ES2316146T3 - Metodo para preparar un analogo de producto lacteo. - Google Patents

Metodo para preparar un analogo de producto lacteo. Download PDF

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Abstract

Método para preparar un análogo de producto lácteo que comprende las etapas de: a) aislar una o más bacterias del ácido láctico de su entorno natural o de una colección de cultivos en un medio de aislamiento libre de componentes animales adecuado; b) adaptar dichas bacterias aisladas haciendo crecer dichas bacterias en un medio de adaptación libre de componentes animales adecuado; c) cultivar dichas bacterias adaptadas en un medio de cultivo libre de componentes animales adecuado y d) preparar un análogo de producto lácteo añadiendo a dicho análogo de producto lácteo como material de partida una cantidad adecuada de bacterias obtenidas en la etapa c); en el que las etapas a) a d) se llevan a cabo en condiciones libres de componentes animales.

Description

Método para preparar un análogo de producto lácteo.
Campo de la invención
La presente invención se refiere al campo de la tecnología alimentaria. La presente invención proporciona un cultivo de bacterias que contiene bacterias del ácido láctico que se han adaptado haciéndolas crecer en un medio de adaptación libre de componentes animales al 100%, y a un método para preparar tales cultivos de bacterias. La presente invención también se refiere a un método para preparar análogos de productos lácteos y a los análogos de productos lácteos obtenidos de ese modo usando dicho cultivo de bacterias.
Antecedentes
Las bacterias del ácido láctico (BAL) son un grupo de bacterias gram-positivas que producen ácido láctico como resultado de la fermentación de hidratos de carbono. Se han usando durante siglos en la fermentación de alimentos, no sólo para el desarrollo de aromas y textura, sino también debido a su capacidad de producir compuestos antimicrobianos, que impiden el crecimiento de microorganismos de degradación o patógenos.
Las BAL se conocen mejor por su papel en la preparación de productos alimenticios fermentados, tales como yogur (Streptococcus spp. y Lactobacillus spp.), quesos (Lactococcus spp.) y chucrut (Leuconostoc spp.). Además, las BAL se usan también para el encurtido de vegetales, el horneado, la preparación de vino, el curado de pescado, carnes y salchichas. Su crecimiento disminuye el pH debido a la producción de ácido láctico. Este proceso de acidificación inhibe el crecimiento de la mayoría de los otros microorganismos incluyendo los patógenos humanos más comunes, permitiendo así que estos alimentos obtengan una vida útil de almacenamiento prolongada. La acidez también cambia la textura de los alimentos debido a la precipitación de algunas proteínas, y las conversiones bioquímicas implicadas en el crecimiento potencian el aroma.
Las BAL son heterótrofas y tienen generalmente requisitos nutricionales complejos debido a que carecen de muchas capacidades biosintéticas. La mayoría de las especies tienen múltiples requisitos de aminoácidos y vitaminas. Debido a esto, las bacterias del ácido láctico generalmente son abundantes sólo en comunidades en las que pueden proporcionarse estos requisitos. A menudo están asociadas con intestinos y cavidades bucales de animales (por ejemplo Enterococcus faecalis), hojas de plantas (Lactobacillus, Leuconostoc) así como materia animal o vegetal en descomposición tal como vegetales en putrefacción, material fecal, compost, etc.
En la técnica anterior, las bacterias del ácido láctico se hacen crecer tradicionalmente y se mantienen en medios que contienen proteínas animales tales como leche, caseína, peptona de carne, suero de caballo, albúmina sérica bovina, suero de queso, etc., y/o componentes derivados de animales tales como cloruro de hemina, y/o componentes obtenidos usando enzimas de origen animal tales como tripsina, pepsina o pancreatina. Además, se conoce bien en la técnica crioconservar bacterias del ácido láctico usando componentes animales tales como suero de caballo.
Por ejemplo, el documento FR 2831395 da a conocer el uso de una cepa de Lactobacillus plantarum depositada para la fermentación de zumo de soja y/o cualquier otro producto similar a base de soja. La cepa de L. plantarum se usa para la fermentación de leche de soja para la preparación de análogos vegetales de productos lácteos. Esta cepa se conserva en nitrógeno líquido en un medio que contiene componentes derivados de animales (caldo MRS).
