ES2330210T3 - Nuevas especies de hongos y su empleo en el control de plagas y enfermedades. - Google Patents

Abstract

Un cultivo sustancialmente puro del hongo M. geulakonigae, en el cual dicho hongo es el hongo designado CBS Núm. de Acceso 110052, progenie, mutantes o variantes del mismo que retienen la actividad contra los ácaros pestíferos y los hongos patógenos de las plantas.

Description

Nuevas especies de hongos y su empleo en el control de plagas y enfermedades.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a tres nuevas especies de hongos de la subdivisión Basidiomicetos, orden Ustilaginales, a cualquiera productos u otras sustancias químicas obtenidas a partir de ellos o de su progenie y/o cualesquiera mutantes de los mismos, y a su empleo en el control de plagas, particularmente ácaros pestíferos (Acari) y hongos patógenos de las plantas, especialmente mildius pulverulentos.

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Antecedentes de la invención

Las enfermedades de las plantas de origen fúngico y ácaros tienen un impacto adverso importante sobre la producción de cosechas importantes en todo el mundo.

Las plagas de ácaros pertenecen a dos familias principales. La familia más importante es la de las Tetranychidae, conocida también como los ácaros-araña. Estos ácaros causan un daño generalizado a almendras, manzanas, aguacates, mandioca, cítricos, algodón, uvas, té, diversas cosechas de invernadero como pepino, pimiento y tomate, y varias plantas ornamentales, con inclusión de rosas y crisantemos [Helle, W. & Sabelis, T.W. Spider Mites, Their Biology, Natural Enemies and Control, Volúmenes I y II, Elsevier, Amsterdam (1985)]. La otra familia, Eriophyidae, corresponde a los ácaros de la roya o de las agallas, que pueden ser plagas importantes de manzanas, cítricos, coco, pera, grosellas y bayas, así como de muchas hortalizas y plantas ornamentales [Lindquist et al., (compiladores) Eriophyoid Mites, Their Biology, Natural Enemies and Control. Elsevier, Amsterdam (1996)]. El ácaro-araña carmín, Tetranychus cinnabarinus, y el ácaro rojo de los cítricos, Panonychus citri, pertenecen a la primera familia, en tanto que el ácaro de la roya de los cítricos, Phyllocoptruta oleivora, pertenece a la última. En Israel, el ácaro-araña carmín es una plaga importante de hortalizas y plantas ornamentales, cuyo control químico ha tropezado con dificultades crecientes debido al desarrollo de resistencia a los plaguicidas. El ácaro rojo de los cítricos es de menor importancia, mientras que el ácaro de la roya de los cítricos es la plaga principal de los cítricos en Israel y muchas otras partes del mundo. Los cultivadores locales de cítricos han venido encontrando problemas graves en el control químico del ácaro de la roya de los cítricos, debido a su resistencia incrementada a los acaricidas y la presencia de residuos de plaguicidas en la fruta exportada [Palevsky et al.] Problemas de ácaros en los cítricos y estrategias de control en Israel. Proceedings of the International Congress of Citriculture, (en prensa)]. Como contrapartida, el control biológico de esta plaga con depredadores introducidos acaba de comenzar y es todavía incierto [Argov, Y. S. Amitai, G.A.C. Beattie y U. Gerson, Crianza, liberación y establecimiento de ácaros depredadores importados para controlar el ácaro de la roya a los cítricos en Israel. BioControl, 47:399-409 (2002)].

Análogamente, los fitopatógenos fúngicos causan pérdidas económicas importantes y graves en las industrias agrícolas y en horticultura. La germinación y el crecimiento de las plantas infectadas se inhiben; las plantas sucumben a la roya blanda y pueden incluso morir. Los suelos infestados son inadecuados para cultivar ciertas cosechas. Los mildius pulverulentos son las enfermedades más comunes, extendidas y fácilmente reconocibles de las plantas. Los mismos están causados por hongos de la familia Erysiphaceae, que se agrupan en siete géneros principales [Agrios, G.N. Plant Pathology, 4ª ed. Academic Press, Nueva York (1997); Braun, U. A Monograph of the Erysiphales (Powdery Mildews), J. Cramer, Grebruder Borentraeger, Berlín (1987)]. Los mildius pulverulentos se caracterizan por manchas o parches de un crecimiento pulverulento blanco a grisáceo sobre los tejidos de las plantas jóvenes, que pueden cubrir hojas enteras y otros órganos de la planta [Agrios (1997) id ibid.]. Los mildius pulverulentos están presentes muy a menudo en plantas de cosecha y ornamentales, y las pérdidas de rendimiento que provocan anualmente en todas las cosechas sobrepasan probablemente las pérdidas causadas por cualquier otro tipo individual de enfermedad de las plantas. Las cosechas que sufren gravemente de los mildius pulverulentos incluyen trigo, cebada, pepino, calabaza, fresa, uva, manzana, mango, plantas ornamentales tales como rosa, begonia, lila y muchas otras [Agrios (1997) id ibid.]. Los fungicidas químicos controlan usualmente estas enfermedades, pero este modo de control está viéndose continuamente expuesto al desarrollo rápido de resistencia a los fungicidas recomendados. Como en el caso de las plagas de ácaros, el control biológico de los fitopatógenos fúngicos está también precisamente en su infancia. Aunque el biofungicida AQ10 ha sido registrado para control de los mildius pulverulentos desde 1996, el alcance de su uso es todavía moderado en comparación con el uso de fungicidas químicos [Copping, L.G. (compilador) The BioPesticide Manual, 1ª ed. British Crop Protection Council, Farnham (1998); Sztejnberg et al. Ampelomyces quisqualis for biological and integrated control of powdery mildews in Israel. J. Phytopathology 124:285-295 (1989)]. Globalmente, los gastos mundiales en fungicidas para controlar los mildius purulentos se estima que se aproximan a un billón de dólares de los Estados Unidos anualmente.

En resumen, los ácaros de las plantas y los fitopatógenos fúngicos se controlan todavía en su mayor parte con acaricidas y fungicidas químicos, a pesar de los problemas corolarios arriba mencionados. Así pues, el abuso generalizado de los plaguicidas y la emergencia de resistencia de las plagas a la mayoría de estos productos químicos ha aumentado la demanda de plaguicidas biológicos respetuosos con el medio ambiente, o "bioplaguicidas" [Copping, 1998, id ibid.].

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Con objeto de satisfacer esta demanda, es un objeto principal de la invención proporcionar nuevas especies de hongos que poseen actividad contra los ácaros y hongos de las plantas, y que pueden utilizarse contra ellos. Otro objeto de la invención es proporcionar preparaciones antifúngicas y anti-acaricidas, o bioplaguicidas.

