ES2370839A1 - Uso de bacterias lácticas para conservar los flavanoles de un producto alimenticio y prevenir el pardeamiento del vino. - Google Patents
Uso de bacterias lácticas para conservar los flavanoles de un producto alimenticio y prevenir el pardeamiento del vino. Download PDFInfo
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Abstract
Uso de bacterias lácticas para conservar los flavanoles de un producto alimenticio y prevenir el pardeamiento del vino.La presente invención se refiere al uso de al menos una bacteria láctica de grado GRAS (Generally Regarded As Safe) para conservar mayor cantidad de flavanoles, preferiblemente (+)-catequina y/o (-)-epicatequina, en al menos un producto alimenticio así como también para disminuir el pardeamiento de al menos un tipo de vino, con respecto a un control, donde preferiblemente dicho vino es blanco.
Description
Uso de bacterias lácticas para conservar los
flavanoles de un producto alimenticio y prevenir el pardeamiento del
vino.
La presente invención se encuadra dentro del
campo del sector alimentario, en concreto, la presente invención se
refiere al uso de al menos una bacteria láctica de grado GRAS
(Generally Regarded As Safe) para conservar mayor cantidad de
flavanoles en al menos un producto alimenticio así como también para
disminuir el pardeamiento de al menos un vino, con respecto a un
control.
Los flavanoles (también conocidos como
flavan-3-ol) son una clase de
flavonoides que tienen la estructura
2-fenil-3,4-dihidro-2H-cromen-3-ol.
Estos compuestos incluyen catequina y epicatequina. En la naturaleza
se encuentran mayoritariamente las formas (+) catequina y (-)
epicatequina. Los flavanoles, al contrario que los flavonoles, no
contienen el grupo cetona. Los flavonoides que no contienen el grupo
polifenol poli-hidroxi cetona se conocen más
específicamente con el término de flavanoide o
flavan-3-ol. Los flavanoles son
precursores de proantocianidinas. Tienen dos carbonos quirales, es
decir, que hay 4 diastereoisómeros para cada uno de ellos.
Los flavonoides (tanto los flavonoles como los
flavanoles) son conocidos por su actividad antioxidante. Las
catequinas han sido relacionadas con la prevención de cáncer y
dichos compuestos se han encontrado en fresas, té verde y té negro.
La epicatequina se ha relacionado con la inhibición de la diarrea
(Schuier et al., 2005. J. Nutr., 135(10):
2320-5). Además, la epicatequina mejora el flujo
sanguíneo y por tanto puede suponer la mejora de pacientes con
enfermedades del corazón. La epicatequina se ha encontrado en el
cacao, alcanzando casi el doble de concentración que en el vino y
más de tres veces que en el té verde (Lee et al., 2003. J.
Agric. Food Chem., 51 (25): 7292-5). Por tanto,
en el estado de la técnica se muestra un interés claro en la
generación de productos alimenticios con propiedades beneficiosas
para la salud, especialmente para la prevención de cáncer y
enfermedades cardiovascu-
lares.
lares.
Por otra parte, es conocido que la degradación
oxidativa de catequina y epicatequina en vinos es responsable del
pardeamiento de los mismos. Los métodos utilizados para prevenir el
oscurecimiento o pardeamiento del vino, así como de alimentos
vegetales, se agrupan en métodos físico-químicos y
biológicos. El método más importante y ampliamente utilizado para
prevenir el pardeamiento es el uso de sulfitos debido a su capacidad
antioxidante. Sin embargo, debido a las objeciones relacionadas con
la salud derivadas del uso de sulfitos, la Organización Mundial de
la Salud (W.H.O) y la Organización Mundial de la Viña y el Vino
(O.I.V) han implementado restricciones regulatorias sobre su uso.
Además, los productores de vino han encontrado que el uso extensivo
de sulfitos compromete la calidad del vino al proporcionar
cualidades organolépticas no deseables al producto. Como sustituto
de los sulfitos para prevenir el pardeamiento del vino se ha
utilizado ampliamente el ácido ascórbico. No obstante una vez que el
ácido ascórbico se oxida a ácido dehidroascórbico, las quinonas se
pueden acumular y sufrir pardeamiento. Además estudios recientes
están aportando evidencia de que el ácido ascórbico posee actividad
pro-oxidante y puede causar una aceleración del
pardeamiento en combinación con los sulfitos. Aparte de estos
métodos ampliamente utilizados, para evitar el pardeamiento del vino
se han descrito otras prácticas menos frecuentes o caras, como
someter el vino al contacto con resinas de intercambio iónico, el
uso de carbón activo, el uso de quitosano (un subproducto de la
industria pesquera) o el uso de escleroproteínas bovinas. Otro
método está basado en la hiperoxidación del mosto para oxidar sus
compuestos fenólicos, sin embargo este método es difícil de
estandarizar y además destruye los compuestos fenólicos, por lo que
el método disminuiría el valor nutritivo del
vino.
vino.
Es conocida la capacidad de levaduras
fermentativas para prevenir el pardeamiento de soluciones vínicas
modelo y del vino (López-Toledano et al.,
2002. J. Agric. Food Chem., 50: 1631-1635; Chamka
et al., 2003. J. Agric. Food Chem., 51:
3179-3184; Shinohara et al., 2000. J. Biosci.
Bioeng., 90: 90-97; Fugelsang et al., 2007.
Microbial Ecology During Vinification. In Wine Microbiolgy.
Practical Applications and Procedures. Second Edition: Fugelsang,
K., Edwards, Ch., Eds. Springer US: New York, pp. 90). El uso de
levaduras podría funcionar en vinos del tipo Sherry en los cuales
las levaduras están presentes después de la fermentación alcohólica.
Esta propiedad ha sido atribuida a la capacidad de las paredes
celulares para adsorber polímeros de color marrón (Razmkhab et
al., 2002. J. Agric. Food Chem., 50: 7432-7437;
Morata et al., 2003. J. Agric. Food Chem., 51:
4084-4088) o disminuir su producción por adsorción
de intermediarios incoloros de la reacción (Mazauric et al.,
2005. J. Agric. Food Chem., 53: 5647-5653; Mazauric
et al., 2006. J. Agric. Food Chem., 54:
3876-3881). Basándose en estas capacidades de las
levaduras varios autores han desarrollado estrategias (Bonilla et
al., 2001. J. Agric. Food Chem., 49: 1928-1933)
para reducir el pardeamiento del vino. Sin embargo el uso de
levaduras para este fin podría alterar las cualidades organolépticas
del vino debido a su capacidad para la formación de aromas
indeseables.
