ES2330045T3 - 2,4-diamino-pirimidinas como inhibidores de aurora. - Google Patents

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ES2330045T3 ES06763989T ES06763989T ES2330045T3 ES 2330045 T3 ES2330045 T3 ES 2330045T3 ES 06763989 T ES06763989 T ES 06763989T ES 06763989 T ES06763989 T ES 06763989T ES 2330045 T3 ES2330045 T3 ES 2330045T3
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Ulrike Tontsch-Grunt
Ralph Brueckner
Charlotte Reither
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Oliver Kraemer
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Abstract

Compuestos de la fórmula general (1), **(Ver fórmula)** donde R1 es un radical sustituido con R5 y, dado el caso, con uno o más radicales R4, escogidos del grupo formado por cicloalquilo C3-10 y heterocicloalquilo de 3-8 miembros; R2 es un radical eventualmente sustituido con uno o más radicales R4 elegidos del grupo formado por alquilo C1-6, cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, arilo C6-15 y heteroarilo de 5-12 miembros; R3 es un radical seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, halógeno, -CN, -NO2, alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, cicloalquilo C3-10, cicloalquilalquilo C4-16 y aril-alquilo C7-16; R4 es un radical seleccionado del grupo constituido por Ra, Rb y Ra sustituido con uno o más radicales Rc y/o Rb iguales o distintos; R5 es un radical idóneo, escogido del grupo formado por -C(O)Rc, -C(O)NRcRc, -S(O)2Rc, -N(Rf)S(O)2Rc, -N(Rf) C(O)Rc, -N(Rf)C(O)ORc y -N(Rf)C(O)NRcRc; cada Ra está independientemente seleccionado del grupo formado por alquilo C1-4, cicloalquilo C3-10, cicloalquilalquilo C4-16, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros; cada Rb es un radical idóneo, seleccionado respectiva e independientemente del grupo formado por =O, -ORc, halo-alquil-C1-3-oxi, -OCF3, =S, -SRc, =NRc, =NORc, -NRcRc, halógeno, -CF3, -CN, -NC, -OCN, -SCN, -NO2, -S (O)Rc, -S(O)2Rc, -S(O)2ORc, -S(O)NRcRc, -S(O)2NRcRc, -OS(O)Rc, -OS(O)2Rc, -OS(O)2ORc, -OS(O)2NRcRc, -C (O)Rc, -C(O)ORc, -C(O)NRcRc, -CN(Rf)NRcRc, -CN(OH)Rc, -CN(OH)NRcRc, -OC(O)Rc, -OC(O)ORc, -OC(O) NRcRc, -OCN(Rf)NRcRc, -N(Rf)C(O)Rc, -N(Rf)C(S)Rc, -N(Rf)S(O)2Rc, -N(Rf)C(O)ORc, -N(Rf)C(O)NRcRc, -[N (Rf)C(O)]2Rc, -N[C(O)]2Rc, -N[C(O)]2ORc, -[N(Rf)C(O)]2ORc y -N(Rf)CN(Rf)NRcRc; cada Rc es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales Rd y/o Re iguales o distintos, escogido del grupo formado por alquilo C1-6, cicloalquilo C3-10, cicloalquilalquilo C4-11, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros; cada Rd es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales Re y/o Rf iguales o distintos, escogido del grupo formado por alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, cicloalquilalquilo C4-11, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros; cada Re es un radical idóneo, seleccionado respectiva e independientemente del grupo formado por =O, -ORf , haloalquil-C1-3-oxi, -OCF3, =S, -SRf , =NRf , =NORf , -NRfRf , halógeno, -CF3, -CN, -NC, -OCN, -SCN, -NO2, -S(O)Rf , -S(O)2Rf , -S(O)2ORf , -S(O)NRfRf , -S(O)2NRfRf , -OS(O)Rf , -OS(O)2Rf , -OS(O)2ORf , -OS(O)2NRfRf , -C(O)Rf , -C(O)ORf , -C(O)NRfRf , -CN(Rg)NRfRf , -CN(OH)Rf , -C(NOH)NRfRf , -OC(O)Rf , -OC(O)ORf , -OC(O) NRfRf , -OCN(Rg)NRfRf , -N(Rg)C(O)Rf , -N(Rg)C(S)Rf , -N(Rg)S(O)2Rf , -N(Rd)C(O)ORf , -N(Rg)C(O)NRfRf y -N (Rg)CN(Rf)NRfRf ; cada Rf es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales Rg, iguales o distintos, seleccionado del grupo formado por alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, cicloalquilalquilo C4-11, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros; cada Rg es, independientemente, hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, cicloalquilalquilo C4-11, arilo C6-10, arilalquilo C7-16, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y hetero-arilalquilo de 6-18 miembros; eventualmente en forma de sus tautómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros y sus mezclas, así como eventualmente sus sales de adición de ácido farmacológicamente inocuas.

Description

2,4-diamino-pirimidinas como inhibidores de Aurora.
La presente invención se refiere a nuevas 2,4-diamino-pirimidinas de la fórmula general (1)
1
donde los radicales R^{1} a R^{3} tienen los significados citados en las reivindicaciones y en la descripción, a sus isómeros, a métodos para preparar estas pirimidinas, así como a su uso como medicamentos.
Antecedentes de la presente invención
Las células tumorales escapan parcial o totalmente a la regulación y control del organismo y se caracterizan por un crecimiento incontrolado, lo cual se debe tanto a la pérdida de proteínas de control, p.ej. Rb, p16, p21 y p53, como a la activación de los llamados aceleradores del ciclo celular, las cinasas dependientes de ciclina (CDK's).
Los estudios en organismos modelo como Schizosaccharomyces pombe, Drosophila melanogaster o Xenopus, así como las investigaciones en células humanas han demostrado que el paso de la fase G2 a la mitosis es regulado por la cinasa CDKI/ciclina B (Nurse, 1990). Esta cinasa, también llamada "factor promotor de mitosis" (FPM) fosforila y regula una serie de proteínas, como p.ej. láminas nucleares, proteínas motoras análogas a las cinesinas, condensinas y proteínas de matriz de Golgi, las cuales juegan un papel importante en la degradación de la envoltura nuclear, en la separación de centrosomas, en la formación del huso del aparato mitótico, en la condensación cromosómica y en la degradación del aparato de Golgi (Nigg, 2001). El tratamiento de células tumorales humanas con inhibidores de CDKI/ciclina B, como p.ej. la butirolactona, produce una interrupción en la fase G2/M, seguida de apoptosis (Nishio y otros, 1996).
Además de las cinasas dependientes de ciclina, las llamadas cinasas de serina/treonina tipo polo (PLK-1, PLK-2, PLK-3 y PLK-4) también juegan un papel importante en la regulación del ciclo celular eucariótico. Concretamente, se demostró que la PLK-1 tiene un papel vital en la regulación de la fase de la mitosis. La PLK-1 es responsable de la maduración de los centrosomas y de la activación de las fosfatasas Cdc25C y del complejo promotor de la anafase (Glover y otros, 1998; Qian y otros, 2001). La inyección de anticuerpos anti-PLK-1 produce una interrupción de la fase G2 en células no transformadas y detiene las células tumorales en la fase de la mitosis (Lane y Nigg, 1996).
La detención en la fase G2/M también se puede provocar inhibiendo ciertas proteínas motoras llamadas cinesinas, como p.ej. la Eg5 (Mayer y otros, 1999), o mediante agentes estabilizadores o desestabilizadores de microtúbulos (p.ej. colchicina, taxol, etopósido, vinblastina, vincristina) (Schiff y Horwitz, 1980).
Las Ser/Thr cinasas de la familia Aurora regulan varios procesos de la división celular, entre los cuales figuran la condensación cromosómica, la dinámica del huso, las interacciones cinetocoro-microtúbulos, la orientación cromosómica, la ordenación en la placa metafásica y la citocinesis (Meraldi y otros, 2004; Carmena y Earnshaw, 2003; Andrews y otros, 2003). En los mamíferos se han descrito tres miembros de la familia - Aurora A, B y C. Las cinasas Aurora del tipo A y B también existen en Caenorhabditis elegans y Drosophila melanogaster, mientras que las levaduras solo contienen un único gen Aurora, conocido con los nombres IPL1 (en S. cerevisiae) o ARK1 (en S. pombe). Todas las proteínas Aurora tienen en común una estructura general semejante, que comprende un extremo N-terminal variable, un dominio medio de cinasa bien conservado y una parte C-terminal corta. A pesar de su analogía secuencial, las cinasas de la familia Aurora presentan una distinta localización subcelular, que está relacionada con funciones especializadas.
Así, la Aurora A se encuentra en los centrosomas durante la interfase y, durante la mitosis, tanto en los centrosomas como en los microtúbulos del huso, cerca de los polos.
Por tanto - como se ha comprobado en ensayos con ARN de interferencia - la Aurora A es esencial para el inicio de la mitosis, pues con la pérdida de Aurora A no puede tener lugar la maduración y separación de los centrosomas. Hay distintos activadores de la Aurora A, como p.ej. el TPX2, el Ajuba o el inhibidor proteína fosfatasa-2. El TPX2 parece responsable de la correcta activación temporal y espacial de Aurora A en los microtúbulos del huso cercanos a los polos (Hirota y otros, 2003; Bayliss y otros, 2003; Eyers y Maller, 2004; Kufer y otros, 2002; Satinover y otros, 2004).
La Aurora B se asocia en la profase temprana con cromosomas condensantes, se localiza en los centrosomas durante la metafase, luego se resitúa en la zona media del huso central y en el momento de la citocinesis se concentra finalmente en el llamado cuerpo de Fleming o cuerpo intermedio, una zona estrecha y limitada entre las células hija resultantes. Estos cambios de posición característicos durante el desarrollo de la mitosis justifican la denominación de la Aurora B como proteína "cromosómica pasajera". Como mínimo se conocen otras tres proteínas "cromosómicas pasajeras", que forman un complejo con la Aurora B. Éstas son INCENP (proteína centrómera interior), survivina y borealina (Andrews y otros, 2003; Carmena y Earnshaw, 2003; Meraldi y otros, 2004). El extremo C-terminal de la INCENP proporciona un punto de contacto importante entre la Aurora B y este complejo, el llamado "IN-box". El "IN-box" es la región más conservada de la INCENP. Fija y activa Aurora B y es fosforilada por esta cinasa (Adams y otros, 2000; Bishop y Schumacher, 2002; Kaitna y otros, 2000; Bolton y otros, 2002; Honda y otros,
2003).
La Aurora C es el miembro menos caracterizado de la familia Aurora. También se fija a la INCENP y se comporta como proteína "cromosómica pasajera", aunque los niveles máximos de expresión medidos son menores que los de la Aurora B. Se supone que la Aurora C puede adoptar algunas funciones de la Aurora B, ya que, p.ej., el fenotipo polinuclear de células deficitarias en Aurora B puede normalizarse mediante la expresión de Aurora C (Sasai y otros, 2004; Li y otros, 2004).
La Aurora B fosforila la histona H3 en Ser10 y Ser28. Aunque esta fosforilación coincide con el momento de la condensación cromosómica, el efecto de este evento solo resulta importante en una fase posterior del ciclo celular. Esto lo confirma el hecho de que la histona H3 se acumula en los cromosomas mitóticos con la fosforilación en Ser10 y la triple metilación simultánea en Lys9 de la heterocromatina cercana al centrómero. La histona H3 así modificada impide la fijación de la heterocromatina-proteína 1 (HP1), permitiendo el acceso del complejo proteico "cromosómico pasajero" a las regiones cinetocóricas del centroméro (Hirota T. y otros, manuscrito en preparación).
Una función de la Aurora B, que resulta evidente al inhibirla, es la reunión de varias proteínas en el cinetocoro durante la metafase (Ditchfield y otros, 2003; Hauf y otros, 2003; Murata-Hori y Wang, 2002; Vigneron y otros, 2004). La Aurora B tiene aquí un papel esencial en una vía señalizadora que detecta y corrige las conexiones sintélicas (defectuosas porque parten de un solo polo del huso) de los microtúbulos del cinetocoro (Andrews y otros, 2003; Carmena y Earnshaw, 2003; Meraldi y otros, 2004). Si este estado de conexiones no se corrige aparecen errores en la segregación cromosómica. La fosforilación de la depolimerasa MCAK del microtúbulo mediada por Aurora B está relacionada con dicho mecanismo corrector (Gorbsky, 2004).
La Aurora B también fosforila proteínas que son importantes para la formación del surco divisorio y para la citocinesis, como p.ej. MgcRacGAP, la cadena ligera reguladora de miosina II, vimentina, desmina, GFAP (proteína ácida fibrilar glial), así como las cinesinas MKLP1 y MKLP2, de las cuales la MKLP2 es probablemente responsable de completar la transferencia del complejo proteico "cromosómico pasajero", desde los cinetocoros al cuerpo central (Gruneberg y otros, 2004).
Viendo las diversas funciones de la Aurora B en el ciclo celular, fue sorprendente comprobar que la inhibición de la Aurora B en las células tumorales no produce una interrupción mitótica, sino más bien una continuación del ciclo celular sin citocinesis (Hauf y otros, 2003). Debido a la acumulación de conexiones sintéticas de los microtúbulos del cinetocoro y por tanto de agregaciones cromosómicas defectuosas, se genera una poliploidía masiva que desemboca finalmente en apoptosis. La inhibición simultánea de la Aurora A tampoco puede influir en este fenotipo (Keen y Taylor, 2004).
Al comienzo había, sobre todo, indicios de la actividad oncógena de la Aurora A (p.ej. transformación de fibroblastos de ratón después de la sobreexpresión), mientras que para la Aurora B dichos indicios solo eran indirectos (Zhou y otros, 1998; Bischoff y otros, 1998; Katayama y otros, 1999). Esto ha cambiado al encontrar que la sobreexpresión de Aurora B en células embrionarias de hámster y su uso en ensayos de xeno-injerto incrementa directamente la incidencia, el tamaño y la invasividad tumoral. Los correspondientes tumores presentaban inestabilidad cromosómica y mayor fosforilación de histona H3 en Ser10 (Ota y otros, 2002). Estos resultados corroboran la importancia de la Aurora B durante la génesis tumoral.
Las pirimidinas son generalmente conocidas como inhibidores de cinasas. Por ejemplo, en las solicitudes de patente internacional WO 02/096888 y WO 03/032997 se describen pirimidinas sustituidas con un radical no aromático en posición 4 como componentes activos con actividad anticancerosa.
La presente invención tiene por objeto indicar nuevos principios activos que puedan usarse para prevenir y/o tratar enfermedades caracterizadas por una proliferación celular excesiva o anómala.
Ahora se ha encontrado sorprendentemente que los compuestos de fórmula general (1), en que los radicales R^{1}, R^{2} y R^{3} tienen los significados indicados a continuación, inhiben cinasas específicas del ciclo celular. Por tanto los compuestos de la presente invención pueden usarse, por ejemplo, para tratar enfermedades relacionadas con la actividad de cinasas específicas del ciclo celular, y caracterizadas por una proliferación celular excesiva o anómala.