Hasta ahora, no se ha registrado indicación alguna de que ninguna de las tres nuevas especies de hongos descritas y reivindicadas en esta memoria haya tenido efecto adverso alguno sobre las plantas con las cuales estuvieron en contacto de cualquier modo, ni han resultado perjudiciales para ningún otro organismo (excepto las plagas contra las cuales se ensayaron). Por consiguiente, es un objeto adicional de la invención proporcionar composiciones acaricidas y fungicidas que estarían desprovistas de efectos adversos sobre las plantas tratadas, o sobre el medio ambiente.

Estos y otros objetos de la presente invención resultarán evidentes a medida que avanza la descripción.

Sumario de la invención

La presente invención describe tres especies nuevas de hongos de la subdivisión Basidiomicetos, orden Ustilaginales, y su utilización en el control de las plagas, particularmente ácaros pestíferos (Acari) y hongos patógenos de las plantas, especialmente mildius pulverulentos.

Como se reivindica en esta memoria, la presente invención se refiere a un cultivo sustancialmente puro del hongo Meira geulakonigae nom. prov. (M. geulakonigae), un cultivo sustancialmente puro del hongo Meira argovae nom. prov. (M. argovae), y un cultivo sustancialmente puro del hongo Acaromyces ingoldii nom. prov. (A. ingoldii), así como sus medios acondicionados respectivos.

La totalidad de los cultivos de hongos de la invención son biológicamente puros.

Las tres nuevas especies de hongos han sido depositadas en el Centraal Bureau voor Schimmelcultures (CBS), Institute of the Royal Netherlands Academy of Arts and Science, de acuerdo con las estipulaciones del Tratado de Budapest para el Depósito de Microorganismos.

La presente invención se refiere también a productos biológicamente activos derivados de hongos seleccionados del grupo constituido por M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii, en donde dicha actividad biológica es acaricida y/o fungicida, y en donde dichos productos son esporas.

La presente invención proporciona una composición para el control de ácaros y una composición para el control de hongos. Ambas composiciones comprenden un agente de biocontrol derivado de cualquiera o al menos uno de los hongos de la invención. El agente de biocontrol está constituido por esporas. La composición acaricida y la composición fungicida pueden comprender adicionalmente un vehículo agronómicamente compatible, extraído de un cultivo líquido de los hongos respectivos. A este respecto, dicho vehículo puede seleccionarse del grupo constituido por agua, medio de cultivo, aceites o cualesquiera otros adyuvantes o vehículos.

La composición acaricida de la invención está disponible en la forma de una suspensión líquida que contiene entre aproximadamente 10^{7} y 10^{10} esporas/ml, con preferencia aproximadamente 10^{9} esporas/ml.

La composición fungicida de la invención está disponible en la forma de suspensión líquida que contienen entre aproximadamente 10^{7} y aproximadamente 10^{10} esporas/ml, con preferencia aproximadamente 10^{8} esporas/ml.

Ambas composiciones acaricida y fungicida de la invención pueden comprender adicionalmente un adyuvante convencional utilizado en formulaciones para agentes de biocontrol.

Es otro aspecto de la presente invención proporcionar un método para producir un fungicida y/o un acaricida, en donde el ingrediente activo de dicho fungicida/acaricida es uno cualquiera de M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii, o cualquier combinación de los mismos, y/o un cultivo de los mismos, y/o esporas de los mismos. Este proceso comprende cultivar un hongo de la invención, y aislar opcionalmente dicho ingrediente activo del cultivo.

En una realización particular, el método comprende los pasos de: (a) cultivar, en condiciones aerobias o anaerobias, uno cualquiera de los hongos de la invención en un medio de cultivo apropiado, (b) cosechar el cultivo; (c) separar las esporas del medio líquido; y o bien (d) suspender las esporas en un vehículo líquido agronómicamente compatible para dar un fungicida/acaricida en forma líquida; o (e) liofilizar las esporas, para dar un fungicida/acaricida en forma seca. Dicho fungicida/acaricida en forma seca puede disolverse ulteriormente en un vehículo líquido agronómicamente compatible. En este método, el hongo debe cultivarse a una temperatura de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 30ºC, con preferencia de aproximadamente 23ºC a aproximadamente 27ºC, y de modo más preferible a aproximadamente 25ºC. El pH del cultivo de hongos debe ser desde aproximadamente 5,1 a aproximadamente 5,6, siendo ideal preferiblemente un pH de 5,1.

Por último, la invención proporciona un método para controlar infestaciones de ácaros y/u hongos en plantas sensibles a los mismos, que comprende aplicar a la planta la composición acaricida o fungicida de la invención. La infestación por ácaros puede estar causada por Phyllocoptruta oleivora (ácaro de la roya de los cítricos) u otros ácaros de la roya y las agallas, por Tetranychus cinnabarinus (ácaro-araña carmín), y/o Panonychus citri (ácaro rojo de los cítricos) u otros ácaros-araña, mientras que la infestación fúngica es debida usualmente a Sphaerotheca fusca (mildiu pulverulento) u otros mildius pulverulentos. Cualesquiera plantas comerciales sensibles a ácaros-araña, ácaros de la roya, ácaros de las agallas o a enfermedades fitopatógenas fúngicas, en particular al mildiu pulverulento, pueden ser tratadas con la composición acaricida y/o con la composición fungicida de la invención.

La totalidad de las características y ventajas de la invención anteriores y otras se comprenderán mejor con ayuda de la descripción ilustrativa y no limitante siguiente de realizaciones preferidas de la misma, con referencia a las figuras del apéndice.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: Dendrograma que muestra la clasificación taxonómica de las tres especies fúngicas.

AS001 representa Acaromyces ingoldii nom. prov.; AS004 representa Meira geulakonigae nom. prov.; y AS005 representa Meira argovae nom. prov.

Figura 2: Fotografías de las tres nuevas especies fúngicas.

Figura 3: Efecto del tratamiento con Meira geulakonigae nom. prov. (M. geulakonigae) sobre el alcance del daño causado por el mildiu pulverulento (Sphaerotheca fusca) para plantas infectadas de pepino.

Gráfico que muestra el cubrimiento de las hojas de pepino (en porcentaje) por el mildiu pulverulento (MP) antes o después de la infección, y tratadas o sin tratar con M. geulakonigae. Se representan los diferentes tratamientos como: Agua, ausencia de infección, agua únicamente; Mg, ausencia de infección, M. geulakonigae solo; MP-Agua, infección en primer lugar y a continuación agua; MP-Mg, infección en primer lugar, y a continuación M. geulakonigae; Agua-MP, agua en primer lugar, seguido por infección; Mg-MP, M. geulakonigae en primer lugar, seguido por infección. A, B, C y D denotan 13, 20, 27 y 53 días después del tratamiento, respectivamente. Abreviaturas: Cub. h., cubrimiento de las hojas.