Sin embargo, cuando se usan BAL que se han conservado, hecho crecer y/o mantenido en medios tal como se indicó anteriormente para preparar análogos de productos lácteos, se han encontrado varios problemas, incluyendo tiempos de fermentación relativamente largos, malos aromas, pérdida de actividad metabólica específica de las BAL, menos supervivencia de las bacterias del ácido láctico en los productos libres de productos lácteos preparados y/o vida útil de almacenamiento limitada de los productos libres de productos lácteos preparados.
Además, el uso de las BAL que se han conservado, hecho crecer y/o mantenido en medios tal como se indicó anteriormente en alimentos vegetarianos o vegetalistas es un problema ético para grupos de consumidores específicos tales como los vegetarianos o los vegetalistas y varios grupos religiosos tal como en el caso de peptona de carne de ternera para los judíos e hindúes o en el caso de peptona de carne de cerdo para los musulmanes.
La presente invención está dirigida proporcionar una solución a al menos algunos de los problemas mencionados anteriormente.
Más en particular, es un objeto de la presente invención proporcionar un método mejorado para preparar productos alimenticios, por ejemplo análogos de productos lácteos fermentados, que es más eficaz y requiere tiempos de fermentación más cortos.
Además, es un objeto de la invención proporcionar un método mejorado para preparar productos alimenticios, preferiblemente productos fermentados, en el que dichos productos alimenticios, por ejemplo análogos de productos lácteos, muestran propiedades de calidad, nutricionales y/u organolépticas mejoradas.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un cultivo de bacterias mejorado de bacterias del ácido láctico para su uso en la preparación de productos alimenticios, preferiblemente productos alimenticios fermentados tales como análogos de productos lácteos fermentados.
El uso de medios de crecimiento libres de proteínas animales para hacer crecer bacterias del ácido láctico se ha notificado en Heenan C N et al, Lebensm.-Wiss, u. Technol. 35: 171-176 (2002).
Sumario de la invención
En un primer aspecto, la invención se refiere a un método para preparar un análogo de producto lácteo. El método comprende las etapas de:
a)
aislar una o más bacterias del ácido láctico de su entorno natural o de una colección de cultivos en un medio de aislamiento libre de componentes animales adecuado;
b)
adaptar dichas bacterias aisladas haciendo crecer dichas bacterias en un medio de adaptación libre de componentes animales adecuado;
c)
cultivar dichas bacterias adaptadas en un medio de cultivo libre de componentes animales adecuado, y
d)
preparar un análogo de producto lácteo añadiendo a dicho análogo de producto lácteo como material de partida una cantidad adecuada de bacterias obtenidas en la etapa c).
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El método se caracteriza porque las etapas a) a d) se llevan a cabo en condiciones libres de componentes animales. En una realización preferida, los medios de aislamiento, adaptación y cultivo son medios 100% vegetales. Preferiblemente, la etapa d) comprende fermentar un análogo de producto lácteo añadiendo a dicho análogo de producto lácteo como material de partida una cantidad adecuada de bacterias obtenidas en la etapa c).
En otro aspecto adicional, la invención también abarca un análogo de producto lácteo que es obtenible mediante el presente método. El análogo de producto lácteo es preferiblemente un producto alimenticio vegetal, un ingrediente alimenticio vegetal o un alimento funcional vegetal. Más preferiblemente, el análogo de producto lácteo es un análogo de producto lácteo fermentado, que se deriva preferiblemente de la soja.
La presente invención también se refiere a bacterias del ácido láctico o a un cultivo de bacterias que comprende una o más bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado haciéndolas crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal o libre de componentes animales, respectivamente. Las bacterias del ácido láctico se seleccionan preferiblemente de los géneros de Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium, y Streptococcus.
La presente invención proporciona un método para preparar un análogo de producto lácteo, preferiblemente un análogo de producto lácteo fermentado, en el que las etapas de aislamiento, adaptación, cultivo y preparación (es decir, adición y/o fermentación) se realizan todas en medios y/o condiciones libres de componentes animales. Por tanto, según con el presente método, se evita la contaminación de compuestos de origen animal durante el proceso de producción completo del análogo de producto lácteo. Además, el solicitante ha mostrado que haciendo crecer las presentes bacterias en un medio de adaptación 100% vegetal, las bacterias pueden experimentar adaptación (bio)química, por ejemplo cambiando los patrones de expresión de enzimas. Tal adaptación tiene consecuencias inesperadas y ventajosas para el proceso de preparación como tal, pero también para las propiedades cualitativas y nutricionales de los análogos de productos lácteos preparados.
