cadena lateral de !-aminoácido)COR5; preferiblemente dicho !aminoácido se selecciona ente el grupo que consiste en Gly, Leu, Val, lie, Ala, Phe, Phg, Nle, Nva; y al menos otro ingrediente, excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

[0014] De acuerdo con la invención:

Alquilo se refiere a un radical de cadena lineal o ramificada, tal como: metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, etenilo, propenilo, butenilo, isobutenilo, acetilenilo, propinilo, butinilo, etc...;

Arilo se refiere a anillos aromáticos o heteroaromáticos que contienen heteroátomos, como N, O, S. Cadena lateral de aminoácido se refiere a diversas sustituciones, como una cadena lateral enlazada a un "aminoácido". El término "aminoácido" incluye cada uno de los !-aminoácidos naturales de las series L o D que tiene como "cadena lateral": -H para glicina; -CH3 para alanina; -CH(CH3)2 para valina; -CH2CH(CH3)2 para leucina; -CH(CH3)CH2CH3 para isoleucina; -CH2OH para serina; -CH(OH)CH3 para treonina; -CH2SH para cisteína; -CH2CH2SCH3 para metionina; -CH2-(fenilo) para fenilalanina; -CH2-(fenil)-OH para tirosina; -CH2-(indol) para triptófano; -CH2COOH para ácido aspártico; -CH2C(O)(NH2) para asparagina; -CH2CH2COOH para ácido glutámico; -CH2CH2C(O)NH2 para glutamina; -CH2CH2CH2-N(H)C(NH2)NH para arginina; -CH2-(imidazol) para histidina; -CH2(CH2)3NH2 para lisina, comprendiendo las mismas cadenas laterales de aminoácido que portan grupos protectores adecuados.

Además, el término "aminoácido" incluye aminoácidos no naturales, tales como Ornitín (Orn), norleucina (Nle), norvalina (NVa), ∀-alanina, L o D !-fenilglicina (Phg), ácido diaminopropiónico, ácido diaminobutírico, ácido 5 aminohidroxibutírico.

[0015] El esquema 1 resume la preparación sintética de compuestos de fórmula (I) como se ha descrito anteriormente, en la que R1 es -CH(R)COR5, R es una cadena lateral de !-aminoácido, a partir de derivados de !aminoácidos (II) disponibles en el mercado o fácilmente sintetizables.

[0016] La alquilación reductora del derivado de aminoácido (II) con un derivado de dicarbonilo disponible en el mercado o fácilmente sintetizable, por ejemplo, dimetoxi-acetaldehído, en un disolvente prótico, preferiblemente 15 metanol, usando un agente reductor, preferiblemente H2 y un catalizador, preferiblemente Pd/C, proporciona la amina secundaria (III) después de agitar a temperatura ambiente, preferiblemente 16 h a 25 ºC. Como alternativa, el compuesto (II) se calienta con un derivado de acetal disponible en el mercado o fácilmente sintetizable que contiene un grupo saliente bueno (X en el Esquema 1), por ejemplo bromoacetaldehído dimetilacetal, preferiblemente a 120 ºC, en un disolvente polar, preferiblemente DMF, en presencia de una base, preferiblemente NEt3, y en presencia de

20 un catalizador, preferiblemente Kl. La amina (III) se convierte sucesivamente en la amida (IV) a través de una reacción de acoplamiento con anhídrido di-O-acetil-tartárico. El tratamiento de (IV) en bruto con un ácido, en un disolvente polar, preferiblemente cloruro de tionilo en MeOH proporciona el acetal cíclico (V) que se calienta además en un disolvente no polar, preferiblemente en tolueno a reflujo durante 30 min, en presencia de un catalizador ácido, preferiblemente H2SO4 sobre gel de sílice, para producir (VI).

25 [0017] La síntesis de las amidas (I) se completa sin utilizar agentes activadores, por calentamiento del éster metílico (VI) en presencia de la amina pura, preferiblemente a 60 ºC durante 18 h.

[0018] Los siguientes ejemplos se presentan para dar una ilustración no limitante de la presente invención. 30

Detalles experimentales

Ejemplo 1. Éster metílico del ácido (2S)-4-metil-2-[(1R,5S,7S)-2-oxo-7-(piperidin-1-carbonil)-6,8-dioxa-3-azabiciclo[3,2,1]oct-3-il]-pentanoico [fórmula del compuesto (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3,

35 R2 = H, R3 y R4 = -CH2(CH2)3CH2-]

[0019] Una solución que contenía metil éster clorhidrato de L-leucina (2,9 g, 16 mmol), 2-bromo-1,1 -dimetoxi etano (1,9 ml, 2,7 g, 16 mmol), NEt3 (6,7 ml, 48 mmol) y una cantidad catalítica de Kl en DMF (190 ml) se agitó a 120 ºC durante 3 días. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se diluyó con agua y se extrajo con DCM.