Por tanto, hay un interés creciente en la
búsqueda de productos alimenticios que tengan flavonoides, entre los
cuales se encuentran los flavanoles catequina y/o epicatequina para
la mejora de la salud de los consumidores. Así mismo, el
pardeamiento del vino es un problema que debe ser solucionado con
herramientas no perjudiciales para la salud de los consumidores y
que no alteren las características organolépticas de los mismos.
La presente invención provee el uso de al menos
una bacteria láctica de grado GRAS (Generally Regarded As
Safe) para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos un
producto alimenticio, con respecto a un control. Además también se
refiere al uso de dicha bacteria láctica para disminuir el
pardeamiento de al menos un vino, con respecto a un control.
En la presente invención se muestra el efecto
técnico producido por la adición de un tipo de bacteria láctica a un
producto alimentario como por ejemplo el vino. Dicho efecto técnico
es la mayor conservación de los flavanoles presentes en dicho
producto alimenticio, respecto de un control. Además, otro problema
técnico asociado que se soluciona mediante el procedimiento de la
presente invención es la disminución del pardeamiento de los vinos a
los que se les añade dicha bacteria láctica.
Las ventajas técnicas que presenta conservar
mayor cantidad de flavanoles en al menos un producto alimenticio,
con respecto a un control, como consecuencia de la adición de una
bacteria láctica a dicho producto alimenticio
son:
son:
- La obtención de productos alimenticios con
capacidad antioxidante mayor. La ingestión de estos alimentos supone
el refuerzo de la salud del consumidor.
- Prevenir la formación de pigmentos de xantilio
ya que se impide la oxidación de dichos flavanoles. Dicha prevención
va asociada con la prevención de la aparición de pardeamiento en el
vino.
- De esta manera se evita la adición de
compuestos tóxicos para la salud como la adición de sulfitos a
productos alimenticios como por ejemplo el vino. Esto permite el uso
de dichas bacterias lácticas en vinos ecológicos.
- La adición de bacterias lácticas al vino no
produce alteraciones organolépticas del producto.
- Mejor aceptación por el consumidor de los
productos alimenticios obtenidos por el procedimiento que se
describe en la presente invención frente a los obtenidos con los
métodos basados en preservativos químicos tradicionales.
Así pues, un aspecto de la presente invención se
refiere al uso de al menos una bacteria láctica de grado GRAS
(Generally Regarded As Safe) para conservar mayor cantidad de
flavanoles en al menos un producto alimenticio, con respecto a un
control. Así mismo, dicha bacteria puede usarse para aumentar la
cantidad de proantocianidina, también denominada como procianidina,
proantocianidina oligomérica, leukocianidina o leucoantocianina. Las
proantocianidinas son dímeros, trímeros, oligómeros o polímeros de
flavanoles.
El término GRAS procede de las siglas de la
expresión "Generally Recognized As Safe". Esta
designación GRAS es obra de la FDA (American Food and Drug
Administration) y significa que la adición del producto químico
o la sustancia a la que se refiere, es considerada segura por los
expertos de dicha organización.
La bacteria láctica pertenece al orden
Lactobacillales. Las bacterias lácticas conocidas pertenecen
a este orden. La bacteria láctica tiene la siguiente clasificación
filogenética:
- Dominio: Bacteria / Filo: Firmicutes / Clase: Bacilli / Orden: Lactobacillales.
La bacteria láctica del orden
Lactobacillales produce ácido láctico como metabolito
mayoritario de la fermentación del azúcar. Estas bacterias se usan
de forma habitual en la producción de productos lácteos fermentados,
como yogur, queso, manteca, crema de leche, kéfir, koumiss, o vino
(para llevar a cabo la fermentación maloláctica).
Este orden está formado por las familias
Aerococcaceae, Carnobacteriaceae, Enterococcaceae,
Lactobacillaceae, Leuconostocaceae y Streptococcaceae.
La familia Lactobacillae está formada por
los géneros Lactobacillus, Paralactobacillus y
Pediococcus. Se encuentran regularmente en la mucosa del
tracto intestinal de humanos y de otros animales, en alimentos y
productos lácteos, así como en zumos vegetales fermentados.
Varios trabajos previos han demostrado que tanto
la catequina como la epicatequina interaccionan con distintos tipos
de bicapas lipídicas que se utilizaron como membranas celulares
modelo (Nakayama et al., 2000. Biofactors 13:
147-151; Caturla et al., 2003. Free Radical
Biology & Medicine, 34: 648-662; Sirk et
al., 2008. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 56:
7750-7758). En uno de estos trabajos (Caturla et
al., 2003. Free Radical Biology & Medicine, 34:
648-662), entre las diferentes bicapas lipídicas
utilizadas, algunas se usaron como membranas bacterianas modelo
debido a su composición en fosfolípidos. En todos los casos
examinados, y a pesar de que las membranas modelo tenían diferente
composición lipídica, catequina y epicatequina se incorporan en la
bicapa lipídica. La absorción de catequina y epicatequina en la
bicapa lipídica es por tanto un mecanismo general de interacción de
estos flavanoles con las membranas celulares y consecuentemente
puede ser extendido al grupo de bacterias
lácticas.
lácticas.
Una realización preferida de la presente
invención se refiere al uso de al menos una bacteria láctica de
grado GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos
un producto alimenticio, con respecto a un control, donde la
bacteria láctica de grado GRAS es una bacteria del género
Lactobacillus. La especie del género Lactobacillus se
selecciona de las lista que comprende, pero sin limitarse,
Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgarícus,
Lactobacillus brevis, Lactobacillus casei, Lactobacillus
delbrueckii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus gasseri,
Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus lactis, Lactobacillus mali,
Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus
reuteri, Lactobacillus rhamnosus o Lactobacillus
salivarius. Según una realización más preferida, la bacteria
láctica se selecciona de la lista que comprende Lactobacillus
plantarum, Lactobacillus brevis y Lactobacillus mali.
La familia Leuconostocaceae está formada
por los géneros Leuconostoc, Oenococcus o
Weissella.