Figura 4: Meira geulakonigae nom. prov. aumenta el rendimiento de las plantas de pepino infectadas por el mildiu pulverulento (Sphaerotheca fusca).

Gráfico que muestra el rendimiento medio de pepinos en peso (g) de plantas infectadas con mildiu pulverulento, antes o después del tratamiento con una suspensión de esporas de M. geulakonigae. Los diferentes tratamientos se representan por las mismas abreviaturas que en Fig. 3. Abreviaturas: P., peso.

Figura 5A-B: Meira geulakonigae nom. prov. reduce la mortalidad de las hojas y aumenta el rendimiento de las plantas de pepino.

Fig. 5A:

Gráfico que muestra el efecto de M. geulakonigae sobre (A) el número de hojas de pepino destruidas por el mildiu pulverulento (Sphaerotheca fusca).

Fig. 5B:

Gráfico que muestra el efecto de M. geulakonigae sobre el rendimiento de pepinos.

Los diferentes tratamientos se representan por las mismas abreviaturas que en Fig. 3. Abreviaturas: Nº. h., número de hojas; P., peso.

Figura 6A-B: Meira geulakonigae nom. prov. reduce el cubrimiento de las plantas de pepino por el mildiu pulverulento (Sphaerotheca fusca).

Fig. 6A:

Vista general del efecto del tratamiento con M. geulakonigae sobre plantas de pepino infectadas por el mildiu pulverulento (MP) en un invernadero piloto comercial. Derecha: infección natural de MP sobre plantas de pepino que se trataron con M. geulakonigae. Izquierda: infección natural de MP en las plantas de pepino.

Fig. 6B:

Primer plano de (A). Derecha: infección natural de MP en plantas de pepino. Izquierda: infección natural de MP en plantas de pepino que se trataron con M. geulakonigae.

Abreviaturas: Mg, M. geulakonigae; s.- tr., sin tratar; tr., tratadas.

Figura 7: Meira geulakonigae nom. prov. reduce la infestación por el ácaro-araña carmín (Tetranychus cinnabarinus) en las plantas de pepino.

Gráfico que muestra el número de hojas infestadas por al menos un ácaro-araña carmín en plantas de pepino tratadas con M. geulakonigae. Datos recogidos a partir de tres exámenes durante un periodo de 16 días, en un invernadero piloto comercial. Los diferentes tratamientos se representan por las mismas abreviaturas que en Fig. 3. Abreviaturas: Nº. h., número de hojas.

Figura 8: Meira geulakonigae nom. prov. aumenta la mortalidad del ácaro de la roya de los cítricos (Phyllocoptruta oleivora) en las hojas de los cítricos.

Gráfico que muestra el porcentaje de mortalidad del ácaro-araña de los cítricos en las hojas de los cítricos, después de tratamiento con M. geulakonigae (10^{9} esporas/ml).

Abreviaturas: T, tratada; C, control; Mort., mortalidad.

Descripción detallada de la invención

El objeto de la presente invención se refiere al uso de agentes de biocontrol de origen fúngico para controlar ciertas plagas. Se ilustra específicamente en esta memoria el uso de las nuevas especies de la invención, Meira geulakonigae nom. prov. (M. geulakonigae), Meira argovae nom. prov. (M. argovae) y Acaromyces ingoldii nom. prov. (A. ingoldii).

Nota 1: El descubrimiento del asunto de las especies de esta solicitud de patente no se había publicado en el momento de la presentación de esta solicitud. Por tanto, para los propósitos de la técnica de Taxonomía, los nombres de las especies respectivas se consideraron provisionales, y requieren la notación "nom. prov.".

Nota 2: Para los propósitos de esta solicitud de patente, Meira geulakonigae nom. prov. es equivalente a M. geulakonigii nom. prov..

Un aspecto adicional de la presente invención incluye composiciones y formulaciones que son sumamente eficaces en el suministro del agente de biocontrol para la plaga diana y están aparentemente desprovistas de cualesquiera efectos adversos sobre las plantas tratadas y/o sobre el medio ambiente.

Cultivos sustancialmente puros de A. ingoldii, M. geulakonigae y M. argovae (todos ellos nom. prov.) han sido depositados en el Centraal Bureau voor Schimmelcultures (CBS), Institute of the Royal Netherlands Academy of Arts and Science (P.O.Box 85167, 3508 AD, Utrecht, Países Bajos), como sigue:

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Los depósitos están disponibles en caso requerido de acuerdo con las leyes de patentes extranjeras en los países en que se presenten contrapartidas de esta solicitud, o de su progenie. Sin embargo, debe entenderse que la disponibilidad de los depósitos no constituye una licencia para practicar la presente invención en derogación de los derechos de patente concedidos por una acción gubernamental.

Adicionalmente, los presentes depósitos de cultivo se guardaron y están disponibles al público de acuerdo con las estipulaciones del Tratado de Budapest para el Depósito de Microorganismos, es decir, que los mismos se guardaron con todo el cuidado necesario para mantenerlos viables y exentos de contaminación durante un periodo de al menos cinco años desde el requerimiento más reciente para el suministro de una muestra de un depósito, y en cualquier caso, durante un periodo de al menos treinta (30) años a partir de la fecha de depósito o durante la vida aplicable de cualquier patente que pueda ser expedida que describa los cultivos. El depositante reconoce el deber de reemplazar el o los depósitos en caso de que el depositario sea incapaz de suministrar una muestra en caso requerido, debido a la condición de un depósito. Todas las restricciones acerca de la disponibilidad al público de los presentes depósitos de cultivo se eliminarán irrevocablemente después de la concesión de una patente que describa las mismas.

Debe entenderse que un cultivo sustancialmente puro es un cultivo que puede comprender variaciones que una persona con experiencia ordinaria en la técnica reconocería que no frustran el propósito declarado de la invención, y que estaría todavía dentro del presente concepto de inventiva.

Los cultivos preferidos, de acuerdo con la invención, son cultivos biológicamente puros. Por "biológicamente puros", como se utiliza en esta memoria, se entiende un cultivo exento de microorganismos contaminantes deletéreos viables.

Dos de las nuevas especies fúngicas de la invención, a saber M. geulakonigae, y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.), se obtuvieron de cadáveres del ácaro de la roya de los cítricos, encontrados en hojas de cítricos en dos ecosistemas en Israel, específicamente la región de la Galilea Superior y el sur de la Llanura Costera. La tercera nueva especie de hongo, M. argovae (nom. prov.), se aisló del cadáver del ácaro-araña carmín encontrado en la hoja de un arbusto del haba del ricino (Ricinus communis), Ness Ziona en la Llanura Costera central de Israel.