\newpage
La presente invención se refiere a compuestos de fórmula general (1)
2
donde
\quad
R^{1} es un radical sustituido con R^{5} y, dado el caso, con uno o más radicales R^{4}, escogidos del grupo formado por cicloalquilo C_{3-10} y heterocicloalquilo de 3-8 miembros;
\quad
R^{2} es un radical eventualmente sustituido con uno o más radicales R^{4} elegidos del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-10}, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, arilo C_{6-15} y heteroarilo de 5-12 miembros;
\quad
R^{3} es un radical seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, halógeno, -CN, -NO_{2}, alquilo C_{1-4}, haloalquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-10}, cicloalquilalquilo C_{4-16} y aril-alquilo C_{7-16};
\quad
R^{4} es un radical seleccionado del grupo constituido por R^{a}, R^{b} y R^{a} sustituido con uno o más radicales R^{c} y/o R^{b} iguales o distintos;
\quad
R^{5} es un radical idóneo, escogido del grupo formado por -C(O)R^{c}, -C(O)NR^{c}R^{c}, -S(O)_{2}R^{c}, -N(R^{f})S(O)_{2}R^{c}, -N(R^{f})C(O)R^{c}, -N(R^{f})C(O)OR^{c} y -N(R^{f})C(O)NR^{c}R^{c};
\quad
cada R^{a} está independientemente seleccionado del grupo formado por alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-10}, cicloalquil-alquilo C_{4-16}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{b} es un radical idóneo, seleccionado respectiva e independientemente del grupo formado por =O, -OR^{c}, halo-alquil-C_{1-3}-oxi, -OCF_{3}, =S, -SR^{c}, =NR^{c}, =NOR^{c}, -NR^{c}R^{c}, halógeno, -CF_{3}, -CN, -NC, -OCN, -SCN, -NO_{2}, -S(O)R^{c}, -S(O)_{2}R^{c}, -S(O)_{2}OR^{c}, -S(O)NR^{c}R^{c}, -S(O)_{2}NR^{c}R^{c}, -OS(O)R^{c}, -OS(O)_{2}R^{c}, -OS(O)_{2}OR^{c}, -OS(O)_{2}NR^{c}R^{c}, -C(O)R^{c}, -C(O)OR^{c}, -C(O)NR^{c}R^{c}, -CN(R^{f})NR^{c}R^{c}, -CN(OH)R^{c}, -CN(OH)NR^{c}R^{c}, -OC(O)R^{c}, -OC(O)OR^{c}, -OC(O)NR^{c}R^{c}, -OCN(R^{f})NR^{c}R^{c}, -N(R^{f})C(O)R^{c}, -N(R^{f})C(S)R^{c}, -N(Rf)S(O)_{2}R^{c}, -N(R^{f})C(O)OR^{c}, -N(R^{f})C(O)NR^{c}R^{c}, -[N(R^{f})C(O)]_{2}R^{c}, -N[C(O)]_{2}R^{c}, -N[C(O)]_{2}OR^{c}, -[N(R^{f})C(O)]_{2}OR^{c} y -N(R^{f})CN(R^{f})NR^{c}R^{c};
\quad
cada R^{c} es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{d} y/o R^{e} iguales o distintos, escogido del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-10}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclo-alquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{d} es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{e} y/o R^{f} iguales o distintos, escogido del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclo-alquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{e} es un radical idóneo, seleccionado respectiva e independientemente del grupo formado por =O, -OR^{f}, haloalquil-C_{1-3}-oxi, -OCF_{3}, =S, -SR^{f}, =NR^{f}, =NOR^{f}, -NR^{f}R^{f}, halógeno, -CF_{3}, -CN, -NC, -OCN, -SCN, -NO_{2}, -S(O)R^{f}, -S(O)_{2}R^{f}, -S(O)_{2}OR^{f}, -S(O)NR^{f}R^{f}, -S(O)_{2}NR^{f}R^{f}, -OS(O)R^{f}, -OS(O)_{2}R^{f}, -OS(O)_{2}OR^{f}, -OS(O)_{2}NR^{f}R^{f}, -C(O)R^{f}, -C(O)OR^{f}, -C(O)NR^{f}R^{f}, -CN(R^{g})NR^{f}R^{f}, -CN(OH)R^{f}, -C(NOH)NR^{f}R^{f}, -OC(O)R^{f}, -OC(O)OR^{f}, -OC(O)NR^{f}R^{f}, -OCN(R^{g})NR^{f}R^{f}, -N(R^{g})C(O)R^{f}, -N(R^{g})C(S)R^{f}, -N(R^{g})S(O)_{2}R^{f}, -N(R^{d})C(O)OR^{f}, -N(R^{g})C(O)NR^{f}R^{f} y -N(R^{g})CN(R^{f})NR^{f}R^{f};
\quad
cada R^{f} es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{g}, iguales o distintos, seleccionado del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclo-alquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{g} es, independientemente, hidrógeno, alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y hetero-arilalquilo de 6-18 miembros; eventualmente en forma de sus tautómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros y sus mezclas, así como eventualmente sus sales de adición de ácido farmacológicamente inocuas.
Un aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1) en que R^{3} significa un radical elegido del grupo formado por halógeno y haloalquilo C_{1-4}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1) en que R^{3} significa R^{3}-CF_{3}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1) en que R^{2} significa arilo C_{6-10} o heteroarilo de 5-12 miembros, sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{4}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1) en que R^{2} significa fenilo, sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{4}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1A),
3
donde
n es igual a 0 o 1, y
m es igual a 1-5, e
y es igual a 0 hasta 6, y los demás radicales están definidos como anteriormente.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1A) en que R^{3} significa un radical elegido del grupo formado por halógeno y haloalquilo C_{1-4}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1A) en que R^{3} significa R^{3}-CF_{3}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1A) en que R^{2} significa arilo C_{6-10} o heteroarilo de 5-12 miembros, sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{4}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1A) en que R^{2} significa fenilo, sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{4}.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1) o (1A), o sus sales farmacéuticamente efectivas, para usar como medicamentos.
Otro aspecto de la presente invención son los compuestos de la fórmula general (1) o (1A), o sus sales farmacéuticamente efectivas, para preparar un medicamento de efecto antiproliferativo.
Otro aspecto de la presente invención son los preparados farmacéuticos que llevan uno o más compuestos de la fórmula general (1) o (1A), o sus sales fisiológicamente compatibles, en combinación con aditivos y/o excipientes habituales,
Otro aspecto de la presente invención es el empleo de compuestos de la fórmula general (1) o (1A), para preparar un medicamento destinado al tratamiento y/o a la prevención del cáncer, de infecciones y de trastornos inflamatorios o autoinmunes.
Otro aspecto de la presente invención es un preparado farmacéutico que comprende un compuesto de la fórmula general (1) o (1A) y, al menos, otra sustancia activa citostática o citotóxica distinta de la fórmula (1), eventualmente en forma de sus tautómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros y sus mezclas, así como eventualmente sus sales de adición de ácido farmacológicamente inocuas.
Definiciones
Son válidas las siguientes definiciones tal como se usan aquí, a no ser que se indique otra cosa.
Como sustituyentes alquilo se entienden los radicales de hidrocarburo alifáticos saturados, insaturados, lineales o ramificados (radical alquilo), incluyendo tanto los radicales alquilo saturados como los radicales insaturados alquenilo y alquinilo. Los sustituyentes alquenilo son radicales alquilo insaturados lineales o ramificados que presentan al menos un doble enlace. Como sustituyentes alquinilo se entienden los radicales alquilo insaturados lineales o ramificados que presentan al menos un triple enlace.
Heteroalquilo representa cadenas de hidrocarburo alifático lineales o ramificadas que contienen 1 hasta 3 hetero-átomos, donde cada átomo de carbono y cada heteroátomo de la cadena heteroalquílica puede estar sustituido independientemente respecto a los demás y los heteroátomos se seleccionan independientemente del grupo formado por O, N, P, PO, PO_{2}, S, SO y SO_{2} (p.ej. dimetilaminometilo, dimetilaminoetilo, dimetilaminopropilo, dietilaminometilo, dietilaminoetilo, dietil-aminopropilo, 2-diisopropilaminoetilo, bis-2-metoxietilamino, [2-(dimetilaminoetil)-etil-amino]-metilo, 3-[2-(dimetilamino-etil)-etil-amino]-propilo, hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, metoxi, etoxi, propoxi, metoximetilo, 2-metoxietilo).
Halógenalquilo se refiere a radicales alquilo en que uno más átomos de hidrógeno están sustituidos por átomos de halógeno. Halógenalquilo comprende tanto radicales alquilo saturados como radicales insaturados alquenilo y alquinilo, por ejemplo -CF_{3}, -CHF_{2}, -CH_{2}F, -CF_{2}CF_{3}, -CHFCF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CF_{2}CH_{3}, -CHFCH_{3}, -CF_{2}CF_{2}CF_{3}, -CF_{2}CH_{2}CH_{3}, -CF=CF_{2}, -CCl=CH_{2}, -CBr=CH_{2}, -CI=CH_{2}, -C=C-CF_{3}, -CHFCH_{2}CH_{3} y -CHFCH_{2}CF_{3}. Halógeno se refiere a átomos de flúor, cloro, bromo y/o yodo.
Como cicloalquilo se entiende un anillo mono- o policíclico, pudiendo ser el sistema cíclico un anillo saturado y también un anillo insaturado no aromático o bien un espirocompuesto que puede llevar un doble enlace, como por ejemplo ciclopropilo, ciclopropenilo, ciclobutilo, ciclobutenilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptanilo, cicloheptenilo, norbornilo, norbornenilo, indanilo, adamantilo, espiroheptanilo y espiro[4.2]heptanilo.
Cicloalquilalquilo comprende un grupo alquilo no cíclico en que un átomo de hidrógeno unido a un átomo de carbono está sustituido por un grupo cicloalquilo.
Arilo se refiere a anillos monocíclicos o bicíclicos de 6-12 átomos de carbono, como por ejemplo fenilo y naftilo.
Arilalquilo comprende un grupo alquilo no cíclico en que un átomo de hidrógeno unido a un átomo de carbono va sustituido por un grupo arilo.
Como heteroarilo se entienden anillos mono- o policíclicos que en lugar de uno o más átomos de carbono contienen uno o más heteroátomos iguales o distintos, como p.ej. nitrógeno, azufre u oxígeno. Como ejemplos cabe citar furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, pirimidilo, piridazinilo, pirazinilo y triazinilo. Como ejemplos de radicales heteroarilo bicíclicos cabe citar indolilo, isoindolilo, benzofuranilo, benzotienilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzisoxazolilo, benzisotiazolilo, benzimidazolilo, indazolilo, isoquinolinilo, quinolinilo, quinoxalinilo, cinnolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo y benzotriazinilo, indolizinilo, oxazolopiridinilo, imidazopiridinilo, naftiridinilo, indolinilo, isocromanilo, cromanilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoindolinilo, isobenzotetrahidrofuranilo, isobenzotetrahidrotienilo, isobenzotienilo, benzoxazolilo, piridopiridinilo, benzotetrahidrofuranilo, benzotetrahidrotienilo, purinilo, benzodioxolilo, triazinilo, fenoxazinilo, fenotiazinilo, pteridinilo, benzotiazolilo, imidazopiridinilo, imidazotiazolilo, dihidrobenzisoxazinilo, benzisoxazinilo, benzoxazinilo, dihidrobenzisotiazinilo, benzopiranilo, benzotiopiranilo, cumarinilo, isocumarinilo, cromonilo, cromanonilo, piridinil-N-óxido, tetrahidroquinolinilo, dihidroquinolinilo, dihidroquinolinonilo, dihidroisoquinolinonilo, dihidrocumarinilo, dihidroisocumarinilo, isoindolinonilo, benzodioxanilo, benzoxazolinonilo, pirrolil-N-óxido, pirimidinil-N-óxido, piridazinil-N-óxido, pirazinil-N-óxido, quinolinil-N-óxido, indolil-N-óxido, indolinil-N-óxido, isoquinolil-N-óxido, quinazolinil-N-óxido, quinoxalinil-N-óxido, ftalazinil-N-óxido, imidazolil-N-óxido, isoxazolil-N-óxido, oxazolil-N-óxido, tiazolil-N-óxido, indolizinil-N-óxido, indazolil-N-óxido, benzotiazolil-N-óxido, benzimidazolil-N-óxido, pirrolil-N-óxido, oxadiazolil-N-óxido, tiadiazolil-N-óxido, triazolil-N-óxido, tetrazolil-N-óxido, benzotiopiranil-S-óxido y benzotiopiranil-S,S-dióxido.
Heteroarilalquilo comprende un grupo alquilo no cíclico, en que un átomo de hidrógeno unido a un átomo de carbono está sustituido por un grupo heteroarilo.
Heterocicloalquilo se refiere a anillos mono-, policíclicos o policíclicos puenteados o espirocompuestos no aromáticos, saturados o insaturados de 3-12 átomos de carbono, que en lugar de uno o más átomos de carbono contienen heteroátomos como nitrógeno, oxígeno o azufre. Como ejemplos de tales radicales cabe mencionar heterociclilo tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, piperidinilo, piperazinilo, indolinilo, isoindolinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homomorfolinilo, homopiperidinilo, homopiperazinilo, homotiomorfolinilo, tiomorfolinilo-S-óxido, tiomorfolinilo-S,S-dióxido, tetrahidropiranilo, tetrahidrotienilo, homotiomorfolinilo-S,S-dióxido, oxazolidinonilo, dihidropirazolilo, dihidropirrolilo, dihidropirazinilo, dihidropiridinilo, dihidropirimidinilo, dihidrofurilo, dihidropiranilo, tetrahidrotienilo-S-óxido, tetrahidrotienilo-S,S-dióxido, homotiomorfolinilo-S-óxido, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptano, 8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octano, 3,8-diazabiciclo
[3.2.1]octano, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptan, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano, 3,9-diazabiciclo[4.2.1]nonano y 2,6-diazabiciclo[3.2.2]nonano.
Heterocicloalquilalquilo se refiere a un grupo alquilo no cíclico en que un átomo de hidrógeno unido a un átomo de carbono está sustituido por grupo heterocicloalquilo.
Lista de abreviaturas
4 
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(Continuación)
5
Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención, pero sin limitar su alcance.
Generalidades
De no indicarse lo contrario, todas las reacciones se efectúan en aparatos comercialmente asequibles, siguiendo procesos corrientes en el laboratorio químico.
Los disolventes empleados se adquieren de calidad analítica y se usan sin purificarlos más. Todos los reactivos se emplean también directamente en la síntesis sin purificarlos más.
Los materiales de partida sensibles al aire y/o a la humedad se conservan en atmósfera de argón y las respectivas reacciones y manipulaciones con estos últimos se realizan en atmósfera de gas protector (nitrógeno o argón).
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Cromatografía
Para la cromatografía preparativa de media presión (MPLC, fase normal) se utiliza gel de sílice de la firma Millipore (marca: Granula Silica Si-60A 35-70 \mum) o gel de sílice C-18 RP (FI fase inversa) de la firma Macherey Nagel (marca: Polygoprep 100-50 C18).
La cromatografía de capa fina se efectuó en placas preparadas CF de gel de sílice 60 sobre vidrio (con indicador fluorescente F-254), de la firma Merck.
Para la cromatografía preparativa de alta presión (HPLC) se usan columnas de la firma Waters (marca: XTerra Prep. MS C 18,5 \mum, 30*100 mm y XTerra Prep. MS C 18,5 \mum, 50*100 mm OBD o Symmetrie C 18,5 \mum, 19*100 mm), la HPLC analítica (control de reacción) se lleva a cabo con columnas de la firma Agilent (marca: Zorbax SB-C8, 5 \mum, 21,2*50 mm).
Para la cromatografía quiral de alta presión (HPLC) se usan columnas de la firma Daicel Chemical Industries, LTD. (marca: Chiralpak AD-H o Chiralpak AS o Chiracel OD-RH o Chiracel OD-H o Chiracel OJ-H de diversos tamaños y material de 5 \mum).
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Espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN)
Los espectros de resonancia magnética nuclear se registran en dimetilsulfóxido deuterado-d6 como disolvente. Si se usan otros disolventes, se indica explícitamente en los ejemplos o en los métodos. El desplazamiento químico se expresa respecto al patrón de tetrametilsilano (\delta = 0,00 ppm). Las mediciones se efectúan en un Avance 400 (espectrómetro RMN de 400 MHz) o en un Avance 500 (espectrómetro RMN de 500 MHz) de la firma Bruker Biospin GmbH.
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HPLC-espectroscopía de masas/espectroscopía UV
Los tiempos de retención/MS-ESI^{+} para la caracterización de los ejemplos se obtienen con un equipo HPLC-MS (cromatografía líquida de alto rendimiento con detector de masas) de la firma Agilent.
El equipo está construido de tal manera que tras el cromatógrafo (columna: XTerra MS C18, 2,5 \mum, 2,1*30 mm, de la firma Waters o Synergi POLAR-RP 80A; 4\mum, de la firma Phenomenex) hay conectados en serie un detector de haz de diodos (G1315B de la firma Agilent) y un detector de masas (1100 LS-MSD SL; G1946D; de la firma Agilent).
Este dispositivo funciona a un caudal de 1,1 ml/min. El proceso de separación se lleva a cabo con un gradiente durante 3,1 min. (Gradiente inicial: 95% de agua y 5% de acetonitrilo; gradiente final: 5% de agua y 95% de acetonitrilo; ambos disolventes llevan 0,1% de ácido fórmico).
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Puntos de fusión
Los puntos de fusión se determinaron en un aparato de la firma Büchi tipo B-540 y no están corregidos.
Donde no está descrita la preparación de los compuestos de partida es porque pueden obtenerse comercialmente o prepararse de forma análoga a compuestos conocidos o mediante los procesos aquí descritos.
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Preparación de los compuestos de la presente invención
Los compuestos de la presente invención se pueden preparar según los métodos de síntesis descritos a continuación, donde los sustituyentes de las fórmulas generales tienen los significados anteriormente citados. Estos métodos se deben entender como ilustración de la presente invención, pero sin que ello suponga limitar su objetivo y la extensión de los compuestos reivindicados a estos ejemplos.
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Esquema A
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6 
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Esquema B
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600 
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Tras la formación de la diaminopirimidina hay la opción de transformar uno o más grupos funcionales.
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Esquema C
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7 
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Tras la formación de la diaminopirimidina hay la opción de transformar uno o más grupos funcionales (GF), lo cual se describe en los ejemplos, siempre que sea relevante.
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Esquema D
8 
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Esquema E
800
Preparación de compuestos de partida
De no indicarse lo contrario, todos los materiales de partida se adquieren a suministradores del comercio y se utilizan directamente en las síntesis. Las sustancias descritas en la literatura se preparan según los métodos de síntesis publicados.
