ES2323172T3 - Mimeticos de cadena-beta. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto que tiene la siguiente estructura:**(Ver fórmula)** en la que: A es -(CH)-, -N- o -CH2-N-; B es -(CH2)- o -(CH2-CH2)-; D es -(C=O) o -(CH2)-; W es -(C=O)- o nada; X es -NH(C=O)-; Y es oxígeno o azufre; L es hidrógeno, -C(O)NHR3 o R5;...
Description
Miméticos de cadena-\beta.
\global\parskip0.900000\baselineskip
La presente invención se refiere, de modo
general, a miméticos de cadena-\beta según se
define en las reivindicaciones adjuntas.
La selección aleatoria de moléculas para su
posible actividad como agentes terapéuticos se ha estado llevando a
cabo durante muchos años y ha producido una serie de importantes
descubrimientos de fármacos. Aunque los avances en la biología
molecular y en la química electrónica han conducido a un mayor
interés en lo que se ha denominado "diseño racional de
fármacos", estas técnicas no han demostrado ser tan rápidas o
fiable como se predijo inicialmente. Por tanto, en años recientes
se ha renovado el interés y se ha vuelto a la selección aleatoria
de fármacos. Con este propósito se han realizado avances concretos
en nuevas tecnologías basadas en el desarrollo de bancos de química
combinatoria, y la búsqueda en estos bancos para descubrir miembros
biológicamente activos.
En general, los bancos de química combinatoria
son sencillamente una colección de moléculas. Estos bancos varían
según la especie química incluida en el banco, así como en los
procedimientos empleados para generar los miembros del banco y para
identificar los miembros que interaccionan con dianas biológicas de
interés. Aunque este campo aún es joven, los procedimientos para
generar y seleccionar bancos ya son bastante diversos y
sofisticados. Por ejemplo, un informe reciente de diversos bancos
químicos combinatorios ha identificado una serie de dichas técnicas
(Dolle, J. Com. Chem., 2(3):383-433, 2000),
incluyendo el uso de miembros del banco marcados y no marcados
(Janda, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:10779-10785,
1994).
Inicialmente, los bancos de química combinatoria
estaban limitados en general a miembros de origen peptídico o
nucleotídico. Con este propósito, las técnicas de Houghten et
al. ilustran un ejemplo de lo que se denomina un procedimiento
"iterativo definido de modo dual" para montar bancos de
péptidos combinatorios solubles mediante técnicas de síntesis de
escisión (Nature (Londres), 354:84-86, 1991;
Biotechniques, 13:412-421, 1992; Bioorg. Med. Chem.
Lett., 3:405-412, 1993). Mediante esta técnica se
han obtenido bancos de péptidos solubles que contienen decenas de
millones de miembros. Estos bancos han demostrado ser eficaces en la
identificación de péptidos opioides, tales como metionin- y
leucinencefalina (Dooley y Houghten, Life Sci., 52,
1509-1517, 1993), y un banco de péptidos
N-acilados se ha empleado para identificar
acetalinas, que son potentes antagonistas de opioides (Dooley et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:10811-10815,
1993). En fechas más recientes se ha construido un banco de
péptidos opioides con sólo D-aminoácidos y se ha
buscado actividad analgésica contre el receptor mu ("\mu")
de opioides (Dooley et al., Science,
266:2019-2022, 1994).
Aunque los bancos combinatorios que contienen
miembros de origen peptídico y nucleotídico tienen un valor
significativo, aún son necesarios en la técnica bancos que contengan
miembros de origen diferente. Por ejemplo, los bancos de péptidos
tradicionales, en gran medida, simplemente varían la secuencia de
aminoácidos para generar miembros del banco. Aunque se reconoce que
las estructuras secundarias de los péptidos son importantes para la
activi-
dad biológica, estos bancos de péptidos no imparten una estructura secundaria constreñida a los miembros del banco.
dad biológica, estos bancos de péptidos no imparten una estructura secundaria constreñida a los miembros del banco.
Con este propósito, algunos investigadores han
ciclado péptidos con puentes disulfuro para intentar proporcionar
una estructura secundaria más constreñida (Tumelty et al., J.
Chem. Soc., 1067-1968, 1994; Eichler et al.,
Peptide Res., 7:300-306, 1994). Sin embargo, estos
péptidos ciclados en general son aún bastante flexible y son poco
biodisponibles y, por tanto, sólo han conseguido un éxito
limitado.
En fechas más recientes se han desarrollado
compuestos no peptídicos que imitan bastante bien la estructura
secundaria de vueltas inversas que se encuentran en las proteínas o
los péptidos biológicamente activos. Por ejemplo, la patente de
EEUU nº 5.440.013 de Kahn, el documento publicado PCT WO94/03494 de
Kahn, y el documento PCT WO02/092010 de Urban, describen compuestos
no peptídicos conformacionalmente constreñidos que imitan la
estructura tridimensional de las vueltas inversas.
Aunque se han realizado avances significativos
en la síntesis y la identificación de miméticos de péptidos
conformacionalmente constreñidos, siguen siendo necesarias en la
técnica moléculas pequeñas que imiten la estructura secundaria de
los péptidos. También son necesarios en la técnica bancos que
contengan este tipo de miembros, así como técnicas para sintetizar
y seleccionar miembros del banco dirigidos contra dianas de
interés, en particular dianas biológicas, para identificar miembros
del banco bioactivos. Por ejemplo, la patente de EEUU nº 5.929.237
y su continuación en parte patente de EEUU nº 6.013.458 de Kahn,
también describen compuestos conformacionalmente constreñi-
dos que imitan la estructura secundaria de regiones de vueltas inversas de péptidos y proteínas biológicamente activos.
dos que imitan la estructura secundaria de regiones de vueltas inversas de péptidos y proteínas biológicamente activos.
La presente invención también satisface estas
necesidades y ofrece otras ventajas relacionadas, proporcionando
compuestos conformacionalmente constreñidos que imitan la estructura
secundaria de las estructuras de cadena-\beta de
péptidos y proteínas biológicamente activos.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Brevemente, la presente invención se dirige a
compuestos conformacionalmente constreñidos que imitan la estructura
secundaria de las estructuras de cadena-\beta de
péptidos y proteínas biológicamente activos. Esta memoria
descriptiva también describe bancos que contienen dichos compuestos,
así como su síntesis y selección.
Los compuestos de la presente invención tienen
la estructura general que se muestra en la reivindicación 1
adjunta.
Las figuras 1 y 2 ilustran una metodología para
preparar bancos de la presente invención, y compuestos de la
presente invención.
La figura 3 ilustra una metodología sintética
para preparar un banco de la presente invención, y compuestos de la
presente invención, como se describe más a fondo en el ejemplo
9.
La figura 4 ilustra una metodología sintética
para preparar un banco de la presente invención, y compuestos de la
presente invención, como se describe más a fondo en el ejemplo
10.
Se describen compuestos conformacionalmente
constreñidos que imitan la estructura secundaria de la regiones de
cadena-\beta de péptidos y proteínas
biológicamente activos. Estas estructuras miméticas de
cadena-\beta tienen utilidad en una amplia gama
de campos, incluyendo su uso como agentes de diagnóstico y
terapéuticos. También se describen bancos que contienen las
estructuras miméticas de cadena-\beta de esta
invención, así como procedimientos para seleccionar éstos para
identificar miembros biológicamente activos.
En un aspecto, la presente invención se dirige a
estructuras miméticas de cadena-\beta de la
fórmula que aparece en la reivindicación 1 adjunta. Las estructuras
miméticas de cadena-\beta de la presente invención
son útiles como agentes bioactivos incluyendo, pero sin limitarse a
su uso como agentes de diagnóstico, profilácticos y/o terapéuticos.
Los bancos de estructuras miméticas de
cadena-\beta de esta descripción son útiles para
la identificación de dichos agentes bioactivos. En la práctica de la
presente descripción, los bancos pueden contener de decenas a
cientos a miles (o más) de estructuras miméticas de
cadena-\beta individuales (también se denominan
en la presente "miembros").
En un aspecto de la presente descripción, se
describe una estructura mimética de cadena-\beta
que tiene la siguiente estructura
en la que A es -(CH)-, -N- o
-CH_{2}-N-, B es -(C=O)- o
-(CH_{2})_{m}-, W es -(C=O)--Y(C=O)-,-
NH(C=O)- o nada, X es -NH-, -NH(C=O)- o nada, Y es
oxígeno o azufre, Z es oxígeno o hidrógeno (cuando Z es hidrógeno,
entonces C=Z representa CH_{2}), L es hidrógeno, R_{5},
-C(O)NHR_{3} o sus equivalentes, n = 0 ó 1, y m = 1
ó 2; R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} son iguales o
diferentes, y se seleccionan independientemente de hidrógeno, un
resto de cadena lateral de aminoácido o su derivado, el resto de la
molécula, un conector y un soporte sólido, y sus
estereoisómeros.
En un aspecto de la descripción, R_{1},
R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan
independientemente del grupo que consiste en amino(alquilo
C_{2-5}), guanidino(alquilo
C_{2-5}), (alquil
C_{1-4})guanidino(alquilo
C_{2-5}), di(alquil
C_{1-4})guanidino(alquilo
C_{2-5}), amidino(alquilo
C_{2-5}), (alquil
C_{1-4})amidino(alquilo
C_{2-5}), di(alquil
C_{1-4})amidino(alquilo
C_{2-5}), alcoxi C_{1-3},
fenilo, fenilo sustituido (en el que los sustituyentes se
seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), bencilo, bencilo sustituido
(en el que los sustituyentes se seleccionan independientemente de
uno o más de amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo,
(alquil C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alcoxi
C_{1-3}, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo o
hidroxilo), naftilo, naftilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), bisfenilmetilo,
bifenilmetilo sustituido (en el que los sustituyentes se
seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), piridilo, piridilo
sustituido (en el que los sustituyentes se seleccionan
independientemente de uno o más de amino, amidino, guanidino,
hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), piridil(alquilo
C_{1-4}), piridil(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
de la piridina se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), pirimidil(alquilo
C_{1-4}), pirimidil(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
de la pirimidina se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo),
triazin-2-il(alquilo
C_{1-4}),
triazin-2-il(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
de la triazina se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), imidazo(alquilo
C_{1-4}), imidazol(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
del imidazol se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo o hidroxilo), imidazolinil(alquilo
C_{1-4}),
N-amidinopiperazinil-N-(alquilo
C_{0-4}), hidroxi(alquilo
C_{2-5}), (alquil
C_{1-5})amino(alquilo
C_{2-5}), hidroxi(alquilo
C_{2-5}), (alquil
C_{1-5})amino(alquilo
C_{2-5}),
N-amidinopiperidinil(alquilo
C_{1-4}) y
4-aminociclohexil(alquilo
C_{0-2}).
En una realización, R_{1}, R_{2} y R_{3}
son iguales o diferentes y representan el resto del compuesto, y
R_{4} se selecciona de un resto de cadena lateral de aminoácido o
su derivado. En otra realización, L representa
-C(=O)NHR_{3}, y R_{1}, R_{2} y R_{3} son los iguales
o diferentes y representan el resto del compuesto o un resto de
cadena lateral de aminoácido o su derivado, y R_{4} es
hidrógeno.
Tal como se emplea en la presente, un "resto
de cadena lateral de aminoácido" representa cualquier resto de
cadena lateral de aminoácido presente en proteínas naturales
incluyendo, pero sin limitarse a los restos de cadena lateral de
aminoácidos naturales identificados en la tabla 1. Otros restos de
cadena lateral de aminoácidos naturales de esta invención incluyen,
pero sin limitarse a los restos de cadena lateral de
3,5-dibromotirosina,
3,5-diyodotirosina, hidroxilisina,
y-carboxiglutamato, fosfotirosina y fosfoserina.
Además, también pueden utilizarse cadenas laterales de aminoácidos
glicosilados en la práctica de esta invención incluyendo, pero sin
limitarse a treonina, serina y asparagina glicosiladas.
Además de los restos de cadena lateral de
aminoácidos naturales, los restos de cadena lateral de aminoácidos
de la presente invención también incluyen diversos derivados de
éstos. Tal como se emplea en la presente, un "derivado" de un
resto de cadena lateral de aminoácido incluye modificaciones y/o
variaciones de los restos de cadena lateral de aminoácidos
naturales. Por ejemplo, los restos de cadena lateral de los
aminoácidos alanina, valina, leucina, isoleucina y fenilalanina
pueden clasificarse, en general, como restos alquilo, arilo o
arilalquilo inferior. Los derivados de los restos de cadena lateral
de aminoácidos incluyen otros restos alquilo, arilo o arilalquilo
inferior de cadena lineal o ramificada, cíclicos o no cíclicos,
sustituidos o no sustituidos, y saturados o insaturados.
Tal como se emplean en la presente, las
expresiones "el resto del compuesto" y "el resto de la
molécula" significan cualquier resto, agente, compuesto,
soporte, molécula, conector, aminoácido, péptido o proteína unidos
covalentemente a la estructura mimética de
cadena-\beta. La unión se realiza preferiblemente
en las posiciones R_{1} y/o R_{2} y/o R_{3}. Estas
expresiones también incluyen restos de cadena lateral de aminoácidos
y sus derivados.
Tal como se emplea en la presente, los "restos
alquilo inferior" contienen de 1-12 átomos de
carbono, los "restos arilo inferior" contienen de
6-12 átomos de carbono, y los "restos aralquilo
inferior" contienen de 7-12 átomos de carbono.
Por tanto, en una realización, el derivado de cadena lateral de
aminoácido se selecciona de un alquilo C_{1-12},
un arilo C_{6-12}, y un arilalquilo
C_{7-12}, y en una realización más preferida, de
un alquilo C_{1-7}, un arilo
C_{6-10}, y un arilalquilo
C_{7-11}.
Los derivados de cadena lateral de aminoácidos
de esta invención incluyen además derivados sustituidos de los
restos alquilo, arilo y arilalquilo inferior, en los que el
sustituyente se selecciona, pero no se limita a uno o más de los
siguientes restos químicos: -OH, -OR, -COOH, -COOR, -CONH_{2},
-NH_{2}, -NHR, -NRR, -SH, -SR-, -SO_{2}R, -SO_{2}H, -SOR y
halógeno (incluyendo F, Cl, Br y I), en los que cuando aparece R,
éste se selecciona independientemente de restos alquilo, arilo y
aralquilo inferior de cadena lineal o ramificada, cíclicos o no
cíclicos, sustituidos o no sustituidos, y saturados o insaturados.
