ES2334747B2 - Nuevas (rs)- 7- o 9- (1,2,3,5- tetrahidro-4,1-benzocazepin-3-il)-7h o9h-purinas con actividad antitumoral. - Google Patents
Nuevas (rs)- 7- o 9- (1,2,3,5- tetrahidro-4,1-benzocazepin-3-il)-7h o9h-purinas con actividad antitumoral. Download PDFInfo
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Abstract
Nuevas (RS)-7- ó
9-(1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il)-7H
ó 9H-purinas con actividad antitumoral, que encuentran
aplicación en el tratamiento de tumores en animales y seres humanos.
Los resultados experimentales obtenidos sobre líneas celulares
tumorales y no tumorales de mama sugieren que los compuestos
seleccionados posean una actividad antitumoral específica y
selectiva.
Description
Nuevas (RS)-7- ó
9-(1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il)-7H
ó 9H-purinas con actividad antitumoral.
La presente invención se relaciona con nuevos
compuestos derivados de (RS)-7- ó
9-(1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il)-7H
ó 9H-purinas con actividad farmacológica antitumoral útiles.
La invención se relaciona asimismo con un procedimiento para su
preparación, con composiciones farmacéuticas que los comprenden,
así como con su empleo en el tratamiento del cáncer, en particular
en el tratamiento del cáncer de mama, pulmón, colorrectal, páncreas
y síndromes mieloproliferativos en humanos y animales.
El cáncer es una de las causas actuales más
frecuentes de muerte en humanos y animales. Por ello se han llevado
y se están llevando a cabo actualmente esfuerzos muy importantes,
para sintetizar y desarrollar agentes antitumorales eficaces y
seguros para el tratamiento del cáncer.
Los inventores de la presente invención han
centrado sus esfuerzos recientemente en la síntesis, estudio y
desarrollo de agentes antitumorales que no sean citotóxicos, ni
dañinos, y dirigidos a la regulación del ciclo celular. En este
sentido los inventores han sintetizado y evaluado la actividad
biológica de una serie de compuestos O,N-acetales que
incluyen un benzoxaheterociclo y diferentes bases nitrogenadas.
Así, la solicitud de patente No. P200601538 divulga compuestos
2,3-dihidro-5H-1,4-benzodiheteroepin-3-il)purinas
que presentan actividad antitumoral frente a diversas estirpes de
cánceres y baja toxicidad frente a una línea celular sana (linea
epitelial de mama normal MCF-10A). Dichos
compuestos presentan las siguientes fórmulas generales:
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En particular la P200601538 divulga compuestos
en los que en el anillo heptagonal los heteroátomos presentes son O
y X, donde X se selecciona de entre O, S y SO_{2} y sus
concentraciones inhibitorias 50 (CI_{50}) sobre la línea celular
humana derivada de cáncer de mama MCF-7.
Las actividades antitumorales de estos
compuestos son notables y comparables a los agentes activos
convencionalmente utilizados en terapia como el agente citotóxico
5-fluorouracilo (Díaz-Gavilán, M.
et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008, 18,
1457-1460).
En su esfuerzo por proporcionar agentes
antiproliferativos mejorados los inventores posteriormente han
divulgado nuevos compuestos, O,N-acetales y su síntesis en
los que X en el anillo heptagonal es un átomo de N sustituido
con un grupo nitrobencénsulfonilo (Díaz-Gavilán, M.
et al., Tetrahedron 63 2007
5274-5286).
Los resultados sobre las actividades
antiproliferativas de diversos compuestos O,N-acetales
N-9'' y N-7'' purínicos o N-1'' y N-3''
pirimidínicos (las posiciones de sustitución del anillo de purina o
el de pirimidina se indican con dobles primas) in vitro
frente a la línea celular de cáncer de mama humano
MCF-7 han sido recientemente publicadas
(Díaz-Gavilán, M. et al., Bioorg. Med. Chem.
Lett. 2008, 18, 1457-1460). Estos
resultados, han puesto de manifiesto, entre otros aspectos, que los
compuestos antitumorales más potentes son los derivados de purina.
También parecen en general más potentes los compuestos que presentan
un anillo de 4,1-benzoxazepina frente a los
compuestos que presenta un anillo de
4,1-benzoxatiepino o de
4,1-benzodioxepino.
A pesar de los continuados esfuerzos realizados
en el desarrollo y estudio de agentes antitumorales, sigue
existiendo la necesidad en el estado de la técnica de proporcionar
nuevos compuestos antitumorales alternativos desarrollados a partir
de los prototipos de los compuestos mencionados.