Otra realización preferida de la presente
invención se refiere al uso de al menos una bacteria láctica de
grado GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos
un producto alimenticio, con respecto a un control, donde la
bacteria láctica de grado GRAS es una bacteria del género
Leuconostoc. La especie del género Leuconostoc se
selecciona de las lista que comprende, pero sin limitarse,
Leuconostoc carnosum, Leuconostoc citreum, Leuconostoc durionis,
Leuconostoc fallax, Leuconostoc ficulneum, Leuconostoc fructosum,
Leuconostoc garlicum, Leuconostoc gasicomitatum, Leuconostoc
gelidum, Leuconostoc inhae, Leuconostoc kimchii, Leuconostoc lactis,
Leuconostoc mesenteroides, Oenococcus oeni, Leuconostoc
pseudoficulneum o Leuconostoc pseudomesenteroides. Según
una realización más preferida, la bacteria láctica es Leuconostoc
mesenteroides.
En cualquier producto alimenticio que contenga
flavanoles se produce la oxidación de los mismos, por tanto, como
consecuencia, dichos productos pierden flavanoles y, como última
consecuencia, el producto alimenticio disminuye su capacidad de
actuar como antioxidante por medio de la acción de algunos de sus
compuestos. Por tanto, la presente invención se refiere a la
conservación de mayor cantidad de flavanoles en al menos un producto
alimenticio, con respecto a un control.
En la presente invención, el término
"control" se refiere a un producto alimenticio al que no se
añade la bacteria láctica GRAS. El producto alimenticio control es
una alícuota del producto alimenticio tratado.
Los flavanoles son compuestos que pertenecen al
grupo de los flavonoides, que son compuestos polifenólicos, y que
comparten un núcleo común. Dentro de los flavanoles se encuentran
los flavan-3-oles, cuya estructura
química básica es,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Y dentro de los compuestos
flavan-3-oles se encuentran las
catequinas, que tienen dos centros quirales pudiendo formar los
siguientes cuatro diasteroisomeros:
La (+)-catequina, que tiene la
siguiente estructura,
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
La (-)-catequina, que tiene la
siguiente estructura,
Por "catequina" se denomina e a partir de
ahora a (+)-catequina ó
(-)-catequina.
La (-)-epicatequina, que tiene
la siguiente estructura,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Y la (+)-epicatequina, que tiene
la siguiente estructura,
Por "epicatequina" se denomina a partir de
ahora a (+)-epicatequina ó
(-)-epicatequina.
Otra realización preferida se refiere al uso de
al menos una bacteria láctica de grado GRAS para conservar mayor
cantidad de flavanoles en al menos un producto alimenticio, con
respecto a un control, donde los flavanoles son catequina y/o
epicatequina. Según una realización más preferida, los flavanoles
son (+)-catequina y/o
(-)-epicatequina. Estos flavanoles son los que se
encuentran de forma mayoritaria en la naturaleza.
El término "producto alimenticio" tal como
se emplea en la presente invención se refiere a un alimento como
artículo de consumo humano o animal. Preferiblemente el producto
alimenticio es para consumo humano. En este sentido conviene
diferenciar este término del término "producto alimentario" que
se refiere a cualquier materia no nociva, en sentido absoluto o
relativo, que, sin valor nutritivo, puedan ser utilizadas en la
alimentación, tanto humana como animal, incluyendo por tanto,
aditivos, desinfectantes, envases, embalajes o útiles
alimentarios.
El producto alimenticio se selecciona de la
lista que comprende, pero sin limitarse, productos alimenticios
manufacturados industrialmente por fermentación de bacterias
lácticas (por ejemplo, pero sin limitarse, productos derivados de la
leche, zumos, vino o cerveza), productos de origen vegetal no
fermentados como por ejemplo, pero sin limitarse, zumos o frutas
(como por ejemplo, pero sin limitarse, manzana, pera, plátano,
berenjena, aguacate o lichi).
Otra realización preferida de la presente
invención se refiere al uso de al menos una bacteria láctica de
grado GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos
un producto alimenticio, con respecto a un control, donde el
producto alimenticio comprende al menos un producto de origen
vegetal. Es decir, el producto alimenticio contiene un producto de
origen vegetal sólo o junto con otros productos de origen vegetal o
con otros productos de distinto origen (como por ejemplo, pero sin
limitarse, de origen animal) o con otros compuestos. Los compuestos
que acompañan al producto de origen vegetal pueden ser de origen
natural o artificial y pueden mejorar las condiciones de
conservación del producto de origen vegetal.
Una realización más preferida se refiere al uso
de al menos una bacteria láctica de grado GRAS para conservar mayor
cantidad de flavanoles en al menos un producto alimenticio, con
respecto a un control, donde el producto alimenticio es vino. Según
una realización aún más preferida, el vino es tinto o blanco. Según
otra realización aún más preferida, el vino es ecológico.
El vino tinto puede proceder de un vino
elaborado con el fruto de cualquiera de las variedades tintas de
vitis vinifera conocidas por el experto en la materia o de
cualquiera de sus combinaciones.
El vino ecológico es aquel vino que procede de
uva ecológica. Las uvas ecológicas provienen de viñas manejadas con
el método de la agricultura ecológica, como se define también a
nivel Europeo, por el Reglamento CE 2092/91. Los vinos elaborados a
partir de uva ecológica son aquellos contenidos en el Reglamento CE
1493/1999 (anexos 4 y 5) y 1622/2000, que define las prácticas
enológicas y los tratamientos permitidos para vinos en Europa.
Otra realización preferida de la presente
invención se refiere al uso de al menos una bacteria láctica de
grado GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos
un vino, con respecto a un control, donde la bacteria láctica se
añade al vino en cualquier momento de la elaboración del mismo.
Según una realización más preferida, la bacteria láctica del género
Lactobacillus se añade cuando el vino tiene al menos un 9% de
contenido alcohólico. Tal como se ha demostrado en el estado de la
técnica (Sieiro et al., 1990. Appl. Environ. Microb., 56:
2936-2938), las bacterias de este género se
encuentran presentes de forma natural en los vinos, después de la
fermentación alcohólica, y en dichas condiciones dichas bacterias no
son capaces de proliferar, por tanto no se producen cambios en las
características organolépticas de los vinos. El fin de la
fermentación alcohólica puede ser debido al agotamiento de la fuente
de azúcares que la levadura utiliza, o como consecuencia de la
adición de inhibidores o supresores de la actividad fermentativa de
las levaduras o la lisis de las mismas. Por otra parte, dependiendo
del contenido de azúcares, medido generalmente como grados Baumé o
grados Brix, se pueden alcanzar diferentes contenidos de alcohol. El
porcentaje establecido en esta realización preferida pretende cubrir
vinos blancos o tintos con poco contenido alcohólico, como
consecuencia, por ejemplo, de proceder de uvas con grados Baumé o
Brix bajos por haber sido recolectadas de forma temprana o por la
ubicación geográfica del cultivo de las vides, o por otras
consecuencias no descritas en la presente invención. Más
preferiblemente la bacteria láctica del género Lactobacillus
se añade cuando el vino tiene al menos un 10%, 11%, 12%, 13%, 14%,
15%, 16%, 17%, 18%, 19% ó 20% de contenido alcohólico respecto del
volumen del vino. El porcentaje se mide en volumen/volumen, es
decir, por ejemplo, un 9% de contenido alcohólico significa que de
cada 100 ml de vino, 9 ml son de alcohol (cualquiera de las
combinaciones de alcoholes) y 81 ml son agua y otros componentes.
