ES2330210T3 - Nuevas especies de hongos y su empleo en el control de plagas y enfermedades. - Google Patents
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Abstract
Un cultivo sustancialmente puro del hongo M. geulakonigae, en el cual dicho hongo es el hongo designado CBS Núm. de Acceso 110052, progenie, mutantes o variantes del mismo que retienen la actividad contra los ácaros pestíferos y los hongos patógenos de las plantas.
Description
Nuevas especies de hongos y su empleo en el
control de plagas y enfermedades.
La presente invención se refiere a tres nuevas
especies de hongos de la subdivisión Basidiomicetos, orden
Ustilaginales, a cualquiera productos u otras sustancias químicas
obtenidas a partir de ellos o de su progenie y/o cualesquiera
mutantes de los mismos, y a su empleo en el control de plagas,
particularmente ácaros pestíferos (Acari) y hongos patógenos de las
plantas, especialmente mildius pulverulentos.
\vskip1.000000\baselineskip
Las enfermedades de las plantas de origen
fúngico y ácaros tienen un impacto adverso importante sobre la
producción de cosechas importantes en todo el mundo.
Las plagas de ácaros pertenecen a dos familias
principales. La familia más importante es la de las Tetranychidae,
conocida también como los ácaros-araña. Estos ácaros
causan un daño generalizado a almendras, manzanas, aguacates,
mandioca, cítricos, algodón, uvas, té, diversas cosechas de
invernadero como pepino, pimiento y tomate, y varias plantas
ornamentales, con inclusión de rosas y crisantemos [Helle, W. &
Sabelis, T.W. Spider Mites, Their Biology, Natural Enemies and
Control, Volúmenes I y II, Elsevier, Amsterdam (1985)]. La otra
familia, Eriophyidae, corresponde a los ácaros de la roya o de las
agallas, que pueden ser plagas importantes de manzanas, cítricos,
coco, pera, grosellas y bayas, así como de muchas hortalizas y
plantas ornamentales [Lindquist et al., (compiladores)
Eriophyoid Mites, Their Biology, Natural Enemies and Control.
Elsevier, Amsterdam (1996)]. El ácaro-araña carmín,
Tetranychus cinnabarinus, y el ácaro rojo de los cítricos,
Panonychus citri, pertenecen a la primera familia, en tanto
que el ácaro de la roya de los cítricos, Phyllocoptruta
oleivora, pertenece a la última. En Israel, el
ácaro-araña carmín es una plaga importante de
hortalizas y plantas ornamentales, cuyo control químico ha
tropezado con dificultades crecientes debido al desarrollo de
resistencia a los plaguicidas. El ácaro rojo de los cítricos es de
menor importancia, mientras que el ácaro de la roya de los cítricos
es la plaga principal de los cítricos en Israel y muchas otras
partes del mundo. Los cultivadores locales de cítricos han venido
encontrando problemas graves en el control químico del ácaro de la
roya de los cítricos, debido a su resistencia incrementada a los
acaricidas y la presencia de residuos de plaguicidas en la fruta
exportada [Palevsky et al.] Problemas de ácaros en los
cítricos y estrategias de control en Israel. Proceedings of the
International Congress of Citriculture, (en prensa)]. Como
contrapartida, el control biológico de esta plaga con depredadores
introducidos acaba de comenzar y es todavía incierto [Argov, Y. S.
Amitai, G.A.C. Beattie y U. Gerson, Crianza, liberación y
establecimiento de ácaros depredadores importados para controlar el
ácaro de la roya a los cítricos en Israel. BioControl,
47:399-409 (2002)].
Análogamente, los fitopatógenos fúngicos causan
pérdidas económicas importantes y graves en las industrias
agrícolas y en horticultura. La germinación y el crecimiento de las
plantas infectadas se inhiben; las plantas sucumben a la roya
blanda y pueden incluso morir. Los suelos infestados son inadecuados
para cultivar ciertas cosechas. Los mildius pulverulentos son las
enfermedades más comunes, extendidas y fácilmente reconocibles de
las plantas. Los mismos están causados por hongos de la familia
Erysiphaceae, que se agrupan en siete géneros principales [Agrios,
G.N. Plant Pathology, 4ª ed. Academic Press, Nueva
York (1997); Braun, U. A Monograph of the Erysiphales (Powdery
Mildews), J. Cramer, Grebruder Borentraeger, Berlín (1987)]. Los
mildius pulverulentos se caracterizan por manchas o parches de un
crecimiento pulverulento blanco a grisáceo sobre los tejidos de las
plantas jóvenes, que pueden cubrir hojas enteras y otros órganos de
la planta [Agrios (1997) id ibid.]. Los mildius
pulverulentos están presentes muy a menudo en plantas de cosecha y
ornamentales, y las pérdidas de rendimiento que provocan anualmente
en todas las cosechas sobrepasan probablemente las pérdidas
causadas por cualquier otro tipo individual de enfermedad de las
plantas. Las cosechas que sufren gravemente de los mildius
pulverulentos incluyen trigo, cebada, pepino, calabaza, fresa, uva,
manzana, mango, plantas ornamentales tales como rosa, begonia, lila
y muchas otras [Agrios (1997) id ibid.]. Los fungicidas
químicos controlan usualmente estas enfermedades, pero este modo de
control está viéndose continuamente expuesto al desarrollo rápido
de resistencia a los fungicidas recomendados. Como en el caso de las
plagas de ácaros, el control biológico de los fitopatógenos
fúngicos está también precisamente en su infancia. Aunque el
biofungicida AQ10 ha sido registrado para control de los mildius
pulverulentos desde 1996, el alcance de su uso es todavía moderado
en comparación con el uso de fungicidas químicos [Copping, L.G.
(compilador) The BioPesticide Manual, 1ª ed. British
Crop Protection Council, Farnham (1998); Sztejnberg et al.
Ampelomyces quisqualis for biological and integrated control of
powdery mildews in Israel. J. Phytopathology
124:285-295 (1989)]. Globalmente, los gastos
mundiales en fungicidas para controlar los mildius purulentos se
estima que se aproximan a un billón de dólares de los Estados
Unidos anualmente.
En resumen, los ácaros de las plantas y los
fitopatógenos fúngicos se controlan todavía en su mayor parte con
acaricidas y fungicidas químicos, a pesar de los problemas
corolarios arriba mencionados. Así pues, el abuso generalizado de
los plaguicidas y la emergencia de resistencia de las plagas a la
mayoría de estos productos químicos ha aumentado la demanda de
plaguicidas biológicos respetuosos con el medio ambiente, o
"bioplaguicidas" [Copping, 1998, id ibid.].
\newpage
Con objeto de satisfacer esta demanda, es un
objeto principal de la invención proporcionar nuevas especies de
hongos que poseen actividad contra los ácaros y hongos de las
plantas, y que pueden utilizarse contra ellos. Otro objeto de la
invención es proporcionar preparaciones antifúngicas y
anti-acaricidas, o bioplaguicidas.