\newpage
La presente invención se refiere a nuevos
compuestos de fórmulas generales I y II:
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donde,
- X
- representa un grupo bencénsulfonamido sustituido en posición orto, meta o para por un grupo nitro, amino o fluoren-9-ilmetilcarbamato (FmocN);
Y y Z representan cada uno,
independientemente entre sí, un grupo seleccionado del grupo formado
por -Cl ó
-I
- R
- representa un sustituyente seleccionado del grupo formado por H, -Cl, -Br, -I, -F ó -CF_{3}, en las posiciones 7'' y/o 9'' del anillo bencénico fusionado al heterociclo de siete miembros.
sus sales farmacológicamente aceptables,
derivados, profármacos y formas homoquirales (R ó S)
de los mismos.
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En el contexto de la presente invención el
término "sales farmacológicamente aceptables, derivados,
profármacos" se refiere a cualquier sal farmacéuticamente
aceptable, éster, solvato, hidrato, o cualquier compuesto que, una
vez administrado a un animal o ser humano, es capaz de proporcionar
de forma directa o indirecta un compuesto como los descritos en esta
invención. La invención también incluye comprendida en su ámbito de
protección, sales no farmacéuticamente aceptables, que pueden ser
utilizadas en la obtención de sales farmacéuticamente aceptables. La
preparación de sales, profármacos y derivados puede llevarse a cabo
mediante métodos conocidos en el estado de la técnica.
Por ejemplo las sales farmacéuticamente
aceptables de los compuestos de la presente invención se sintetizan
en general a partir de los compuestos de la invención en forma de
ácido o base libre, por adición de una cantidad estequiométrica de
una base o ácido apropiado, en agua, en un disolvente orgánico o en
mezclas de éstos.
Los compuestos de la invención pueden
presentarse en forma cristalina como compuestos libres o solvatos
(por ejemplo hidratos) estando ambas formas comprendidas en el
ámbito de protección de la presente invención. Los métodos de
solvatación son generalmente conocidos en el estado de la
técnica.
Los compuestos de la invención de fórmulas
generales I y II presentan un anillo de
4,1-benzoxazepina unido a través de su posición 3 al
átomo de nitrógeno en posición 9'' de una base púrica en los
compuestos de fórmula general I, o al átomo de nitrógeno en
posición 7'' de una base púrica en los compuestos de fórmula
general II. Por tanto la diferencia entre los compuestos I y II
reside únicamente en su unión hemiaminálica.
En los compuestos de la invención el anillo
bencénico fusionado al heterociclo de siete miembros, puede tener
uno o dos sutituyentes R en las posiciones 7'' o 9'' o en ambas, y
dichos R pueden ser iguales o diferentes entre sí.
En una realización particular de la invención,
en los compuestos de fórmulas generales I y II,
R es H;
X es grupo bencénsulfonamido sustituido en
posición orto o para por un grupo nitro,
Z e Y, iguales o diferentes entre sí, se
seleccionan de entre -Cl, -Br, y -I.
\newpage
En otra realización particular los compuestos de
la presente invención son los que se muestran en las siguientes
Tablas 1 y 2:
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Los inventores han observado que los compuestos
de la presente invención muestran mejores actividades
antiproliferativas frente a la línea tumoral de cáncer de mama
humano MCF-7, que las de los compuestos del estado
de la técnica (solicitud de patente No. P200601538 y
Díaz-Gavilán, M. et al., Bioorg. Med. Chem.
Lett. 2008, 18, 1457-1460).
Además, los compuestos de la presente invención mostraron mayor
citotoxicidad sobre la línea tumoral MCF-7, que
sobre la línea celular mamaria no tumoral MCF-10A
por lo que resultan más selectivos y específicos. Del mismo modo,
el IT in vitro determinado ha sido de utilidad para comparar
la mayor o menor efectividad de los compuestos de la invención sobre
las líneas de estirpe mamaria.
En las Tablas 3 (compuestos de fórmula general
I) y 4 (compuestos de fórmula general II), se muestran los datos
estructurales de los compuestos, y los valores biológicos,
incluyendo los ITs y se comparan con los datos de compuestos del
estado de la técnica. La comparación demuestra las ventajas de los
compuestos de la presente invención.
Las Tablas 3 y 4 resumen los resultados
obtenidos en los ensayos realizados con los compuestos de la
invención, con compuestos divulgados en la solicitud de patente No.
P200601538, y con los siete compuestos más activos divulgados en la
comunicación del año 2008 (M. Díaz-Gavilán et
al. Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 18,
1457-1460).
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Los compuestos de las Tablas 3 y 4, en los que X
es O o S, muestran valores de CI_{50} comprendidos entre 4.63 y
3.55 \muM, mientras que el rango de actividad de los cinco
compuestos ejemplificados de esta invención está comprendido entre
0.36-0.99 \muM. Este dato pone de manifiesto en
consecuencia, actividades antiproliferativas comprendidas entre 3.6
y 12.9 veces superiores de los compuestos de la presente
invención.