Después, la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, 1:1 de EtOAc/P.E.) para proporcionar el compuesto de fórmula (III), en la que R = cadena lateral de Leu, en forma de un aceite de color amarillo (1,2 g, rendimiento del 32%).

[!]D24 -3,32 (c 1,0, CHCl3); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 4,38 (t, J = 6 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,30 (s, 3H), 3,29 (s, 3H), 3,24 (t, J = 6 Hz, 1H), 2,68 (dd, J1 = J2 = 6 Hz, 1H), 2,52 (dd, J1 = J2 = 6 Hz, 1H), 1,71 -1,55 (m, 2H), 1,44-1,37 (m, 2H), 0,86 (d, J = 4 Hz, 3H), 0,83 (d, J = 4 Hz, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 175,9 (s), 103,6 (d), 59,9 (d), 54,0 (c), 53,1 (c), 51,7 (c), 49,3 (t), 42,8 (t), 25,0 (d), 22,8 (c), 22,5 (c); EM m/z 233 (0,5), 202 (7,2), 174 (33), 158 (14), 75 (100); IR (CHCl3) 2915, 1729, 1130, 1065 cm-1; Anal. Calc. para C11H23NO4 (233,30): C, 56,63; H, 9,94; N, 6,00. Encontrado: C, 57,49; H, 9,90; N, 6,24.

[0020] A una suspensión de anhídrido (S,S)-2,3-di-O-acetil-tartárico (1 g, 4,7 mmol) en DCM seco (4,5 ml) se le añadió, a 0 ºC y en una atmósfera de nitrógeno, una solución del compuesto de fórmula (III), en la que R = cadena lateral de Leu, (1 g, 4,7 mmol) en DCM seco (2,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de la evaporación del disolvente, el producto en bruto de fórmula (IV), en la que R = cadena lateral de Leu, se disolvió en MeOH (8 ml) y se añadió gota a gota cloruro de tionilo (292 ∃l, 4 mmol) a 0 ºC. Después, se dejó que la mezcla alcanzara 60 ºC y se agitó durante 2 h. El disolvente se retiró y el compuesto de fórmula (V) en bruto, en la que R = cadena lateral de Leu, se aisló en forma de un aceite de color amarillo y se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

[0021] Una solución de (V), en la que R = cadena lateral de Leu, (1,63 g, 4,7 mmol) en tolueno (8 ml) se añadió rápidamente a una suspensión a reflujo de SiO2/H2SO4 (1 g) en tolueno (12 ml). Se dejó que la mezcla reaccionara durante 30 min, y después un tercio del disolvente se eliminó por destilación. La mezcla de reacción caliente se filtró a través de una capa de NaHCO3 y, después de la evaporación del disolvente, el producto en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 1:2 de EtOAc/P.E.), proporcionando (VI), en la que R = cadena lateral de Leu, en forma de un sólido de color blanco (730 mg, rendimiento del 50% en tres etapas).

[!]D24 22,0 (c 1,0, MeOH); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 5,88 (d, J = 2 Hz, 1H), 5,09 (t, J = 8 Hz, 1H), 4,87 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,50 (dd, J1= 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 3,11 (dd, J1= 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 1,671,60 (m, 2H), 1,46-1,32 (m, 1H), 0,88 (s, 3H), 0,84 (s, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 170,8 (s), 168,7 (s), 165,6 (s), 100,0 (d), 77,8 (d), 77,3 (d), 52,8 (d), 52,4 (c), 52,3 (c), 48,1 (t), 36,6 (t), 24,7 (d), 23,3 (c), 21,3 (c); EM m/z 315 (11), 256 (100), 240 (4); Anal. Calc. para C14H21 N07 (315,33): C, 53,33; H, 6,71; N, 4,44. Encontrado: C, 52,99; H, 5,58; N, 4,79.

[0022] Una solución que contenía (VI), en la que R = cadena lateral de Leu, (1 g, 3,2 mmol) y piperidina (6,3 ml, 63 mmol) se agitó a 60 ºC durante una noche. Después, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, 20:1 de DCM/MeOH) para proporcionar el compuesto de fórmula (VII), en la que R = cadena lateral de Leu, R3 y R4 = -CH2(CH2)3CH2-(correspondiente al compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2(CH2)3CH2), en forma de un aceite de color amarillo (816 mg, rendimiento del 70%).