Con la perspectiva de llegar a mostrar mejor las características de la invención, se describen a continuación en el presente documento algunas realizaciones y ejemplos preferidos en referencia a los dibujos adjuntos.
Descripción de las figuras
La figura 1 ilustra el cambio del pH en una leche de soja que está fermentándose con Lactococcus lactis S (LMG P-23669).
La figura 2 representa los perfiles de SDS PAGE de L. casei T (LMG P-23506) en medio S (figura 2A), L. casei T (LMG P-23506) en medio MRS (figura 2B) y de L. casei 6904 en medio MRS (figura 2C).
La figura 3 muestra la transición gradual en el espectro de IR típico cuando se compara L. casei V (LMG P-23504) en medio S (VS), adaptada en medio S y adaptada de nuevo en medio MRS (VSM), adaptada en medio MRS y adaptada de nuevo en medio S (VMS) y adaptada a medio MRS (VM).
La figura 4 representa perfiles de SDS PAGE 2D de L. casei V (LMG P-23504) en medio S (figura 4A), L. casei V (LMG P-23504) en medio MRS (figura 4B). Las flechas indican las diferencias entre ambos geles.
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La figura 5 ilustra la velocidad de fermentación de una leche de soja + 2% de glucosa cuando se usa Lactococcus lactis S (LMG P- 23669) aislada, adaptada y mantenida en medio S o MRS.
La figura 6 ilustra la velocidad de fermentación de una leche de soja + 2% de glucosa cuando se usa L. casei V (LMG P-23504) aislada, adaptada y mantenida en medio S o MRS.
La figura 7 ilustra la velocidad de fermentación de una leche de soja + 2,5% de rafinosa cuando se usa B. infantis (LMG P-24096) aislada, adaptada y mantenida en medio S o MRS.
La figura 8 ilustra la fermentación a un pH constante de 5,9 de una leche de soja + 2,5% de rafinosa cuando se usa B. infantis (LMG P-24096) aislada, adaptada y mantenida en medio S o MRS.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona un método para preparar un análogo de producto lácteo, preferiblemente un análogo de producto lácteo fermentado. Tradicionalmente, los procedimientos de fermentación o preparación comprenden las etapas de A) hacer crecer bacterias, B) cultivar dichas bacterias y C) usar dichas bacterias como cultivo de bacterias en una etapa de fermentación o preparación.
En la técnica, se han vendido productos fermentados y no fermentados a consumidores con una etiqueta denominada "100% vegetal". Sin embargo, debe aclararse que tales productos no son de hecho 100% vegetales, dado que en la práctica, generalmente no todas las etapas en el procedimiento de producción de tales productos se llevan a cabo en condiciones vegetales. Tradicionalmente, antes de multiplicarse e inocularse como fermento, las bacterias del ácido láctico se hacen crecer en medios que contienen proteínas animales, por ejemplo como leche, caseína, peptona de carne, suero de caballo, albúmina sérica bovina, suero de queso, etc.
En cambio, la presente invención difiere de tales procedimientos de la técnica anterior en que antes de cultivarse e inocularse como cultivo de bacterias, las bacterias del ácido láctico se aíslan en un medio de aislamiento libre de componentes animales y se hacen crecer en un medio de adaptación libre de componentes animales. En el presente procedimiento, las etapas de aislamiento, adaptación, cultivo y preparación o fermentación se realizan todas en medios y/o condiciones libres de componentes animales.