Por otra parte, los compuestos divulgados en la
comunicación Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008,
18, 1457-1460, muestran actividades
antiproliferativas importantes comprendidas entre los valores de
CI_{50} de 0.67 y 2.73 \muM.
Los compuestos de la invención presentan en
general valores de CI_{50} mejores que los del estado de la
técnica (P200601538; y la comunicación Bioorg. Med. Chem.
Lett., 2008, 18, 1457-1460),
excepto, en el caso del derivado FC-30b2. No
obstante la comparación entre MDG-884B y
FC-30b2 pone de manifiesto que los
compuestos de la presente invención en los que Z e Y son ambos
halógenos, presentan mejores actividades antiproliferativas.
De modo similar la comparación entre
MDG-884A2-2 con
FC-35 pone de manifiesto que los compuestos
de la invención en los que Z e Y son ambos halógenos presentan
mejores actividades antiproliferativas y lo mismo se desprende de
la comparación entre MDG-798C y
ACG-812b-F3.
En consecuencia, los datos biológicos apuntan al
hecho experimental de que, en general, la presencia de dos átomos
de halógeno en las posiciones 2'' y 6'' del resto de purina
conlleva sorprendentemente a una mejora de la actividad
antiproliferativa.
Una vez mostrada la mayor actividad
antiproliferativa de los compuestos de esta invención con respecto
a los compuestos de la técnica (Bioorg. Med. Chem. Lett.,
2008, 18, 1457-1460; P200601538) se
procedió a hacer un estudio comparativo de los ITs entre los
compuestos de esta invención y los de la solicitud de patente
P200601538.
Todos los compuestos de fórmulas generales I y
II de la presente invención muestran valores elevados de IT
(excepto FC-35) cuando se probaron sobre
líneas de estirpe mamaria (MCF-7 y
MCF-10A) destacando por encima de todos, los
derivados ACG-812b-F3 y
FC-26c, con valores de ITs de 5.06 y 4.03,
respectivamente. Además, los compuestos de P200601538 muestran
valores de IT menores que 1, lo que indica que estos fármacos
ejercen una mayor toxicidad sobre las células epiteliales mamarias
normales.
Por tanto, los compuestos de la presente
invención presentan un alto índice terapéutico experimental, con
actividad citotóxica en general selectiva de cáncer de mama. Los
ITs in vitro avalan su elevada selectividad sobre células
tumorales y la baja toxicidad sobre células normales.
En otro aspecto la invención se refiere a una
composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto
seleccionado de entre los compuestos de fórmulas I y II, sus sales
farmacológicamente aceptables, derivados, profármacos y formas
homoquirales (R ó S) de los mismos, junto con al menos
un excipiente farmacológica aceptable. Ejemplos de composiciones
farmacéuticas incluyen entre otras, formas sólidas como
comprimidos, cápsulas, gránulos etc., formas líquidas, como
soluciones, suspensiones, o emulsiones. Las composiciones
farmacéuticas pueden administrarse de forma oral, tópica,
parenteral etc.
En otro aspecto la invención se refiere a un
compuesto seleccionado de entre los compuestos de fórmulas I y II,
sus sales farmacológicamente aceptables, derivados, profármacos y
formas homoquirales (R ó S) de los mismos, para su
uso como medicamento.
En otro aspecto adicional la invención se
refiere al empleo de al menos un compuesto seleccionado de entre
los compuestos de fórmulas I y II, sus sales farmacológicamente
aceptables, derivados, profármacos y formas homoquirales (R
ó S) de los mismos, en la elaboración de un medicamento para
el tratamiento y/o profilaxis del cáncer. En una realización
particular dicho medicamento es para el tratamiento y/o profilaxis
de los cánceres de mama, pulmón, colorrectal, páncreas y los
síndromes mieloproliferativos en animales y seres humanos.
Otro aspecto adicional de la invención se
refiere a un método de tratamiento y/o profilaxis del cáncer y de
los síndromes mieloproliferativos en animales y seres humanos en
necesidad de dicho tratamiento que comprende la administración de la
menos una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto
de fórmula general I o II.
La administración de los compuestos o de las
composiciones de la invención puede realizarse de acuerdo con
cualquier método adecuado, como infusión intravenosa, preparaciones
orales, administración intraperitoneal, intravenosa entre otras. La
correcta dosificación dependerá de la formulación concreta, el modo
de administración, y las particularidades del paciente, del tumor a
tratar etc., tales como la edad, el peso corporal, de la
combinación con otros fármacos, etc.