En un aspecto, el sustituyente tiene menos de 18 átomos de carbono.
Además, los restos alquilo, arilo y arilalquilo inferior cíclicos de
esta invención incluyen naftaleno, así como compuestos
heterocíclicos como tiofeno, pirrol, furano, imidazol, oxazol,
tiazol, pirazol, 3-pirrolina, pirrolidina, piridina,
pirimidina, purina, quinolina, isoquinolina y carbazol. Los
derivados de cadena lateral de aminoácidos incluyen además derivados
de heteroalquilo de la porción alquílica de los restos alquilo y
aralquilo inferior incluyendo, pero sin limitarse a silanos y
fosfonatos de alquilo y aralquilo.
En un aspecto de la invención, los restos
R_{1}, R_{2} y R_{3} se seleccionan de -OH, -OR, -COR, -COOR,
-CONH_{2}, -CONR, -CONRR, -NH_{2}, -NHR, -NRR, -SO_{2}R y
-COSR, en los que cuando aparece R es como se definió
anteriormente.
En otra realización, y además de ser un resto
lateral de aminoácido o su derivado (o el resto del compuesto en el
caso de R_{1}, R_{2} y R_{3}), R_{1}, R_{2} o R_{3}
pueden ser un conector que facilita la unión del compuesto a otro
resto o compuesto. Por ejemplo, los compuestos de esta invención
pueden estar unidos a uno o más compuestos conocidos, como biotina,
para su uso en un ensayo de selección o diagnóstico. Además,
R_{1}, R_{2} o R_{3} pueden ser un conector que une el
compuesto a un soporte sólido (tal como un soporte utilizado en la
síntesis de péptidos en fase sólida) o, como alternativa, pueden ser
el propio soporte. En esta realización, la unión a otro resto o
compuesto, o a un soporte sólido, se realiza preferiblemente en la
posición R_{1}, R_{2} o R_{3}, y más preferiblemente en la
posición R_{3}.
En la realización en que X está ausente, A es N,
B es -(C=O), y L es -C(O)NHR_{3}, los compuestos de
cadena-\beta de esta invención tienen la
siguiente estructura (I'):
en la que R_{1}, R_{2},
R_{3}, R_{4}, W, Y, Z y n son como se definió anteriormente. En
una realización preferida, R_{2} y R_{3} representan el resto
del compuesto, y R_{1} y R_{4} se seleccionan de restos de
cadena lateral de
aminoácidos.
En la realización en que X está ausente, A es N,
B es -(CH_{2})_{m}-, y L es -C(O)NHR_{3},
las estructuras miméticas de cadena-\beta de esta
invención tienen la siguiente estructura (I''):
en la que R_{1}, R_{2},
R_{3}, R_{4}, W, Y, Z, m y n son como se definió anteriormente.
En una realización preferida, R_{2} y R_{3} representan el
resto del compuesto, y R_{1} y R_{4} se seleccionan de restos
de cadena lateral de
aminoácidos.
En una realización más específica en que X es
-NH-, A es -(CH)-, B es -(CH_{2})_{m}-, y L es
-C(O)NHR_{3}, la estructura mimética de
cadena-\beta tiene la siguiente estructura
(I'''):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}, R_{2},
R_{3}, R_{4}, W, Y, Z, m y n son como se definió
anteriormente.
En una realización más específica en que A es
-CH_{2}-N-, B es -(CH_{2})_{m}-, y L es
-C(O)NHR_{3}, los compuestos de esta invención
tienen la siguiente estructura (I''''):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
opcionalmente en la que R_{1},
R_{2}, R_{3}, R_{4}, W, X, Y, Z, m y n son como se definió
anteriormente, W está ausente, Z es oxígeno e Y es
oxígeno.
Las estructuras miméticas de
cadena-\beta de la presente invención pueden
prepararse utilizando las moléculas componentes de partida
apropiadas (en lo sucesivo se denominan "piezas componentes").
Brevemente, en la síntesis de las estructuras miméticas de
cadena-\beta que tienen la estructura (I'), la
primera y la segunda pieza componente se acoplan para formar un
primer-segundo intermedio combinado y, si es
necesario, las piezas componentes tercera y/o cuarta se acoplan
para formar un tercer-cuarto intermedio combinado
(o, si está disponible en el mercado, puede utilizarse un único
tercer intermedio), entonces se acoplan el
primer-segundo intermedio combinado y el
tercer-cuarto intermedio combinado (o tercer
intermedio) para proporcionar un
primer-segundo-tercer-cuarto
intermedio (o un
primer-segundo-tercer intermedio)
que se cicla para producir las estructuras miméticas de
cadena-\beta de esta invención. Como alternativa,
las estructuras miméticas de cadena-\beta de
estructura (I') pueden prepararse mediante el acoplamiento
secuencial de las piezas componentes individuales de forma
discontinua en una disolución o mediante síntesis en fase sólida
como se emplea habitualmente en la síntesis de péptidos en fase
sólida.
Dentro del contexto de la presente descripción,
una "primera pieza componente" tiene la siguiente estructura
1:
en la que R_{2}, A y B son como
se definió anteriormente, y R es un grupo protector adecuado para su
uso en la síntesis de péptidos. Los grupos R adecuados incluyen
grupos alquilo y, en una realización preferida, R es un grupo
metilo. Estas primeras piezas componentes pueden sintetizarse con
facilidad mediante aminación reductora acoplando
CH(OR)_{2}-(CH_{2})_{m}-CHO
con H_{2}N-R_{2}, o mediante desplazamiento
desde
CH(OR)_{2}-(CH_{2})_{m}-Br.
Una "segunda pieza componente" de esta
descripción tiene la siguiente estructura 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que L y R_{4} son como se
definió anteriormente, P es un grupo protector de amino adecuado
para su uso en la síntesis de péptidos, y X representa el grupo
saliente del grupo ácido carboxílico activado. Los grupos
protectores preferidos incluyen t-butil dimetil
sililo (TBDMS), BOC, FMOC y ALOC (aliloxicarbonilo). Cuando L es
-C(O)NHR_{3}, -NHR_{3} puede ser un grupo
protector de carboxilo. Los aminoácidos N-protegidos
están disponibles en el mercado, por ejemplo, los aminoácidos FMOC
están disponibles en una diversidad de fuentes. La conversión de
estos aminoácidos N-protegidos en las segundas
piezas componentes de esta invención puede lograrse con facilidad
mediante la activación del grupo ácido carboxílico del aminoácido
N-protegido. Los grupos ácido carboxílico activados
adecuados incluyen haluros de ácido en los que X es un haluro, como
cloruro o bromuro, anhídridos de ácidos en los que X es un grupo
acilo, como acetilo, ésteres reactivos, como ésteres de
N-hidroxisuccinimida y ésteres de pentafluorofenilo,
y otros intermedios activados, como el intermedio activo formado en
una reacción de acoplamiento utilizando una carbodiimida, como
diciclohexilcarbodiimida
(DCC).
En el caso de que un derivado de azido de un
aminoácido sea la segunda pieza componente, estos compuestos pueden
prepararse a partir del correspondiente aminoácido mediante la
reacción descrita en Zaloom et al. (J. Org. Chem.,
46:5173-5176, 1981).
Una "tercera pieza componente" de esta
descripción tiene la siguiente estructura 3:
R_{1}-NH_{2}
\hskip0.5cmo
\hskip0.5cmR_{3}-NH_{2}
en la que R_{1} y R_{3} son
como se definió anteriormente. Las terceras piezas componentes
adecuadas están disponibles en una diversidad de fuentes, o pueden
prepararse con facilidad mediante técnicas sintéticas orgánicas
convencionales que se utilizan habitualmente para la síntesis de
aminas
primarias.
De forma más específica, las estructuras
miméticas de cadena-\beta de esta descripción de
estrutura (I') se sintetizan haciendo reaccionar una primera pieza
componente con una segunda pieza componente para producir un
primer-segundo intermedio combinado, seguido de
hacer reaccionar el primer-segundo intermedio
combinado con terceras piezas componentes de modo secuencial, o
terceras y cuartas piezas componentes, para proporcionar un
primer-segundo-tercer-cuarto
intermedio combinado, y después ciclar este intermedio para producir
la estructura mimética de cadena-\beta.
La síntesis general de una estructura mimética
de cadena-\beta que tenga la estructura I' puede
llevarse a cabo mediante la siguiente técnica. Una primera pieza
componente 1 se acopla con una segunda pieza componente 2
utilizando un reactivo de acoplamiento, como fosgeno, para producir,
después de la N-desprotección, un
primer-segundo intermedio combinado
1-2 como se ilustra a continuación:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que A, B, L, R, R_{2},
R_{4}, P, X y n son como se definió anteriormente. X_{2}C(=S) es
un ejemplo de un agente de acoplamiento y pueden emplearse otros
tipos de agentes de acoplamiento. La síntesis de piezas componentes
representativas de esta invención se describe en los ejemplos. Los
compuestos miméticos de cadena-\beta con las
estructuras (I'') a (I''') pueden prepararse mediante técnicas
análogas a la síntesis de componentes modulares descrita
anteriormente, pero con las modificaciones apropiadas para las
correspondientes
piezas.
En otro aspecto de esta descripción, se
describen bancos que contienen las estructuras miméticas de
cadena-\beta de la presente invención. Una vez
montados, los bancos de la presente invención pueden seleccionarse
para identificar miembros individuales que tengan bioactividad.
Esta selección de los bancos para descubrir miembros bioactivos
puede implicar, por ejemplo, evaluar la actividad de unión de los
miembros del banco o evaluar el efecto que tienen los miembros del
banco sobre un ensayo funcional. La selección normalmente se lleva a
cabo poniendo en contacto los miembros del banco (o un subconjunto
de miembros del banco) con una diana de interés, como por ejemplo
un anticuerpo, una enzima, un receptor o una línea celular. Los
miembros del banco que son capaces de interaccionar con la diana de
interés se denominan en la presente "miembros del banco
bioactivos" o "miméticos bioactivos". Por ejemplo, un
mimético bioactivo puede ser un miembro del banco que es capaz de
unirse a un anticuerpo o a un receptor, que es capaz de inhibir una
enzima, o que es capaz de provocar o de antagonizar una respuesta
funcional asociada, por ejemplo, con una línea celular. En otras
palabras, la selección de bancos de la presente invención determina
cuáles son los miembros del banco que son capaces de interaccionar
con una o más dianas biológicas específicas de interés. Cuando se
produce esta interacción, el mimético (o miméticos) bioactivo que
interacciona puede identificarse a partir de los miembros del banco.
La identificación de un único (o un número limitado) mimético (o
miméticos) bioactivo a partir del banco produce estructuras
miméticas de cadena-\beta que en sí mismas son
biológicamente activas y, por tanto, son útiles como agentes de
diagnóstico, profilácticos o terapéuticos, y que después pueden
utilizarse para avanzar significativamente en la identificación de
compuestos líderes en estos
campos.
campos.
La síntesis de los miméticos de péptidos del
banco de la presente descripción puede realizarse utilizando
técnicas de síntesis peptídica conocidas, en combinación con la
primera, segunda, tercera y opcionalmente cuarta piezas componentes
de esta invención. De manera más específica, cualquier secuencia de
aminoácidos puede añadirse al N-terminal y/o al
C-terminal del compuesto conformacionalmente
constreñido. Para este fin, los miméticos pueden sintetizarse sobre
un soporte sólido (tal como una resina PAM) mediante técnicas
conocidas (véase, John M. Stewart y Janis D. Young, Solid Phase
Peptide Synthesis, 1984, Pierce Chemical Comp., Rockford, III) o
sobre una resina unida mediante sililo por medio de una unión con
alcohol (véase, Randolph et al., J. Am. Chem. Soc.,
117:5712-5714, 1995).
Además puede utilizarse una combinación de
técnicas de síntesis en disolución y en fase sólida para sintetizar
los miméticos de péptidos de esta invención. Por ejemplo, puede
utilizarse un soporte sólido para sintetizar la secuencia del
péptido lineal hasta el punto en que se añade la
cadena-\beta conformacionalmente constreñida a la
secuencia. Una estructura mimética de cadena-\beta
conformacionalmente constreñida adecuada que se ha sintetizado
previamente mediante técnicas de síntesis en disolución puede
añadirse entonces como el siguiente "aminoácido" a la síntesis
en fase sólida (es decir, el mimético de
cadena-\beta conformacionalmente constreñido, que
tiene un N-terminal y un C-terminal,
puede utilizarse como el siguiente aminoácido que se va a añadir al
péptido lineal). Tras la incorporación de la estructura mimética de
cadena-\beta conformacionalmente constreñida a la
secuencia pueden añadirse otros aminoácidos para completar el
péptido unido al soporte sólido. Como alternativa, las secuencias
peptídicas lineales protegidas en el N-terminal y
C-terminal pueden sintetizarse sobre un soporte
sólido, retirarse del soporte, y después acoplarse a las estructuras
miméticas de cadena-\beta conformacionalmente
constreñidas en disolución utilizando técnicas de acoplamiento en
disolución conocidas.
En otro aspecto de la invención se describen
procedimientos para construir los bancos. Las técnicas de la
química combinatoria tradicionales (véase, por ejemplo, Gallop et
al., J. Med. Chem., 37:1233-1251, 1994)
permiten preparar con rapidez un vasto número de compuestos mediante
la combinación secuencial de reactivos sobre un andamio molecular
básico. Las técnicas combinatorias se han utilizado para construir
bancos de péptidos derivados de los aminoácidos naturales. Por
ejemplo, tomando 20 mezclas de 20 aminoácidos diferentes protegidos
de forma adecuada, y acoplando cada una con uno de los 20
aminoácidos se crea un banco de 400 (es decir, 20^{2})
dipéptidos. Si se repite el procedimiento siete veces se prepara un
banco de péptidos formado por aproximadamente 26 billones (es
decir, 20^{8}) de octapéptidos.