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A-1) 2,4-Dicloro-5-trifluorometil-pirimidina 
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9 
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Se suspenden 48 g (267 mmoles) de 5-trifluorometiluracilo en 210 ml de oxicloruro de fósforo (POCl_{3}), excluyendo la humedad. A esta suspensión se añaden lentamente por goteo 47,7 g (320 mmoles, 1,2 eq) de dietilanilina, de modo que la temperatura se mantenga entre 25 y 30ºC. Terminada la adición se agita 5-10 min más en el baño de agua y la mezcla se calienta a 80 - 90ºC durante 5 - 6 h, excluyendo la humedad. El POCl_{3} sobrante se destruye agitando con unos 1200 g de agua helada que contiene ácido sulfúrico y la fase acuosa se extrae enseguida 3 veces con 500 ml de éter o de t-butil-metil-éter respectivamente. Los extractos en éter reunidos se lavan 2 veces con 300 ml de agua helada que lleva ácido sulfúrico (aprox. 0,1 M) y también con solución fría de cloruro sódico, y se secan enseguida sobre sulfato sódico. El secante se separa por filtración y el disolvente se elimina al vacío. El residuo se destila al vacío (10 mbar) a través de una columna corta (20 cm) (temperatura de cabeza: 65 - 70ºC), obteniéndose 35,3 g (0,163 moles, 61%) de un líquido incoloro que se envasa en atmósfera de argón y se guarda.
CF: Fr = 0,83 (cHex:AE = 3:1).
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A-2) 2-Cloro-4-metilsulfanil-5-trifluorometilpirimidina y A-3) 4-Cloro-2-metilsulfanil-5-trifluorometilpirimidina 
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10 
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Se disuelven 5 g (23 mmoles) de 2,4-dicloro-5-trifluorometil-pirimidina en 40 ml de THF y la disolución se tempera a -25ºC y se le agregan 1,8 g (25,3 mmoles, 1,1 eq) de tiometilato sódico. Se agita 1 h a -25ºC y después, sin refrigeración, a la temperatura ambiente durante la noche. A continuación se diluye con diclorometano y se lava tres veces con HCl 1 N. La fase orgánica se seca sobre sulfato magnésico y se concentra al vacío. El producto crudo se purifica por cromatografía en columna (gel de sílice, ciclohexano/diclorometano; de 90/10 a 80/20% en aprox. 20 min). Se separan 1,56 g (6,8 mmoles, 30%) del producto A-3 y 1,46 g (6,4 mmoles, 28%) del producto A-2 en forma de aceite incoloro. Además pueden aislarse 0,24 g (4%) de 2,4-bis-metilsulfanil-5-trifluorometil-pirimidina en forma de sólido incoloro.
1000
El análisis estructural se realiza por derivación química seguido de espectroscopía RMN. Para ello primero se deshalogenan A-2 y A-3 por separado en THF a 100ºC con 5 bar de H_{2}, Pd/C y Pd(OH)_{2} 1:1 respectivamente. Gracias a las distintas características de simetría de los productos resultantes los regioisómeros se identifican claramente.
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4-Amino-N-metil-N-fenil-bencenosulfonamida (educto en el ejemplo 1)
11
Se disuelven 9,5 ml (85,7 mmoles, 98%) de N-metilanilina en 100 ml de diclorometano, se agregan gota a gota a 0ºC 20 g (85,7 mmoles, 95%) de cloruro de 4-nitrobencenosulfonilo disueltos en 150 ml de diclorometano y se mantiene 1,5 h en agitación. La fase orgánica se lava con solución acuosa saturada de carbonato sódico y se seca sobre sulfato sódico. A continuación se filtra a través de gel de sílice y después de eliminar todos los componentes volátiles al vacío se obtienen 24,6 g la N-metil-4-nitro-N-fenil-bencenosulfonamida cruda.
Se disuelven 14,6 g (49,9 mmoles) de la nitrosulfonamida en 100 ml de THF/MeOH 1/1. Tras añadir Pd/C (10%) se agita 16 h a 50ºC bajo una presión de 5 bar de H_{2}. Después de añadir un tamiz molecular para absorber el agua, de agregar más Pd/C y de agitar de nuevo en condiciones de hidrogenación (5 bar de presión de H_{2}, 60ºC) durante 16 h se obtienen 13,1 g (48,9 mmoles, 100%) de A-4a crudo en forma de sólido beige. Este producto crudo se emplea en la síntesis sin purificarlo más.
De manera análoga se prepara 4-amino-N-fenil-benceno-sulfonamida y 4-amino-N,N-dimetil-bencenosulfonamida (eductos en los ejemplos 2 y 3). Los métodos descritos constituyen un método generalmente aplicable para preparar aminobencenosulfonamidas sustituidas o sin sustituir, a partir de los respectivos cloruros de ácido nitrobencenosulfónico.
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Procedimiento general para sintetizar compuestos del tipo B-2
Una 2,4-dicloropirimidina B-1 adecuadamente sustituida en R3 (asequible comercialmente o preparada por cloración del respectivo uracilo, tal como se describe en el ejemplo A-1) se disuelve en THF (o en dioxano, DMA, NMP, acetona) (aprox. 2 - 5 ml por mmol), se añaden 1-1,6 eq de base de Hünig (o de trietilamina, carbonato potásico u otra base apropiada) y se tempera la mezcla reaccionante (a -78ºC para pirimidinas muy reactivas, a temperatura ambiente o superior para pirimidinas poco reactivas). Luego se añaden 0,75 - 1 eq de la amina disuelta en el correspondiente disolvente (véase arriba) y la mezcla reaccionante se agita durante cierto tiempo a la temperatura determinada, o se derrite o se calienta durante un tiempo establecido, en función de la reactividad de la pirimidina empleada. Al terminar la reacción (controlada por HPLC o por CF) la mezcla de reacción se combina con gel de sílice y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. La purificación mediante cromatografía en columna proporciona los productos de sustitución deseados. Dependiendo del radical R3 de la pirimidina se forman los dos regioisómeros posibles en diferentes proporciones. En general pueden separarse por cromatografía.
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B-2a) ()-(1S*,2R*)-2-(2-Cloro-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino)-ciclopentanocarboxamida
12
Se suspenden 500 mg (2,3 mmoles) de A-1 y 636 mg (4,6 mmoles, 2 eq) de carbonato potásico en 11 ml de acetona, se enfría a -70ºC y luego se añade cis-(\pm)-(1S,2R)-2-aminociclopentano-carboxamida. La mezcla reaccionante se deja en agitación a temperatura ambiente durante la noche, para que se derrita, y después se continúa agitando 24 horas a temperatura ambiente. Luego se combina con 40 ml de gel de sílice y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. Los dos productos regioisómeros se separan por cromatografía en columna, siendo el regioisómero deseado el primer producto eluido (gel de sílice, cHex/AE 40/60). Se obtienen 218 mg (0,71 mmoles, 31%) de B-2a y 297 mg (0,96 mmoles, 42%) del regioisómero B-2'a.
F_{r} (B-2a) = 0,51 (gel de sílice, AE), [F_{r} (B-2a') = 0,34].
MS-ESI^{+}: 309 (M+H)^{+}.
La dilucidación y asignación de la estructura de ambos regioisómeros tiene lugar mediante deshalogenación separada en condiciones reductoras, seguida de espectroscopía RMN-H1 de los productos (análogamente a A-2 y
A-3).
13
De forma análoga se sintetizan los siguientes ejemplos del tipo B-2.
14
15
Los compuestos B-2a hasta B-2f pueden hacerse reaccionar con anilinas, mediante catálisis ácida, para dar compuestos del tipo B-4.
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Procedimiento general para sintetizar compuestos del tipo B-4
El educto B-2 se disuelve en 1-butanol (o en dioxano, DMA, NMP) (aprox. 0,5 - 4 ml por mmol), se añaden 0,1-1 eq de HCl en dioxano y 1 eq de la anilina, y la mezcla reaccionante se calienta a reflujo. Al terminar la reacción, la mezcla se combina con gel de sílice y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. A continuación se purifica por cromatografía en columna. Frecuentemente los productos precipitan al terminar la reacción y entonces pueden filtrarse directamente por aspiración y lavarse con 1-butanol.
16 
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17
(4-Amino-2-clorofenil)-(4-metilpiperazin-1-il)-metanona (Educto en el ejemplo 70)
19
Se disuelve 1 ml (8,84 mmoles, 1,3 eq) de N-metil-piperazina en 40 ml de diclorometano y la solución se mezcla con 1,5 ml (8,84 mmoles, 1,3 eq) de base de Hünig-Base. Luego se agregan lentamente por goteo y enfriando 1 - 5 g (6,82 moles, 1 eq) de cloruro de 4-nitro-2-clorobenzoílo disueltos en 10 ml de diclorometano. Tras 2 h de agitación se añaden lentamente por goteo 9 ml de solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, se separa la fase orgánica y el disolvente se elimina al vacío. El producto se purifica por cromatografía en columna (gel de sílice, DCM/MeOH/NH_{3} 9/1/01) y se obtienen 1,83 g (6,45 mmoles, 95%) de la nitrobenzamida. Esta última se disuelve en 2 l de THF, se añaden 300 mg de níquel Raney y se agita 16 h a temperatura ambiente con 3 bar de presión de H_{2}. Tras separar el níquel Raney por filtración y eliminar los componentes volátiles al vacío se obtienen 1,2 g (4,73 mmoles, 73%) de (4-amino-2-clorofenil)-(4-metilpiperazin-1-il)-metanona.
F_{r} = 0,38 (gel de sílice, DCM:MeOH:NH_{3} = 9:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 254 (M+H)^{+}.
El método es adecuado para sintetizar análogamente aminobenzamidas sustituidas y sin sustituir, como, por ejemplo, el empleado en la síntesis de los ejemplos 71 - 75. Estos ejemplos se prepararan de modo similar al ejemplo 70. Para sintetizar los ejemplos 106, 107 y 144 se utilizan aminobenzamidas preparadas por el mismo método.
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cis-(\pm)-2-aminociclopentanocarboxil-isopropilamida
20
Se suspenden 55 mg (0,43 mmoles) de ácido cis-(\pm)-2-amino-ciclopentanocarboxílico en 900 \mul (25 eq) de isopropilamina y a esta suspensión se le añaden 205 mg (0,064 mmoles, 1,5 eq) de TBTU y 550 \mul de DMF. Se agita durante 16 h y la mezcla reaccionante se recoge en DCM:MeOH:NH_{3} 9:1:0,1 y se combina con 7 ml de gel de sílice. Después de eliminar todos los componentes volátiles al vacío se cromatografía (gel de sílice, DCM:MeOH:NH_{3} 9:1:0,1). Se obtienen 63 mg (0,37 mmoles, 86%) de un sólido incoloro. F_{r} = 0,33 (gel de sílice, DCM:MeOH:NH_{3} 85:15:1,5).
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B-2g) (\pm)-(1S*,2R*)-2-(2-Cloro-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino)-ciclopentanocarboxil-isopropilamida
21
Se disuelven 2 g (9,2 mmoles) de A-1 y 1,8 ml (11,2 mmoles, 1,2 eq) de base de Hünig en 60 ml de THF, se enfría a -78ºC y luego se añade lentamente por goteo cis-(\pm)-2-aminociclo-pentanocarboxil-isopropilamida disuelta en 60 ml de THF. La mezcla reactiva se deja en agitación durante la noche, para que se derrita a temperatura ambiente. Luego se combina con 40 ml de gel de sílice y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. Los dos regioisómeros se separan mediante cromatografía en columna y el regioisómero deseado es el primer producto eluido (gel de sílice, cHex/AE de 85/15 a 80/20 a lo largo de 30 min). Se aíslan 590 mg (1,68 mmoles, 24%) de B-2g y 690 mg (1,97 mmoles, 28%) del regioisómero B-2g'.
F_{r} (B-2g) = 0,21 (gel de sílice, cHex/AE 3:1),
[F_{r} (B-2g') = 0,10].
MS-ESI^{+}: 351 (M+H)^{+}.
UV máx. = 246 nm.
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3-Fluoro-4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-fenilamina 
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22 
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Se disuelven 2 g (12,6 mmoles) de 3,4-difluoronitrobenceno en 1,6 ml de etanol, se añaden 2,4 ml (15,1 mmoles, 1,2 eq) de base de Hünig y luego por goteo, enfriando con hielo, 1,44 g (12,6 mmoles, 1 eq) de hexahidro-1-metil-1H-1,4-diazepina. Tras agitar 12 h a temperatura ambiente la reacción está terminada. Luego se mezcla con metanol y 50 ml de gel de sílice, se eliminan al vacío los componentes volátiles y se purifica mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH de 97/3 a 85/15 en 35 min). Se obtienen 3 g (11,9 mmoles, 94%) del nitrocompuesto.
F_{r} = 0,93 (gel de sílice, DCM:MeOH:NH_{3} 9:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 253 (M+H)^{+}.
El nitrocompuesto se disuelve en 600 ml de THF y mezcla con aprox. 300 mg de níquel Raney. Se hidrogena durante 3 h a una presión de H_{2} de 3 bar. El níquel Raney se separa por filtración y la solución se libera al vacío de todos los componentes volátiles.
Se obtienen 2,15 g (9,6 mmoles, 81%) de 3-fluoro-4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-fenilamina.
F_{r} = 0,48 (gel de sílice, DCM:MeOH:NH_{3} 4:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 224 (M+H)^{+}.
De manera análoga se preparan las anilinas que sirven de educto en los ejemplos 142 - 143.
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4-Aminobenzoato de bencilo 
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23
Se suspenden 10,01 g de ácido 4-nitrobenzoico en 500 ml de acetonitrilo y luego se mezclan con 15,03 g (108,7 mmoles, 1,2 eq) de carbonato potásico. Se añaden por goteo, agitando, 15,40 g (171,0 mmoles, 1 eq) de bromuro de bencilo y luego se calienta la mezcla reaccionante a 60ºC durante 5 h en agitación. Se mezcla con 750 ml de agua destilada, se extrae 4 x con 250 ml de AE, respectivamente, y, una vez combinadas, las fases orgánicas se secan sobre sulfato sódico. Tras eliminar todos los componentes volátiles al vacío el producto crudo se suspende dos veces sucesivamente en tolueno, eliminando todos los componentes volátiles al vacío (eliminación del bromuro de bencilo en exceso). Se obtienen 20,60 g (80,1 mmoles) de 4-nitrobenzoato de bencilo en forma de sólido transparente, que se utiliza en la siguiente etapa sin purificarlo más. Se disuelven 20,6 g del 4-nitrobenzoato de bencilo en 350 ml de dioxano y esta disolución se mezcla con 6,9 g (49,9 mmoles, 0,61 eq) de níquel Raney. Se hidrogena durante 16 h a 5 bar de presión de H_{2} y agitando. El catalizador se separa por filtración y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. Se obtienen 17,0 g (74,8 mmoles, 93%) de 4-aminoben-zoato de bencilo en forma de un sólido incoloro.
C-1a) 4-(4-Cloro-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-benzoato de bencilo 
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24 
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Se disuelven 10 g (44 mmoles) de 4-aminobenzoato de bencilo en 200 ml de DMA, se añaden 8 ml de base de Hünig (0,97 eq) y a la disolución transparente se le agregan gota a gota, a la temperatura ambiente, 10,4 g (48,21 mmoles) de 2,4-dicloro-5-trifluormetilpirimidina disueltos en 50 ml de DMA. La mezcla reactiva se agita a 60ºC por la noche, después se mezcla con 300 ml de diclorometano y se extrae con agua (3 x 300 ml). La fase orgánica se seca sobre sulfato sódico y el disolvente se elimina al vacío. El producto crudo se mezcla con 100 ml de MeOH, se digiere y se deja 2 h en reposo. A continuación se agita 10 min., el precipitado se separa por filtración y se lava con metanol (el filtrado metanólico contiene el regio-isómero no deseado de la sustitución nucleófila). Por último el producto crudo se suspende de nuevo en metanol, se separa por filtración, se lava con un poco de metanol y se seca en la estufa de vacío a 60ºC. Se obtienen 8,5 g (20,7 mmoles, 43%) de C-1a en forma de un sólido amarillo claro.
F_{r} = 0,71 (gel de sílice, cHex:AE 1:2).
MS-ESI^{+}: 408 (M+H)^{+}.