\newpage
En otro aspecto la invención se refiere a un
procedimiento para la preparación de los compuestos de la presente
invención. El procedimiento comprende la siguiente etapa de
reacción que consiste en una condensación de Vorbrüggen entre un
compuesto de partida de fórmula general (1) y una base púrica de
fórmula general (2) según el siguiente Esquema 1:
Esquema
1
y donde R_{1} es un grupo
bencensulfonilo sustituido en posiciones orto, meta o
para por un grupo nitro o amino, o un grupo
fluoren-9-ilmetilcarbonilo
(Fmoc);
R tiene los significados anteriormente
mencionados para los compuestos de la invención, y
Z e, Y pueden ser iguales o distintos entre sí,
y tener los significados anteriormente mencionados para los
compuestos de la invención.
La condensación de Vorbrüggen se lleva a cabo de
forma convencional tal y como se describe por ejemplo en
(Díaz-Gavilán, M. et al., Bioorg. Med. Chem.
Lett. 2008, 18, 1457-1460;
Díaz-Gavilán, M. et al., Tetrahedron,
2007, 63, 5274-5286; Corrigendum:
Tetrahedron, 2007, 63, 9023).
La condensación se realiza en presencia de los
reactivos silanizantes, trimetilclorosilano (TCS),
1,1,1,3,3,3-hexametildisilazano (HMDS), y cloruro
estánnico como ácido de Lewis en acetonitrilo anhidro. En general se
emplean 2.5 equivalentes de la purina correspondiente, TCS (4
equivalentes), HMDS (4 equivalentes), SnCl_{4}, (4 equivalentes),
MeCN anhidro y la temperatura suele estar comprendida entre
45-50ºC, durante 24 a 72 horas. La condensación da
lugar a los regioisómeros cíclicos N-9'' y N-7''.
Por otra parte, algún compuesto de la presente
invención de fórmula I, se prepara a partir de los compuestos de
fórmula I, obtenidos de la condensación de Vorbrüggen, mediante
transformaciones químicas convencionales (ver Ejemplo 3).
A continuación se presentan ejemplos
ilustrativos de la invención, que se exponen para una mejor
comprensión de la invención, y que en ningún caso deben
considerarse una limitación del alcance de la misma.
\vskip1.000000\baselineskip
Sobre una solución de
(RS)-3-metoxi-1-(o-nitrobencénsulfonil)-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepina
(200 mg, 0.55 mmoles) y 2,6-dicloropurina (259 mg,
1.37 mmoles) en 2.5 mL de acetonitrilo anhidro a 0ºC y bajo
atmósfera de argón, se añadieron sucesivamente TCS (278 \muL,
2.20 mmoles), HMDS (453 \muL, 2.20 mmoles) y SnCl_{4} (1M en
CH_{2}Cl_{2}, 2.2 mL). Se dejó elevar lentamente la temperatura
hasta 10ºC antes de calentar a 50ºC. Una vez alcanzada esta
temperatura se mantuvo la mezcla en agitación, bajo atmósfera de
argón, durante 69 horas. Transcurrido ese tiempo la mezcla se
enfrió a 0ºC y se añadieron 10 mL de agua. Se neutralizó con una
solución de NaHCO_{3} saturada y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}.
(3 x 30 mL). La fase orgánica se lavó con H_{2}O (1 x 30 mL) y
con una solución saturada de NaCl (1 x 30 mL) y se secó
(Na_{2}SO_{4}). El crudo se purificó mediante cromatografía
flash utilizando una mezcla de EtOAc/Hexano 1/1. De esta forma se
obtuvieron las siguientes dos fracciones:
FC-26c (35.5 mg, 13%) y
FC-30b2 (5.5 mg, 2%):
(FC-26c). Sólido blanco;
pf: 154-155ºC. ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}, 300 MHz): \delta (ppm) 8.18 (s, 1H), 8.07 (dd,
J= 1.8 Hz, J= 7.9 Hz, 1H), 7.82-7.80
(m, 3H), 7.42-7.40 (m, 2H),
7.34-7.31 (m, 1H), 7.08 (d, J= 7.5 Hz, 1H),
6.09 (dd, J= 1.8 Hz, J= 10.1 Hz, 1H), 5.05 (d,
J = 13.6 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.72 (dd,
J = 13.2 Hz, J= 1.8 Hz, 1H), 3.84 (dd, J= 10.1
Hz, J= 13.2 Hz, 1H). ^{13}C-RMN
(CDCl_{3}, 75 MHz): \delta (ppm) 153.68, 152.48, 152.38,
148.03, 143.70, 138.89, 137.75, 134.95, 133.71, 132.60, 132.55,
131.03, 130.56, 130.04, 129.58, 128.82, 125.02, 85.22, 72.12, 54.80.