En otro aspecto de la descripción se describen
procedimientos para seleccionar los bancos para buscar bioactividad
y para aislar los miembros del banco bioactivos. Los bancos de la
presente invención pueden ensayarse para detectar bioactivida
mediante una diversidad de técnicas y procedimientos. En general, el
ensayo de selección puede realizarse (1) poniendo en contacto un
banco con una diana biológica de interés, tal como un receptor, y
dejar que se produzca la unión entre los miméticos del banco y la
diana, y (2) detectar el acontecimiento de unión mediante un ensayo
apropiado, tal como mediante el ensayo calorimétrico descrito por
Lam et al. (Nature, 354:82-84, 1991) o
Griminski et al. (Biotechnology,
12:1008-1011, 1994) (incorporándose ambos como
referencia en la presente). En una realización preferida, los
miembros del banco están en disolución y la diana se inmoviliza
sobre un soporte sólido. Como alternativa, el banco puede
inmovilizarse sobre una fase sólida y puede sondarse poniéndolo en
contacto con la diana en disolución.
La síntesis de los miméticos de péptidos de un
banco de la presente descripción puede realizarse utilizando el
esquema general para preparar un banco de miméticos de
cadena-\beta indicado en la figura 1. La síntesis
de los miméticos de péptidos seleccionados a partir de bancos de
moldes bicíclicos de la presente invención se realizó utilizando un
bloque reactor FlexChem que tiene una placa de 96 pocillos. En el
anterior esquema, "Pol" representa una resina de cloruro de
2-clorotritilo (Novabiochem) y a continuación se
proporciona un procedimiento detallado.
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Etapa
1
La resina de cloruro de
2-clorotritilo (1 mmol/g) y una disolución de
Fmoc-R_{1}-aminoácido (1,5
equiv.) y DIEA (2 equiv.) en DCE se colocó en un bloque Robinson de
96 pocillos (Flexchem). La mezcla de reacción se agitó durante 12
horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y
después DCM.
Etapa
2
A la resina hinchada por el DCM antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó
con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido
4-R_{2}-amino-2-Fmoc-aminobutírico
(1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la
resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a
temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH y después
DCM.
Etapa
3
A la resina hinchada por el DCM antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó
con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido
2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico
(1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la
resina. La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a
temperatura ambiente y después la resina se lavó con DMF, MeOH y
después
DCM.
DCM.
Etapa
4
A la resina hinchada por el DCM antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó
con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de un
R_{3}-ácido disponible en el mercado (1,5 equiv.), DIC (1,5
equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y
después la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.
Etapa
5
La resina se trató con ácido fórmico (1,2 ml
cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después la
resina se retiró mediante filtración, el filtrado se condensó a
presión reducida utilizando SpeedVac (Servant) para producir el
producto como un aceite. Estos productos se diluyeron con agua al
50%/acetonitrilo y después se liofilizaron después de
congelarse.
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La tabla 2 muestra un banco de miméticos de
cadena-\beta que puede prepararse según la
presente descripción; en el ejemplo 9 se ofrece una preparación
representativa. Los compuestos de la tabla 2 ilustran un aspecto de
la invención, a saber, los compuestos en que A es -(CH)-, B es
-(CH_{2})_{m}, en los que m = 1, W es -(C=O)-, X es
-NH(CH=O)-, Y es oxígeno, Z es hidrógeno, de manera que C=Z
representa CH_{2}, L es -C(=O)NHR_{3}, n = 0, R_{4} es
hidrógeno, y R_{1}, R_{2} y R_{3} son iguales o diferentes y
se seleccionan independientemente de un resto de cadena lateral de
aminoácido o su derivado, el resto de la molécula, un conector y un
soporte sólido, o sus estereoisómeros. En diversas realizaciones de
este aspecto de la invención, R_{1}, R_{2} y R_{3} se
seleccionan independientemente de restos de peso molecular
relativamente bajo, es decir, grupos orgánicos que tienen un peso
molecular entre 15 (metilo) y 1.000 g/mol; y/o al menos uno de
R_{1}, R_{2} y R_{3} representa una cadena lateral de
aminoácido o su derivado. Por ejemplo, en los compuestos de la
tabla 2, R^{3} representa derivados del ácido aspártico. En un
aspecto, los compuestos de la presente invención tienen un peso
molecular en el intervalo de aproximadamente 440 a 750 g/mol, y los
compuestos de la tabla 2 proporcionan numerosas ilustraciones de
estos compuestos.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis de los miméticos de péptidos de un
banco de la presente descripción puede realizarse utilizando el
esquema general para preparar un banco de miméticos de
cadena-\beta indicado en la figura 2. La síntesis
de los miméticos de péptidos seleccionados a partir de bancos de
moldes bicíclicos de la presente invención se realizó utilizando un
bloque reactor FlexChem que tiene una placa de 96 pocillos. En el
anterior esquema, "Pol" representa una resina de cloruro de
2-clorotritilo (Novabiochem) y a continuación se
proporciona un procedimiento detallado.
Etapa
1
La resina de cloruro de
2-clorotritilo (1 mmol/g) y una disolución de
Fmoc-R_{1}-beta-aminoácido
(1,5 equiv.) y DIEA (2 equiv.) en DCE se colocó en un bloque
Robinson de 96 pocillos (Flexchem). La mezcla de reacción se agitó
durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF,
MeOH y después DCM.
Etapa
2
A la resina hinchada por el DCM antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto
se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de
ácido
4-R_{2}-amino-2-Fmoc-aminobutírico
(1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la
resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a
temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH y después
DCM.
Etapa
3
A la resina hinchada por el DCM antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó
con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de ácido
2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico
(1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la
resina. Después la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a
temperatura ambiente y la resina se lavó con DMF, MeOH y después
DCM.
Etapa
4
A la resina hinchada por el DCM antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto
se lavó con DMF, MeOH y después DCM. Se añadió una disolución de un
R_{3}-ácido disponible en el mercado (1,5 equiv.), DIC (1,5
equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP a la resina. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y
después la resina se lavó con DMF, MeOH y después DCM.
Etapa
5
La resina se trató con ácido fórmico (1,2 ml
cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después la
resina se retiró mediante filtración, el filtrado se condensó a
presión reducida utilizando SpeedVac (Servant) para producir el
producto como un aceite. Estos productos se diluyeron con agua al
50%/acetonitrilo y después se liofilizaron después de
congelarse.
\vskip1.000000\baselineskip
La tabla 3 muestra un banco de miméticos de
cadena-\beta que puede prepararse según la
presente invención; en el ejemplo 10 se ofrece una preparación
representativa. Los compuestos de la tabla 3 ilustran un aspecto de
la invención, a saber, los compuestos en que A es -(CH)-, B es
-(CH_{2})_{m}, en los que m = 1, W es nada, es decir, es
un enlace directo entre R^{b} y N del anillo heterocíclico, X es
-NH(CH=O)-, Y es oxígeno, Z es hidrógeno, de manera que C=Z
representa CH_{2}, L es -C(=O)NHR_{3}, n = 0, R_{4} es
hidrógeno, y R_{1}, R_{2} y R_{3} son iguales o diferentes y
se seleccionan independientemente de un resto de cadena lateral de
aminoácido o su derivado, el resto de la molécula, un conector y un
soporte sólido, o sus estereoisómeros. En diversas realizaciones de
este aspecto de la invención, R_{1}, R_{2} y R_{3} se
seleccionan independientemente de restos de peso molecular
relativamente bajo, es decir, grupos orgánicos que tienen un peso
molecular entre 15 (metilo) y 1.000 g/mol; y/o al menos uno de
R_{1}, R_{2} y R_{3} representa una cadena lateral de
aminoácido o su derivado. Por ejemplo, en los compuestos de la tabla
3, R^{3} representa derivados del ácido glutárico. En un aspecto,
los compuestos de la presente invención tienen un peso molecular en
el intervalo de aproximadamente 450 a 800 g/mol, y los compuestos
de la tabla 3 proporcionan numerosas ilustraciones de estos
compuestos.
Las estructuras miméticas de
cadena-\beta de la presente invención pueden
utilizarse como agentes bioactivos, tales como agentes de
diagnóstico, profilácticos y terapéuticos. Preferiblemente, los
compuestos se formulan en una forma farmacéuticamente aceptable y
después se administran a un paciente que necesite un tratamiento
con las estructuras miméticas de cadena-\beta de
la presente invención.
Por tanto, la presente descripción proporciona
una composición farmacéutica que contiene un compuesto de las
estructuras (I'') a (I'''). Para la preparación de la composición
farmacéutica que contiene los presentes compuestos, los expertos en
la técnica pueden utilizar conocimientos de dominio público y
técnicas que son conocidas en la técnica pertinente. Se emplean
variedades generalmente conocidas de vehículos y otros aditivos
para la preparación de la composición de la presente invención. Las
composiciones farmacéuticas de esta descripción pueden
administrarse de la manera convencional para la afección de
enfermedad que se desee tratar, por ejemplo mediante administración
oral, rectal o parenteral.
Para estos fines, los compuestos de la presente
invención pueden formularse mediante medios conocidos en la técnica
para tomar la forma, por ejemplo, de comprimidos, cápsulas,
disoluciones o suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones
(lípidos), polvos dispersable, supositorios, ungüentos, cremas,
gotas y disoluciones o suspensiones inyectables estériles acuosas u
oleosas.
Una composición farmacéutica adecuada de la
presente descripción es aquella que sea adecuada para la
administración oral en una forma de dosificación unitaria como, por
ejemplo, un comprimido o una cápsula que contenga de
aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1 g del compuesto de esta
invención.
En otro aspecto, una composición farmacéutica es
aquella que sea adecuada para la administración intravenosa,
subcutánea o intramuscular. Un paciente puede recibir, por ejemplo,
una dosis intravenosa, subcutánea o intramuscular de
aproximadamente 1 \mug/kg a aproximadamente 1 g/kg del compuesto
de la presente invención. La dosis intravenosa, subcutánea e
intramuscular puede administrarse mediante una inyección en
embolada. Como alternativa, la dosis intravenosa puede
administrarse mediante una infusión continua a lo largo de un
periodo de tiempo.
Como alternativa, un paciente recibirá una dosis
oral diaria que es aproximadamente equivalente a la dosis
parenteral diaria, administrándose la composición de 1 a
aproximadamente 4 veces diarias.
\newpage
La siguiente tabla ilustra formas de
dosificación farmacéutica representativas que contienen el compuesto
o su sal farmacéuticamente aceptable para un uso terapéutico o
profiláctico en seres humanos:
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\vskip1.000000\baselineskip
La composición farmacéutica que contiene el
compuesto de fórmula general (I) puede utilizarse para una
diversidad de efectos biológicamente deseables, incluyendo inhibir
una proteasa en un animal de sangre caliente, modular un péptido
relacionado con el factor de transcripción de señalización celular
en un animal de sangre caliente, e inhibir una quinasa en un animal
de sangre caliente. Estos efectos pueden lograrse mediante un
procedimiento que comprende administrar al animal que lo necesite
una cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I).
Además, como se analizará con más detalle a
continuación, las estructuras miméticas de
cadena-\beta de la presente invención también
pueden ser eficaces para inhibir la presentación de
MHC-I y/o MHC-II de péptidos a los
receptores de células T en un animal de sangre caliente; para
inhibir la unión de péptidos a dominios SH2 en un animal de sangre
caliente; para inhibir la unión de péptidos a dominios SH3 en un
animal de sangre caliente; para inhibir la unión de péptidos a
dominios PTB en un animal de sangre caliente; para modular el
receptor acoplado a proteína G (GPCR) y el canal iónico en un animal
de sangre caliente; y para modular las citoquinas en un animal de
sangre caliente.
En un aspecto, la presente descripción
proporciona un procedimiento para inhibir una quinasa en un animal
de sangre caliente. El procedimiento comprende administrar al animal
una cantidad de un compuesto de la presente invención, siendo la
cantidad eficaz para inhibir una quinasa. Las quinasas (también
denominadas proteína quinasas) son una clase de enzimas que
catalizan una reacción mediante la cual una biomolécula (de forma
típica otra enzima) es fosforilada. Se cree que hasta 1000 quinasas
son codificadas por el genoma de mamíferos (Hunter, Cell,
50:823-829, 1987). El gran número de quinasas
permite la rápida amplificación de la señal y la existencia de
múltiples puntos de regulación.
La fosforilación es una modificación covalente
muy habitual que se encuentra en los procesos de transducción de
señales y provoca una alteración en la actividad de aquellas
proteínas que son fosforiladas. Por tanto, las quinasas son un
componente crítico de las vías de señalización. Las quinasas se
organizan, de forma típica, en varias regiones funcionales
modulares o "dominios" (Cohen, G.B., et al., Cell,
80-237-248, 1995). Un dominio,
conocido como "SH3", es una región de 55-70
aminoácidos que se une a péptidos ricos en prolina, en particular
de cadena extendida. Otro dominio, conocido como "SH2", es una
región de unión a fosfotirosina con una longitud de aproximadamente
100 aminoácidos. Se cree que estos dos dominios están implicados en
el reconocimiento y la unión a los sustratos de proteína. Éstos, al
igual que otros dominios que incluye sitios de miristoilación y
palmotoilación, son responsables del ensamblaje de complejos
multiproteínicos que guían al dominio catalítico hacia las dianas
correctas (Mayer et al., Mol. Cell. Biol.,
12:609-618, 1992; y Mayer y Baltimore, Mol. Cell.
Biol., 14:2883-2894, 1994). Aunque se sabe que los
dominios SH2 y SH3 están presentes en algunas quinasas, estos
dominios también están presentes en otras proteínas. Los compuestos
de la presente invención pueden utilizarse para inhibir la unión
mediada por SH2 o SH3 en las quinasas o en otras proteínas.
El cuerpo utiliza las quinasas en un gran número
de mecanismos de transducción de señales intracelulares diferentes
pero a menudo interrelacionados. Por ejemplo, los factores del
crecimientos, los factores de transcripción, las hormonas, las
proteínas reguladoras del ciclo celular y muchas otras clases de
reguladores celulares utilizan las tirosina quinasas en sus
cascadas de señalización (véase, por ejemplo, Bolen et al.,
FASEB J., 6:3403-3409, 1992; y Ullrich y
Schlessinger, Cell, 61:203-212, 1990). Las
serina/treonina quinasas forman la mayoría del resto de la familia
de las quinasas.