Se realizaron caracterizaciones taxonómicas, morfológicas y moleculares utilizando los métodos recomendados por el CBS. Debe mencionarse que, debido a su tamaño diminuto, la totalidad de las nuevas especies pudieron caracterizarse únicamente por técnicas de biología molecular. Las tres especies están dentro de la subdivisión Basidiomicetos, orden Ustilaginales. El dendrograma representado (Fig. 1) es una representación del resultado de un análisis filogenético de un estudio molecular para la ubicación correcta de los hongos, que indica la separación clara de las tres nuevas especies. Conforme al dendrograma, las tres nuevas especies se designan como Acaromyces ingoldii nom. prov., AS001; Meira geulakonigae nom. prov., AS004; y Meira argovae nom. prov., AS005. Se realizaron determinaciones más precisas con el Espaciador Interno Transcrito de Subunidades Grandes (ITS-LSU), y se realizaron de acuerdo con el Método de Grupos de Pares no Ponderados utilizando el programa de Medias Aritméticas (UPGMA), y los métodos de Análisis de los Componentes Principales LSU-ITS (PCA). Los dibujos resultantes demuestran la ubicación inequívoca de las tres nuevas especies (Fig. 1 y datos no presentados).

En la Figura 2 se presentan fotografías de las tres especies de hongos. Las tres especies se cultivaron en agar patata-dextrosa (PDA) durante 11 días a aproximadamente 25ºC. La Figura 2a muestra A. ingoldii, cuya colonia es blanquecina, mientras que M. geulakonigae (Fig. 2b) y M. argovae (Fig. 2c) son parduscas. Ambas colonias de M. geulakonigae y M. argovae secretan pigmentos en el medio, secretando M. argovae cantidades mayores. Las tres especies demostraron diferencias en el patrón de crecimiento de colonias. La colonia de M. geulakonigae es más lanosa, en tanto que M. argovae exhibe un patrón de crecimiento casi segmentado. El crecimiento de los hongos era similar en condiciones de luz y oscuridad. Ninguna de las tres especies ha mostrado actividades quitinolíticas o proteolíticas de tipo alguno.

Así pues, en un primer aspecto, la invención proporciona cultivos sustancialmente puros de cada uno de los hongos M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.). Específicamente, la invención proporciona cultivos sustancialmente puros de los hongos depositados en el CBS bajo los Núms. de Acceso CBS 110052, CBS 110053 y CBS 110050.

Es conocido en la técnica el modo de obtener mutantes de microorganismos sin alterar las características de los mismos. Por ejemplo, pueden obtenerse mutantes por tratamiento con mutágenos físicos o químicos, tales como luz UV, rayos X, rayos gamma y productos químicos tales como n-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina. Se conoce también en la técnica el modo de obtener variantes naturales, v.g. por cribado de cultivos de la cepa parental. Por consiguiente, la invención se refiere también a los mutantes o variantes de M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) que retienen las características descritas en esta memoria, particularmente mutantes de los hongos depositados en el CBS bajo los Núms. de Acceso CBS 110052, CBS 110053 y CBS 110050.

En una realización, los hongos de la invención pueden cultivarse por cualesquiera métodos conocidos en la técnica para su cultivo, v.g. cultivo anaerobio, cultivo aerobio sobre agares de diferentes tipos, o fermentación aerobia sumergida en fermentadores. Preferiblemente, el cultivo se realiza en condiciones de fermentación sumergida.

Los medios para cultivo o fermentación pueden contener fuentes asimilables de carbono y fuentes digeribles de nitrógeno. Fuentes de carbono adecuadas incluyen, pero sin carácter limitante, glucosa, lactosa, manitol, dextrina, maíz, almidón, xilosa, fructosa, lactosa y análogos.

Fuentes de nitrógeno adecuadas incluyen, pero sin carácter limitante, materiales naturales que contienen nitrógeno y sus productos, v.g., extractos de carne, peptonas, soluciones de infiltración de maíz, extractos de levadura, harinas de haba de soja, triptonas, harinas de semilla de algodón, harinas de trigo, y análogos. También pueden utilizarse materiales nitrogenados orgánicos o inorgánicos, v.g. urea, nitratos y sales de amonio, tales como nitrato de sodio, acetato de amonio, cloruro de amonio, sulfato de amonio, fosfato de amonio, y análogas.

Opcionalmente, los medios para cultivo de M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) pueden contener también sales inorgánicas, elementos traza, y estimuladores del crecimiento.

Las sales inorgánicas adecuadas para uso en el medio para cultivo de M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) incluyen, pero sin carácter limitante, sales capaces de proporcionar cinc, sodio, magnesio, calcio, amonio, cloruro, carbonato, sulfato, nitrato, y análogos.

Adicionalmente, elementos traza esenciales necesarios para el crecimiento y desarrollo de los organismos pueden incluirse también en el medio de cultivo. Tales elementos traza se encuentran comúnmente como impurezas en otros componentes del medio en cantidad suficiente para satisfacer las necesidades de crecimiento del organismo.

Los estimuladores del crecimiento adecuados para uso en la invención incluyen, pero sin carácter limitante, glicerol y sales de sodio, tales como acetato de sodio, glutamato de sodio, tartrato de sodio, y análogas.

Los hongos de la invención deben cultivarse a temperaturas de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 30ºC, con preferencia desde aproximadamente 23ºC a aproximadamente 27ºC, y de modo más preferible a aproximadamente 25ºC.

Como resulta habitual en los procesos de cultivo aerobios, se inyecta aire estéril en la vasija por el fondo mientras se agita el medio con impulsores de turbina convencionales. En general, la tasa de aireación y la tasa de agitación deben ser suficientes para mantener un nivel de oxígeno disuelto de al menos 30% de saturación de aire con una presión interna en la vasija de 0,2 bar.

El valor de pH en el fermentador varía junto con el medio de cultivo una cantidad de inóculos utilizada. Típicamente, el valor de pH se mantiene débilmente ácido. En caso necesario, antes de la inoculación o durante la fermentación, el valor de pH en el fermentador puede ajustarse de modo adecuado para hacerlo débilmente ácido, v.g. aproximadamente pH 5,1 \pm 0,2 a aproximadamente pH 5,6. De manera preferible, el valor de pH antes de la inoculación se ajusta a aproximadamente pH 5,1.

Todos materiales básicos conocidos en la técnica pueden utilizarse para ajustar el valor de pH, v.g. sales de metal alcalino, tales como sales de sodio, y análogas.