Hasta ahora, no se ha registrado indicación
alguna de que ninguna de las tres nuevas especies de hongos
descritas y reivindicadas en esta memoria haya tenido efecto
adverso alguno sobre las plantas con las cuales estuvieron en
contacto de cualquier modo, ni han resultado perjudiciales para
ningún otro organismo (excepto las plagas contra las cuales se
ensayaron). Por consiguiente, es un objeto adicional de la invención
proporcionar composiciones acaricidas y fungicidas que estarían
desprovistas de efectos adversos sobre las plantas tratadas, o sobre
el medio ambiente.
Estos y otros objetos de la presente invención
resultarán evidentes a medida que avanza la descripción.
La presente invención describe tres especies
nuevas de hongos de la subdivisión Basidiomicetos, orden
Ustilaginales, y su utilización en el control de las plagas,
particularmente ácaros pestíferos (Acari) y hongos patógenos de las
plantas, especialmente mildius pulverulentos.
Como se reivindica en esta memoria, la presente
invención se refiere a un cultivo sustancialmente puro del hongo
Meira geulakonigae nom. prov. (M. geulakonigae), un
cultivo sustancialmente puro del hongo Meira argovae nom.
prov. (M. argovae), y un cultivo sustancialmente puro del
hongo Acaromyces ingoldii nom. prov. (A. ingoldii),
así como sus medios acondicionados respectivos.
La totalidad de los cultivos de hongos de la
invención son biológicamente puros.
Las tres nuevas especies de hongos han sido
depositadas en el Centraal Bureau voor Schimmelcultures (CBS),
Institute of the Royal Netherlands Academy of Arts and Science, de
acuerdo con las estipulaciones del Tratado de Budapest para el
Depósito de Microorganismos.
La presente invención se refiere también a
productos biológicamente activos derivados de hongos seleccionados
del grupo constituido por M. geulakonigae, M. argovae
y A. ingoldii, en donde dicha actividad biológica es
acaricida y/o fungicida, y en donde dichos productos son
esporas.
La presente invención proporciona una
composición para el control de ácaros y una composición para el
control de hongos. Ambas composiciones comprenden un agente de
biocontrol derivado de cualquiera o al menos uno de los hongos de
la invención. El agente de biocontrol está constituido por esporas.
La composición acaricida y la composición fungicida pueden
comprender adicionalmente un vehículo agronómicamente compatible,
extraído de un cultivo líquido de los hongos respectivos. A este
respecto, dicho vehículo puede seleccionarse del grupo constituido
por agua, medio de cultivo, aceites o cualesquiera otros adyuvantes
o vehículos.
La composición acaricida de la invención está
disponible en la forma de una suspensión líquida que contiene entre
aproximadamente 10^{7} y 10^{10} esporas/ml, con preferencia
aproximadamente 10^{9} esporas/ml.
La composición fungicida de la invención está
disponible en la forma de suspensión líquida que contienen entre
aproximadamente 10^{7} y aproximadamente 10^{10} esporas/ml, con
preferencia aproximadamente 10^{8} esporas/ml.
Ambas composiciones acaricida y fungicida de la
invención pueden comprender adicionalmente un adyuvante convencional
utilizado en formulaciones para agentes de biocontrol.
Es otro aspecto de la presente invención
proporcionar un método para producir un fungicida y/o un acaricida,
en donde el ingrediente activo de dicho fungicida/acaricida es uno
cualquiera de M. geulakonigae, M. argovae o A.
ingoldii, o cualquier combinación de los mismos, y/o un cultivo
de los mismos, y/o esporas de los mismos. Este proceso comprende
cultivar un hongo de la invención, y aislar opcionalmente dicho
ingrediente activo del cultivo.
En una realización particular, el método
comprende los pasos de: (a) cultivar, en condiciones aerobias o
anaerobias, uno cualquiera de los hongos de la invención en un
medio de cultivo apropiado, (b) cosechar el cultivo; (c) separar
las esporas del medio líquido; y o bien (d) suspender las esporas en
un vehículo líquido agronómicamente compatible para dar un
fungicida/acaricida en forma líquida; o (e) liofilizar las esporas,
para dar un fungicida/acaricida en forma seca. Dicho
fungicida/acaricida en forma seca puede disolverse ulteriormente en
un vehículo líquido agronómicamente compatible. En este método, el
hongo debe cultivarse a una temperatura de aproximadamente 20ºC a
aproximadamente 30ºC, con preferencia de aproximadamente 23ºC a
aproximadamente 27ºC, y de modo más preferible a aproximadamente
25ºC. El pH del cultivo de hongos debe ser desde aproximadamente 5,1
a aproximadamente 5,6, siendo ideal preferiblemente un pH de
5,1.
Por último, la invención proporciona un método
para controlar infestaciones de ácaros y/u hongos en plantas
sensibles a los mismos, que comprende aplicar a la planta la
composición acaricida o fungicida de la invención. La infestación
por ácaros puede estar causada por Phyllocoptruta oleivora
(ácaro de la roya de los cítricos) u otros ácaros de la roya y las
agallas, por Tetranychus cinnabarinus
(ácaro-araña carmín), y/o Panonychus citri
(ácaro rojo de los cítricos) u otros ácaros-araña,
mientras que la infestación fúngica es debida usualmente a
Sphaerotheca fusca (mildiu pulverulento) u otros mildius
pulverulentos. Cualesquiera plantas comerciales sensibles a
ácaros-araña, ácaros de la roya, ácaros de las
agallas o a enfermedades fitopatógenas fúngicas, en particular al
mildiu pulverulento, pueden ser tratadas con la composición
acaricida y/o con la composición fungicida de la invención.
La totalidad de las características y ventajas
de la invención anteriores y otras se comprenderán mejor con ayuda
de la descripción ilustrativa y no limitante siguiente de
realizaciones preferidas de la misma, con referencia a las figuras
del apéndice.
Figura 1: Dendrograma que muestra la
clasificación taxonómica de las tres especies fúngicas.
AS001 representa Acaromyces ingoldii nom.
prov.; AS004 representa Meira geulakonigae nom. prov.; y
AS005 representa Meira argovae nom. prov.
Figura 2: Fotografías de las tres nuevas
especies fúngicas.
Figura 3: Efecto del tratamiento con Meira
geulakonigae nom. prov. (M. geulakonigae) sobre el
alcance del daño causado por el mildiu pulverulento
(Sphaerotheca fusca) para plantas infectadas de
pepino.
Gráfico que muestra el cubrimiento de las hojas
de pepino (en porcentaje) por el mildiu pulverulento (MP) antes o
después de la infección, y tratadas o sin tratar con M.
geulakonigae. Se representan los diferentes tratamientos como:
Agua, ausencia de infección, agua únicamente; Mg, ausencia de
infección, M. geulakonigae solo; MP-Agua,
infección en primer lugar y a continuación agua;
MP-Mg, infección en primer lugar, y a continuación
M. geulakonigae; Agua-MP, agua en primer
lugar, seguido por infección; Mg-MP, M.
geulakonigae en primer lugar, seguido por infección. A, B, C y
D denotan 13, 20, 27 y 53 días después del tratamiento,
respectivamente. Abreviaturas: Cub. h., cubrimiento de las
hojas.
