ES2331246T3

ES2331246T3 - Derivados de benzamidazol como inhibidores del mek.

Info

Publication number: ES2331246T3
Application number: ES04744015T
Authority: ES
Inventors: Stephan Douglas Barrett; Cathlin Marie Flamme; Michael David Kaufman; Jared B. J. Milbank; Haile Tecle; Joseph Scott Warmus
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 2003-07-24
Filing date: 2004-07-12
Publication date: 2009-12-28
Anticipated expiration: 2024-07-12
Also published as: BRPI0412851A; JP2006528621A; WO2005009975A2; EP1651214A2; US20050026970A1; US7160915B2; MXPA06000921A; EP1651214B1; WO2005009975A3; ATE442847T1; DE602004023207D1; CA2532067C; CA2532067A1; JP4896717B2

Abstract

Un compuesto de Fórmula **(Ver fórmula)** en la que **(Ver fórmula)** W es Q es -NH2; R1 es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por -COOH y -OH; R2 es hidrógeno, cloro, flúor o metilo; R4 es bromo, cloro, flúor, yodo, alquilo C1-6, alquenilo C2-4, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-6, -(CH2)-cicloalquilo C3-6, ciano, -O-(alquilo C1-4), -S-(alquilo C1-2), -SOCH3, -SO2CH3, -SO2NR6R7, -CC-(CH2)nNH2, -CC-(C H2)nNHCH3, -CC-(CH2)nN(CH3)2, -CC-CH2OCH3, -C=C(CH2)n, -C=C-(CH2)nNH2, -CHCHCH2OCH3, -CHCH- (CH2)nNHCH3, -CHCH-(CH2)nN(CH3)2, -(CH2)pCO2R6, -C(O)alquilo C1-3, C(O)NHCH3, -(CH2)mNH2, -(CH2)mNHC H3, -(CH2)mN(CH3)2, -(CH2)mOR6, -CH2S(CH2)t(CH3), -(CH2)pCF3, -CCCF3, -CH=CHCF3, -CH2CHCF2, -CH=CF2, -(CF2)vCF3, -CH2(CF2)nCF3, -(CH2)tCF(CF3)2, -CH(CF3)2, -CF2CF(CF3)2, o -C(CF3)3, en la que el alquilo C1-6 y alquinilo C2-6 están opcionalmente sustituidos con 1 y 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre -OH y alquilo C1-6; R5 es hidrógeno o flúor; R6 y R7 son cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo; m es de 1 a 4; n es de 1 a 2; p es de 0 a 2; t es de 0 a 1; v es de 1 a 5; ó sales amidas C1-6 y ésteres C1-6 farmacéuticamente aceptables, del mismo.

Description

Derivados de benzamidazol como inhibidores de MEK.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a derivados de benzamidazol N-metil- sustituidos, a composiciones farmacéuticas y a procedimientos para usar los mismos.

Antecedentes de la invención

Las enzimas MAPK/ERK quinasa ("MEK") son quinasas de especificidad dual implicadas en, por ejemplo, la inmunomodulación, inflamación y enfermedades proliferativas tales como cáncer y reestenosis.

Las enfermedades proliferativas son provocadas por un defecto en el sistema de señalización intracelular, o en el mecanismo de transducción de señal de ciertas proteínas. Los defectos incluyen un cambio en la actividad intrínseca o en la concentración celular de una o más proteínas de señalización en la cascada de señalización. La célula puede producir un factor de crecimiento que se une a sus propios receptores, dando como resultado un bucle autocrino, que estimula continuamente la proliferación. Las mutaciones o la sobreexpresión de las proteínas de señalización intracelular pueden conducir a señales mitogénicas falsas dentro de la célula. Algunas de las mutaciones más comunes se producen en genes que codifican la proteína conocida como Ras, una proteína G que se activa cuando está unida a GTP, y que se inactiva cuando está unida a GDP. Los receptores del factor de crecimiento mencionados anteriormente, y muchos otros receptores mitogénicos, cuando están activadas, conducen a que Ras pase del estado unido a GDP al estado unido a GTP. Esta señal es un pre-requisito absoluto para la proliferación en la mayoría de los tipos celulares. Los defectos en este sistema de señalización, especialmente en la desactivación del complejo Ras-GTP, son comunes en cánceres, y conducen a que la cascada de señalización por debajo de Ras se active cróni-
camente.

Ras activado conduce a su vez a la activación de una cascada de serina/treonina quinasas. Uno de los grupos de quinasas conocido por requerir Ras-GTP activo para su propia activación es la familia Raf. Ésta activa a su vez MEK (por ejemplo, MEK_{1} y MEK_{2}) que después activa la MAP quinasa, ERK (ERK_{1} y ERK_{2}). La activación de la MAP quinasa por mitógeno parece ser esencial para la proliferación; la activación constitutiva de esta quinasa es suficiente para inducir la transformación celular. El bloqueo de la señalización de Ras corriente abajo, por ejemplo mediante el uso de una proteína Raf-1 negativa dominante, puede inhibir completamente la mitogénesis, ya sea inducida desde los receptores de la superficie celular o desde los mutantes de Ras oncogénicos. Aunque Ras no es una proteína quinasa en sí misma, ésta participa en la activación de Raf y otras quinasas, probablemente a través de un mecanismo de fosforilación. Una vez activada, Raf y otras quinasas fosforilan MEK en dos restos de serina muy adyacentes, S^{218} y S^{222} en el caso de MEK-1, que son el pre-requisito para la activación de MEK como quinasa. A su vez, MEK fosforila a la MAP quinasa tanto en un resto tirosina, Y^{185}, como en un resto treonina, T^{183}, separados por un único aminoácido. Esta doble fosforilación activa la MAP quinasa al menos 100 veces. Después, la MAP quinasa activada puede catalizar la fosforilación de un gran número de proteínas, incluyendo varios factores de transcripción y otras quinasas. Muchas de estas fosforilaciones de MAP quinasa se activan mitogénicamente para la proteína diana, tal como una quinasa, un factor de transcripción u otra proteína celular. Además de Raf-1 y de MEKK, otras quinasas activan MEK, y MEK parece ser en sí misma una quinasa que integra señal. Actualmente se entiende que MEK es altamente específica para la fosforilación de MAP quinasa. De hecho, hasta la fecha no se ha demostrado ningún sustrato para MEK diferente de la MAP quinasa, ERK, y MEK no fosforila los péptidos basados en la secuencia de fosforilación de MAP quinasa, o incluso fosforila la MAP quinasa desnaturalizada. MEK también parece asociarse fuertemente con la MAP quinasa antes de fosforilarla, lo que sugiere que la fosforilación de la MAP quinasa por MEK puede requerir una fuerte interacción previa entre las dos proteínas. Tanto este requerimiento como la especificidad inusual de MEK sugieren que puede haber suficientes diferencias en su mecanismo de acción con otras proteínas quinasas como para que puedan encontrarse inhibidores selectivos de MEK, que funcionan posiblemente a través de mecanismos alostéricos en lugar de a través del bloqueo normal del sitio de unión al ATP.

Los documentos WO 00/42022 y WO 00/05390 describen benzoheterociclos como inhibidores de MEK. El documento WO 01/05392 describe derivados fenilaminobenzhidroxámicos como inhibidores de MEK. Los documentos WO 03/077855 y WO 03/077914, ambos publicados el 25 de septiembre de 2003 y el documento US 2004/1167710, publicado el 17 de junio de 21004, describen derivados de bencimidazol como inhibidores de MEK. El documento US 2004/043388, publicado el 4 de marzo de 2004, describe reactivos para la identificación de la pareja de unión a proteínas de un pequeño agente farmacéutico.

Se ha descubierto que los compuestos de la presente invención son inhibidores de MEK y son útiles en el tratamiento de diversas patologías proliferativas, tales como afecciones relacionadas con la hiperactividad de MEK, así como enfermedades moduladas por la cascada de MEK.

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Sumario de la invención

La presente invención proporciona un compuesto de Fórmula

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1

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en la que

W es 2

Q es -NH_{2};

R_{1} es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por -COOH y -OH;

R_{2} es hidrógeno, cloro, flúor o metilo;

R_{4} es bromo, cloro, flúor, yodo, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-4}, alquinilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-6}, -(CH_{2})-cicloalquilo C_{3-6}, ciano, -O-(alquilo C_{1-4}), -S-(alquilo C_{1-2}), -SOCH_{3}, -SO_{2}CH_{3}, -SO_{2}NR_{6}R_{7}, -C\equivC-(CH_{2})_{n}NH_{2}, -C\equivC-(C
H_{2})_{n}NHCH_{3}, -C\equivC-(CH_{2})_{n}N(CH_{3})_{2}, -C\equivC-CH_{2}OCH_{3}, -C=C(CH_{2})_{n}OH, -C=C-(CH_{2})_{n}NH_{2}, -CHCHCH_{2}OCH_{3}, -CHC
H-(CH_{2})_{n}NHCH_{3}, -CHCH-(CH_{2})_{n}N(CH_{3})_{2}, -(CH_{2})_{p}CO_{2}R_{6}, -C(O)alquilo C_{1-3}, C(O)NHCH_{3}, -(CH_{2})_{m}NH_{2}, -(C
H_{2})_{m}NHCH_{3}, -(CH_{2})_{m}N(CH_{3})_{2}, -(CH_{2})_{m}OR_{6}, -CH_{2}S(CH_{2})_{t}(CH_{3}), -(CH_{2})_{p}CF_{3}, -C\equivCCF_{3}, -CH=CHCF_{3}, -CH_{2}CHCF_{2}, -CH=CF_{2}, -(CF_{2})_{v}CF_{3}, -CH_{2}(CF_{2})_{n}CF_{3}, -(CH_{2})_{t}CF(CF_{3})_{2}, -CH(CF_{3})_{2}, -CF_{2}CF(CF_{3})_{2}, o -C(CF_{3})_{3}, en la que el alquilo C_{1-6} y alquinilo C_{2-6} están opcionalmente sustituidos con 1 y 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre -OH y alquilo C_{1-6};

R_{5} es hidrógeno o flúor;

cada uno de R_{6} y R_{7} es independientemente hidrógeno, metilo, o etilo;

m es de 1 a 4;

n es de 1 a 2;

p es de 0 a 2;

t es de 0 a 1;

v es de 1 a 5;

y sales amidas C_{1-6} y ésteres C_{1-6} farmacéuticamente aceptables, del mismo.