En principio, el tiempo para cultivar M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) debería ser bastante para producir una cantidad suficiente de esporas. En general, el cultivo se realiza durante aproximadamente 5 a aproximadamente 8 días a dichas temperaturas, con preferencia a 25ºC.

Adicionalmente, pueden añadirse adecuadamente agentes antiespumantes guante la fermentación para inhibir la formación excesiva de espuma. Por ejemplo, puede añadirse propilenglicol de un peso molecular de aproximadamente 2000 al medio de cultivo en una cantidad de aproximadamente 0,2 g/litro de medio de cultivo.

El término "medio acondicionado" utilizado en la memoria descriptiva hace referencia al contenido total en un vaso o fermentador, con inclusión tanto de los componentes celulares como de los no celulares, resultante directamente de la fermentación de uno cualquiera o una combinación de los hongos de la invención en un medio de cultivo apropiado sin ser sometido a filtración, separación o purificación.

Así pues, el medio acondicionado de uno cualquiera de los hongos de la invención se obtiene por cultivo de dichos hongos en el medio de cultivo arriba especificado y en las condiciones especificadas de pH, temperatura y duración.

El Ejemplo 1 muestra la actividad de M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii en el control del mildiu pulverulento en la planta de pepino, mientras que en los Ejemplos 2 y 3, se utilizan las tres nuevas especies de hongos en el control de plagas de ácaros. Análogamente, el medio acondicionado de los hongos de la invención debe ser activo en el control de las plagas de ácaros, tales como el ácaro-araña carmín (Tetranychus cinnabarinus), el ácaro rojo de los cítricos (Panonychus citri), el ácaro rojo oriental (Eutetranychus orientalis), y el ácaro de la roya de los cítricos (Phyllocoptruta oleivora), y hongos fitopatógenos. El ingrediente activo en el medio acondicionado es cualquier compuesto que sea tóxico y/o incompatible con la vida o el crecimiento de las plagas de ácaros y/u hongos fitopatógenos.

El medio acondicionado puede utilizarse directamente para el control de las plagas de ácaros y hongos fitopatógenos o como parte de una composición de la invención, como se describe más adelante.

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición o formulación para el control de plagas, que comprende como ingrediente efectivo cualquier agente de biocontrol eficaz derivado de uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) o progenie o mutantes de los mismos, o cualquier mezcla de los mismos, siendo dicho agente de biocontrol esporas.

Uno cualquiera de los hongos de la invención, M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii (todos ellos nom. prov.), puede producir o contener un compuesto, que puede ser un nucleótido, una proteína, trazas de metales, que son, directa o indirectamente, tóxicos o incompatibles con la vida de las plagas de ácaros y/o los hongos fitopatógenos. A ellos se hace referencia en esta memoria como productos de los mismos, o de modo más específico productos biológicamente activos de los mismos. Análogamente, los productos pueden derivarse también del grupo constituido por esporas y conidios, preferiblemente esporas, derivadas de los hongos de la invención.

En los Ejemplos 2 y 3, plantas de semillero de pepino y cítricos infestadas por ácaros se tratan con M. geulakonigae y el nivel de infestación disminuye significativamente cuando se compara con plantas infestadas tratadas con agua o sin tratar. Así, en una realización, la composición de la presente invención tiene por objeto el control de ácaros infectantes de las plantas (Acari). En una realización preferida, las plagas de ácaros son el ácaro-araña carmín (Tetranychus cinnabarinus), el ácaro rojo de los cítricos (Panonychus citri), el ácaro rojo oriental (Eutetranychus orientalis), y el ácaro de la roya de los cítricos (Phyllocoptruta oleivora). La composición para el control de los ácaros comprende una suspensión acuosa, que contiene entre aproximadamente 10^{7} y 10^{10} esporas/ml, con preferencia 10^{9} esporas/ml. La composición de control de los ácaros de la invención puede comprender adicionalmente otros materiales activos o no activos agronómicamente aceptables. Estos pueden ser otros acaricidas y/o vehículos, diluyente, adyuvantes y excipientes agronómicamente aceptables.

Los hongos y composiciones de la presente invención y sus esporas pueden utilizarse para el tratamiento y la prevención de la infestación por ácaros en plantas que incluyen, pero sin carácter limitante, todas las variedades de plantas de cítricos, manzanas, uvas, pepinos, calabazas y cualesquiera otras plantas comerciales que son atacadas por ácaros fitopatógenos.

En el Ejemplo 1, se utiliza con éxito M. geulakonigae en el tratamiento de plantas de pepino infestadas por el mildiu pulverulento. Así, en otra realización, los hongos y composiciones de la presente invención y sus productos pueden utilizarse para el control de hongos fitopatógenos. En una realización preferida, la invención se refiere al tratamiento y/o la prevención de la infestación del mildiu pulverulento del pepino, Sphaerotheca fusca, así como de otros mildius pulverulentos en cosechas diferentes, y otros géneros y especies de hongos fitopatógenos.

Las composiciones para el control de los hongos comprenden una suspensión acuosa, que contiene entre aproximadamente 10^{7} y 10^{10} esporas/ml, con preferencia 10^{9} esporas/ml. Las composiciones de control de los hongos de la invención pueden comprender adicionalmente otros materiales activos o no activos agronómicamente aceptables. Éstos pueden ser otros acaricidas, fungicidas, y/o vehículos, diluyentes, adyuvantes y excipientes agronómicamente aceptables.

Los hongos y las composiciones antifúngicas de la invención pueden utilizarse para el tratamiento de diversas cosechas. Tales cosechas pueden ser, pero sin carácter limitante, pepino, tomate, berenjena, pimiento, manzana, uvas y todas las cosechas comerciales sensibles a los hongos fitopatógenos.

En un aspecto adicional, la invención comprende un método para la producción o preparación de un fungicida y/o un acaricida, en donde el ingrediente activo de dicho fungicida/acaricida es uno cualquiera de M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii o cualquier combinación de los mismos, y/o un cultivo de los mismos, y/o esporas de los mismos. Este proceso comprende cultivar un hongo de la invención y, opcionalmente, aislar dicho ingrediente activo del cultivo.

En una realización particular, el método comprende los pasos de: (a) cultivar, en condiciones aerobias o anaerobias, uno cualquiera de los hongos de la invención en un medio de cultivo apropiado; (b) cosechar el cultivo; (c) separar las esporas del medio líquido; y o bien (d) suspender las esporas en un vehículo líquido agronómicamente compatible para dar un fungicida/acaricida en forma líquida; o (e) liofilizar las esporas, para dar un fungicida/acaricida en forma seca. Dicho fungicida/acaricida en forma seca puede disolverse ulteriormente en un vehículo líquido agronómicamente compatible. Opcionalmente, las esporas pueden lavarse con agua desionizada después de separar las mismas del medio líquido.

