ES2339226T3

ES2339226T3 - Inhibidores n-heterociclicos de la expresion de tnf-alfa.

Info

Publication number: ES2339226T3
Application number: ES02739978T
Authority: ES
Inventors: Kevin J. Moriarty; Yvonne Shimshock; Gulzar Ahmed; Junjun Wu; James Wen; Wei Li; Shawn D. Erickson; Jeffrey J. Letourneau; Edward Mcdonald; Katerina Leftheris; Stephen T. Wrobleski; Zahid Hussain; Ian Henderson; Axel Metzger; John J. Baldwin; Alaric Dyckman
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co; Pharmacopeia Inc
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co; Pharmacopeia LLC
Priority date: 2001-06-26
Filing date: 2002-06-25
Publication date: 2010-05-18
Anticipated expiration: 2022-06-25
Also published as: JP2004535446A; HUP0401712A2; ATE458724T1; EP1409463B1; HUP0401712A3; EP1409463A4; EP1409463A1; DE60235470D1; CA2451125A1

Abstract

Un compuesto de fórmula I, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables **(Ver fórmula)** en la que: V es -NH- u -O-, W, X e Y se eligen independientemente de -CH= y -N= de modo que dos o más sean -N=; Z es -N(R1)(R2); -N(R1)(R2) considerado junto puede formar un heterociclilo o heterociclilo sustituido o R1 se elige de hidrógeno o metilo, y R2 es alquilo de 1 a 8 carbonos; R6 es **(Ver fórmula)** R7 se elige de hidrógeno, metilo, metoxi, halógeno o ciano; R9 se elige de triazol, oxadiazol, imidazol, tiazol o bencimidazol no sustituido o sustituido; R11 es -N(R12)(R13) en el que -N(R12)(R13) considerado junto puede formar un heterociclilo monocíclico o heterociclilo sustituido de 5 a 7 átomos que contiene 1, 2 ó 3 átomos de nitrógeno adicionales, NH-alquilo, en el que el alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono o **(Ver fórmula)** R15 y R16 son independientemente hidrógeno o metilo, de modo que los sustituyentes se pueden seleccionar de alquilo, -N(R31)(R32), alcoxi, alquiltio, arilo, halógeno, ciano, nitro, oxo, carboxilo, hidroxilo, -SO2-alquilo, -CO2-alquil-C(O)-alquilo, -C(O)-N(R31)(R32), o -NH-C(O)-alquilo, de modo que R31 y R32 se eligen independientemente de hidrógeno y alquilo.

Description

Inhibidores N-heterocíclicos de la expresión de TNF-\alpha.

Referencia a solicitud relacionada

Esta solicitud es una continuación en parte de la solicitud de patente de Estados Unidos número 09/747195 que reivindica prioridad respecto a la solicitud de patente provisional de Estados Unidos número de serie 60/173.227, presentada el 28 de diciembre, 1999.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a compuestos N-heterocíclicos que son eficaces en el bloqueo de la producción de citocinas, y en particular de la expresión de TNF-alfa (TNF-\alpha), por inhibición de la quinasa p38. Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias tales como, por ejemplo, la artritis reumatoide.

Antecedentes de la invención

La sobreproducción de citocinas tales como IL-1 y TNF-\alpha está implicada en una amplia variedad de enfermedades inflamatorias incluyendo la artritis reumatoide (AR), psoriasis, esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer e insuficiencia cardiaca congestiva, entre otras [Henry y col., Drugs Fut., 24:1345-1354 (1999); Salituro y col., Curr. Med. Chem., 6:807-823 (1999)]. Hay pruebas convincentes en pacientes humanos, de que antagonistas proteínicos de citocinas, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal contra TNF-\alpha (Enbrel) [Rankin y col., Br. J. Rheumatol., 34:334-342 (1995)], la proteína de fusión del receptor Fc y TNF-\alpha soluble (Etanercept) [Moreland y col., Ann. Intern. Med., 130: 478-486 (1999)] y/o antagonista del receptor de IL-1 [Bresnihan y col., Arthritis Rheum., 41:2196-2204 (1998)], pueden proporcionar un tratamiento eficaz para las enfermedades inflamatorias crónicas. Puesto que ninguno de los tratamientos actuales para la enfermedad inflamatoria proporciona el alivio completo de los síntomas, y los tratamientos más habituales están asociados con diferentes desventajas tales como efectos secundarios, se desean procedimientos mejorados para el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

El TNF-\alpha es una proteína cuya síntesis se produce en muchos tipos de células en respuesta a un estímulo externo, tal como por ejemplo, un mitógeno, un organismo infeccioso o traumatismo. La señalización desde la superficie celular al núcleo procede por varios mediadores intracelulares que incluyen quinasas que catalizan la fosforilación de proteínas secuencia abajo en la cascada de señalización. Son mediadores importantes para la producción de citocina TNF-\alpha las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAP) y en particular la quinasa p38.

Las quinasas p38 son activadas en respuesta a diferentes estímulos que incluyen, pero sin limitar, citocinas proinflamatorias, endotoxinas, luz ultravioleta, y choque osmótico. La activación de p38 requiere la fosforilación doble por quinasas quinasa MAP (MKK3 y MKK6) secuencia arriba en la treonina y tirosina en el patrón Thr-Gly-Tyr, característico de las isozimas p38.

Se han descrito 4 isoformas de p38. Las formas \alpha y \beta se expresan en células inflamatorias y se cree que son mediadores clave en la producción de TNF-\alpha. La inhibición de p38\alpha y \beta en células da como resultado niveles reducidos de expresión de TNF-\alpha, y dichos inhibidores son eficaces en modelos animales de enfermedad inflamatoria.

La clonación molecular de p38\alpha humano identificó dos isozimas, que son el producto variante de corte y empalme de un solo gen. Posteriormente se han identificados 3 productos génicos adicionales, p38\beta, p38\gamma y p38\delta. Las quinasas p38 fosforilan y activan factores de transcripción, ATF-2, MAX, CHOP y C/ERPb, sugiriendo una función de las quinasas p38 en la regulación génica. Además, las quinasas p38 fosforilan otras proteína quinasas, tales como la proteína quinasa activada MAPK-2/3 (MAPKAP-K2/3, o MK2/3), y la quinasa de interacción con quinasa MAP 1/2 (MNK1/2). Recientemente, se ha mostrado que la activación de MK2 es esencial para la expresión de TNF-\alpha inducida por LPS [Kotlyarov y col., Nature Cell Biol., 1:94-97 (1999)]. Los ratones que carecen de MK2 presentan una reducción de 90% en la producción de TNF-\alpha y son resistentes al choque inducido por LPS. La reducción de las cantidades de TNF-\alpha no se debe a la menor producción de ARNm de TNF-\alpha, sino a la menor producción de la proteína TNF-\alpha, sugiriendo que MK2 regula la biosíntesis de TNF-\alpha a un nivel postranscripcional.

Una amplia evidencia indica que la ruta de p38 tiene una función importante en el proceso inflamatorio mediado por IL-1 y TNF-\alpha.

Se espera que los inhibidores de tipo moléculas pequeñas de p38 tengan varias ventajas frente a inhibidores proteínicos de TNF-\alpha o IL-1. Los inhibidores de p38 no solo bloquean la producción de TNF-\alpha e IL-1, sino que también interfieren directamente con muchos de los efectos biológicos secundarios. Además, no es probable que las moléculas pequeñas inhibidoras induzcan reacciones inmunitarias en pacientes, y se cree que son activos después de la administración oral.

\newpage

La presente invención proporciona nuevos compuestos que son inhibidores potentes y selectivos de p38\alpha y \beta, y como tales, también son inhibidores potentes de la expresión de TNF-\alpha en células humanas. Los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios y otros trastornos mediados por la expresión de TNF-\alpha y p38, incluyendo, pero sin limitar, resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome de dificultad respiratoria en el adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

Sumario de la invención

Los compuestos de la presente invención son eficaces como inhibidores de la actividad de p38 inadecuada, en especial las isoformas \alpha y \beta, y a su vez de la producción de citocinas, y en particular, de la expresión de TNF-alfa (TNF-\alpha) celular. Por consiguiente, los compuestos de la invención son útiles para inhibir, prevenir y suprimir diferentes patologías asociadas con dicha actividad, tales como por ejemplo, inflamación, asma, artritis, aterosclerosis, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedades autoinmunes, enfermedad de Alzheimer e insuficiencia cardiaca congestiva, entre otros.

En una realización, los principios de la presente invención proporcionan un compuesto, o una sal del mismo, representado por la fórmula I:

1

en la que:

V se elige de -NH y -O-,

W, X e Y se eligen independientemente de -CH= y -N=;

de modo que dos o más sean -N=;

Z es -N(R^{1})(R^{2});

-N(R^{1})(R^{2}) considerado junto puede formar un heterociclilo o heterociclilo sustituido o

R^{1} se elige de hidrógeno y metilo, y

R^{2} es alquilo de 1 a 8 carbonos;

R^{6} es

2

R^{7} se elige de hidrógeno, metilo, metoxi, halógeno o ciano;

R^{9} se elige de triazol, oxadiazol, imidazol, tiazol o bencimidazol no sustituido o sustituido;

R^{11} es -N(R^{12})(R^{13});

-N(R^{12})(R^{13}) considerado junto puede formar un heterociclilo monocíclico o heterociclilo sustituido de 5-7 átomos que contiene 1, 2 ó 3 átomos de nitrógeno adicionales -NH-alquilo, en el que alquilo es de 1-4 átomos de carbono o

3

y

R^{15} y R^{16} son independientemente hidrógeno o metilo.

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Los principios de la presente invención también proporcionan un compuesto representado por la fórmula I, o una sal del mismo, para usar en la inhibición de la expresión de TNF-\alpha en un mamífero. Tal como se usa en el presente documento, inhibir la expresión de TNF-\alpha se pretende que incluya inhibir, suprimir y prevenir afecciones asociadas con la expresión de TNF-\alpha inadecuadas, incluyendo, pero sin limitar, inflamación, asma, artritis, aterosclerosis, esclerosis múltiple, enfermedades autoinmunes, enfermedad de Alzheimer e insuficiencia cardiaca congestiva.

Los principios de la presente invención proporcionan además un compuesto representado por la fórmula I, o una sal del mismo, para usar para tratar trastornos mediados por la quinasa p38 y por TNF-\alpha en un mamífero.

Como se usa en el presente documento, un trastorno mediado por quinasa p38 significa un trastorno asociado con la actividad inadecuada de la quinasa p38; un trastorno mediado por TNF-\alpha significa un trastorno asociado con la expresión inadecuada de TNF-\alpha. Dichos trastornos incluyen, pero sin limitar, inflamación, asma, artritis, aterosclerosis, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedades autoinmunes, enfermedad de Alzheimer e insuficiencia cardiaca congestiva.

Por consiguiente, los compuestos de la invención, así como sales de los mismos, se pueden usar en la fabricación de una composición farmacéutica o medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico de estados patológicos en mamíferos. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en forma de composiciones farmacéuticas como una monoterapia, o en combinación, por ejemplo, con otro antiinflamatorio, p. ej., un esteroide o AINE (fármaco antiinflamatorio no esteroideo) y/o agentes inmunosupresores. Dichas terapias de combinación pueden implicar la administración de diferentes productos farmacéuticos como una sola forma farmacéutica o como múltiples formas farmacéuticas, administradas de forma simultánea o secuencial.

Se puede usar cualquier vía de administración adecuada para proporcionar a un paciente una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención. Las vías de administración adecuadas pueden incluir, por ejemplo, la oral, rectal, nasal, bucal, parenteral (tal como intravenosa, intratecal, subcutánea, intramuscular, intraesternal, intrahepática, intralesional, intracraneal, intraarticular e intrasinovial), transdérmica (tal como, por ejemplo, parches) y similares. Debido a su facilidad de administración, se pueden preferir las formas farmacéuticas oral, tales como por ejemplo, comprimidos, trociscos, dispersiones, suspensiones, disoluciones, cápsulas, cápsulas de gelatina blanda, y similares. La administración también puede ser por medios de liberación controlada o sostenida y dispositivos de suministro. Los procedimientos para preparar dichas formas farmacéuticas son bien conocidos en la materia.

Las composiciones farmacéuticas que incorporan los compuestos de la presente invención pueden incluir excipientes, un vehículo farmacéuticamente aceptable, además de otros ingredientes terapéuticos. Los excipientes tales como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes colorantes, agentes de sabor, agentes de granulación, agentes disgregantes, y similares pueden ser adecuados dependiendo de la vía de administración. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y cápsulas representan las formas farmacéuticas monodosis más ventajosas. Si se desea, los comprimidos se pueden recubrir por técnicas acuosas o no acuosas estándar.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar en forma de sales farmacéuticamente aceptables derivadas de bases orgánicas o inorgánicas, e hidratos de los mismos. Están incluidas entre dichas sales, sales de amonio, sales de metal alcalino, tales como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos, tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas, tales como sales de diciclohexilamina, N-etil-D-glucamina, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares.

Descripción detallada de la invención

[1] Por lo tanto, en una primera realización, la presente invención proporciona un compuesto nuevo de fórmula I, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 1.

[2] En una realización preferida, la presente invención proporciona un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 2.

[3] En una realización más preferida, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 3.

[4] En otra realización preferida, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 4.

[5] En otra realización más preferida, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 5.

[6] En otra realización más preferida, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 6.

[7] En otra realización más preferida, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 7.

[8] En otra realización preferida más, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 8.

[9] Todavía en otra realización más preferida, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 9.

[10] En otra realización preferida más, la presente invención proporciona un compuesto de [1], incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos del mismo, según la reivindicación 10.

[11] En una segunda realización preferida, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende como un principio activo, un compuesto, o sal del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

[12] En una realización más preferida, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que además comprende uno o más principios activos adicionales.

[13] En una realización más preferida, la presente invención proporciona una composición farmacéutica en la que dicho principio activo adicional es un compuesto antiinflamatorio o un agente inmunosupresor.

[14] En una realización preferida, la presente invención proporciona una composición farmacéutica en la que dicho principio activo adicional se elige de un esteroide y un AINE.

[15] En una tercera realización preferida, la presente invención proporciona una composición de acuerdo con [11] para usar en la inhibición de la expresión de TNF-\alpha en un mamífero.

[16] En una realización más preferida, la presente invención proporciona una composición de acuerdo con [11] para usar en el tratamiento de un trastorno mediado por TNF-\alpha.

[17] En una realización más preferida, el trastorno mediado por TNF-\alpha es un trastorno inflamatorio.

[18] En una realización incluso más preferida, el trastorno mediado por TNF-\alpha se elige de resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome de dificultad respiratoria en el adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

[19] En una realización más preferida, la composición farmacéutica de la invención se va a administrar con uno o más agentes antiinflamatorios o inmunosupresores adicionales, como una sola forma farmacéutica o como formas farmacéuticas distintas.

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[20] En una realización incluso más preferida, la presente invención proporciona una composición de acuerdo con [11] para usar para tratar una afección asociada con la expresión de TNF-\alpha en un mamífero.

[21] En una realización incluso más preferida, la afección asociada con la expresión de TNF-\alpha es un trastorno inflamatorio.

[22] En una realización incluso más preferida, la afección asociada con la expresión de TNF-\alpha se elige de resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome de dificultad respiratoria en el adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

[23] En una realización más preferida, la presente invención proporciona una composición de acuerdo con [11] para usar para tratar una afección asociada con la expresión de TNF-\alpha en un mamífero, en la que la que la composición farmacéutica de la invención se va a administrar con uno o más agentes antiinflamatorios o inmunosupresores adicionales en una sola forma farmacéutica o en formas farmacéuticas separadas.

[24] En otra realización más preferida, la presente invención proporciona una composición de acuerdo con [11] para usar para tratar una afección asociada con la actividad de quinasa p38 en un mamífero.

[25] Todavía en otra realización más preferida, la afección asociada con la actividad de quinasa p38 es un trastorno inflamatorio.

[26] Todavía en otra realización más preferida, la afección asociada con la actividad de quinasa p38 se elige de resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome de dificultad respiratoria en el adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

[27] Todavía en otra realización más preferida, la composición farmacéutica de la invención se va a administrar con uno o más agentes antiinflamatorios o inmunosupresores adicionales como una sola forma farmacéutica o como formas farmacéuticas distintas.

En particular, la presente invención proporciona un compuesto, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos, seleccionados de:

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4

5

6

7

y

8

Abreviaturas y definiciones

Los siguientes términos y abreviaturas conservan el significado indicado a lo largo de esta memoria descriptiva.