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C-2a) [4-(4-Cloro-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-fenil]-(4-metilpiperazin-1-il)-metanona 
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Se disuelven 2,74 g (6,71 mmoles) de C-1a en 120 ml de dioxano, se añaden 300 mg de hidróxido de paladio (20% w/w de Pd, 2,14 mmoles, 0,32 eq) y se agita 16 h con 3 bar de presión de H_{2} a la temperatura ambiente. La mezcla reaccionante se filtra a través de celite, el disolvente se elimina al vacío y se obtienen 1,87 g (5,89 mmoles, 88%) de ácido 4-(4-cloro-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-benzoico, en forma de un sólido incoloro que se emplea sin purificación posterior. Se mezclan 1,1 g (3,46 mmoles) del ácido benzoico con 20 ml de tolueno y 301 \mul (4,16 mmoles, 1,2 eq) de cloruro de tionilo y se calienta 1,5 h a reflujo. Se eliminan al vacío todos los componentes volátiles y el cloruro de benzoílo crudo se utiliza directamente en la otra reacción. Se disuelven 536 mg (1,6 mmoles) del mismo en 4 ml de THF y se mezclan con 410 \mul (1,5 eq) de base de Hünig. Tras añadir 179 \mul (1 eq) de N-metilpiperazina la disolución se agita 16 h a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vierte en unos 40 ml de agua destilada, se agita durante 30 min. y la fase acuosa se extrae 3 veces con 50 ml de acetato de etilo respectivamente. Después de secar la fase orgánica sobre sulfato magnésico, filtrar, y eliminar los componentes volátiles al vacío se obtienen 645 mg (1,5 mmoles, 94%) de C-2a en forma sólida.
F_{r} = 0,69 (gel de sílice, CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NH_{3} 5:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 400 (M+H)^{+}.
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C-2b) 4-(4-Cloro-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-N-metil-N-(1-metilpiperidin-4-il)-benzamida 
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26 
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F_{r} = 0,30 (gel de sílice, CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NH_{3} 5:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 428 (M+H)^{+}.
C-2b se prepara análogamente a C-2a mediante el uso de metil-(1-metilpiperidin-4-il)-amina.
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(\pm)-((1S*,2R*)-2-Aminociclohexil)-carbamato de bencilo 
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27 
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Se disuelven 2 ml (16,2 mmoles) de cis-1,2-diaminociclohexano y 2,42 g (19,4 mmoles, 1,2 eq) de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (9-BBN) en 8 ml de THF/NMP 1/1 y se agita a la temperatura ambiente durante 45 min. A la disolución ligeramente turbia se le añaden 2,4 ml (16,2 mmoles, 1 eq) de cloroformiato de bencilo (Cbz-cloruro). Tras aprox. 1 h la mezcla reaccionante se combina con agua destilada y se agita algunos minutos. A continuación la disolución acuosa se mezcla con acetato de etilo y la fase acuosa se lava 3 veces con 50 ml de acetato de etilo, respectivamente. El producto se halla totalmente en la fase acuosa y como impurezas en la fase orgánica. La fase acuosa se alcaliniza con NaHCO_{3} (a pH 8), se mezcla con diclorometano, se extrae 3 veces con 10 ml de diclorometano, respectivamente, las fases orgánicas reunidas se secan sobre sulfato magnésico y el disolvente se elimina al vacío. Se obtienen 2,29 g (9,22 mmoles, 57%) de (\pm)-((1S*,2R*)-2-amino-ciclohexil)-carbamato de bencilo en forma de líquido aceitoso
incoloro.
F_{r} = 0,45 (gel de sílice, CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NH_{3} 9:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 249 (M+H)^{+}.
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C-3a) (\pm)-(1S*,2R*)-{2-[4-(4-Metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluormetilpirimidin-4-ilamino}-ciclohexil)-carbamato de bencilo 
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28 
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Se disuelven 800 mg (2 mmoles) C-2a en 1 ml de NMP con 569 mg (2,4 mmoles, 1,2 eq) de (\pm)-((1S*,2R*)-2-aminociclohexil)-carbamato de bencilo y a continuación se agregan 521 \mul de base de Hünig. Tras 48 h a 70ºC la reacción está terminada. Después de eliminar el disolvente al vacío el producto crudo se purifica por cromatografía en columna (DCM/MeOH/NH_{3} desde 19/1/0,1 hasta 9/1/0,1) y se obtienen 826 mg (1,35 mmoles, 68%) de producto en forma de resina incolora.
MS-ESI^{+}: 612 (M+H)^{+}.
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C-3b) (\pm)-{4-[4-((1R*,2S*)-2-Aminociclohexilamino)-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino]-fenil}-(4-metil-piperazin-1-il)-metanona 
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29 
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Se disuelven 112 mg (0,18 mmoles) de C-3a en DMF (10 ml) y se mezclan agua destilada (1 ml). Luego se agregan 9 ml más de DMF, la disolución se transfiere a un aparto de hidrogenación y se mezcla con Pd/C (200 mg, 5% de Pd). La solución reactiva se agita durante 12 h a 4 bar de presión de H_{2}. La mezcla de reacción se recoge en diclorometano, se combina con 10 ml de gel de FI y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. La purificación se realiza mediante cromatografía en columna (fase FI, acetonitrilo/agua desde 5/95 hasta 95/5 en 20 min). Tras reunir las fracciones de producto y liofilizarlas se obtienen 27 mg (0,06 mmoles, 30%) del producto deseado en forma de sólido incoloro.
MS-ESI^{+}: 478 (M+H)^{+}.
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C-3c) Ácido (\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-cicloheptancarboxílico 
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30 
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Se disuelven 440 mg (1,1 mmoles) C-2a en 500 \mul de NMP y se mezclan con 565 \mul de base de Hünig (3,3 mmoles, 3 eq) y con 256 mg de ácido cis-2-aminocicloheptancarboxílico (racémico). La mezcla reactiva se coloca en un baño de aceite temperado a 100ºC y se calienta a esta temperatura, agitando durante 8 h. Concluida la reacción, la mezcla se recoge en metanol, se combina con 20 ml de gel de FI y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. La purificación tiene lugar en fase inversa (eluyente, acetonitrilo/agua desde 15/85 hasta 35/65 en 15 min). Tras reunir las fracciones de producto y liofilizarlas se obtienen 160 mg (0,31 mmoles, 28%) del producto deseado en forma de sólido incoloro.
MS-ESI^{+}: 521 (M+H)^{+}.
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C-3d) Ácido (\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ciclopentancarboxílico
31
Se disuelven 563 mg (1,13 mmoles) de C-2a en 5 ml de 1-butanol y se agregan 163 mg de ácido cis-2-amino-1-ciclo-pentancarboxílico (racémico). Tras añadir 540 \mul de base de Hünig se calienta aprox. 60 min. a 110ºC (microondas, CEM, 100 W). La mezcla de reacción se concentra al vacío, se agita con unos 100 ml de agua y se extrae 3 veces respectivamente con 50 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secan sobre sulfato magnésico y el disolvente se elimina al vacío. Se obtienen 530 mg (1,08 mmoles, 96%) de C-3d.
MS-ESI^{+}: 493 (M+H)^{+}.
El compuesto C-3e se prepara de modo análogo, empleando DMA como disolvente y C-2b como material de partida.
32
MS-ESI^{+}: 521 (M+H)^{+}.
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C-3f) Ácido (1S,3R)-3-(2-{4-[metil-(1-metilpiperidin-4-il)-carbamoíl]-fenilamino}-5-trifluorometilpirimidin-4-il-amino)-ciclopentancarboxílico
33
Se disuelven 200 mg de C-2b en 750 \mul de DMA y se le añaden 160 \mul (0,93 mmoles, 2 eq) de base de Hünig. Luego se agregan 72 mg (0,56 mmoles, 1,2 eq) de ácido (1S,3R)-3-aminociclo-pentancarboxílico y la mezcla de reacción se calienta durante 40 min. a 120ºC. La mezcla reactiva se combina con gel de FI, los componentes volátiles se eliminan al vacío y el producto se purifica y se aísla por cromatografía en columna a través de una fase FI (desde 85% de agua (+0,2% de HCOOH) y 15% de acetonitrilo (+0,2% HCOOH) hasta 76% de agua y 24% de acetonitrilo en 20 min). Las respectivas fracciones de producto se purifican, se liberan de disolvente por liofilización y se obtienen 150 mg (0,29 mmoles, 62%) de C-3f en forma de film incoloro.
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(\pm)-trans-2-Aminociclopentancarboxamida 
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34
El compuesto se prepara según la literatura (Csomos y otros, 2002).
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D-2a) 4-[4-((1R,2S)-2-Carboxiciclopentilamino)-5-tri-fluorometilpirimidin-2-ilamino]-benzoato de bencilo
35
Se introducen 2,05 g (5 mmoles) de C-1a y 1 g de hidrocloruro de ácido (1S,2R)-(+)-2-amino-1-ciclopentancarboxílico (6 mmoles, 1,2 eq) en 18 ml de etanol. Se añaden 7,3 ml (42,5 mmoles, 3,4 eq) de base de Hünig y se agita durante 4 h a 70ºC. La mezcla reaccionante se agita en 275 ml de agua, se filtra para separar la parte insoluble, el filtrado se ajusta a pH 2 con disolución acuosa saturada de KHSO_{4} y el precipitado formado se filtra por aspiración. El producto crudo se lava con agua, se seca al vacío y se obtienen 2,37 g (4,74 mmoles, 94%) de D-2a en forma de sólido de ligero color beige.
MS-ESI^{+}: 501 (M+H)^{+}.
La síntesis con derivados de ácido (1R,2S)-(-)-2-amino-1-ciclopentancarboxílico o de ácido (1R*,2S*)-(\pm)-2-amino-1-ciclopentancarboxílico tiene lugar de manera similar. Los productos correspondientes se designan como D-2b (quiral, enantiómero de D-2a) y D-2c (racémico).
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Preparación de hidrocloruro de ácido (1S,2R)-2-amino-ciclopentancarboxílico
36
A 23 ml (0,273 moles, 1 eq) de ciclopenteno se le añaden por goteo a -75ºC, en atmósfera de argón, 22,64 mL (0,26 moles, 0,95 eq) de CSI. Durante la adición, la temperatura de reacción se mantiene constantemente por debajo de -65ºC. Se deja que la mezcla reaccionante suba en 2 h hasta la temperatura ambiente y se mantiene en agitación durante la noche. La elaboración reductora tiene lugar incorporando gota a gota la solución reactiva a una solución de 600 ml de agua helada con 60 g de sulfito sódico y 180 g de NaHCO_{3}. La fase acuosa se extrae 4 veces respectivamente con 200 ml de diclorometano, se reúnen las fases orgánicas, se secan sobre sulfato magnésico y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. Se obtienen 25,75g (85%) de cristales ligeramente amarillos, los cuales se disuelven en 400 ml de diisopropiléter, se añaden 1,6 ml de agua y 20 g de lipolasa unida a resina (lipasa-resina acrílica de candida antartica, Sigma-Aldrich) y se agita durante 11 días a 60ºC. La suspensión reaccionante se filtra a través de celite, se lava con diisopropiléter y el filtrado se concentra hasta sequedad. El aceite amarillento resultante se recoge en 200 ml de diclorometano y se lava con aprox. 150 ml de solución saturada de NaHCO_{3}. La fase acuosa se extrae 3 veces con diclorometano y las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato magnésico. Tras eliminar todos los componentes volátiles al vacío se obtienen 8,93 g de la lactama quiral, en forma de un aceite amarillento.
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Este último producto se disuelve en 10 ml de agua y se le añaden 10 ml de HCl al 37% (aq), enfriando en baño de hielo y agitando. Después de agitar 10 min. a 0ºC se deja reposar la solución a temperatura ambiente durante la noche. Se filtran los cristales precipitados, se lavan con poco acetonitrilo y se secan haciendo vacío elevado. Las aguas madres se secan casi hasta sequedad, los cristales precipitados se filtran, se lavan con acetonitrilo y se secan también a vacío elevado. Se obtienen 11,74 g (70,9 mmoles, 31% respecto a la lactama racémica) de cristales incoloros del hidrocloruro del ácido (1S,2R)-2-aminociclopentancarboxílico.
(El ácido enantiómero ha precipitado en la etapa de resolución cinética y está contenido en el precipitado separado por filtración a través de celite).
La secuencia de la síntesis está descrita en la literatura (Forro and Fueloep, 2003).
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D-3a) 4-[4-((1R,2S)-2-Isopropilcarbamoíl-ciclopentil-amino)-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino]-benzoato de bencilo
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Se disuelven 2,59 g (4,9 mmoles) de D-2a, 2,21 g (6,9 mmoles, 1,4 eq) de TBTU y 4,21 ml (24,6 mmoles, 5 eq) de base de Hünig en 75 ml de DMF y se durante agita 20 min. a temperatura ambiente. Después se añaden 0,63 ml (7,38 mmoles; 1,5 eq) de isopropilamina y se agita a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se succiona a través de óxido de aluminio básico, se lava con DMF y el licor acuoso se agita en 400 ml de agua, se agita otros 30 min. y se aspira el precipitado. El producto crudo se lava con agua y se seca al vacío. Para purificarlo se agita a 5ºC con 50 ml de acetonitrilo durante 30 min., se lava con un poco de acetonitrilo frío y el residuo se seca al vacío. Se obtienen 2,13 g (3,9 mmoles, 80%) de D-3a en forma de un sólido de color beige claro.
F_{r} = 0,53 (gel de sílice, cHx:AE 1:1).
MS-ESI^{+}: 542 (M+H)^{+}.
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D-4a) Ácido 4-[4-((1R,2S)-2-isopropilcarbamoílciclo-pentilamino)-5-trifluorometilpirimidin-2-ilaminol]-benzoico
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Se disuelven 2,13 g (3,9 mmoles) de D-3a en 150 ml de THF y se agregan 250 mg de catalizador de hidróxido de paladio/C (20% en peso de Pd sobre carbón). Se hidrogena agitando 16 h a temperatura ambiente bajo 6 bar de presión de H_{2}. Luego se añaden 30 ml de metanol, se separa el catalizador filtrando a través de tierra de diatomeas, se lava con metanol y se concentra el filtrado. El residuo se hierve con 45 ml de etanol, se enfría lentamente hasta 5ºC, se agita 1 h más y luego se succiona y se lava con etanol frío. Se obtienen 2,46 g (3,2 mmoles, 82%) del ácido D-4a.
F_{r} = 0,46 (gel de sílice, CH_{2}Cl_{2}:MeOH:AcOH 5:1:0,1).
MS-ESI^{+}: 452 (M+H)^{+}.
La síntesis del compuesto enantiómero y del racemato se realiza análogamente.
39 
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D-5c) (\pm)-{4-[4-((1R*,2S*)-2-Isopropilcarbamoílciclo-pentilamino)-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino]-fenil}-car- bamato de t-butilo
40
Se disuelven 450 mg (1 mmol) de D-4c en 1,8 ml de tolueno seco y luego se mezcla sucesivamente con 222 \mul (1,3 mmoles, 1,3 eq) de base de Hünig y 940 \mul de t-butanol. Después se añaden 258 \mul de difenilfosforilazida y se calienta durante 16 h a 80ºC. La mezcla reactiva se combina con 20 ml de acetato de etilo, se lava 2 veces respectivamente con 20 ml de solución de NaOH 0,5 M y la fase acuosa se contralava 2 veces respectivamente con 20 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavan con disolución acuosa saturada de cloruro sódico, los componentes insolubles se separan por filtración, el filtrado se seca sobre cloruro magnésico y el disolvente se elimina al vacío: se obtienen 461 mg (0,88 mmoles, 89%) de D-5c en forma de un sólido amarillento.
MS-ESI^{+}: 523 (M+H)^{+}.
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D-6c) (\pm)-(1S*,2R*)-2-[2-(4-Aminofenilamino)-5-trifluoro-metilpirimidin-4-ilamino]-ciclopentancarboxil-isopropilamida
41
Se disuelven 461 mg (0,88 mmoles) de D-5c en 5 ml de diclorometano, se agregan 2 ml de ácido trifluoroacético y se agita durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla reaccionante se agita en 50 ml de agua y la fase acuosa se lava con 50 ml de acetato de etilo. La fase orgánica se extrae aún 2 veces con 30 ml de ácido clorhídrico al 10%, las fases acuosas se reúnen, se ajustan a pH 10 con sosa cáustica al 10% y se extraen 3 veces respectivamente con 50 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secan sobre sulfato magnésico, los componentes volátiles se eliminan al vacío y se obtienen 243 mg (0,58 mmoles, 65%) de D-6c en forma de un sólido incoloro.
F_{r} = 0,08 (gel de sílice, cHex:AE 1:1).
MS-ESI^{+}: 423 (M+H)^{+}.
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E-1) 2-Metilsulfanil-1H-pirimidin-4-ona
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Se suspenden 20 g (153 mmoles) de 2-tiouracilo en 250 ml de metanol y luego se añaden 8,7 g (152,9 mmoles, 1 eq) de metanolato sódico. La disolución se agita 5 min. a temperatura ambiente y luego se añaden gota a gota 12,4 ml (198,8 mmoles, 1,3 eq) de yoduro de metilo. La mezcla reaccionante se agita durante la noche, luego se vierte en agua y se extrae 3 veces con aprox. 150 ml de cloroformo, respectivamente. Las fases orgánicas reunidas se secan sobre sulfato magnésico, el disolvente se elimina al vacío y se obtienen 16 g (121,5 mmoles, 74%) de E-1 en forma de un sólido incoloro.