Una realización de la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I, como se ha definido anteriormente, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

La presente invención proporciona también compuestos de Fórmula 1 en la que R_{1} es metilo; R_{1} es metilo sustituido con -COOH; R_{2} es flúor; R_{4} es yodo, alquilo C_{1-3}, alquenilo C_{2-4}, alquinilo C_{2-3}, o -S-CH_{3}; R_{4} es yodo; R_{4} es etilo, etenilo, acetileno o -S-CH_{3}; R_{4} es yodo, etilo, o acetileno; o R_{5} es flúor.

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En una realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de un compuesto o una sal de fórmula (I):

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en la que W es -CO-Q; y Q es como se ha descrito anteriormente; y

R_{1}, R_{2}, R_{4}, R_{5} son como se ha descrito anteriormente;

que comprende la etapa de:

(a) tratar un compuesto de fórmula (II):

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4

en la que R_{1}, R_{2}, R_{4}, y R_{5} son como se ha descrito anteriormente;

con un compuesto de fórmula (III):

(III);Q-H

en la que Q es como se ha descrito anteriormente; en un disolvente, para formar dicho compuesto de fórmula (I).

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (I) que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (II); que comprende:

(b) tratar un compuesto de fórmula (IV):

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5

en la que R_{1}, R_{2}, R_{4}, y R_{5} son como se ha descrito anteriormente;

con un compuesto de fórmula C_{6}F_{5}OH en presencia de un agente de acoplamiento en un disolvente. En una realización, el agente de acoplamiento es DCC.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (II) que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (IV); que comprende:

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(c) tratar un compuesto de fórmula (V):

6

en la que R_{1}, R_{2}, R_{4}, y R_{5} son como se ha descrito anteriormente; y

R_{16} es -O-R_{3},

con un agente hidrolizante en un disolvente. En una realización, el agente hidrolizante es trimetil silanato potásico. En una realización preferida en dicho compuesto de fórmula (V), R_{3} es alquilo C_{1-6}; tal como metilo.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (IV) que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (V) que comprende:

(d) tratar un compuesto de fórmula (VI):

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en la que R_{1}, R_{2}, R_{4}, R_{5}, y R_{15} son como se ha descrito anteriormente;

R_{5} se selecciona entre el grupo constituido por alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-6}, alquinilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-}C_{12}, -(CR_{10}R_{11})_{q}(arilo C_{6-}C_{10}), -(CR_{10}R_{11})_{q}(heterociclilo de 4-10 miembros) y -OSiR_{11}R_{12}R_{13}; en la que dicho R_{3} está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por -(CR_{10}R_{11})_{q}(arilo C_{6-}C_{10}), -(CR_{10}R_{11})_{q}(heterociclilo de 4-10 miembros), -SO_{2}R_{11}, -SO_{2}NR_{12}R_{13} -OH, -OR_{14}, ciano, -SiR_{11}R_{12}R_{13}, halo, -NH_{2}, y -NHCO(R_{11}); Lg es un grupo saliente seleccionado entre el grupo constituido por halo, ésteres sulfato, ésteres sulfonato, tetrafluoroborato y hexafluorofosfato;

cada q es de 0 a 5;

cada R_{10}, R_{11}, R_{12}, y R_{13} son alquilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6}; y R_{14} es alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por -(CR_{10}R_{11})_{q}(arilo C_{6-}C_{10}), -(CR_{10}R_{11})_{q}(heterociclilo de 4-10 miembros); con un agente de desprotección en un disolvente.

En una realización, R_{5} es alquilo o 4-metoxibencilo. En otra realización, R_{5} es -OSiR_{11}R_{12}R_{13}. En otra realización, Lg es triflato, mesilato, tosilato, tetrafluoroborato o hexafluorofosfato.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (IV) que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (VI); que comprende:

(e) tratar un compuesto de fórmula (VII):

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en la que R_{2}, R_{4}, R_{5}, R_{8}, y R_{15} son como se describen en el compuesto de fórmula (VI);

con un agente de alquilación adecuado; en un disolvente.

En una realización, dicho agente de alquilación adecuado es tosilato de alquilo C_{1-6}, tal como tosilato de metilo; o triflato de alquilo C_{1-6}, tal como triflato de metilo.

En otra realización, dicho agente de alquilación adecuado es haluro de alquilo C_{1-6}; tal como yoduro de metilo.

En otra realización, dicho agente de alquilación adecuado es tetrafluoroborato de trimetiloxonio.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (VI), que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (VII); que comprende:

(f) tratar un compuesto de fórmula (VIII):

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en la que R_{2}, R_{4}, R_{5}, R_{8}, y R_{15} son como se ha descrito anteriormente;

con un agente de ciclocondensación; en un disolvente. Dicho agente de ciclocondensación incluye ácido fórmico, trimetilortoformiato, acetato de formamidina, o formiato de etilo.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (VII), que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (VIII); que comprende:

(g) tratar un compuesto de fórmula (IX):

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en la que R_{2}, R_{4}, R_{5}, R_{8}, y R_{15} son como se ha descrito anteriormente; con un agente reductor; en un disolvente.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (VIII), que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (IX); que comprende:

(h) tratar un compuesto de fórmula (X):

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en la que R_{2}, R_{4}, R_{5}, y R_{15} son como se ha descrito anteriormente;

con un compuesto de fórmula R_{5}-NH_{2}, en la que R_{5} es como se ha descrito anteriormente; en un disolvente. En una realización, dicho compuesto de fórmula R_{5}-NH_{2} es 2-hidroxietilamina o 4-metoxibencilamina.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (IX), que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (X); que comprende:

(i) tratar un compuesto de fórmula (XI):

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en la que R_{2}, R_{4}, y R_{5} son como se ha descrito anteriormente;

con un agente de esterificación adecuado o un agente de amidación adecuado; en un disolvente. En una realización, un agente de esterificación adecuado incluye una combinación de un agente de halogenación, tal como SOCl_{2}, y un alcohol adecuado, tal como H-O-R_{3}. En otra realización, un agente de esterificación adecuado incluye una combinación de un ácido catalítico, tal como HCl catalítico, y un alcohol adecuado, tal como H-O-R_{3}. En otra realización, un agente de amidación adecuado incluye una combinación de un agente de halogenación, tal como SOCl_{2}, y una amina adecuada, tal como -NH_{2}, -NH[(CH_{2})_{k}CH_{3}], o -NH[O(CH_{2})_{k}CH_{3}].

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (X), que comprende adicionalmente la etapa de preparar dicho compuesto de fórmula (XI); que comprende:

(j) tratar un compuesto de fórmula (XII):

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en la que R_{5} es como se ha descrito anteriormente;

con un compuesto de fórmula (XIII):

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en la que R_{2} y R_{4} son como se ha descrito anteriormente; en presencia de una base fuerte en un disolvente.

En otra realización, la presente invención proporciona un procedimiento de preparación de dicho compuesto o una sal de fórmula (XI), que comprende adicionalmente la etapa de preparación de dicho compuesto de fórmula (XII); que comprende:

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(k) tratar un compuesto de fórmula (XIV):

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en la que R_{5} es como se ha descrito anteriormente;

con un agente nitro-productor en un disolvente.

En otra realización, dicho agente nitro-productor es HCl/H_{2}SO_{4}.

La invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Adicionalmente, la invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I para tratar una enfermedad proliferativa en un paciente que lo necesita.

Además, la invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula I para tratar cáncer, reestenosis, psoriasis, enfermedad autoinmune, aterosclerosis, osteoartritis, artritis reumatoide, insuficiencia cardiaca, dolor crónico, y dolor neuropático en un paciente en necesidad del mismo.

Además, la invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula I para tratar cáncer en un paciente en necesidad del mismo en combinación con terapia por radiación o al menos un agente quimioterapéutico.

La invención proporciona también el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de las patologías o enfermedades proporcionadas anteriormente.

Descripción detallada de la invención

A continuación se definen ciertos términos y su uso en toda esta descripción.

Los términos "halógeno" o "halo" en la presente invención se refieren a un átomo de flúor, bromo, cloro, y yodo o fluoro, bromo, cloro, y yodo. Los términos flúor y fluoro, por ejemplo, se entiende que son equivalentes en este documento.

Los grupos alquilo, tales como "alquilo C_{1-6}", incluyen cadenas alifáticas (es decir, estructuras radicálicas de hidrocarbilo o hidrocarburo que contienen átomos de hidrógeno y carbono) con una valencia libre. Los grupos alquilo se entiende que incluyen estructuras de cadena lineal y ramificada. Los ejemplos incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, isopentilo, neopentilo, (R)-2-metilbutilo, (S)-2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 2,3-dimetilpropilo, hexilo, y similares. El término "alquilo C_{1-6}" incluye en su definición los términos "alquilo C_{1-4}" y "alquilo C_{1-2}".