Una estrategia importante para determinar el
papel y comprender la función de enzimas, tanto in vitro
como in vivo, es el uso de inhibidores específicos de
enzimas. Si se descubre que uno o más compuestos inhiben la enzima,
el inhibidor puede utilizarse para modular la actividad de la enzima
y pueden observarse los efectos de esta disminución. Estas
estrategias han contribuido decisivamente en el desciframiento de
muchas de las vías del metabolismo intermedio y también han sido
importantes en la comprensión de la cinética enzimática y para
determinar los mecanismos catalíticos. La presente invención
proporciona estos compuestos.
La regulación de muchas respuestas inmunológicas
es mediada a través de receptores que transmiten señales a través
de tirosina quinasas que contienen dominios SH2. La activación de
células T a través del receptor de células T específico de
antígenos (TCR) inicia una cascada de transducción de señales que
conduce a la secreción de linfoquinas y a la proliferación celular.
Una de las respuestas bioquímicas más tempranas tras la activación
del TCR es un aumento en la actividad tirosina quinasa. En
particular, la activación y la proliferación de células T son
controladas mediante la activación, mediada por los receptores de
células T, de las tirosina quinasas p56^{lck} y p59^{fyn}, así
como ZAP-70 y Syk (Weiss y Litman, Cell,
76:263-274, 1994), que contienen dominios SH2.
Otras pruebas indican que varias quinasas de la familia src (lck,
blk, fyn) participan en las vías de transducción de señales que
surgen de los receptores de antígenos de células B y, por tanto,
puede servir para integrar los estímulos recibidos desde varias
estructuras de receptores diferentes. Por tanto, los inhibidores
que bloquean las interacciones de estos dominios SH2 de quinasas con
sus receptores cognados pueden servir como agentes inmunosupresores
con utilidad en enfermedades autoinmunológicas, en rechazos de
transplantes o como agentes antiinflamatorios, así como agentes
anticáncer en casos de leucemias linfocíticas.
Además se conocen PTPasa no transmembrana que
contienen dominios SH2, y la nomenclatura se refiere a ellas como
SH-PTP1 y SH-PTP2 (Neel, Cell
Biology, 4:419-432, 1993). La
SH-PTP1 es idéntica a PTP1C, HCP o SHP, y la
SH-PTP2 también se conoce como PTP1D o PTP2C. La
SH-PTP1 se expresa a altos niveles en células
hematopoyéticas de todos los linajes y en todas las etapas de
diferenciación. Puesto que el gen SH-PTP1 se
identificó como el responsable del fenotipo apolillado (me) de
ratón, esto proporciona una base para predecir los efectos de
inhibidores que bloquearían su interacción con sus sustratos
celulares. Por tanto, se espera que la inhibición de la función
SH-PTP1 produzca una respuesta reducidas de células
T a la estimulación mitogénica, una disminución de la función de
células NK, y una merma en los precursores de células B con
potenciales aplicaciones terapéuticas, como se describió
anteriormente.
La capacidad de un compuesto de la presente
invención para unirse al dominio SH2 de STAT6, o para unirse al
dominio SH2 de la proteína tirosina fosfatasa
SH-PTP1 puede demostrarse mediante el procedimiento
descrito por Payne et al., P.N.A.S. USA,
90:4902-4906, 1993). Pueden seleccionarse bancos de
miméticos de unión a SH2 mediante el procedimiento de Songyang
et al., Cell, 72:767-7778, 1993. Véase
también el procedimiento de Songyang et al., Current
Biology, 4:973-982, 1994, para ensayar la capacidad
de un compuesto para actuar como sustrato o inhibidor de proteína
quinasas.
Por consiguiente, en un aspecto, la presente
descripción proporciona un procedimiento para inhibir una fosfatasa
en un animal de sangre caliente, comprendiendo dicho procedimiento
administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente
invención, siendo la cantidad eficaz para inhibir la fosfatasa.
En la diabetes de tipo 2 (no
insulino-dependiente), las tirosina fosfatasas
(PTP-1b) compensan el efecto de las quinasas de
receptores de insulina activadas y puede representar importantes
dianas de fármacos. Los experimentos in vitro muestran que
la inyección de PTPasa bloquea la fosforilación, estimulada por
insulina, de restos tirosilo sobre proteínas endógenas. Por tanto,
los compuestos de la invención pueden utilizarse para modular la
acción de la insulina en la diabetes.
En otro aspecto, la presente descripción
proporciona un procedimiento para inhibir la unión de un resto
fosfotirosina en una primera proteína a un dominio SH2 de una
segunda proteína. El procedimiento comprende poner en contacto una
cantidad de un compuesto de la presente invención con una
composición que comprende la primera y la segunda proteína. La
cantidad es eficaz para mitigar la unión entre la primera y la
segunda proteína que se produce a través del dominio SH2 de la
segunda proteína y el resto fosfotirosina de la primera
proteína.
En otro aspecto, la presente descripción
proporciona un procedimiento para inhibir una proteasa en un animal
de sangre caliente. El procedimiento comprende administrar al animal
una cantidad de un compuesto de la presente invención como se
describe en la presente. La cantidad es eficaz para inhibir una
proteasa en el animal. En diversas realizaciones, la proteasa es
una serina proteasa; la proteasa es una serina proteasa seleccionada
de trombina, factor X, factor IX, factor VIII, factor XI,
uroquinasa, proteasa de HCV, quimasa triptasa y calicreína; la
proteasa es trombina; la proteasa es el factor VII; y la proteasa se
selecciona de una aspártico-, cisteína- y metaloproteasa.
Con respecto a la inhibición de proteasas, la
catepsina B es una cisteína proteasa lisosómica que normalmente
está implicada en el procesamiento de proenzimas y el recambio de
proteínas. Unos niveles elevados de actividad se han implicado en
la metástasis tumoral (Sloane, B.F. et al., Cancer Metastasis
Rev., 9:333-352, 1990), la artritis reumatoide
(Werb, Z., Textbook of Rheumatology, Keller, W. N.; Harris, W. D.;
Ruddy, S.; Sledge, C. S., eds., 1989, W. B. Saunder Co.,
Filadelfia, Pa., pp. 300-321), y la distrofia
muscular (Katunuma y Kominami, Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol.,
108:1-20, 1987).
Las calpaínas son proteasas activadas por
Ca^{++} citosólicas o unidas a a membranas que son responsables
de la degradación de proteínas citoesqueléticas en respuesta al
cambio en los niveles de calcio dentro de la célula. Contribuyen a
la degradación de tejidos en la artritis y la distrofia muscular
(véase, Wang y Yuen, Trends Pharmacol. Sci.,
15:412-419, 1994).
La enzima conversora de interleuquina (ICE)
rompe la
pro-IL-1-beta para
producir IL-1-beta, un mediador
clave en la inflamación y, por tanto, los inhibidores de ICE pueden
resultar útiles en el tratamiento de la artritis (véase, por
ejemplo, Miller B. E. et al., J. Immunol.,
154:1331-1338,1995). La ICE o las proteasas de tipo
ICE también pueden actuar en la apoptosis (la muerte celular
programada) y, por tanto, desempeñar un papel en el cáncer, SIDA,
enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades en las que está
implicada una apoptosis desregulada (véase, Barr y Tomei,
Biotechnol., 12:487-493, 1994).
La proteasa de VIH desempeña un papel clave en
el ciclo vital del VIH, el virus del SIDA. En las etapas finales de
la maduración vírica rompe los precursores poliproteínicos para
producir enzimas funcionales y proteínas estructurales del núcleo
del virión. Los inhibidores de la proteasa del VIH han sido
identificados con rapidez como excelentes dianas terapéuticas para
el SIDA (véase, Huff, J. R., J. Med. Chem.,
34:2305-2314) y ya han demostrado ser útiles en su
tratamiento, según prueba la reciente aprobación por la FDA del
ritonavir, el crixiván y el saquinavir.
El virus de la hepatitis C (HCV) es la principal
causa de hepatitis no-A y no-B en la
actualidad en el mundo. Se estima que infecta hasta 50 millones de
personas. En la actualidad no existe un tratamiento satisfactorio
disponible para detener el avance de esta enfermedad debilitante.
Durante el ciclo vital del virus se produce una poliproteína de
aproximadamente 3000 aminoácidos y las proteasas víricas y del
hospedante la rompen proteolíticamente para producir los productos
génicos víricos maduros. Una serina proteasa localizada dentro de la
proteína NS3 de HSV produce una ruptura en cuatro sitios
específicos para producir proteínas no estructurales consideradas
esenciales para la replicación vírica. Por tanto, los inhibidores de
la proteasa de HCV son dianas atractivas para el diseño de fármacos
y pueden presentar un gran beneficio terapéutico (Neddermann et
al., Biol. Chem., 378:469-476, 1997).
La enzima conversora de angiotensina (ACE) es
parte del sistema de renina-angiotensina que
desempeña un papel central en la regulación de la presión
sanguínea. La ACE rompe la angiotensina I para producir el
octapéptido angiotensina II, un potente agente presor debido a su
actividad vasoconstrictora. La inhibición de ACE ha demostrado ser
terapéuticamente útil en el tratamiento de la hipertensión
(Williams, G. H., N. Engl. J. Med.,
319:1517-1525,
1989).
1989).
Las colagenasas rompen el colágeno, el principal
constituyente de la matriz extracelular (por ejemplo, tejido
conectivo, piel, vasos sanguíneos). Una elevada actividad colagenasa
contribuye a la artritis (Krane et al., Ann. N.Y. Acad.
Sci., 580:340-354, 1990), la metástasis tumoral
(Flug y Kopf-Maier, Acta Anat., Basilea,
152:69-84, 1995), y otras enfermedades que implican
la degradación del tejido conectivo.
Las serina proteasas de tipo tripsina forman una
gran familia de enzimas, altamente selectiva, implicada en la
hemostasis/coagulación (Davie y Fujikawa, Ann. Rev.,
799-829, 1975) y la activación del complemento
(Muller-Eberhard, Ann. Rev. Biochem.,
44:697-724, 1975). La secuenciación de estas
proteasas ha mostrado la presencia de un núcleo de tipo tripsina
homólogo con inserciones de aminoácidos que modifican la
especificidad y que son responsables, en general, de las
interacciones con otros componentes macromoleculares (Magnusson
et al., Miami Winter Symposia, 11:203-239,
1976).
La trombina, una serina proteasa de tipo
tripsina, actúa para proporcionar una proteolisis limitada, en la
generación de fibrina a partir de fibrinógeno y en la actividad del
receptor de plaquetas y, por tanto, desempeña un papel crítico en
la trombosis y la hemostasis (Mann, K. G., Trends Biochem. Sci.,
12:229-233, 1987). La trombina muestra una
especificidad notable para la eliminación de los fibrinopéptidos A y
B del fibrinógeno mediante la ruptura selectiva de sólo dos enlaces
Arg-Gly de las 181 secuencias Arg- o
Lys-Xaa en el fibrinógeno (Blomback, Blood Clotting
Enzymology, Seeger, W. H. (ed.), Academic Press, Nueva York, 1967,
pp. 143-215).
Muchos estados de enfermedad importantes están
relacionados con una hemostasis anómala, incluyendo los síndromes
coronarios agudos. La aspirina y la heparina se utilizan mucho en el
tratamiento de pacientes con síndromes coronarios agudos. Sin
embargo, estos agents tienen varias limitaciones intrínsecas. Por
ejemplo, la trombosis que complica la ruptura de placas
ateroscleróricas tiende a ser un proceso dependiente de plaquetas,
mediado por trombina, que es relativamente resistente a la
inhibición por la aspirina y la heparina (Fuster et al., N.
Engl. J. Med., 326:242-50, 1992).
Los inhibidores de la trombina evitan la
formación de trombos en sitios de daños vasculares in vivo.
Además, puesto que la trombina también es un potente factor del
crecimiento que inicia la proliferación de células del músculo liso
en sitios de daños mecánicos en la arteria coronaria, los
inhibidores bloquearán esta respuesta proliferativa de células del
músculo liso y reducirán la reestenosis. Los inhibidores de trombina
también reducirán la respuesta inflamatoria en células de la pared
vascular (Harker et al., Am. J. Cardiol.,
75:122-16B, 1995).
Además, al menos dos factores de transcripción
bien definidos, el factor nuclear (NF)-\kappaB y
la proteína activadora (AP)-1, son regulados por el
estado de reducción-oxidación (redox) intracelular.
La regulación de la expresión génica por el estado redox presenta
prometedoras implicaciones terapéuticas. Por ejemplo, los sitios de
unión de los factores de transcripción regulados por redox
NF-\kappaB y AP-1 se localizan en
la región promotora de una gran diversidad de genes que están
directamente implicados en la patogénesis de enfermedades, como el
SIDA, el cáncer, la aterosclerosis y las complicaciones diabéticas
(Sen y Packer, FASEB Journal, 10:709-720, 1996). De
forma más específica, la unión de factores de transcripción, como
NF-\kappaB y AP-1, a sitios
consenso sobre el ADN está controlada por la homeostasis
oxidante-antioxidante, en especial por el
equilibrio tiol-disulfuro.
En el caso del NF-\kappaB, un
tiol fisiológicamente importante que desempeña un papel crucial en
la regulación de la función NF-\kappaB es la
tiorredoxina reducida o una proteína de tipo tiorredoxina reducida.
La tiorredoxina es una importante proteína oxidorreductasa con
funciones antioxidantes. Se ha descubierto que al tiorredoxina
sobrerregula la unión del NF-\kappaB activado al
ADN y, por tanto, aumenta la expresión génica (Schenk et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 91:1672-1676, 1994). La
tiorredoxina se ha implicado en la reducción del
NF-\kappaB citosólico activado (concretamente la
reducción de cys-62), que puede, por tanto,
contribuir a su translocación nuclear y unión al ADN (Hayashi et
at., J. Biol. Chem., 268:11380-11388, 1993).