Figura 4: Meira geulakonigae nom.
prov. aumenta el rendimiento de las plantas de pepino infectadas por
el mildiu pulverulento (Sphaerotheca fusca).
Gráfico que muestra el rendimiento medio de
pepinos en peso (g) de plantas infectadas con mildiu pulverulento,
antes o después del tratamiento con una suspensión de esporas de
M. geulakonigae. Los diferentes tratamientos se representan
por las mismas abreviaturas que en Fig. 3. Abreviaturas: P.,
peso.
Figura 5A-B: Meira
geulakonigae nom. prov. reduce la mortalidad de las hojas y
aumenta el rendimiento de las plantas de pepino.
- Fig. 5A:
- Gráfico que muestra el efecto de M. geulakonigae sobre (A) el número de hojas de pepino destruidas por el mildiu pulverulento (Sphaerotheca fusca).
- Fig. 5B:
- Gráfico que muestra el efecto de M. geulakonigae sobre el rendimiento de pepinos.
Los diferentes tratamientos se representan por
las mismas abreviaturas que en Fig. 3. Abreviaturas: Nº. h., número
de hojas; P., peso.
Figura 6A-B: Meira
geulakonigae nom. prov. reduce el cubrimiento de las plantas de
pepino por el mildiu pulverulento (Sphaerotheca
fusca).
- Fig. 6A:
- Vista general del efecto del tratamiento con M. geulakonigae sobre plantas de pepino infectadas por el mildiu pulverulento (MP) en un invernadero piloto comercial. Derecha: infección natural de MP sobre plantas de pepino que se trataron con M. geulakonigae. Izquierda: infección natural de MP en las plantas de pepino.
- Fig. 6B:
- Primer plano de (A). Derecha: infección natural de MP en plantas de pepino. Izquierda: infección natural de MP en plantas de pepino que se trataron con M. geulakonigae.
Abreviaturas: Mg, M. geulakonigae; s.-
tr., sin tratar; tr., tratadas.
Figura 7: Meira geulakonigae nom.
prov. reduce la infestación por el ácaro-araña
carmín (Tetranychus cinnabarinus) en las plantas de
pepino.
Gráfico que muestra el número de hojas
infestadas por al menos un ácaro-araña carmín en
plantas de pepino tratadas con M. geulakonigae. Datos
recogidos a partir de tres exámenes durante un periodo de 16 días,
en un invernadero piloto comercial. Los diferentes tratamientos se
representan por las mismas abreviaturas que en Fig. 3.
Abreviaturas: Nº. h., número de hojas.
Figura 8: Meira geulakonigae nom.
prov. aumenta la mortalidad del ácaro de la roya de los cítricos
(Phyllocoptruta oleivora) en las hojas de los
cítricos.
Gráfico que muestra el porcentaje de mortalidad
del ácaro-araña de los cítricos en las hojas de los
cítricos, después de tratamiento con M. geulakonigae
(10^{9} esporas/ml).
Abreviaturas: T, tratada; C, control; Mort.,
mortalidad.
El objeto de la presente invención se refiere al
uso de agentes de biocontrol de origen fúngico para controlar
ciertas plagas. Se ilustra específicamente en esta memoria el uso de
las nuevas especies de la invención, Meira geulakonigae nom.
prov. (M. geulakonigae), Meira argovae nom. prov.
(M. argovae) y Acaromyces ingoldii nom. prov. (A.
ingoldii).
Nota 1: El descubrimiento del asunto de las
especies de esta solicitud de patente no se había publicado en el
momento de la presentación de esta solicitud. Por tanto, para los
propósitos de la técnica de Taxonomía, los nombres de las especies
respectivas se consideraron provisionales, y requieren la notación
"nom. prov.".
Nota 2: Para los propósitos de esta solicitud de
patente, Meira geulakonigae nom. prov. es equivalente a
M. geulakonigii nom. prov..
Un aspecto adicional de la presente invención
incluye composiciones y formulaciones que son sumamente eficaces en
el suministro del agente de biocontrol para la plaga diana y están
aparentemente desprovistas de cualesquiera efectos adversos sobre
las plantas tratadas y/o sobre el medio ambiente.
Cultivos sustancialmente puros de A.
ingoldii, M. geulakonigae y M. argovae (todos
ellos nom. prov.) han sido depositados en el Centraal Bureau voor
Schimmelcultures (CBS), Institute of the Royal Netherlands Academy
of Arts and Science (P.O.Box 85167, 3508 AD, Utrecht, Países Bajos),
como sigue:
Los depósitos están disponibles en caso
requerido de acuerdo con las leyes de patentes extranjeras en los
países en que se presenten contrapartidas de esta solicitud, o de su
progenie. Sin embargo, debe entenderse que la disponibilidad de los
depósitos no constituye una licencia para practicar la presente
invención en derogación de los derechos de patente concedidos por
una acción gubernamental.
Adicionalmente, los presentes depósitos de
cultivo se guardaron y están disponibles al público de acuerdo con
las estipulaciones del Tratado de Budapest para el Depósito de
Microorganismos, es decir, que los mismos se guardaron con todo el
cuidado necesario para mantenerlos viables y exentos de
contaminación durante un periodo de al menos cinco años desde el
requerimiento más reciente para el suministro de una muestra de un
depósito, y en cualquier caso, durante un periodo de al menos
treinta (30) años a partir de la fecha de depósito o durante la
vida aplicable de cualquier patente que pueda ser expedida que
describa los cultivos. El depositante reconoce el deber de
reemplazar el o los depósitos en caso de que el depositario sea
incapaz de suministrar una muestra en caso requerido, debido a la
condición de un depósito. Todas las restricciones acerca de la
disponibilidad al público de los presentes depósitos de cultivo se
eliminarán irrevocablemente después de la concesión de una patente
que describa las mismas.
Debe entenderse que un cultivo sustancialmente
puro es un cultivo que puede comprender variaciones que una persona
con experiencia ordinaria en la técnica reconocería que no frustran
el propósito declarado de la invención, y que estaría todavía
dentro del presente concepto de inventiva.
Los cultivos preferidos, de acuerdo con la
invención, son cultivos biológicamente puros. Por "biológicamente
puros", como se utiliza en esta memoria, se entiende un cultivo
exento de microorganismos contaminantes deletéreos viables.
Dos de las nuevas especies fúngicas de la
invención, a saber M. geulakonigae, y A. ingoldii
(todos ellos nom. prov.), se obtuvieron de cadáveres del ácaro de
la roya de los cítricos, encontrados en hojas de cítricos en dos
ecosistemas en Israel, específicamente la región de la Galilea
Superior y el sur de la Llanura Costera. La tercera nueva especie
de hongo, M. argovae (nom. prov.), se aisló del cadáver del
ácaro-araña carmín encontrado en la hoja de un
arbusto del haba del ricino (Ricinus communis), Ness Ziona en
la Llanura Costera central de Israel.