Los grupos alquenilo son análogos a los grupos alquilo, pero tienen al menos un doble enlace (dos átomos de carbono sp^{2} adyacentes). Dependiendo de la situación de un doble enlace y de los sustituyentes, si los hubiera, la geometría del doble enlace puede ser entgegen (E), o zusammen (Z), cis, o trans. Similarmente, los grupos alquinilo tienen al menos un triple enlace (dos átomos de carbono sp adyacentes). Los grupos alquenilo o alquinilo insaturados pueden tener uno o más dobles o triples enlaces, respectivamente, o una mezcla de los mismos. Al igual que los grupos alquilo, los grupos insaturados pueden ser de cadena lineal o ramificada. Los ejemplos de alquenilos y alquinilos incluyen vinilo, alilo, 2-metil-2-propenilo, cis-2-butenilo, trans-2-butenilo, y acetilo.

Los grupos cicloalquilo, tales como cicloalquilo C_{3-6}, se refieren a una estructura de anillo de hidrocarburo saturado que contiene de 3 a 6 átomos. Los grupos cicloalquilo C_{3-6} típicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y similares.

La presente invención incluye los hidratos y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos definidos mediante la Fórmula l. Los compuestos de esta invención pueden poseer un grupo funcional suficientemente básico y, en consecuencia, reaccionar con cualquiera de los numerosos ácidos orgánicos e inorgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable.

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El término "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en este documento, se refiere a sales de los compuestos de Fórmula I que son sustancialmente no tóxicas para los organismos vivos. Las sales farmacéuticamente aceptables típicas incluyen aquellas sales preparadas por reacción de los compuestos de la presente invención con un ácido mineral u orgánico farmacéuticamente aceptable. Dichas sales se conocen también como sales de adición de ácidos. Dichas sales incluyen las sales farmacéuticamente aceptables mostradas en Journal of Pharmaceutical Science, 1955; 66:2-19, que son conocidas por el especialista en la técnica.

Los ácidos empleados habitualmente para formar sales de adición de ácidos son ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, y similares, y ácidos orgánicos tales como ácido p-toluenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético, y similares. Los ejemplos de dichas sales farmacéuticamente aceptables son las sales sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, bromuro, bromhidrato, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprato, caprilato, acrilato, ascorbato, formiato, clorhidrato, diclorhidrato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, glucuronato, glutamato, propionato, fenilpropionato, salicilato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, malato, maleato, hidroximaleato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, cinnamato, hipurato, nitrato, estearato, ftalato, tereftalato, butin-1,4-dioato, butin-1,4-dicarboxilato, hexin-1,4-dicarboxilato, hexin-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, dinitrobenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, ftalato, p-toluenosulfonato, p-bromobencenosulfonato, p-clorobencenosulfonato, xilenosulfonato, fenilacetato, trifluoroacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, \alpha-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, hemi-tartrato, bencenosulfonato, metanosulfonato, etanosulfonato, propanosulfonato, hidroxietanosulfonato, 1-naftalenosulfonato, 2-naftalenosulfonato, 1,5-naftalenodisulfonato, mandelato, tartarato, y similares. Una sal farmacéuticamente aceptable preferida es clorhidrato.

Debe reconocerse que el contraión particular que forma parte de cualquier sal de estas invenciones normalmente no tiene una naturaleza crítica, siempre y cuando la sal en su conjunto sea farmacológicamente aceptable y siempre y cuando el contraión no contribuya a cualidades indeseables para la sal en su conjunto. Se entiende adicionalmente que dichas sales pueden existir en forma de un hidrato.

Los enantiómeros de los compuestos de la presente invención puede resolverlos un especialista en la técnica usando técnicas convencionales bien conocidas en la técnica, tales como las descritas por J. Jacques et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc 1981. Los ejemplos de resoluciones incluyen técnicas de recristalización o cromatografía quiral.

Algunos de los compuestos de la presente invención tienen uno o más centros quirales y pueden existir en diversas configuraciones estereoisoméricas. Como consecuencia de estos centros quirales, los compuestos de la presente invención pueden aparecer en forma de racematos, mezclas de enantiómeros y como enantiómeros individuales, así como diastereómeros y mezclas de diastereómeros. Todos estos racematos, enantiómeros, y diastereómeros están dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de Fórmula I pueden prepararse por técnicas y procedimientos fácilmente disponibles para un especialista habitual en la técnica, por ejemplo siguiendo los procedimientos mostrados en los siguientes Esquemas, o en variantes análogas de los mismos. Estas estrategias sintéticas se ejemplifican adicionalmente en los ejemplos más adelante. Estos esquemas no pretenden limitar el alcance de la invención de ninguna manera.

Como se usa en este documento, los siguientes términos tienen los significados indicados: "AcOH" se refiere a ácido acético; "CDI" se refiere a 1,1'-carbonildiimidazol; Celite® se refiere a un agente de filtrado que está lavado con ácido y es aproximadamente SiO_{2} al 95%; "CHCl_{3}" se refiere a cloroformo; "CH_{2}Cl_{2}" y "DCM" se refieren a diclorometano; "conc." se refiere a concentrado; "DABCO" se refiere a 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octano; "DIEA" se refiere a N,N-diisopropiletilamina; "DMA" se refiere a N,N-dimetilacetamida; "DMF" se refiere a N,N-dimetilformamida; "DMSO" se refiere a sulfóxido de metilo; "DMT-MM" se refiere a cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolinio; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "EtOH" se refiere a etanol; "Et_{2}O" se refiere a éter dietílico; "FMOC" se refiere a 9H-fluoren-9-ilmetil éster; "h" se refiere a horas; "HCP" se refiere a ácido clorhídrico; "Me" se refiere a metilo; "MeOH" se refiere a metanol; "Me_{2}SO_{4}" se refiere a sulfato de dimetilo; "min" se refiere a minutos; "NaOH" se refiere a hidróxido sódico, "Na_{2}SO_{4} se refiere a sulfato sódico; "N-MM" se refiere a N-metilmorfolina; "Pd/C" se refiere a paladio sobre carbono; "PE" se refiere a éter de petróleo que puede estar sustituido con hexanos; "(Ph_{3}P)_{2}PdCl_{2}; se refiere a diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II); "(Ph_{3}P)_{4}Pd" se refiere a tetraquis(trifenilfosfina) paladio (0); "PS" se refiere a soportado en polímero; "T.A." se refiere a temperatura ambiente; "sat" se refiere a saturado; "TEA" se refiere a trietilamina; "TFA" se refiere a ácido trifluoroacético; "THF" se refiere a tetrahidrofurano; "CCF" se refiere a cromatografía en capa fina y "TMS" se refiere a trimetilsililo. Todos los demás términos y sustituyentes, a menos que se indique de otra manera, son como se han definido anteriormente.

Todos los demás términos y sustituyentes, a menos que se indique de otra manera, son como se han definido anteriormente. Los reactivos y materiales de partida son fácilmente disponibles para un especialista en la técnica.

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Esquema 1

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El Esquema 1 proporciona la síntesis de los compuestos de Fórmula l.

R_{10} y R_{11} son hidrógeno.

En el Esquema 1, Etapa A, un derivado ácido benzoico (1) adecuado se convierte en el derivado ácido nitrobenzoico (3) mediante un procedimiento conocido por un especialista en la técnica.

En el Esquema 1, Etapa B, el derivado ácido 2-(arilamino)-5-nitrobenzoico (4) se prepara a partir del acoplamiento del derivado ácido nitrobenzoico (3) y una anilina (2) adecuada en presencia de una base fuerte, por ejemplo, bis(trimetilsilil)amiduro de litio (LiHMDS) o diisopropilamiduro de litio, en un disolvente aprótico polar tal como tetrahidrofurano, acetonitrilo o dimetilformamida. Por ejemplo, la anilina (2) y el ácido nitrobenzoico (3) se disuelven en un disolvente adecuado orgánico y se enfrían a aproximadamente -58ºC en atmósfera de nitrógeno. La suspensión se trata con un exceso de una base adecuada, tal como la base de litio, LiHMDS, y se dejó calentar hasta temperatura ambiente. La reacción típicamente se completa entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 5 días. El derivado ácido nitrobenzoico (4) resultante puede aislarse retirando el disolvente, por ejemplo por evaporación a presión reducida o filtrando el sólido precipitado a través de Celite® y lavando con un disolvente adecuado. El derivado ácido nitrobenzoico (4) puede purificarse adicionalmente, si se desea, por procedimientos convencionales tales como cromatografía, cristalización, o destilación.

En el Esquema 1, Etapa C, el derivado ácido nitrobenzoico (4) se convierte en derivado éster metílico (5) mediante un procedimiento generalmente conocido en la técnica. Por ejemplo, el derivado ácido nitrobenzoico (4) en un disolvente adecuado se trata con bicarbonato sódico seguido de dimetilsulfato.

En el Esquema 1, Etapa D, una amina adecuada, tal como alilamina se añadió al derivado éster metílico (5) en un sistema disolvente adecuado tal como, metanol, THF y agua, para proporcionar el derivado alquinil-amino metil éster (6).

En el Esquema 1, Etapa E, el sustituyente nitro del derivado alquenil-amino metil éster (6) se convirtió en la amina (5) correspondiente de acuerdo con un procedimiento conocido en la técnica. Por ejemplo, el derivado nitro metil éster (6) se trata con cloruro de amonio en una mezcla de un disolvente adecuado, tal como metanol, y dioxano. Se añade hierro en polvo en atmósfera de nitrógeno y toda la mezcla se calienta a reflujo para proporcionar la amina (5).