Generalmente, un vino con al menos un 16% de contenido alcohólico
suele ser un vino al que se ha añadido alcohol de forma artificial,
es decir,
\hbox{que dicho alcohol añadido no procede de la actividad fermentativa de las levaduras.}
La bacteria láctica puede añadirse al vino
durante el proceso de crianza. El proceso de crianza tiene una
duración de tiempo variable, pero normalmente comporta meses, y
depende de la composición inicial de componentes del vino
(principalmente antioxidantes), de la cantidad de oxígeno que
difunde en dicho vino (depende del tamaño de poro de la madera con
las que están construidas las barricas) así como de otros factores.
A modo de síntesis, en dicho proceso de crianza convencional se
pueden destacar dos fases: a) la fase oxidativa: en la que tiene
lugar la microoxigenación del vino y b) la fase reductora, en la que
se evita que el oxígeno esté en contacto con el vino. Lo más común
es que la fase oxidativa tenga lugar en barricas de madera,
generalmente de madera de roble de uno o de distintos tipos.
Dependiendo del tamaño medio de poro de dicha madera este proceso se
puede alargar más o menos así como también el aporte de componentes
de la madera puede variar dependiendo del tipo de madera empleado.
La fase reductora del vino suele llevarse a cabo en botellas,
tapadas para evitar la entrada de oxígeno. La adición de bacterias
lácticas al vino durante el proceso de crianza puede producir además
un producto enológico de interés ya que, además de llevar a cabo la
fermentación maloláctica (siempre que no se haya producido antes),
estos microorganismos favorecen la presencia de flavanoles
(antioxidantes) que actúan tamponando la oxidación, por tanto, los
vinos mantenerse por más tiempo en las barricas o en el recipiente
empleado para la fase oxidativa de la crianza, sin producirse picado
o pardeamiento indeseado. Por tanto, esto permitiría llevar a cabo
la fase oxidativa de la crianza en vinos con poco contenido de
compuestos antioxidantes como son los vinos blancos y no limitarse
exclusivamente a la fase anaerobia.
Tal como se ha mencionado en párrafos
precedentes, el propósito del uso de la bacteria láctica de grado
GRAS es, tanto conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos un
producto alimenticio, con respecto a un control, como para disminuir
el pardeamiento de dicho vino, con respecto a un control. Tal como
se demuestra en los ejemplos de la presente invención, la adición de
bacterias lácticas de grado GRAS como por ejemplo, pero sin
limitarse, del género Lactobacillus o Leuconostoc,
disminuyen el pardeamiento de vinos modelo con respecto a los vinos
control a los que no se adiciona el microorganismo correspondiente.
Los inventores han demostrado el mecanismo por el cual se disminuye
dicho pardeamiento del vino, que consiste esencialmente en la
prevención de la formación de sales de xantilio por la prevención de
la oxidación de flavanoles como catequina y/o epicatequina.
Por tanto, otra realización preferida de la
presente invención se refiere al uso de la bacteria láctica de grado
GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos un
vino, con respecto a un control, donde además dicha bacteria láctica
se usa para disminuir el pardeamiento de dicho vino, con respecto a
un control. Dicho vino puede ser blanco, tinto, ecológico o la
bacteria se puede añadir al vino en cualquier momento de la
elaboración del mismo, o la bacteria del género Lactobacillus
se añade cuando el vino tiene al menos un 9% de contenido alcohólico
(o cualquiera de los porcentajes descritos anteriormente). Una
realización preferida se refiere al uso de la bacteria láctica de
grado GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos
un vino, con respecto a un control, donde además dicha bacteria
láctica se usa para disminuir el pardeamiento de dicho vino, con
respecto a un control, donde dicho vino es blanco.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos,
ventajas y características de la invención se desprenderán en parte
de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las
siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración,
y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
Fig. 1. Muestra el efecto inhibidor de
Lactobacillus plantarum RM71 sobre el pardeamiento de vinos
modelo que contienen (+)-catequina (A) y
(-)-epicatequina (B).
Las muestras de vino modelo fueron incubadas
durante 42 días a 25ºC, en un periodo de 42 días. (\Diamond) Vinos
modelo control libres de células, (\blacksquare) Vinos modelo
suplementados con Lactobacillus plantarum RM71. Los valores
representan la media de triplicados que no presentan diferencias
significativas al usar test no-paramétricos
(P<0.05).
Fig. 2. Muestra cromatogramas obtenidos por
HPLC-DAD registrados a 440 nm.
Dichos cromatogramas corresponden a vinos modelo
control que contienen (+)-catequina (A) o
(-)-epicatequina (B) y que fueron incubados durante
42 días a 25ºC.
Fig. 3. Muestra los espectros
UV-visible de los productos de degradación de
(+)-catequina y
(-)-epicatequina.
En la figura se muestran los productos de
degradación de la (+)-catequina (picos 1, 3 y 4)(A)
y de la (-)-epicatequina (picos a-f)
(B) en vinos modelo control libres de células después de la
incubación durante 42 días a 25ºC.
Fig. 4. Muestra los espectros de masa del
pico 1 de degradación de la (+)-catequina (A) y del
pico b de degradación de la (-)-epicatequina
(B).
Dichos espectros se obtienen después de la
incubación de los vinos modelo control libres de células durante 42
días a 25ºC.
Fig. 5. Muestra el efecto inhibidor de
Lactobacillus plantarum RM71 sobre la formación de pigmentos
de xantilio derivados de la (+)-catequina (A) y de
la (-)-epicatequina (B) en vinos modelo.