ATP = trifosfato de adenosina

ADNc = ADN complementario

DCE = dicloroetileno

DCM = diclorometano = cloruro de metileno CH C4

DIC = diisopropilcarbodiimida

DIEA = N,N-diisopropiletilamina

DMF = N,N-dimetilformamida

DMSO = dimetilsulfóxido

DTT = ditiotreitol

EDTA = ácido etilendiaminetetraacético

EIA = inmunoensayo enzimático

ELISA = ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas

Fmoc = 9-fluorenilmetoxicarbonilo

GST = glutatión S-transferasa

HOBt = 1-hidroxibenzotriazol

LPS = lipopolisacárido

MBP = proteína básica de mielina

MES = ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico

ARNm = ARN mensajero

PCR = reacción en cadena de la polimerasa

Pr_{2}NEt = dipropiletilamina

i-Pr_{2}NEt = diisopropiletilamina

RPMI = Roswell Park Memorial Institute

TBS = t-butildimetilsililo

TFA = ácido trifluoroacético

THF = tetrahidrofurano

"Alquilo" se pretende que incluya estructuras de hidrocarburos lineales o ramificadas y combinaciones de las mismas, de 1 a 20 carbonos. Un "alquilo inferior" significa grupos alquilo de 1 a aproximadamente 10, preferiblemente de 1 a aproximadamente 8, y más preferiblemente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Los ejemplos de dichos radicales incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, pentilo, iso-amilo, hexilo, octilo y similares.

"Arilo" significa un radical hidrocarburo aromático de 6 a aproximadamente 16 átomos de carbono, preferiblemente de 6 a aproximadamente 12 átomos de carbono, y más preferiblemente de 6 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos arilo son fenilo, que se prefiere, 1-naftilo y 2-naftilo.

"Cicloalquilo" se refiere a estructuras de anillos de hidrocarburos saturados de 3 a 12 átomos de carbono, y preferiblemente de 3 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, norbornilo, adamantilo y similares. Un "cicloalquilo inferior" se refiere a cicloalquilo de 3 a 6 carbonos.

"Heterociclilo" se refiere a estructuras monocíclicas saturadas, parcialmente saturadas o insaturadas, de 3 a 8 átomos, preferiblemente 5 ó 6 átomos, y estructuras bicíclicas de 9 ó 10 átomos que contienen 1 o más átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos elegidos de O, N y S. El punto de unión de la estructura de heterociclilo es en un átomo de carbono o nitrógeno disponible. Los ejemplos incluyen: imidazol, piridina, indol, tiofeno, benzopiranona, tiazol, furano, bencimidazol, quinolina, isoquinolina, quinoxalina, pirimidina, pirazina, tetrazol, pirazol, pirrolilo, piridinilo, pirazolilo, triazolilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, indolilo, tiofenilo, furanilo, tetrazolilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, pirrolindinilo, 1,3-dioxolanilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, piperidinilo, 1,4-ditianilo, tiomorfolinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo, 1,2,5-tritianilo, benzo(b)tiofenilo, bencimidazolilo, quinolinilo, y similares.

Se usa el siguiente sistema de numeración para indicar puntos de unión en los heterociclos en los compuestos de la invención.

9

"Alcoxi" significa una configuración de hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico o combinaciones de los mismos, que incluye de 1 a 20 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 8 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 a aproximadamente 4 átomos de carbono, y un átomo de oxígeno en el punto de unión. Los grupos alcoxi adecuados incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, iso-butoxi, s-butoxi, t-butoxi, ciclopropiloxi, ciclohexiloxi y similares. "Alcoxi inferior" se refiere a grupos alcoxi que tienen de 1 a 4 átomos de carbono. Igualmente, "alquiltio" se refiere a dichos grupos que tienen un átomo de azufre en el punto de unión.

"Alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo acíclico insaturado, siempre que contenga al menos un doble enlace. "Alquenilo inferior" se refiere a dichos radicales que contienen de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 2 a aproximadamente 8 átomos de carbono y más preferiblemente de aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Los ejemplos de radicales alquenilo adecuados incluyen propenilo, buten-1-ilo, isobutenilo, penten-1-ilo, 2-metilbuten-1-ilo, 3-metilbuten-1-ilo, hexen-1-ilo, hepten-1-ilo y octen-1-ilo y similares.

"Alquinilo" se refiere a un radical hidrocarbonado acíclico insaturado que contiene al menos un triple enlace. Los ejemplos incluyen etinilo, propinilo y similares.

"Alquilo sustituido" significa un alquilo en el que uno o más hidrógenos, preferiblemente 1, 2 ó 3 hidrógenos, unidos a un carbono alifático se sustituyen por un sustituyente tal como -N(R^{31})(R^{32}), alcoxi, alquiltio, halógeno, ciano, carboxilo, hidroxilo, -SO_{2}-alquilo, -CO_{2}alquilo, -C(O)-alquilo, nitro, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heterociclilo, heterociclilo sustituido, -C(O)-N(R^{31})(R^{32}) o -NH-C(O)-alquilo. Los ejemplos de dichos grupos sustituyentes incluyen metoxi, etoxi, propoxi, amino, metilamino, dimetilamino, fenilo, naftilo, cloro, flúor, y similares.

"Cicloalquilo sustituido" significa un cicloalquilo en el que uno o más hidrógenos, preferiblemente 1, 2 ó 3 hidrógenos, unidos a un carbono del anillo se sustituyen por un sustituyente tal como alquilo, alquilo sustituido, -N(R^{31})(R^{32}), alcoxi, alquiltio, arilo, arilo sustituido, halógeno, ciano, carboxilo, hidroxilo, nitro, -SO_{2}-alquilo, -CO_{2}-alquilo, -C(O)-alquilo, -C(O)-N(R^{31})(R^{32}), o -NH-C(O)-alquilo. Los ejemplos de dichos grupos incluyen metilo, isopropilo, metoxi, etoxi, propoxi, amino, metilamino, dimetilamino, fenilo, cloro, flúor y similares. También están incluidos en esta definición los anillos de cicloalquilo que tienen un arilo condensado, preferiblemente fenilo o cicloalquilo, tales como

10

y similares.

"Arilo sustituido" significa un arilo en el que uno o más hidrógenos, preferiblemente 1, 2 ó 3 hidrógenos unidos a un carbono aromático se sustituyen por un sustituyente tal como alquilo, alquilo sustituido, -N(R^{31})(R^{32}), alcoxi, alquiltio, arilo, arilo sustituido, halógeno, ciano, nitro, carboxilo, hidroxilo, -SO_{2}-alquilo, -CO_{2}-alquilo, -C(O)-alquilo, -C(O)-N(R^{31})(R^{32}), o -NH-C(O)-alquilo. Los ejemplos de dichos sustituyentes incluyen metilo, isopropilo, metoxi, etoxi, propoxi, amino, metilamino, dimetilamino, fenilo, cloro, flúor, -CO_{2}CH_{3}, -C(O)-NH_{2} y similares.

"Heterociclilo sustituido" significa un heterociclilo sustituido en uno o más átomos de carbono o nitrógeno disponibles, preferiblemente en 1 ó 2 átomos de carbono y/o nitrógeno, con un sustituyente tal como alquilo, alquilo sustituido, -N(R^{31})(R^{32}), alcoxi, alquiltio, arilo, arilo sustituido, halógeno, ciano, nitro, oxo, carboxilo, hidroxilo,
-SO_{2}-alquilo, -CO_{2}-alquilo, -C(O)-alquilo, -C(O)-N(R^{31})(R^{32}), o -NH-C(O)-alquilo. Los ejemplos de dichos grupos incluyen metilo, isopropilo, metoxi, etoxi, propoxi, amino, metilamino, dimetilamino, fenilo, cloro, flúor y similares.

"Halógeno" se pretende que incluya por ejemplo F, Cl, Br y I.

El término "profármaco" se refiere a un compuesto químico que se convierte en un agente activo por procedimientos metabólicos in vivo. [Véase, p. ej., N. Boder y J.J. Kaminski, Ann. Rep. Med. Chem. 22:303 (1987) y H. Bundgarrd, Adv. Drug Delivery Rev., 3:39 (1989)]. En relación con la presente invención, un profármaco de un compuesto de fórmula I se pretende que signifique cualquier compuesto que se convierte en un compuesto de fórmula I por procedimientos metabólicos in vivo. El uso de profármacos de los compuestos de fórmula I en cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento está contemplado y se pretende que esté dentro del alcance de la invención.

Se usa terminología relacionada con grupos funcionales "protegidos", "protección" y/o "desprotección" a lo largo de toda esta solicitud. Dicha terminología la comprenden bien los expertos en la materia y se usa en el contexto de procedimientos que implican el tratamiento secuencial con una serie de reactivos. En este contexto, un grupo protector se refiere a un grupo que se usa para ocultar un grupo funcional durante una etapa del procedimiento en la que, de lo contrario, reaccionaría, pero en la que la reacción no es deseable. El grupo protector previene la reacción en esta etapa, pero se puede eliminar posteriormente para exponer el grupo funcional original. La eliminación o "desprotección" se produce después de completarse la reacción o reacciones en las que el grupo funcional interferiría. Por lo tanto, cuando se especifica una secuencia de reactivos, como en el procedimiento de la invención, el experto en la materia puede prever fácilmente los grupos que serán adecuados como "grupos protectores" para los grupos funcionales implicados.

En el caso de la presente invención, los grupos funcionales típicos que deben protegerse son las aminas. Los grupos adecuados para este propósito se discuten en libros de texto estándar en el campo de la química, tales como Protective Groups in Organic Synthesis de T.W.Greene [John Wiley & Sons, New York, 1991], que se incorpora en el presente documento por referencia. Se dirige la atención, en particular, al capítulo titulado "Protección para el grupo amino" (páginas 309-405). Los grupos protectores preferidos incluyen BOC y Fmoc. Los procedimientos de ejemplo para la protección y desprotección de estos grupos se encuentran en Green y Wuts en las páginas 318 y 327.

Los materiales sobre los que se llevan a cabo las síntesis descritas en el presente documento se denominan soportes sólidos, perlas y resinas. Estos términos se pretende que incluyan: (a) perlas, gránulos, discos, fibras, geles o partículas tales como perlas de celulosa, perlas de vidrio poroso, geles de sílice, perlas de poliestireno opcionalmente reticulado con divinilbenceno y opcionalmente injertado con polietilenglicol, perlas de poliacrilamida, perlas de látex, perlas de dimetilacrilamida opcionalmente reticuladas con N,N'-bis-acriloiletilendiamina, partículas de vidrio recubiertas con polímero hidrófobo, etc., es decir, material que tiene una superficie rígida o semirrígida; y (b) soportes solubles tales como polietilenglicol o poliestireno no reticulado, de bajo peso molecular. Los soportes sólidos pueden tener, y normalmente tienen, grupos funcionales tales como grupos amino, hidroxi, carboxilo o halógeno; en los que los grupos amino son los más comunes.

TentaGel^{TM}-NH_{2} (polímero Rapp, Tubingen, Alemania) es una resina preferida de poliestireno injertada con polietilenglicol funcionalizada con amina. La resina TentaGel^{TM}-S-PHB tiene un conector para-hidroxibencilo que se puede escindir usando ácido trifluoroacético al 90% en DCM. Las técnicas para funcionalizar la superficie de fases sólidas son conocidas en la materia. La unión de lisina a los grupos amino en una perla (para aumentar el número de sitios disponibles) y la posterior unión de conectores, así como etapas adicionales en una síntesis combinatoria típica, se describen, por ejemplo, en la solicitud PCT WO95/30642, cuya descripción se incorpora en el presente documento por referencia. En la síntesis descrita en el documento WO95/30642, el conector es un conector que se puede escindir por fotolisis, pero los principios generales del uso de un conector están bien ilustrados.

Isómeros ópticos - Diastereómeros - Isómeros geométricos

Algunos de los compuestos descritos en el presente documento contienen uno o más centros asimétricos y por lo tanto pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisómeros que pueden definirse en términos de estereoquímica absoluta como (R) o (S) o como (D) o (L) para los aminoácidos. La presente invención implica que incluye todos dichos posibles diastereómeros así como sus formas racémicas y ópticamente puras. Los isómeros ópticamente activos (R) y (S) o (D) y (L) se pueden preparar usando sintones quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver ópticamente usando técnicas convencionales. Cuando los compuestos descritos en el presente documento contienen dobles enlaces olefínicos u otros centros de asimetría geométrica, y salvo que se especifique lo contrario, se pretende que incluya los isómeros geométricos tanto (E) como (Z). Igualmente, se pretende que estén incluidas todas las formas tautómeras.

Los compuestos de la invención que incorporan diaminas quirales se pueden resolver en pares de enantiómeros por técnicas conocidas. Cuando los enantiómeros puros de los materiales de partida no están disponibles en el comercio, se pueden obtener por resolución clásica, que puede usar, por ejemplo, la cristalización fraccionada de sales diastereómeras. Los compuestos de la invención pueden tener más de un centro quiral, por ejemplo, en el que la aminación reductora de un producto intermedio homoquiral conduce a una mezcla de diastereómeros. Los productos intermedios racémicos y compuestos de la invención también se pueden resolver por separación cromatográfica, tal como por ejemplo, HPLC usando una columna cargada con un soporte homoquiral, dando compuestos isómeros puros.

La configuración de cualquier doble enlace carbono-carbono que aparezca en el presente documento se selecciona solo por conveniencia y no se pretende que designe una configuración particular; así pues, un doble enlace carbono-carbono representado de forma arbitraria en el presente documento, como trans puede ser cis, trans o una mezcla de los dos en cualquier proporción.

En vista de las definiciones anteriores, otros términos químicos usados a lo largo de esta solicitud los pueden entender fácilmente los expertos en la materia. Los términos se pueden usar solos o en cualquier combinación de los mismos. Las longitudes de cadena preferidas y más preferidas de los radicales se aplican a todas dichas combinaciones.

Utilidad

Los compuestos de la presente invención han demostrado utilidad como inhibidores selectivos de la actividad inadecuada de quinasa p38, y en particular, las isoformas p38\alpha y p38\beta. Como tales, los compuestos de la presente invención tienen utilidad en el tratamiento de afecciones asociadas con la actividad de quinasa p38 inadecuada. Dichas afecciones incluyen enfermedades en las que los niveles de citocinas son modulados como una consecuencia de la señalización intracelular a través de p38, y en particular, enfermedades que están asociadas con una sobreproducción de dichas citocinas tales como IL-1, IL-4, IL-8 y en particular TNF-\alpha.

Como inhibidores de la actividad de quinasa p38, los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento y prevención de las afecciones mediadas por p-38 incluyendo, pero sin limitar, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, trastornos óseos destructivos, trastornos proliferativos, trastornos angiogénicos, enfermedades infecciosas, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades víricas, alergias, isquemia miocárdica, reperfusión/isquemia en el accidente cerebrovascular, ataques cardiacos, hipoxia de órgano, hiperplasia vascular, hipertrofia cardiaca, agregación de plaquetas inducida por trombina, y afecciones asociadas con la prostaglandina endoperóxido sintasa-2.

Las enfermedades inflamatorias que se pueden tratar o prevenir incluyen, pero sin limitar, pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, asma, alergia y síndrome de dificultad respiratoria en el adulto.

Las enfermedades autoinmunes que se pueden tratar o prevenir incluyen, pero sin limitar, glomerulonefritis, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerodermia, tiroiditis crónica, enfermedad de Grave, gastritis autoinmune, diabetes, anemia hemolítica autoinmune, neutropenia autoinmune, trombocitopenia, dermatitis atópica, hepatitis activa crónica, miastenia grave, esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, psoriasis o enfermedad de injerto contra huésped.

Las enfermedades óseas destructivas que se pueden tratar o prevenir incluyen, pero sin limitar, osteoporosis, osteoartritis y trastorno óseo relacionado con mieloma múltiple.

Las enfermedades proliferativas que se pueden tratar o prevenir incluyen, pero sin limitar, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, melanoma metastático, sarcoma de Kaposi y mieloma múltiple.

Las enfermedades infecciosas que se pueden tratar o prevenir incluyen, pero sin limitar, sepsia, choque séptico y Shigellosis.

Las enfermedades neurodegenerativas que se pueden tratar o prevenir con los compuestos de esta invención incluyen, pero sin limitar, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, isquemias cerebrales o enfermedad neurodegenerativa causada por lesión traumática.

Los trastornos angiogénicos que se pueden tratar o prevenir incluyen tumores sólidos, neovascularización ocular, hemangiomas infantiles.

Las enfermedades víricas que se pueden tratar o prevenir incluyen, pero sin limitar, infección de hepatitis aguda (incluyendo hepatitis A, hepatitis B y hepatitis C), infección por VIH y retinitis por CMV.

Además, los inhibidores de p38 de esta invención también presentan inhibición de la expresión de proteínas proinflamatorias inducibles tales como la prostaglandina endoperoxidasa sintasa-2 (PGHS-2), también denominada ciclooxigenasa-2 (COX-2). Por consiguiente, las afecciones mediadas por p38 adicionales incluyen edema, analgesia, fiebre y dolor, tal como dolor neuromuscular, cefalea, dolor causado por cáncer, dolor dental y dolor por artritis.