También se ha descubierto que la actividad de
unión al ADN de Fos y Jun en el complejo AP-1 es
regulada por el estado redox (Abate et al., Science,
249:1157-1162, 1990). Cada proteína contiene una
única cisteína conservada (flanqueada por lisina y arginina) en su
dominio de unión al ADN. Este tiol no parece formar parte de un
enlace disulfuro y puede existir como un ácido sulfénico o
sulfínico en su forma oxidada. La Ref-1, una
proteína nuclear bifuncional que también posee actividad
endonucleasa de reparación del ADN, estimula la unión del
AP-1 al ADN mediante la reducción de esta cisteína
reguladora. Un mutante Fos, en que la cisteína crítica fue
reemplazada por serina, produjo un aumento en tres veces de la
actividad de unión del AP-1 al ADN y ya no se
sometió al control redox (Okuno et al., Oncogene,
8:695-701, 1993). Por tanto, puesto que al menos
cuatro miembros de la familia fos, 3 de la familia jun, y al menos
4 de la familia ATF/CREB de factores de transcripciçon contienen
esta cisteína conservada, el control redox de los factores de
transcripción parece un mecanismo muy extendido.
Como se mencionó anteriormente, la regulación de
factores de transcripción, como NF-\kappaB y
AP-1, tiene importantes implicaciones terapéuticas.
Por ejemplo, el AP-1 es un importante mediador de la
producción de tumores (Yoshioka et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 92:4972-4976, 1995). Por tanto, los
compuestos que repriman la actividad transcripcional de
AP-1 tienen utilidad en el tratamiento del cáncer.
Además, debido a su papel directo en la regulación de las
respuestas a citoquinas inflamatorias y a endotoxinas, la activación
del NF-\kappaB desempeña un papel importante en
el desarrollo de enfermedades crónicas, como la artritis reumatoide
y de afecciones agudas, como el choque séptico. También se cree que
enfermedades autoinmunológicas, como el lupus eritematoso sistémico
(SLE) y la enfermedad de Alzheimer, están implicadas en la
activación del NF-\kappaB. De forma similar, el
NF-\kappaB desempeña un papel importante en la
activación de la expresión génica del VIH. Otras afecciones en las
que se cree que está implicado el NF-\kappaB
incluyen la gripe, la aterosclerosis, la oncogénesis y la
ataxia-telangiectasia (AT).
Con respecto a la regulación de los factores de
transcripción, los compuestos de esta invención regulan factores de
transcripción cuya capacidad para unirse al ADN está controlada por
la reducción de un resto cisteína por una oxidorreductasa celular.
En una realización, el factor de transcripción es
NF-\kappaB. En esta realización, los compuestos
de esta invención tienen actividad como mediadores de las respuestas
inmunológicas y/o inflamatorias, o actúan para controlar el
crecimiento celular. En otra realización, el factor de transcripción
es AP-1, y la oxidorreductasa celular es
Ref-1. En esta realización, los compuestos de esta
invención tienen actividad como agentes antiinflamatorios y/o
anticáncer. En otras realizaciones, el factor de transcripción se
selecciona de Myb y el receptor de glucocorticoides. Otros factores
de transcripción que pueden ser regulados en el contexto de esta
invención también incluyen los de la familia
NK-\kappaB, como Rel-A,
c-Rel, Rel-B, p50 y p52; los de la
familia AP-1, como Fos, FosB, Fra-1,
Fra-2, Jun, JunB y JunD; ATF; CREB;
STAT-1, -2, -3, -4, -5 y -6;
NFAT-1, -2 y -4; MAF; factor tiroide; IRF;
Oct-1 y -2; NF-Y;
Egr-1; y USF-43.
Por consiguiente, en un aspecto la presente
descripción proporciona un procedimiento para inhibir una
oxidorreductasa en un animal de sangre caliente, que comprende
administrar al animal una cantidad de un compuesto de la presente
invención, siendo la cantidad eficaz para inhibir la
oxidorreductasa. La inhibición de la actividad oxidorreductasa
puede utilizarse como un medio para regular la transcripción.
En otro aspecto, la presente descripción
proporciona un procedimiento para la inhibición de CAAX en un animal
de sangre caliente. El procedimiento comprende administrar al
animal una cantidad de un compuesto de la presente invención como
se describe en la presente. La cantidad es eficaz para proporcionar
la inhibición de CAAX en el animal.
La Ras, el producto proteico del oncogén ras, es
una proteína unida a membrana implicada en la transducción de
señales que regulan la división y el crecimiento celular. La
mutaciones del gen ras son una de las anomalías genéticas más
habituales asociadas con cánceres humanos (Barbacid, M., Annu. Rev.
Biochem., 56:779-827, 1987). Estas mutaciones
provocan que una señal de crecimiento siempre esté "encendida"
lo cual conduce a una célula cancerosa. Para localizarse en la
membrana celular, Ras requiere la prenilación de la cisteína dentro
de su secuencia CAAX C-terminal por la farnesil
transferasa (FTasa) en que, en la secuencia CAAX, "a" se define
como un aminoácido con una cadena lateral hidrófoba y "X" es
otro aminoácido. Esta modificación postraduccional es crucial para
su actividad. Se ha demostrado que los inhibidores de peptidilo de
la FTasa con la secuencia CaaX bloquean o frenan el crecimiento de
tumores en cultivo celular y en animales completos (Kohl et
al., Science, 260:1934-1937, 1993; Buss and
Marsters, Chemistry and Biology, 2:787-791,
1995).
Los procedimientos para seleccionar la actividad
de un compuesto para inhibir la actividad CAAX son conocidos en la
técnica. Véase, por ejemplo, la patente de EEUU nº 6.391.574, que
describe un procedimiento para identificar un compuesto que inhibe
la eliminación proteolítica de un tripéptido AAX de una proteína
CAAX en una célula. Véase también la patente de EEUU nº 5.990.277,
que describe varios ensayos adecuados, y las referencias
bibliográficas Gibbs et al., Cell, 77:175, 1994; Gibbs,
Cell, 65:1, 1991; Maltese, FASEB J., 4:3319, 1990; Moores et
al., J. Biol. Chem., 266:14603, 1991; Goldstein et al.,
J. Biol. Chem., 266:15575, 1991; patente europea 0 461 869 A2;
Casey, J. Lipid Res., 33:1731-1740, 1992; Cox et
al., Curr. Opin. Cell Biol., 4:1008-1016, 1992;
Garcia et al., J. Biol. Chem.,
268:18415-18418, 1993; Vogt et al., J. Biol.
Chem., 270:660-664, 1995; Kohl et al.,
Science, 260:1934-1937, 1993; Garcia et al.,
J. Biol. Chem., 268:18415-18418, 1993; y Vogt et
al., J. Biol. Chem. 270:660-664, 1995).
En otro aspecto, la presente descripción
proporciona un procedimiento para inhibir la unión de un péptido
antigénico a una molécula MHC de clase uno o de clase dos. El
procedimiento comprende poner en contacto un compuesto según la
presente invención con una composición que comprende un péptido
antigénico y una molécula MHC de clase uno o de clase dos. El
compuesto se pone en contacto con el antígeno/molécula en una
cantidad eficaz para reducir la afinidad de unión entre las dos
especies.
Un aspecto importante del sistema inmunológica
es la respuesta de células T. Esta respuesta requiere que las
células T reconozcan e interaccionen con complejos de moléculas de
la superficie celular, denominados antígenos leucocíticos humanos
("HLA") o complejos de histocompatibilidad mayor ("MHC"),
y péptidos (véase, por ejemplo, Male et al., Advanced
Immunology, J.P. Lipincott Company, 1987). Los antígenos movilizan
una respuesta inmunológica, al menos en parte, siendo ingeridos por
una célula de presentación del antígeno (APC) que contiene sobre su
superficie una glicoproteína de clase II codificada por un gen en el
complejo de histocompatibilidad mayor (MHC). El antígeno entonces
se presenta a una célula T auxiliar específica en el contexto de la
glicoproteína MHC unida a la superficie, y mediante la interacción
del receptor de células T específico de antígeno con el complejo
antígeno-MHC, la célula T auxiliar es estimulada
para que medie en la respuesta inmunológica específica de
antígenos, incluyendo la inducción de la función de células T
citotóxicas, la inducción de la función de células B, y la
secreción de una serie de factores que ayudan e incitan esta
respuesta. En un aspecto de la invención, la molécula MHC es
HLA-A2.1, HLA-A1 o
HLA-A3.1, o cualquier otro alelo de HLA que esté
presente en los pacientes con melanoma.
La capacidad de un compuesto de la presente
invención para unirse a moléculas MHC I puede demostrarse
fundamentalmente como se describe en Elliot et al., Nature,
351:402-406, 1991. De forma similar, la capacidad de
un compuesto de la invención para unirse a moléculas MHC II puede
demostrarse mediante el procedimiento de Kwok et al., J.
Immunol., 155:2468-2476, 1995.
En otro aspecto, la presente descripción
proporciona un procedimiento para inhibir la unión de un primer
péptido a un segundo péptido que comprende un dominio
14-3-3, en el que el primer péptido
tiene afinidad de unión al dominio
14-3-3 del segundo péptido. El
procedimiento comprende poner en contacto un compuesto de la
presente invención con una composición que comprende un (primer)
péptido que tiene afinidad de unión al dominio
14-3-3 de la segunda proteína.
Las proteínas que tienen el dominio
14-3-3 y sus compañeros de unión se
han descrito en la bibliografía. Estos péptidos pueden utilizarse
en el procedimiento de la presente invención. Véase, por ejemplo,
Dai y Murakami, J. Neurochem., enero 2003,
84(1):23-34; Lim et al., J. Biol.
Chem., 25 de octubre 2002,
277(43):40997-1008; Parvaresch et
al., FEBS Lett., 18 de diciembre 2002,
532(3):357-362; Eilers et al., Mol.
Cell. Biol., diciembre 2002,
22(24):8514-8526; Liu et al., Cancer
Res., 15 de noviembre 2002, 62(22):6475-6480;
Truong et al., Proteins, 15 de noviembre 2002,
49(3):321-325; Birkenfeld et al.,
Biochem. J., 1 de enero 2003, 369(Pt
1):45-54; Espejo et al., Biochem. J., 1 de
noviembre 2002, 367(Pt 3):697-702; y Benzing
et al., J. Biol. Chem., 6 de septiembre 2002,
277(36):32954-
32962.
32962.
En la práctica de los procedimientos de esta
descripción, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto
de esta invención se administra a un animal de sangre caliente que
lo necesite. Por ejemplo, los compuestos de esta invención pueden
administrarse a un animal de sangre caliente al que se le ha
diagnosticado o está en riesgo de desarrollar una afección
seleccionada de una o más de enfermedad de Crohn, asma, artritis
reumatoide, isquemia, lesiones por reperfusión, enfermedad del
receptor frente al transplante (GVHD), esclerosis lateral
amiotrófica (ALS), enfermedad de Alzheimer, rechazo de aloinjertos y
leucemia de células T en adultos.
Los pacientes que padecen el complejo de
esclerosis tuberosa (TSC) desarrollan de forma típica múltiples
lesiones focales en el cerebro, el corazón, el riñón y otros
tejidos (véase, por ejemplo, Gómez, M.R., Brain Dev.,
17(supl.):55-57, 1995). Estudios con células
de mamífero han demostrado que la sobreexpresión de TSC1 (que
expresa hamartina) y TSC2 (que expresa tuberina) regula
negativamente la proliferación celular e induce la detención del
ciclo celular en G_{1}/S (véase, por ejemplo, Miloloza, A. et
al., Hum. Mol. Genet., 9:1721-1727, 2000).
Otros estudios han demostrado que la hamartina y la tuberina actúan
al nivel del complejo de degradación de
\beta-catenina y, de forma más específica, que
estas proteínas regulan negativamente la estabilidad y la actividad
de la \beta-catenina participando en el complejo
de degradación de la \beta-catenina (véase, por
ejemplo, Mak, B.C., et al., J. Biol. Chem.,
278(8):5947-5951, 2003). La
\beta-catenina es una proteína de 95 kDa que
participa en la adhesión celular mediante su asociación con miembros
de la familia de cadherina unidos a membranas, y en la
proliferación y la diferenciación celular como un componente clave
de la vía Wnt/Wingless (véase, por ejemplo, Daniels, D.L., et
al., Trends Biochem. Sci., 26:672-678, 2001). Se
ha demostrado que la interrupción de esta vía es oncogénica en
seres humanos y roedores. La presente invención proporciona
compuestos que modulan la actividad
\beta-catenina y, en particular, sus interacciones
con otras proteínas y, por consiguiente, puede utilizarse en el
tratamiento del TSC.
\newpage
Los siguientes ejemplos se proporcionan como
ilustración y no como limitación.
En los ejemplos y los ejemplos de preparación se
utilizan las siguientes abreviaturas:
- BMS:
- dimetilsulfuro de boro
- CbzOSu:
- benciloxicarbonil-N-hidroxisuccinimida
- DIC:
- 1,3-diisopropilcarbodiimida
- DIEA:
- N,N-diisopropiletilamina
- DIPEA:
- N,N-diisopropiletilamina
- DMAP:
- N,N-dimetilaminopiridina
- DMF:
- dimetilformamida
- DMSO:
- sulfóxido de dimetilo
- EA:
- acetato de etilo
- EDC:
- hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
- EDCI:
- hidrocloruro de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
- FmocOsu:
- 9-fluoreniloxicarbonil-N-hidroxisuccinimida
- HATU:
- [hexafluorofosfato de 2-(1H-9-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio]
- Hex:
- hexano
- HOBT:
- N-hidroxibenzotriazol
- MC:
- cloruro de metileno
- MeOH:
- metanol
- -OBn:
- -O-bencilo
- PPTS:
- p-toluensulfonato de piridinio
- PyBOP:
- hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris-pirrolidinofosfonio
- p-TsOH:
- ácido p-toluensulfónico
- THF:
- tetrahidrofurano
- TLC:
- cromatografía en capa fina.
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Ejemplo preparativo
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de ácido
2-naftoico (25 g, 0,145 mmol) en MC (200 ml) se le
añadió cloruro de oxalilo (38 ml, 0,4356 mol) y una cantidad
catalítica de DMF y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h.
Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo bruto se
diluyó con MC (200 ml) al cual se le añadió gota a gota una
disolución de hidróxido de amonio en agua (160 ml) a temperatura de
baño de hielo. Después de agitar durante 1 h, el producto
precipitado se recogió mediante filtración con succión, se trituró
en hexano y se secó para obtener el compuesto del título, que se
utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de la amida bruta obtenida en
la anterior etapa (1) en THF (100 ml) se le añadió lentamente BMS
(27,5 ml, 0,2904 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción resultante se
calentó hasta 60ºC durante 3 h, se extinguió con HCl al 5% a 0ºC,
se extrajo con EA y se lavó con HCl al 5%. Las capas acuosas se
reunieron y se basificaron con NaOH 1 N y de nuevo se extrajeron
con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para
producir el compuesto del título (13 g) como un sólido blanco.
TLC sistema 1: MC/MeOH = 90:10 v/v, Rf =
0,23.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 4,07 (s, 3H), 7,48 (m, 3H), 7,79 (m, 4H).
Ejemplo preparativo
2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de ácido
indol-2-carboxílico (1 g, 6,21 mmol)
en MC (30 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (1,64 ml, 0,1862 mol)
y una cantidad catalítica de DMF y se agitó a temperatura ambiente
durante 2 h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo
bruto se diluyó con MC (20 ml) al cual se le añadió gota a gota una
disolución de hidróxido de amonio en agua (7 ml) con enfriamiento en
un baño de hielo. Después de agitar durante 1 h, el producto
precipitado se recogió mediante filtración con succión, se trituró
en hexano y se secó para obtener el compuesto del título, que se
utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de la amida bruta obtenida en
la anterior etapa (1) en THF (30 ml) se le añadió lentamente BMS
(1,18 ml, 12,42 mmol) a 0ºC. La mezcla de reacción resultante se
calentó hasta 60ºC durante 3 h, se extinguió con HCl al 5% a 0ºC,
se extrajo con EA y se lavó con HCl al 5%. Las capas acuosas se
reunieron y se basificaron con NaOH 1 N y de nuevo se extrajeron
con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para
producir el compuesto del título (0,28 g) como un aceite
amarillo.
TLC sistema 1: MC/MeOH = 90:10 v/v, Rf =
0,15.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 3,98 (s, 2H), 7,08 (m, 3H), 7,26 (m, 1H), 7,58 (d, 1H), 9,10
(s a, 1H).
Ejemplo preparativo
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de
Z-Aps-OBn (10 g, 0,028 mol) en MC
(200 ml) se le añadió cloruro de oxalilo (2,93 ml, 0,0336 mol) y
una cantidad catalítica de DMF a 0ºC y se agitó a temperatura
ambiente durante 2 h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro
de acilo bruto se disolvió en benceno (400 ml) y se añadió hidruro
de tributilestaño (15,1 ml, 0,056 mmol) y una cantidad catalítica
de Pd(0) lentamente 0ºC y se agitó a temperatura ambiente
durante la noche. Después de evaporar el disolvente, se añadió éter
(100 ml)/KF al 10% en agua (100 ml) y se agitó a temperatura
ambiente durante 2 h, seguido de una filtración para producir una
disolución bifásica. La capa orgánica se separó y se concentró para
producir un producto bruto, que se purificó mediante una
cromatografía en columna para obtener el compuesto del título,
aldehído de Z-Aps-OBn (6 g) como un
aceite de color amarillo pálido.
Rf: 0,29 en hexano/EA (2/1).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del aldehído de
Z-Asp-OBn (6 g, 17,58 mmol) obtenido
en la anterior etapa (1) en MeOH (100 ml) se le añadió una cantidad
catalítica de p-TsOH y se agitó a temperatura
ambiente durante 5 h. Después de que se completase la reacción el
disolvente se evaporó para producir un producto bruto que se
purificó mediante una cromatografía en columna para obtener el
compuesto del título, Z-Asp-OBn
acetal (5 g) como un aceite de color amarillo pálido.
Rf: 0,32 en hex./EA (2/1).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El Z-Asp-OBn
acetal (0,5 g, 1,29 mmol) obtenido en la anterior etapa (2) se
disolvió en THF (20 ml)/NaOH (0,11 g, 2,1 mmol) en agua (20 ml) y
se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después de que
desapareciera el material de partida, la mezcla de reacción se
concentró mediante evaporación y después se diluyó con agua/EA. La
capa acuosa se separó, se acidificó cuidadosamente hasta pH
4-5 con HCl 1 N a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA.
Las capas orgánicas se reunieron y se concentraron para obtener el
compuesto del título, Z-Asp-OBn
acetal (0,27 g) como un aceite de color amarillo pálido.
TLC sistema 1: hexano/MeOH = 20:10 v/v, Rf =
0,10.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,20 (s, 2H), 3,35 (d, 6H), 4,25 (m, 2H), 5,19 (t, 2H), 5,80
(d, 1H), 7,37 (s a, 5H).
En un recipiente de reacción equipado con un
balón de hidrógeno gaseoso se añadió una disolución del
Z-Asp-OBn acetal (2,22 g, 5,73
mmol) obtenido en la anterior etapa (3) en ácido acético (20 ml) y
catalizador de Pearlman y se agitó a temperatura ambiente durante
la noche. La mezcla de reacción resultante se filtró, se concentró
y se liofilizó para producir un producto bruto, que se utilizó en la
siguiente etapa sin más purificación.
A una disolución del Asp-OH
acetal bruto obtenido en la anterior etapa (4) en THF (100 ml)/agua
(100 ml) se le añadió FmocOsu (2,13 g, 6,3 mmol)/bicarbonato de
sodio (1,93 g, 22,92 mmol) y se agitó a temperatura ambiente
durante la noche. La mezcla de reacción resultante se concentró y se
diluyó con agua/EA. La capa acuosa se separó, se acidificó
cuidadosamente hasta pH 4-5 con HCl 1 N a 0ºC y de
nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas se reunieron y se
concentraron para producir un producto bruto, que se purificó
mediante cromatografía en columna, para obtener el compuesto del
título (1,5 g) como un sólido espumoso.
Rf: 0,15 en hex./EA (2/1).
Ejemplo preparativo
4
A una disolución del ácido
L-glutámico (20 g, 136 mmol) en agua/THF (1/1, 400
ml) se le añadió bicarbonato de sodio (45,7 g, 544 mmol) y se
enfrió hasta 0ºC en un baño de hielo. A la mezcla de reacción se le
añadió CbzOSu (37,3 g, 150 mmol) y se agitó durante la noche a
temperatura ambiente. Después de que la reacción se hubiese
completado, la mezcla de reacción resultante se extrajo con EA. La
capa acuosa se separó, se acidificó hasta pH 2 con HCl concentrado
a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA (4 veces). Las capas orgánicas se
concentraron para producir un producto bruto, que se purificó
mediante una cromatografía en columna para obtener el compuesto del
título (16 g) como un aceite incoloro.
Rf: 0,2 en MC/MeOH (9/1).
En un aparato Dean-Starck se
colocó el ácido
N-Cbz-L-glutámico (4
g, 14,22 mmol) obtenido en la anterior etapa (1), paraformaldehído
(5 g), una cantidad catalítica de pTsOH, tamices moleculares (5 g) y
tolueno (100 ml) y se sometió a reflujo hasta que el material de
partida desapareció. La mezcla de reacción resultante se enfrió
hasta la temperatura ambiente, se filtró y se concentró para
producir un producto bruto, que se purificó mediante una
cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (2 g)
como un aceite incoloro.
Rf: 0,45 sólo en EA.
A una disolución del ácido glutámico diprotegido
(2 g, 6,82 mmol) obtenido en la anterior etapa (2) en MC (200 ml)
se le añadió cloruro de oxalilo (0,7 ml, 7,5 mmol) y una cantidad
catalítica de DMF a 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 2
h. Después de evaporar el disolvente, el cloruro de acilo bruto
resultante se disolvió en THF (400 ml) al cual se le añadieron
lentamente a 0ºC hidruro de tributilestaño (3,86 ml, 14,34 mmol) y
una cantidad catalítica de Pd(0) y se agitó a temperatura
ambiente durante la noche. Después de evaporar el disolvente se
añadió éter (100 ml)/KF al 10% en agua (100 ml) y se agitó a
temperatura ambiente durante 2 h, seguido de una filtración para
producir una disolución bifásica. La capa orgánica se separó y se
concentró para producir un producto bruto, que se purificó mediante
una cromatografía en columna para obtener el compuesto del título
(0,7 g) como un aceite incoloro.
Rf: 0,23 en hexano/EA (4/1).
A una disolución del aldehído diprotegido (0,7
g, 2,53 mmol) obtenido en la anterior etapa (3) en MeOH (30 ml) se
le añadió una cantidad catalítica de pTsOH y se agitó a temperatura
ambiente durante 7 h. Después de completar la reaccón, la mezcla de
reacción se concentró mediante evaporación del disolvente para
producir un producto bruto, que se purificó mediante una
cromatografía en columna para obtener el compuesto del título (0,5
g) como un aceite incoloro.
Rf: 0,33 en hexano/EA (4/1).
El acetal diprotegido (0,456 g, 1,411 mmol)
obtenido en la anterior etapa (4) se disolvió en MeOH (20 ml)/NaOH
1 N (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche.
Después de que el material de partida hubiese desaparecido
completamente, la mezcla de reacción se concentró mediante
evaporación del disolvente y se diluyó con agua/EA. La capa acuosa
se separó, se acidificó cuidadosamente hasta pH 4-5
con HCl 1 N a 0ºC y de nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas
se reunieron y se concentraron para obtener el compuesto del título
(0,35 g) como un aceite incoloro.
Rf: 0,1 en hex./EA (1/1).
En un recipiente de reacción equipado con un
balón de hidrógeno gaseoso se añadió una disolución del
Cbz-acetal (0,35 g, 1,13 mmol) obtenido en la
anterior etapa (5) en MeOH (10 ml) y una cantidad catalítica de Pd
al 10%/C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La
mezcla de reacción resultante se filtró y se concentró para
producir un producto bruto (0,2 g) como un aceite incoloro, que se
utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.
Rf: 0,01 en hex./EA (1/1).
A una disolución del Glu-OH
acetal bruto obtenido en la anterior etapa (6) en THF (10 ml)/agua
(10 ml) se le añadió FmocOsu (0,42 g, 1,24 mmol)/bicarbonato de
sodio (0,5 g, 5,9 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante
la noche. Después de evaporar el disolvente, la mezcla de reacción
resultante se diluyó con agua/EA. La capa acuosa se separó y se
acidificó cuidadosamente hasta pH 4-5 con HCl 1 N a
0ºC y de nuevo se extrajo con EA. Las capas orgánicas se reunieron
y se concentraron para obtener el compuesto del título (0,19 g) como
un aceite incoloro.
TLC sistema 1: sólo EA, Rf = 0,25.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,75 (m a, 4H), 3,28 (d, 6H), 3,43 (q, 1H), 4,20 (t, 1H), 4,38
(m, 3H), 5,62 (d, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,65 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).
Ejemplo preparativo
5
A una disolución de
Boc-Dab-OH (3 g, 13,75 mmol) en
H_{2}O (50 ml) se le añadió lentamente NaOH (2,75 g, 68,75 mmol,
5 equiv.) hasta pH > 11, al cual se añadió cloroformiato de
metilo (2,6 g, 27,5 mmol, 2 equiv.) en tolueno (50 ml). La mezcla
de reacción resultante se agitó durante 2 h. Para la comprobación
mediante TLC se tomó una pequeña cantidad de fase acuosa y se
acidificó con HCl 1 N. Después de confirmar que la reacción se
había completado mediante TLC, la fase orgánica se separó y la fase
acuosa se acidificó con una disolución de HCl al 10% y se extrajo
con EA (5 ml x 2). Las fases orgánicas se reunieron, se secaron
sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentraron al vacío para
producir un producto bruto (3,277 g, 11,86 mmol, 86%) como un aceite
incoloro.
TCL sistema: EA, Rf = 0,2.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,30-1,50 (s a, 9H), 2,00-2,30
(m, 2H), 3,10-3,30 (m, 2H), 3,70 (s a, 3H), 4,35
(m, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,65 (s a, 1H).
A una disolución del ácido
2-terc-butoxicarbonilamino-4-metoxicarbonilaminobutírico
(1,1 g, 3,98 mmol) obtenida en la anterior etapa (1) en DMF (20 ml)
se le añadió EDCI (763 mg, 3,98 mmol, 1 equiv.), HOBT (538 mg, 3,98
mmol, 1 equiv.) y DIEA (1,4 ml, 7,96 mmol, 2 equiv.) a 5ºC y se
agitó durante 1 día. Después de confirmar que la reacción se había
completado mediante una comprobación con TLC, la disolución de
reacción se acidificó con HCl al 10% a 5ºC (hasta un pH de
aproximadamente 4) y se extrajo con EA (20 ml). Las fases orgánicas
se reunieron y se lavaron con NaHCO_{3} saturado y salmuera, se
secaron sobre Na_{2}SO_{4} anhidro y se concentraron al vacío
para producir un residuo que se solidificó añadiendo EA y
n-hexano y se purificó mediante una cromatografía
en columna para obtener el compuesto del título (620 mg, 1,7 mmol,
43%) como un sólido blanco.
Rf: 0,7 (EA).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,45 (s a, 9H), 1,75-2,10 (m, 2H), 3,05 (m,
1H), 3,45 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 4,25 (m, 1H), 4,45 (d, 2H,
J = 5,7 Hz), 5,45 (m, 1H), 7,05 (m, 1H),
7,20-7,45 (m, 5H).
A una disolución del éster
terc-butílico del ácido
(1-bencilcarbamoil-3-metoxicarbonilaminopropil)carbámico
(1 g, 2,7 mmol) obtenido en la anterior etapa (2) en
1,4-dioxano (10 ml) se le añadió HCl 4 N en
1,4-dioxano (6,8 ml, 27 mmol) y se agitó durante 2
horas. Después de confirmar que la reacción se había completado
mediante comprobación con TLC, la disolución de reacción se
concentró y se secó al vacío para producir el compuesto del título
como un sólido blanco.
Ejemplo de referencia
1
Una suspensión de hidrocloruro de
\beta-alaninbencilamido (1,0 eq.) y
N-metilmorfolina (2,2 eq.) en diclorometano se trató con
tiofosgeno (1,2 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de
reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó
durante 2 horas más. La disolución transparente se diluyó con
acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%,
agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica
se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un
residuo oleoso.