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E-2) Ácido 4-(6-oxo-1,6-dihidropirimidin-2-ilamino)-benzoico
43
Se disuelven 4,1 g (28,8 mmoles) de E-1 en 10 ml de diglime (dietilenglicoldimetiléter) y esta disolución se mezcla con 4,79 g (34,6 mmoles, 1,2 eq) de ácido 4-aminobenzoico. La mezcla reaccionante se calienta 16 h a reflujo. Tras enfriar a temperatura ambiente, se succiona el precipitado, se lava con poco diglime, luego con dietiléter y se seca al vacío. Se obtienen 5,27 g (22,8 mmoles, 79%) de E-2 en forma de sólido incoloro.
MS-ESI^{+}: 232 (M+H)^{+}.
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E-3a) Ácido 4-(5-yodo-6-oxo-1,6-dihidropirimidin-2-il-amino)-benzoico
44
Se introducen 9 g (38,9 mmoles) de E-2 en 100 ml de agua y se añaden 2,18 g de NaOH (54,5 mmoles, 1,4 eq). La disolución se mezcla con 11,9 g (46,7 mmoles, 1,2 eq) de yodo y se agita a 65ºC durante 3 h. Después de enfriar a 50ºC se añade tiosulfato sódico pentahidratado para eliminar el exceso de yodo, luego se agita 1 h más y se enfría a temperatura ambiente. El precipitado marronoso se aspira, se lava con agua y se seca al vacío. Se obtienen 13,7 g (38,4 mmoles, 82%) de E-3a.
MS-ESI^{+}: 358 (M+H)^{+}.
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E-3b) Ácido 4-(5-bromo-6-oxo-1,6-dihidropirimidin-2-il-amino)-benzoico
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Se introducen 9 g (38,9 mmoles) de E-2 en 10 ml de ácido acético y se añade por goteo una solución de 2,1 ml (40,9 mmoles, 1,05 eq) de bromo en 50 ml ácido acético y se agita a temperatura ambiente durante aprox. 1 h. La mezcla reaccionante se agita en 800 ml de agua y el precipitado marronoso resultante se aspira, se lava con agua y se seca al vacío. Se obtienen 11,5 g (37,1 mmoles, 95%) de E-3b en forma de sólido incoloro.
F_{r} = 0,27 (gel de sílice, AE:MeOH 7:3).
MS-ESI^{+}: 309 (M+H)^{+} (1 x Br).
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E-4a) Cloruro de 4-(4-cloro-5-yodopirimidin-2-ilamino)-benzoílo y E-5a) ácido 4-(4-cloro-5-yodopirimidin-2-ilamino)-benzoico
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Se suspenden 6,5 g (18,2 mmoles) de E-3a en 80 ml de oxicloruro de fósforo y se calienta a reflujo agitando durante 3 h. La mezcla reaccionante se vierte por goteo en 800 ml de agua/hielo con fuerte agitación, se agita 30 min. más y se separa por filtración el cloruro de ácido E-4a crudo. Éste se seca al vacío y se usa sin posterior purificación.
Para preparar el ácido, el cloruro de ácido crudo se disuelve en 200 ml de THF y se añaden 200 ml de disolución acuosa de NaHCaO_{3} al 20%. La mezcla reaccionante se agita 16 h a temperatura ambiente. El THF se elimina al vacío, la fase acuosa se ajusta a pH 2 con HCl concentrado, se agita 10 min. más, el residuo formado se aspira y se lava con agua. Después de secar al vacío se obtienen 6,3 g (16,7 mmoles, 92%) de E-5a en forma de sólido incoloro.
F_{r} = 0,24 (gel de sílice, acetato de etilo).
MS-ESI^{+}: 427 (M+H)^{+}.
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E-4b) Cloruro de 4-(4-cloro-5-bromopirimidin-2-ilamino)-benzoílo y E-5b) ácido 4-(4-cloro-5-bromopirimidin-2-il-amino)-benzoico
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La preparación se efectúa de manera análoga a los derivados E-4a y E-5a, partiendo de E-3b.
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E-6b) [4-(5-Bromo-4-cloropirimidin-2-ilamino)-fenil]-(4-metilpiperazin-1-il)-metanona
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Se disuelven 559 mg (1,6 mmoles) de E-4b en 5 ml de THF y se mezclan con 414 \mul (2,4 mmoles, 1,5 eq) de base de Hünig. A esta disolución se añaden por goteo 181 \mul (1,6 mmoles, 1 eq) de N-metilpiperazina y se agita durante 90 min. a temperatura ambiente. Luego se agregan 100 ml de agua y se extrae 3 veces con 50 ml de acetato de etilo, respectivamente. Las fases orgánicas reunidas se secan sobre sulfato magnésico y el disolvente se elimina al vacío. Se obtienen 566 mg (1,4 mmoles, 86%) de E-6b en forma de resina incolora.
MS-ESI^{+}: 410/412 (M+H)^{+} (1 x Br).
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E-7b) Ácido (\pm)-(1S*,2R*)-2-{5-bromo-2-[4-(4-metil-piperazin-1-carbonil)-fenilamino]-pirimidin-4-ilamino}-ciclo-pentancarboxílico
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Se disuelven 459 mg (1,1 mmoles) de E-6b en 5 ml de 1-butanol y se mezclan con 536 \mul (3,1 mmoles, 2,8 eq) de base de Hünig. A la disolución se agregan 162 mg de ácido cis-amino-ciclopentancarboxílico (racémico) y la mezcla reaccionante se agita durante 100 min. a 110ºC (en un microondas CEM, 100 W), después se concentra, se agita en aprox. 200 ml de agua y se extrae 3 veces respectivamente con 50 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secan sobre sulfato magnésico y el disolvente se elimina al vacío. Se obtienen 321 mg (0,64 mmoles, 57%) de E-7b en forma de resina incolora.
MS-ESI^{+}: 503/505 (M+H)^{+} (1 x Br).
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E-8b) Ácido (\pm)-4-[5-bromo-4-((1R*,2S*)-2-carbamoíl-ciclopentilamino)-pirimidin-2-ilamino]-benzoico
50
Se disuelve 1 g (3,04 mmoles) de E-5b en 3,9 ml de DMA y se mezcla con 1,3 \mul (7,6 mmoles, 1,5 eq) de base de Hünig. A la disolución se le agregan 390 mg (3,04 mmoles, 1 eq) de cis-2-aminociclopentancarboxamida (racémica) y la mezcla reaccionante se agita durante 60 min. a 120ºC y luego se concentra, el residuo se recoge en 5 ml de 1-butanol y se aspira el precipitado. Después de lavar con 5 ml de 1-butanol frío y secar al vacío se obtienen 935 mg (2,2 mmoles, 73%) de E-8b en forma de un sólido beige.
MS-ESI^{+}: 420/422 (M+H)^{+} (1 x Br).
El derivado de yodo E-8a se prepara de manera análoga al E-5a, pero la temperatura de reacción es de 80ºC.
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E-9b) Ácido (\pm)-4-[4-((1R*,2S*)-2-carbamoíl-ciclopentil-amino)-5-cianopirimidin-2-ilamino]-benzoico
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Se disuelven 935 mg (2,23 mmoles) de E-8b en 8 ml de DMF y en atmósfera de argón se agregan 403 mg (4,45 mmoles, 2 eq) de cianuro de cobre(I). La solución amarilla se mezcla con 80 mg (0,067 mmoles, 3% molar) de paladio-tetrakistrifenilfosfina y se calienta 24 h a 145ºC, con lo cual reacciona aprox. un 50% del educto. Se añade otra vez la misma cantidad de catalizador, se calienta 5 h más y luego se completa la reacción. La mezcla reactiva se filtra a través de una frita llena de gel de sílice (disolvente: DMF), el filtrado se concentra hasta unos 5 ml y se vierte en aprox. 400 ml de agua destilada. El precipitado resultante se separa por filtración, se lava con 100 ml de agua y se disuelve en metanol. Se añade gel de FI y se elimina el disolvente al vacío. Se purifica por cromatografía de fase inversa (desde 5% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) y 95% de agua (+ 0,2% de HCOOH) hasta 50% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) y 50% de agua (+ 0,2% de HCOOH). Se aíslan 160 mg (0,44 mmoles, 20%) de E-9b en forma de un sólido de color beige.
F_{r} = 0,30 (gel de sílice, CH_{2}Cl_{2}:MeOH:AcOH 5:1:0,1)
MS-ESI^{+}: 367 (M+H)^{+}
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Ejemplo 1 (\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[4-(Metilfenilsulfamoíl)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ciclopentancarbona- mida (esquema de síntesis A)
Se disuelven 150 mg (0,6 mmoles) de A-2, 519 mg (1,98 mmoles, 3 eq) de 4-amino-N-metil-N-fenilbencenosulfo-
namida y 130 \mul (0,76 mmoles, 1,15 eq) de N-etildiisopropilamina en 3 ml de N,N-dimetilacetamida y la disolución se agita 10 min. a 180ºC (calentando en microondas). La solución se agita en 30 ml de agua, se ajusta a pH 3 con HCl (aq) 0,1 N, se extrae 3 veces con 10 ml de acetato de etilo, respectivamente, se seca sobre sulfato magnésico y los componentes volátiles se eliminan al vacío. El residuo se purifica por cromatografía en columna (ciclohexano/acetato de etilo 2/1). Resultan 92 mg (0,2 mmoles) de N-metil-4-(4-metilsulfanil-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-N-fenilbencenosulfonamida en forma de un sólido de color marrón claro.
Se disuelven 85 mg (0,19 mmoles) de este intermedio en 7,5 ml de diclorometano, se añaden 64 mg (0,285 mmoles, 1,5 eq, 77%) de ácido m-cloroperbenzoico y se agita 3 h a la temperatura ambiente. La fase orgánica se lava 3 veces con 20 ml de solución acuosa saturada de NaHCaO_{3}, eliminándose así el ácido 3-clorobenzoico. Al secar la fase orgánica sobre sulfato sódico se obtienen 83 mg (0,18 mmoles, 95%) de 4-(4-metan-sulfinil-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-N-metil-N-fenilbenceno-sulfonamida (A-4a), que se usan sin posterior purificación en la siguiente etapa.
Se disuelven 83 mg (0,18 mmoles) de A-4a, 26 mg de cis-2-amino-1-ciclopentancarboxamida (0,2 mmoles, 1,1 eq, racémica) y 35 \mul (0,2 mmoles, 1,1 eq) de base de Hünig en 2 ml de DMA y se agita 1 h a 60ºC. La mezcla reactiva se agita en 10 ml de HCl (aq) 0,1 N, se agita 30 min. más y el precipitado formado se aspira, se lava con agua y se seca. Por último tiene lugar la purificación por cromatografía en columna (cHex/AE, de 60/40 a 50/50 en 20 min). Se obtienen 43 mg (0,08 mmoles, 45%) del compuesto 1 en forma de sólido incoloro.
Los ejemplos 2 y 3 se preparan análogamente.
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Ejemplo 4 (\pm)-N-((1S*2R*)-2-{2-[4-(4-Metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ciclohexil)-acetamida (esquema de síntesis C)
Se disuelven 38 mg (0,08 mmoles) de C-3b en 50 \mul de DMA, se adicionan 25 \mul (0,16 mmoles, 2 eq) de base de Hünig y se disuelve a la temperatura ambiente durante algunos minutos. Se disuelven 5 \mul (1 eq) de cloruro de acetilo en un poco de DMA y se añade gota a gota a la mezcla reaccionante. Después de aprox. 10 min. la mezcla reactiva se recoge en diclorometano, se combina con 10 ml de gel FI y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. Se purifica mediante cromatografía de fase inversa (AcCN/agua desde 5/95 hasta 95/5% en 20 min). Después de reunir las fracciones de producto y liofilizarlas se obtienen 18 mg (0,034 mmoles, 42%) del compuesto 4 en forma de un sólido incoloro.
Los ejemplos 5-12 se preparan análogamente.
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Ejemplo 13 (\pm)-1-Metil-3((1S*,2R*)-2-{2-[4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ci- clohexil)-urea (esquema de síntesis C)
Se disuelven 50 mg (0,105 mmoles) de C-3b en 50 \mul de DMF y se mezclan con 55 \mul (0,315 moles, 3 eq) de base de Hünig. A esta disolución se le agregan a temperatura ambiente 6 \mul de isocianato de metilo (1 eq). Al cabo de unos 10 min. la mezcla reactiva se recoge en diclorometano, se combina con 10 ml de gel FI y todos los componentes volátiles se eliminan al vacío. Se purifica por cromatografía de fase inversa (AcCN/agua desde 5/95 hasta 95/5% en 20 min). Después de reunir las fracciones de producto y de liofilizarlas se obtienen 24 mg (0,45 mmoles, 43%) del compuesto 13 en forma de un sólido incoloro.
Los ejemplos 14-17 se preparan análogamente.
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Ejemplo 18 ((\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[4-(4-Metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ciclohexil)- carbamato de metilo (esquema de síntesis C)
Se disuelven 30 mg (0,063 mmoles) de C-3b en 50 \mul de DMF y se mezclan con 22 \mul (0,126 mmoles, 2 eq) de base de Hünig. A esta disolución se le añaden a temperatura ambiente 6 \mul de cloroformiato de metilo (1,2 eq). Al cabo de unos 10 min. se recoge la mezcla reaccionante en diclorometano, se mezcla con 10 ml de fase FI y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. Se purifica mediante cromatografía de fase inversa (AcCN/agua desde 5/95 hasta 95/5% en 20 min). Después de reunir las fracciones de producto y de liofilizarlas se obtienen 13 mg (0,025 mmoles, 39%) del compuesto 18 en forma de un sólido incoloro.
Los ejemplos 19 y 20 se preparan análogamente.
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Ejemplo 21 [4-(4-Ciclopentilamino-5-trifluorometilpirimidin-2-il-mino)fenil]-4-metilpiperazin-1-il)-metanona (esquema de síntesis C)
Se disuelven 88 mg (0,22 mmoles) de C-2a en 290 \mul de DMA, se añaden 26 \mul (0,26 mmoles, 1,2 eq) de ciclopentilamina, así como 75 \mul (0,44 mmoles, 2 eq) de base de Hünig y la mezcla reaccionante se calienta a 120ºC. Al cabo de unos 90 min. se vierte la mezcla reactiva en aprox. 10 ml de agua destilada y el filtrado resultante se separa por filtración. La suspensión se extrae 3 veces respectivamente con 20 ml de acetato de etilo, las fases orgánicas reunidas se secan con solución acuosa saturada de NaCl y sulfato magnésico, se mezclan con 100 \mul de HCl en dioxano y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. Se obtienen 106 mg (0,219 mmoles, 99%) del compuesto 21 en forma de hidrocloruro.
Los ejemplos 22-26 se preparan análogamente.
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Ejemplo 27 (\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[4-Metilpiperazin-1-carbonil)-fenil-amino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-cicloheptan-carboxil-dimetilamida (esquema de síntesis C)
Se disuelven 35 mg (0,067 mmoles) de C-3d en 250 \mul de DMF, se agregan 30 \mul (0,175 mmoles, 2,6 eq) de base de Hünig y finalmente 35 mg (0,11 mmoles, 1,6 eq) de TBTU. La mezcla de reacción se agita 10 min. a temperatura ambiente y luego se combina con 118 \mul de dimetilamina (disolución 2 M en THF, 0,235 mmoles, 3,5 eq). Se agita 4 h a 35ºC, después se recoge la mezcla reactiva en acetonitrilo y se combina con 6 ml de gel FI y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. La purificación tiene lugar por cromatografía en columna de fase inversa (acetonitrilo/agua desde 12/88 hasta 40/60 en 12 min). Se liofilizan las fracciones de producto y se obtienen 19 mg (0,035 mmoles, 52%) del compuesto 27.
Los ejemplos 28-30 se preparan análogamente.
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Ejemplo 31 (+)-4-(4-((1R*,2S)-2-Isopropilcarbamoílciclopentil-amino)-5-trifluorometilpirimidin-2-ilamino]-N-[2-(1-metil-pirrolidin-2-il)-etil]-benzamida (esquema de síntesis D)
Se disuelven 80 mg (0,18 mmoles) de D-4c en 2,4 ml de DMF, se añaden 179 \mul (1,03 moles, 1,5 eq) de base de Hünig y la disolución se mezcla con 83 mg (0,25 mmoles, 1,4 eq) de TBTU. La solución se agita 40 min. a temperatura ambiente, luego se agregan 38,5 \mul (0,27 mmoles, 1,5 eq) de 2-(2-aminoetil)-1-metilpirrolidina y se agita durante 2 días. Después se añade gel de sílice a la mezcla reactiva y se eliminan al vacío los componentes volátiles. La purificación tiene lugar mediante cromatografía en columna, a través de una fase normal (DCM/MeOH/NH_{3} (aq) 5/1/0,1). Se obtienen 70 mg (0,125 mmoles, 70%) del compuesto 31.
Los ejemplos 32-58 se preparan análogamente.