Como resultado de su actividad inhibidora de p38, los compuestos de la presente invención tienen utilidad en el tratamiento y la prevención de enfermedades asociadas con la producción de citocinas. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento y prevención de:

enfermedades mediadas por IL-1 tales como, por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis, accidente cerebrovascular, endotoxemia y/o síndrome de choque tóxico, reacción inflamatoria inducida por endotoxinas, enfermedad inflamatoria del intestino, tuberculosis, aterosclerosis, degeneración muscular, caquexia, artritis psoriática, síndrome de Reiter, gota, artritis traumática, artritis por rubéola, sinovitis aguda, diabetes, enfermedad pancreática de células \beta y enfermedad de Alzheimer;

enfermedades y afecciones mediadas por IL-8 tales como, por ejemplo, las caracterizadas por infiltración neutrófila masiva, tales como psoriasis, enfermedad inflamatoria del intestino, asma, lesión por reperfusión cardiaca y renal, síndrome de dificultad respiratoria en el adulto, trombosis y glomerulonefritis; y

enfermedades y afecciones mediadas por TNF tales como artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, osteoartritis, artritis gotosa y otras afecciones artríticas, sepsia, síndrome de choque séptico, síndrome de dificultad respiratoria en el adulto, malaria cerebral, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, silicosis, sarcoidosis pulmonar, enfermedad de resorción ósea, lesión por reperfusión, reacción de injerto contra huésped, rechazos de aloinjertos, fiebre y mialgias debido a infección, caquexia secundaria a infección, SIDA, ARC o tumor maligno, formación mieloide, formación de tejido de cicatriz, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, piresis, infecciones víricas, tales como VIH, CMV, gripe y herpes; e infecciones víricas veterinarias, tales como infecciones por lentivirus, incluyendo, pero sin limitar, anemia infecciosa equina; o infecciones retrovíricas, incluyendo virus de inmunodeficiencia felina, virus de inmunodeficiencia bovina o virus de inmunodeficiencia canina.

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Los compuestos de fórmula I, incluyendo una sal o hidrato del mismo farmacéuticamente aceptables, se pueden administrar por cualquier vía adecuada como se ha descrito previamente, para tratar las enfermedades y afecciones mencionadas. El procedimiento de administración variará, por supuesto, dependiendo del tipo de enfermedad que se va a tratar. La cantidad administrada de compuesto activo también variará de acuerdo con el procedimiento de administración y la enfermedad que se va a tratar. Una cantidad eficaz estará dentro del intervalo de dosificación de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 50 mg/kg, en una sola dosis o múltiples dosis administradas a intervalos adecuados a lo largo del día.

Los valores de CI_{50} (concentración necesaria para inhibir 50% de la unión específica) de los compuestos de la presente invención para inhibir la actividad de p38 están por debajo de 30 \muM. Los compuestos preferidos (ejemplificados por los de la Tabla 1) tienen una CI_{50} por debajo de 1 \muM, los compuestos más preferidos tienen una CI_{50} por debajo de 300 nM y los compuestos más preferidos tienen una CI_{50} por debajo de 100 nM.

Los compuestos mostrados en las Tablas 1-4 se han sintetizado de acuerdo con procedimientos descritos en el presente documento y se han ensayado de acuerdo con protocolos descritos a continuación.

Ensayos biológicos Generación de quinasas p38

Se clonaron por PCR ADNc de las isozimas p38\alpha, \beta y \gamma humanas. Estos ADNc se subclonaron en el vector de expresión pGEX (Pharmacia). La proteína de fusión GST-p38 se expresó en E. coli y se purificó de los sedimentos bacterianos por cromatografía de afinidad usando glutatión-agarosa. La proteína de fusión de p38 se activó por incubación con MKK6 constitutivamente activa. La p38 activa se separó de MKK6 por cromatografía de afinidad, MKK6 constitutivamente activa se generó de acuerdo con Raingeaud y col. [Mol. Cell. Biol., 1247-1255 (1996)].

Producción de TNF-\alpha por CMSP estimuladas por LPS

Se obtuvo sangre entera humana heparinizada de voluntarios humanos. Las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) se purificaron de la sangre entera humana por centrifugación en gradiente de densidad con Ficoll-Hypaque y se volvieron a suspender a una concentración de 5 x 10^{6}/ml en medio de ensayo (medio RPMI que contenía suero bovino fetal al 10%). Se incubaron 50 \mul de suspensión de células con 50 \mul de compuesto de ensayo (concentración 4X en medio de ensayo que contenía DMSO al 0,2%) en placas de cultivo tisular de 96 pocillos, durante 5 minutos a temperatura ambiente. Después se añadieron 100 \mul de LPS (200 ng/ml, disolución madre) a la suspensión de células y la placa se incubó durante 6 horas a 37ºC. Después de incubación, el medio de cultivo se recogió y se almacenó a -20ºC. La concentración de TNF\alpha en el medio se cuantificó usando un kit de ELISA estándar (Pharmingen-San Diego, CA). Las concentraciones de TNF\alpha y los valores de CI_{50} de los compuestos de ensayo (concentración de compuesto que inhibía la producción de TNF\alpha estimulada por LPS en 50%) se calcularon por análisis de regresión lineal.

Producción de TNF inducida por LPS en células THP-1

Células THP-1 monocíticas humanas se mantuvieron en medio RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal al 10%. Las células (40.000 células en 80 \mul se añadieron a pocillos de placas de fondo plano de 96 pocillos. Se añadieron los compuestos de ensayo (10 \mul) o vehículo (DMSO al 3%) a los pocillos. Posteriormente, se añadió LPS (Sigma, nº L7261; 10 \mul/pocillo) a las células para una concentración final de 1 \mug/ml. Las placas se incubaron durante la noche a 37ºC y CO_{2} al 5%. Se recogió el líquido sobrenadante (50 \mul/pocillo) para un ensayo ELISA. El TNF se capturó mediante un anticuerpo anti-TNF humano (R&D, nº MAB610) que se preabsorbió en placas de EIA de unión alta (Costar, nº 3590). El TNF capturado se reconoció mediante un anticuerpo policlonal anti-TNF humano biotinilado (R&D, nº BAF210). Se añadió estreptavidina conjugada con peroxidasa a cada pocillo, y se cuantificó la actividad de peroxidasa por un kit de sustrato de peroxidasa (Pierce, nº 34062 y nº 34006).

Ensayo de p38

Los ensayos se realizaron en placas de 96 pocillos con fondo en V. El volumen final del ensayo eral 60 \mul preparados por 3 adiciones de 20 \mul de enzima, sustratos (MBP y ATP) y compuestos de ensayo en tampón de ensayo (Tris 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 10 mM, NaCl 50 mM y DTT 1 mM). La p38 activada, expresada por bacterias, se preincubó con compuestos de ensayo durante 10 min, antes de iniciar la reacción con sustratos. La reacción se incubó a 25ºC durante 45 min y se terminó por adición de 5 \mul de EDTA 0,5 M a cada muestra. La mezcla de reacción se aspiró en una placa Filtermat prehumedecida usando un recogedor de células Skatron Micro96 (Skatron, Inc.), y después se lavó con PBS. Después, la placa Filtermat se secó en un horno de microondas durante 1 min, se trató con cera de centelleo MeltilLex A (Wallac), y se hizo el recuento en un contador de centelleo Microbeta Modelo 1450 (Wallac). Los datos de inhibición se analizaron por regresión no lineal por mínimos cuadrados usando Prizm (Software GraphPad). La concentración final de reactivos en los ensayos era ATP, 1 mM; [\gamma-^{33}P]ATP, 3 nM; MBP (Sigma, nº M1891), 2 mg/pocillo; p38, 10 nM; y DMSO, al 0,3%.

Procedimientos de síntesis

Los procedimientos generales de síntesis para los compuestos de la presente invención se ilustran mediante los siguientes ejemplos. Los compuestos de la invención se pueden preparar por técnicas estándar conocidas en la materia, que implican tanto química en fase sólida como en disolución. Los materiales de partida están disponibles en el comercio o los puede preparar fácilmente el experto en la materia por procedimientos conocidos, o por procedimientos descritos en el presente documento. Las realizaciones específicas descritas se presentan solo a modo de ilustración, y la invención no está limitada por estas.

Como se ilustra en el esquema 1, los compuestos de fórmula I en la que V es -NR^{5}-; cada uno de W, X e Y son N; y cada uno de Z y R^{11} están unidos al núcleo de triazina por -N-, se pueden preparar a partir de triclorotriazina por reacciones secuenciales con 3 aminas diferentes (1, 2, 3; 4 representa una N-sustitución en la amina 3). Preferiblemente, una de las aminas será una anilina y la otra será una diamina protegida de forma adecuada en su N distal.

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Esquema 1

11

Con respecto a la fórmula I de la invención, la amina 1 corresponde a -N(R^{5})(R^{6}); la amina 2 corresponde a -Z y la amina 3 corresponde a -R^{11} y dichas designaciones se usan de forma intercambiable en la siguiente descripción.

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Preparación de aminas 1 [-N(R^{5})(R^{6})] N,N-Dimetil-(3-amino-4-metil)benzamida

12

Se disolvió ácido 3-amino-4-metilbenzoico (9,06 g, 60 mmol) y NaOH (4,8 g, 120 mmol) en 100 ml de acetona/agua al 50% a 0ºC. Se añadieron gota a gota a la disolución 13,2 g de Boc_{2}O (60 mmol) en acetona. La reacción se desarrolló a 0ºC durante 30 min, y después a temperatura ambiente durante 3-4 h. La disolución se evaporó a vacío y la disolución acuosa resultante se acidificó con HCl 2 N hasta pH 2, y se extrajo posteriormente con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua, disolución de HCl 1 N, disolución saturada de NaCl, y se secó sobre sulfato sódico. La filtración y evaporación a vacío proporcionaron el producto intermedio deseado (11,6 g, 77%).

13

El producto intermedio (5 g, 20 mmol) así obtenido se disolvió en 40 ml de THF. A la disolución se añadió dimetilamina 2 N en THF (10 ml), DIC (3,13 ml, 20 mmol) y HOBt (2,7 g, 20 mmol). La disolución se agitó a temperatura ambiente durante 16 h y después se filtró. Los filtrados se evaporaron a vacío. El residuo aceitoso se purificó por una columna ultrarrápida dando 4,5 g de producto (81%). El tratamiento posterior del producto con 20 ml de TFA/DCM al 50% a temperatura ambiente, dio el producto final deseado.

N-Metil-(3-amino-4-metil)benzamida

14

Se preparó de acuerdo con el mismo protocolo anterior.

3-Amino-2-metilbenzamida

La preparación se llevó a cabo por una combinación de química en fase de disolución y en fase sólida, mostrada a continuación.

15

La protección con N-Boc (2,03 g, 81%) se llevó a cabo siguiendo el mismo protocolo descrito previamente.

16

Se trató resina amídica Rink (2 g, 0,4 mmol/g) en un recipiente de reacción con 20 ml de piperidina/DMF al 20% a temperatura ambiente durante 20 min. La resina se lavó con DMF (4x). A esta suspensión de resina/DMF (5 ml) se añadió ácido Boc-3-amino-2-metilbenzoico (0,6 g, 2,4 mmol), HBTU (0,91 g, 2,4 mmol), HOBt (32 g, 2,4 mmol) y DIEA (0,43 ml, 2,4 mmol). El recipiente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La resina se lavó con DMF, CH_{3}OH y CH_{2}Cl_{2} sucesivamente. El posterior tratamiento de la resina con 20 ml de TFA/DCM al 50% dio el producto deseado (66 mg, 55%).

Ácido 3-amino-4,5-dimetilbenzoico y ácido 2-amino-3,4-dimetilbenzoico

17

A una disolución de ácido sulfúrico concentrada (20 ml) se añadieron gota a gota 1,7 ml de ácido nítrico. La disolución resultante se agitó a 0ºC durante 5 min y se añadió el ácido 3,4-dimetilbenzoico (6 mg, 40 mmol) en varias porciones pequeñas. La reacción se desarrolló a 0ºC durante 20 min, y después a temperatura ambiente durante 60 min. Se añadió agua fría a la mezcla de reacción. El precipitado resultante se filtró, se recogió y se purificó por columna ultrarrápida.

El producto se disolvió en 25 ml de CH_{3}OH, y se sometió a hidrogenación Pd/C al 10%, H_{2}, 3,5 kg/cm^{2}) a temperatura ambiente durante 3-4 h. La filtración y evaporación proporcionaron los productos deseados en forma de una mezcla 1:1 de regioisómeros (4 g, 61%).

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Preparación de aminas 1A Síntesis de 3-(4-Metil-3-nitro-fenil)-4H-[1,2,4]triazol

18

Se burbujeó cloruro de hidrógeno a través de una disolución de 3-nitro-p-tolunitrilo (0,49 g, 3 mmol) en 40 ml de etanol a temperatura ambiente durante 10 min. La disolución se continuó agitando a temperatura ambiente durante 60 min y después el disolvente se evaporó a vacío hasta sequedad dando un sólido blanco.

19

Los productos intermedios así obtenidos se disolvieron en 20 ml de etanol, se neutralizaron con disolución de etóxido sódico y el precipitado resultante se separó por filtración. Al filtrado se añadió a temperatura ambiente hidrazida del ácido fórmico (0,2 g, 3 mmol) y la disolución se continuó agitando a temperatura ambiente durante 2 h. Después de separar los productos volátiles a vacío, el residuo se disolvió en 30 ml de m-xileno y se calentó a reflujo a 150ºC durante 16 h. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida proporcionaron 0,26 g del producto final. (Rendimiento: 43%). EM (m/z) calculado para C_{9}H_{8}N_{4}O_{2} (MH^{+}) 205,2, encontrado, 205,1.

2-(4-Metil-3-nitro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol

20

A una disolución de hidrato de hidrazina (1,47 ml, 50 mmol) en CH_{2}Cl_{2} se añadió gota a gota a 0ºC una disolución de cloruro de 3-nitro-4-metil-benzoilo (0,63 ml, 5 mmol) en CH_{2}Cl_{2}. La disolución se continuó agitando a 0ºC durante 10 min y después a temperatura ambiente durante 30 min. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,46 g del producto (rendimiento: 47%). EM (m/z) calculado para C_{8}H_{9}N_{3}O_{3} (MH^{+}), 196,1, encontrado, 196,1.

21

El producto (0,3 g, 1,54 mmol) así obtenido se disolvió en 15 ml de ortoformiato de trietilo y la disolución después se calentó a reflujo a 150ºC durante 16 h. La disolución se dejó enfriar a temperatura ambiente, después se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (2X). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,23 g del producto (rendimiento: 75%). EM (m/z) calculado para C_{9}H_{7}N_{3}O_{3} (MH^{+}), 206,1, encontrado, 206,1.

2-Metil-5-(5-metil-[1,2,4]oxadiazol-3-il)-fenilamina

22

La disolución de 3-nitro-p-tolunitrilo (0,81 g, 5 mmol), bicarbonato sódico (0,89 g, 10 mmol) e hidrocloruro de hidroxilamina (0,70 g, 10 mmol) en 20 ml de etanol/agua (2/1, v/v) se calentó a reflujo durante 2 h. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,75 g del producto (rendimiento: 77%). EM (m/z) calculado para C_{8}H_{9}N_{3}O_{3} (MH+), 196,1, encontrado, 196,1.

23

A una disolución del producto (0,50 g, 2,56 mmol) así obtenido en 15 ml de acetato de etilo se añadió anhídrido acético (0,24 ml, 2,56 mmol) y la disolución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,48 g del producto (rendimiento: 78%). EM (m/z) calculado para C_{10}H_{11}N_{3}O_{4} (MH+), 238,1, encontrado, 237,9.

24

El producto (0,40 g, 1,69 mmol) así obtenido se disolvió en 15 ml de m-xileno y la disolución se calentó a reflujo durante 16 h. El disolvente después se evaporó a vacío y el producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,59 (s, 3H), 2,74 (d, 3H), 7,53 (d, 1H), 8,19 (d, 1H), y 8,72 (s, 1H).

25

A una mezcla del producto (1,69 mmol) así obtenido y estaño (0,30 g, 2,5 mmol) a 0ºC, se añadieron gota a gota 10 ml de una disolución de cloruro de hidrógeno 12 N en agua y la disolución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después, se añadió una disolución de NaOH en agua 2 N a la mezcla de reacción hasta que la disolución se hizo básica. La disolución resultante se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,14 g del producto (rendimiento: 44% para las dos etapas). EM (m/z) calculado para C_{10}H_{11}N_{3}O (MH+), 190,1, encontrado, 190,0.

2-Metil-5-tiazol-2-il-fenilamina

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26

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A una disolución 3-amino-4-metilbenzamida (1,5 g, 10 mmol) en 30 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió en porciones a temperatura ambiente reactivo de Lawesson (2,2 g, 5 mmol). La disolución se agitó a temperatura ambiente durante 48 h y después el disolvente se separó a vacío. El residuo se repartió entre agua y acetato de etilo y la capa orgánica después se lavó con agua, salmuera, y se secó sobre Na_{2}SO_{4}. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,18 g del producto (rendimiento: 11%). EM (m/z) calculado para C_{8}H_{10}N_{2}S (MH^{+}), 167,2, encontrado, 167,1.