La expresión "libre de componentes animales" en este contexto se refiere a medios y/o condiciones en los que no se añaden componentes de origen animal. Pueden estar presentes trazas involuntarias de componentes de origen animal pero no tienen ningún efecto sobre el metabolismo y/o el patrón de expresión de enzimas de las bacterias del ácido láctico. Preferiblemente, las bacterias del ácido láctico se aíslan y se hacen crecer según la invención en un medio libre de componentes animales que es sustancialmente, y preferiblemente, un medio 100% vegetal. El término "sustancialmente" tal como se usa en este contexto se refiere a un medio vegetal en el que sólo se usan componentes 100% vegetales pero en el que pueden estar presentes trazas involuntarias de componentes de origen animal, pero en el que tales trazas no tienen ningún efecto sobre el metabolismo y/o patrón de expresión de enzimas de las bacterias del ácido láctico. En una realización preferida, el medio 100% vegetal o libre de componentes de origen animal comprende componentes vegetales y/o componentes sintéticos derivados de fuentes vegetales. Los ejemplos preferidos de medios 100% libres de componentes de origen vegetal incluyen medios en los que por ejemplo la fuente de nitrógeno es una peptona vegetal tal como peptona de soja y la fuente de carbono es un resto azúcar derivado de plantas tales como fructosa, o medios sintéticos con una composición de aminoácidos definida y vitaminas sintéticas, que se derivan sólo de fuentes no animales.
La presente invención proporciona un método para preparar un análogo de producto lácteo fermentado que es más seguro y más transparente, dado que se evita la contaminación de compuestos de origen animal durante el procedimiento de producción completo del análogo de producto lácteo, incluyendo la etapa de aislamiento, adaptación, cultivo y fermentación.
Los solicitantes han encontrado además que usando bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado en un medio 100% vegetal, se obtienen tiempos de fermentación reducidos para preparar análogos de productos lácteos fermentados. Además, la supervivencia de las bacterias del ácido láctico durante la vida útil de almacenamiento de los análogos de productos lácteos preparados también se aumenta.
Además, el uso de bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado en un medio 100% vegetal como cultivo de bacterias en el presente método permite mejorar las propiedades estructurales, nutricionales y/u organolépticas de productos lácteos preparados, incluyendo una digestibilidad mejorada.
Otra ventaja del presente cultivo de bacterias es que no contiene compuestos de origen animal. El cultivo de bacterias puede usarse ventajosamente para preparar análogos de productos lácteos que son adecuados para grupos de consumidores específicos tales como vegetarianos, vegetalistas o grupos religiosos tales como judíos y musulmanes. Además, el uso de los presentes cultivos de bacterias elimina el riesgo de transmitir contaminación derivada de animales, tal como encefalopatía espongiforme bovina (EEB) u otros agentes infecciosos o nocivos, a consumidores de los análogos de productos lácteos preparados.
El presente método se explicará adicionalmente a continuación con referencia a las diferentes etapas.
Aislamiento de bacterias del ácido láctico
Una primera etapa del presente método comprende el aislamiento de una o más bacterias del ácido láctico en un medio de aislamiento libre de componentes animales.
Las bacterias del ácido láctico pueden aislarse de su entorno natural, por ejemplo de intestinos y cavidades bucales animales, de leche, queso; de hojas de plantas así como de material animal o vegetal en descomposición tal como vegetales en putrefacción, materia fecal, compost, productos vegetales fermentados de manera natural (encurtidos, chucrut, etc.).
Las bacterias del ácido láctico también pueden aislarse de una colección de cultivos, tal como las colecciones de cultivos que están presentes en instituciones de depósito según el tratado de Budapest.
Las bacterias se aíslan en un medio de aislamiento, y preferiblemente un medio 100% vegetal. La etapa de aislamiento en el presente método comprende la única etapa de llevar las bacterias a un medio de aislamiento adecuado, preferiblemente un medio de aislamiento 100% vegetal. La etapa de aislamiento es la primera etapa de llevar las bacterias, por ejemplo del entorno o de una colección de cultivos, a un medio de aislamiento adecuado tal como se define en el presente documento. Por tanto, el aislamiento comprende en principio sustancialmente una etapa de manipulación.
Preferiblemente, las bacterias del ácido láctico se seleccionan del grupo de géneros de Lactobacillus, Lactococcus Bifidobacterium y Streptococcus. En una realización preferida, las bacterias del ácido láctico comprenden Lactobacillus acidophilus, L. bulgaricus, L. casei, L. paracasei, L. delbrueckii, L. fermentum, L. plantarum o L. reuteri. En otra realización, las bacterias del ácido láctico comprenden Lactococcus garvieae, L. lactis, L. cremoris, L. lactis subsp. diacetylactis, L. piscium o L. raffinolactis. En otra realización, las bacterias del ácido láctico comprenden Bifidobacterium infantis, B. longum, B. breve, B. animalis (lactis) y B. adolescentis. Aún en otra realización, las bacterias del ácido láctico comprenden Streptococcus salivarius o Streptococcus thermophilus, y preferiblemente Streptococcus salivarius ssp. thermophilus.