[!]D22 33,6 (c 1,0, CHCl3); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): (mezcla de dos rotámeros) # 5,79 (d, 1H, J = 1,4 Hz), 5,064,94 (m, 1H), 5,02 (s, 1H), 4,82 (s, 1H, menor), 4,71 (s, 1H, mayor), 3,62 (s, 3H, menor), 3,61 (s, 3H, mayor), 3,553,20 (m, 5H), 3,09 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 1,67-1,34 (m, 9H), 0,86 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 0,84 (d, J = 5,8 Hz, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz) (mezcla de dos rotámeros): # 171,1 (s, menor), 170,8 (s, mayor), 167,6 (s, menor), 166,8 (s, mayor), 164,9 (s, menor), 164,8 (s, mayor), 99,6 (d, mayor), 99,5 (d, menor), 78,0 (d), 76,4 (d), 52,7 (c), 52,4 (d, mayor), 52,2 (d, menor), 48,6 (t, mayor), 47,7 (t, menor), 46,4 (t), 43,5 (t), 36,7 (t, mayor), 35,8 (t, menor), 26,4 (t), 25,5 (t), 24,7 (d), 24,5 (t), 23,2 (c), 21,5 (c); EM m/z 368 (M+), 309 (21), 312 (100); IR (CHCl3) 2935, 1739, 1666 cm-1, Anál. calc. para C18H29N3O6 (368,43): C, 58,68; H, 7,66; N, 7,60. Encontrado: C, 57,06; H, 7,50; N, 8,32.

Ejemplo 2. Éster metílico del ácido (2S)-2-[(1R,5S,7S)-7-(4-metil-piperazin-1-carbonil)-2-oxo-6,8-dioxa-3-azabiciclo[3,2,1]oct-3-il]-4-metil-pentanoico [compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2N(CH3)CH2CH2-]

[0023] El compuesto (I), en el que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 =CH2CH2N(CH3)CH2CH2-se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto (I), en el que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 =-CH2(CH2)3CH2-, partiendo del compuesto (VI), en la que R = cadena lateral de Leu, (150 mg, 0,48 mmol) y 1-metil piperazina (1,06 ml, 9,5 mmol). El compuesto (I) puro, en el que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 =-CH2CH2N(CH3)CH2CH2-, (128 mg, rendimiento del 72%) se obtuvo en forma de un aceite de color amarillo.

[!]D25 28,1 (c 0,99, CHCl3); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 5,85 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 5,05 (t, J = 8 Hz, 1H),4,77(s, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,62-3,51 (m, 5H), 3,14 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,42-2,33 (m, 4H), 2,72 (s, 3H), 1,73-1,65 (m, 2H), 1,49-1,42 (m, 1H), 0,92 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 4 Hz, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 170,8 (s), 166,8 (s), 165,0 (s), 99,7 (d), 78,0 (d), 76,4 (d), 55,0, 54,6 (t), 52,8 (c), 52,5 (d), 48,6 (t), 46,1 (c), 45,4 (t), 42,3 (t), 36,9 (t), 24,8 (d), 23,3

(c), 21,6 (c); EM m/z 383 (23), 352 (2,4), 324 (9), 99 (55), 70 (100); IR (CHCl3) 2866,1738,1670 cm-1; Anál. calc. para C18H29N3O6 (383,44): C, 56,38; H, 7,62; N, 10,96. Encontrado: C, 55,12; H, 6,88; N, 12,01.

Ejemplo 3. Éster metílico del ácido 4'-metil-(2'S)-2'-[(1R,5S,7S)-7-(morfolin-4-carbonil)-2-oxo-6,8-dioxa-3-azabiciclo[3,2,1]oct-3-il]-pentanoico [compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2OCH2CH2-]

[0024] El compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu) COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2OCH2CH2-se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu) COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2(CH2)3CH2-, partiendo del compuesto (VI), en la que R = cadena lateral de Leu, (100 mg, 0,32 mmol) y morfolina (0,55 ml, 6,3 mmol). El compuesto de fórmula

(I) puro, en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2OCH2CH2-(95 mg, rendimiento del 65%) se obtuvo en forma de un aceite de color amarillo.

[!]D22 29,0 (c 1,0, CHCl3); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 5,86 (d, J = 2 Hz, 1H), 5,16 (s, 1H), 5,06 (dd, J1 = J2 = 8 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,67-3,52 (m, 9H), 3,15 (d, J = 12 Hz, 1H), 1,75-1,67 (m, 2H), 1,53-1,43 (m, 1H), 0,94 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,92 (d, J = 6 Hz, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 170,8 (s), 99,8 (d), 84,6 (d), 78,0 (d), 66,8 (t), 66,6 (t), 52,8 (c), 52,5 (d), 48,6 (t), 46,0 (t), 42,7 (t), 36,8 (t), 24,8 (d), 23,3 (c), 21,6 (c); EM m/z 370 (14), 311 (60), 283 (19), 168 (100); IR (CHCl3) 2932, 1735, 1668 cm-1; Anal. Calc. para C17H26N2O7 (370,41): C, 55,13; H, 7,08; N, 7,56. Encontrado: C, 54,27; H, 6,40; N, 7,22.