HR (LSIMS) calculado para C_{20}H_{14}Cl_{2}N_{6}NaO_{5}
M+Na)^{+} 543.0021; encontrado 543.0020. Análisis
elemental para C_{20}H_{14}Cl_{2}N_{6}O_{5}: C, 46.08; H,
2.71; N, 16.12; S, 6.15; encontrado: C, 46.10; H, 3.02; N, 16.43;
S, 5.99.
(FC-30b2). Sólido blanco;
pf: 172-174ºC. ^{1}H-RMN
(Acetona-d_{6}, 400 MHz): \delta (ppm) 8.93 (s, 1H),
8.10-8.07 (m, 2H), 7.94 (m, 1H), 7.57 (d, J=
7.5 Hz, 1H), 7.42-7.44 (m, 2H), 7.21 (d, J=
7.8 Hz, 1H), 6.56 (dd, J= 2.0 Hz, J= 10.2 Hz,1H),
5.01-4.98 (m, 3H), 4.16 (dd, J= 10.0 Hz,
J= 13.7 Hz, 1H). ^{13}C-RMN
(DMSO-d_{6}, 100 MHz): \delta (ppm) 163.88, 160.85,
152.18, 144.00, 139.25, 137.93, 136.29, 133.91, 132.67, 131.00,
130.89, 130.32, 129.96, 129.54, 128.63, 125.86, 121.01, 85.38,
70.40, 53.85. HR (LSIMS) calculado para
C_{20}H_{14}Cl_{2}N_{6}O_{5}SNa (M+Na)^{+}
543.0021; encontrado 43.0018. Análisis elemental para
C_{20}H_{14}Cl_{2}N_{6}O_{5}S: C, 46.08; H, 2.71; N,
16.12; S, 6.15; encontrado: C, 46.21; H, 3.08; N, 15.93; S,
6.00.
\vskip1.000000\baselineskip
Se siguió el mismo procedimiento detallado en el
Ejemplo 1 sustituyendo el O,O-acetal de partida
[(RS)-3-metoxi-1-(p-nitrobencénsulfonil)-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepina)],
manteniendo las mismas relaciones molares. Se obtuvo el compuesto
ACG-812bF3.
(ACG-812bF3) Sólido
amarillento; pf: 173-175ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz): \delta (ppm)
8.44 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 8.17-8.11 (m, 3H),
7.43-7.31 (m, 4H), 6.00 (d, J= 8.8 Hz, 1H),
4.78 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 4.74 (dd, J = 1.2 Hz,
J= 14.7 Hz, 1H), 4.60 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 3.65 (dd,
J = 10.0 Hz, J= 14.7 Hz, 1H).
^{13}C-RMN (CDCl_{3}, 75 MHz): \delta (ppm)
153.72, 152.59, 152.16, 150.79, 146.29, 143.41, 138.78, 136.64,
131.01, 130.52, 130.40, 129.54, 129.10, 129.05, 125.18, 84.78,
72.05, 54.56. HR (LSIMS) calculado para
C_{20}H_{14}Cl_{2}N_{6}NaO_{5}S (M+Na)^{+}
543.0021, encontrado 543.0024. Análisis elemental para
C_{20}H_{14}Cl_{2}N_{6}O_{5}S: C, 46.08; H, 2.71; N,
16.12; S, 6.15; encontrado: C, 46.00; H, 2.65; N, 15.99; S,
6.28.
Las síntesis de los compuestos que resultan de
la sustitución del átomo de cloro en la posición 6'' del anillo de
purina por otro átomo de yodo (FC-35), se detalla a
continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de FC-26c
(150 mg, 0.28 mmoles) en 6 mL de butanona se le añadió Nal (839 mg,
5.60 mmoles), TFA (107.2 \muL, 1.4 mmoles) a -10ºC y se mantuvo a
esta temperatura 6 horas. Tras evaporar el disolvente, el crudo se
redisolvió en CH_{2}Cl_{2} y se lavó sucesivamente con una
disolución saturada de NaHSO_{4} (2 x 50 mL), H_{2}O (1 x 50
mL), una solución saturada de NaCl (1 x 50 mL) y se secó
(Na_{2}SO_{4}). El producto (FC-35) se
purificó por cromatografía en columna utilizando como eluyente
EtOAc/Hexano 1/1 (117 mg, 66%).