En una realización más preferida, las bacterias del ácido láctico comprenden Lactobacillus casei V (LMG P-23504), Lactobacillus casei W (LMG P-23505), Lactobacillus casei T (LMG P-23506), Lactococcus lactis S (LMG P-23669), Bifidobacterium infantis S (LMG P-24096) y/o Streptococcus salivarius ssp. thermophilus (LMG P-24095). La cepa V de Lactobacillus casei V se ha depositado en la Colección de Bacterias BCCM/LMG, Ledeganckstraat 35 B-9000 Gante, Bélgica, el 11 de abril de 2006 (recepción del depósito por la autoridad depositaria el 17 de febrero de 2006). La cepa depositada tiene las características del número de registro asignado LMG P-23504. La cepa W de Lactobacillus casei se ha depositado en la Colección de Bacterias BCCM/LMG, Ledeganckstraat 35 B-9000 Gante, Bélgica el 11 de abril de 2006 (recepción del depósito por la autoridad depositaria el 17 de febrero de 2006). La cepa depositada tiene las características del número de registro asignado LMG P-23505. La cepa T de Lactobacillus casei se ha depositado en la Colección de Bacterias BCCM/LMG, Ledeganckstraat 35 B-9000 Gante, Bélgica el 11 de abril de 2006 (recepción del depósito por la autoridad depositaria el 17 de febrero de 2006). La cepa depositada tiene las características del número de registro asignado LMG P-23506. En otra realización, dichas bacterias del ácido láctico son Lactococcus lactis S. Esta cepa se ha depositado en la Colección de Bacterias BCCM/LMG, Ledeganckstraat 35 B-9000 Gante, Bélgica el 15 de mayo de 2006. La cepa depositada tiene las características del número de registro asignado LMG P-23669. En otra realización, dichas bacterias del ácido láctico son Bifidobacterium infantis S. Esta cepa se ha depositado en la Colección de Bacterias BCCM/LMG, Ledeganckstraat 35 B-9000 Gante, Bélgica el 12 de abril de 2007. La cepa depositada tiene las características del número de registro asignado LMG P-24096. Aún en otra realización, dichas bacterias del ácido láctico son Streptococcus salivarius ssp. thermophilus. Esta cepa se ha depositado en la Colección de Bacterias BCCM/LMG, Ledeganckstraat 35 B-9000 Gante, Bélgica el 12 de abril de 2007. La cepa depositada tiene las características del número de registro asignado LMG P-24095.
Adaptación
Según la presente invención, se proporciona un método en el que se aíslan y adaptan bacterias del ácido láctico haciéndolas crecer en un medio de aislamiento y adaptación libre de componentes animales adecuado a su temperatura de crecimiento óptima.
La expresión "hacer crecer" tal como se usa en el presente documento se refiere al crecimiento de bacterias. En el presente documento, el crecimiento bacteriano se define como un aumento en la biomasa bacteriana.
La etapa de adaptación en el presente método comprende preferiblemente hacer crecer y frecuentemente volver a sembrar en placa las bacterias en un medio de adaptación adecuado, preferiblemente un medio de adaptación 100% vegetal. La etapa de adaptación implica al menos una y preferiblemente más de una nueva siembra en placa de las bacterias en un medio de adaptación adecuado tal como se define en el presente documento. Durante esta etapa de adaptación, las bacterias se vuelven a sembrar en placa frecuentemente, por ejemplo cada de 3 a 5 días, con el fin de mantener las bacterias en un estado viable. Preferiblemente, durante estas operaciones de nueva siembra en placas, se seleccionan las colonias bacterianas más grandes. Las bacterias se hacen crecer a una temperatura adecuada durante un tiempo adecuado. Por ejemplo, para bacterias Lactococcus, la temperatura es preferiblemente de aproximadamente 30ºC; para Lactobacillus la temperatura es preferiblemente de 30ºC o 37ºC dependiendo de la cepa, para Streptococcus thermophilus la temperatura es preferiblemente de 42ºC, mientras que para Bifidobacerium la temperatura es preferiblemente de aproximadamente 37ºC.