(\Diamond) Vinos modelo libres de células,
(\blacksquare) Vinos modelo suplementados con Lactobacillus
plantarum RM71. Cada punto indica las áreas combinadas
(obtenidas por HPLC-DAD 440 nm) de los picos que
representan los pigmentos de xantilio formados en los respectivos
vinos modelo (picos 1-4 en vinos con
(+)-catequina o picos a-f en vinos
con (-)-epicatequina) a los tiempos indicados. Se
representan las medias y las desviaciones estándar de triplicados
que no presentan diferencias significativas al usar test
no-paramétricos (P<0.05).
Fig. 6. Muestra el efecto preventivo de
Lactobacillus plantarum RM71 sobre la degradación oxidativa
de (+)-catequina (A) y
(-)-epicatequina (B) en vinos modelo.
Se muestran las variaciones durante 42 días en
las concentraciones de ambos flavanoles en vinos control libres de
células (\Diamond) y vinos modelo suplementados con
Lactobacillus plantarum RM71. Se representan las medias y las
desviaciones estándar de triplicados que no presentan diferencias
significativas al usar test no-paramétricos
(P<0.05).
Fig. 7. Muestra la comparación del efecto
inhibidor de varias bacterias lácticas (BAL) sobre el pardeamiento
de vinos modelo que contienen (+)-catequina (A) y
(-)-epicatequina (B).
Las muestras de vono modelo fueron incubadas
durante 20 días a 30ºC en presencia de 20 mg/L de sulfato ferroso.
(\ding{117}) Vinos modelo control libres de células. Vinos modelo
suplementados con: Lactobacillus brevis (\boxempty);
Lactobacillus mali (X); Leuconostoc mesenteroides
(+).
A continuación se ilustrará la invención
mediante unos ensayos realizados por los inventores. Los siguientes
ejemplos específicos que se proporcionan en este documento de
patente sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención.
Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han
de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se
reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos no pretenden limitar
el campo de aplicación de la misma.
Ejemplo
1
Para mimetizar el proceso de oxidación del vino
se utilizaron los vinos modelo, descritos en el apartado de Material
y Métodos. Estos vinos fueron suplementados con sulfato ferroso
debido a su efectividad para acelerar la oxidación de flavanoles
(Oszmianski, et al., 1996. J. Agric. Food Chem., 44:
1712-1715). El pardeamiento de las bebidas
habitualmente se examina siguiendo las variaciones de absorbancia a
420 nm (A_{420\ nm}) debido a que los pigmentos marrones
que se producen como resultado de la oxidación de los fenoles
presentes en las bebidas, incrementan el color en la región
amarillo-marrón del espectro visible (Iland et
al., 2000. White wine spectral measures. In Techniques for
Chemical Analysis and Quality Monitoring during Winemaking;
Patrick Iland Wine Promotions: Campbelltown, Australia, p 100). Por
ello, para examinar la influencia de L. plantarum RM71 en el
pardeamiento, las variaciones en los valores de A_{420\ nm}
mostrados por los vinos modelo que contenían
(+)-catequina o (-)-epicatequina
fueron examinadas en función de la presencia o ausencia de este
microorganismo.
La Fig. 1 muestra cómo se pardean los vinos
modelo que contienen bien (+)-catequina o
(-)-epicatequina durante la incubación en presencia
de sulfato ferroso a 10 mg/l. El valor de A_{420\ nm} en
los vinos control, libres de L. plantarum RM71 se incrementó
notablemente en el tiempo, revelando la formación de pigmentos
coloreados en la región visible del espectro. La incubación de los
vinos modelo que contenían bien (+)-catequina o
(-)-epicatequina en presencia de L. plantarum
RM71, produjo una inhibición parcial del proceso de pardeamiento
como se puede observar al examinar los valores finales de
A_{420\ nm} y la velocidad de formación de pigmentos
marrones (Fig. 1A y 1B). El porcentaje de inhibición del
pardeamiento proporcionado por L. plantarum RM71 respecto de
los controles libres de células es del 21.5% en los vinos modelo que
contienen (+)-catequina y del 29.2% en los vinos
modelo que contienen (-)-epicatequina. La velocidad
de pardeamiento de los vinos modelo fue calculada hasta los 23 días
de incubación debido a que posteriormente el pardeamiento de todos
los vinos modelo perdía linearidad. La presencia de L.
plantarum RM71 en los vinos modelo que contenían catequina
mostraron una velocidad de pardeamiento más lenta (\DeltaAU/día
=0.036; r^{2} de 0.9816) que sus controles
(\DeltaAU/día=0.045; r^{2} de 0.9927). Una tendencia
similar se observó en los vinos modelo que contenían
(-)-epicatequina los cuales mostraron una velocidad
de pardeamiento de 0.044 AU/día (r^{2} de 0.9881) en
presencia de bacteria respecto a una velocidad de 0.060 AU/día
(r^{2} de 0.9957) de los controles sin bacteria. Una de las
rutas de formación de pigmentos coloreados es la oxidación de
flavanoles catalizada por trazas de cobre y/o hierro y la
subsiguiente polimerización de los productos oxidados. Sin embargo
cuando el ácido tartárico está en el medio, como ocurre en nuestros
vinos modelo y en vinos no modelo, la oxidación no ocurre
directamente en los flavanoles sino en el ácido tartárico el cual se
convierte en ácido glioxílico. El ácido glioxílico reacciona con dos
unidades de flavanol para dar lugar a dímeros incoloros que sufren
posteriormente deshidratación y oxidación para formar pigmentos
marrones (Fulcrand et al., 1997. Phytochemistry, 46:
223-227).
Para tener mas información acerca de los cambios
de color observados, se registraron a 280 nm y 440 nm cromatogramas
obtenidos por HPLC-DAD de vinos modelo que contenían
(+)-catequina o (-)-epicatequina.
Después de 42 días de incubación los cromatogramas registrados a 280
nm revelaron la presencia de (+)-catequina y de
productos resultantes de su degradación. L. plantarum RM71 no
determinó el patrón de degradación de la catequina, ya que los picos
observados eran los mismos (aunque con diferente intensidad) que los
observados en los controles libres de células. La Fig. 2A muestra
los cromatogramas obtenidos por HPLC-DAD de vinos
modelo control libres de células que contienen
(+)-catequina. Estos cromatogramas se registraron a
440 nm después de 42 días de incubación. Se observan 4 picos (1 -4)
que revelan la formación de compuestos de degradación de la
(+)-catequina y que no se observaron al comienzo de
la incubación. La presencia de L. plantarum RM71 en los vinos
modelo no afectó al perfil de los cromatogramas pero si a la
intensidad de los picos.