(FC-35) Sólido
amarillento; pf: 129-130ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}, 300 MHz): (ppm) 8.18 (s,
1H), 8.08 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.81-7,79 (m,
3H), 7.43-7.42 (m, 3H), 7.40-7.38
(m, 2H), 7.31-7.32 (m, 1H), 7.10 (d, J= 8.0
Hz, 1H), 6.06 (dd, J= 8.0 Hz, J= 16.0 Hz, 1H), 5.04
(dd, J= 8.0 Hz, J = 12.0 Hz, 1H), 4.82 (d, J =
12.0 Hz, 1H), 4.73 (dd, J= 16.0 Hz, J= 4.0 Hz, 1H),
3.82-3.80 (m, 1H). ^{13}C-RMN
(CDCl_{3}, 75 MHz): \delta (ppm) 153.10, 152.46, 152.34,
148.81, 147.86, 143.64, 138.85, 137.72, 137.68, 134.90, 133.68,
132.57, 132.52, 130.53, 130.00, 128.82, 124.99, 85.18, 72.12, 54.76.
HR (LSIMS) calculado para C_{20}H_{14}ClIN_{6}NaO_{5}S
(M+Na)^{+} 634.9377, encontrado 634.9381. Análisis
elemental para C_{20}H_{14}ClIN_{6}O_{5}S: C, 39.20; H,
2.30; N, 13.71; S, 5.23; encontrado: C, 39.45; H, 2.15; N, 13.95;
S, 5.00.
Los compuestos de fórmula general I de la
invención que se han evaluado biológicamente se muestran en la
Tabla 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto de fórmula general II de la
invención que se ha evaluado biológicamente se muestra en la Tabla
2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se han ensayado los compuestos sobre la línea
celular MCF-7 americana (ATCC HTB22) que es una
línea tumoral de adenocarcinoma de mama. Es dependiente del
receptor de estrógeno y es salvaje para p53.
\vskip1.000000\baselineskip
Los cultivos de células se realizaron en cabina
de flujo laminar (Micro-V, Telstar, España) bajo
condiciones de esterilidad. Los frascos de cultivo estériles
(Falcons de 25 u 80 cm^{2} de superficie útil) se mantuvieron en
estufa a 37ºC, atmósfera al 5% de CO_{2} y 90% de humedad.
Durante el cultivo celular, las células tuvieron que ser
resembradas en nuevos Falcons conforme se alcanzaba la saturación,
despegándolas de la superficie de los frascos de cultivo mediante
una solución de PBS-EDTA (0.02%) o de Tripsina
(10x). Después se centrifugaron a 600 g durante 5 minutos y
lavadas dos veces con PBS, resuspendiéndolas en medio de
cultivo.
Para el cultivo se utilizó el medio Dubelcco's
Eagle modificado (DMEM) (Gibco, EE UU) (13.37 g de medio base),
suplementado con 10% de suero fetal bovino inactivado (Flow, Reino
Unido) en calor húmedo entre 50 y 60ºC durante 30 minutos. El medio
se tamponó con NaHCO_{3} y buffer Hepes (Flow) 1M pH 7.2 y se
suplementó con 40 mg/L de gentamicina (Antibióticos S. A.), 500 mg/L
de ampicilina (Antibióticos S. A.), 20 mL de
L-glutamina (Flow) 200 mM y agua bidestilada, c.s.p.
hasta 1000 mL. Una vez preparado el medio de cultivo, se filtró con
filtros Millex estériles de 0.22 \muM (Millipore, Francia) y se
añadió a los frascos.
Para la congelación celular, las células se
despegaron de la superficie de los Falcons mediante una solución de
PBS-EDTA (0.02%) o de Tripsina (10x), centrifugadas
a 600 g durante cinco minutos y lavadas dos veces con PBS. El
pellet celular se resuspendió en medio de congelación a razón de
0.5 x 10^{6} células por mL siendo introducidas inmediatamente en
criotubos y éstos en el congelador a -80ºC durante 24 h, siendo
almacenadas definitivamente en nitrógeno líquido tras este
período.
Medio de congelación: suero fetal bovino
(Sigma, S. L.), inactivado en calor húmedo durante 30 minutos, y
dimetilsulfóxido (DMSO).
La línea celular MCF-7
crioconservada en nitrógeno líquido se descongeló en calor húmedo.
Inmediatamente después, las células se resuspendieron en PBS
estéril, siendo centrifugadas a 1500 rpm durante cinco minutos,
repitiéndose el proceso dos veces para eliminar los restos de DMSO.
El pellet se resuspendió en medio de cultivo previamente filtrado y
las células se depositaron en frascos de cultivo.