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Ejemplo 59 (\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[4-(4-Metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ciclopentan- carboxil-isopropilamida (esquema de síntesis C)
Se disuelven 88 mg (0,18 mmoles) de C-3d en 2 ml de DMF, se añaden 153 \mul (0,90 mmoles, 5 eq) de base de Hünig y la disolución se mezcla con 81 mg (0,25 mmoles, 1,4 eq) de TBTU. La solución se agita 20 min. a temperatura ambiente, después se agregan 12 \mul (0,27 mmoles, 1,5 eq) de isopropilamina y se agita durante 16 h. Luego se filtra a través de óxido de aluminio básico y se lava con 20 ml de metanol. Se añade gel FI al filtrado y se eliminan los componentes volátiles al vacío. El producto crudo inmovilizado en el gel de FI se purifica a través de una fase inversa (de 95% de agua (+0,2% de HCOOH) y 5% de acetonitrilo (+0,2% de HCOOH) a 55% de agua y 45% de acetonitrilo en 20 min). Las correspondientes fracciones de producto se mezclan con 1 eq de ácido clorhídrico concentrado y se liberan de disolvente por liofilización. Quedan 14 mg (0,025 mmoles, 14%) del hidrocloruro del compuesto 59 en forma de film incoloro.
Los ejemplos 60-69 se preparan análogamente.
Los ejemplos 68 y 69 son quirales; se preparan adecuadamente a partir de C-2a, empleando los enantiómeros del ácido cis-2-aminociclopentancarboxílico y formando por último la isopropilamida. Como alternativa 68 y 69 también se pueden obtener a partir de 59 mediante HPLC quiral preparativa.
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Ejemplo 70 (\pm)-(1S*,2R*)-2-{2-[3-Cloro-4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ci- clopentancarboxil-isopropilamida (esquema de síntesis B)
Se disuelven 30 mg (85,5 mmoles) de B-2a en 100 \mul de NMP y se mezclan con 35 mg (0,14 mmoles, 1,6 eq) de (4-amino-2-clorofenil)-(4-metilpiperazin-1-il)-metanona. A esta mezcla reactiva se añaden 107 \mul de HCl 4 M en dioxano (0,43 mmoles, 5 eq) y se agita 12 h a 5ºC. La mezcla reactiva se recoge en DCM/MeOH/NH_{3} 9/1/0,1 y se combina con 6 ml de gel de FI, los componentes volátiles se eliminan al vacío y se purifica por cromatografía de fase inversa (de 5% de acetonitrilo a 95% de acetonitrilo en 10 min). Las correspondientes fracciones de producto se liberan de disolvente por liofilización y quedan 35 mg (0,06 mmoles, 72%) del compuesto 70.
Los ejemplos 71-75 se preparan análogamente.
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Ejemplos 76 -105
Método operativo general
Se disuelve 1 eq del compuesto B-4 (del compuesto E-8b para los ejemplos 98-101 y del compuesto E-8a para los ejemplos 102-105) en DMF (aprox. 1-10 ml por mmol), se añaden 4-6 eq de base de Hünig y luego 1,3-1,5 eq de TBTU. La mezcla reaccionante se agita 10-30 min. a temperatura ambiente y después se agrega 1 -1,5 eq de la amina o anilina. Terminada la reacción se combina la mezcla con gel de sílice, se eliminan al vacío todos los componentes volátiles y el producto se purifica por cromatografía en columna (de fase normal o inversa) y se aísla.
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Ejemplo 106 (\pm)-(3-[4-((1R*,2S*)-2-Carbamoílciclopentilamino)-5-tri-fluorometilpirimidin-2-ilamino]-N-fenilbenzamida (esquema de síntesis A)
Se disuelven 700 mg (3,06 mmoles) de A-3 en 6 ml de DMA. Se añaden 800 \mul (4,6 mmoles, 1,5 eq) de base de Hünig y luego, gota a gota, 440 mg de cis-2-amino-1-ciclopentancarboxamida disueltos en 24 ml de DMA. La mezcla reaccionante se agita a temperatura ambiente. Al cabo de 1 h se diluye con 400 ml de diclorometano y se extrae 2 veces respectivamente con 200 ml de solución semisaturada de cloruro amónico, después se seca sobre sulfato magnésico y el disolvente se elimina al vacío. Quedan 1,1 g de (\pm)-(1S*,2R*)-2-(2-metilsulfanil-5-trifluoro-metilpirimidin-4-ilamino)-ciclopentancarboxamida cruda, como un sólido de color beige, que se emplea en la siguiente etapa sin ulterior purificación.
Para ello se disuelve el sólido en 60 ml de THF, se agregan en porciones 1,31 g (5,5 mmoles, 77%, 2 eq) de mCPBA y se agita 1 h a la temperatura ambiente. La fase orgánica se lava 3 veces respectivamente con 20 ml de disolución saturada de bicarbonato sódico, eliminando así el ácido 3-clorobenzoico. Después de secar la fase orgánica sobre sulfato magnésico se obtienen 1,15 g de (\pm)-(1S*,2R*)-2-(2-metanosulfinil-5-tri-fluorometilpirimidin-4-ilamino)-ciclopentancarboxamida cruda, que se usan en la siguiente etapa sin ulterior purificación.
Se disuelven 150 mg (0,45 mmoles) de (\pm)-(1S*,2R*)-2-(2-metanosulfinil-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino)-ciclo-pentancarboxamida en 500 \mul de NMP y se le adicionan 148 mg (0,68 mmoles, 1,5 eq) de m-aminobenzanilida. A esta solución se le agregan 34 \mul de ácido clorhídrico (disolución 4 M en dioxano, 0,3 eq) y se agita 16 h a 50ºC. La mezcla reactiva se agita en 30 ml de agua, se ajusta a pH 3 con 10 ml de HCl 0,1 N y se extrae 3 veces respectivamente con 15 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre sulfato magnésico, se eliminan al vacío todos los componentes volátiles y el producto crudo se agita en ciclohexano/acetato de etilo 60/40, el precipitado se aspi-
ra y se lava con 2-propanol. Se obtienen 15 mg (0,03 mmoles, 7%) del compuesto 106 en forma de sólido incoloro.
Los ejemplos 107-109 se preparan análogamente. En este caso la purificación se efectuó por cromatografía en columna (acetato de etilo/ciclohexano, gel de sílice).
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Ejemplo 110 (\pm)-((1S,2R)-2-{5-Bromo-2-[4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilaminopirimidin-4-ilamino}-ciclopentancarboxil-ciclopropilamida (esquema de síntesis E)
Se disuelven 39 mg (0,077 mmoles) de E-7b en \mul de 500 DMF, se añaden 66 \mul (0,39 mmoles, 5 eq) de base de Hünig y 35 mg (0,11 mmoles, 1,4 eq) de TBTU. La disolución se agita 20 min. a temperatura ambiente, luego se agregan 8 \mul (0,116 mmoles, 1,5 eq) de ciclopropilamina y se agita a temperatura ambiente durante la noche. Se filtra a través de óxido básico de aluminio, se lava con aprox. 20 ml de metanol y el filtrado se mezcla con 8 ml de gel FI. Tras eliminar al vacío los componentes volátiles se purifica en fase inversa (desde 95% de agua (+ 0,2% de HCOOH) y 5% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) hasta 5% de agua y 95% de acetonitrilo en 20 min). Las fracciones correspondientes de producto se liberan de disolvente por liofilización. Se obtiene el compuesto 110 en forma de un film transparente, 12 mg (0,021 mmoles, 27%).
MS-ESI^{+}: 542/544 (M+H)^{+} (1 Br).
Los ejemplos 111-120 se preparan análogamente.
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Ejemplo 121 N-Metil-N-(1-metilpiperidin-4-il-4-{4-[(\pm)-1R*,2S*)-2-(pirrolidin-1-carbonil)-ciclopentilamino]-5-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino}-benzamida (esquema de síntesis C)
Se disuelven 80 mg (0,15 mmoles) de C-3e en 1,4 ml de DMF, se agregan 132 \mul (0,77 mmoles, 5 eq) de base de Hünig y 69 mg (0,22 mmoles, 1,4 eq) de TBTU. La mezcla reactiva se agita a temperatura ambiente 30 min., después se añaden 119 \mul (0,144 mmoles, 9,4 eq) de pirrolidina y se agita 16 h a temperatura ambiente. Se filtra a través de óxido básico de aluminio, se lava con aprox. 20 ml de metanol y el filtrado se mezcla con gel de sílice. Después de eliminar los componentes volátiles al vacío se purifica mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH/NH_{3} 9/1/0,1). Después de combinar las fracciones de producto, mezclarlas con 100 \mul de HCl (solución 4 M en dioxano) y eliminar el disolvente al vacío se obtiene el hidrocloruro del compuesto 121 en forma de un film transparente, 29 mg (0,048 mmoles, 31%).
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MS-ESI^{+}: 574 (M+H)^{+}
Los ejemplos 122-128 se preparan análogamente.
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Ejemplo 129 4-[4-((1R,3S)-3-Carbamoílciclopentilamino)-5-trifluoro-metilpirimidin-2-ilamino]-N-metil-N-(1-metilpiperidin-4-il)-benzamida (esquema de síntesis C)
Se disuelven 75 mg (0,14 mmoles) de C-3f en 1 ml de DMF, se añaden 123 \mul (0,7 mmoles, 5 eq) de base de Hünig y la mezcla reaccionante se agita durante 30 min. Luego se agregan 14 \mul (0,22 mmoles, 1,5 eq) de solución acuosa amoniacal (al 28%) y se agita 5 h a temperatura ambiente. La disolución se mezcla con gel FI, se eliminan al vacío todos los componentes volátiles y se purifica mediante cromatografía en columna (de 10% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) y 90% de agua (+ 0,2% de HCOOH) a 24% de acetonitrilo y 76% de agua en 12 min). Las fracciones de producto se mezclan con 100 \mul de HCl dioxánico y se eliminan todos los componentes volátiles por liofilización. Se obtienen 35 mg (0,063 moles, 44%) del compuesto 129 en forma de hidrocloruro.
El ejemplo 129 se prepara análogamente.
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Ejemplo 131 (\pm)-(1S*,2R*)-2-[2-(4-Acetilaminofenilamino)-5-trifluoro-metilpirimidin-4-ilamino]-ciclopentancarboxil-isopropilamida (esquema de síntesis D)
Se disuelven 22 mg de D-6c en 1 ml de THF, se mezclan con 14 \mul (0,075 mmoles, 1,5 eq) de base de Hünig y luego se agregan 3 \mul de cloruro de acetilo disuelto en 500 \mul de THF. Al cabo de unos 90 min. la disolución reactiva se diluye con 10 ml de metanol y se añaden 8 ml de gel FI. Se purifica por cromatografía de fase inversa (de 78% de agua (+ 0,2% de HCOOH) y 22% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) a 51% de agua y 49% de acetonitrilo en 15 min). Se reúnen las respectivas fracciones de producto y el disolvente se elimina por liofilización. Se obtienen 14 mg (0,028 mmoles, 54%) del compuesto 131.
Los ejemplos 132-133 se preparan análogamente.
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Ejemplo 134 (\pm)-(1S*,2R*)-2-{5-Ciano-2-[4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-pirimidin-4-ilamino}-ciclopentan-carbo- xamida (esquema de síntesis E)
Se disuelven 40 mg (0,11 mmoles) de E-96 en 1,5 ml de DMF, se agregan 110 \mul (0,63 mmoles, 5,8 eq) de base de Hünig y la mezcla reaccionante se agita durante 40 min. Luego se añaden 18 \mul (0,16 mmoles, 1,5 eq) de N-metilpiperazina y se agita a temperatura ambiente durante 48 h. La solución se combina con gel de sílice, se eliminan todos los componentes volátiles al vacío y se purifica por cromatografía en columna (DCM/MeOH 9/1). Se obtienen 33 mg (0,07 moles, 67%) del compuesto 134.
Los ejemplos 135-136 se preparan análogamente.
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Ejemplo 137 (\pm)-(1S*,2R*)-2-{5-Ciclopropiletinil-2-[4-metilpiperazin-1-carbonil)-fenilamino]-pirimidin-4-ilamino}-ciclopentan-carboxamida (esquema de síntesis E)
Se disuelven 50 mg (0,09 mmoles) de 105 en 220 \mul de DMF y a continuación se agregan 15 mg de diclorobis(trifenilfosfin)-paladio (0,021 mmoles, 23% molar) y 10 mg (0,03 mmoles, 0,58 eq) de yoduro de cobre(I). La solución se mezcla con 320 \mul de base de Hünig y después con 18 mg (0,27 mmoles, 3 eq) de etinilciclopropano. La mezcla reactiva se filtra a través de gel de sílice con una mezcla de DCM/MeOH/NH_{3} 4/1/0,1 y luego se añaden 6 ml de gel FI. Después de eliminar los componentes volátiles se purifica mediante cromatografía en columna de fase inversa (de 95% de agua (+ 0,2% de HCOOH) y 5% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) a 50% de agua y 50% de acetonitrilo en 20 min). Se reúnen las correspondientes fracciones de producto y el disolvente se elimina por liofilización. Se obtienen 32 mg (0,065 mmoles, 71%) del compuesto 137.
Los ejemplos 138-139 se preparan análogamente, efectuando la reacción del ejemplo 138 bajo una atmósfera de propino, en un matraz de nitrógeno a 40ºC.
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Ejemplo 140 (\pm)-4-[4-((1R*,2S*)-2-Carbamoílciclopentilamino)-5-ciclo-propilpirimidin-2-ilamino]-N-(1-metilpiperidin-4-il)-benzamida (esquema de síntesis E)
Se suspenden 100 mg (0,15 mmoles) de 104 en 1,4 ml de dioxano y se añaden 13 mg (0,15 mmoles, 1 eq) de ácido ciclopropilborónico. La disolución se desgasifica al vacío y, en atmósfera de argón, se añaden 3,5 mg (0,004 mmoles, 3% molar) de aducto dicloro[1,1'-bis(difenilfosfino)ferrocen]paladio(II)-diclorometano (PdCl_{2}dppf DCM) y 2 ml de solución de carbonato sódico (2 M en agua). La mezcla de dos fases se calienta a 130ºC (en microondas CEM, 100 W) durante 5 min. La fase orgánica se separa, se diluye con metanol y se mezcla con 6 ml de gel FI. Después de eliminar los componentes volátiles tiene lugar la purificación por cromatografía en columna de fase inversa (desde 97% de agua (+ 0,2% de HCOOH) y 3% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) hasta 70% de agua y 30% de acetonitrilo en 12 min). Se reúnen las correspondientes fracciones de producto y el disolvente se elimina por liofilización. Se obtienen 2 mg (0,003 mmoles, 2%) del compuesto 140.
Ejemplo 141 (\pm)-(1S*,2R*)-2-[2-(4-[1,4]Diazepan-1-il-3-fluorofenil-amino)-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino]-ciclopentan-carboxil-isopropilamida (esquema de síntesis B)
Se disuelven 23 mg (0,066 mmoles) de B-2a en 100 \mul de NMP, se agregan 17 mg (0,079 mmoles, 1,2 eq) de 3-fluoro-4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-fenilamina y por último 46 \mul de HCl (0,18 mmoles, 2,8 eq, solución 4 M en dioxano). La mezcla reactiva se calienta 12 h a 90ºC, se combina con 6 ml de gel de FI y los componentes volátiles se eliminan al vacío. Se purifica por cromatografía en columna de fase inversa (desde 95% de agua (+ 0,2% de HCOOH) y 5% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) hasta 55% de agua y 45% de acetonitrilo en 25 min). Se reúnen las respectivas fracciones de producto y el disolvente se elimina por liofilización. Se obtienen 3 mg (0,005 mmoles, 8%) del compuesto 141.
Los ejemplos 142-144 se preparan análogamente.
Ejemplo 145 (\pm)-(1R*,2R*)-2-{2-[4-(4-Metilpiperazin-1-carbonil)-fenilaminol]-5-trifluorometilpirimidin-4-ilamino}-ciclo-pentancarboxamida (esquema de síntesis C)
Se disuelven 100 mg (0,25 mmoles) de C-2a en 1 ml de 1-buta-nol y esta disolución se mezcla con 35 mg (0,275 mmoles, 1,1 eq) de trans-2-aminociclopentancarboxamida racémica, así como con 60 \mul de (0,35 mmoles, 1,4 eq) de base de Hünig. Se agita 30 min. a 110ºC (microondas CEM, 100 W) hasta completar la conversión. Se añaden unos 20 ml de metanol a la mezcla reactiva, se combina con gel de FI (aprox. 8 ml) y se eliminan al vacío todos los componentes volátiles. Se purifica a través de una columna de FI (desde 95% de agua (+ 0,2% de HCOOH) y 5% de acetonitrilo (+ 0,2% de HCOOH) hasta 55% de agua y 45% de acetonitrilo en 20 min). Las correspondientes fracciones de producto se mezclan con ácido clorhídrico concentrado y el disolvente se elimina por liofilización. Se obtienen 77 mg (0,146 mmoles, 58%) del compuesto 145.