En el Esquema 1, Etapa F, el benzamidazol (8) se forma a partir de la amina (5). Por ejemplo, la amina (5) en un disolvente adecuado, tal como metanol, se trata con acetato de formamidina y se calienta a reflujo en atmósfera de nitrógeno para proporcionar el benzamidazol (8).

En el Esquema 1, Etapa G, el benzamidazol (8) se convierte en un benzamidazol sustituido (9) tratando el benzamidazol (8) con yodometano en un disolvente adecuado, tal como acetonitrilo.

En el Esquema 1, Etapa H, el benzamidazol sustituido (9) se desprotege para proporcionar el compuesto (10).

En el Esquema 1, Etapa I, el compuesto (10) se trata con trimetil silanolato potásico en un disolvente, tal como THF/agua.

En el Esquema 1, Etapa J, un compuesto (11) se hace reaccionar con un éster activo, en presencia de una base, si fuera necesario, para producir un compuesto activado (12). Los ésteres activos preferidos incluyen trifluoroacetato de pentafluorofenilo y las bases preferidas incluyen diisopropiletilamina, trietilamina, 4-metilmorfolina, piridina o una piridina sustituida, por ejemplo, 4-dimetilaminopiridina o 2,6-dimetilpiridina. Los disolventes preferidos son disolventes apróticos polares tales como diclorometano, tetrahidrofurano, dimetilformamida, o N,N- dimetilacetamida.

En el Esquema 1, Etapa K, los compuestos de fórmula I se obtienen generalmente por la unión de un compuesto (12) con amina o alcoxilamina en presencia de una base, si fuera necesario. Las bases preferidas incluyen diisopropiletilamina, trietilamina, 4-metilmorfolina, piridina o una piridina sustituida, por ejemplo, 4-dimetilaminopiridina o 2,6-dimetilpiridina. Los disolventes preferidos son disolventes apróticos polares tales como diclorometano, tetrahidrofurano, dimetilformamida, o N,N-dimetilacetamida. Las reacciones generalmente se realizan a una temperatura entre aproximadamente -58ºC y aproximadamente 25ºC, y normalmente se completan en aproximadamente 1 hora a aproximadamente 5 días. El producto amida puede aislarse retirando el disolvente, por ejemplo por evaporación a presión reducida, y purificando adicionalmente, si se desea, por procedimientos convencionales tales como cromatografía, cristalización, o destilación.

Esquema 2

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En el Esquema 2, pueden usarse también grupos protectores Rq diferentes de alilo. Las etapas A, B, y C del Esquema 2 pueden realizarse de una manera análoga a la del Esquema 1.

Esquema 3

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En el Esquema 3, los compuestos de fórmula I, en la que R_{4} no es halógeno se preparan a partir de los compuestos de fórmula I en la que R_{4} es halógeno, por acoplamiento promovido por metal de transición con el reactivo M-R_{4} donde R_{4} no es halógeno (12) en un disolvente o disolventes adecuados tales como trietilamina, tetrahidrofurano o dimetilformamida. El acoplamiento promovido por metal de transición puede realizarse con un agente de acoplamiento de paladio (0) o paladio (II), tal como (Ph_{3}P)_{4}Pd o (Ph_{3}P)_{2}PdCl_{2}. Se agita toda la mezcla de aproximadamente 2 a 24 horas a temperatura ambiente. M se define como un grupo funcional que se sabe que transfiere un fragmento radicálico de carbono en los procedimientos de acoplamiento promovido por metal de transición. Los ejemplos de un grupo M adecuado incluyen trialquilestannilo, trialquilsililo, trimetilsililo, cinc, estaño, cobre, boro, magnesio y litio. Los ejemplos de un reactivo M-R_{4} (12) adecuado cuando R_{4} es alquenilo C_{2-4} es alil tributil estaño o tetravinil estaño, y cuando R_{4} es alquinilo C_{2-6} sustituido con OH es alcohol propargílico. Los halógenos preferidos, cuando R_{4} es halógeno, son bromo y yodo.

El compuesto de fórmula I resultante, así como el compuesto de Fórmula I protegido, pueden aislarse retirando el disolvente, por ejemplo por evaporación a presión reducida, y purificando adicionalmente, si se desea, por procedimientos convencionales tales como cromatografía, cristalización, o destilación.

Un especialista en la técnica debe entender que el sustituyente R_{4}, cuando R_{4} no es halógeno, puede transformarse adicionalmente, tal como por oxidación, reducción, desprotección, o hidrogenación.

Un compuesto en el que R_{4} es alquenilo C_{2-4} puede transformarse en un compuesto en el que R_{4} es -alquilo OH-sustituido tratando el doble enlace del alqueno con ozono y NaBH_{4}. Además, un compuesto en el que R_{4} es alquenilo C_{2-4} puede transformarse en un compuesto en el que R_{4} es alquilo sustituido con 2 sustituyentes -OH tratando el doble enlace del alqueno con OsO_{4}.

Un compuesto en el que R_{4} es un derivado alqueno o alquino puede reducirse en condiciones conocidas en la técnica, tales como mediante hidrogenación, tal como con Pd/C en una atmósfera de hidrógeno. Por ejemplo, el derivado alquino se disuelve en un disolvente adecuado, tal como etanol absoluto, en presencia de un catalizador metálico, tal como paladio sobre carbono. Esta mezcla se agita en una atmósfera de hidrógeno de aproximadamente 1 a 24 horas a temperatura ambiente para proporcionar el derivado totalmente saturado. Como alternativa, el derivado alquino se reduce parcialmente por hidrogenación para proporcionar el derivado alqueno. Por ejemplo, el derivado alquino se disuelve en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, en presencia de un catalizador, tal como catalizador de Lindlar o paladio sobre carbono y, si se desea, un compuesto adecuado que altera las acciones del catalizador, tal como quinolina o piridina. Esta mezcla se agita en una atmósfera de hidrógeno de aproximadamente 1 a 24 horas a temperatura ambiente para proporcionar el derivado alqueno.

El sustituyente R_{4} puede transformarse también en un R_{4} diferente mediante procedimientos convencionales de síntesis conocidos por un especialista en la técnica.

Un especialista en la técnica debe entender que la transformación de R_{4} como se muestra en el Esquema 3 puede realizarse en diversas etapas mediante la síntesis de los compuestos de la presente invención, si se desea. Por ejemplo, R_{4} puede transformarse antes del acoplamiento del éster (1) y la anilina (2) como se muestra en el Esquema 1, Etapa A.

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Las transformaciones adicionales de R_{4} se muestran en el Esquema 4 a continuación.

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Esquema 4

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En el Esquema 4, etapa A, el compuesto de fórmula Ig se disuelve en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano y se hace reaccionar con cloruro de metanosulfonilo dando el mesilato intermedio, después Nal en EtOAc dando el compuesto yoduro (13).

En el Esquema 4, etapa B, el compuesto yoduro (13) se hace reaccionar con una amina adecuada, tal como metilamina o dimetilamina, o un alcóxido adecuado dando compuestos de fórmula Ih.

Un especialista en la técnica debe entender que una anilina (2) puede prepararse para que incluya el R_{4} deseado.

La anilina (2) puede prepararse por técnicas y procedimientos fácilmente disponibles para el especialista en la técnica y siguiendo los procedimientos como se muestra en los siguientes Esquemas, o variantes análogas de los mismos. Adicionalmente, las anilinas (2) se muestran en los documentos USSN 10/349.801 presentada el 23 de enero de 2003 y USSN 10/349.826 presentada el 23 de enero de 2003, cuya descripción se incorpora a este documento como referencia. Estos Esquemas no pretenden limitar el ámbito de la invención en modo alguno.

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Esquema 5

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En el Esquema 5, un para-nitroestireno adecuadamente sustituido se hace reaccionar con metiluro de dimetiloxosulfonio para formar el para-nitrociclopropilbenceno sustituido. La reducción del para-nitrociclopropilbenceno con hierro en presencia de ácido débil da la anilina deseada.

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Esquema 6

21

En el Esquema 6, la acetamida orto-sustituida adecuada se hace reaccionar con bromociclobutano, bromociclopropano, o bromociclohexano en condiciones típicas de Friedel-Craft, como sabe un especialista en la técnica, dando las para-cicloalquilanilinas deseadas. La acetamida se desprotege en condiciones conocidas por un especialista en la técnica para proporcionar las para-cicloalquilmetilanilinas deseadas.

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Esquema 7

22

En el Esquema 7, Etapa A, una amina adecuada o alcóxido (14) se hace reaccionar con un bromuro de 4-terc-butoxicarbonilamino-3-sustituido-bencilo (13), tal como bromuro de 4-terc-butoxicarbonilamino-3-fluorobencilo (J. Med. Chem., 2000; 43:5015). En la Etapa B, el grupo protector BOC del compuesto de estructura (15) se hidroliza con, por ejemplo, TFA, proporcionando la anilina (2a) deseada.

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Esquema 8

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En el Esquema 8, Etapa A, un 3-sustituido-4-nitrofenol (16) adecuado, tal como 3-fluoro-4-nitrofenol, se alquila con un compuesto de estructura (15) en presencia de una base adecuada para proporcionar un compuesto de estructura (18). En la Etapa B, el compuesto (18) se reduce por hidrogenación en presencia de un catalizador metálico, tal como paladio sobre carbono, en una atmósfera de hidrógeno para proporcionar la anilina (2b) deseada.