Ejemplo 4. Éster metílico del ácido (2S)-2-[(1R, 5S, 7S)-7-(4-bencil-piperazin-1-carbonil)-2-oxo-6,8-dioxa-3aza-biciclo[3,2,1]oct-3-il]-4-metil-pentanoico [compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2N(bencil)CH2CH2-]

[0025] El compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = CH2CH2N(bencil) CH2CH2-se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2(CH2)3CH2-, partiendo del compuesto de fórmula (VI), en la que R = cadena lateral de Leu, (100 mg, 0,32 mmol) y 1-bencil piperazina (1,1 ml, 6,3 mmol). El compuesto de fórmula (I) puro, en la que R1 = -CH (cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2N(bencil)CH2CH2-(106 mg, rendimiento del 72%) se obtuvo en forma de un aceite de color amarillo.

[!]D23 20,1 (c 1,1, CHCl3); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 7,42-7,27 (m, 5H), 5,88 (s, 1H), 5,25-5,05 (m, 2H), 4,79 (s, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,63-3,53 (m, 7H), 3,16 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 2,51 -2,45 (m, 4H), 1,76-1,68 (m, 2H), 1,55-1,25 (m, 1H), 0,96 (d, J = 5, 3H), 0,93 (d, J = 6,2 Hz, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 170,8 (s), 166,8 (s), 165,0 (s), 129,1 (d), 128,3 (d), 127,3 (d), 99,7 (d), 78,0 (d), 76,4 (d), 62,9 (t), 52,9 (c), 52,7, 52,7 (t), 52,5 (d), 48,5 (t), 45,5, 42,4 (t), 36,8 (t), 24,8 (d), 23,3 (c), 21,6 (c); EM m/z 459 (10), 400 (1), 330 (1), 175 (19), 91 (100); IR (CHCl3) 2940, 1740, 1672 cm-1; Anal. Calc. para C24H33N3O6 (459,55): C, 62,73; H, 7,24; N, 9,14. Encontrado: C, 61,34; H, 6,82; N, 8,50.

Ejemplo 5. Éster metílico del ácido (2S)-2-[(1R,5S,7S)-7-(4-feniletil-piperazin-1-carbonil)-2-oxo-6,8-dioxa-3aza-biciclo[3,2,1]oct-3-il]-4-metil-pentanoico [compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2N(-CH2CH2Ph)CH2CH2-]

[0026] El compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = CH2CH2N(-CH2CH2Ph)CH2CH2-se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito para el compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2(CH2)3CH2-, partiendo del compuesto de fórmula (VI), en la que R = cadena lateral de Leu, (100 mg, 0,32 mmol) y 1-feniletil piperazina (1,2 ml, 6,3 mmol). El compuesto de fórmula (I) puro, en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2N(-CH2CH2Ph)CH2CH2-(89 mg, rendimiento del 59%) se obtuvo en forma de un aceite de color amarillo.

[!]D25 21,3 (c 0,9, CHCl3); RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 7,33-7,18 (m, 5H), 5,88 (d, J = 2 Hz, 1H), 5,17 (s, 1H), 5,09 (dd, J1 = 8 Hz, J2 = 6 Hz, 1H), 4,81 (s, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,78-3,63 (m, 4H), 3,57 (dd, J1= 12 Hz, J2 = 2 Hz, 1H), 3,18 (d, J = 12 Hz, 1H), 2,88-2,80 (m, 2H), 2,70-2,58 (m, 6H), 1,78-1,70 (m, 2H), 1,53-1,25 (m, 1H), 0,98 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6 Hz, 3H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 170,6 (s), 166,5 (s), 164,8 (s), 138,5 (s), 128,4 (d), 128,3 (d), 126,1 (d), 99,5 (d), 77,7 (d), 76,9 (d), 59,5 (t), 52,6 (c), 52,4, 52,2 (t), 51,9 (d), 48,2, 44,3 (t), 41,3 (t), 36,5 (t), 32,4 (t), 24,4 (d), 22,8 (c), 21,2 (c); EM m/z 414 (1), 382 (95), 56(100); IR (CHCl3) 2923, 1740, 1672 cm-1; Anál. calc. para C25H35N3O6 (473,57): C, 63,41; H, 7,45; N, 8,87. Encontrado: C, 62,28; H, 7,01; N, 8,96.