Los ejemplos 146-147 se obtienen análogamente y el ejemplo 148 se prepara como el 129 (sustitución nucleófila con el \beta-aminoácido, partiendo de C-2a y finalizando por acoplamiento amídico con amoniaco.
Ejemplos 1-148
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Los siguientes ejemplos describen la acción biológica de los compuestos de la presente invención, pero sin limitarla a dichos ejemplos.
Como pudo demostrarse mediante tinción de ADN seguido de análisis por clasificación de células fluorescentes activadas (FACS) o barrido de matrices Cellomics, el efecto inhibidor de la proliferación debido a compuestos de la presente invención está mediado principalmente por fallos en la segregación cromosómica. La acumulación de segregaciones defectuosas produce una poliploidía masiva que puede desembocar finalmente en una inhibición de la proliferación o incluso en apoptosis. Gracias a sus propiedades biológicas, los compuestos de la presente invención de la fórmula general (1), sus isómeros y sus sales fisiológicamente compatibles y polimorfos son apropiados para tratar enfermedades caracterizadas por una proliferación celular excesiva o anormal.
Ejemplo de ensayo de cinasa Aurora-B
Se desarrolló un ensayo radiactivo de inhibición enzimática, usando proteína natural Aurora B humana recombinante, expresada en báculovirus y dotada de un epítopo de histidina (6) (His-) N-terminal, obtenida de células de insecto infectadas (SF21) y purificada.
Expresión y purificación
Para ello se incuban 300x10^{6} células SF21 en medio celular de insecto SF-900II (Invitrogen) con una cantidad idónea de solución de báculovirus durante 1 h a 27ºC (matraz Fernbach-agitador, a 50 rpm). Después se agregan 250 ml de medio SF-900II y se agita durante 3 días (a 100 rpm, 27ºC). Tres horas antes de recolectar se añade ácido okadaico al cultivo (C_{44}H_{68}O_{13}, Calbiochem #495604) (concentración final 0,1 \muM) para estabilizar los sitios de fosforilación en la Aurora B recombinante. Las células se peletizan por centrifugación (1000 rpm, 5 min, 4ºC), se desecha el sobrenadante y el precipitado se congela en nitrógeno líquido. Luego se derrite (37ºC, 5 min.) y se resuspende en tampón de lisis. Para un volumen de 200 ml de cultivo inicial se usan 40 ml de tampón de lisis (Tris/Cl 25 mM, MgCl_{2} 10 mM, NaCl 300 mM, imidazol 20 mM, pH 8,0, 2-mercaptoetanol 0,07% y Protease-Inhibitor-Complete de Roche Diagnostics). Tras dos ciclos rápidos de congelación/descongelación (de nitrógeno líquido a 37ºC) el lisado se mantiene durante 30 min. sobre hielo, después se incuba con perlas de Ni-NTA lavadas (Ni-NTA Superflow Beads, 4 ml por 200 ml de cultivo inicial) (2 h, 4ºC) y se introduce en una columna Econo-Pac (Biorad #732-1010). Antes de eluir con 8 ml (por 200 ml de cultivo inicial) de tampón de elución (Tris/Cl 25 mM, pH 8,0, NaCl 300 mM, MgCl_{2} 10 mM, Brij-35 0,03%, glicerina 10%, 2-mercaptoetanol 0,07%, imidazol 400 mM) se efectúan cinco lavados con 10 volúmenes de columna, de tampón de lavado (Tris/Cl 25 mM, MgCl_{2} 10 mM, NaCl 1000 mM, imidazol 20 mM, pH 8,0, 2-mercaptoetanol 0,07% y Protease-Inhibitor-Complete de Roche Diagnostics), respectivamente. Las fracciones reunidas de producto eluido se desalinizan con una columna Sephadex G25 y se transfieren a tampón de congelación (Tris/Cl 50 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM, EDTA 0,1 mM, Brij-35 0,03%, glicerina 10%, DTT 1 mM).
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Ensayo de cinasa
Las sustancias ensayadas se depositan en una placa de polipropileno (de 96 pocillos, Greiner #655 201), cubriendo un intervalo de concentraciones de 10 \muM - 0,0001 \muM. La concentración final de DMSO en el ensayo es del 5%. Se pipetean 30 \mul de mezcla proteica (Tris/Cl 50 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 25 mM, NaCl 25 mM, ATP 167 \muM, 200 ng de His-Aurora B en tampón de congelación) en 10 \mul de sustancia de ensayo en 25% de DMSO y se incuba 15 min. a temperatura ambiente. Después se agregan 10 \mul de mezcla peptídica (Tris/Cl 100 mM, pH 7,5, MgCl_{2} 50 mM, NaCl 50 mM, NaF 5 \muM, DTT 5 \muM, gamma-P33-ATP 1 \muCi [Amersham], substrato peptídico 50 \muM [biotina-EPLERRLSLVPDS o multímeros del mismo, o biotina-EPLERRLSLVPKM o multímeros del mismo, o biotina-LRRWSLGLRRWSLGLRRWSLGLRRWSLG]). La reacción se incuba durante 75 min. (a temperatura ambiente), se para añadiendo 180 \mul de ácido tricloroacético al 6,4% y se incuba sobre hielo durante 20 min. Una placa de filtración Multiscreen (Millipore, MAIP NOB10) se equilibra primero con 100 \mul de etanol al 70% y luego con 180 \mul de ácido tricloroacético, eliminando los líquidos con un aparato de succión adecuado. Después se aplica la reacción de cinasa detenida. Tras 5 etapas de lavado con 180 \mul de ácido tricloroacético al 1%, respectivamente, se seca la parte inferior de la placa (10-20 min. a 55ºC) y se agregan 25 \mul de cóctel de centelleo (Microscint, Packard #6013611). El gamma-fosfato incorporado se cuantifica mediante un contador de centelleo de líquidos Wallac 1450 Microbeta. Las muestras sin sustancia de ensayo o sin substrato peptídico sirven de control. Los valores IC_{50} se obtienen mediante el programa informático Graph Pad Prism.
El efecto antiproliferativo de los compuestos de la presente invención se determina en el ensayo de proliferación con células tumorales humanas cultivadas y/o en un análisis de ciclo celular, por ejemplo con células tumorales NCI-H460. En ambos métodos de ensayo los compuestos muestran una buena hasta muy buena efectividad, es decir, por ejemplo, un valor IC_{50} inferior a 5 \mumoles/l, generalmente inferior a 1 \mumol/l, en el ensayo de proliferación de NCI-H460.
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Medición de la inhibición de la proliferación en células tumorales humanas cultivadas
Para medir la proliferación en células tumorales humanas cultivadas se cultivan células de la línea celular de tumores pulmonares NCI-H460 (obtenidas de la colección americana de cultivos tipo (ATCC)) en medio RPMI 1640 (Gibco) con 10% de suero fetal bovino (Gibco) y se recolectan en la fase de crecimiento logarítmico. A continuación, las células NCI-H460 se colocan en placas de fondo plano de 96 pocillos (Falcon), con una densidad de 1000 células por pocillo en medio RPMI 1640, y se incuban durante la noche en un incubador (a 37ºC y 5% de CO_{2}). Las sustancias activas se añaden a las células a varias concentraciones (disueltas en DMSO; concentración final en DMSO: 0,1%). Tras 72 h de incubación se añaden a cada pocillo 20 \mul de reactivo AlamarBlue (AccuMed International) y las células se incuban otras 5-7 h. Después de la incubación se mide el cambio de color del reactivo AlamarBlue en un espectrofotómetro de fluorescencia Wallac Microbeta. Los valores Ec_{50} se calculan mediante algoritmos estándar de Levenburg-Marquard (programa GraphPadPrizm).
Los ensayos de ciclo celular se realizan, por ejemplo, mediante análisis FACS (clasificación de células fluorescentes activadas) o barrido de matrices Cellomics (CellCycle Analysis).
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Análisis FACS
El yoduro de propidio (PI) se fija estequiométricamente al ADN de doble cadena y por lo tanto sirve para determinar la proporción de células en las fases G1, S y G2/M del ciclo celular, en base al contenido celular de ADN. En las fases G0 y G1 las células contienen ADN diploide (2N), mientras que en la fase G2 o mitosis contienen ADN 4N.
Para la tinción con PI se siembran por ejemplo 1,75x10^{6} células NCI-H460 en un frasco de cultivo celular de 75 cm^{2}, a las 24 h se añade 0,1% de DMSO como control o bien la sustancia a diversas concentraciones (en 0,1% de DMSO). Las células se incuban 42 h con la sustancia o con DMSO. Las células se separan luego con tripsina y se centrifugan. El precipitado celular se lava con suero fisiológico tamponado (PBS) y luego se fijan las células con etanol del 80% a -20ºC durante 2 h, como mínimo. Tras otra etapa de lavado con PBS las células se permeabilizan con Triton X-100 (Sigma; 0,25% en PBS) durante 5 min. sobre hielo y a continuación se incuban con una solución de yoduro de propidio (Sigma; 10 \mug/ml) y ARNasa (Serva; 1 mg/ml) en relación 9:1 durante al menos 20 min. en la oscuridad. La medición de ADN se efectúa en un analizador Becton Dickinson FACS con láser de argón (500 mW, emisión 488 nm); los datos se obtienen y se evalúan con el programa DNA Cell Quest Programm (BD).
Barrido de matrices Cellomics
Se siembran células NCI-H460 en placas de fondo plano de 96 pocillos (Falcon) en medio RPMI 1640 (Gibco) con 10% de suero fetal bovino (Gibco) a una densidad de 2000 células por pocillo y se incuban durante la noche en un incubador (a 37ºC y 5% de CO_{2}). Las sustancias activas se añaden a las células a diversas concentraciones (disueltas en DMSO; concentración final en DMSO: 0,1%). Tras 42 h de incubación se succiona el medio, las células se fijan durante 10 min. con disolución de formaldehído al 4% y Triton X-100 (1:200 en PBS) a la temperatura ambiente y simultáneamente se permeabilizan, y luego se lavan dos veces con una solución de BSA al 0,3% (Calbiochem). A continuación se tiñe el ADN añadiendo 50 \mul/pocillo de 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Molecular Probes) a una concentración final de 300 nM, durante 1 h a la temperatura ambiente en la oscuridad. Después se lava dos veces cuidadosamente con PBS, las placas se cubren con film adhesivo negro y se analizan por barrido de matrices Cellomics mediante el programa CellCycle BioApplication y se visualizan y evalúan empleando Spotfire.
Las sustancias de la presente invención son inhibidores de cinasas Aurora. Gracias a sus propiedades biológicas, los nuevos compuestos de la fórmula general (1), sus isómeros y sus sales fisiológicamente compatibles son apropiados para el tratamiento de enfermedades caracterizadas por una proliferación celular excesiva o anómala.
Entre estas enfermedades cabe citar por ejemplo: infecciones víricas (p.ej. VIH y sarcoma de Kaposi), enfermedades inflamatorias y autoinmunes (p.ej. colitis, artritis, enfermedad de Alzheimer, glomérulonefritis y curación de heridas), infecciones bacterianas, fúngicas y/o parasitarias, leucemias, linfomas y tumores sólidos (p.ej. carcinomas y sarcomas), enfermedades cutáneas (p.ej. psoriasis), enfermedades basadas en hiperplasias que se caracterizan por un aumento del número de células (p.ej. fibroblastos, hepatocitos, células óseas y de médula ósea, células cartilaginosas o de musculatura lisa o epiteliales (p.ej. hiperplasia endometrial)); enfermedades óseas y cardiovasculares (p.ej. restenosis e hipertrofia).
Por ejemplo, con los compuestos de la presente invención se pueden tratar las siguientes enfermedades cancerosas, pero sin limitarse a ellas: tumores cerebrales como por ejemplo neurinoma acústico, astrocitomas como el astrocitoma pilocítico, astrocitoma fibrilar, astrocitoma protoplasmático, astrocitoma gemistocítico, astrocitoma anaplástico y glioblastomas, linfomas cerebrales, metástasis cerebrales, tumores hipofisarios como el prolactinoma, tumor productor de HGH (hormona del crecimiento humano) y tumor productor de HACT (hormona adrenocorticotrópica), craneofaringioma, méduloblastomas, meningiomas y oligodendrogliomas; tumores nerviosos (neoplasmas), por ejemplo tumores del sistema nervioso vegetativo como el neuroblastoma simpático, ganglioneuroma, paraganglioma (feocromocitoma, cromafinoma) y el tumor del glomo carotídeo, tumores del sistema nervioso periférico como el neuroma traumático, neurofibroma, neurinoma (neurilemoma, schwannoma) y schwannoma maligno, y también tumores del sistema nervioso central como tumores del cerebro y de la médula espinal; tumores intestinales como por ejemplo carcinoma de recto, carcinoma de colon, carcinoma anal, tumores del intestino delgado y tumores dudodenales; tumores palpebrales como basalioma o carcinoma de células basales; cáncer o carcinoma de páncreas; cáncer o carcinoma de vejiga; cáncer de pulmón (carcinoma bronquial) como por ejemplo los carcinomas bronquiales de células pequeñas (carcinomas de células en grano de avena) y los carcinomas bronquiales de células no pequeñas como carcinomas de células escamosas, adenocarcinomas y carcinomas bronquiales de células grandes; cáncer de mama, por ejemplo carcinomas mamarios como el carcinoma ductal infiltrante, carcinoma coloide, carcinoma lobular invasivo, carcinoma tubular, carcinoma adenoquístico y carcinoma papilar; linfomas no hodgkinianos (NHL) como por ejemplo linfoma de Burkitt, linfomas no hodgkinianos (NHL) de baja malignidad y mucosis fungoides; cáncer de útero o carcinoma endometrial o carcinoma del cuerpo uterino; síndrome COD (cáncer de origen desconocido); cáncer de ovario o carcinoma ovárico como mucinosis, cáncer endometrial o seroso; cáncer de vesícula biliar; cáncer de conductos biliares, como por ejemplo el tumor de Klatskin; cáncer testicular como por ejemplo seminomas y no seminomas; linfoma (linfosarcoma) como por ejemplo el linfoma maligno, la enfermedad de Hodgkin, linfomas no hodgkinianos (NHL) como leucemia linfática crónica, tricoleucemia, inmunocitoma, plasmocitoma (mieloma múltiple), inmunoblastoma, linfoma de Burkitt, micosis fungoide de zonas T, linfoblastoma anaplástico de células grandes y linfoblastoma; cáncer de faringe como por ejemplo los tumores de las cuerdas vocales, tumores de laringe supraglóticos, glóticos y subglóticos; cáncer óseo como por ejemplo ósteocondroma, condroma, condroblastoma, fibroma condromixoide, osteoma, osteoma osteoide, osteoblastoma, granuloma eosinófilo, tumor de células gigantes, condrosarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Ewing, retículo-sarcoma, plasmocitoma, displasia fibrosa, quistes óseos juveniles y quistes óseos aneurismáticos; tumores de la cabeza y del cuello, como por ejemplo los tumores de labios, lengua, suelo de la boca, encías de la cavidad bucal, paladar, glándulas salivales, laringe, fosas nasales, senos paranasales, laringe y oído medio; cáncer de hígado como por ejemplo el carcinoma de células del hígado o hepatocelular (CHC); leucemias, por ejemplo leucemias agudas como leucemia linfática/linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA); leucemias crónicas como leucemia linfática crónica (LLC), leucemia mieloide crónica (LMC); cáncer de estómago o carcinoma gástrico, por ejemplo el adenocarcinoma papilar, tubular o mucinoso, carcinoma de células en forma de anillo de sello, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células pequeñas y carcinoma indiferenciado; melanomas como por ejemplo el melanoma de extensión superficial, melanoma nodular, melanoma léntigo-maligno y melanoma acral-lentiginoso; cáncer renal como por ejemplo carcinoma de células de riñón o hipernefroma o tumor de Grawitz; cáncer de esófago o carcinoma esofágico; cáncer de pene; cáncer de próstata; cáncer de faringe o carcinomas faríngeos como por ejemplo los carcinomas nasofaríngeos, orofaríngeos e hipofaríngeos; retinoblastoma como por ejemplo el cáncer o carcinoma vaginal; carcinomas planocelulares, adenocarcinomas, carcinomas in situ, melanomas y sarcomas malignos; carcinomas tiroideos como por ejemplo el carcinoma de tiroides papilar, folicular y medular, así como carcinomas anaplásticos; espinalioma, carcinoma espinocelular y carcinoma planocelular cutáneo; timomas; cáncer de uretra y cáncer de vulva.
Los nuevos compuestos pueden utilizarse para prevenir y tratar a corto o largo plazo las enfermedades arriba citadas, opcionalmente también en combinación con radioterapia u otros compuestos del "estado técnico", como p.ej. sustancias citostáticas o citotóxicas, inhibidores de proliferación celular, sustancias antiangiogénicas, esteroides o anticuerpos.