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Esquema 9

24

En el Esquema 9, un 4-(aminofenil)tiocianato (19) adecuado, se alquila con un compuesto de estructura (15') en presencia de una base nucleófila adecuada para proporcionar un compuesto alquiltio de estructura (2c). Después de la reacción en condiciones estándar para formar la difenilamina (3), en la que R_{4} es -S-(alquilo), como en el Esquema 1 anterior, este compuesto se oxida después al compuesto sulfonilo correspondiente, generalmente también, la difenilamina (3), en la que R_{4} es -SO_{2}-(alquilo).

Esquema 10

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En el Esquema 10, la anilina (2d) orto-sustituida o no sustituida apropiada se acetila con anhídrido acético en presencia de sal de indio del ácido trifluorometanosulfónico dando la anilina protegida (20). La clorosulfonación de una manera típica, como se sabe en la técnica, da el derivado cloruro de sulfonilo (21) que se hace reaccionar con un exceso de una amina adecuada en un disolvente tal como diclorometano o dicloroetano dando la para-aminobencenosulfonamida (22) protegida. La desprotección mediada por ácido en el disolvente apropiado da la anilina (2e) deseada.

Como alternativa, puede prepararse la anilina (2e) deseada en la que R_{2} es metilo, flúor o cloro, usando el compuesto (21) como material de partida. Cuando R_{2} es flúor, el derivado cloruro de sulfonilo (21) es un compuesto conocido en la bibliografía (Patente Alemana DE 2630060, 1958). Similarmente, cuando R_{2} es metilo, el derivado cloruro de sulfonilo (21) se conoce también en la bibliografía (Patente Alemana DE 2550150, 1958). Finalmente, el derivado cloruro de sulfonilo (21) en el que R_{2} es cloro está disponible en el mercado.

Además del procedimiento descrito en el Esquema 10, un especialista habitual en la técnica entenderá que hay numerosas maneras de acetilar anilinas. Por ejemplo, calentando la anilina y el anhídrido acético juntos en un disolvente adecuado, tal como ácido acético, se obtendría el mismo resultado.

Los compuestos de la presente invención incluyen también, aunque sin limitación los siguientes compuestos:

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260

En una realización, los compuestos de la presente invención incluyen

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y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización, los compuestos de la presente invención incluyen también

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y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como se usa en este documento, el término "paciente" se refiere a cualquier animal de sangre caliente tal como, aunque sin limitación, un ser humano, un caballo, un perro, un conejillo de indias, o un ratón. Preferiblemente, el paciente es humano.

El término "tratar" para los propósitos de la presente invención se refiere al tratamiento, profilaxis o prevención, mejora o eliminación de una cierta afección una vez que se ha establecido dicha afección.

Los inhibidores selectivos de MEK 1 o MEK 2 son aquellos compuestos que inhiben las enzimas MEK 1 o MEK 2, respectivamente sin inhibir sustancialmente otras enzimas tales como MKK3, PKC, Cdk2A, fosforilasa quinasa, EGF, y quinasas del receptor PDGF, y C-src. En general, un inhibidor selectivo de MEK 1 o MEK 2 tiene una CI_{50} para MEK 1 o MEK 2 que es al menos una quincuagésima parte (1/50) de su CI_{50} para una de las otras enzimas mencionadas anteriormente. Preferiblemente, un inhibidor selectivo tiene una CI_{50} que es al menos 1/100, más preferiblemente 1/500, e incluso más preferiblemente 1/1000, 1/5000, o menos de su CI_{50} para una o más de las enzimas mencionadas anteriormente.

Las composiciones descritas son útiles para tratamientos profilácticos y terapéuticos para enfermedades o afecciones relacionadas con la hiperactividad de MEK, así como enfermedades o afecciones moduladas por la cascada MEK. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, apoplejía, choque séptico, insuficiencia cardiaca, osteoartritis, artritis reumatoide, rechazo de órganos transplantados, y diversos tumores tales como de ovario, pulmón, pancreático, cerebral, prostático y colorrectal.

La invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para tratar enfermedades proliferativas, tales como cáncer, reestenosis, psoriasis, enfermedad autoinmune, y aterosclerosis. Otros aspectos de la invención incluyen procedimientos para tratar cánceres relacionados con MEK (incluyendo los relacionados con ras), sólidos o hematopoyéticos. Los ejemplos de cánceres incluyen cáncer de cerebro, mama, pulmón, tal como de pulmón microcítico, de ovario, pancreático, prostático, renal, colorrectal, cervical, leucemia aguda, y cáncer gástrico. Los aspectos adicionales de la invención incluyen procedimientos para tratar o reducir los síntomas de rechazo de xenoinjerto (transplante de célula(s), piel, extremidad, órgano o médula ósea), osteoartritis, artritis reumatoide, fibrosis quística, complicaciones de diabetes (incluyendo retinopatía diabética y nefropatía diabética), hepatomegalia, cardiomegalia, apoplejía (tal como apoplejía isquémica focal aguda e isquemia cerebral global), insuficiencia cardiaca, choque séptico, asma, enfermedad de Alzheimer, y dolor crónico o neuropático. Los compuestos de la invención son útiles también como agentes antivirales para tratar infecciones virales tales como VIH, virus de la hepatitis (B) (HBV), virus del papiloma humano (HPV), citomegalovirus (CMV), y virus de Epstein-Barr (EBV). Estos procedimientos incluyen la etapa de administrar a un paciente en necesidad de dicho tratamiento, o que padezca dicha enfermedad o afección, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito de fórmula I o una composición farmacéutica del mismo.

El término "dolor crónico" para los propósitos de la presente invención incluye, aunque sin limitación, dolor neuropático, dolor idiopático, y dolor asociado con alcoholismo crónico, deficiencia vitamínica, uremia, o hipotiroidismo. El dolor crónico está asociado con numerosas afecciones incluyendo, aunque sin limitación, inflamación, artritis, y dolor post-operatorio.

Como se usa en este documento, el término "dolor neuropático" está asociado con numerosas afecciones que incluyen, aunque sin limitación, inflamación, dolor post-operatorio, dolor del miembro fantasma, dolor de quemadura, gota, neuralgia trigeminal, dolor agudo herpético y post-herpético, causalgia, neuropatía diabética, avulsión del plexo, neuroma, vasculitis, infección viral, lesión por aplastamiento, lesión por constricción, lesión tisular, amputación de miembros, dolor artrítico, y lesión nerviosa entre el sistema nervioso periférico y el sistema nervioso central.

La invención se refiere también a procedimientos de terapia combinada, tal como un procedimiento para tratar cáncer, en el que el procedimiento incluye adicionalmente proporcionar terapia por radiación o quimioterapia, por ejemplo, con inhibidores mitóticos tales como taxano o un alcaloide de la vinca. Los ejemplos de inhibidores mitóticos incluyen paclitaxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, vinorelbina, y vinflunina. Otras combinaciones terapéuticas incluyen un inhibidor MEK de la invención y un agente anticáncer tal como cisplatino, 5-fluorouracilo o 5-fluoro-2-4(1H,3H)-pirimidinadiona (5FU), flutamida, y gemcitabina.

La quimioterapia o terapia por radiación puede administrarse antes, simultáneamente, o después de la administración de un compuesto descrito de acuerdo con las necesidades del paciente.

Los especialistas en la técnica podrán determinar, de acuerdo con procedimientos conocidos, la cantidad terapéuticamente eficaz o dosificación apropiada de un compuesto de la presente invención a administrar a un paciente, teniendo en cuenta factores tales como la edad, peso, estado de salud general, el compuesto administrado, la vía de administración, el tipo de dolor o afección que requiere el tratamiento, y la presencia de otros medicamentos. En general, una cantidad eficaz o una cantidad terapéuticamente eficaz estará entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 1000 mg/kg por día, preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 300 mg/kg de peso corporal, y las dosificaciones diarias estarán entre aproximadamente 10 y aproximadamente 5000 mg para un sujeto adulto de peso normal. Las cápsulas u otras formulaciones disponibles en el mercado (tales como líquidos y comprimidos recubiertos con una película) de 100, 200, 300, o 400 mg pueden administrarse de acuerdo con los procedimientos descritos.

Los compuestos de la presente invención preferiblemente se formulan antes de la administración. Por lo tanto, otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En la preparación de las composiciones de la presente invención, el ingrediente activo, tal como un compuesto de Fórmula I, normalmente se mezclará con un vehículo, o se diluirá con un vehículo o se encerrará en un vehículo. Las formas de dosificación unitaria o composiciones farmacéuticas incluyen comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, soluciones y suspensiones orales acuosas y no acuosas, y soluciones parenterales envasadas en recipientes adaptados para la subdivisión en dosis individuales.

Las formas de dosificación unitaria pueden adaptarse para diversos procedimientos de administración, incluyendo formulaciones de liberación controlada, tales como implantes subcutáneos. Los procedimientos de administración incluyen por vía oral, rectal, parenteral (intravenosa, intramuscular, subcutánea), intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intravesical, local (gotas, polvos, pomadas, geles, o crema), y por inhalación (un pulverizador bucal o nasal).