Se realizaron caracterizaciones taxonómicas,
morfológicas y moleculares utilizando los métodos recomendados por
el CBS. Debe mencionarse que, debido a su tamaño diminuto, la
totalidad de las nuevas especies pudieron caracterizarse únicamente
por técnicas de biología molecular. Las tres especies están dentro
de la subdivisión Basidiomicetos, orden Ustilaginales. El
dendrograma representado (Fig. 1) es una representación del
resultado de un análisis filogenético de un estudio molecular para
la ubicación correcta de los hongos, que indica la separación clara
de las tres nuevas especies. Conforme al dendrograma, las tres
nuevas especies se designan como Acaromyces ingoldii nom.
prov., AS001; Meira geulakonigae nom. prov., AS004; y
Meira argovae nom. prov., AS005. Se realizaron
determinaciones más precisas con el Espaciador Interno Transcrito de
Subunidades Grandes (ITS-LSU), y se realizaron de
acuerdo con el Método de Grupos de Pares no Ponderados utilizando el
programa de Medias Aritméticas (UPGMA), y los métodos de Análisis
de los Componentes Principales LSU-ITS (PCA). Los
dibujos resultantes demuestran la ubicación inequívoca de las tres
nuevas especies (Fig. 1 y datos no presentados).
En la Figura 2 se presentan fotografías de las
tres especies de hongos. Las tres especies se cultivaron en agar
patata-dextrosa (PDA) durante 11 días a
aproximadamente 25ºC. La Figura 2a muestra A. ingoldii, cuya
colonia es blanquecina, mientras que M. geulakonigae (Fig.
2b) y M. argovae (Fig. 2c) son parduscas. Ambas colonias de
M. geulakonigae y M. argovae secretan pigmentos en el
medio, secretando M. argovae cantidades mayores. Las tres
especies demostraron diferencias en el patrón de crecimiento de
colonias. La colonia de M. geulakonigae es más lanosa, en
tanto que M. argovae exhibe un patrón de crecimiento casi
segmentado. El crecimiento de los hongos era similar en condiciones
de luz y oscuridad. Ninguna de las tres especies ha mostrado
actividades quitinolíticas o proteolíticas de tipo alguno.
Así pues, en un primer aspecto, la invención
proporciona cultivos sustancialmente puros de cada uno de los
hongos M. geulakonigae, M. argovae y A.
ingoldii (todos ellos nom. prov.). Específicamente, la
invención proporciona cultivos sustancialmente puros de los hongos
depositados en el CBS bajo los Núms. de Acceso CBS 110052, CBS
110053 y CBS 110050.
Es conocido en la técnica el modo de obtener
mutantes de microorganismos sin alterar las características de los
mismos. Por ejemplo, pueden obtenerse mutantes por tratamiento con
mutágenos físicos o químicos, tales como luz UV, rayos X, rayos
gamma y productos químicos tales como
n-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina.
Se conoce también en la técnica el modo de obtener variantes
naturales, v.g. por cribado de cultivos de la cepa parental. Por
consiguiente, la invención se refiere también a los mutantes o
variantes de M. geulakonigae, M. argovae y A.
ingoldii (todos ellos nom. prov.) que retienen las
características descritas en esta memoria, particularmente mutantes
de los hongos depositados en el CBS bajo los Núms. de Acceso CBS
110052, CBS 110053 y CBS 110050.
En una realización, los hongos de la invención
pueden cultivarse por cualesquiera métodos conocidos en la técnica
para su cultivo, v.g. cultivo anaerobio, cultivo aerobio sobre
agares de diferentes tipos, o fermentación aerobia sumergida en
fermentadores. Preferiblemente, el cultivo se realiza en condiciones
de fermentación sumergida.
Los medios para cultivo o fermentación pueden
contener fuentes asimilables de carbono y fuentes digeribles de
nitrógeno. Fuentes de carbono adecuadas incluyen, pero sin carácter
limitante, glucosa, lactosa, manitol, dextrina, maíz, almidón,
xilosa, fructosa, lactosa y análogos.
Fuentes de nitrógeno adecuadas incluyen, pero
sin carácter limitante, materiales naturales que contienen nitrógeno
y sus productos, v.g., extractos de carne, peptonas, soluciones de
infiltración de maíz, extractos de levadura, harinas de haba de
soja, triptonas, harinas de semilla de algodón, harinas de trigo, y
análogos. También pueden utilizarse materiales nitrogenados
orgánicos o inorgánicos, v.g. urea, nitratos y sales de amonio,
tales como nitrato de sodio, acetato de amonio, cloruro de amonio,
sulfato de amonio, fosfato de amonio, y análogas.
Opcionalmente, los medios para cultivo de M.
geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos
ellos nom. prov.) pueden contener también sales inorgánicas,
elementos traza, y estimuladores del crecimiento.
Las sales inorgánicas adecuadas para uso en el
medio para cultivo de M. geulakonigae, M. argovae y
A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) incluyen, pero sin
carácter limitante, sales capaces de proporcionar cinc, sodio,
magnesio, calcio, amonio, cloruro, carbonato, sulfato, nitrato, y
análogos.
Adicionalmente, elementos traza esenciales
necesarios para el crecimiento y desarrollo de los organismos pueden
incluirse también en el medio de cultivo. Tales elementos traza se
encuentran comúnmente como impurezas en otros componentes del medio
en cantidad suficiente para satisfacer las necesidades de
crecimiento del organismo.
Los estimuladores del crecimiento adecuados para
uso en la invención incluyen, pero sin carácter limitante, glicerol
y sales de sodio, tales como acetato de sodio, glutamato de sodio,
tartrato de sodio, y análogas.
Los hongos de la invención deben cultivarse a
temperaturas de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 30ºC, con
preferencia desde aproximadamente 23ºC a aproximadamente 27ºC, y de
modo más preferible a aproximadamente 25ºC.
Como resulta habitual en los procesos de cultivo
aerobios, se inyecta aire estéril en la vasija por el fondo
mientras se agita el medio con impulsores de turbina convencionales.
En general, la tasa de aireación y la tasa de agitación deben ser
suficientes para mantener un nivel de oxígeno disuelto de al menos
30% de saturación de aire con una presión interna en la vasija de
0,2 bar.
El valor de pH en el fermentador varía junto con
el medio de cultivo una cantidad de inóculos utilizada. Típicamente,
el valor de pH se mantiene débilmente ácido. En caso necesario,
antes de la inoculación o durante la fermentación, el valor de pH
en el fermentador puede ajustarse de modo adecuado para hacerlo
débilmente ácido, v.g. aproximadamente pH 5,1 \pm 0,2 a
aproximadamente pH 5,6. De manera preferible, el valor de pH antes
de la inoculación se ajusta a aproximadamente pH 5,1.
Todos materiales básicos conocidos en la técnica
pueden utilizarse para ajustar el valor de pH, v.g. sales de metal
alcalino, tales como sales de sodio, y análogas.
En principio, el tiempo para cultivar M.
geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii (todos
ellos nom. prov.) debería ser bastante para producir una cantidad
suficiente de esporas. En general, el cultivo se realiza durante
aproximadamente 5 a aproximadamente 8 días a dichas temperaturas,
con preferencia a 25ºC.