El pardeamiento de los vinos comienza
normalmente con la formación de dímeros incoloros compuestos por dos
unidades de flavanol. La condensación de estos dímeros puede estar
catalizada por acetaldehído o por ácido glioxílico. Asumimos que el
ácido glioxílico es el catalizador de la condensación de los dímeros
de catequina ya que a pesar de las diferentes condiciones
cromatográficas utilizadas, el patrón de elución de los picos
1-4 es prácticamente idéntico al observado en otros
trabajos para productos de degradación de la catequina formados en
sistemas modelo que utilizan el ácido glioxílico como catalizador.
Ha sido previamente establecido que los pigmentos marrones formados
en soluciones modelo de (+)-catequina/ácido
glioxílico son sales de xantilio (Clark et al., 2003. J.
Agric. Food Chem,. 51: 6204-6210;
Es-Safi et al., 1999. J. Agric. Food
Chem., 47: 5211-5217; Es-Safi
et al., 1999. Tetrahedron Lett., 40:
5869-5872; Es-Safi et al.,
2000. J. Agric. Food Chem., 48: 4233-4240).
Estas sales son pigmentos que muestran un espectro
UV-visible característico con un máximo de
absorbancia a 440 nm, un "hombro" a 310 nm y un pico a 278 nm
(Es-Safi et al., 1999. J. Agric. Food
Chem., 47: 5211-5217). Para comprobar si los
pigmentos formados en los vinos modelo que contienen catequina son
sales de xantilio, se realizaron barridos de cada pico de
degradación de la (+)-catequina en el espectro
UV-vis. En la Fig. 3A se muestran las
características espectrales en el rango UV-visible
de los picos 1 y 3 extraídos del cromatograma obtenido por
HPLC-DAD y coinciden con las características de las
sales de xantilio, esto es, máximo de absorbancia a 440 nm, un
"hombro" a 310 nm y un pico a 278 nm. Respecto al pico 4, éste
muestra las características espectrales de sales de xantilio
esterificadas, máximo de absorbancia a 460 nm en lugar de a 440 nm y
un "hombro" a 310 nm, características previamente descritas
(Es-Safi et al., 1999. Tetrahedron
Lett, 40: 5869-5872). Las características
espectrales de los productos de degradación de la catequina son una
primera evidencia de que son pigmentos de xantilio.
Para identificar más claramente los productos de
degradación de la catequina (picos 1 -4) como pigmentos de xantilio
derivados de la catequina, se determinaron sus masas
correspondientes mediante experimentos de HPLC-MS.
Los espectros de masas de los picos 1, 2 y 3 en el modo de ión
negativo mostraron señales a valores de m/z 615. Esta señal
se fragmentó en dos iones principales: uno con una señal a un valor
de m/z 571 (correspondiente a la decarboxilación del ión
principal. -44 amu [unidad de masa atómica]) y otro con una señal a
un valor de m/z 419 (correspondiente a una fisión del tipo
retro Diels-Alder. -152 amu). Estos datos revelan,
de acuerdo a estudios precedentes (Clark et al., 2003. J.
Agric. Food Chem,. 51: 6204-6210;
Es-Safi et al., 2000. J. Agric. Food
Chem., 48: 4233-4240; Labrouche et al.,
2005. J. Agric. Food Chem., 53: 9993-9998),
que los productos de degradación de la catequina representados en
los picos 1, 2 y 3 de los cromatogramas obtenidos por
HPLC-DAD son pigmentos de xantilio. En la Fig. 4A se
muestra como ejemplo el espectro de masas del pico 1 de una muestra
extraída de un vino modelo que contiene
(+)-catequina después de 42 días de incubación. El
espectro de masas del pico 4 muestra las características típicas
descritas (Labrouche et al., 2005. J. Agric. Food
Chem., 53: 9993-9998) de un éster de una sal de
xantilio con una señal en el modo de ión negativo a un valor de
m/z 643 y un fragmento principal a un valor de
m/z 597.
m/z 597.
Para comprobar si los pigmentos formados en los
vinos modelo que contienen epicatequina son sales de xantilio, se
procedió de igual modo que con los vinos modelo suplementados con
catequina. La Fig. 2B muestra un cromatograma obtenido por
HPLC-DAD registrado a 440 nm de un vino modelo libre
de células que contiene epicatequina después de 42 días de
incubación. Para obtener una primera evidencia de que los picos
resultantes de la degradación de la epicatequina son pigmentos de
xantilio se realizó un espectro de cada pico en el rango
UV-visible. Los picos a-d extraídos
del cromatograma obtenido por HPLC-DAD presentaron
propiedades espectrales características de las sales de xantilio,
\lambda_{max} a 440 nm, un "hombro" a 310 nm y un pico a
278 nm. Los picos e-f muestran las características
espectrales de sales de xantilio esterificadas, máximo de
absorbancia a 460 nm en lugar de a 440 nm y un "hombro" a 310
nm.
Para determinar que los picos
a-f representan pigmentos de xantilio formados a
partir de la epicatequina, se determinaron las masas
correspondientes mediante experimentos de HPLC-MS.
Los pigmentos de xantilio en los vinos modelo que contienen
epicatequina representados en los picos a-d, son
análogos a los respresentados en los picos 1-3
formados en los vinos modelo que contienen catequina, debido a que
mostraron señales a un valor m/z 615. Los pigmentos de
xantilio derivados de la epicatequina exhibieron prácticamente el
mismo patrón de fragmentación que el mostrado por los pigmentos de
xantilio derivados de la catequina con fragmentos principales a
valores de m/z 571 y 419. Debido a que la
(+)-catequina y la (-)- epicatequina son
diastereoisomeros sus derivados de xantilio conservan una relación
diastereoisomérica lo que explica que aunque son análogos, ambos
tipo de pigmentos muestran diferentes tiempos de retención en sus
cromatogramas (Labrouche et al., 2005. J. Agric. Food
Chem., 53: 9993-9998). Por otra parte la
observación de seis picos correspondientes a productos de
degradación de la epicatequina en lugar de los cuatro observados
para la catequina puede ser el resultado de la coelución de
diferentes isómeros de pigmentos de xantilio o la formación
preferente de los mismos. También se observa, por ejemplo, que en el
pico b el isómero que se forma preferentemente es el ión
decarboxilado (m/z 571) del catión de xantilio, mientras que
en el pico c se forma preferentemente el correspondiente a una
fisión del tipo retro Diels-Alder del catión
decarboxilado (m/z 419). A modo de ejemplo se muestra el
espectro de masas del pico c de un vino modelo que contiene
(+)-epicatequina después de 42 días de incubación
(Fig. 4B). Los espectros de masas de los picos e y f mostraron
señales de m/z de 643 con iones a m/z de 597 que como
se menciona anteriormente para los vinos modelos que contienen
catequina, correspondieron a ésteres de pigmentos de xantilio. Estos
resultados confirman que los pigmentos de xantilio formados a partir
de catequina y epicatequina en sus correspondientes vinos modelo,
son análogos.