Se siguió el siguiente protocolo: las células
fueron despegadas de la superficie de los frascos de cultivo con
PBS-EDTA (0,02%) o PBS-tripsina
(10x) a 37ºC, y se lavaron dos veces con PBS a una temperatura
entre 0 y 10ºC mediante centrifugación a 600 g durante 5
minutos. A continuación se diluyeron en medio Dubelcco's Eagle
suplementado con suero fetal bovino hasta obtener cultivos de 5 x
10^{6} células. A partir de este momento se llevó a cabo la
inducción con los compuestos antitumorales añadiendo las
concentraciones deseadas de cada uno de ellos, permaneciendo en
contacto con las células durante seis días. Se utilizaron como
control en cada experimento cultivos paralelos de células
MCF-7 sin compuestos. El medio de ambos cultivos,
control y los tratados con los fármacos, fue reemplazado
cada 48 h.
cada 48 h.
Tras la inducción durante 6 días con los
compuestos, a las concentraciones de 0.5, 1, 3, 5, 10 y 20 \muM,
de la línea celular en cultivo, y después de llevar a cabo un
ensayo colorimétrico con sulforrodamina-B (SRB) que
se especificará más adelante, se procedió a la medida de la
absorbancia para una densidad óptica de 492 nm. Se construyeron las
gráficas de densidad óptica (D. O.) (eje de ordenada) y
concentración (eje de abcisa) de cada uno de los fármacos, y sobre
las gráficas se calculó interpolando el valor de la CI_{50}
trazando la vertical de la curva del valor obtenido como media
entre los dos valores extremos de la D. O. Se determinaron dos
valores para cada punto de la curva, el experimento se repitió dos o
tres veces y se estimaron los valores medios. Los resultados se
resumen en las
Tablas 3 y 4.
Tablas 3 y 4.
Tras períodos de 6 días de cultivo, las células
fueron coloreadas con SRB mediante el siguiente protocolo:
- 1.
- El tapiz celular se lavó con PBS al 1% y se incubó con glutaraldehído durante 15-30 minutos a una temperatura comprendida entre 0 y 4ºC, lavándose a continuación con PBS y dejándolo secar.
- 2.
- Las células así fijadas se tiñeron durante 15 minutos con SRB en ácido acético.
- 3.
- Posteriormente se lavó el tapiz con ácido acético y se dejaron secar las placas, de nuevo.
- 4.
- El colorante fijado sobre las células se solubilizó con una solución de Tris-base con agitación suave.
- 5.
- Alícuotas de 100 \muL se transfirieron a placas de 96 pocillos y se leyeron en un colorímetro Titertek multiscan.
Además de la línea tumoral para el estudio del
cáncer de mama se utilizaron líneas celulares mamarias no tumorales
en concreto la línea MCF-10A, con objeto de poder
establecer comparaciones que permitan identificar mecanismos
involucrados en el fenotipo maligno. Esta línea procede del
epitelio de la glándula mamaria humana y fue establecida a través
de un cultivo a largo tiempo en un medio libre de suero con baja
concentración de calcio (H. Soule, C. M. McGrath, U.S. Pat.
5,026,637, dated June 25, 1991).
El índice terapéutico o IT constituye una medida
del margen de seguridad de un medicamento. Se expresa numéricamente
como una relación entre la dosis del medicamento que causa la
muerte (dosis letal o DL) o un efecto nocivo en una proporción
"x" de la muestra y la dosis que causa el efecto terapéutico
deseado (dosis efectiva o DE) en la misma o mayor proporción
"y" de la muestra. Este concepto se puede formular como:
IT =
DL_{50}/DE_{50}
donde el número 50 significa el 50%
de la población. El margen de seguridad es tanto mayor cuanto mayor
es el valor del índice, siendo extremadamente reducido, y por tanto
muy peligroso, el consumo del compuesto en cuestión cuando su valor
se aproxima a
1.
De forma análoga, en la presente invención se ha
definido el índice terapéutico in vitro o experimental de un
compuesto como el cociente entre la CI_{50} de la línea celular
normal y la CI_{50} de ese mismo compuesto en la respectiva línea
celular tumoral.
Se determinó la CI_{50} sobre
MCF-7, y sobre MCF-10A y se
calcularon los IT in vitro de los compuestos de la
invención, y se compararon con los valores obtenidos para
compuestos del estado de la técnica.
Las Tablas 3 y 4 resumen los resultados
obtenidos en los ensayos realizados.