Adicionalmente, pueden añadirse adecuadamente
agentes antiespumantes guante la fermentación para inhibir la
formación excesiva de espuma. Por ejemplo, puede añadirse
propilenglicol de un peso molecular de aproximadamente 2000 al
medio de cultivo en una cantidad de aproximadamente 0,2 g/litro de
medio de cultivo.
El término "medio acondicionado" utilizado
en la memoria descriptiva hace referencia al contenido total en un
vaso o fermentador, con inclusión tanto de los componentes celulares
como de los no celulares, resultante directamente de la
fermentación de uno cualquiera o una combinación de los hongos de la
invención en un medio de cultivo apropiado sin ser sometido a
filtración, separación o purificación.
Así pues, el medio acondicionado de uno
cualquiera de los hongos de la invención se obtiene por cultivo de
dichos hongos en el medio de cultivo arriba especificado y en las
condiciones especificadas de pH, temperatura y duración.
El Ejemplo 1 muestra la actividad de M.
geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii en el
control del mildiu pulverulento en la planta de pepino, mientras
que en los Ejemplos 2 y 3, se utilizan las tres nuevas especies de
hongos en el control de plagas de ácaros. Análogamente, el medio
acondicionado de los hongos de la invención debe ser activo en el
control de las plagas de ácaros, tales como el
ácaro-araña carmín (Tetranychus
cinnabarinus), el ácaro rojo de los cítricos (Panonychus
citri), el ácaro rojo oriental (Eutetranychus
orientalis), y el ácaro de la roya de los cítricos
(Phyllocoptruta oleivora), y hongos fitopatógenos. El
ingrediente activo en el medio acondicionado es cualquier compuesto
que sea tóxico y/o incompatible con la vida o el crecimiento de las
plagas de ácaros y/u hongos fitopatógenos.
El medio acondicionado puede utilizarse
directamente para el control de las plagas de ácaros y hongos
fitopatógenos o como parte de una composición de la invención, como
se describe más adelante.
En otro aspecto, la invención se refiere a una
composición o formulación para el control de plagas, que comprende
como ingrediente efectivo cualquier agente de biocontrol eficaz
derivado de uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae,
M. argovae o A. ingoldii (todos ellos nom. prov.) o
progenie o mutantes de los mismos, o cualquier mezcla de los
mismos, siendo dicho agente de biocontrol esporas.
Uno cualquiera de los hongos de la invención,
M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii
(todos ellos nom. prov.), puede producir o contener un compuesto,
que puede ser un nucleótido, una proteína, trazas de metales, que
son, directa o indirectamente, tóxicos o incompatibles con la vida
de las plagas de ácaros y/o los hongos fitopatógenos. A ellos se
hace referencia en esta memoria como productos de los mismos, o de
modo más específico productos biológicamente activos de los mismos.
Análogamente, los productos pueden derivarse también del grupo
constituido por esporas y conidios, preferiblemente esporas,
derivadas de los hongos de la invención.
En los Ejemplos 2 y 3, plantas de semillero de
pepino y cítricos infestadas por ácaros se tratan con M.
geulakonigae y el nivel de infestación disminuye
significativamente cuando se compara con plantas infestadas
tratadas con agua o sin tratar. Así, en una realización, la
composición de la presente invención tiene por objeto el control de
ácaros infectantes de las plantas (Acari). En una realización
preferida, las plagas de ácaros son el ácaro-araña
carmín (Tetranychus cinnabarinus), el ácaro rojo de los
cítricos (Panonychus citri), el ácaro rojo oriental
(Eutetranychus orientalis), y el ácaro de la roya de los
cítricos (Phyllocoptruta oleivora). La composición para el
control de los ácaros comprende una suspensión acuosa, que contiene
entre aproximadamente 10^{7} y 10^{10} esporas/ml, con
preferencia 10^{9} esporas/ml. La composición de control de los
ácaros de la invención puede comprender adicionalmente otros
materiales activos o no activos agronómicamente aceptables. Estos
pueden ser otros acaricidas y/o vehículos, diluyente, adyuvantes y
excipientes agronómicamente aceptables.
Los hongos y composiciones de la presente
invención y sus esporas pueden utilizarse para el tratamiento y la
prevención de la infestación por ácaros en plantas que incluyen,
pero sin carácter limitante, todas las variedades de plantas de
cítricos, manzanas, uvas, pepinos, calabazas y cualesquiera otras
plantas comerciales que son atacadas por ácaros fitopatógenos.
En el Ejemplo 1, se utiliza con éxito M.
geulakonigae en el tratamiento de plantas de pepino infestadas
por el mildiu pulverulento. Así, en otra realización, los hongos y
composiciones de la presente invención y sus productos pueden
utilizarse para el control de hongos fitopatógenos. En una
realización preferida, la invención se refiere al tratamiento y/o
la prevención de la infestación del mildiu pulverulento del pepino,
Sphaerotheca fusca, así como de otros mildius pulverulentos
en cosechas diferentes, y otros géneros y especies de hongos
fitopatógenos.
Las composiciones para el control de los hongos
comprenden una suspensión acuosa, que contiene entre aproximadamente
10^{7} y 10^{10} esporas/ml, con preferencia 10^{9}
esporas/ml. Las composiciones de control de los hongos de la
invención pueden comprender adicionalmente otros materiales activos
o no activos agronómicamente aceptables. Éstos pueden ser otros
acaricidas, fungicidas, y/o vehículos, diluyentes, adyuvantes y
excipientes agronómicamente aceptables.
Los hongos y las composiciones antifúngicas de
la invención pueden utilizarse para el tratamiento de diversas
cosechas. Tales cosechas pueden ser, pero sin carácter limitante,
pepino, tomate, berenjena, pimiento, manzana, uvas y todas las
cosechas comerciales sensibles a los hongos fitopatógenos.
En un aspecto adicional, la invención comprende
un método para la producción o preparación de un fungicida y/o un
acaricida, en donde el ingrediente activo de dicho
fungicida/acaricida es uno cualquiera de M. geulakonigae,
M. argovae o A. ingoldii o cualquier combinación de
los mismos, y/o un cultivo de los mismos, y/o esporas de los
mismos. Este proceso comprende cultivar un hongo de la invención y,
opcionalmente, aislar dicho ingrediente activo del cultivo.
En una realización particular, el método
comprende los pasos de: (a) cultivar, en condiciones aerobias o
anaerobias, uno cualquiera de los hongos de la invención en un
medio de cultivo apropiado; (b) cosechar el cultivo; (c) separar
las esporas del medio líquido; y o bien (d) suspender las esporas en
un vehículo líquido agronómicamente compatible para dar un
fungicida/acaricida en forma líquida; o (e) liofilizar las esporas,
para dar un fungicida/acaricida en forma seca. Dicho
fungicida/acaricida en forma seca puede disolverse ulteriormente en
un vehículo líquido agronómicamente compatible. Opcionalmente, las
esporas pueden lavarse con agua desionizada después de separar las
mismas del medio líquido.