Para determinar si la reducción de la velocidad
de pardeamiento que produce L. plantarum RM71 en los vinos
modelo que contienen (+)-catequina o
(-)-epicatequina (Fig. 1A y B) es causada por
inhibición de las reacciones de polimerización que dan lugar a los
pigmentos de xantilio identificados, la generación de estos
pigmentos se estudió comparativamente en el tiempo en vinos modelo
suplementados o libres de L. plantarum. Para este objetivo se
comprobó la variación de las áreas que representaban los pigmentos
de xantilio durante los 42 días de incubación en los cromatogramas
de HPLC-DAD registrados a 440 nm. Las áreas totales
de los picos 1-4 se sumaron en una y este valor se
examinó durante el periodo de incubación para seguir la formación de
pigmentos de xantilio derivados de la catequina (Fig. 5A). El mismo
razonamiento se utilizó para seguir la formación de pigmentos de
xantilio derivados de la epicatequina, esta vez examinando las áreas
totales sumadas de los picos e-f (Fig. 5B). Como se
puede observar al comparar la Fig. 5A y 5B, las áreas totales de los
pigmentos de xantilio formados a partir de la epicatequina son
aproximadamente el doble que la de los formados a partir de la
catequina. Se comprobó, mediante el seguimiento en el tiempo de las
áreas de catequina y epicatequina, que la epicatequina (Fig. 6B) se
perdía 1.26 veces más rápido que la catequina (Fig. 6A), dato que no
explica satisfactoriamente el aumento por un factor de 2 de los
pigmentos de xantilio derivados de la epicatequina respecto a los de
la catequina. Esta discordancia se debe a que los pigmentos de
xantilio derivados de la epicatequina presentan un coeficiente de
absorción mayor que los de la catequina (Labrouche et al.,
2005. J. Agric. Food Chem., 53:
9993-9998).
Las Fig. 6A y 6B, muestran que la presencia de
L. plantarum RM71 inhibe la degradación oxidativa de la
(+)-catequina y (-)-epicatequina. De
acuerdo a ello la generación de pigmentos de xantilio derivados de
la catequina (Fig. 5A) y de la (-)-epicatequina
(Fig. 5B) se inhibió en vinos modelo suplementados con esta bacteria
respecto a los vinos modelo control (libres de células). El
incremento de las áreas totales de los picos que representan los
pigmentos de xantilio derivados de la catequina o de la epicatequina
en los vinos modelo suplementados con L. plantarum RM71, fue
menor que el de sus respectivos controles y mostraron la misma
tendencia que los incrementos en el valor de A_{420\ nm}
observados en la Fig. 1A y 1B. Estos resultados confirman que los
pigmentos de xantilio son los responsables del pardeamiento de los
vinos modelo y que L. plantarum RM71 inhibía su formación. El
efecto inhibitorio de L. plantarum fue más pronunciado sobre
la generación de pigmentos de xantilio derivados de la
(-)-epicatequina que de la
(+)-catequina. En la muestras extraídas en el día
28, L. plantarum inhibió un 35.2% la formación de pigmentos
de xantilio derivados de la (-)-epicatequina y un
14.1% los de la (+)-catequina comparado con sus
respectivos
controles.
controles.
La capacidad de L. plantarum para
prevenir la formación de ambos tipos de pigmentos de xantilio podría
ser de utilidad independientemente de la condiciones estacionales,
tipo de uva y prácticas en la fabricación del vino las cuales se han
demostrado que puede influenciar el contenido de catequina y de
epicatequina en el vino (Simpson, 1982. Vitis, 21:
233-239).
Las sales de xantilio derivadas de flavanoles
son pigmentos que i) ocurren en vinos blancos y tintos
(Es-Safi et al., 2000. J. Agric. Food
Chem., 48: 4233-4240) y ii) pueden actuar como
especies transitorias en la formación de compuestos quinoidales
coloreados que contribuyen al cambio de color en alimentos derivados
de la uva (Es-Safi et al., 1999.
Tetrahedron Lett., 40: 5869-5872. En vista de
ello, la inhibición preventiva de las rutas que dan lugar a los
pigmentos de xantilio contribuye a la inhibición de los procesos de
pardeamiento asociados a estos pigmen-
tos.
tos.
La capacidad de otras bacterias lácticas
presentes en el vino como Lactobacillus brevis, Lactobacillus
mali y Leuconostoc mesenteroides fue examinada en los
mismos vinos modelo que los usados para L. plantarum. Con el
objeto de acelerar aún más el pardeamiento los vinos se
suplementaron con una cantidad más alta de sulfato ferroso (20 mg/l
en lugar de 10 mg/l) y fueron incubadas a 30ºC en lugar de a 25ºC
durante un periodo de 20 días en lugar de 42 días. Los vinos se
inocularon con una biomasa liofilizada de la bacteria láctica a
examinar correspondiente a 2 x 10^{8} células/ml. Los resultados
se muestran en la Fig. 7. El porcentaje de inhibición del
pardeamiento proporcionado por Lactobacillus brevis,
Lactobacillus mali y Leuconostoc mesenteroides respecto
de los vinos control libres de células es, respectivamente, del
15.3, 10.7 y 16.8% en los vinos modelo que contienen
(+)-catequina y del 5.2, 3.3 y 8.6% en los vinos
modelo que contienen (-)-epicatequina.
La cepa Lactobacillus plantarum RM71
utilizada en este estudio fue aislada originalmente de vino en el
Instituto de Fermentaciones Industriales (CSIC)
(Moreno-Arribas et al., 2003. Int. J. Food
Microb, 84: 117-123). Lactobacillus
plantarum RM71 se creció rutinariamente en el medio MRS (19) a
30ºC.