Este producto se disolvió en diclorometano y se
trató con
2-(N-metil-2-aminoetil)-1,3-dioxolano
(0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción
se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 4
horas más. La reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con
una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada, una disolución
de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y una disolución de NaCl
saturada. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se
concentró para producir un residuo oleoso. Este producto bruto se
purificó mediante una cromatografía en columna (gel de sílice,
acetato de etilo/hexano = 5/2) para producir el producto puro.
RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,02 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,18 (s, 3H), 3,82 (m, 2H), 3,88
(m, 2H), 4,03(m, 4H), 4,44 (m, 2H), 4,91 (m, 1H), 6,84 (s a,
1H), 7,25-7,38 (m, 5H).
MS (m/z, ESI), 352 (MH^{+}).
La amida obtenida en la anterior etapa (A) se
trató con ácido fórmico a 60ºC durante 4 días. Después de la
evaporación del ácido fórmico a presión reducida, el residuo se
purificó mediante TLC preparativa (gel de sílice, acetato de
etilo/metanol = 5/1) para producir el producto del título puro.
RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,05 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,64 (d, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,30
(m, 3H), 3,44(s, 3H), 4,42 (d, 1H), 4,86 (s a, 1H), 5,08 (d,
1H), 5,49 (m, 1H) 7,25-7,38 (m, 5H).
MS (m/z, ESI), 290 (MH^{+}), 311
(M^{+}Na).
Ejemplo de referencia
2
Una suspensión de hidrocloruro de
\beta-alaninbencilamido (1,0 eq.) y
N-metilmorfolina (2,2 eq.) en diclorometano se trató con
tiofosgeno (1,2 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de
reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó
durante 2 horas más. La disolución transparente se diluyó con
acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%,
agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica
se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un
residuo oleoso. Este producto se disolvió en diclorometano y se
trató con
2-(N-bencil-1-amino-3,3-dietoxi)propano
(0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción
se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 6
horas más. La mezcla de reacción resultante se diluyó con acetato de
etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua
destilada, una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y
una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso.
Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en
columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 2/1) para
producir el producto del título puro.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,22 (t, 6H), 1,95 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,46 (m, 2H), 3,60
(t a, 2H), 3,63 (m, 2H), 3,97 (m, 2H), 4,38 (m, 2H), 4,52 (m, 1H),
5,07 (s a, 2H), 6,16 (s a, 1H), 6,98 (s a, 1H),
7,25-7,38 (m, 10H).
MS (m/z, ESI), 458 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La amida obtenida en la anterior etapa (A) se
trató con ácido fórmico a 60ºC durante 4 días. Después de la
evaporación del ácido fórmico a presión reducida, el residuo se
purificó mediante TLC preparativa (gel de sílice, acetato de
etilo/metanol = 5/1) para producir el producto puro.
RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,94 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 3,01 (m, 1H), 3,18
(m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,39 (d, 1H), 4,51 (m, 1H),
4,91 (m, 1H), 5,02 (d, 1H), 5,26 (d, 1H), 5,53 (m, 1H),
7,25-7,40 (m, 10H).
MS (m/z, APCI), 366 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una suspensión de hidrocloruro de
\beta-alaninbencilamido (1,0 eq.) y
N-metilmorfolina (3,2 eq.) en diclorometano se trató con
tiofosgeno (0,7 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de
reacción se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó
durante 2 horas más. La disolución transparente se diluyó con
acetato de etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%,
agua destilada y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica
se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un
residuo oleoso. Este producto se disolvió en diclorometano y se
trató con
2-(N-bencil-1-amino-3,3-dietoxi)propano
(0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la mezcla de reacción
se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 4
horas más. La mezcla de reacción resultante se diluyó con acetato de
etilo y se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua
destilada, una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y
una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso.
Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en
columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 2/1) para
producir el producto del título puro.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,23 (t, 6H), 1,87 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 3,24 (m, 2H), 3,49
(m, 2H), 3,59 (m, 2H), 3,65 (m, 2H), 4,45-4,58 (m,
5H), 5,62 (s a, 1H), 6,57 (s a, 1H), 7,25-7,48 (m,
10H).
MS (m/z, ESI), 442 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La amida obtenida en la anterior etapa (A) se
trató con ácido fórmico a 60ºC durante 4 días. Después de la
evaporación del ácido fórmico a presión reducida, el residuo se
purificó mediante TLC preparativa (gel de sílice, acetato de etilo)
para producir el compuesto del título.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,89 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 3,02
(m, 3H), 4,42 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 4,65
(m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,98 (d, J = 12,4 Hz, 1H),
7,25-7,38 (m, 10H).
MS (m/z, ESI), 350 (MH^{+}).
Ejemplo de referencia
4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una suspensión de resina ArgoGel seca y
para-toluensulfonato de piridinio (240 mg, 0,96
mmol) en 1,2-dicloroetano (15 ml) se calentó a
reflujo mientras se retiraba continuamente el disolvente y las
trazas de agua. Después de retirar aproximadamente 5 ml del
destilado se añadió una disolución de
3-bromo-1,1-dimetoxipropano
(700 mg, 3,84 mmol) en 1,2-dicloroetano (5 ml) y la
mezcla se mantuvo a reflujo durante 4 h con la retirada continua de
EtOH/EDC, tras lo cual la resina se lavó con DMF y dioxano, seguido
de una liofilización para producir el producto deseado.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Una disolución de bencilamina (520 mg, 4,85
mmol) en DMSO (4 ml) se añadió a la resina de bromoacetal (1 g,
0,48 mmol) y la suspensión se agitó a 60ºC durante 15 h. La resina
resultante se filtró, se lavó con DMSO, MeOH y MC, y se secó al
vacío durante la noche. La amina secundaria se detectó mediante un
ensayo de cloranilo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución de HCl de
\beta-alaninbencilamida (80 mg, 0,36 mmol) en
N-metilmorfolina (120 \mul) y MC (2 ml) se le añadió
trifosgeno (0,72 mmol) a temperatura ambiente. Después de 10 minutos
la disolución de isocianato resultante se añadió a una suspensión
de la resina de amina secundaria obtenida en la anterior etapa (2)
(100 mg, 0,048 mmol) y se mantuvo la agitación durante 3 h a
temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y MC y se
comprobó que la reacción se había completado con un ensayo de
cloranilo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La resina que contiene un grupo tiourea de la
etapa (C) se trató con ácido fórmico y se mantuvo en agitación
durante 15 h. La resina se retiró mediante filtración y el filtrado
se concentró y se purificó mediante una cromatografía (gel de
sílice) para obtener el compuesto del título.
RMN de ^{1}H (500 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,94 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 3,01 (m, 1H), 3,18
(m, 1H), 3,43 (m, 1H), 3,62 (m, 1H), 4,39 (d, 1H), 4,51 (m, 1H),
4,91 (m, 1H), 5,02 (d, 1H), 5,26 (d, 1H), 5,53 (m, 1H),
7,25-7,40 (m, 10H).
MS (m/z, APCI), 366 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del éster
1-bencílico del ácido
2-terc-butoxicarbonilaminosuccínico
(1 g, 3,09 mmol) en MC se le añadió DIC (532 \mul, 1,1 eq.), DMAP
(188 mg, 0,5 eq.) y fluorenilmetanol (635 mg, 1,05 eq.). Después de
completarse la reacción, la mezcla de reacción resultante se lavó
con HCl 1 N y una disolución de NaHCO_{3} saturada y se purificó
mediante una cromatografía en columna (gel de sílice) para obtener
el fluorenil metil éster (400 mg).
\newpage
Este éster se diluyó en dioxano (10 ml) y se
añadió una disolución de HCl 4 N en dioxano y se mantuvo en
agitación durante 2 h para eliminar el grupo protector Boc. Después
de completarse la reacción, la disolución se evaporó hasta la
sequedad. La sal HCl de la amina se diluyó con MC y
N-metilmorfolina y se añadió tiofosgeno (1,2 eq.) a
aproximadamente 0ºC. Después de completarse la reacción, la mezcla
se lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua destilada,
una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua destilada y una
disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso.
Este producto bruto se purificó mediante una cromatografía en
columna (gel de sílice, acetato de etilo/hexano = 1/1) para
producir el producto del título puro.
Una disolución en MC del isocianato (0,5 mmol)
obtenido en la anterior etapa (A) con
N-metilmorfolina se añadió a una suspensión de la
resina de amina secundaria (200 mg, 0,04 mmol) obtenida en la etapa
(B) del ejemplo 4 y se mantuvo en agitación durante 3 h a
temperatura ambiente. La resina resultante se lavó con DMF, MeOH y
MC, y se comprobó que la reacción se había completado con un ensayo
de cloranilo.
La resina obtenida en la anterior etapa (C) se
sumergió durante 30 min en DMF (4 ml) y se añadió una disolución de
piperidina al 25% para escindir la protección de fluorenilmetilo. La
resina resultante se lavó con DMF, MeOH y MC. La resina se secó a
presión reducida y se volvió a sumegir, a lo cual se le añadió DIC
(8 \mul, 0,05 mmol), HOBt (8 mg, 0,05 mmol) y DIEA (18 \mul,
0,1 mmol) para activar el ácido. Después de agitar durante 30 min
se añadió bencilamina y se mantuvo en agitación para obtener la
resina de bencilamida deseada.
La resina obtenida en la anterior etapa (C) se
sumergió en MC (4 ml) al cual se le añadió PPTS (10 mg) y se
calentó durante 4 h a 60ºC para obtener el compuesto del título.
MS (m/z, ESI), 500 (MH^{+}).
\newpage
Ejemplo de referencia
6
Una suspensión del HCl de
Cbz-diaminopropano (1,0 eq.) y
N-metilmorfolina (2,2 eq.) en MC se trató con tiofosgeno
(1,2 eq.) a 0ºC durante 10 min. Se dejó que la disolución resultante
se calentase hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 2
horas más. La disolución transparente resultante se diluyó con
acetato de etilo y se lavó con KHSO_{4} al 10%, agua y NaCl
saturado. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se
concentró para producir un residuo oleoso, que se disolvió en MC y
se trató con
N-bencil-1-amino-3,3-dietoxipropano
(0,9 eq.) a 0ºC durante 10 min y después se dejó que se calentase
hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 6 horas más. La
mezcla de reacción resultante se diluyó con acetato de etilo y se
lavó con una disolución de KHSO_{4} al 10%, agua, NaHCO_{3}
saturado, agua y NaCl saturado. La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso,
que encontes se purificó mediante una cromatografía en columna (gel
de sílice, acetato de etilo/hexano, 2/1) para producir el producto
del título.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,17 (t, 6H), 1,5 (s a, 2H), 1,75 (t, 2H), 1,92 (m, 2H), 3,20
(q, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,60 (m, 4H), 3,75 (q, 2H), 4,51 (t, 1H),
5,06 (s, 4H), 6,75 (s a, 1H), 7,25-7,38 (m,
10H).
MS (m/z, ESI), 442
(M-OEt^{+}).
A una disolución de la amida obtenida en la
anterior etapa (A) en MC se le añadió PPTS y se agitó a 70ºC durante
la noche. La mezcla de reacción resultante se concentró a presión
reducida para producir un residuo, que se purificó mediante TLC
preparativa (sólo con acetato de etilo) para obtener el compuesto
del título.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,89 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,10
(m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,89 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,39 (d, 1H),
4,51 (m, 1H), 4,92 (m, 2H), 5,10 (m, 2H), 7,16-7,4
(m, 10H),
MS (m/z, ESI), 396 (MH^{+}).
Ejemplo de referencia
7
A una disolución de la sal HCl de bencilglicina
(1 eq.) en MeOH se le añadió dimetoxiacetaldehído (1,05 eq.) y
después NaCNBH_{3} (1,2 eq.) a temperatura ambiente y se agitó
durante 5 h. La mezcla de reacción resultante se concentró a
presión reducida para producir un residuo oleoso que se disolvió en
MC y se lavó con una disolución de NaHCO_{3} saturada, agua, y
una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un residuo oleoso,
que se disolvió en MC y se trató con trietilamina (3 eq.) y cloruro
de acetilo (1,1 eq.) a 0ºC.
Después de completarse la reacción, la mezcla de
reacción resultante se lavó con una disolución de NaHCO_{3}
saturada, agua, y una disolución de NaCl saturada. La capa orgánica
se secó sobre Na_{2}SO_{4} y se concentró para producir un
residuo oleoso, que se purificó mediante una cromatografía en
columna (gel de sílice, acetato de etilo) para producir el producto
puro. Este producto se hidrogenolizó con Pd al 10%/C y un balón que
contenía H_{2} para obtener el compuesto del título, que se
utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,09 (s, 1H), 2,20 (s, 2H), 3,40 (d, 6H), 3,48 (d, 2H), 4,16
(s, 2H), 4,44 (m, 1H).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del ácido (1 eq.) obtenido en
la anterior etapa (A) en MC se le añadió HATU (1 eq.), DIPEA (3
eq.) y HCl de Cbz-diaminopropano (1,0 eq.) y se
agitó durante 3 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se
concentró a presión reducida para producir un residuo oleoso, que se
purificó mediante TLC preparativa para obtener el compuesto del
título.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,60 (m, 2H), 2,01 (s, 1H), 2,20 (s, 2H), 3,20 (d, 2H), 3,24
(m, 2H), 3,40 (d, 6H), 3,50 (d, 2H), 4,06 (s, 2H), 4,44 (m, 1H),
5,08 (s, 2H), 5,18 (d, 1H), 6,91 (d a, 1H), 7,16 (s a, 5H).
MS (m/z, ESI), 396 (MH^{+}).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución del precursor de amida
protegido con Cbz obtenido en la anterior etapa (B) en MC se le
añadió PPTS (1 eq.) a temperatura ambiente y se calentó hasta 70ºC
durante 5 h. La mezcla de reacción resultante se concentró para
producir un residuo que se caracterizó como sigue:
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 1,90 (m, 2H), 2,10 (s, 1H), 2,30 (s, 2H), 2,61 (m, 1H), 2,82
(m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 4,2
(m, 1H), 4,3 (s, 1H), 4,47 (m, 1H), 5,08-5,18 (m,
2H), 5,28 (s a, 1H), 7,16 (s a, 5H).
MS (m/z, ESI), 332 (MH^{+}).