Claims (5)
1. Un compuesto de fórmula general I o de
fórmula general II,
donde,
- X
- representa un grupo bencénsulfonamido sustituido en posición orto, meta o para por un grupo nitro, amino o fluoren-9-ilmetilcarbamato;
- Y
- representa un grupo seleccionado del grupo formado por -Cl ó -I
- Z
- representa un grupo -Cl
- R
- representa un sustituyente seleccionado del grupo formado por H, -Cl, -Br, -I, -F, -CF_{3}, en las posiciones 7 y/o 9 del anillo bencénico fusionado al heterociclo de siete miembros,
seleccionado del grupo formado por:
-
(RS)-2,6-dicloro-9-[1-(p-nitrobencénsulfonil)-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il]-9H-purina
(ACG-812b F3)
-
(RS)-2,6-dicloro-9-[1-(o-nitrobencénsulfonil)-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il]-9H-purina
(FC-26c)
-
(RS)-2-Cloro-6-iodo-9-[1-(o-nitrobencénsulfonil)-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il]-9H-purina
(FC-35)
-
(RS)-2,6-dicloro-7-[1-(o-nitrobencénsulfonil)-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoxazepin-3-il]-7H-purina
(FC-30b2).
\vskip1.000000\baselineskip
2. Composición farmacéutica que comprende al
menos un compuesto según reivindicación 1, junto con al menos un
excipiente farmacológica aceptable.
3. Compuesto según reivindicación 1, para su uso
como medicamento.
4. Compuesto según la reivindicación 3, para su
uso como medicamento para el tratamiento y/o profilaxis del cáncer,
preferiblemente el cáncer de mama, pulmón, colorrectal, páncreas y
los síndromes mieloproliferativos en animales y seres humanos.
5. Empleo de al menos un compuesto según
reivindicación 1, en la elaboración de un medicamento para el
tratamiento y/o profilaxis del cáncer preferiblemente el cáncer de
mama, pulmón, colorrectal, páncreas y los síndromes
mieloproliferativos en animales y seres humanos.
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| ES200802431A ES2334747B2 (es) | 2008-08-07 | 2008-08-07 | Nuevas (rs)- 7- o 9- (1,2,3,5- tetrahidro-4,1-benzocazepin-3-il)-7h o9h-purinas con actividad antitumoral. |
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|---|---|---|---|
| ES200802431A ES2334747B2 (es) | 2008-08-07 | 2008-08-07 | Nuevas (rs)- 7- o 9- (1,2,3,5- tetrahidro-4,1-benzocazepin-3-il)-7h o9h-purinas con actividad antitumoral. |
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| ES2459565B2 (es) * | 2014-01-20 | 2014-09-29 | Universidad De Granada | Sulfonamidas derivadas de aminas secundarias con grupos 1,3-dioxolanilalquílicos y fenilmetilpurínicos, y su utilización como agentes anticancerígenos |
| WO2017064350A1 (es) * | 2015-10-15 | 2017-04-20 | Universidad De Granada | Benzo-heterociclos de seis miembros con átomos de oxígeno y nitrógeno con actividad antitumoral |
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|---|---|---|---|---|
| ES2303444B2 (es) * | 2006-05-24 | 2009-04-16 | Universidad De Granada | (2,3-dihidro-5h-1,4-benzodiheteroepin-3-il)purinas con actividad antitumoral. |
-
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- 2008-08-07 ES ES200802431A patent/ES2334747B2/es active Active
-
2009
- 2009-07-22 WO PCT/ES2009/000418 patent/WO2010018268A1/es active Application Filing
Non-Patent Citations (3)
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|---|
| DÍAZ-GAVILÁN, M. et al. "{}Anticancer activity of (1,2,3,5-tetrahydro-4,1-benzoxazepin-3-yl)-pyrimidines and -purines against the MCF-7 cell line: Preliminary cDNA microarray studies"{}. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2008, Volumen 18, Número 4, páginas 1457-1460. [Disponible en línea el 01 de Enero de 2008]. Ver especialmente página 1457, resumen; página 1458, figura 3; página 1459, esquema 1. * |
| DÍAZ-GAVILÁN, M. et al. "{}Synthesis and reactivity of (RS)-6- chloro-7- or 9-(1,2,3,5-tetrahydro-4,1-benzoxazepin-3-yl)- 7H- or 9H-purines bearing a nitrobenzenesulfonyl group on the nitrogen atom"{}. Tetrahedron 2007, Volumen 63, Número 24, páginas 5274-5286. Ver especialmente página 5278, figura 2, compuestos 13 y 14; página 5275, esquema 1. * |
| NÚÑEZ, M.C. et al. "{}Synthesis and anticancer activity studies of novel 1-(2,3-dihydro-5H-1,4-benzodioxepin-3-yl)-uracil and (6'-substituted)-7- or 9-(2,3-dihydro-5H-1,4-benzodioxepin-3-yl)- 7H- or 9H-purines"{}. Tetrahedron 2006, Volumen 62, Número 4, páginas 11724-11733. Ver especialmente página 11724, resumen; página 11725, figura 2. * |
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| ES2334747A1 (es) | 2010-03-15 |
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