Dos vinos modelo conteniendo 400 mg/L de
(+)-catequina o de (-)-epicatequina
se prepararon en un medio similar al vino que contenía 5 g/l de
ácido tartárico, 0.6 g/L de ácido acético, 1.75 g/l de ácido málico
en de etanol al 12%. Los vinos modelo fueron ajustados a un pH de
3.5 con NaOH. Se añadió sulfato ferroso a los vinos modelo como
catalizador de la reacción de oxidación hasta llegar a una
concentración final de 10 mg/l.
Colonias de Lactobacillus plantarum RM71
crecidas en placas de medio MRS fueron inoculadas en caldo de medio
MRS e incubadas 24 horas a 30ºC. Diez mililitros de células ya
crecidas se centrifugaron y lavaron tres veces con agua destilada
para después ser almacenadas a -40ºC. La biomasa fue liofilizada y
almacenada bajo gas argón a temperatura ambiente. Los vinos modelo
fueron inoculados con una cantidad de biomasa liofilizada
equivalente a 2 x 10^{9} unidades formadoras de colonias (ufc)/ml.
Los vinos modelo que contenían bien (+)-catequina o
(-)-epicatequina y sus respectivos controles no
inoculados fueron incubados sin agitación y en oscuridad a 25ºC en
un incubador BioRad. Durante 42 días se tomaron muestras
periódicamente y se filtraron (filtros con tamaño de poro de 0.45
\mum, Millipore) para posteriores determinaciones analíticas y
espectrofotométricas. Los experimentos se llevaron a cabo por
triplicado.
triplicado.
Las medidas de la absorbancia a 420 nm que
mostraban las soluciones vínicas modelo se llevaron a cabo en un
espectrofotómetro modelo Shimadzu UV-Visible 1601
utilizando cubetas de 10 mm de paso.
Para el análisis por HPLC-DAD,
la (+)-catequina, la
(-)-epicatequina y sus productos de degradación
fueron extraídos dos veces a partir de alícuotas filtradas con un
tercio del volumen de reacción de etil acetato. El análisis se llevó
a cabo como se ha descrito previamente (Rodríguez et al.,
2008. Food Chem., 107: 1393-1398) en un
sistema cromatográfico Thermo (Thermo Electron Corporation,
Waltham, Massachussets, USA) equipado con una bomba P400
SpectraSystem, un autosampler AS3000, y un detector
UV6000LP. Un gradiente de solvente A (agua/ácido acético, 98:2, v/v)
y solvente B (agua/acetonitrilo/ácido acético, 78:20:2, v/v/v) se
aplicó a un cartucho de fase reversa Nova-pack
C_{18} (25 cm x 4.0 mm i.d.; 4.6 \mum tamaño de partícula) a
temperatura ambiente. El programa de elución fue el siguiente:
0-55 min, 80% B lineal, 1.1 ml/min;
55-57 min, 90% B lineal; 1.2 ml/min;
57-70 min, 90% B isocrático, 1.2 ml/min;
70-80 min, 95% B lineal, 1.2 ml/min;
80-90 min, 100% lineal, 1.2 ml/min;
100-120 min, lavado a 1.0 ml/min. La detección fue
llevada a cabo por barrido desde 220 a 380 nm. Las muestras fueron
inyectadas por duplicado en el cartucho después de ser filtradas a
través de un filtro de PVDF (0.45 \mum). Los cromatogramas se
generaron a 280 nm para la cuantificación y a 440 nm para seguir la
formación de pigmentos resultantes de los flavanoles durante la
oxidación de los vinos modelo.
Las medidas de masa (MS) se llevaron a cabo en
un sistema cromatográfico Hewlett-Packard series
1100 (Palo Alto, CA) equipado con un detector (DAD) y un
espectrómetro de masas cuádruple (Hewlett-Packard
series 1100 MSD) con un interfaz electrospray. Las separaciones
cromatográficas se llevaron a cabo con la misma columna y
condiciones de solvente usadas en los experimentos de
LC-DAD. La detección con DAD se llevó a cabo desde
210 a 500 nm, con un flujo de 0.7 ml/min. Para la masa (MS) se
utilizó nitrógeno como gas secante y nebulizante, y los parámetros
iónicos fueron: presión de nebulización, 55 psi; gas secante, 11
l/min; y temperatura de secado, 350ºC. El voltaje capilar fue de - 4
kV. Se usó un orificio de voltaje a -90 V en los experimentos de
investigación de los productos de fragmentación. Los espectros
fueron adquiridos en el modo de ión negativo en un rango de 100 a
1,500 m/z.
Claims (15)
1. Uso de al menos una bacteria láctica de grado
GRAS para conservar mayor cantidad de flavanoles en al menos un
producto alimenticio, con respecto a un control.
2. Uso según la reivindicación 1, donde la
bacteria láctica es una bacteria del género
Lactobacillus.
3. Uso según la reivindicación 2, donde la
bacteria láctica se selecciona de la lista que comprende
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis y
Lactobacillus mali.
4. Uso según la reivindicación 1, donde la
bacteria láctica es una bacteria del género Leuconostoc.
5. Uso según la reivindicación 4, donde la
bacteria láctica es Leuconostoc mesenteroides.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 5, donde los flavanoles son catequina y/o epicatequina.
7. Uso según la reivindicación 6, donde los
flavanoles son (+)-catequina y/o
(-)-epicatequina.
8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 7, donde el producto alimenticio comprende al menos un producto
de origen vegetal.
9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
1 a 8, donde el producto alimenticio es vino.
10. Uso según la reivindicación 9, donde el vino
es tinto o blanco.
11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
9 ó 10, donde el vino es ecológico.
12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
9 a 11, donde la bacteria láctica se añade al vino en cualquier
momento de la elaboración del mismo.
13. Uso según la reivindicación 12, donde la
bacteria láctica del género Lactobacillus se añade cuando el
vino tiene al menos un 9% de contenido alcohólico.
14. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
9 a 12, donde además dicha bacteria láctica se usa para disminuir el
pardeamiento de dicho vino, con respecto a un control.
15. Uso según la reivindicación 14, donde dicho
vino es blanco.
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WO2013156653A1 (es) * | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Cepa y composición de pediococcus damnosus, usos y método para la realización de la fermentación maloláctica |
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ES2157155B1 (es) * | 1999-03-31 | 2002-02-16 | Consejo Superior Investigacion | Microorganismo de la especie lactobacillus casei cepa ly 6 y su uso. |
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