En el método arriba descrito, el hongo debe
cultivarse a una temperatura de aproximadamente 20ºC a
aproximadamente 30ºC, con preferencia desde aproximadamente 23ºC a
aproximadamente 27ºC, y de modo más preferible a aproximadamente
25ºC. El pH del cultivo de hongos debe estar comprendido entre
aproximadamente 5,1 y aproximadamente 5,6, siendo preferiblemente
ideal un pH de 5,1.
En una realización, el fungicida/acaricida es
una suspensión acuosa de esporas, obtenida por cultivo, en
condiciones aerobias o anaerobias, de uno cualquiera de los hongos
M. geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii
(todos ellos nom. prov.) en un medio de cultivo apropiado.
En una segunda realización, el
fungicida/acaricida es un liofilizado de esporas de hongos, obtenido
por el método arriba descrito, en el cual las esporas son de uno
cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae
o A. ingoldii. Esta forma liofilizada puede ser ventajosa
para almacenamiento y manipulación del fungicida/acaricida.
La composición puede prepararse de cualquier
manera conocida, v.g. por refuerzo del ingrediente activo con
vehículos, adyuvantes o diluyentes agronómicamente aceptables, tales
como disolventes, emulsionantes y dispersantes o agentes
tensioactivos.
Disolventes adecuados para uso en la invención y
sus diversos productos incluyen, pero sin carácter limitante,
aromáticos, v.g. xileno; aromáticos clorados, v.g. clorobencenos;
parafinas, v.g. fracciones de aceite mineral; alcoholes, v.g.
metanol y butanol; cetonas, v.g., ciclohexanona; aminas, v.g.
etanolamina y dimetilformamida; y agua, preferentemente
desionizada. Cuando se utiliza agua, pueden utilizarse también como
co-disolventes otros disolventes orgánicos.
Vehículos adecuados para uso en la invención y
sus productos incluyen, pero sin carácter limitante, minerales
naturales o sintéticos molidos, v.g. caolines, arcillas, talco,
creta, sílice, silicatos, y análogos.
Emulsionantes adecuados para uso en las
composiciones de la invención incluyen, pero sin carácter limitante,
emulsionantes no iónicos y aniónicos (v.g. alcohol-éteres grasos de
polioxietileno, alquilsulfonatos, arilsulfonatos, y análogos.
Dispersantes adecuados para uso en las
composiciones de la invención incluyen, pero sin carácter limitante,
lejías residuales de lignosulfito y metilcelulosa; y análogos.
Agentes tensioactivos adecuados incluyen, pero
sin carácter limitante, ácido ligno-, fenol-, naftaleno- y
dibutilnaftalenosulfónico, ácidos grasos, alquil- y
alquilarilsulfonatos, alquil-lauril-éter y sulfatos
de alcoholes grasos, sales de hexa-, hepta- y octadecanoles
sulfatados y de alcohol-glicoléteres grasos,
condensados de naftaleno sulfonado y sus derivados con
formaldehído, condensados de naftaleno, o de los ácidos
naftalenosulfónicos, con fenol y formaldehído,
polioxietileno-octilfenol-éter,
iso-octil-, octil- o nonilfenol etoxilado,
alquilfenol-poliglicoléteres,
tributilfenil-poliglicoléter,
alquil-lauril-poliéter-alcoholes,
alcohol isotridecílico, condensados alcohol graso-óxido de etileno,
aceite de ricino etoxilado,
polioxietilen-alquiléteres o
polioxipropilen-alquiléteres, alcohol
laurílico-poliglicoléter-acetato,
ésteres de sorbitol, lejías residuales de lignosulfito o
metilcelulosa.
En otro aspecto adicional, la invención
comprende el uso de las nuevas especies y sus esporas en un método
para el control y/o la prevención de la infestación por ácaros
(Acari) y/u hongos en las plantas.
En una realización, el método comprende
pulverizar la planta, antes o después de una infestación por Acari
o una infección por hongos, con una composición que comprende una
suspensión de esporas de uno cualquiera de los hongos M.
geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos
ellos nom. prov.), o una mezcla de al menos dos de los mismos.
Las plantas crecen con gran rapidez, y las
infecciones fúngicas e infestaciones por ácaros se producen
repetidas veces, debido también a su naturaleza transportada por el
viento. Por ello, preferiblemente, en el método arriba mencionado,
la composición debe aplicarse sobre la planta semanal o
bisemanalmente, durante la estación. Este procedimiento es similar
al utilizado con los plaguicidas químicos.
Para el propósito de aplicación, la suspensión
acaricida o fungicida puede utilizarse directamente o formularse
como composiciones adecuadas para pulverización, atomización,
espolvoreo, esparcimiento o vertido. Por ejemplo, las composiciones
pueden formularse como soluciones listas para pulverización, polvos,
suspensiones, suspensiones acuosas o aceitosas de alta
concentración u otras suspensiones o dispersiones, emulsiones,
dispersiones en aceite, pastas, polvos, o gránulos.
El plaguicida acuoso no tóxico puede contener
también diversos aditivos tales como antioxidantes, conservantes,
neutralizadores del pH y/o clarificadores.
Durante el uso, el plaguicida acuoso no tóxico
se diluye y pulveriza o aplica en forma de nebulización sobre el
hospedador infestado, sea planta o animal, para entrar directamente
en contacto con la superficie de las plagas diana. En algunos
casos, pueden ser necesarias aplicaciones repetidas.
Para aumentar la eficiencia de la aplicación, la
composición fungicida/acaricida de la invención puede comprender
también otros ingredientes activos, tales como herbicidas,
insecticidas, estimuladores del crecimiento, fertilizantes y
análogos.
Como se ha expuesto y descrito, debe entenderse
que esta invención no está limitada a los ejemplos, pasos de
proceso, y materiales particulares descritos en esta memoria,
pudiendo variar en cierto grado dichos pasos de proceso y
materiales. Debe entenderse también que la terminología utilizada en
esta memoria se utiliza exclusivamente con el propósito de
describir realizaciones particulares, y no debe entenderse como
limitante, estando limitado únicamente el alcance de la presente
invención por las reivindicaciones adjuntas y equivalentes de las
mismas.
Debe tenerse en cuenta que, como se utilizan en
esta memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las
formas singulares "un", "uno" y "el/la" incluyen los
correspondientes plurales a no ser que el contenido dicte
claramente lo contrario.
A lo largo de esta memoria descriptiva y las
reivindicaciones que siguen, a no ser que el contexto requiera lo
contrario, debe entenderse que el término "comprenden" y
variaciones tales como "comprende" y "que
comprende(n)", implican la inclusión de una entidad
completa o paso indicado o un grupo de entidades completas o pasos,
pero no la exclusión de ninguna otra entidad completa o paso o
grupo de entidades completas o pasos.
Dos de las especies de hongos, a saber M.
geulakonigae, y A. ingoldii (todos ellos nom. prov.), se
obtuvieron de cadáveres del ácaro de la roya de los cítricos en
diferentes sitios de Israel, desde la Galilea Superior al Sur de la
Llanura Costera. La tercera especie, M. argovae (nom. prov.),
se aisló del ácaro-araña carmín encontrado en una
hoja de haba del ricino en la Llanura Costera.