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27

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A una disolución del producto (0,15 g, 0,93 mmol) así obtenido y diisopropiletilamina (0,26 ml, 1,4 mmol) en 15 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadió gota a gota una disolución de dicarbonato de di-terc-butilo (0,30 g, 1,4 mmol) en CH_{2}Cl_{2} y la disolución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después los productos volátiles se separaron a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dio 0,19 g del producto (rendimiento: 75%). EM (m/z) calculado para C_{13}H_{18}N_{2}O_{2}S (MH^{+}), 266,4, encontrado, 266,7.

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28

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A una disolución del producto (0,09 g, 0,34 mmol) así obtenido en 5 ml de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC se añadió cloroacetaldehído (0,032 ml, 0,51 mmol). La disolución se calentó a temperatura ambiente durante 20 min y después se calentó a reflujo durante 16 h. La separación de los productos volátiles a vacío y la purificación usando cromatografía ultrarrápida dieron 0,06 g del producto. El producto purificado después se trató con TFA/CH_{2}Cl_{2} al 50% a temperatura ambiente durante 30 min. Después, se evaporó el disolvente, se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y se volvió a evaporar. El residuo aceitoso resultante se disolvió en CH_{2}Cl_{2} y se neutralizó con di-isopropiletilamina dando el producto deseado. EM (m/z) calculado para C_{10}H_{10}N_{2}S (MH^{+}), 191,1, encontrado, 191,2.

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Preparación de aminas 2 [-Z] 3-Metil-3-n-propilpirrolidina

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29

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Se disolvió \alpha-metil-\alpha-propil-succinimida (310 mg, 2 mmol) en THF y se añadieron a la disolución 84 mg de LiAlH_{4} (2,2 mmol) en 3 porciones pequeñas. La reacción se desarrolló a 0ºC durante 5 min, y después a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió agua fría para inactivar la reducción. La disolución se filtró a través de Celita. Los filtrados se combinaron y se evaporaron a vacío. El producto (160 mg, rendimiento 63%) estaba listo para usar.

4,4-Dimetilpiperidina

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30

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Se preparó de acuerdo con el mismo protocolo anterior.

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Preparación de Aminas 3 [-R^{11}]

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31

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En un matraz de 500 ml se disolvió (3R)-(+)-3-aminopirrolidina (10,0 g, 116 mmol) en DCM (160 ml). Se añadió a la disolución la imina de benzofenona (1,0 equivalente) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El disolvente se separó a vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida dando la imina deseada (24,3 g).

Se disolvieron 2,4 g de imina obtenida antes en DCM (30 ml). Se añadió a la disolución 2,6-lutidina (2,5 equivalentes) y cloroformiato de alilo (1,2 equivalentes) y después se enfrió con hielo. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, y se concentró a vacío. A la mezcla resultante se añadió acetato de etilo (100 ml) y disolución acuosa de cloruro amónico (20 ml). La capa acuosa se separó de la capa orgánica y se extrajo con acetato de etilo 2 veces. La capa acuosa separada de la capa orgánica, se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa saturada de cloruro amónico 2 veces, salmuera 2 veces y se secaron con sulfato sódico, y después se concentraron.

El producto anterior se disolvió en metanol (30 ml). Se añadió a la disolución HCl 0,4 N (30 ml) y después se enfrió con hielo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, se vertió en agua y se lavó con DCM (2x30 ml). Se añadió disolución de carbonato sódico para ajustar la fase acuosa a pH 10, y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa saturada de cloruro amónico 2 veces, salmuera 2 veces, y se secaron sobre sulfato sódico, y después se concentraron dando el producto deseado (1,02 g, rendimiento 63%). EM (m/z) calculado para C_{8}H_{14}N_{2}O_{2} (MH^{+}), 171: encontrado, 171.

1-(2-Piridilmetil)-3-aminopirrolidina

32

A una disolución de 3-(t-butoxicarbonilamino)-pirrolidina (racémico, 745 mg, 4 mmol) en dicloroetano se añadió 2-piridinacarboxaldehído (0,38 ml, 4,0 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (848 mg, 4 mmol). La disolución se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La disolución se evaporó a vacío. El residuo aceitoso se purificó por columna ultrarrápida dando 790 mg del producto puro (71%). El producto se trató después con HCl/dioxano 4 N dando el producto final en forma de la sal de HCl.

1-(3-Metoxietil)-3-aminopirrolidina

33

Se disolvieron 3-(t-butoxicarbonilamino)-pirrolidina (racémico, 932 mg, 5 mmol) y ácido 2-metoxiacético (0,39 ml, 5 ml) en DCM. A la disolución se añadieron 0,78 ml de DIC (5 mmol) y 675 mg de HOBt (5 mmol). La reacción se desarrolló a temperatura ambiente durante 16 h. La disolución se filtró. Los filtrados se combinaron y se evaporaron a vacío. El residuo aceitoso se purificó por columna ultrarrápida dando 843 mg del producto puro (65%).

A la disolución del producto intermedio anterior (258 mg, 1 mmol) en THF se añadieron gota a gota 3 ml de BH_{3} en THF 1,0 M. La disolución se agitó a 60ºC durante 3 h y después se enfrió. Se añadió metanol. La disolución se evaporó a vacío. El residuo resultante se extrajo con acetato de etilo y se saturó con disolución de bicarbonato sódico. La capa orgánica se lavó con agua, disolución saturada de cloruro sódico y se secó sobre sulfato sódico. El residuo aceitoso obtenido por filtración y evaporación se trató después con TFA/DCM al 50% a temperatura ambiente durante 30 min dando 50 mg del producto final (35%) en forma de sal de TFA.

1-(3-Metoxipropil)-3-aminopirrolidina

34

Se preparó de acuerdo con el mismo protocolo anterior.

N-t-Butilpirrolidina

35

Se mezclaron anhídrido N-carbonilbenciloxi-L-aspártico (2,49 g 10 mmol) y t-butilamina (0,80 g, 10,9 mmol) en 5 ml de DMF. La mezcla se agitó a temperatura ambiente, después se calentó en un baño de aceite a 120ºC durante 24 h. La mezcla de reacción se repartió entre agua y acetato de etilo. La capa orgánica se lavó una vez con salmuera y se secó sobre sulfato magnésico. La filtración, concentración y purificación por cromatografía ultrarrápida (disolvente, hexano:acetato de etilo 6:4) proporcionaron 0,84 g (rendimiento 28%) del producto.

36

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El producto de la etapa anterior (0,54 g, 1,78 mmol) se disolvió en 5 ml de THF anhidro y se enfrió con un baño de hielo. Se añadió lentamente hidruro de litio y aluminio (1,0 M en THF, 4,5 ml). La mezcla se agitó a 0ºC durante 3,5 h, y después se inactivó con agua hasta que cesó la evolución de hidrógeno. El residuo inorgánico se filtró y se lavó con acetato de etilo. Los filtrados combinados se secaron y se evaporaron dando 0,44 g (89%) del producto.

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37

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El producto de la etapa previa (180 mg, 1,27 mol) se disolvió en 2 ml de ácido acético y se agitó con Pd/Cl al 10% (18 mg) bajo 4,2 kg/cm^{2} de presión de hidrógeno durante 2 h. El catalizador se separó por filtración y el filtrado se concentró dando 120 mg de la sal de ácido acético de la t-butil-3-aminopirrolidina (91%).

1-Fenil-3-aminopirrolidinas

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38

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A una disolución de 559 mg de (3S)-3-(t-butoxicarbonilamino)pirrolidina (3 mmol) en 5 ml de DMSO se añadieron 0,32 ml de 2-fluoro-1-nitrobenceno (3 mmol) y 0,52 ml de DIEA (3 mmol). La disolución se agitó a 100ºC durante 16 h. La disolución se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua, disolución de HCl 1 N y disolución saturada de cloruro sódico sucesivamente, y se secó sobre sulfato sódico. La filtración, evaporación y purificación por cromatografía ultrarrápida dieron 660 mg del producto deseado (72%).

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39

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El producto (600 mg, 2 mmol) anterior se trató con 10 ml de TFA/DCM al 50% a temperatura ambiente durante 30 min. La disolución se evaporó a vacío. El residuo aceitoso se disolvió en acetona a 0ºC. Se añadieron a la disolución 777 mg de Fmoc-Cl (3 mmol) y 828 mg de carbonato potásico (6 mmol). La reacción se desarrolló a 0ºC durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 16 h. La disolución se evaporó a vacío. El residuo se extrajo con acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó sucesivamente con agua, disolución saturada de cloruro sódico y se secó sobre sulfato sódico. El disolvente se separó y el producto se purificó por columna ultrarrápida (680 mg, 79%)

40

El producto (600 mg, 1,4 mmol) así obtenido se mezcló con 249 mg de estaño (2,1 mmol) en un matraz RB de 50 ml. A la mezcla se añadieron gota a gota 10 ml de cloruro de hidrógeno concentrado (era necesario un baño de agua helada si la reacción era demasiado vigorosa). La reacción se desarrolló a temperatura ambiente durante 2 h. Después, se añadió disolución acuosa de NaOH 2 N a la mezcla de reacción hasta que la disolución se hizo básica. La disolución resultante se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua, disolución saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó a vacío. El producto bruto se purificó por columna ultrarrápida dando 130 mg del producto deseado junto con 400 mg del material de partida recuperado.

41

El producto (54 mg, 0,14 mmol) así obtenido se disolvió en 3 ml de etanol absoluto a 0ºC. A la disolución se añadieron 0,22 ml de ácido sulfúrico concentrado, seguido de 37 mg de nitrito sódico en 1 ml de agua. La disolución se agitó a 0ºC durante 5 min, y después a temperatura ambiente durante 60 min. Después se añadió cobre en polvo (87 mg, previamente lavado con éter) a la disolución de la reacción. La disolución se agitó a 60ºC durante 2-3 h. Después de enfriar, la disolución se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua, disolución saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó a vacío. El producto bruto se purificó por columna ultrarrápida dando 32 mg del producto.

Después el producto se trató con 1 ml de piperidina/DMF al 20% a temperatura ambiente durante 1 h. El producto final se purificó por columna ultrarrápida (9 mg, 40%).

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Procedimientos generales para la preparación de pirrolidinas N-sustituidas

Las aminaciones reductoras del grupo -NH de las aminas 3, se llevaron a cabo a temperatura ambiente en dicloroetano usando 2-10 equivalentes de aldehídos o cetonas y triacetoxiborohidruro sódico, NaHB(OAc)_{3}. Fueron necesarias separaciones después de tratamiento por cromatografía para la purificación del producto final. Las N-acilaciones y N-alquilaciones por apertura de epóxido se llevaron a cabo por procedimientos usados habitualmente en la bibliografía.

Los compuestos en los que V es -CHR^{5}- se pueden preparar de acuerdo con los siguientes ejemplos (no abarcados en la presente invención).

Éster de terc-butilo del ácido 3-{4-(5-ciano-2-metil-bencil)-6-[(2,2-dimetil-propil)-metil-amino]-[1,3,5]triazin-2- ilaminol}-pirrolidina-1-carboxílico

42

Una suspensión del compuesto A (0. 036 g, 0,09 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)-paladio(0) (0,025 g, 0,02 mmol), y bromuro de 3-cianobencilzinc (0,5 M en THF, 2 ml, 1 mmol) se agitó durante 16 h a 80ºC en un tubo cerrado. Después de filtrar y concentrar la disolución, el producto se purificó por HPLC preparativa (36 mg, 81%), C_{27}H_{39}N_{7}O_{2}, EM m/z 494 (M+H)^{+}.

3-[4-[(2,2-Dimetil-propil)-metil-amino]-6-(pirrolidin-3-ilamino)-[1,3,5]triazin-2-ilmetil]-4-metil-benzamida

43

Una suspensión del compuesto B (0,03 g, 0,06 mmol) en ácido sulfúrico (4 ml) se agitó durante 90 min a 60ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la disolución de la reacción se diluyó con agua (20 ml), y se hizo básica con hidróxido sódico acuoso 6 N. Después, el producto se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato sódico anhidro), se filtraron y concentraron. Después el producto se purificó por HPLC preparativa (5,2 mg, 21%), C_{22}H_{33}N_{7}O, EM m/z 412 (M+H)^{+}.

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Los compuestos en los que V es -S- se pueden preparar de acuerdo con los siguientes ejemplos.

Preparación de tiofenoles

Etapa 1

Compuesto A

44

Al ácido 3-hidroxi-4-metilbenzoico (2,0 g, 13 mmol) en metanol anhidro (20 ml) a 0ºC en atmósfera de argón se añadió gota a gota cloruro de tionilo (1,4 ml, 20 mmol) a lo largo de un periodo de 10 min. La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC y después a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se separó a vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (50 ml x 2), salmuera (50 ml), después se secó sobre sulfato sódico y se concentró a vacío. El producto bruto (2,0 g, 91% de rendimiento) se usó directamente en la siguiente reacción sin más purificación. Tiempo de retención en HPLC: 2,56 min. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,30 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 5,26 (s, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,52 (d, 1H).

Etapa 2

Compuesto B

45

Al compuesto A (2,0 g, 12 mmol) en DMF (60 ml) a temperatura ambiente en atmósfera de argón, se añadió hidruro sódico (0,67 g, 17 mmol) en una porción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h y después se añadió cloruro de dimetiltiocarbonilo (2,1 g, 17 mmol) en una porción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de inactivación con agua, la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 4). La capa orgánica se lavó con agua (40 ml x 2), salmuera (50 ml), después se secó sobre sulfato magnésico y se concentró a vacío. El compuesto bruto se purificó por cromatografía en columna dando 2,8 g (92%) de un sólido casi blanco. Tiempo de retención en HPLC: 2,90 min. LCMS MH^{+} (m/z) 253. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,26 (s, 3H), 3,38 (s, 3H), 3,47 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 7,30 (d, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,90 (d, 1H).

\newpage

Etapa 3

Compuesto C

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46

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El compuesto B (4,3 g, 17 mmol) se calentó en atmósfera de argón a 240ºC durante 4 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, se obtuvieron 4,1 g (94%) de aceite viscoso marrón como el producto deseado. Tiempo de retención en HPLC: 3,11 min. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,46 (s, 3H), 3,02 (s ancho, 3H), 3,14 (s ancho, 3H), 3,88 (s, 3H), 7,37 (d, 1H), 7,97 (dd, 1H), 8,15 (d, 1H).

Etapa 4

Compuesto D

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47

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Al compuesto C (4,1 g, 16 mmol) en metanol/agua 3:1 (60 ml) a 0ºC se añadió monohidrato de hidróxido de litio (0,68 g, 17 mmol) en una porción. Después de calentar a temperatura ambiente, la mezcla se agitó durante la noche. Después el disolvente se separó a vacío, y la mezcla se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con éter dietílico (50 ml x 2). La capa acuosa se llevó a pH 1 con disolución acuosa de HCl y el sólido resultante se recogió por filtración dando 3,2 g (83%) de un sólido amarillo pálido. Tiempo de retención en HPLC: 2,79 min. LCMS MH^{+} (m/z) 240. RMN ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,48 (s, 3H), 3,03 (s ancho, 3H), 3,15 (s ancho, 3H), 7,40 (d, 1H), 8,01 (d, 1H), 8,20 (s, 1H).

Etapa 5

Compuesto E

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48

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Al compuesto D (1,3 g, 5,7 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) enfriado a -20ºC, se añadió N-metil morfolina (0,63 ml, 5,7 mmol) y cloroformiato de isobutilo (0,74 ml, 5,7 mmol) sucesivamente. La mezcla resultante se agitó a -20ºC durante 0,5 h. En este momento, se añadió gota a gota una disolución de amoniaco 2 M en metanol (4,3 ml, 8,6 mmol) seguido de la agitación a -20ºC durante 1 h y después a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió acetato de etilo (300 ml) y la capa orgánica se lavó con agua (50 ml x 2), disolución acuosa de carbonato sódico al 10% (50 ml) y salmuera (50 ml), después la disolución se secó sobre sulfato magnésico y se concentró a vacío. El compuesto bruto se trituró con acetato de etilo en hexano al 20% y éter dietílico dando 0,77 g (56%) de un sólido casi blanco, como el producto puro. Tiempo de retención en HPLC: 2,20 min. LCMS MH^{+} (m/z) 239. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,46 (s, 3H), 3,03 (s ancho, 3H), 3,14 (s ancho, 3H), 5,5 (br. s, 1H), 6,1 (s ancho, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,77 (dd, 1H), 7,89 (d, 1H).