Ejemplo 6. (3-Butilcarbamoil-2-hidroxi-propil)-amida del ácido (2S)-4-metil-2-[(1R,5S,7S)-2-oxo-7-(piperidin-1carbonil)-6,8-dioxa-3-aza-biciclo[3,2,1]oct-3-il]-pentanoico [compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COR5, R2 = H, R3 y R4 = -CH2CH2OCH2CH2-, R5 =-NHCH2CH(OH)CH2CONHBu]

[0027] A una solución de sal clorhidrato del éster metílico del ácido 4-amino-3-hidroxi-butírico, (37 mg, 0,22 mmol)

en DCM (4 ml) se le añadieron, en una atmósfera de nitrógeno y a 0 ºC, PyBrOP (102 mg, 0,22 mmol), ácido (2S)-4metil-2-[(1R,5S,7S)-2-oxo-7-(piperidin-1-carbonil)-6,8-dioxa-3-aza-biciclo[3,2,1]oct-3-il]-pentanoico (80 mg, 0,22 mmol), obtenido previamente por hidrólisis básica del éster del compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COOCH3, R2 = H, R3 y R4=-CH2(CH2)3CH2-, con LiOH y DIPEA (85 ∃I, 0,5 mmol). Se dejó que la solución resultante alcanzara temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Después, la mezcla de reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO3, KHSO4 acuoso al 5% y salmuera, y se secó sobre Na2SO4. Después de la evaporación del disolvente, el producto en bruto se diluyó en EtOAc y se dejó durante tres horas a 4 ºC para permitir la precipitación del PyBrOP. Después de la purificación por cromatografía ultrarrápida, el compuesto resultante (40 mg, 0,08 mmol) se trató con n-butil amina (168 ∃I, 1,7 mmol) en una mezcla de THF (200 ∃I) y dos gotas de H2O a 50 ºC durante tres días. La filtración de la mezcla de reacción sobre Amberlyst 15 y purificación adicional por cromatografía en columna (gel de sílice, 20:1 de DCM/MeOH) proporcionó 30 mg del compuesto de fórmula (I), en la que R1 = -CH(cadena lateral de Leu)COR5, R2= H, R3 y R4 = -CH2CH2OCH2CH2-, R5 = NHCH2CH(OH)CH2CONHBu en forma de un aceite incoloro.

RMN 1H (CDCl3, 200 MHz): # 6,81-6,68 (m, 1H), 6,41 -6,22 (m, 1H), 5,90, 5,86 (s, 1H, mezcla de dos diaestereoisómeros), 5,14-4,81 (m, 3H), 4,13-3,92 (m, 1H), 3,66-3,35 (m, 6H), 3,36-3,02 (m, 4H), 2,28 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 1,88-1,20 (m, 13H), 0,97-0,87 (m, 9H); RMN 13C (CDCl3, 200 MHz): # 171,5 (s), 170,2 (s), 168,0 (s), 164,8 (s), 99,6 (d), 77,9 (d), 67,9 (d), 54,1, 53,9 (d), 47,6 (t), 46,6 (t), 44,5 (t), 43,6 (t), 39,4 (t), 36,4 (t), 34,9 (t), 31,6 (t), 26,4 (t), 25,6 (t), 24,9 (d), 24,6 (t), 23,1 (c), 22,0 (c), 20,3 (t), 13,9 (c); EM m/z 510 (3), 309 (34), 112 (69), 84 (100).

[0028] Los siguientes ejemplos se presentan para dar una ilustración no limitante de la actividad in vitro e in vivo de compuestos seleccionados de la presente invención.

Ensayo enzimático proteasa

[0029] Método espectrofotométrico: la actividad proteasa de los diversos compuestos de fórmula (I) se midió mediante un ensayo espectrofotométrico con respecto a la actividad de la pepstatina a la misma concentración: cada ensayo contenía 50 ∃l de muestra en 0,4 ml de BSA al 1% (p/v) en citrato sódico 50 mM, pH 3,2 y 50 ∃I de solución de proteasa (1 ∃g/ml). Después de 30 min a 37 ºC, se añadió 1 ml de ácido tricloroacético al 10% (p/v). Los tubos se almacenaron en hielo durante 30 min, y después se centrifugaron (3000 g) durante 10 min. La absorbancia del sobrenadante se leyó a 280 nm. Control: BSA al 1% en tampón citrato. Una unidad de la enzima se catalizó a %A280 de 1 min-1. Con la proteasa pura, el ensayo fue proporcional a la concentración de la enzima durante el intervalo 0,10,4 de %A280 y una detección límite de 1 ∃g (De Bernardis F., Sullivan P.A., Cassone A. Medical Mycology 2001, 39, 303).