A una disolución del aminoácido acetal protegido
con Cbz (100 mg, 1,3 eq.) obtenido en el ejemplo preparativo 3 (3)
en MC se le añadió PyBOP (1 eq. del ácido), DIPEA (6 eq. del ácido)
y HOBt (1,3 eq.) y se agitaron durante 30 min. A la mezcla de
reacción se le añadió la sal HCl de aminobencilamida (71 mg, 0,27
mmol) y se agitó durante 7 h. La mezcla de reacción resultante se
lavó con NaHCO_{3} saturado, agua y NaCl saturado. La capa
orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para producir un
residuo oleoso que se purificó mediante una cromatografía en
columna (gel de sílice, acetato de etilo) para obtener el compuesto
del título (50 mg, rendimiento: 35%).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,1 (t, 2H), 3,05 (m, 1H), 3,50 (ss, 6H), 3,45 (m, 1H), 3,75
(s, 3H), 4,25 (q, 1H), 4,41 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 5,0 (q, 2H), 5,3
(m, 1H), 5,95 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 10H).
El precursor de la ciclación de acetal amida (5
mg, 0,009 mmol) obtenido en la anterior etapa (A) se disolvió en
ácido fórmico (1 ml) y se agitó durante la noche. La mezcla de
reacción resultante se concentró hasta la sequedad y se utilizó en
la siguiente etapa sin más purificación.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,25 (m, 2H), 2,61 (t, 2H), 3,24 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,55
(m, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 4,65 (d, 1H), 4,8 (m, 2H), 5,3
(m, 1H), 5,7 (d, 1H), 7,15-7,4 (m, 10H), 7,85 (m,
1H).
En un recipiente de reacción equipado con un
balón de hidrógeno gaseoso se colocó una disolución del compuesto
de anillo bicíclico con Cbz obtenido en la anterior etapa (B) en
MeOH y Pd/C (1 mg) a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h.
Después de que se completase la reacción, la mezcla de reacción se
filtró con un filtro de Celite para eliminar el Pd/C y el
disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo oleoso
resultante se disolvió en MC, al cual se le añadió una disolución
de ácido benzoico (1,1 eq.) en MC y PyBOP (1,1 eq.), HOBt (1,1 eq.)
y DIPEA (3 eq.) y se agitó durante 30 min. A la disolución
resultante del ácido activado se le añadió una disolución de amina
y se mantuvo en agitación durante 3 h. La mezcla de reacción
resultante se concentró a presión reducida para producir un residuo
oleoso que se purificó mediante TLC preparativa para obtener el
compuesto del título.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
ppm: 2,25 (m, 2H), 2,65 (m, 2H), 3,27 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,6
(m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,54 (m, 2H), 4,8 (t, 1H), 5,45 (m, 1H),
7,15-7,42 (m, 10H), 7,9 (d, 1H), 8,31 (t, 1H).
En la figura 3 aparece un esquema sintético que
muestra la metodología del ejemplo 9.
Se colocó una resina de cloruro de
2-clorotritilo (200 mg, 1 mmol/g) y una disolución
de Fmoc-alanina (1,5 equiv., disponible en el
mercado) y DIEA (3 equiv.) en DCE (2 ml) en un vial con una tapa
roscada. La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente
durante 12 horas. La resina se recogió mediante filtración y se
lavó con DMF, MeOH y después con DCM, para proporcionar una primera
pieza componente.
A la resina hinchada con DMF antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto
se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una
disolución de ácido
2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4-metoxicarbonilaminobutírico
(1,5 equiv., segunda pieza componente), DIC (1,5 equiv.) y HOBT
(1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción durante
12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH y
después con DCM.
A la resina hinchada con DMF antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó
con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una
disolución de ácido
2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico
(1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después
de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente
la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.
A la resina hinchada con DMF antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto
se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una
disolución de ácido benzoico disponible en el mercado (1,5 equiv.),
DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la
mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se
lavó con DMF, MeOH y después con DCM.
La resina se trató con ácido fórmico (1,2 ml
cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después la
resina se retiró mediante filtración y el filtrado se condensó a
presión reducida para producir el producto como un aceite.
RMN de ^{1}H (300 MHz,
MeOH-d_{4}) \delta 1,40 (d, 3H), 1,90 (m, 1H),
2,20 (m, 1H), 2,30-2,50 (m, 2H), 3,15 (m, 1H), 3,20
(m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,40-3,60 (m, 1H),
4,20-4,40 (m, 2H), 4,70 (t, 1H), 5,40 (t, 1H),
7,25-7,45 (m, 3H), 7,75 (d, 2H).
MS (m/z, ESI): 433 (MH^{+}), 455
(MNa^{+}).
En la figura 4 aparece un esquema sintético que
muestra la metodología del ejemplo 10.
Se colocó una resina de cloruro de
2-clorotritilo (200 mg, 1 mmol/g) y una disolución
de Fmoc-beta-alanina (1,5 equiv.) y
DIEA (2 equiv.) en DCE (2 ml) en un vial con una tapa roscada. La
mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 12
horas. La resina se recogió mediante filtración y se lavó con DMF,
MeOH y después con DCM, para proporcionar una primera pieza
componente.
A la resina hinchada con DMF antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y la mezcla del producto se lavó
con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una
disolución de ácido
2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4-metoxicarbonilaminobutírico
(1,5 equiv., segunda pieza componente), DIC (1,5 equiv.) y HOBT
(1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la mezcla de reacción
durante 12 h a temperatura ambiente la resina se lavó con DMF, MeOH
y después con DCM.
A la resina hinchada con DMF antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto
se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una
disolución de ácido
2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-5,5-dimetoxipentanoico
(1,5 equiv.), DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después
de agitar la mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente
la resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.
A la resina hinchada con DMF antes de la
reacción se le añadió piperidina al 25% en DMF. Después la mezcla
de reacción se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se
repitió la etapa de desprotección y después la mezcla del producto
se lavó con DMF, MeOH y después con DCM. Se añadió a la resina una
disolución de ácido benzoico disponible en el mercado (1,5 equiv.),
DIC (1,5 equiv.) y HOBT (1,5 equiv.) en NMP. Después de agitar la
mezcla de reacción durante 12 h a temperatura ambiente la resina se
lavó con DMF, MeOH y después con DCM.
La resina se trató con ácido fórmico (1,2 ml
cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después la
resina se retiró mediante filtración y el filtrado se condensó a
presión reducida para producir el producto como un aceite.
RMN de ^{1}H (300 MHz,
MeOH-d_{4}) \delta 1,40 (d, 3H), 1,90 (m, 1H),
2,20 (m, 1H), 2,30-2,50 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,35
(s, 3H), 3,40-3,60 (m, 3H),
4,20-4,40 (m, 2H), 4,70 (t, 1H), 5,40 (t, 1H),
7,25-7,45 (m, 3H), 7,75 (d, 2H).
MS (m/z, ESI): 447 (MH^{+}), 469
(MNa^{+}).
En la presente se ofrecen diversas referencias
bibliográficas que describen con detalle ciertos procedimientos,
compuestos y/o composiciones.
Se apreciará que aunque en la presente se han
descrito realizaciones específicas de la invención con fines
ilustrativos, pueden realizarse diversas modificaciones. Por
consiguiente, la invención no está limitada excepto por las
reivindicaciones adjuntas.
Claims (6)
1. Un compuesto que tiene la siguiente
estructura:
en la
que:
A es -(CH)-, -N- o
-CH_{2}-N-;
B es -(CH_{2})- o
-(CH_{2}-CH_{2})-;
D es -(C=O) o -(CH_{2})-;
W es -(C=O)- o nada;
X es -NH(C=O)-;
Y es oxígeno o azufre;
L es hidrógeno, -C(O)NHR_{3} o
R_{5};
R_{1}, R_{2}, y R_{3} son iguales o
diferentes, y se seleccionan independientemente de hidrógeno; un
resto de cadena lateral de aminoácido seleccionado de -CH_{3},
-CH(CH_{3})_{2},
-CH_{2}CH(CH_{3})_{2},
-CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3},
-(CH_{2})_{4}NH_{3}^{+},
-(CH_{2})_{3}NHC(NH_{2})NH_{2}^{+},
-CH_{2}COO^{-}, -CH_{2}CH_{2}COO^{-},
-CH_{2}CONH_{2}, -CH_{2}CH_{2}CONH_{2},
\vskip1.000000\baselineskip
-CH_{2}SH, -CH_{2}CH_{2}SCH_{3},
-CH_{2}OH, - CH(OH)CH_{3},
alquilo C_{1-12};
arilo C_{6-12}; arilalquilo
C_{7-12}; alquilo C_{1-12}
sustituido; arilo C_{6-12} sustituido;
arilalquilo C_{7-12} sustituido; heteroalquilo
C_{1-12}; (aril
C_{7-12})heteroalquilo;
amino(alquilo C_{2-5});
guanidino(alquilo C_{2-5}); (alquil
C_{1-4})guanidino(alquilo
C_{2-5}); di(alquil
C_{1-4})guanidino(alquilo
C_{2-5}); amidino(alquilo
C_{2-5}); (alquil
C_{1-4})amidino(alquilo
C_{2-5}); di(alquil
C_{1-4})amidino(alquilo
C_{2-5}); alcoxi C_{1-3};
fenilo; fenilo sustituido (en el que los sustituyentes se
seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o
-SOR);
bencilo; bencilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
naftilo; naftilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
bisfenilmetilo; bifenilmetilo sustituido (en el
que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o
más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
piridilo; piridilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
piridil(alquilo
C_{1-4}); piridil(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
pirimidil(alquilo
C_{1-4}); pirimidil(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
triazin-2-il(alquilo
C_{1-4});
triazin-2-il(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
imidazo(alquilo
C_{1-4}); imidazo(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
imidazolinil(alquilo
C_{1-4});
N-amidinopiperazinil-N-(alquilo
C_{0-4}); hidroxi(alquilo
C_{2-5}); (alquil
C_{1-5})amino(alquilo
C_{2-5}); (dialquil
C_{1-5})amino(alquilo
C_{2-5});
N-amidinopiperidinil(alquilo
C_{1-4}); y
4-aminociclohexil(alquilo
C_{0-2});
-OH; -OR; -COR; -COOR; -CONH_{2}; -CONR;
-CONRR; -NH_{2}; -NHR; -NRR; -SO_{2}R; y -COSR;
R_{5} es hidrógeno; un resto de cadena lateral
de aminoácido seleccionado de -CH_{3},
-CH(CH_{3})_{2},
-CH_{2}CH(CH_{3})_{2},
-CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3},
-(CH_{2})_{4}NH_{3}^{+},
-(CH_{2})_{3}NHC(NH_{2})NH_{2}^{+},
-CH_{2}COO^{-}, -CH_{2}CH_{2}COO^{-},
-CH_{2}CONH_{2}, -CH_{2}CH_{2}CONH_{2},
-CH_{2}SH, -CH_{2}CH_{2}SCH_{3},
-CH_{2}OH, - CH(OH)CH_{3},
alquilo C_{1-12};
arilo C_{6-12}; arilalquilo
C_{7-12}; alquilo C_{1-12}
sustituido; arilo C_{6-12} sustituido;
arilalquilo C_{7-12} sustituido; heteroalquilo
C_{1-12}; (aril
C_{7-12})heteroalquilo;
amino(alquilo C_{2-5});
guanidino(alquilo C_{2-5}); (alquil
C_{1-4})guanidino(alquilo
C_{2-5}); di(alquil
C_{1-4})guanidino(alquilo
C_{2-5}); amidino(alquilo
C_{2-5}); (alquil
C_{1-4})amidino(alquilo
C_{2-5}); di(alquil
C_{1-4})amidino(alquilo
C_{2-5}); alcoxi C_{1-3};
fenilo; fenilo sustituido (en el que los sustituyentes se
seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o
-SOR);
bencilo; bencilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidino, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
naftilo; naftilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
bisfenilmetilo; bifenilmetilo sustituido (en el
que los sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o
más de amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
piridilo; piridilo sustituido (en el que los
sustituyentes se seleccionan independientemente de uno o más de
amino, amidino, guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2},
-NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
piridil(alquilo
C_{1-4}); piridil(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
pirimidil(alquilo
C_{1-4}); pirimidil(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
triazin-2-il(alquilo
C_{1-4});
triazin-2-il(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
imidazo(alquilo
C_{1-4}); imidazo(alquilo
C_{1-4}) sustituido (en el que los sustituyentes
se seleccionan independientemente de uno o más de amino, amidino,
guanidina, hidrazina, amidrazonilo, (alquil
C_{1-4})amino, (dialquil
C_{1-4})amino, halógeno,
perfluoro(alquilo C_{1-4}), alquilo
C_{1-4}, alcoxi C_{1-3}, nitro,
carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, -OR, -COOR, -CONH_{2}, -NHR,
-NRR, -SH, -SR, -SO_{2}R, -SO_{2}H, o -SOR);
imidazolinil(alquilo
C_{1-4});
N-amidinopiperazinil-N-(alquilo
C_{0-4}); hidroxi(alquilo
C_{2-5}); (alquil
C_{1-5})amino(alquilo
C_{2-5}); (dialquil
C_{1-5})amino(alquilo
C_{2-5});
N-amidinopiperidinil(alquilo
C_{1-4}); o
4-aminociclohexil(alquilo
C_{0-2});
\newpage
R se selecciona de alquilo
C_{1-12}; arilo C_{6-12};
arilalquilo C_{7-12}; heterociclilo seleccionado
de tiofeno, pirrol, furano, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol,
3-pirrolina, pirrolidina, piridina, pirimidina,
purina, quinolina, y carbazol.
\vskip1.000000\baselineskip
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el
que A es -CH_{2}-N-, B es -CH_{2}- o
-CH_{2}-CH_{2}-, D es -(CH_{2})-, y L es
-C(=O)NHR_{3}.
3. El compuesto de la reivindicación 2, en el
que Y es oxígeno.
4. El compuesto de la reivindicación 2 ó 3, en
el que W es -(C=O)-.
5. El compuesto de la reivindación 1, en el que
A es -CH-, B es -CH_{2}-, Y es oxígeno, D es -CH_{2}-, y L es
-C(=O)NHR_{3}.
6. El compuesto de la reivindicación 5, en el
que W es -(C=O)-.
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