\newpage

Etapa 6

Compuesto F

49

Al compuesto E (0,77 g, 3,2 mmol) en metanol (10 ml) a temperatura ambiente se añadió disolución acuosa de hidróxido sódico 5 N (3,2 ml, 16 mmol) seguido de calentamiento a reflujo durante 1 h. Después de separar el disolvente a vacío, la mezcla se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con éter dietílico (50 ml x 2). La capa acuosa se llevó a un pH de 1 con disolución acuosa de HCl y el sólido resultante se recogió por filtración dando 0,40 g (74%) de un sólido amarillo pálido. Tiempo de retención en HPLC: 2,09 min. LCMS MH^{+} (m/z) 167. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,38 (s, 3H), 3,42 (s, 1H), 5,70 (s ancho, 1H), 6,00 (s ancho, 1H), 7,22 (d, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,77 (d, 1H).

Etapa 7

Compuesto G

50

Al compuesto D (1,0 g, 4,2 mmol) en DMF (15 ml) se añadieron 1-hidroxibenzotriazol (0,67 g, 5,0 mmol), hidrocloruro de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (0,96 g, 5,0 mmol), i-Pr_{2}NEt (2,2 ml, 12 mmol) e hidrocloruro de metilamina (0,34 g, 5,0 mmol) secuencialmente a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó durante la noche. Después se añadió agua seguido de extracción con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se lavaron sucesivamente con agua, disolución acuosa de HCl 1 N (50 ml x 2), agua, disolución acuosa saturada de NaHCO_{3}, y salmuera, y después la disolución se secó sobre sulfato magnésico. El disolvente se separó a vacío dando 0,89 g (84%) de un sólido amarillo pálido. Tiempo de retención en HPLC: 2,37 min. LCMS MH^{+} (m/z) 252. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 2,44 (s, 3H), 2,98 (d, 3H), 3,02 (s ancho, 3H), 3,13 (s ancho, 3H), 6,12 (s ancho, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,73 (dd, 1H), 7,82 (d, 1H).

Compuesto H

51

El compuesto H se preparó a partir del compuesto D usando el mismo procedimiento que para el compuesto E, sustituyendo la metilamina-HCl por el hidrocloruro de metoxiamina.

Compuesto I

52

El compuesto I se preparó a partir del compuesto G usando el mismo procedimiento que para el compuesto F.

Compuesto J

53

El compuesto J se preparó a partir del compuesto H usando el mismo procedimiento que para el compuesto F.

Compuesto K

54

A cloruro cianúrico (0,20 g, 1,1 mmol) en DCM (2 ml) enfriado en un baño de hielo, se añadió gota a gota una disolución de hidrocloruro de N-metilneopentilamina (0,15 g, 1,1 mmol) y DIEA (0,60 ml, 3,5 mmol) en 1 ml de DCM. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 15 min y a temperatura ambiente durante 15 min, y después se enfrió a 0ºC. Después se añadió gota a gota el compuesto I en DCM (2 ml) seguido de agitación a 0ºC durante 15 min y a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla resultante se purificó directamente por cromatografía en columna dando 0,36 g (86%) de una espuma blanca como producto puro. Tiempo de retención en HPLC: 3,60 min. LCMS MH^{+} (m/z) 394.

Compuesto L

55

El compuesto L se preparó a partir del compuesto K usando el mismo procedimiento que para el compuesto K.

Compuesto M

56

El compuesto M se preparó a partir del compuesto F usando el mismo procedimiento que para el compuesto K.

Compuesto N

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57

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Al compuesto K (25 mg, 0,07 mmol) en acetonitrilo (0,2 ml) se añadió 1-metilhomopiperazina (11 mg, 0,1 mmol) y la mezcla resultante se calentó a 80ºC durante 2 h. El producto puro se aisló en forma de un sólido blanquecino después de HPLC preparativa. Tiempo de retención en HPLC: 3,01 min. LCMS MH^{+} (m/z) 458.

Compuestos O a S

Los compuestos O a S se prepararon usando un procedimiento similar al del compuesto N excepto que se sustituyeron los materiales de partida por el compuesto L, compuesto M y 2-(aminometil)piridina, según fuera adecuado. Véase la tabla 2.

Compuestos T a V

Los compuestos T a V se prepararon usando un procedimiento similar al del compuesto N excepto que se sustituyeron los materiales de partida por el compuesto L, compuesto M y 3-(R)-N-terc-butoxicarbonilpirrolidina, según fuera adecuado. Además, los productos intermedios obtenidos a partir de este procedimiento después se expusieron a HCl 4 N en dioxano a temperatura ambiente durante 1 h para escindir el grupo protector BOC, seguido de concentración a vacío dando las correspondientes sales de HCl de los productos puros. Véase la tabla 2.

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Preparación de fluoroanilinas Compuesto W

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58

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Al ácido 4-fluoro-3-nitrobenzoico (5,0 g, 27 mmol) en diclorometano anhidro (200 ml) a temperatura ambiente, se añadió lentamente cloruro de oxalilo (12 ml, 0,14 mol) seguido de 1 gota de DMF. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y después el disolvente se separó a vacío dando el cloruro de ácido intermedio en forma de un sólido amarillo.

A una parte del cloruro de ácido bruto (2,0 g, 9,9 mmol) en diclorometano anhidro (35 ml) se añadió trietilamina (4,1 ml, 30 mmol) seguido de hidrocloruro de metoxilamina (1,2 g, 15 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua (50 ml x 2), disolución acuosa saturada de NaHCO_{3} (50 ml x 2), salmuera (50 ml), después se secó sobre sulfato magnésico, se filtró, y se concentró a vacío. El residuo resultante se trituró con éter dietílico dando 1,3 g (60%) de un sólido amarillo claro en forma de un producto puro. Tiempo de retención en HPLC: 1,57 min. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 3,86 (s, 3H), 7,35 (dd, 1H), 8,24 (ddd, 1H), 8,65 (dd, 1H), 11,75 (s, 1H).

Compuesto X

59

El compuesto X se preparó usando un procedimiento similar al del compuesto W, excepto que el hidrocloruro de metoxilamina se sustituyó por disolución de amoniaco en metanol como material de partida.

Compuesto Y

60

Al compuesto W (0,25 g) en etanol absoluto (20 ml) se añadió paladio sobre carbón (50 mg, al 10% en peso) y se hidrogenó con hidrógeno (2,1 kg/cm^{2}) durante 3 h. La disolución se filtró a través de un lecho de Celita y el disolvente se separó a vacío dando 0,21 g de aceite espeso marrón claro como producto. Tiempo de retención en HPLC: 0,67 min. RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 3,86 (s ancho, 5H), 6,98 (dd, 1H), 7,00 (dd, 1H), 7,23 (dd, 1H), 8,63 (s, 1H).

Compuesto Z

61

El compuesto Z se preparó a partir del compuesto X usando el mismo procedimiento que para el compuesto Y.

Compuestos A_{1} y B_{1}

62

Los compuestos A_{1} y B_{1} se prepararon a partir de los compuestos Y y Z usando un procedimiento similar al del compuesto K sustituyendo el compuesto I por los compuestos Y y Z.

Compuestos C_{1} y D_{1}

Los compuestos C_{1} y D_{1} se prepararon a partir de los compuestos A_{1} y B_{1} usando un procedimiento similar al usado para el compuesto N. Véase la tabla 3.

Compuestos E_{1} y F_{1}

Los compuestos se prepararon a partir de los compuestos A_{1} y B_{1} usando un procedimiento similar al del compuesto N excepto que se usó la 3-(R)-amino-N-terc-butoxicarbonilpirrolidina en lugar de N-metilhomopiperizina. Además, los productos intermedios obtenidos por este procedimiento se expusieron posteriormente a HCl 4 N en dioxano a temperatura ambiente durante 1 h, para escindir el grupo protector BOC seguido de concentración a vacío para dar las correspondientes sales de HCl de los productos puros. Véase la tabla 3.

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Los compuestos en los que V es -O- se pueden preparar de acuerdo con los siguientes ejemplos.

Preparación de fenoles Compuesto G_{1}

63

A una suspensión de ácido 3-hidroxi-4-metilbenzoico (2,5 g, 16 mmol) en 65 ml de DCM a temperatura ambiente, se añadieron sucesivamente 5,7 ml de cloruro de oxalilo y 0,05 ml de DMF y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 17 h y después se concentró a vacío dando el cloruro de ácido intermedio bruto en forma de un aceite viscoso, amarillo pálido (3 g).

Sin más purificación, el aceite bruto se disolvió en 30 ml de THF y una mitad de esta disolución (15 ml) se añadió lentamente a 16 ml de una disolución de amoniaco en metanol 2 M a 0ºC. Después de calentar a temperatura ambiente y agitar durante 15 h, la mezcla de reacción se concentró a vacío y el residuo resultante se disolvió en KOH acuoso 3 N (50 ml) y se lavó con DCM (2 x 75 ml). La parte acuosa se acidificó con cuidado usando HCl acuoso 6 N hasta pH \sim4, y el producto se extrajo con DCM (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron a vacío dando 0,90 g (72%) del producto puro en forma de un sólido marrón claro. RMN ^{1}H (400 MHz, d^{6}-DMSO): \delta 9,44 (s ancho, 1H), 7,74 (s ancho, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,21 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,13 (s ancho, 1H), 7,09 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 2,14 (s, 3H).

Compuesto H_{1}

64

El compuesto H_{1} se preparó usando el mismo procedimiento que para el compuesto G_{1}, excepto que se usaron 4 ml de una disolución de metilamina en metanol 8 M en sustitución de los 16 ml de una disolución de amoniaco en metanol 2 M. El compuesto H_{1} se aisló en forma de un sólido marrón claro. RMN ^{1}H (400 MHz, d^{6}-DMSO): \delta 9,46 (s ancho, 1H), 8,20 (s ancho, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,16 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 2,74 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 2,14 (s, 3H).

Compuesto I_{1}

65

Una mezcla de ácido 3-hidroxi-4-metilbenzoico (2,0 g, 13 mmol), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (3,3 g, 17 mmol), HOBt (2,1 g, 16 mmol), DIEA (7,2 ml, 53 mmol) e hidrocloruro de metoxilamina (1,3 g, 16 mmol) en 30 ml de DMF, se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla resultante se vertió en 350 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (4 x 100 ml). Los extractos combinados se lavaron con disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 x 75 ml), agua (3 x 75 ml) y salmuera (2 x 100 ml), y después se secaron sobre sulfato sódico anhidro. La disolución se filtró y se concentró a vacío, y el sólido amarillo resultante se disolvió en 30 ml de disolución acuosa de hidróxido sódico 1 N y se lavó con DCM (2 x 20 ml). La parte acuosa después se acidificó usando HCl acuoso 3 N a pH \sim4 y la disolución acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato sódico anhidro, se filtraron y se concentraron a vacío dando 0,47 g (20%) del producto puro en forma de un sólido blanquecino. RMN ^{1}H (400 MHz, d^{6}-DMSO): \delta 11,54 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,12 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,14 (s, 3H).

Compuesto J_{1}

66

A una disolución a 0ºC de cloruro cianúrico (0,20 g, 1,1 mmol) en DCM se añadió gota a gota lentamente una disolución del compuesto A (0,17 g, 1,1 mmol) y DIEA (0,23 ml, 1,3 mmol) en 1 ml de DMF. Después de agitar a 0ºC durante 15 min, se añadió gota a gota lentamente una disolución de hidrocloruro de N-metilneopentilamina (0,16 g, 1,1 mmol) y DIEA (0,62 ml, 3,5 mmol) en 1 ml de DCM. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 1 h, después se añadieron lentamente 4 ml de HCl acuoso 1 N, seguido de dilución de la mezcla de reacción con 30 ml de cloruro de metileno. Se separaron las capas y la capa orgánica se lavó con HCl acuoso 1 N adicional (2 x 15 ml), agua (15 ml) y salmuera (15 ml), y después la disolución se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró a vacío dando 0,4 g de un aceite amarillo pálido, como monocloruro intermedio bruto.

El aceite bruto se disolvió en 0,9 ml de DMF, y a un tercio (0,3 ml) de la disolución resultante se añadió N-metilhomopiperizina (56 mg, 0,50 mmol) y DIEA (30 \mul, 1,7 mmol). La mezcla se calentó a 85ºC durante 3 h seguido de enfriamiento a temperatura ambiente. El compuesto D puro se obtuvo por HPLC preparativa de la mezcla de reacción dando 83 mg (92%) de la correspondiente sal de TFA del producto puro en forma de un sólido blanco. Tiempo de retención en HPLC: 2,66 min. LCMS MH^{+} (m/z) 442.

Compuestos K_{1} a O_{1}

Los compuestos K_{1} a O_{1} se prepararon usando el mismo procedimiento que para el compuesto J_{1} excepto que se usaron como materiales de partida el compuesto H, compuesto I y 2-(aminometil)piridina, según fuera adecuado. Los compuestos finales puros se obtuvieron por HPLC preparativa de la mezcla de reacción dando los productos puros en forma de sus sales de ácido trifluoroacético. Véase la tabla 4.

Compuestos P_{1} a R_{1}

Los compuestos P a R se prepararon usando el mismo procedimiento que para el compuesto J, excepto que se usaron como materiales de partida el compuesto H o compuesto I, y 3-(R)-amino-N-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina, cuando fuera adecuado. Además, los productos intermedios obtenidos por este procedimiento se sometieron posteriormente a HCl 4 N en dioxano a temperatura ambiente durante 1 h para escindir el grupo protector BOC seguido de concentración a vacío dando las correspondientes sales de HCl de los productos puros. Véase la tabla 4.

Los tiempos de retención de HPLC se determinaron usando una columna de cromatografía YMC S5 ODS 4,6 mm x 50 mm Ballistic con un tiempo de elución total con gradiente de 4 min y un caudal de 4 ml/min. El gradiente de elución usa 100% de disolvente A y aumenta gradualmente a 100% de disolvente B a lo largo de 4 min de tiempo de elución (disolvente A = 10% de metanol/90% de agua/0,2% de ácido fosfórico, y disolvente B = 90% de metanol/10% de agua/0,2% de ácido fosfórico). Los productos eluidos se detectaron usando un detector de UV a una longitud de onda de 220 nm.

Síntesis de sintones habituales Éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-hidroximetil-pirrolidina-1-carboxílico

67

El éster de 1-t-butilo del ácido 4-benciloxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (1,00 g, 3,11 mmol) se recogió en THF anhidro en atmósfera de argón y se enfrió a 0ºC. Se añadió gota a gota BH_{3}.THF (1,0 M, 6,22 mmol, 6,22 ml) a la disolución a lo largo de 10 min. La mezcla de reacción después se dejó agitar a 0ºC durante 30 min y después se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 30 min adicionales. La reacción se vertió lentamente en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 1:1) Rendimiento 814 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,48 (s, 9H), 1,63-1,76 (m, 1H), 2,10-2,26 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 3,50-3,60 (m, 1H), 3,63-3,75 (m, 2H), 4,05-4,19 (m, 2H), 4,49 (s, 2H), 7,23-7,39 (m, 5H).

Éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico

68

El alcohol (250 mg, 0,81 mmol) y yoduro de metilo (344,91 mg, 2,43 mmol, 0,15 ml) se disolvieron en THF anhidro en atmósfera de argón. Se añadió lentamente NaH sólido (29,28 mg, 1,22 mmol) a la disolución en atmósfera de argón. Después la reacción se agitó durante 12 h a temperatura ambiente. La reacción se vertió lentamente en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida. (hexano-acetato de etilo 4:1) Rendimiento 217 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,27 (s, 9H), 2,06-2,16 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 3,40-3,52 (n, 3H), 4,09-4,21 (m, 1H), 2,49 (s, 2H), 7,23-7,36 (m, 5H).

Éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico

69

El éster de t-butilo del ácido benciloxi-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico (217,00 mg, 0,68 mmol) se suspendió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (100 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó dos veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin purificación adicional. Rendimiento 148,35 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,42 (s, 9H), 1,80-2,10 (m, 2H), 3,05 (s ancho, 1H), 3,30 (s, 3H), 3,34-3,50 (m, 3H), 4,00 (s ancho, 1H), 4,33-4,40 (m, 1H).

Éster de t-butilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico

70

El éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico (148,35 mg, 0,64 mmol) se disolvió en DCM anhidro y se añadió trietilamina (194,28 mg, 1,92 mmol, 0,27 ml) en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió cloruro de metanosulfonilo (80,64 mg, 0,70 mmol, 0,06 ml) con una jeringa. La reacción se agitó a 0ºC durante 30 min y después se dejó calentar a temperatura ambiente y agitar durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 2:1). Rendimiento 172,26 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,49 (s, 9H), 2,32 (s ancho, 2H), 3,04 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 3,44 (d, J = 6 Hz, 1H), 3,49-3,88 (m, 3H), 4,11 (s ancho, 1H), 5,25 (m, 1H).

Éster de t-butilo del ácido 4-azido-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico

71

El éster de t-butilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico (172,26 mg, 0,56 mmol) se recogió en DMF seca en atmósfera de argón y se añadió azida sódica (182,00 mg, 2,80 mmol). Después la reacción se calentó a 60ºC durante 48 h. La reacción se vertió en agua y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 122,00 mg. C_{11}H_{22}N_{2}O_{3} EM m/e = 257,3 (M+H).