Tabla 1. Actividad in vitro hacia SAP2 de compuestos representativos de la presente invención. 1% es el porcentaje de inhibición con respecto a pepstatina a la misma concentración de 10 ∃M.

Comp.

R1 R2 R3 R4 R5 I%

1

-CH(cadena lateral de Leu)COR5 H -CH2(CH2)3CH2- OCH3 37

2

-CH(cadena lateral de Leu)COR5 H -CH2CH2OCH2CH2 OCH3 32

3

-CH(cadena lateral de Leu)COR5 H -CH2(CH2)3CH2 NHCH2CH(OH)CH2CONHBu 22

4

-CH2Ph H H -CH2CH2OH - 36

5

-CH2Ph H H -CH(cadena lateral de Leu)CH2OH 41

6

-CH2Ph H -CH2(CH2)3CH2 - 42

7

-CH2Ph H -(CH2)2NCH2CH2OH(CH2)2 - 34

8

H -CH2CH2OCH2CH2 - 31

9

-CH2Ph H CH2CH2NC(O)OCH2CH3CH-2CH2 - 37

10

-CH2Ph H H -(CH2)3OH - 12

Comp.

R1 R2 R3 R4 R5 I%

11

-CH2Ph H H -CH(cadena lateral de Pro)CH2OH 24

12

-CH2Ph H H -CH(cadena lateral de DPro)CH2OH 17

13

-CH2Ph H H -CH(cadena lateral de Phg)CH2OH 16

14

-CH2Ph H H -CH(cadena lateral de Phe)CH2OH 19

15

-CH2Ph H H -CH(cadena lateral de DPhe)CH2OH

15

16

-CH2Ph -CH2Ph H -(CH2)3CH3 - 17

17

-CH2Ph -CH2Ph H -(CH2)5CH3 - 21

18

-CH2Ph -CH2Ph H -CH2CF3 - 17

19

-CH2Ph -CH2Ph -CH2CH2OCH2CH2 - 25

20

-CH2Ph -CH2Ph -CH2CH2SCH2CH2 - 28

21

-CH2Ph -CH2Ph -(CH2)2NCH2CH2OH(CH2)2 - 31

Ensayo in vivo

5 Infección vaginal experimental: para la infección vaginal experimental, se adoptó un modelo vaginal de rata descrito previamente (De Bernardis, F.; Boccanera, M.; Adriani, D.; Spreghini, E.; Santoni, G.; Cassone, A. Infect. Immun., 1997, 65, 3399).

[0030] En resumen, a ratas Wistar hembras ooforectomizadas (80-100 g; Charles River Calco, Italia) se les inyectó

10 por vía subcutánea 0,5 mg de benzoato de estradiol (Estradiolo, Amsa Farmaceutici srl, Roma, Italia). Seis días después del primer estradiol se inoculó a los animales, por vía intravaginal, 107 células de levadura en 0,1 ml de solución salina de cada cepa de C.albicans sometida a ensayo. El inóculo se dispensó en la cavidad vaginal a través de una jeringa equipada con una boquilla calibrada multipropósito (Combitip; PBI, Milán, Italia). Las células de levadura se habían cultivado previamente en caldo YPD (extracto de levadura 1%; peptona 2%; dextrosa 2%) a 28

15 ºC en un agitador giratorio (200 rpm), se recogieron por centrifugación (1500 g), se lavaron, se contaron en un hemocitómetro, y se suspendieron para dar el número requerido en la solución salina. El número de células en el fluido vaginal se contó cultivando muestras de 100 ∃I (usando a un asa de plástico calibrada, Disponoic, PBI, Milán, Italia) tomadas de cada uno de los animales, en agar Sabouraud que contenía cloramfenicol (50 ∃g/ml) como se ha descrito previamente. La rata se consideró infectada cuando al menos 1 UFC estuvo presente en el lavado vaginal,

20 es decir, un recuento de > 103 UFC/ml.

[0031] Como un ejemplo representativo para estudios in vivo, uno de los compuestos de fórmula (I), como se ha descrito anteriormente y en lo sucesivo denominado APG12, correspondiente al compuesto 6 de la Tabla 1, se administró por vía intravaginal a concentraciones de 10 ∃M, 1 h, 24 h y 48 h después de la exposición intravaginal a

25 Candida albicans con dos cepas diferentes, concretamente SA40 y la AIDS68 resistente a fármaco. De forma similar, se administró un control positivo (pepstatina 10 ∃g; fluconazol 10 ∃g) y un control negativo (solución salina estéril).