En el método arriba descrito, el hongo debe cultivarse a una temperatura de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 30ºC, con preferencia desde aproximadamente 23ºC a aproximadamente 27ºC, y de modo más preferible a aproximadamente 25ºC. El pH del cultivo de hongos debe estar comprendido entre aproximadamente 5,1 y aproximadamente 5,6, siendo preferiblemente ideal un pH de 5,1.

En una realización, el fungicida/acaricida es una suspensión acuosa de esporas, obtenida por cultivo, en condiciones aerobias o anaerobias, de uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) en un medio de cultivo apropiado.

En una segunda realización, el fungicida/acaricida es un liofilizado de esporas de hongos, obtenido por el método arriba descrito, en el cual las esporas son de uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii. Esta forma liofilizada puede ser ventajosa para almacenamiento y manipulación del fungicida/acaricida.

La composición puede prepararse de cualquier manera conocida, v.g. por refuerzo del ingrediente activo con vehículos, adyuvantes o diluyentes agronómicamente aceptables, tales como disolventes, emulsionantes y dispersantes o agentes tensioactivos.

Disolventes adecuados para uso en la invención y sus diversos productos incluyen, pero sin carácter limitante, aromáticos, v.g. xileno; aromáticos clorados, v.g. clorobencenos; parafinas, v.g. fracciones de aceite mineral; alcoholes, v.g. metanol y butanol; cetonas, v.g., ciclohexanona; aminas, v.g. etanolamina y dimetilformamida; y agua, preferentemente desionizada. Cuando se utiliza agua, pueden utilizarse también como co-disolventes otros disolventes orgánicos.

Vehículos adecuados para uso en la invención y sus productos incluyen, pero sin carácter limitante, minerales naturales o sintéticos molidos, v.g. caolines, arcillas, talco, creta, sílice, silicatos, y análogos.

Emulsionantes adecuados para uso en las composiciones de la invención incluyen, pero sin carácter limitante, emulsionantes no iónicos y aniónicos (v.g. alcohol-éteres grasos de polioxietileno, alquilsulfonatos, arilsulfonatos, y análogos.

Dispersantes adecuados para uso en las composiciones de la invención incluyen, pero sin carácter limitante, lejías residuales de lignosulfito y metilcelulosa; y análogos.

Agentes tensioactivos adecuados incluyen, pero sin carácter limitante, ácido ligno-, fenol-, naftaleno- y dibutilnaftalenosulfónico, ácidos grasos, alquil- y alquilarilsulfonatos, alquil-lauril-éter y sulfatos de alcoholes grasos, sales de hexa-, hepta- y octadecanoles sulfatados y de alcohol-glicoléteres grasos, condensados de naftaleno sulfonado y sus derivados con formaldehído, condensados de naftaleno, o de los ácidos naftalenosulfónicos, con fenol y formaldehído, polioxietileno-octilfenol-éter, iso-octil-, octil- o nonilfenol etoxilado, alquilfenol-poliglicoléteres, tributilfenil-poliglicoléter, alquil-lauril-poliéter-alcoholes, alcohol isotridecílico, condensados alcohol graso-óxido de etileno, aceite de ricino etoxilado, polioxietilen-alquiléteres o polioxipropilen-alquiléteres, alcohol laurílico-poliglicoléter-acetato, ésteres de sorbitol, lejías residuales de lignosulfito o metilcelulosa.

En otro aspecto adicional, la invención comprende el uso de las nuevas especies y sus esporas en un método para el control y/o la prevención de la infestación por ácaros (Acari) y/u hongos en las plantas.

En una realización, el método comprende pulverizar la planta, antes o después de una infestación por Acari o una infección por hongos, con una composición que comprende una suspensión de esporas de uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.), o una mezcla de al menos dos de los mismos.

Las plantas crecen con gran rapidez, y las infecciones fúngicas e infestaciones por ácaros se producen repetidas veces, debido también a su naturaleza transportada por el viento. Por ello, preferiblemente, en el método arriba mencionado, la composición debe aplicarse sobre la planta semanal o bisemanalmente, durante la estación. Este procedimiento es similar al utilizado con los plaguicidas químicos.

Para el propósito de aplicación, la suspensión acaricida o fungicida puede utilizarse directamente o formularse como composiciones adecuadas para pulverización, atomización, espolvoreo, esparcimiento o vertido. Por ejemplo, las composiciones pueden formularse como soluciones listas para pulverización, polvos, suspensiones, suspensiones acuosas o aceitosas de alta concentración u otras suspensiones o dispersiones, emulsiones, dispersiones en aceite, pastas, polvos, o gránulos.

El plaguicida acuoso no tóxico puede contener también diversos aditivos tales como antioxidantes, conservantes, neutralizadores del pH y/o clarificadores.

Durante el uso, el plaguicida acuoso no tóxico se diluye y pulveriza o aplica en forma de nebulización sobre el hospedador infestado, sea planta o animal, para entrar directamente en contacto con la superficie de las plagas diana. En algunos casos, pueden ser necesarias aplicaciones repetidas.

Para aumentar la eficiencia de la aplicación, la composición fungicida/acaricida de la invención puede comprender también otros ingredientes activos, tales como herbicidas, insecticidas, estimuladores del crecimiento, fertilizantes y análogos.

Como se ha expuesto y descrito, debe entenderse que esta invención no está limitada a los ejemplos, pasos de proceso, y materiales particulares descritos en esta memoria, pudiendo variar en cierto grado dichos pasos de proceso y materiales. Debe entenderse también que la terminología utilizada en esta memoria se utiliza exclusivamente con el propósito de describir realizaciones particulares, y no debe entenderse como limitante, estando limitado únicamente el alcance de la presente invención por las reivindicaciones adjuntas y equivalentes de las mismas.

Debe tenerse en cuenta que, como se utilizan en esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "uno" y "el/la" incluyen los correspondientes plurales a no ser que el contenido dicte claramente lo contrario.

A lo largo de esta memoria descriptiva y las reivindicaciones que siguen, a no ser que el contexto requiera lo contrario, debe entenderse que el término "comprenden" y variaciones tales como "comprende" y "que comprende(n)", implican la inclusión de una entidad completa o paso indicado o un grupo de entidades completas o pasos, pero no la exclusión de ninguna otra entidad completa o paso o grupo de entidades completas o pasos.

Ejemplos Procedimientos Experimentales Fuente de los hongos

Dos de las especies de hongos, a saber M. geulakonigae, y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.), se obtuvieron de cadáveres del ácaro de la roya de los cítricos en diferentes sitios de Israel, desde la Galilea Superior al Sur de la Llanura Costera. La tercera especie, M. argovae (nom. prov.), se aisló del ácaro-araña carmín encontrado en una hoja de haba del ricino en la Llanura Costera.