Los tres hongos se cultivaron en gran cantidad
en el laboratorio sobre el medio sólido común, PDA (agar
patata-dextrosa, Difco) y sobre el medio líquido PB
(caldo de patata, Difco), a la temperatura óptima de 25ºC. Los
hongos tienen un ciclo vital muy rápido, y la producción máxima de
esporas tuvo lugar en el transcurso de 4 a 5 días. De este modo, se
obtuvieron cantidades muy grandes de esporas en un periodo de tiempo
breve.
Se separaron las esporas por lavado del medio de
cultivo en PDA con agua desionizada y se ajustó su cantidad (por
ml) a la concentración requerida con un hemocitómetro. Las esporas
se separaron del medio líquido por centrifugación. Se añadió agua
desionizada y se ajustó su concentración como anteriormente.
Se condujeron experimentos con el mildiu
pulverulento (MP) en el laboratorio y en el invernadero, y se
condujo un experimento en un invernadero piloto comercial. Se
pulverizaron suspensiones de M. geulakonigae (2 x 10^{8}
esporas/ml) sobre hojas de pepino. Se ensayaron el cubrimiento de
las hojas por MP y el número de hojas destruidas por la enfermedad,
y se determinaron por pesada la materia seca de las plantas enteras,
y sus rendimientos.
Se pulverizaron las plantas como se ha descrito
arriba, con una suspensión de M. geulakonigae de
aproximadamente 10^{9} esporas/ml.
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Ejemplo
1
Se realizaron experimentos iniciales para
ensayar el efecto de las tres nuevas especies de hongos M.
geulakonigae, M. argovae y A. ingoldii (todos
ellos nom. prov.) sobre hojas desprendidas infectadas con el mildiu
pulverulento del pepino. Las hojas tratadas se pulverizaron con cada
uno de los hongos, mientras que las hojas de control no se
pulverizaron, y se inocularon después todas las hojas con mildiu
pulverulento. Se evaluó la enfermedad como el área de las hojas
cubierta por el mildiu pulverulento, y el experimento se siguió
semanalmente durante un periodo de 4 semanas. Al final de las 4
semanas, los resultados obtenidos eran como sigue. Las hojas de
control tenían entre 50 y 100% de su área cubierta por los hongos
dentro de la primera semana, lo cual fue seguido luego por
mortalidad de las hojas. En contraste, las hojas tratadas con
cualquiera de M. geulakonigae, M. argovae o A.
ingoldii (todos ellos nom. prov.) tenían usualmente menos del
10% de su área cubierta por el mildiu pulverulento al cabo de 15
días. El área cubierta por la infección aumentaba luego hasta
aproximadamente 25% al final de las 4 semanas, transcurrido cuyo
tiempo la mayoría de las hojas estaban todavía vivas.
Después de los resultados satisfactorios
obtenidos en los experimentos iniciales con los tres hongos, se
realizó un estudio más sistemático utilizando únicamente M.
geulakonigae para el tratamiento de la infección por mildiu
pulverulento en los pepinos. Así, se pulverizaron plantas de pepino
con una suspensión de M. geulakonigae (Mg), antes o después
de la infección por el mildiu pulverulento (MP). Se utilizaron
varios protocolos de tratamiento: ausencia de infección y
únicamente tratamiento con agua (Agua en Fig. 3); ausencia de
infección y únicamente tratamiento con M. geulakonigae (Mg
en Fig. 3); infección con MP primeramente seguida por tratamiento
con agua (MP-Agua en Fig. 3); infección
primeramente, seguida por tratamiento con M. geulakonigae
(MP-Mg en Fig. 3); tratamiento con agua
primeramente, seguido por infección con MP (Agua-MP
en Fig. 3); tratamiento con M. geulakonigae primeramente,
seguido por infección con MP (Mg-MP en Fig. 3). Se
analizaron los parámetros siguientes:
(a) La extensión (porcentaje) del cubrimiento
con MP sobre las hojas de pepino se evaluó de acuerdo con el método
de Horsfall & Barratt [Horsfall, J.G. & Barratt, R.W.
Phytopathology, 35: 655 (1945)] 13, 20, 27 y 53 días
después del tratamiento, y se comparó con plantas de control
tratadas con agua. El cubrimiento con MP era más rápido en ausencia
de tratamiento con M. geulakonigae (Fig. 1, Agua,
MP-Agua y Agua-MP) que en su
presencia (Mg, MP-Mg y Mg-MP),
mostrando el efecto significativo de biocontrol de M.
geulakonigae sobre el hongo patógeno.
(b) El rendimiento de pepinos (en gramos, g) de
las plantas pulverizadas con M. geulakonigae era consistente
y significativamente mayor que el rendimiento de pepinos de las
plantas sin tratar (Fig. 4).
(c) El número de hojas muertas en las plantas de
pepino pulverizadas con una suspensión de Mg era significativamente
menor que en las plantas infectadas con MP pero que no recibieron el
tratamiento con Mg (Fig. 5A).
(d) El peso seco de las plantas tratadas con
M. geulakonigae era significativamente mayor que el peso
seco de las plantas sin tratar (Fig. 5B).
La evidencia clara del efecto de biocontrol de
M. geulakonigae sobre el mildiu pulverulento infectante de
los pepinos puede apreciarse en las fotografías presentadas en la
Figura 6.
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Ejemplo
2
Se testó el efecto del tratamiento de M.
geulakonigae sobre el ácaro-araña carmín
devorador de la planta (Tetranychus cinnabarinus) infestante
de los pepinos. Este ácaro es una plaga importante de muchas
cosechas. Las plantas se trataron utilizando el mismo protocolo que
se ha descrito en el Ejemplo 1. A fin de evitar la toma de muestras
destructiva, se contó el número de hojas infestadas por al menos un
ácaro-araña adulto vivo. Los datos se obtuvieron de
5 hojas por planta y 6 plantas por tratamiento. De este modo, se
evaluaron un total de 30 hojas en cada fecha de observación. Todas
las hojas que no se trataron con M. geulakonigae tenían
poblaciones significativamente mayores del
ácaro-araña (Fig. 7) y a veces exhibían fuerte
deterioro por el ácaro.
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Ejemplo
3
Se condujo un experimento inicial con la plaga
importante de los cítricos, el ácaro de la roya de los cítricos
Phyllocoptruta oleivora como diana, utilizando los tres
nuevos hongos para control de la plaga. La Tabla 1 muestra los
resultados obtenidos para este experimento inicial, representando
los números el porcentaje de ácaros destruidos después del
tratamiento, calculado con la corrección de Abbott. Los nombres de
los tres hongos son provisionales.
Después de los resultados del experimento
inicial utilizando las tres nuevas especies de hongos, se realizó
un segundo experimento concerniente al efecto de M.
geulakonigae sobre el ácaro de la roya de los cítricos. Se
pulverizaron plantas de semillero de cítricos fuertemente infestadas
con suspensiones de M. geulakonigae de 10^{9} esporas/ml,
obtenidas después de fermentación líquida del hongo. La mortalidad
de la plaga era prácticamente 100% (después de la corrección de
Abbott) en las plantas tratadas, en comparación con aproximadamente
30% en el control sin tratar (Fig. 8).