[0032] El perfil de eliminación de Candida albicans en ratas tratadas por vía intravaginal con APG12 es similar a la aceleración observada en ratas tratadas con la pepstatina inhibidora de SAP2 natural, y en ratas tratadas con

30 fluconazol (Tabla 2 y Figura 1). De mayor importancia, la aceleración de la eliminación de Candida albicans en la cepa AIDS68 resistente a fármaco muestra eficacia de la pepstatina inhibidora de SAP2 natural APG12 y de APG12, mientras que el fluconazol es ineficaz, mostrando un perfil de eliminación similar al del control sin tratar (Tabla 3 y Figura 2).

TABLA 2. Aceleración de eliminación de Candida SA40 en ratas tratadas por vía intravaginal con APG12 después de exposición (1, 24, 48 h)

D�?AS

SA40 + APG12 SA40 + pepstatina SA40

0

>100 >100 >100

1

70 ± 1,3 56,8 + 2 >100

2

57,6 ± 1,4 51 ±1,2 >100

5

39,2 ± 3 32,4 ± 2,5 80 ± 2,6

7

30,6 ± 1,8 28 ± 1,5 66 ± 2,1

14

14,4 ± 1,6 9,4 ± 1,4 26,2 ± 1,8

21

8 ± 1,5 5 ± 1,3 12,8 ± 1,2

28

1,2 ± 0,7 0 5,8 ± 1,6

Todos los valores x 1000; SA40 : control sin tratar; Día de comienzo 1, todas las diferencias entre APG12tratado y control sin tratar son estadísticamente significativas; (P <0,01, ensayo U de Mann-withney)

TABLA 3. Aceleración de eliminación de Candida AIDS68 en ratas tratadas por vía intravaginal con APG 12 después de exposición (1, 24, 48 h)

D�?AS

AIDS68 + APG12 AIDS68 + pepstatina AIDS68 + fluconazol AIDS68

0

>100 ± 0 >100 ± 0 >100 ± 0 >100 ± 0

1

71,8 ± 1,3 58,4 ± 1,0 100 ± 0 100 ± 0

2

62,6 ± 1,5 52,0 ± 1,3 93 ± 4,3 100 ± 0

5

40,6 ± 1,4 37,2 ± 1,6 61 ± 2,5 71 ± 1,6

7

23,2 ± 1,4 30,0 ± 1,2 44 ± 2,9 50 ± 3,5

14

12,8 ± 1,2 19,8 ± 0,8 18,7 ± 3,8 25 ± 1,6

21

3,4 ± 1,7 3,8 ± 1,9 11,7 ± 0,7 10,7 ± 1,6

28

0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 7,7 ± 3

Todos los valores x 1000; AIDS68 : control sin tratar; Día de comienzo 1, todas las diferencias entre APG12tratado y control sin tratar son estadísticamente significativas; (P <0,01, ensayo U de Mann-withney)

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Los compuestos de fórmula (I)

   en la que:

   R1 es -CH(R)COR5;

   10 R es una cadena lateral de !-aminoácido; R2 es H, alquilo, arilo, alquilarilo; R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, -CH(cadena lateral de !aminoácido)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están conectados pueden formar un ciclo de 5 a 8 miembros, opcionalmente sustituido;

   15 R5 se selecciona ente el grupo que consiste en -Oalquilo, -Oarilo, -NHalquilo, NHarilo, aminoácido, péptido;

   comprendiendo todas las combinaciones posibles de estereoisómeros;

   en la que la cadena lateral de aminoácido se refiere a diversas sustituciones, como una cadena lateral enlazada a

   20 un "aminoácido"; el término "aminoácido" incluye cada uno de los !-aminoácidos naturales de las series L o D que tiene como "cadena lateral": -H para glicina; -CH3 para alanina; -CH(CH3)2 para valina; -CH2CH(CH3)2 para leucina; -CH(CH3)CH2CH3 para isoleucina; -CH2OH para serina; -CH(OH)CH3 para treonina; -CH2SH para cisteína; -CH2CH2SCH3 para metionina; -CH2-(fenilo) para fenilalanina; -CH2-(fenil)-OH para tirosina; -CH2-(indol) para triptófano; -CH2COOH para ácido aspártico; -CH2C(O)(NH2) para asparagina; -CH2CH2COOH para ácido

   25 glutámico; -CH2CH2C(O)NH2 para glutamina; -CH2CH2CH2-N(H)C(NH2)NH para arginina; -CH2-(imidazol) para histidina; -CH2(CH2)3NH2 para lisina, comprendiendo las mismas cadenas laterales de aminoácido que portan grupos protectores adecuados; el término "aminoácido" incluye aminoácidos no naturales seleccionados entre el grupo que consiste en Ornitín (Orn), norleucina (Nle), norvalina (NVa), ∀-alanina, L o D !-fenilglicina (Phg), ácido diaminopropiónico, ácido diaminobutírico y ácido aminohidroxibutírico.
2. 2. Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en la que:

   R2 es H, bencilo, metilo, isobutilo;

   35 3. Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 2, en la que:

   R se selecciona ente el grupo que consiste en aquellos de Gly, Leu, Val, lie, Ala, Phe, Phg, Nle, Nva.
3. 4. Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 3, en la que:

   40 R3 y R4 se seleccionan independientemente en el grupo que consiste en H, hidroxietilo, propargilo, CH(cadena lateral de Leu) CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están conectados pueden formar un anillo, seleccionado en el grupo que consiste en piperidina, 4-hidroxietil-piperazina, 4-metil-piperazina, 4-carboetoxi-piperazina, 4

   45 feniletil-piperazina, 4-bencil-piperazina, morfolina.
4. 5. Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 4, en la que:

   R3 es H y R4 se selecciona ente el grupo que consiste en H, hidroxietilo, propargilo, -CH(cadena lateral de 50 Leu)CH2OH; o R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están conectados pueden formar un anillo, seleccionado entre el grupo que consiste en piperidina, 4-hidroxietil-piperazina, 4-carboetoxi-piperazina.

5. 6.

   Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 5, en la que:

6. 7.

   El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1-6 para su uso como un medicamento.

7. 8.

   Uso de un compuesto de fórmula (I), en la que: R1 se selecciona ente el grupo que consiste en bencilo, fenilo, -CH(R)COR5;

   55 R es cadena lateral de Leu.

   5 R es una cadena lateral de !-aminoácido; R2 es H, alquilo, arilo, alquilarilo; R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hidroxialquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, -CH(cadena lateral de !

   10 aminoácido)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están conectados pueden formar un ciclo de 5 a 8 miembros, opcionalmente sustituido; R5 se selecciona ente el grupo que consiste en -Oalquilo, -Oarilo, -NHalquilo, NHarilo, aminoácido, péptido;

   15 comprendiendo todas las combinaciones posibles de estereoisómeros;

   en la que la cadena lateral de aminoácido se refiere a diversas sustituciones, como una cadena lateral enlazada a un "aminoácido"; el término "aminoácido" incluye cada uno de los !-aminoácidos naturales de las series L o D que tiene como "cadena lateral": -H para glicina; -CH3 para alanina; -CH(CH3)2 para valina; -CH2CH(CH3)2 para leucina; 20 CH(CH3)CH2CH3 para isoleucina; -CH2OH para serina; -CH(OH)CH3 para treonina; -CH2SH para cisteína; -CH2CH2SCH3 para metionina; -CH2-(fenilo) para fenilalanina; -CH2-(fenil)-OH para tirosina; -CH2-(indol) para triptófano; -CH2COOH para ácido aspártico; -CH2C(O)(NH2) para asparagina; -CH2CH2COOH para ácido glutámico; -CH2CH2C(O)NH2 para glutamina; -CH2CH2CH2-N(H)C(NH2)NH para arginina; -CH2-(imidazol) para histidina; -CH2(CH2)3NH2 para lisina, comprendiendo las mismas cadenas laterales de aminoácido que portan

   25 grupos protectores adecuados; el término "aminoácido" incluye aminoácidos no naturales seleccionados entre el grupo que consiste en Ornitín (Orn), norleucina (Nle), norvalina (NVa), ∀-alanina, L o D !-fenilglicina (Phg), ácido diaminopropiónico, ácido diaminobutírico y ácido aminohidroxibutírico.

   para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades infecciosas. 30
8. 9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8 de un compuesto de fórmula (I) en la que:

   R1 se selecciona ente el grupo que consiste en bencilo, -CH(R)COR5, en el que dicha R es un !aminoácido seleccionado ente el grupo que consiste en aquellos de Gly, Leu, Val, lie, Ala, Phe, Phg, Nle,

   35 Nva. R2 se selecciona entre el grupo de H, bencilo, metilo, isobutilo; R3 y R4 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste en H, hidroxietilo, propargilo, CH(cadena lateral de Leu)CH2OH; R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos pueden formar un ciclo, seleccionado entre el

   40 grupo que consiste en piperidina, 4-hidroxi-piperazina, 4-carboetoxi-piperazina.
9. 10. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8-9 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades infecciosas asociadas con patógenos microbianos que expresan actividad de aspartilproteasa.
10. 11. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 para la preparación de un medicamente para el tratamiento de enfermedades infecciosas asociadas con patógenos, seleccionados entre el grupo que consiste en Candida albicans, VIH, HTLV, Plasmodium falciparum.

    50 12. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades infecciosas resistentes a fármaco asociadas con Candida albicans.
11. 13. Composición farmacéutica que contiene al menos un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con las

    reivindicaciones 1-6, y al menos otro ingrediente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 55