Producción de hongos en gran escala

Los tres hongos se cultivaron en gran cantidad en el laboratorio sobre el medio sólido común, PDA (agar patata-dextrosa, Difco) y sobre el medio líquido PB (caldo de patata, Difco), a la temperatura óptima de 25ºC. Los hongos tienen un ciclo vital muy rápido, y la producción máxima de esporas tuvo lugar en el transcurso de 4 a 5 días. De este modo, se obtuvieron cantidades muy grandes de esporas en un periodo de tiempo breve.

Preparación de la suspensión

Se separaron las esporas por lavado del medio de cultivo en PDA con agua desionizada y se ajustó su cantidad (por ml) a la concentración requerida con un hemocitómetro. Las esporas se separaron del medio líquido por centrifugación. Se añadió agua desionizada y se ajustó su concentración como anteriormente.

Aplicación del fungicida

Se condujeron experimentos con el mildiu pulverulento (MP) en el laboratorio y en el invernadero, y se condujo un experimento en un invernadero piloto comercial. Se pulverizaron suspensiones de M. geulakonigae (2 x 10^{8} esporas/ml) sobre hojas de pepino. Se ensayaron el cubrimiento de las hojas por MP y el número de hojas destruidas por la enfermedad, y se determinaron por pesada la materia seca de las plantas enteras, y sus rendimientos.

Aplicación del acaricida

Se pulverizaron las plantas como se ha descrito arriba, con una suspensión de M. geulakonigae de aproximadamente 10^{9} esporas/ml.

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Ejemplo 1

Se realizaron experimentos iniciales para ensayar el efecto de las tres nuevas especies de hongos M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) sobre hojas desprendidas infectadas con el mildiu pulverulento del pepino. Las hojas tratadas se pulverizaron con cada uno de los hongos, mientras que las hojas de control no se pulverizaron, y se inocularon después todas las hojas con mildiu pulverulento. Se evaluó la enfermedad como el área de las hojas cubierta por el mildiu pulverulento, y el experimento se siguió semanalmente durante un periodo de 4 semanas. Al final de las 4 semanas, los resultados obtenidos eran como sigue. Las hojas de control tenían entre 50 y 100% de su área cubierta por los hongos dentro de la primera semana, lo cual fue seguido luego por mortalidad de las hojas. En contraste, las hojas tratadas con cualquiera de M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) tenían usualmente menos del 10% de su área cubierta por el mildiu pulverulento al cabo de 15 días. El área cubierta por la infección aumentaba luego hasta aproximadamente 25% al final de las 4 semanas, transcurrido cuyo tiempo la mayoría de las hojas estaban todavía vivas.

Después de los resultados satisfactorios obtenidos en los experimentos iniciales con los tres hongos, se realizó un estudio más sistemático utilizando únicamente M. geulakonigae para el tratamiento de la infección por mildiu pulverulento en los pepinos. Así, se pulverizaron plantas de pepino con una suspensión de M. geulakonigae (Mg), antes o después de la infección por el mildiu pulverulento (MP). Se utilizaron varios protocolos de tratamiento: ausencia de infección y únicamente tratamiento con agua (Agua en Fig. 3); ausencia de infección y únicamente tratamiento con M. geulakonigae (Mg en Fig. 3); infección con MP primeramente seguida por tratamiento con agua (MP-Agua en Fig. 3); infección primeramente, seguida por tratamiento con M. geulakonigae (MP-Mg en Fig. 3); tratamiento con agua primeramente, seguido por infección con MP (Agua-MP en Fig. 3); tratamiento con M. geulakonigae primeramente, seguido por infección con MP (Mg-MP en Fig. 3). Se analizaron los parámetros siguientes:

(a) La extensión (porcentaje) del cubrimiento con MP sobre las hojas de pepino se evaluó de acuerdo con el método de Horsfall & Barratt [Horsfall, J.G. & Barratt, R.W. Phytopathology, 35: 655 (1945)] 13, 20, 27 y 53 días después del tratamiento, y se comparó con plantas de control tratadas con agua. El cubrimiento con MP era más rápido en ausencia de tratamiento con M. geulakonigae (Fig. 1, Agua, MP-Agua y Agua-MP) que en su presencia (Mg, MP-Mg y Mg-MP), mostrando el efecto significativo de biocontrol de M. geulakonigae sobre el hongo patógeno.

(b) El rendimiento de pepinos (en gramos, g) de las plantas pulverizadas con M. geulakonigae era consistente y significativamente mayor que el rendimiento de pepinos de las plantas sin tratar (Fig. 4).

(c) El número de hojas muertas en las plantas de pepino pulverizadas con una suspensión de Mg era significativamente menor que en las plantas infectadas con MP pero que no recibieron el tratamiento con Mg (Fig. 5A).

(d) El peso seco de las plantas tratadas con M. geulakonigae era significativamente mayor que el peso seco de las plantas sin tratar (Fig. 5B).

La evidencia clara del efecto de biocontrol de M. geulakonigae sobre el mildiu pulverulento infectante de los pepinos puede apreciarse en las fotografías presentadas en la Figura 6.

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Ejemplo 2

Se testó el efecto del tratamiento de M. geulakonigae sobre el ácaro-araña carmín devorador de la planta (Tetranychus cinnabarinus) infestante de los pepinos. Este ácaro es una plaga importante de muchas cosechas. Las plantas se trataron utilizando el mismo protocolo que se ha descrito en el Ejemplo 1. A fin de evitar la toma de muestras destructiva, se contó el número de hojas infestadas por al menos un ácaro-araña adulto vivo. Los datos se obtuvieron de 5 hojas por planta y 6 plantas por tratamiento. De este modo, se evaluaron un total de 30 hojas en cada fecha de observación. Todas las hojas que no se trataron con M. geulakonigae tenían poblaciones significativamente mayores del ácaro-araña (Fig. 7) y a veces exhibían fuerte deterioro por el ácaro.

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Ejemplo 3

Se condujo un experimento inicial con la plaga importante de los cítricos, el ácaro de la roya de los cítricos Phyllocoptruta oleivora como diana, utilizando los tres nuevos hongos para control de la plaga. La Tabla 1 muestra los resultados obtenidos para este experimento inicial, representando los números el porcentaje de ácaros destruidos después del tratamiento, calculado con la corrección de Abbott. Los nombres de los tres hongos son provisionales.