Éster de t-butilo del ácido 4-amino-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico

72

El éster de t-butilo del ácido 4-azido-2-metoximetil-pirrolidina-1-carboxílico (122,00 mg, 0,48 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (100,00 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó dos veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 99,76 mg. C_{11}H_{22}N_{2}O_{3} EM m/e 230,2 (M^{+}).

Éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico

73

El éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-hidroximetil-pirrolidina-1-carboxílico (250 mg, 0,81 mmol) se recogió en DMF seca en atmósfera de argón y se añadió imidazol (110,29 mg, 1,62 mmol). Se añadió cloruro de t-butildimetilsililo (134,29 mg, 0,89 mmol) y la disolución se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 5:1). Rendimiento 267,49 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 0,02 (m, 6H), 0,83 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 1,98-2,13 (m, 1H), 2,13-2,24 (m, 1H), 3,36-3,70 (m, 3H), 3,86-3,95 (m, 1H), 4,00 (s ancho, 1H), 4,15-4,28 (m, 1H), 4,50 (s ancho, 2H), 7,23-7,37 (m, 5H).

Éster de t-butilo del ácido 2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-hidroxi-pirrolidina-1-carboxílico

74

El éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico (267,49 mg, 0,63 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (100 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó 2 veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 192,15 mg. C_{16}H_{33}NO_{4}Si EM m/e = 3,32,2 (M+H).

Éster de t-butilo del ácido 2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-metanosulfoniloxi-pirrolidina-1-carboxílico

75

El éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico (192,15 mg, 0,58 mmol) se disolvió en DCM anhidro y se añadió trietilamina (176,07 mg, 1,74 mmol, 0,24 ml) en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió cloruro de metanosulfonilo (73,08 mg, 0,64 mmol, 0,05 ml) con una jeringa. La reacción se agitó a 0ºC durante 30 min y después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en una disolución HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 4:1). Rendimiento 220,94 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 0,05 (m, 6H), 0,89 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 2,20-2,43 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 3,48-3,92 (m, 4H), 3,93-4,10 (m, 1H), 5,31 (s ancho, 1H).

Éster de t-butilo del ácido 4-azido-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico

76

El éster de t-butilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico
(220,94 mg, 0,54 mmol) se recogió en DMF seca en atmósfera de argón y se añadió azida sódico (175,31 mg, 2,70 mmol). Después la reacción se calentó a 60ºC durante 48 h. La reacción se vertió en agua y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 5:1). Rendimiento 184,83 mg. C_{16}H_{32}N_{4}O_{3}Si EM m/e = 357,3 (M+H).

Éster de t-butilo del ácido 4-amino-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico

77

El éster de t-butilo del ácido 4-azido-2-(t-butil-dimetil-silaniloximetil)-pirrolidina-1-carboxílico (184,83 mg, 0,52 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (150 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó 2 veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 154,69 mg. C_{16}H_{34}N_{2}O_{3}Si EM m/e = 331,2 (M+H).

Éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-metanosulfoniloximetil-pirrolidina-1-carboxílico

78

El éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-hidroximetil-pirrolidina-1-carboxílico (219,09 mg, 0,71 mmol) se recogió en DCM anhidro y se añadió trietilamina (215,53 mg, 2,13 mmol, 0,30 ml) en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió cloruro de metanosulfonilo (89,81 mg, 0,78 mmol, 0,06 ml) con una jeringa. La reacción se agitó a 0ºC durante 30 min y después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en una disolución HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 234,14 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,47 (s ancho, 9H), 2,05-2,32 (m, 2H), 2,98 (s, 3H), 3,31-3,63 (m, 2H), 4,04-4,78 (m, 6H), 7,27-7,40 (m, 5H).

79

El éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-metanosulfoniloximetil-pirrolidina-1-carboxílico (234,14 mg, 0,65 mmol) se recogió en THF anhidro en atmósfera de argón y se enfrió a 0ºC. Se añadió Super-Hydride (1,0 M, 0,98 mmol, 0,98 ml) con una jeringa en 10 min. La disolución se agitó durante 1 h a 0ºC, la TLC indicaba que no quedaba material de partida. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron agua y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 4:1). Rendimiento 168,57 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,22 (d, J = 9,0 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,65-1,77 (m, 1H), 2,13-2,24 (m, 1H), 3,45 (dd, J = 7, 12 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 7 Hz, 1H), 3,94-4,04 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 7,27-7,39 (m, 5H).

Éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico

80

El éster de t-butilo del ácido 4-benciloxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico (168,57 mg, 0,58 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (100,00 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó 2 veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 110,89 mg. C_{10}H_{19}NO_{3} EM m/e=202,1 (M+H).

Éster de t-butilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico

81

El éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico (110,89 mg, 0,55 mmol) se disolvió en DCM anhidro y se añadió trietilamina (166,96 mg, 1,65 mmol, 0,23 ml) en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió cloruro de metanosulfonilo (69,30 mg, 0,61 mmol, 0,05 ml) con una jeringa. La reacción se agitó a 0ºC durante 30 min y después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en una disolución HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 135,21 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,27 (d, J = 9 Hz, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,81-1,92 (m, 1H), 2,43 (s ancho, 1H), 3,04 (s, 3H), 3,56 (dd, J = 7,17 Hz, 1H), 3,84 (s ancho, 1H), 4,01 (s ancho, 1H), 5,17 (s ancho, 1H).

Éster de t-butilo del ácido 4-azido-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico

82

El éster de t-butilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico (135,21 mg, 0,48 mmol) se recogió en DMF seca en atmósfera de argón y se añadió azida sódica (156,00 mg, 2,40 mmol). Después la reacción se calentó a 60ºC durante 48 h. La reacción se vertió en agua y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 5:1). Rendimiento 93,41 mg.

RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,32 (d, J = 9 Hz, 3H), 1,47 (s, 3H), 1,72 (dt, J = 2,12 Hz, 1H), 2,28-2,37 (m, 1H), 3,34 (dd, J = 7, 12 Hz, 1H), 3,63-3,72 (m, 1H), 3,93 (s ancho, 1H), 4,05-4,14 (m, 1H).

Éster de t-butilo del ácido 4-amino-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico

83

El éster de t-butilo del ácido 4-azido-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico (93,41 mg, 0,41 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (100,00 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó 2 veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 79,65 mg. C_{10}H_{20}N_{2}O_{2} EM m/e = 200,2 (M+).

Éster de t-butilo del ácido 2-metil-4-(4-nitro-benzoiloxi)-pirrolidina-1-carboxílico

84

El éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico (300,00 mg, 1,49 mmol) y trifenilfosfina (512,54, 1,95 mmol) se disolvieron en THF anhidro y se añadieron a una mezcla de ácido para-nitrobenzoico (249,00 mg, 1,49 mmol) y DEAD (268,00 mg, 1,54 mmol, 0,24 ml) en THF anhidro a 0ºC en atmósfera de argón. La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC. Después de 1 h la TLC indicaba que no quedaba material de partida y la mezcla se vertió en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 2:1). Rendimiento 391,54 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,39 (d, J = 9 Hz, 3H), 1,49 (s, 9H), 1,99 (d, J = 15 Hz, 1H), 2,24-2,33 (m, 1H), 3,62-3,71 (m, 1H), 3,82 (dd, J = 7, 12 Hz, 1H), 4,13 (s ancho, 1H), 5,52-5,56 (m, 1H), 8,20-8,35 (m, (A_{2}B_{2}), 4H).

Éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico

85

El éster de t-butilo del ácido 4-hidroxi-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico (391,54 mg, 1,12 mmol) se disolvió en una mezcla de THF-agua 4:1 y se añadió LiOH (5,59 mmol). La mezcla se agitó durante 12 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en una disolución de HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 2:1). Rendimiento 220,90 mg. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,35 (d, J = 9 Hz, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,67 (dt, J = 2,15 Hz, 1H), 3,38 (s ancho, 1H), 3,60 (dd, J = 7, 17 Hz, 1H), 3,84-3,97 (m, 1H), 4,34-4,42 (m, 1H).

Éster de t-butilo del ácido 4-amino-2-metil-pirrolidina-1-carboxílico

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86

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El isómero R se preparó por los procedimientos experimentales anteriores. Rendimiento 163,99 mg.

Éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-hidroxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico

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87

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El éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-benciloxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (500 mg, 1,49 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (200 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó 2 veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 350,98 mg. C_{11}H_{19}NO_{5} EM m/e = 246,2 (M+H).

Éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico

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88

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El éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-hidroxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (350,98 mg, 1,43 mmol) se disolvió en DCM anhidro y se añadió trietilamina (434,11 mg, 4,29 mmol, 0,6 ml) en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadió cloruro de metanosulfonilo (180,19 mg, 1,57 mmol, 0,12 ml) con una jeringa. La reacción se agitó a 0ºC durante 30 min y después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en una disolución HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y después se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 2:1). Rendimiento 406,92 mg. C_{12}H_{21}NO_{7}S EM m/e = 323,1 (M+H).

Éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-azido-pirrolidina-1,2-dicarboxílico

89

El éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-metanosulfoniloxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (406,92 mg, 1,26 mmol) se recogió en DMF seca en atmósfera de argón y se añadió azida sódica (409,50 mg, 6,30 mmol). Después la reacción se calentó a 60ºC durante 48 h. La reacción se vertió en agua y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, y se secaron sobre MgSO_{4}. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 303,10 mg. C_{11}H_{18}N_{4}O_{4} EM m/e = 271,2 (M+H).

Éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-amino-pirrolidina-1,2-dicarboxílico

90

El éster de 1-t-butilo y 2-metilo del ácido 4-azido-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (303,10 mg, 1,12 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar. La disolución se lavó por barrido con argón y se añadió Pd/C (400,00 mg) al recipiente. La atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. La atmósfera de hidrógeno se sustituyó por argón y la disolución se filtró a través de un lecho corto de Celita. El lecho se lavó 2 veces con acetato de etilo. El disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 262,66 mg. C_{11}H_{20}N_{2}O_{4} EM m/e = 244,2 (M^{+}).

Éster de t-butilo del ácido (3R)-3-aminopirrolidina-1-carboxílico

91

A una disolución de (3R)-(+)-3-aminopirrolidina (5,0 G, 58,0 mmol) en DCM (100 ml), se añadió imina de la benzofenona (10,52 g, 58,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 18 h. La imina se obtuvo por separación del disolvente a presión reducida.

Se añadieron DCM (120 ml) y DIEA (20,0 ml, 115,1 mmol) a la imina, y después se añadió dicarbonato de di-t-butilo (14,0 g, 63,8 mmol) en porciones a la disolución. La reacción se agitó durante 4 h a temperatura ambiente. La mezcla se vertió en salmuera y se extrajo con DCM (3 x 40 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y después se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice (primero con acetato de etilo-hexano al 10% y después acetato de etilo-hexano al 20% como eluyente). La Boc-amina se obtuvo en forma de un sólido blanco. (12,89 g, 63%). EM (m/z) calculado para C_{22}H_{26}N_{2}O_{2} (MH^{+}), 351; encontrado, 351.

A la disolución en metanol (100 ml) de la Boc-amina a 0ºC, se añadió HCl 0,4 M (110,0 ml, 44,2 mmol), y la disolución resultante se agitó durante 2 h a 0ºC. La mezcla se vertió en agua y se lavó con DCM (3 x 40 ml). Se añadió NaOH 6 N para ajustar la fase acuosa a pH 10, y el producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 40 ml). La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y la posterior concentración dio el producto, el éster de t-butilo del ácido (3R)-3-aminopirrolidina-1-carboxílico en forma de un sólido blanco (6,0 g, 88%). EM (m/z) calculado para C_{9}H_{18}N_{2}O_{2} (MH^{+}), 187; encontrado, 187.

(2,2-Dimetil-propil)-etil-amina

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92

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Una disolución de neopentilamina (2,0 g, 23,0 mmol), cloruro de acetilo (1,96 ml, 27,6 mmol), trietilamina (3,84 ml, 27,5 mmol), y DCM (100 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM (3 x 40 ml). La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y el disolvente se separó dando la N-neopentilacetamida en forma de un sólido blanco (2,90 g, 98%). El análisis de RMN confirmó la estructura de la N-neopentilaceta-
mida.

A una disolución en THF (100 ml) de N-neopentilacetamida (2,90 g, 22,5 mmol), se añadió gota a gota LiAIH_{4} 1 M (28 ml, 28,0 mmol) en THF a temperatura ambiente, y la reacción se agitó durante 18 h a 70ºC. Después de enfriar, se añadió gota a gota NaOH 1 N (28,0 ml) a la disolución. La mezcla se agitó durante 15 min, y la suspensión blanca se filtró a través de Celita. Se añadió HCl 1 M en dioxano (10 ml) a la disolución, y la mezcla se agitó durante 15 min. El disolvente se separó dando la (2-dimetil-propil)-etil-amina en forma de sal de HCl (3,10 g, 89%). EM (m/z) calculado para C_{7}H_{17}N (MH^{+}), 116; encontrado, 231 (dímero).

Metil-(1-metil-ciclopentilmetil)-amina

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93

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A una disolución en THF (5 ml) de ciclopentanocarbonitrilo (4,39 ml, 42,0 mmol), se añadió gota a gota NaHMDS 2 M (25,0 ml, 50,0 mmol) en THF en atmósfera de argón a 0ºC. La reacción se agitó durante 15 min y después se añadió gota a gota yoduro de metilo (3,14 ml, 50,4 mmol) a la disolución a 0ºC. La reacción se agitó durante 2 h a 0ºC, y se añadió BH_{3} 1 M (126 ml, 126 mmol) en THF a la mezcla, a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 3 h, y se añadió gota a gota HCl 6 N a la mezcla a 0ºC hasta que el pH alcanzó 2. La mezcla se agitó durante 15 min. La mezcla se vertió en agua y se lavó con DCM (3 x 40 ml). Se añadió NaOH a la fase acuosa para ajustar el pH a 11. La (1-metildiciclopentilmetil)-amina se extrajo con acetato de etilo (3 x 40 ml). La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}. Se separó el disolvente dando la (1-metil-ciclopentilmetil)-amina en forma de un aceite amarillo (2,0 g, 44%). EM (m/z) calculado para C_{7}H_{15}N (MH^{+}), 114; encontrado, 227 (dímero), 340 (trímero).

Una disolución de (1-metil-ciclopentilmetil)-amina (1,5 g, 13,3 mmol), cloroformiato de etilo (1,52 ml, 16 mmol), y N,N-DIEA (2,79 ml, 16,0 mmol) en DCM (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con DCM (3 x 40 ml). La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y el disolvente se separó dando el éster de etilo del ácido (1-metil-ciclopentilmetil)-carbámico en forma de un aceite incoloro (1,62 g, 66%). EM (m/z) calculado para C_{10}H_{19}NO_{2} (MH^{+}), 186; encontrado 186.

A una disolución de THF (15 ml) de éster de etilo del ácido (1-metil-ciclopentilmetil)-carbámico (0,84 g, 4,54 mmol), se añadió gota a gota LiAlH_{4} 1 M (5,45 ml, 5,45 mmol) en THF a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 18 h a 70ºC. Después de enfriar, se añadió gota a gota NaOH 1 N (5,45 ml) a la disolución. La mezcla se agitó durante 15 min. La suspensión blanca se filtró a través de Celita. Se añadió HCl 1 M en dioxano (3 ml) a la disolución. La mezcla se agitó durante 15 min. El disolvente se separó dando la metil-(1-metil-ciclopentilmetil)-amina en forma de sal de HCl (380 mg, 51%). EM (m/z) calculado para C_{8}H_{17}N (MH^{+}), 128; encontrado, 128; encontrado 128, 255 (dímero).

3-Amino-N-etil-4-metil-benzamida

94

Se disolvió cloruro de 4-metil-3-nitro-benzoilo (1,0 g, 5,0 mmol) en DCM, y la disolución se enfrió a 0ºC. Se añadió gota a gota etilamina (2,0 M en THF, 5,0 ml, 10 mmol) al cloruro de ácido, y la reacción se agitó a 0ºC durante 5 min. Se quitó el baño de hielo y la reacción se continuó agitando durante 3. La disolución se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío. La anilina resultante (0,75 g) se usó sin purificación adicional.

Acoplamiento de cloruro cianúrico con aminobenzamida 1. 3-Cloro-5-(4,6-dicloro-[1,3,5]triazin-2-ilamino)-4-metil-benzamida

95

Se añadió cloruro cianúrico (65,0 mg, 0,35 mmol) a una disolución en acetona (5 ml) de 3-amino-5-cloro-4-metilbenzamida (65,0 mg, 0,35 mmol) a 0ºC. La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC. Se añadió hielo a la mezcla y la posterior filtración dio la 3-cloro-5-(4,6-dicloro-[1,3,5]triazin-2-ilamino)-4-metil-benzamida (101,0 mg, 87%) en forma de un sólido blanco. EM (m/z) calculado para C_{11}H_{8}N_{5}O (MH^{+}), 331: encontrado, 331.