Los compuestos de la fórmula general (1) se pueden usar solos o en combinación con otras sustancias activas conforme a la presente invención, opcionalmente también en combinación con otras sustancias farmacológicamente activas.
Como agentes quimioterapéuticos que pueden administrarse junto con los compuestos de la presente invención cabe citar, sin limitarse a ellos, hormonas, análogos hormonales y antihormonas (p.ej. tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, fulvestrant, acetato de megestrol, flutamida, nilutamida, bicalutamida, aminoglutetimida, acetato de ciproterona, finasterida, acetato de buserelina, fludrocortisona, fluoximesterona, medroxiprogesterona, octreotida), inhibidores de aromatasas (p.ej. anastrozol, letrozol, liarozol, vorozol, exemestano, atamestano), agonistas y antagonistas de LHRH (p.ej. acetato de goserelina, luprolida), inhibidores de factores de crecimiento (factores de crecimiento como, por ejemplo, el "factor de crecimiento derivado de plaquetas" y el "factor de crecimiento hepatocítico"; como inhibidores cabe citar p.ej. anticuerpos de "factores de crecimiento", anticuerpos de receptores de "factores de crecimiento" e inhibidores de tirosincinasa como por ejemplo gefitinib, imatinib, lapatinib y trashizumab); antimetabolitos (p.ej. antifolatos como metotrexato y raltitrexed, análogos de pirimidina como 5-fluorouracilo, capecitabina y gemcitabina, análogos de purina y adenosina como mercaptopurina, tioguanina, cladribina y pentostatina, citarabina, fludarabina); antibióticos antitumorales (p.ej. antraciclinas como doxorubicina, daunorubicina, epirubicina e idarubicina, mitomicina-C, bleomicina, dactinomicina, plicamicina, estreptozocina); derivados de platino (p.ej. cisplatino, oxaliplatino, carboplatino); agentes alquilantes (p.ej. estramustina, mecloretamina, melfalán, clorambucilo, busulfán, dacarbazina, ciclofosfamida, ifosfamida, temozolomida, nitrosoureas como por ejemplo carmustina y lomustina, tiotepa); agentes antimicóticos (p.ej. alcaloides de vinca, como por ejemplo vinblastina, vindesina, vinorelbina y vincristina; y taxanos como paclitaxel, docetaxel); inhibidores de topoisomerasas (p.ej. epipodofilotoxinas como por ejemplo etopósido y etopofós, tenipósido, amsacrina, topotecán, irinotecán; mitoxantrona) y varios agentes quimioterapéuticos, como amifostina, anagrelida, clodronato, filgrastina, interferón alfa, leucovorina, rituximab, procarbazina, levamisol, mesna, mitotano, pamidronato y porfímero.
Como formas de aplicación son adecuadas por ejemplo las tabletas, cápsulas, supositorios, soluciones - especialmente para inyección (s.c., i.v., i.m.) e infusión - elixires, emulsiones o polvos dispersables. En estos casos el contenido de compuesto(s) farmacéuticamente activo(s) debería estar comprendido respectivamente en el intervalo del 0,1-90% en peso, con preferencia del 0,5-50% en peso, referido a la composición total, es decir una cantidad suficiente para obtener el margen de dosificación abajo indicado. Si es necesario las dosis señaladas se pueden administrar varias veces al día.
Pueden obtenerse tabletas adecuadas, por ejemplo, mezclando el o los principios activos con excipientes conocidos, por ejemplo, con diluyentes inertes como carbonato cálcico, fosfato cálcico o lactosa, disgregantes como almidón de maíz o ácido algínico, aglutinantes como el almidón o la gelatina, lubricantes como estearato magnésico o talco y/o agentes para alcanzar la liberación controlada, como carboximetilcelulosa, acetato-ftalato de celulosa o poli(acetato de vinilo). Estas tabletas también pueden constar de varias capas.
Asimismo se pueden preparar grageas, recubriendo núcleos producidos de modo análogo a las tabletas con las sustancias utilizadas normalmente para este tipo de capas, por ejemplo, Kollidon o goma laca, goma arábiga, talco, dióxido de titanio o azúcar. Para conseguir un efecto de liberación controlada o para evitar incompatibilidades, el núcleo también puede constar de varias capas. Análogamente, la envoltura de la gragea también puede ser de varias capas, para obtener la liberación controlada, empleando los mismos excipientes mencionados para las
tabletas.
Los jarabes que contienen los principios activos o combinaciones de los principios activos de la presente invención también pueden llevar edulcorantes como sacarina, ciclamato, glicerina o azúcar, así como un potenciador del sabor, p.ej. vainillina o extracto de naranja. Además pueden llevar adyuvantes de suspensión o espesantes, como carboximetilcelulosa sódica; humectantes, por ejemplo productos de condensación de alcoholes grasos con óxido de etileno, o conservantes de tipo p-hidroxibenzoato.
Las soluciones de inyección o infusión se preparan como es usual - p.ej. añadiendo agentes isotónicos, conservantes del tipo p-hidroxibenzoatos, o estabilizantes como las sales alcalinas de ácido etilendiaminotetraacético, empleando eventualmente emulsionantes y/o dispersantes en caso de utilizar, por ejemplo, agua como diluyente y disolventes orgánicos como solubilizantes o codisolventes - y se envasan en ampollas o en frascos de infusión.
Las cápsulas que llevan uno o más principios activos o combinaciones de principios activos se pueden preparar mezclando las sustancias activas con soportes inertes, como lactosa o sorbita, y rellenando cápsulas de gelatina.
Se pueden preparar supositorios adecuados, por ejemplo, por mezcla con materiales soporte previstos para ello, como grasas neutras o polietilenglicol o sus derivados.
\newpage
Como excipientes hay que señalar, por ejemplo, agua, disolventes orgánicos farmacéuticamente aceptables, tales como parafinas (p.ej. fracciones de petróleo), aceites de origen vegetal (p.ej. aceite de cacahuete o sésamo), alcoholes mono o polifuncionales (p.ej. etanol o glicerina), soportes como p.ej. harinas minerales naturales (p.ej. caolines, arcillas, talco, cretas), harinas minerales sintéticas (p.ej. sílice de alta dispersión y silicatos), azúcares (p.ej. sacarosa, lactosa y glucosa), emulsionantes (p.ej. lignina, lejía residual de sulfito, metilcelulosa, almidón y poli(vinilpirrolidona)) y lubricantes (p.ej. estearato magnésico, talco, ácido esteárico y laurilsultato sódico).
La administración se realiza del modo usual, con preferencia por vía oral o transdérmica, sobre todo oral. En caso de administración oral, aparte de los soportes mencionados, las tabletas pueden contener naturalmente aditivos tales como p.ej. citrato sódico, carbonato cálcico y fosfato dicálcico, junto con diversas sustancias auxiliares, tales como almidón, preferiblemente almidón de patata, gelatinas y similares. En el proceso de elaboración de comprimidos pueden usarse además lubricantes como estearato magnésico, laurilsultato sódico y talco. En el caso de las suspensiones acuosas, los principios activos pueden mezclarse con diversos saborizantes o colorantes, además de con los citados aditivos.
Para la administración parenteral pueden emplearse soluciones de los principios activos, con soportes líquidos apropiados.
La dosificación por vía intravenosa es de 1-1000 mg por hora, preferiblemente entre 5 y 500 mg por hora.
No obstante, a veces puede ser preciso administrar dosis distintas de las mencionadas, dependiendo del peso corporal o de la vía de administración, de la respuesta individual al fármaco, del tipo de formulación y del momento o intervalo de administración. En algunos casos puede ser suficiente emplear menor cantidad que la dosis antes citada y en otros habrá que exceder el límite superior. En caso de tener que administrar mayores cantidades es recomendable dividirlas en varias dosis menores repartidas a lo largo del día.
Los siguientes ejemplos de formulación ilustran la presente invención, pero sin limitar su alcance:
Ejemplos de formulaciones farmacéuticas
77
Se mezcla el principio activo finamente molido, la lactosa y una parte del almidón de maíz. La mezcla se tamiza y luego se humecta con una solución de polivinilpirrolidona en agua, se amasa, se granula en húmedo y se seca. El granulado, el resto de almidón de maíz y el estearato magnésico se tamizan y se mezclan entre sí. La mezcla se comprime en tabletas de forma y tamaño adecuado.
78
Se mezcla el principio activo finamente molido, una parte del almidón de maíz, la lactosa, la celulosa microcristalina y la polivinilpirrolidona; la mezcla se tamiza y se trabaja con el resto de almidón de maíz y agua, formado un granulado que se seca y se tamiza. Se le agrega el carboximetilalmidón sódico y el estearato magnésico, se mezcla y se comprime en tabletas de forma y tamaño adecuado.
80
El principio activo se disuelve en agua a su propio pH o a pH 5,5-6,5 y se mezcla con cloruro sódico como agente isotónico. La solución resultante se filtra libre de pirógenos y el filtrado se envasa bajo condiciones asépticas en ampollas que luego se esterilizan y se sellan por fusión. Las ampollas contienen 5 mg, 25 mg y 50 mg de principio activo.
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Claims (15)

1. Compuestos de la fórmula general (1),
\vskip1.000000\baselineskip
81 
\vskip1.000000\baselineskip
donde
\quad
R^{1} es un radical sustituido con R^{5} y, dado el caso, con uno o más radicales R^{4}, escogidos del grupo formado por cicloalquilo C_{3-10} y heterocicloalquilo de 3-8 miembros;
\quad
R^{2} es un radical eventualmente sustituido con uno o más radicales R^{4} elegidos del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-10}, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, arilo C_{6-15} y heteroarilo de 5-12 miembros;
\quad
R^{3} es un radical seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, halógeno, -CN, -NO_{2}, alquilo C_{1-4}, haloalquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-10}, cicloalquilalquilo C_{4-16} y aril-alquilo C_{7-16};
\quad
R^{4} es un radical seleccionado del grupo constituido por R^{a}, R^{b} y R^{a} sustituido con uno o más radicales R^{c} y/o R^{b} iguales o distintos;
\quad
R^{5} es un radical idóneo, escogido del grupo formado por -C(O)R^{c}, -C(O)NR^{c}R^{c}, -S(O)_{2}R^{c}, -N(R^{f})S(O)_{2}R^{c}, -N(R^{f})C(O)R^{c}, -N(R^{f})C(O)OR^{c} y -N(R^{f})C(O)NR^{c}R^{c};
\quad
cada R^{a} está independientemente seleccionado del grupo formado por alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-10}, cicloalquil-alquilo C_{4-16}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{b} es un radical idóneo, seleccionado respectiva e independientemente del grupo formado por =O, -OR^{c}, halo-alquil-C_{1-3}-oxi, -OCF_{3}, =S, -SR^{c}, =NR^{c}, =NOR^{c}, -NR^{c}R^{c}, halógeno, -CF_{3}, -CN, -NC, -OCN, -SCN, -NO_{2}, -S(O)R^{c}, -S(O)_{2}R^{c}, -S(O)_{2}OR^{c}, -S(O)NR^{c}R^{c}, -S(O)_{2}NR^{c}R^{c}, -OS(O)R^{c}, -OS(O)_{2}R^{c}, -OS(O)_{2}OR^{c}, -OS(O)_{2}NR^{c}R^{c}, -C(O)R^{c}, -C(O)OR^{c}, -C(O)NR^{c}R^{c}, -CN(R^{f})NR^{c}R^{c}, -CN(OH)R^{c}, -CN(OH)NR^{c}R^{c}, -OC(O)R^{c}, -OC(O)OR^{c}, -OC(O)NR^{c}R^{c}, -OCN(R^{f})NR^{c}R^{c}, -N(R^{f})C(O)R^{c}, -N(R^{f})C(S)R^{c}, -N(Rf)S(O)_{2}R^{c}, -N(R^{f})C(O)OR^{c}, -N(R^{f})C(O)NR^{c}R^{c}, -[N(R^{f})C(O)]_{2}R^{c}, -N[C(O)]_{2}R^{c}, -N[C(O)]_{2}OR^{c}, -[N(R^{f})C(O)]_{2}OR^{c} y -N(R^{f})CN(R^{f})NR^{c}R^{c};
\quad
cada R^{c} es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{d} y/o R^{e} iguales o distintos, escogido del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-10}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclo-alquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{d} es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{e} y/o R^{f} iguales o distintos, escogido del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclo-alquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\quad
cada R^{e} es un radical idóneo, seleccionado respectiva e independientemente del grupo formado por =O, -OR^{f}, haloalquil-C_{1-3}-oxi, -OCF_{3}, =S, -SR^{f}, =NR^{f}, =NOR^{f}, -NR^{f}R^{f}, halógeno, -CF_{3}, -CN, -NC, -OCN, -SCN, -NO_{2}, -S(O)R^{f}, -S(O)_{2}R^{f}, -S(O)_{2}OR^{f}, -S(O)NR^{f}R^{f}, -S(O)_{2}NR^{f}R^{f}, -OS(O)R^{f}, -OS(O)_{2}R^{f}, -OS(O)_{2}OR^{f}, -OS(O)_{2}NR^{f}R^{f}, -C(O)R^{f}, -C(O)OR^{f}, -C(O)NR^{f}R^{f}, -CN(R^{g})NR^{f}R^{f}, -CN(OH)R^{f}, -C(NOH)NR^{f}R^{f}, -OC(O)R^{f}, -OC(O)OR^{f}, -OC(O)NR^{f}R^{f}, -OCN(R^{g})NR^{f}R^{f}, -N(R^{g})C(O)R^{f}, -N(R^{g})C(S)R^{f}, -N(R^{g})S(O)_{2}R^{f}, -N(R^{d})C(O)OR^{f}, -N(R^{g})C(O)NR^{f}R^{f} y -N(R^{g})CN(R^{f})NR^{f}R^{f};
\quad
cada R^{f} es, independientemente, hidrógeno o un radical sustituido eventualmente con uno o más radicales R^{g}, iguales o distintos, seleccionado del grupo formado por alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclo-alquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y heteroarilalquilo de 6-18 miembros;
\newpage
\quad
cada R^{g} es, independientemente, hidrógeno, alquilo C_{1-6}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloalquilalquilo C_{4-11}, arilo C_{6-10}, arilalquilo C_{7-16}, heteroalquilo de 2-6 miembros, heterocicloalquilo de 3-8 miembros, heterocicloalquilalquilo de 4-14 miembros, heteroarilo de 5-12 miembros y hetero-arilalquilo de 6-18 miembros; eventualmente en forma de sus tautómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros y sus mezclas, así como eventualmente sus sales de adición de ácido farmacológicamente inocuas.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Compuestos según la reivindicación 1, donde R^{3} significa un radical escogido del grupo formado por halógeno y haloalquilo C_{1-4}.
3. Compuestos según la reivindicación 2, donde R^{3} significa R^{3}-CF_{3}.
4. Compuestos según la reivindicación 1 a 3, donde R^{2} significa arilo C_{6-10} o heteroarilo de 5-12 miembros sustituido opcionalmente con uno o más R^{4}.
5. Compuestos según la reivindicación 4, donde R^{2} significa fenilo, sustituido opcionalmente con uno o más R^{4}.
6. Compuestos de la fórmula general (1A),
82
donde
\quad
n es igual a 0 o 1, y
\quad
m es igual a 1-5, e
\quad
y es igual a 0 hasta 6, y los demás radicales están definidos como anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
7. Compuestos según la reivindicación 6, donde R^{3} significa un radical escogido del grupo formado por halógeno y haloalquilo C_{1-4}.
8. Compuestos según la reivindicación 7, donde R^{3} significa R^{3}-CF_{3}.
9. Compuestos según la reivindicación 6 - 8, donde R^{2} significa arilo C_{6-10} o heteroarilo de 5-12 miembros sustituido opcionalmente con uno o más R^{4}.
10. Compuestos según la reivindicación 6 - 9, donde R^{2} significa fenilo, sustituido opcionalmente con uno o más R^{4}.
11. Compuestos - o sus sales farmacéuticamente efectivas - según la reivindicación 1 a 10, para usar como medicamentos.
12. Compuestos - o sus sales farmacéuticamente efectivas - según la reivindicación 1 a 10, para preparar un medicamento de acción antiproliferativa.
13. Preparados farmacéuticos que contienen como principio activo uno o más compuestos de la fórmula general (1) o (1A) según una de las reivindicaciones 1 a 10 o sus sales fisiológicamente compatibles, dado el caso, en combinación con excipientes y/o soportes habituales.
14. Uso de compuestos de la fórmula general (1) o (1A) según la reivindicación 1 a 10, para preparar un medicamento destinado al tratamiento y/o prevención del cáncer, infecciones y enfermedades inflamatorias y autoinmunes.
15. Preparado farmacéutico que contiene un compuesto de la fórmula general (1) o (1A) según la reivindicación 1 a 10 y al menos otra sustancia activa citostática o citotóxica distinta de la fórmula (1) o (1A), opcionalmente en forma de sus tautómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros y de sus mezclas, así como eventualmente de sus sales de adición de ácido farmacológicamente inocuas.
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