TABLA 1

2

Después de los resultados del experimento inicial utilizando las tres nuevas especies de hongos, se realizó un segundo experimento concerniente al efecto de M. geulakonigae sobre el ácaro de la roya de los cítricos. Se pulverizaron plantas de semillero de cítricos fuertemente infestadas con suspensiones de M. geulakonigae de 10^{9} esporas/ml, obtenidas después de fermentación líquida del hongo. La mortalidad de la plaga era prácticamente 100% (después de la corrección de Abbott) en las plantas tratadas, en comparación con aproximadamente 30% en el control sin tratar (Fig. 8).

Claims (35)

1. Un cultivo sustancialmente puro del hongo M. geulakonigae, en el cual dicho hongo es el hongo designado CBS Núm. de Acceso 110052, progenie, mutantes o variantes del mismo que retienen la actividad contra los ácaros pestíferos y los hongos patógenos de las plantas.

2. El cultivo de la reivindicación 1, en el cual dicho cultivo es biológicamente puro.

3. Un cultivo sustancialmente puro del hongo Meira argovae, en el cual dicho hongo es el hongo designado CBS acceso no. 110053, progenie, mutantes o variantes del mismo que retienen la actividad contra los ácaros pestíferos y los hongos patógenos de las plantas.

4. El cultivo de la reivindicación 3, en el cual dicho cultivo es biológicamente puro.

5. Un cultivo sustancialmente puro del hongo Acaromyces ingoldii, en el cual dicho hongo es el hongo designado CBS acceso no. 110050, progenie, mutantes o variantes del mismo, que retienen la actividad contra ácaros pestíferos y los hongos patógenos de las plantas.

6. El cultivo de la reivindicación 5, en el cual dicho cultivo es biológicamente puro.

7. Contenidos totales resultantes de la fermentación de un hongo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, y/o combinación de los mismos.

8. Productos biológicamente activos derivados de uno cualquiera de los hongos de acuerdo con las reivindicaciones 1-6, en donde la actividad biológica de dichos productos es acaricida y/o fungicida y en donde dichos productos son esporas.

9. Una composición para el control de los ácaros, en la cual dicha composición comprende al menos un agente de biocontrol derivado de uno cualquiera de los hongos de acuerdo con las reivindicaciones 1-6 y dicho agente de biocontrol está constituido por esporas.

10. La composición de la reivindicación 9, que comprende adicionalmente un vehículo agronómicamente compatible.

11. La composición de la reivindicación 10, en donde dicho vehículo se extrae de un cultivo líquido de cualquiera de dichos hongos.

12. La composición de la reivindicación 10, en donde dicho vehículo se selecciona del grupo constituido por agua, medio de cultivo, aceites o cualesquiera otros adyuvantes o vehículos.

13. La composición de la reivindicación 12, en la forma de una suspensión líquida que contiene aproximadamente entre 10^{7} y 10^{10} esporas/ml.

14. La composición de la reivindicación 13, en donde la suspensión contiene aproximadamente 10^{9} esporas/ml.

15. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, que comprende adicionalmente disolventes, emulsionantes, dispersantes o agentes tensioactivos utilizados en formulaciones para agentes de biocontrol.

16. Una composición para el control de los hongos, en la cual dicha composición comprende al menos un agente de biocontrol derivado de uno cualquiera de los hongos de acuerdo con las reivindicaciones 1-6 y dicho agente de biocontrol está constituido por esporas, que comprende opcionalmente un vehículo agronómicamente compati-
ble.

17. La composición de la reivindicación 16, en donde dicho vehículo se extrae de un cultivo líquido de uno cualquiera de dichos hongos.

18. La composición de la reivindicación 17, en la cual dicho vehículo se selecciona del grupo constituido por agua, medio de cultivo, aceites u otros adyuvantes o vehículos.

19. La composición de la reivindicación 18, en la forma de una suspensión líquida que contiene entre 10^{7} y aproximadamente 10^{10} esporas/ml.

20. La composición de la reivindicación 19, en donde la suspensión contiene aproximadamente 10^{8} esporas/ml.

21. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20, que comprende adicionalmente disolventes, emulsionantes, dispersantes o agentes tensioactivos utilizados en formulaciones para agentes de biocontrol.

22. Un método para producir un fungicida y/o un acaricida, en el cual el ingrediente activo de dicho fungicida/acaricida es uno cualquiera de los hongos de acuerdo con las reivindicaciones 1-6, o cualquier combinación de los mismos, y/o un cultivo de los mismos, y/o esporas de los mismos, que comprende cultivar dicho hongo y, opcionalmente, aislar dicho ingrediente activo del cultivo.

23. El método de la reivindicación 22, en donde dicho método comprende los pasos de:

(a)

cultivar, en condiciones aerobias o anaerobias, uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii en un medio de cultivo apropiado;

(b)

cosechar el cultivo;

(c)

separar las esporas del medio líquido;

y o bien

(d)

suspender las esporas en un vehículo líquido agronómicamente compatible para dar un fungicida/acaricida en forma líquida; o

(e)

liofilizar las esporas, para dar un fungicida/acaricida en forma seca.

24. El método de la reivindicación 23, en el cual dicho fungicida/acaricida en forma seca se disuelve ulteriormente en un vehículo líquido agronómicamente compatible.

25. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 22 y 24, en el cual el hongo se cultiva a una temperatura comprendida entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 30ºC.

26. El método de la reivindicación 25, en el cual la temperatura es de aproximadamente 23ºC a aproximadamente 27ºC.

27. El método de la reivindicación 26, en el cual la temperatura es 25ºC.

28. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, en el cual el hongo se cultiva a un pH de aproximadamente 5,1 a aproximadamente 5,6.

29. El método de la reivindicación 28, en el cual el pH es aproximadamente 5,1.

30. Un método de control de la infestación por ácaros en una planta sensible a los mismos, que comprende aplicar a la planta la composición acaricida de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 15.

31. El método de la reivindicación 30, en el cual la infestación por ácaros está causada por Phyllocoptruta oleivora (ácaro de la roya de los cítricos), Tetranychus cinnabarinus (ácaro-araña carmín), y/o Panonychus citri (ácaro rojo de los cítricos).

32. Método de la reivindicación 31, en el cual dicha planta es cualquier planta comercial sensible a los ácaros-araña, ácaros de la roya, ácaros de las agallas o enfermedades fitopatógenas de origen fúngico.

33. Un método de control de la contaminación por hongos en una planta sensible a dichos hongos, que comprende aplicar a la planta la composición fungicida de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21.

34. El método de la reivindicación 33, en el cual la infestación fúngica es debida a Sphaerotheca fusca (mildiu pulverulento).

35. El método de la reivindicación 34, en el cual dicha planta es cualquier planta comercial sensible a enfermedades causadas por el mildiu pulverulento u otras enfermedades fitopatógenas de origen fúngico.