Las formulaciones parenterales incluyen soluciones acuosas o no acuosas farmacéuticamente aceptables, dispersión, suspensiones, emulsiones, y polvos estériles para la preparación de las mismas. Los ejemplos de vehículos incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol), aceites vegetales, y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. La fluidez puede mantenerse usando un recubrimiento tal como lecitina, un tensioactivo, o manteniendo un tamaño de partícula apropiado. Los vehículos para las formas de dosificación sólidas incluyen (a) cargas o extensores, (b) aglutinantes, (c) humectantes, (d) agentes disgregantes, (e) retardadores de la disolución, (f) aceleradores de la absorción, (g) adsorbentes, (h) lubricantes, (i) agentes de tamponación, y (j) propulsores.

Las composiciones pueden contener también adyuvantes tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes, y dispersantes; agentes antimicrobianos tales como parabenos, clorobutanol, fenol, y ácido sórbico; agentes isotónicos tales como un azúcar o cloruro sódico; agentes de prolongación de la absorción tales como monoestearato de aluminio y gelatina; y agentes potenciadores de la absorción.

Los siguientes ejemplos representan la síntesis típica de los compuestos de la presente invención como se ha descrito de manera general anteriormente. Estos ejemplos son sólo ilustrativos y no pretenden limitar la invención de ninguna manera. Los reactivos y materiales de partida están fácilmente disponibles para un especialista habitual en la técnica.

Ejemplo 1

(Referencia)

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(2-OH-etoxi)-amida del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico

Etapa A

Preparación de ácido 2,3,4-trifluoro-5-nitrobenzoico

30

Se añadió HNO_{3} fumante gota a gota a H_{2}SO_{4} (5 l) conc. frío (5 a -10ºC) y se agitó en un matraz de fondo redondo de tres bocas (20 l), manteniendo la temperatura entre 5 y -10ºC. Después se añadió ácido 2,3,6-trifluorobenzoico (1 kg, 5,6 mol) en porciones, manteniendo la temperatura a 5ºC y después de completar la adición la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se agitó durante 2 h y (la suspensión se convierte en una solución de color amarillo claro), después se vertió en 30 kg de hielo picado. La mezcla se extrajo con éter (3 X 4,0 l) y los extractos orgánicos se lavaron con agua (2 X 2 l), salmuera (2,0 l), se secaron sobre MgSO_{4} anhidro, se filtraron y evaporaron al vacío. El residuo (sólido de color crema) obtenido se re-cristaliza en cloroformo caliente proporcionando el compuesto del título en forma de un sólido (amarillo). Rendimiento: 880 g (50%), pf. 128-129ºC.

Etapa B

Preparación de ácido 3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-5-nitro-benzoico

31

Una solución agitada de ácido 2,3,4-trifluoro-5-nitrobenzoico (400 g, 1,9 mol) en THF seco (6 l) en atmósfera de nitrógeno se enfrió a -58ºC y una solución de 2,0 l de LiHMDS 1,0 M (1,0 M, 2 l, 2,0 mol) se añadió gota a gota a -58ºC. Esta mezcla de reacción (solución amarilla que se volvió una suspensión de color amarillo anaranjado) se denominó mezcla de reacción A.

En un matraz de reacción diferente, 2-fluoro-4-yodoanilina (400 g, 1,0 mol) en THF (4 l) se enfrió a -58ºC en atmósfera de nitrógeno y una solución de LiHMDS (1,0 M, 3,65 l, 3,6 mol) se añadió gota a gota a -58ºC (la solución amarilla se convirtió en una suspensión blanca). Esta mezcla de reacción se denominó mezcla B.

Ambas mezclas de reacción A y B se agitaron durante 45 min., manteniendo la temperatura a -58ºC y la mezcla A se transfirió en la mezcla de reacción B mediante una cánula. La suspensión naranja resultante se agitó durante 1 h a -58ºC, después se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante una noche en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió a -10ºC y se ajustó a pH 1 burbujeando HCl gas. El sólido blanco separado se filtró a través de un lecho corto de Celite®, se lavó con THF (3 l) y el filtrado (pardo) se evaporó al vacío. El residuo (sólido de color amarillo anaranjado) obtenido se trituró con solución acuosa de HCl al 10% (3 l) y el sólido separado se filtró, se lavó con HCl ac. al 10% (2 X 1 l), agua (4 X 1,0 l) y el sólido húmedo se recogió en tolueno (1 l). La solución de tolueno se evaporó retirando el agua y el residuo obtenido se recogió en metanol caliente (3,0 l), se filtró, se lavó con metanol (2 l) después se secó dando el compuesto del título en forma de un sólido (amarillo). Rendimiento: 543,9 g (55,35%).

Etapa C

Preparación de éster metílico del ácido 3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-5-nitro-benzoico

32

A una solución de ácido 3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-5-nitro-benzoico (595,3 g, 1,363 mol) en acetona (9 l) se le añadió bicarbonato sódico (609,0 g, 3,48 mol) y la mezcla se agitó durante 10 min. A esta suspensión se le añadió dimetilsulfato (285,6 ml, 3,026 mol) y se calienta a reflujo durante 3 h (se confirmó que la reacción se había completado mediante CCF-hexano: EtOAc/4:1). Se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó al vacío. El residuo (amarillo) se digirió adicionalmente en metanol caliente (2 l), se filtró, se lavó con metanol y se secó dando el compuesto del título en forma de un sólido (amarillo). Rendimiento: 405,63 g (65,54%).

Etapa D

Preparación de éster metílico del ácido 4-alilamino-3-fluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-5-nitro-benzoico

33

Una suspensión de éster metílico del ácido 3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-5-nitro-benzoico (456,0 g, 1,008 mol) en una mezcla de metanol (4,5 l), tetrahidrofurano (4,5 l) y agua (1,13 l) se trató con alilamina (441,89 ml, 336,25 g, 5,88 mol) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. (se confirmó que la reacción se había completado mediante CCF-DCM:MeOH/9:1). La suspensión de color amarillo se filtró y se lavó con hexano retirando la alilamina que no había reaccionado y se secó dando el compuesto del título en forma de un sólido (amarillo). Rendimiento: 350 g (50,90%), pf. 153-154ºC.

Etapa E

Preparación de éster metílico del ácido 4-alilamino-5-amino-3-fluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-benzoico

34

Una suspensión agitada de éster metílico del ácido 4-alilamino-3-fluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-5-nitro- benzoico (125,0 g, 0,25 mol), cloruro de amonio (300,0 g, 8,58 mol) en una mezcla v/v 1:1 de metanol (4,0 l) y dioxano (4,0 l) se calentó hasta que se convirtió en una solución transparente y se añadió hierro en polvo (150,0 g, 2,68 mol) bajo una corriente positiva de nitrógeno gas. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 16 h (se confirmó que la reacción se había completado mediante CCF-EtOAc-hexano:/3:5) y se vertió sobre una mezcla de 10 kg de hielo picado y 6,5 l de bicarbonato sódico saturado. A la mezcla se le añadió 1 kg de Celite®, se agitó y la suspensión espesa se filtró a través de un lecho de Celite®. El lecho de Celite® se enjuagó con agua, después con acetato de etilo y la fase de acetato de etilo se separó. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 l) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (3 l), salmuera (2 l), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtraron y se evaporaron al vacío dando el compuesto del título en forma de un aceite (de color pardo claro), que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Rendimiento: 110 (93,55%).

Etapa F

Preparación de éster metílico del ácido 1-alil-5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-carboxílico

35

Una suspensión agitada de éster metílico del ácido 4-alilamino-5-amino-3-fluoro-2-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-benzoico (313,52 g, 0,683 mol) y acetato de formamidina (313,59 g, 3,01 mol) en metanol (2 l) se calentó a reflujo durante una hora en atmósfera de nitrógeno (se confirmó que la reacción se había completado mediante CCF-EtOAc:hexano/1:1). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, después se diluyó con bicarbonato sódico acuoso saturado (2 l) y agua (2 l). El sólido separado se filtró y se secó dando un sólido pardo, que se re-cristaliza en metanol dando el compuesto del título en forma de un sólido (rosáceo claro) Rendimiento: 225 g, (50,23%), pf. 154-155ºC.

Etapa G

Preparación de yoduro de 3-alil-4-fluoro-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-6-metoxicarbonil-1-metil-3H-benzoimidazol-1-io

36

Una mezcla de éster metílico del ácido 1-alil-5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-carboxílico (50,0 g, 0,106 mol), acetonitrilo (150 ml) y yodometano (224 g, 80 ml, 1,55 mol) se agitó a 50ºC en un tubo cerrado herméticamente durante 12 h. La mezcla de reacción (se enfrió y se abrió a la atmósfera retirando el yodometano, después el residuo se vertió en éter (3 l). El sólido separado se filtró, se lavó con éter y se secó dando el compuesto del título en forma de un sólido. Rendimiento: 58 g (65,33%), pf. >200ºC.

Etapa H

Preparación de éster metílico del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico

37

A una mezcla agitada de yoduro de 3-alil-4-fluoro-5-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-6-metoxicarbonil-1-metil-
3H-benzoimidazol-1-io (150,05 g, 0,258 mol), trifenil fosfina (35,56 g, 0,136 mol, lote Aldrich Nº: CO 02815 TI) y tetraquis(trifenilfosfina) Pd (0) (25,64 g, 0,022 mol, Lancaster 10058 369) en cloruro de metileno (2 l) a 0ºC se le añadió gota a gota pirrolidina (34,40 ml, lote Aldrich Nº: JI 01530KU). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente (se confirmó que la reacción se había completado mediante TLC-DCM:MeOH 9:1) y se evaporó al vacío. El residuo se repartió entre DCM (1,5 l) y HCl 1 N (1,5 l) y la fase orgánica se separó. La solución de DCM se lavó con solución saturada de dihidrogenofosfato potásico (1 l), seguido de una solución de salmuera (1 l), después se secó sobre Na_{2}SO_{4} anhidro, se filtró y se evaporó al vacío. El sólido (amarillo claro) obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM:MeOH/ 9,5:0,5) dando el compuesto del título en forma de un sólido. Rendimiento: 86 g (51,66%).