Claims (35)
1. Un cultivo sustancialmente puro del hongo
M. geulakonigae, en el cual dicho hongo es el hongo designado
CBS Núm. de Acceso 110052, progenie, mutantes o variantes del mismo
que retienen la actividad contra los ácaros pestíferos y los hongos
patógenos de las plantas.
2. El cultivo de la reivindicación 1, en el cual
dicho cultivo es biológicamente puro.
3. Un cultivo sustancialmente puro del hongo
Meira argovae, en el cual dicho hongo es el hongo designado
CBS acceso no. 110053, progenie, mutantes o variantes del mismo que
retienen la actividad contra los ácaros pestíferos y los hongos
patógenos de las plantas.
4. El cultivo de la reivindicación 3, en el cual
dicho cultivo es biológicamente puro.
5. Un cultivo sustancialmente puro del hongo
Acaromyces ingoldii, en el cual dicho hongo es el hongo
designado CBS acceso no. 110050, progenie, mutantes o variantes del
mismo, que retienen la actividad contra ácaros pestíferos y los
hongos patógenos de las plantas.
6. El cultivo de la reivindicación 5, en el cual
dicho cultivo es biológicamente puro.
7. Contenidos totales resultantes de la
fermentación de un hongo de una cualquiera de las reivindicaciones
1-6, y/o combinación de los mismos.
8. Productos biológicamente activos derivados de
uno cualquiera de los hongos de acuerdo con las reivindicaciones
1-6, en donde la actividad biológica de dichos
productos es acaricida y/o fungicida y en donde dichos productos
son esporas.
9. Una composición para el control de los
ácaros, en la cual dicha composición comprende al menos un agente
de biocontrol derivado de uno cualquiera de los hongos de acuerdo
con las reivindicaciones 1-6 y dicho agente de
biocontrol está constituido por esporas.
10. La composición de la reivindicación 9, que
comprende adicionalmente un vehículo agronómicamente compatible.
11. La composición de la reivindicación 10, en
donde dicho vehículo se extrae de un cultivo líquido de cualquiera
de dichos hongos.
12. La composición de la reivindicación 10, en
donde dicho vehículo se selecciona del grupo constituido por agua,
medio de cultivo, aceites o cualesquiera otros adyuvantes o
vehículos.
13. La composición de la reivindicación 12, en
la forma de una suspensión líquida que contiene aproximadamente
entre 10^{7} y 10^{10} esporas/ml.
14. La composición de la reivindicación 13, en
donde la suspensión contiene aproximadamente 10^{9}
esporas/ml.
15. La composición de una cualquiera de las
reivindicaciones 9 a 14, que comprende adicionalmente disolventes,
emulsionantes, dispersantes o agentes tensioactivos utilizados en
formulaciones para agentes de biocontrol.
16. Una composición para el control de los
hongos, en la cual dicha composición comprende al menos un agente
de biocontrol derivado de uno cualquiera de los hongos de acuerdo
con las reivindicaciones 1-6 y dicho agente de
biocontrol está constituido por esporas, que comprende opcionalmente
un vehículo agronómicamente compati-
ble.
ble.
17. La composición de la reivindicación 16, en
donde dicho vehículo se extrae de un cultivo líquido de uno
cualquiera de dichos hongos.
18. La composición de la reivindicación 17, en
la cual dicho vehículo se selecciona del grupo constituido por
agua, medio de cultivo, aceites u otros adyuvantes o vehículos.
19. La composición de la reivindicación 18, en
la forma de una suspensión líquida que contiene entre 10^{7} y
aproximadamente 10^{10} esporas/ml.
20. La composición de la reivindicación 19, en
donde la suspensión contiene aproximadamente 10^{8}
esporas/ml.
21. La composición de una cualquiera de las
reivindicaciones 16 a 20, que comprende adicionalmente disolventes,
emulsionantes, dispersantes o agentes tensioactivos utilizados en
formulaciones para agentes de biocontrol.
22. Un método para producir un fungicida y/o un
acaricida, en el cual el ingrediente activo de dicho
fungicida/acaricida es uno cualquiera de los hongos de acuerdo con
las reivindicaciones 1-6, o cualquier combinación de
los mismos, y/o un cultivo de los mismos, y/o esporas de los
mismos, que comprende cultivar dicho hongo y, opcionalmente, aislar
dicho ingrediente activo del cultivo.
23. El método de la reivindicación 22, en donde
dicho método comprende los pasos de:
- (a)
- cultivar, en condiciones aerobias o anaerobias, uno cualquiera de los hongos M. geulakonigae, M. argovae o A. ingoldii en un medio de cultivo apropiado;
- (b)
- cosechar el cultivo;
- (c)
- separar las esporas del medio líquido;
y o bien
- (d)
- suspender las esporas en un vehículo líquido agronómicamente compatible para dar un fungicida/acaricida en forma líquida; o
- (e)
- liofilizar las esporas, para dar un fungicida/acaricida en forma seca.
24. El método de la reivindicación 23, en el
cual dicho fungicida/acaricida en forma seca se disuelve
ulteriormente en un vehículo líquido agronómicamente
compatible.
25. El método de una cualquiera de las
reivindicaciones 22 y 24, en el cual el hongo se cultiva a una
temperatura comprendida entre aproximadamente 20ºC y
aproximadamente 30ºC.
26. El método de la reivindicación 25, en el
cual la temperatura es de aproximadamente 23ºC a aproximadamente
27ºC.
27. El método de la reivindicación 26, en el
cual la temperatura es 25ºC.
28. El método de una cualquiera de las
reivindicaciones 22 a 27, en el cual el hongo se cultiva a un pH de
aproximadamente 5,1 a aproximadamente 5,6.
29. El método de la reivindicación 28, en el
cual el pH es aproximadamente 5,1.
30. Un método de control de la infestación por
ácaros en una planta sensible a los mismos, que comprende aplicar a
la planta la composición acaricida de una cualquiera de las
reivindicaciones 9 a 15.
31. El método de la reivindicación 30, en el
cual la infestación por ácaros está causada por Phyllocoptruta
oleivora (ácaro de la roya de los cítricos), Tetranychus
cinnabarinus (ácaro-araña carmín), y/o
Panonychus citri (ácaro rojo de los cítricos).
32. Método de la reivindicación 31, en el cual
dicha planta es cualquier planta comercial sensible a los
ácaros-araña, ácaros de la roya, ácaros de las
agallas o enfermedades fitopatógenas de origen fúngico.
33. Un método de control de la contaminación por
hongos en una planta sensible a dichos hongos, que comprende
aplicar a la planta la composición fungicida de una cualquiera de
las reivindicaciones 16 a 21.
34. El método de la reivindicación 33, en el
cual la infestación fúngica es debida a Sphaerotheca fusca
(mildiu pulverulento).
35. El método de la reivindicación 34, en el
cual dicha planta es cualquier planta comercial sensible a
enfermedades causadas por el mildiu pulverulento u otras
enfermedades fitopatógenas de origen fúngico.
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