2. 3-(4,6-Dicloro-[1,3,5],triazin-2-ilamino)-4-metil-N-fenetil-benzamida

96

Se añadió cloruro cianúrico (0,74 g, 4,02 ml) a una disolución en acetona (15 ml) de 3-amino-4-metil-N-fenetil-
benzamida (1,02 g, 4,02 mmol) a 0ºC. La mezcla se agitó durante 1 h a 0ºC. Se añadió hielo a la mezcla y se agitó durante 15 min. Se separó el disolvente dando la 3-(4,6-dicloro-[1,3,5]triazin-2-ilamino)-4-metil-N-fenetil-benzamida (1,52 g, 94%) en forma de un sólido blanco EM (m/z) calculado para C_{19}H_{17}Cl_{2}N_{5}O (MH^{+}), 402; encontrado, 402.

N,N-Dietil-4-metil-benzamida

97

Se disolvieron dimetilamina (13,00 g, 177,87 mmol, 18,40 ml) y piridina (38,37 g, 485,10 mmol, 39,23 ml) en 500 ml de DCM anhidro en atmósfera de argón y se enfriaron a 0ºC. Se añadió lentamente cloruro de p-tolilo (25,00 g, 161,70 mmol) disuelto en 75 ml de DCM anhidro, a la disolución. Tras completarse la adición, la disolución se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción se vertió en HCl 1 N y se extrajo la capa acuosa 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 4:1). Rendimiento 25,36 g.

N,N-Dietil-2-formil-4-metil-benzamida

98

Se disolvió tetrametiletilenamina (6,20 g, 5336 mmol, 8,05 ml) en THF anhidro (100 ml) en atmósfera de argón y se enfrió a -78ºC. Se añadió lentamente s-butil-litio (1,30 M, 53,36 mmol, 41,04 ml) a la disolución con jeringa. La disolución se agitó durante 10 min a -78ºC, y después se añadió N,N-dietil-4-metil-benzamida (9,28 g, 48,51 mmol) disuelta en 50 ml de THF anhidro a la mezcla de reacción a lo largo de 15 min. La reacción se agitó durante 1 h a -78ºC, se añadió rápidamente DMF (7,09 g, 97,02 mol, 7,51 ml) a la disolución. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción se vertió en HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 7,98 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 1,08 (t, 3H), 1,32 (t, 3H), 2,46 (s, 3H), 3,13 (q, 2H), 3,42 (a, 2H), 7,28 (d, J = 8, 1H), 7,45 (d, J = 7, 1H), 7,77 (s, 1H), 10,01 (s, 1H).

3-Hidroxi-5-metil-3H-isobenzofuran-1-ona

99

La N,N-dietil-2-formil-4-metil-benzamida (7,98 g, 36,39 mmol) se recogió en 100 ml de HCl 6 N y se calentó a reflujo durante 48 h. Después, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con 50 ml de agua. La capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 4,66 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,47 (s, 3H), 6,05 (s ancho, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,33 (d, J = 9, 1H), 7,95 (d, J = 9, 1H).

8-Metil-3-fenil-2,3-dihidro-9bH-oxazolo[2,3-a]isoindol-5-ona

100

La 3-hidroxi-5-metil-3H-isobenzofuran-1-ona (4,66 g, 28,39 mmol) y H-fenilglicinol (3,89 g, 28,39 mmol) se recogieron en tolueno seco y se calentaron a reflujo en atmósfera de argón durante 12 h. El agua generada se recogió en una trampa de Dean-Stark. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 4:1). Rendimiento 5,20 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,49 (s, 3H), 4,16 (dd, J = 7, 9 Hz, 1H), 4,83 (dd, J = 8, 9 Hz, 1H), 5,21 (t, J = 7, 1H), 6,01 (s, 1H), 7,31-7,45 (m, 1H), 7,73 (d, J = 8 Hz, 1H).

2-(2-Hidroxi-1-fenil-etil)-5-metil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

101

La 8-metil-3-fenil-2,3-dihidro-9bH-oxazolo[2,3-a]isoindol-5-ona (5,20 g, 19,60 mmol) se recogió en DCM anhidro (100 ml) en atmósfera de argón y se enfrió a -78ºC. Se añadió trietilsilano (9,12 g, 78,40 mmol, 12,52 ml) con una jeringa seguido de tetracloruro de titanio en DCM (1,0 M, 58,80 mmol, 58,80 ml). La disolución se agitó a -78ºC durante 5 h y después se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La reacción se vertió lentamente en hielo y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 1:1). Rendimiento 4,72 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,40 (s, 3H), 4,12-4,42 (m, 5H), 5,31 (dd, J = 4, 8 Hz, 1H), 7,10-7,39 (m, 7H), 7,67 (d, J = 8, 1H).

Éster de 2-(5-metil-1-oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-2-fenil-etilo del ácido metanosulfónico

102

La 2-(2-hidroxi-1-fenil-etil)-5-metil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (4,72 g, 17,66 mmol) y trietilamina (5,36 g, 53,97 mmol, 7,38 ml) se recogieron en DCM anhidro (50 ml), en atmósfera de argón y se enfriaron a 0ºC. Se añadió cloruro de metanosulfonilo (2,22 g, 19,43 mmol, 1,5 ml) a la reacción a lo largo de 10 min. La reacción se agitó durante 1 h a 0ºC y después se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 4 h. La reacción se vertió lentamente en disolución saturada de bicarbonato sódico y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl 1 N, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Rendimiento 5,61 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,44 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 4,15 (d, J = 16 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 17 Hz, 1H), 4,77 (dd, J = 5, 11 Hz, 1H), 5,03 (dd, J = 9, 11 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 5, 9 Hz, 1H), 7,20-7,38 (, 7H), 7,76 (d, J = 8, 1H).

5-Metil-2-(fenil-alil)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

103

En atmósfera de argón se añadió lentamente sodio metal (0,58 g, 24,37 mmol) en etanol anhidro. Después de que todo el sodio hubiera reaccionado, se añadió el éster de 2-(5-metil-1-oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-2-fenil-etilo del ácido metanosulfónico (5,61 g, 16,25 mmol) disuelto en etanol a la mezcla de reacción y la disolución se agitó durante 6 h a temperatura ambiente. La reacción se vertió en agua y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Rendimiento 3,64 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,45 (s, 3H), 4,49 (s, 2H), 5,50 (s, 1H), 5,54 (s, 1H), 7,22-7,36 (m, 7H), 7,80 (d, J = 8 Hz, 1H).

5-Metil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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104

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La 5-metil-2-(fenil-alil)-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (3,64 g, 14,61 mmol) se recogió en una mezcla de etanol-HCl 3 M 50/50 (100 ml) y se calentó a 80ºC durante 12 h. La mezcla de reacción se enfrió y el etanol se separó a presión reducida. La capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 1:1). Rendimiento 1,40 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,51 (s, 3H), 4,48 (s, 2H), 7,27-7,36 (m, 2H), 7,75 (d, J = 8 Hz, 1H).

5-Metil-4-nitro-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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105

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5-Metil-6-nitro-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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106

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La 5-metil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (1,00 g, 6,79 mmol) se recogió en ácido sulfúrico y se enfrió a 0ºC. Se añadió 1 equivalente de ácido nítrico a la disolución y la mezcla se dejó que se calentara lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción se vertió en agua helada y la capa acuosa se extrajo 4 veces con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. Se aislaron 2 productos por cromatografía ultrarrápida (metanol-acetato de etilo al 10%). Rendimiento 813,40 mg del 4-nitro y 100 mg del 6-nitro. RMN ^{1}H (300 MHz, d_{6}-DMSO): 4-nitro \delta 7,76 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,98 (s ancho, 1H); 6-nitro \delta 7,69 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 9 Hz), 8,91 (s ancho, 1H).

6-Amino-5-metil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

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107

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La 5-metil-6-nitro-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (100,00 mg, 0,52 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar y se lavó por barrido con argón. Se añadió paladio sobre carbón (25 mg) y la atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. Después el hidrógeno se sustituyó por argón y el catalizador se separó por filtración a través de Celita. El disolvente se separó a presión reducida dando 65,8 mg de la amina deseada. C_{9}H_{10}N_{2}O EM m/e = 163,2 (M+H).

4-Amino-5-metil-2,3-dihidro-isoindol-1-ona

108

La 5-metil-4-nitro-2,3-dihidro-isoindol-1-ona (800,00 mg, 4,16 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar y se lavó por barrido con argón. Se añadió paladio sobre carbón (100 mg) y la atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. Después el hidrógeno se sustituyó por argón y el catalizador se separó por filtración a través de Celita. El disolvente se separó a presión reducida dando 539,8 mg de la amina deseada. C_{9}H_{10}N_{2}O EM m/e = 163,2 (M+H).

2,2,2-Trifluoro-N-(2-metil-5-nitro-fenil)-acetamida

109

La 2-metil-5-nitro-fenilamina (3,00 g, 1972 mmol) se recogió en DCM seco, en atmósfera de argón, y se añadieron trietilamina (3,99 g, 39,44 mmol, 5,50 ml) y DMAP (0,24 g, 1,97 mmol). La reacción se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente anhídrido trifluoroacético (6,21 g, 29,58 mmol, 4,18 ml) con jeringa. La reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción se vertió en HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 3,91 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,43 (s, 3H), 7,45 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H).

N-(5-Amino-2-metil-fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida

110

La 2,2,2-trifluoro-N-(2-metil-5-nitro-fenil)acetamida (3,91 g, 15,78 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar y se lavó por barrido con argón. Se añadió paladio sobre carbón (400 mg) y la atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. Después el hidrógeno se sustituyó por argón y el catalizador se separó por filtración a través de Celita. El disolvente se separó a presión reducida dando 3,27 g de la amina deseada. C_{9}H_{9}F_{3}N_{2}O EM m/e = 219,1 (M+H).

N-(5-Acetilamino-2-metil-fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida

111

La N-(5-amino-2-metil-fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida (3,27 gm 14,99 mmol) se recogió en DCM anhidro (75 ml) y se enfrió a 0ºC. Se añadió piridina (3,56 g, 44,97 mmol, 3,64 ml) seguido de la adición lenta de cloruro de acetilo (1,18 g, 14,99 mol, 1,07 ml). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se vertió en HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución saturada de bicarbonato sódico, agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 3:1). Rendimiento 2,93 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,13 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 7,25 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H).

N-(3-Amino-4-metil-fenil)acetamida

112

La N-(5-acetilamino-2-metil-fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida (2,93 g, 11,24 mmol) se recogió en metanol (50 ml) y se añadió carbonato sódico (5,96 g, 56,20 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se vertió en agua y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se usó sin más purificación. Rendimiento 1,60 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,16 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 7,18 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H).

Éster de 4-metil-3-nitro-bencilo del ácido metanosulfónico

113

El (4-metil-3-nitro-fenil)metanol (3,00 g, 17,95 mmol) se recogió en DCM anhidro, en atmósfera de argón, y se añadió trietilamina (5,45 g, 53,85 mmol, 7,51 ml). La disolución se enfrió a 0ºC y se añadió lentamente cloruro de metanosulfonilo (2,26 g, 19,74 mmol, 1,53 ml) con jeringa. La reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción se vertió en HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 5:1). Rendimiento 2,00 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,62 (s, 3H), 4,61 (s, 2H), 7,36 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H).

2-(Metil-3-nitro-bencil)isoindol-1,3-diona

114

Se añadió el éster de 4-metil-3-nitro-bencilo del ácido metanosulfónico (0,45 g, 1,83 mmol) en DMF anhidra (20 ml), en atmósfera de argón, y se añadió ftalimida potásica (0,34 g, 1,83 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 60ºC durante 12 h. La mezcla de reacción se enfrió y se vertió en HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, y se secaron sobre sulfato magnésico anhidro. La disolución se filtró y el disolvente se separó a presión reducida. El producto se aisló por cromatografía ultrarrápida (hexano-acetato de etilo 4:1). Rendimiento 0,45 g. RMN ^{1}H (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta 2,58 (s, 3H), 4,88 (s, 2H), 7,30 (d, J = 7 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 7 Hz, 1H), 7,24-7,77 (m, 2H), 7,84-7,89 (m, 2H), 8,02 (s, 1H).

2-(3-Amino-4-metil-bencil)isoindol-1,3-diona

115

La 2-(metil-3-nitro-bencil)isoindol-1,3-diona (0,45 g, 1,52 mmol) se recogió en acetato de etilo en un recipiente Paar y se lavó por barrido con argón. Se añadió paladio sobre carbón (100 mg) y la atmósfera de argón se sustituyó por hidrógeno a 3,5 kg/cm^{2}. El recipiente se agitó durante 12 h. Después el hidrógeno se sustituyó por argón y el catalizador se separó por filtración a través de Celita. El disolvente se separó a presión reducida dando 0,40 g de la amina deseada. C_{16}H_{14}N_{2}O_{2} EM m/e = 267,3 (M+H).

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Procedimiento general para la síntesis de N-alquil-3-(4,6-dicloro[1,3,5]triazin-2-ilamino)-4-metil-benzamidas

116

Se disolvió cloruro de 4-metil-3-nitro-benzoilo (1 equivalente molar) en CH_{2}Cl_{2} y la disolución se enfrió a 0ºC. Se añadió gota a gota la amina adecuada (2 equiv. molares) al cloruro de ácido y la reacción se agitó a 0ºC durante 5 min. Se quitó el baño de hielo y la reacción se continuó agitando durante 3 h. La disolución se lavó con salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío. La amida resultante se purificó por cromatografía en gel de sílice.

Después, la amida se disolvió en EtOAc, y se añadió una cantidad catalítica de Pd/C. La disolución se presurizó a 3,5 kg/cm^{2} de H_{2} durante 15 h. La disolución se filtró a través de Celita y se concentró a vacío. La anilina se usó sin más purificación.

Se añadió gota a gota una disolución de anilina (1 equivalente molar) en acetona a una disolución a 0ºC de cloruro cianúrico (1 equivalente molar). Se quitó el baño de hielo y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La acetona se separó a vacío. El sólido resultante se lavó con hexano y después se secó con alto vacío.

Carbamatos

117

A la disolución de 4-metil-3-nitroanilina (0,75 g, 5,0 mmol) en DCM (10 ml) enfriada en un baño de hielo, se añadió cloroformiato de metilo (1,01 equiv.) y base de Hunig (1,1 equiv.). La disolución se agitó a 0ºC durante 0,5 h. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y se lavó con disolución acuosa de cloruro amónico 2 veces, y salmuera 2 veces. La capa orgánica se secó con sulfato sódico anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto después se disolvió en acetato de etilo (20 ml) y a la disolución se añadió paladio sobre carbón al 10% en polvo. La mezcla de reacción se puso en un aparato de hidrogenación. La hidrogenolisis se desarrolló a temperatura ambiente durante 0,5 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró a vacío. La purificación del producto bruto con cromatografía ultrarrápida dio 0,75 g de 3-amino-4-metilfenilamino-carbamato de metilo (rendimiento 85%).

En un matraz de fondo redondo de 50 ml se añadió el 3-amino-4-metilfenilamino-carbamato de metilo (0,75 g) y acetona (10 ml). La disolución se enfrió con un baño de hielo y se añadió triclorotriazina (1,0 equiv.). La mezcla se agitó a 0ºC durante 5 min antes de la adición de disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml). Se continuó agitando a 0ºC durante 15 min, la mezcla se filtró y se lavó con etanol frío. El sólido se secó y se disolvió en DMF anhidra (10 ml). A la disolución enfriada en un baño de hielo, se añadió hidrocloruro de N-metilneopentilamina (1,0 equiv.) y base de Hunig (1,2 equiv.). La disolución se agitó a 0ºC durante 0,5 h antes de añadir acetato de etilo y disolución acuosa de cloruro amónico. La capa orgánica se separó y se lavó con disolución acuosa de amonio y salmuera 2 veces, se secó con sulfato sódico anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida.

El producto obtenido antes (80 mg) se disolvió en DMSO (1 ml). Se añadió a la disolución 1-Boc-(3R)-aminopirrolidina (1,5 equiv.) y base de Hunig (2 equiv.). La mezcla se calentó a 80ºC durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo y disolución acuosa de cloruro amónico. La capa orgánica se separó y se lavó con disolución acuosa de amonio y salmuera 2 veces, se secó con sulfato sódico anhidro y se concentró a vacío. El producto bruto después se disolvió en una disolución de ácido trifluoroacético al 50% en DCM y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El disolvente se separó a vacío. El producto se purificó por HPLC y se obtuvieron 50,1 mg del compuesto final.

Preparaciones en fase sólida de los compuestos de fórmula I

Los compuestos de fórmula I también se pueden preparar en fase sólida. Típicamente, una resina funcionalizada con amino, tal como perlas de poliestireno injertadas con PEG (p. ej., ArgoGel^{TM}), se puede modificar por reacción con bis-Fmoc-lisina para aumentar los sitios de reacción disponibles para la unión del ligando. Después de desprotección, se puede unir un conector aldehído por los sitios de amina libres. La aminación reductora con una amina primaria da una amina secundaria unida a la resina. Las siguientes descripciones ilustran los procedimientos de preparación de compuestos de fórmula I en fase sólida.