Etapa I

Preparación de ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico

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A una solución de éster metílico del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (136,3 g, 0,305 mol) en tetrahidrofurano (1,5 l) se le añadió trimetilsilonato potásico (155,95 g, 1,23 mol) a temperatura ambiente (una vez completada la adición la mezcla de reacción se convirtió en una solución de color pardo oscuro). La mezcla de reacción se agitó durante 3,5 h (se confirmó que la reacción se había completado mediante TLC-DCM:MeOH 1:9), se inactivó con agua (25m1) y se evaporó al vacío retirando el THF. El residuo se ajustó después a pH 1 con HCl conc. y el sólido (blanco cremoso) se filtró, se lavó con agua (2 X 200 ml) y después se secó dando el compuesto del título. Rendimiento: 96 g (52,53%).

Etapa J

Preparación de pentafluorofenil éster del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-carboxílico

39

Una solución de pentafluorofenol (21,6 g, 0,113 mol) DMF (100 ml) a temperatura ambiente se añadió lentamente a una suspensión de ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (40,0 g 0,093 mol) en 165 ml de THF, seguido de diciclohexilcarbodiimida (24,14 g, 0,118 mol). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente (TLC-EtOAc), se evaporó al vacío y se añaden 200 g de hielo picado a la solución residual de DMF. El compuesto amarillo claro separado se filtró y se secó al vacío dando el compuesto del título (bruto), que se lleva directamente a la siguiente etapa sin purificación. Rendimiento: 55 g (99%).

Etapa K

Preparación de (2-OH-etoxi)-amida del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico

A una solución de color amarillo claro de 2,3,4,5,6-pentafluorofenil-4-fluoro-5[(2-fluoro-4-yodofenil)-amino]-1-metilbenzimidazol-6-carboxilato (55,0 g, 0,092 mol) en DMF (360 ml) se le añadió gota a gota 2-(aminooxi)etan-1-ol (25,31 y, 0,354 mol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h (TLC-EtOAc:Hex/1:1), se evaporó al vacío hasta la mitad de su volumen y se le añadió 1 kg de hielo picado. El producto espeso pegajoso se extrajo con acetato de etilo (250 ml x 3) y el extracto orgánico se lavaron con salmuera (250 ml X1), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se evaporaron al vacío. El producto bruto (40 g) se purificó por cromatografía en columna en gel de sílice eluyendo con EtOAc:Hex (30:50) dando el compuesto del título puro (15 g) y una mezcla de compuestos deseados y no deseados (13 g). Rendimiento: 15 g (34,09%), pf. 203-205ºC.

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Ejemplo 2

40

Amida del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico

Un vial de reacción se cargó con el producto del Ejemplo 1, Etapa J, pentafluorofenil éster del ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-4-yodo-fenilamino)-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (0,5229 g, 0,8585 mmol) y DMF (1 ml). Se añadió amoniaco acuoso saturado (3 ml) a la solución, dando un precipitado blanco inmediatamente. La mezcla se agitó durante 10 minutos y después se filtró al vacío y se succionó dando el producto sólido blanco (0,3509 g). Rendimiento: 93,3%, pf 265-268ºC DESC.

^{1}H-RMN (400 MHz; DMSO-d_{6}) \delta 8,59 (5, 1 H), 8,34 (s, 1 H), 8,09 (s, 1 H), 5,84 (s, 1 H), 5,66 (s, 1 H), 5,50 (dd, 1H, J = 11,0, 2,0 Hz), 5,26 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,30 (m, 1 H), 3,86 (s, 3H). ^{19}F-RMN (_{356} MHz; DMSO-d_{5}) \delta -131,31 (t, 1F, J = 10,1 Hz), -133,85 (s, 1F).

Microanálisis Calculado para C_{15}H_{11}F_{2}IN_{4}O/encontrado %C 42,08/42,11, %H 2,59/2,41, %N 13,08/12,84, %F 8,85/9,08.

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Ejemplo 3 Ensayo Celular para Medir la Inhibición de MEK

Los inhibidores de MEK se evaluaron determinando su capacidad de inhibir la fosforilación de MAP quinasa (ERK) en células de carcinoma de colon murino 26 (C26). Como ERK1 y ERK2 representan los únicos sustratos conocidos para MEK1 y MEK2, la medición de la inhibición de la fosforilación de ERK en células proporciona una lectura directa de la inhibición celular de MEK por los compuestos de la invención. La detección de la fosforilación de ERK se realizó por transferencia de Western o en formato ELISA. Brevemente, los ensayos implican el tratamiento de células C26 en crecimiento exponencial con concentraciones variables del compuesto de ensayo (o vehículo de control) durante una hora a 35ºC. Para el ensayo de transferencia de Western, las células se aclaran libres de compuesto/vehículo y se lisan en una solución que contiene NaCl 50 mM, fosfato de glicerol 50 mM, HEPES 10 mM, pH 5,4, Triton X-100 al 1%, Na_{3}VO_{4} 1mM, PMSF 100 \muM, leupeptina 10 \muM y pepstatina 10 \muM. Los sobrenadantes después se sometieron a electroforesis en gel y se hibridaron a un anticuerpo primario que reconoce ERK2 y ERK1 fosforilados dualmente. Para evaluar los niveles totales de MAPK, las bandas transferencia posteriormente se "extraen" y se vuelven a sondear con una mezcla 1:1 de anticuerpos policlonales que reconocen ERK1 y ERK2 no fosforilados. Para el ensayo ELISA de pERK, se consiguen kits de Ensayo inmunométrico pERK TiterZyme Enzyme de Assay Designs, Inc (Ann Arbor, MI). Brevemente, las células se recogen en solución de lisis que contiene \beta-glicerofosfato 50 mM, HEPES 10 mM, pH 5,4, NaCl 50 mM, EDTA 2 mM y SDS al 1% y los lisados proteicos se diluyen 1:15 con tampón de Ensayo suministrado antes de la ejecución del ensayo. Las etapas posteriores se realizaron esencialmente como recomienda el fabricante.

Los datos de inhibición generados por el protocolo anterior se describen en la Tabla I. Si se ensayaran varias concentraciones de inhibidor, se determinarían valores CI_{50} (la concentración que da un 50% de inhibición) de manera gráfica a partir de la curva de respuesta a dosis para el % de inhibición. Por el contrario, se presentan los porcentajes de inhibición a concentraciones medidas.

TABLA I Inhibición Celular de la Fosforilación de ERK por Compuestos de la Invención

41

Ejemplo 4 Modelo de Rata de Edema en la Almohadilla Plantar inducido por Carragenano (CFE)

A ratas macho Wistar exogámicas (135-150 g, Charles River Labs) se les dosifica por vía oral 10 ml/kg de vehículo o compuesto de ensayo 1 hora antes de la administración de una suspensión sonicada de carragenano (1 mg/0,1 ml de solución salina). El carragenano se inyecta en la región subplantar de la pata trasera derecha. El volumen de la pata se determina por pletismografía con mercurio inmediatamente después de la inyección y otra vez cinco horas después de la inyección de carragenano. Se determina el porcentaje de inhibición del edema, y se calcula la DI40 por regresión lineal. Las diferencias en la hinchazón en comparación con animales de control se evalúan por un ANOVA de 1 vía, seguido del ensayo de Dunnett.

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Ejemplo 5 Artritis Inducida por Colágeno en Ratones

La artritis inducida por colágeno de tipo II (CIA) en ratones es un modelo experimental de artritis que tiene varias características patológicas, inmunológicas, y genéticas en común con artritis reumatoide. La enfermedad se induce por inmunización de ratones DBA/1 con 100 \mug de colágeno de tipo II, que es un componente principal del cartílago de articulaciones, suministrado por vía intradérmica en adyuvante completo de Freund. La susceptibilidad a la enfermedad se regula por el locus génico MHC de clase II, que es análogo a la asociación de artritis reumatoide con HLA-DR4.

Se desarrolla una artritis progresiva e inflamatoria en la mayoría de los ratones inmunizados, caracterizada en que la anchura de la pata aumenta hasta un 100%. Se administra un compuesto de ensayo a los ratones en un intervalo de cantidades, tales como 20, 60, 100, y 200 mg/kg de peso corporal/día. La duración del ensayo puede ser de varias semanas a unos pocos meses, tal como 40, 60, u 80 días. Se usa un índice de valoración clínico para evaluar la progresión de la enfermedad desde eritema y edema (fase 1), deformación articular (fase 2), a anquilosis articular (fase 3). La enfermedad es variable en que puede afectar a una o a todas las patas del animal, provocando un valor posible total de 12 para cada ratón. La histopatología de una articulación artrítica revela sinovitis, formación de pannus, y erosiones del cartílago y el hueso. Todas las cepas de ratón que son susceptibles a CIA tienen alta sensibilidad de anticuerpos a colágeno de tipo II, y hay una marcada respuesta celular a CII.

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Ejemplo 6 Artritis mono articular inducida por SCW

La artritis se induce como se describe por Schwab y col., Infection and Immunity, 1991; 59:4436-4442 con modificaciones minoritarias. Las ratas reciben 6 \mug de SCW sonicado [en 10 \mul de PBS de Dulbecco (DPBS)] por una inyección intra-articular en la articulación tibiotalar derecha en el Día 0. En el Día 21, se inicia el DTH con 100 \mug de SCW (250 \mul) administrado IV. Para estudios de compuestos orales, los compuestos se suspenden en vehículo (hidroxipropilmetilcelulosa al 0,5%/Tween 80 al 0,2%), se sonican, y se administran dos veces al día (10 ml/kg de volumen) comenzando 1 hora antes de la reactivación con SCW. Los compuestos se administran en cantidades entre 10 y 500 mg/kg de peso corporal/día, tal como 20, 30, 60, 100, 200, y 300 mg/kg/día. Las mediciones de edema se obtienen determinando los volúmenes de medida inicial de la pata trasera sensibilizada antes de la reactivación en el Día 21, y comparándolos con los volúmenes en los siguientes tiempos puntuales tales como Día 22, 23, 24, y 25. El volumen de la pata se determina por pletismografía con mercurio.

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Ejemplo 7 Modelo de transplante oreja-corazón de ratón

Fey T.A. y col. describen procedimientos para el transplante de injertos cardiacos de corazón neonato divididos en la pinna de la oreja de ratones y ratas (J. Pharm. y Toxic Meth., 1998; 39:9-15). Los compuestos se disuelven en soluciones que contienen combinaciones de etanol absoluto, hidroxipropilmetilcelulosa al 0,2% en agua, propilenglicol, cremofor, y dextrosa, u otro disolvente o vehículo de suspensión. A los ratones se les dosifica por vía oral o intraperitoneal una vez, dos veces o tres veces al día desde el día del transplante (Día 0) hasta el Día 13 o hasta que los injertos se han rechazado. A las ratas se les dosifica una vez, dos veces o tres veces al día desde el Día 0 hasta el Día 13. Cada animal se anestesia y se hace una incisión en la base de la oreja del receptor, cortando sólo la epidermis y la dermis dorsales. La incisión se abre y se continúa hacia abajo hasta el cartílago paralela a la cabeza, y suficientemente ancha para acomodar el tunelado apropiado para una rata o la herramienta de inserción para un ratón. Una cría de rata o ratón neonato con menos de 60 horas de edad se anestesia y se le disloca cervicalmente. Se retira el corazón del pecho, se aclara con solución salina, se bisecciona longitudinalmente con un escalpelo, y se aclara con solución salina estéril. El fragmento de corazón del donante se coloca en el túnel preformado con la herramienta de inserción y el aire o fluido residual se expulsa suavemente del túnel con ligera presión. No se necesita suturado, unión adhesiva, vendaje, o tratamiento con antibióticos.

Los implantes se examinan a un aumento de 10 a 20 veces con un microscopio de disección estereoscópico sin anestesia. Los receptores cuyos injertos no están latiendo visiblemente pueden anestesiarse y evaluarse respecto a la presencia de actividad eléctrica usando microelectrodos con clavijas subdérmicas de platino Grass E-2 colocados en la pinna o directamente en el injerto y un tacógrafo. Los implantes pueden examinarse de 1 a 4 veces al día durante 10, 20, 30 o más días. La capacidad de un compuesto de ensayo de mejorar los síntomas del rechazo del transplante puede compararse con un compuesto de control tal como ciclosporina, tracolimus, o lefluonomida administrada por vía oral.

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Ejemplo 8

La actividad analgésica de los compuestos de la presente invención se evalúa por un ensayo con ratas. Se inyecta carragenano a ratas que pesan de 155 a 200 g (al 2% en solución acuosa de cloruro sódico al 0,9%, volumen de inyección de 100 \mul) en la almohadilla plantar de una extremidad trasera. Las ratas se colocan en una placa de vidrio con iluminación de una lámpara de halógeno colocada directamente bajo la pata inyectada. El tiempo (en segundos) desde el inicio de la iluminación hasta que la extremidad trasera se retira del vidrio, se mide y se valora como Tiempo de Espera de Retirada de la Pata (PWL). Las sustancias fármaco se administraron por inyección por sonda oral 2½ horas después de la inyección de carragenano en la almohadilla plantar. Se midió PWL antes de la inyección de carragenano, justo antes de la inyección de fármaco, y 1, 2 (y algunas veces 3) horas después de la inyección de fármaco.

El carragenano (un polisacárido extraído de alga marina) provoca una inflamación estéril cuando se inyecta bajo la piel. La inyección en la almohadilla plantar de una rata provoca poco o ningún comportamiento espontáneo relacionado con el dolor pero induce hiperalgesia (respuestas de comportamiento relacionado con el dolor de intensidad más alta que la esperada) a estímulos térmicos o mecánicos periféricos. Esta hiperalgesia es máxima 2 a 3 horas después de la inyección. El tratamiento de las ratas con diversos fármacos analgésicos reduce la hiperalgesia medida de este modo y es un ensayo convencional para la detección de la actividad analgésica en ratas. (Hargreaves K, Dubner R, Brown F, Flores C, Joris J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain, 1988; 32:55-88 y Kayser V, Guilbaud G. Local and remote modifications of nociceptive sensitivity during carrageenan-induced inflammation in the rat. Pain, 1985; 28:99-108). Las ratas no tratadas tienen un PWL de aproximadamente 10 segundos. La inyección con carragenano reduce el PWL a aproximadamente 3 segundos durante al menos 4 horas, lo que indica una hiperalgesia térmica. La inhibición de la respuesta de hiperalgesia térmica por carragenano se determina por la diferencia entre PWL reducido antes del tratamiento con fármaco y después del tratamiento con fármaco, y se expresó como porcentaje de inhibición de la respuesta. La administración de inhibidores de MEK redujo de manera dependiente de la dosis la hiperalgesia térmica.

Aunque la invención se ha ilustrado por referencia a realizaciones específicas y preferidas, los especialistas en la técnica reconocerán que pueden hacerse variaciones y modificaciones a través de la experimentación de rutina y práctica de la invención. Por tanto, la invención no pretende limitarse por la descripción anterior, sino que se define por las reivindicaciones adjuntas y sus equivalentes.

Claims

1. Un compuesto de Fórmula

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en la que

W es 420

Q es -NH_{2};

R_{2} es hidrógeno, cloro, flúor o metilo;

R_{4} es bromo, cloro, flúor, yodo, alquilo C_{1-6}, alquenilo C_{2-4}, alquinilo C_{2-6}, cicloalquilo C_{3-6}, -(CH_{2})-cicloalquilo C_{3-6}, ciano, -O-(alquilo C_{1-4}), -S-(alquilo C_{1-2}), -SOCH_{3}, -SO_{2}CH_{3}, -SO_{2}NR_{6}R_{7}, -C\equivC-(CH_{2})_{n}NH_{2}, -C\equivC-(C
H_{2})_{n}NHCH_{3}, -C\equivC-(CH_{2})_{n}N(CH_{3})_{2}, -C\equivC-CH_{2}OCH_{3}, -C=C(CH_{2})_{n}, -C=C-(CH_{2})_{n}NH_{2}, -CHCHCH_{2}OCH_{3}, -CHCH-(CH_{2})_{n}NHCH_{3}, -CHCH-(CH_{2})_{n}N(CH_{3})_{2}, -(CH_{2})_{p}CO_{2}R_{6}, -C(O)alquilo C_{1-3}, C(O)NHCH_{3}, -(CH_{2})_{m}NH_{2}, -(CH_{2})_{m}NHC
H_{3}, -(CH_{2})_{m}N(CH_{3})_{2}, -(CH_{2})_{m}OR_{6}, -CH_{2}S(CH_{2})_{t}(CH_{3}), -(CH_{2})_{p}CF_{3}, -C\equivCCF_{3}, -CH=CHCF_{3}, -CH_{2}CHCF_{2}, -CH=CF_{2}, -(CF_{2})_{v}CF_{3}, -CH_{2}(CF_{2})_{n}CF_{3}, -(CH_{2})_{t}CF(CF_{3})_{2}, -CH(CF_{3})_{2}, -CF_{2}CF(CF_{3})_{2}, o -C(CF_{3})_{3}, en la que el alquilo C_{1-6} y alquinilo C_{2-6} están opcionalmente sustituidos con 1 y 3 sustituyentes seleccionados independientemente entre -OH y alquilo C_{1-6};

R_{5} es hidrógeno o flúor;

R_{6} y R_{7} son cada uno independientemente hidrógeno, metilo o etilo;

m es de 1 a 4;

n es de 1 a 2;

p es de 0 a 2;

t es de 0 a 1;

v es de 1 a 5;

ó sales amidas C_{1-6} y ésteres C_{1-6} farmacéuticamente aceptables, del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1 en el que R_{1} es metilo opcionalmente sustituido con -COOH.

3. El compuesto de la reivindicación 1 en el que R_{2} es flúor.

4. El compuesto de la reivindicación 1 en el que R_{4} es yodo, alquilo C_{1-3}, alquenilo C_{2-4}, alquinilo C_{2-3}, o -S-CH_{3},

5. El compuesto de la reivindicación 1 en el que R_{5} es flúor.

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6. El compuesto de la reivindicación 1, que se selecciona entre el grupo constituido por:

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y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Un compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usar como un medicamento.

9. El compuesto de la reivindicación 1 para usar en el tratamiento de cáncer.

10. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad proliferativa.

11. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para tratar cáncer.

12. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para tratar reestenosis, psoriasis, enfermedad autoinmune, aterosclerosis, artritis reumatoide, insuficiencia cardiaca, dolor crónico, dolor neuropático u osteoartritis.