Preparación 1

118

La resina ArgoGel (3,0 g) con conector escindible con ácido en un recipiente de agitación, se lavó 2 veces con 1,2-dicloroetano. Después de drenaje, se añadieron 120 ml de 1,2-dicloroetanol, seguido de la adición de ciclopentilamina (20 equivalentes). El pH de la mezcla de reacción se ajustó a 5 por adición de ácido acético. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 min, y se añadió triacetoxiborohidruro sódico (20 equivalentes). Tras completarse la adición, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La resina después se filtró y se lavó con metanol y DCM (5 ciclos).

119

La resina ArgoGel obtenida antes se lavó con DMF 2 veces. Después de drenaje, se añadieron 50 ml de DMF anhidra y base de Hunig (10 equivalentes), seguido de la adición de 2-(5-aminocarbonil-2-metil)fenilamino-4,6-diclorotriazina (3,0 equivalentes). La reacción se dejó avanzar a temperatura ambiente durante 4 h. Después, la resina se filtró y se lavó con metanol y DCM (5 ciclos), y se secó a vacío.

120

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La resina ArgoGel (50 mg) obtenida antes se puso en un pequeño vial de reacción. Al vial se añadieron n-BUOH anhidro (1,0 ml) y 1-N-Boc-(3R)-aminopirrolidina (0,5 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 70ºC durante 16 h. Después, la resina se filtró y se lavó con metanol y DCM (5 ciclos) y se trató con disolución al 50% de ácido trifluoroacético en DCM. El producto se recogió por filtración y se purificó por HPLC.

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Procedimiento 2

Este procedimiento permite la N-derivatización de los soportes sólidos

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121

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La resina TentaGel^{TM} (3,5 g) unida con el conector escindible con ácido se lavó con 1,2-dicloroetano 2 veces (agitando 5 min cada vez). Después de drenar, se añadió a la resina 1,2-dicloroetano (30 ml). Se añadió (3R)-amino-1-pirrolidina-carbamato de alilo (1,00 g) y el pH de la disolución se ajustó a 5 por adición de ácido acético. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 min, antes de añadir triacetoxiborohidruro sódico (10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La resina se filtró y se lavó con metanol, DCM y THF. Después se secó a vacío.

Se lavaron 0,9 g de la resina obtenida antes con DMF 2 veces y se suspendió en DMF (8 ml). A la suspensión de la resina se añadió base de Hunig (5,0 equiv.) y después el derivado de diclorotriazina (3,0 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La resina se filtró y se lavó con DMF, metanol, DCM y después se suspendió en DMSO (6 ml). A la suspensión se añadió 1-isobutil-1-metilamina (10 equiv.). La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante la noche. La resina se filtró y se lavó con metanol, DCM y THF. Después se secó a vacío.

Se suspendieron 50 mg de la resina obtenida antes en THF (3 ml). Se añadieron tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,15 g) y 5,5-dimetil-1,3-ciclohexanodiona (10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La resina se lavó con disolución de dietilditiocarbamato de sodio al 0,5% en DMF, y después disolución en DMF de base de Hunig al 0,5%, antes de lavarla con metanol, DCM.

La resina se lavó con 1,2-dicloroetano 2 veces y se suspendió en 1,2-dicloroetano (3 ml). Se añadieron acetona (0,1 ml) y triacetoxiborohidruro sódico (10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La resina se filtró y se lavó con metanol, DCM, y se escindió con TFA/DCM (1:1). La escisión produjo el producto final bruto con un rendimiento total del 80%.

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Procedimiento 3 Unión del conector escindible con ácido a la resina

122

Se acopló Bis-Fmoc-lisina a la resina TentaGel^{TM} funcionalizada con amino por formación de enlace amida. El acoplamiento se realizó haciendo reaccionar una suspensión de la resina (40 g, 11,2 mmol) en 100 ml de DMF con bis-Fmoc-lisina (20 g, 33,8 mmol), HOBt (5,2 g, 33,9 mmol) y DIC (10,6 ml, 67,6 mmol). La suspensión se agitó durante la noche, después se extrajo y se lavó sucesivamente con MeOH, DMF y DCM, y después se secó a vacío.

Se agitó una suspensión de resina en piperidina:DMF 1:3 (50 ml) aproximadamente 2 h, después se lavó con MeOH, DMF y DCM. Esta resina-diamina (40 g, 20 mmol) se suspendió en 160 ml de DMF, y se trató con MPB (9,6 g, 40,3 mmol) y HOBt (6,2 g, 40,5 mmol). Se añadió DIC (12 ml, 76,6 mmol) después de 30 min. La suspensión se agitó durante la noche, después se extrajo y la resina se lavó con MeOH, DMF y DCM. La resina-MPB se secó a vacío.

Unión del éster de t-butilo del ácido (3R)-3-amino-pirrolidina-1-carboxílico a la resina

123

Se añadió amino-pirrolidina (0,5 mg, 2,68 mmol) a una suspensión de la resina (5 g, 2,5 mmol) en 45 ml de DCE y la mezcla se agitó durante 30 min. Después, se añadió triacetoxiborohidruro sódico (0,8 g, 3,7 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 18 h y la suspensión se extrajo. La resina se lavó con MeOH, DMF y DCM, y se secó durante la noche a vacío.

Acoplamiento de la amino-pirrolidina unida a resina con la 3-(4,6-dicloro-[1,3,5]triazin-2-ilamino)-4-metil-benzamida

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124

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Una suspensión de la resina (2,7 g, 1,35 mmol), DIEA (0,5 ml) y 3-(4,6-dicloro[1,3,5]triazin-2-ilamino)-4-metil-benzamida (0,5 g, 1,67 mol) en 10 ml de THF seco, se agitó durante 16 h a 70ºC. La suspensión se extrajo, la resina se lavó con MeOH, DMF y DCM y se secó a vacío.

3-[4-(i-Butil-metil-amino)-6-(3R)-(pirrolidin-3-ilamino)-[1,3,5]triazin-2-ilamino]-4-metil-benzamida

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125

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Una suspensión de la resina (0,1 g, 0,05 mmol) y N-metilisobutilamina (0,1 ml, 0,8 mmol) en 1 ml de THF seco se agitó durante 3 h a 80ºC. La suspensión se extrajo, la resina se lavó con MeOH, DMF y DCM. Con el fin de escindir el producto de la resina, la resina se trató con 1 ml de TFA durante 1 h con agitación. Después de filtrar y concentrar la disolución, el producto se purificó por HPLC preparativa en forma de la sal de TFA (4,2 mg, 21%), C_{20}H_{30}N_{8}O, EM m/z 399 (M+H)^{+}.

3-[4-(6,6-Dimetil-biciclo[3,1,1]hept-2-ilmetoxi)-6-(pirrolidin-3-ilamino)-[1,3,5]triazin-2-ilamino]-4-metil-benzamida

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126

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A una suspensión de la resina (0,1 g, 0,05 mmol), DIEA (0,1 ml) y (1S,2S,5S)-(-)-mirtanol (0,08 ml, 0,5 mmol) en 1 ml de THF seco, se añadió NaH (al 60% en aceite, 0,04 g, 1 mmol), y la suspensión resultante se agitó durante 16 h a 75ºC. La suspensión se extrajo, la resina se lavó con MeOH, DMF y DCM. Con el fin de escindir el producto de la resina, la resina se trató con 1 ml de TFA durante 1 h con agitación. Después de filtrar y concentrar la disolución, el producto se purificó por HPLC preparativa en forma de una sal de TFA (1,2 mg, 5,2%), C_{25}H_{35}N_{7}O_{2}, EM m/z 466 (M+H)^{+}.

3-[4-(3-Cloro-fenil)-6-(pirrolidin-3-ilamino)-[1,3,5]triazin-2-ilamino]-4-metilbenzamida

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Una suspensión de la resina (0,1 g, 0,05 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)-paladio(0) (0,015 g, 0,012 mmol), y yoduro de 3-cloro-fenilzinc (0,5 M en THF, 1,5 ml, 0,75 mmol) se agitó durante 16 h a 80ºC. La suspensión se extrajo, la resina se lavó con agua, THF, MeOH, DMF y DCM. Con el fin de escindir el producto de la resina, la resina se trató con 1 ml de TFA durante 2 h con agitación. Después de filtrar y concentrar la disolución, el producto se purificó por HPLC preparativa en forma de una sal de TFA (1,9 mg, 9%), C_{21}H_{22}ClN_{7}O, EM m/z 424 (M+H)^{+}.

3-[4-Isobutilsulfonil-6-(pirrolidin-3-ilamino)-[1,3,5]triazin-2-ilamino]-4-metil-benzamida

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A una suspensión en agitación de NaH (al 60% en aceite, 0,06 g, 1,5 mmol) en 2 ml de THF seco, se añadió gota a gota i-butiltiol (0,07 ml, 0,6 mmol) a temperatura ambiente. Tras cesar el desprendimiento de hidrógeno gaseoso, la mezcla se añadió a la resina (0,1 g, 0,05 mmol), y la suspensión resultante se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y 16 h a 80ºC. La suspensión se extrajo, la resina se lavó con MeOH, DMF y DCM. Con el fin de escindir el producto de la resina, la resina se trató con 1 ml de TFA durante 1 h con agitación. Después de filtrar y concentrar la disolución, el producto se purificó por HPLC preparativa en forma de una sal de TFA (3,5 mg, 5,2%), C_{19}H_{27}N_{7}OS. EM m/z 402 (M+H)^{+}.

Procedimientos generales para la síntesis de 3-(4,6-bis-alquilamino-pirimidin-2-ilamino)-4-metil-benzamidas

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129

3-{4-Ciclopentilamino-6-[(2,2-dimetil-propil)-metil-amino]-pirimidin-2-ilamino}-4-metil-benzamida

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130

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Se añadió 3-amino-4-metil-benzamida (1 equivalente molar) a una disolución a temperatura ambiente de trifluoropirimidina (1 equivalente molar) y DIEPA (1,5 equivalentes molares), en THF. La reacción se agitó durante 24 h, y después se concentró a vacío. La mezcla resultante de productos de 2- y 4-pirimidina se separó por cromatografía en gel de sílice.

La pirimidina sustituida (34 mg, 0,12 mmol), la amina unida a la resina (140 mg, 0,07 mmol) y DIPEA (50 \mul, 0,28 mmol) en DMSO (1 ml) se calentaron a 120ºC durante 24 h. La resina se lavó con DMF (3x) y DCM (3x).

La resina resultante se hizo reaccionar con la amina (120 mg 1,1 mmol) en DMSO (0,5 ml) a 80ºC durante 18 h. La resina se lavó con DMF (3x), MeOH (3x), DCM (3x), y después se trató con TFA para liberar el producto. El producto bruto se purificó por HPLC preparativa. EM (m/z) calculado para C_{23}H_{35}N_{6}O (MH^{+}), 411; encontrado, 411.

N-(3-{4-Ciclopentilamino-6-[(2,2-dimetil-propil)-metil-amino]-pirimidin-2-ilamino}-4-metil-bencil)-acetamida

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La resina unida a ftalimida se preparó usando procedimientos estándar. Una suspensión de resina (200 mg) en hidrazina/etanol 2 M (20 ml) se agitó durante 4 h a temperatura ambiente. La resina se lavó con MeOH (3x), DMF (3x), DCM (3x) y después se secó con alto vacío.

Se añadió anhídrido acético (40 \mul, 0,42 mmol) a un vial que contenía la resina (80 mg, 0,04 mmol), DMAP (cat.) en piridina/DCM al 10%. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La resina se lavó con DCM (3x), MeOH (3x), DCM (3x). Tras agitar la resina en 1 ml de TFA durante 3 h, se liberó el producto. La disolución se concentró a vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa. EM (m/z) calculado para C_{25}H_{39}N_{6}O (MH+), 440; encontrado, 440.

Todos los compuestos de la tabla 1, excepto los compuestos 400-412 son compuestos de referencia.

132

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(Continuación)

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TABLA 2

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TABLA 3

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TABLA 3 (continuación)

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TABLA 4

160

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TABLA 4 (continuación)

161

Claims

1. Un compuesto de fórmula I, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables

162

en la que:

V es -NH- u -O-,

W, X e Y se eligen independientemente de -CH= y -N= de modo que dos o más sean -N=;

Z es -N(R^{1})(R^{2});

R^{1} se elige de hidrógeno o metilo, y

R^{2} es alquilo de 1 a 8 carbonos;

R^{6} es

163

R^{7} se elige de hidrógeno, metilo, metoxi, halógeno o ciano;

R^{11} es -N(R^{12})(R^{13}) en el que

-N(R^{12})(R^{13}) considerado junto puede formar un heterociclilo monocíclico o heterociclilo sustituido de 5 a 7 átomos que contiene 1, 2 ó 3 átomos de nitrógeno adicionales, NH-alquilo, en el que el alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono o

164

R^{15} y R^{16} son independientemente hidrógeno o metilo, de modo que los sustituyentes se pueden seleccionar de alquilo, -N(R^{31})(R^{32}), alcoxi, alquiltio, arilo, halógeno, ciano, nitro, oxo, carboxilo, hidroxilo, -SO_{2}-alquilo, -CO_{2}-alquil-C(O)-alquilo, -C(O)-N(R^{31})(R^{32}), o -NH-C(O)-alquilo, de modo que R^{31} y R^{32} se eligen independientemente de hidrógeno y alquilo.

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2. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es 1,2,4-triazol sustituido o no sustituido.

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3. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es 1,2,4-triazol sustituido o no sustituido conectado por una posición C3 o C5.

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4. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es 1,2,4-triazol sustituido o no sustituido conectado por una posición N4, N1 o N2.

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5. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es tiazol sustituido o no sustituido conectado por una posición C2.

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6. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es tiazol sustituido o no sustituido conectado por una posición C4.

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7. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es tiazol sustituido o no sustituido conectado por una posición C5.

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8. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es 1,3,4-oxadiazol sustituido o no sustituido conectado por una posición 2 ó 5.

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9. Un compuesto de la reivindicación 1, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, en el que:

R^{9} es imidazol sustituido o no sustituido conectado por una posición C2, C4, C5, N1 o N3.

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10. Un compuesto, incluyendo isómeros, enantiómeros, diastereoisómeros, tautómeros, sales y solvatos del mismo farmacéuticamente aceptables, seleccionado de:

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165

1650

166

1660

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167

1670

y

168

11. Una composición farmacéutica que comprende como un principio activo un compuesto o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11, que además comprende uno o más principios activos adicionales.

13. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12, en la que dicho principio activo adicional es un compuesto antiinflamatorio o un agente inmunosupresor.

14. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho principio activo adicional se elige de un esteroide y un AINE.

15. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la fabricación de una composición farmacéutica para inhibir la expresión de TNF-\alpha en un mamífero.

16. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la fabricación de una composición farmacéutica para tratar un trastorno mediado por TNF-\alpha.

17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el trastorno mediado por TNF-\alpha es un trastorno inflamatorio.

18. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el trastorno mediado por el TNF-\alpha se elige de resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome dispneico agudo del adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

19. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en el que dicha composición de acuerdo con la reivindicación 13 se va a administrar con uno o más agentes antiinflamatorios o inmunosupresores adicionales, como una sola forma farmacéutica o como formas farmacéuticas distintas.

20. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10 en la fabricación de una composición farmacéutica para tratar una afección asociada con la expresión de TNF-\alpha en un mamífero.

21. Uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la afección asociada con la expresión de TNF-\alpha es un trastorno inflamatorio.

22. Uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que el trastorno asociado con la expresión de TNF-\alpha se elige de resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome dispneico agudo del adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

23. Uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que dicha composición de acuerdo con la reivindicación 13 se va a administrar con uno o más agentes antiinflamatorios o inmunosupresores adicionales como una sola forma farmacéutica o como formas farmacéuticas distintas.

24. Uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10 en la fabricación de una composición farmacéutica para tratar una afección asociada con la actividad de la quinasa p38 en un mamífero.

25. Uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que la afección asociada con la actividad de la quinasa p38 es un trastorno inflamatorio.

26. Uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que la afección asociada con la actividad de la quinasa p38 se elige de resorción ósea, reacción de injerto contra huésped, aterosclerosis, artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, psoriasis, estados patológicos inflamatorios tópicos, síndrome dispneico agudo del adulto, asma, enfermedad inflamatoria pulmonar crónica, lesión por reperfusión cardiaca, lesión por reperfusión renal, trombo, glomerulonefritis, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, esclerosis múltiple, choque endotóxico, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, insuficiencia cardiaca congestiva y caquexia.

27. Uso de acuerdo con la reivindicación 24, en el que dicha composición de acuerdo con la reivindicación 11 se va a administrar con uno o más agentes antiinflamatorios o inmunosupresores adicionales como una sola forma farmacéutica o como formas farmacéuticas distintas.