La etapa de adaptación se caracteriza en particular porque las BAL se hacen crecer en un medio libre de componentes animales o 100% vegetal. El solicitante ha mostrado que haciendo crecer y volviendo a sembrar en placa frecuentemente las BAL en un medio 100% vegetal, las BAL se adaptan a tal medio. El término "adaptación", cuando se usa en el contexto se refiere al fenómeno de que las BAL han experimentado modificaciones químicas y metabólicas, especialmente con respecto a su metabolismo enzimático, por ejemplo ajustando su patrón de enzimas, la inducción/regulación por disminución de ciertas enzimas, la actividad enzimática, la cinética de síntesis enzimática, etc., en función de los componentes presentes en el medio vegetal. Como resultado de la misma, las BAL están más adaptadas a componentes vegetales y obtienen capacidades mejoradas para fermentar posteriormente productos de origen vegetal.
Puede usarse cualquier medio convencional para el cultivo de bacterias como base para preparar el presente medio vegetal, en tanto que la composición final del medio esté libre de componentes animales, o sea sustancialmente vegetal, tal como se define en el presente documento. El término "medios" puede usarse en referencia a medios en placa sólidos que soportan el crecimiento de las bacterias. También se incluyen en esta definición sistemas de crecimiento microbiano semisólidos y líquidos, así como cualquier tipo de medios. Pueden prepararse medios sólidos convencionales a partir de cualquier medio líquido mediante la adición de un agente solidificante tal como agar.
El medio de la presente invención comprende preferiblemente una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una fuente de vitaminas, una fuente de minerales esenciales y opcionalmente un agente de selección, tal como un agente de reducción como L-cisteína o un antibiótico, para seleccionar los microorganismos que van a cultivarse.
En una realización, el medio de aislamiento libre de componentes animales y el medio de adaptación libre de componentes animales son el mismo medio. En otra realización, el medio de aislamiento libre de componentes animales y el medio de adaptación libre de componentes animales son medios diferentes. Por ejemplo, el medio de adaptación puede ser más pobre que el medio de aislamiento, o puede comprender componentes (tales como por ejemplos péptidos específicos derivados de una fuente vegetal, rafinosa, estaquiosa, ácido fítico,...) que mejoran el proceso de adaptación. En un ejemplo, el medio de aislamiento comprende diferentes hidratos de carbono fermentables tales como fructosa, glucosa y sacarosa y una fuente de nitrógeno que se origina de diversas peptonas vegetales (por ejemplo de soja y patata), mientras que el medio de adaptación es más selectivo y comprende por ejemplo una peptona de soja específica con una distribución del peso molecular específica y un hidrato de carbono fermentable (por ejemplo, fructosa).
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "fuente de carbono" se usa en referencia a cualquier compuesto que puede utilizarse como fuente de carbono para el metabolismo y/o crecimiento bacterianos. Las fuentes de carbono pueden ser de diversas formas, incluyendo, pero sin limitarse a, polímeros, hidratos de carbono, ácidos, alcoholes, aldehídos, cetonas, aminoácidos y péptidos.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "fuente de nitrógeno" se usa en referencia a cualquier compuesto que puede utilizarse como fuente de nitrógeno para el metabolismo y/o crecimiento bacterianos. Como con las fuentes de carbono, las fuentes de nitrógeno pueden ser de diversas formas, tales como nitrógeno libre, así como compuestos que contienen nitrógeno, incluyendo pero sin limitarse a aminoácidos, peptonas, vitaminas, amoniaco y sales nitrogenadas.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "fuente de minerales" puede hacer referencia a la adición de uno o más minerales. Tal como se usa en el presente documento, la expresión "fuente de vitaminas" puede hacer referencia a la adición de una o más vitaminas.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "agente de selección" se usa en referencia a cualquier compuesto que inhibe el crecimiento de, o destruye microorganismos o estimula el crecimiento del microorganismo seleccionado. Se pretende que la expresión se use en su sentido más amplio, e incluye, pero no se limita a, compuestos tales como L-cisteína o antibióticos que se producen de manera natural o sintética. También se pretende que el término incluya compuestos y elementos que son útiles para inhibir el crecimiento de, o para destruir microorganismos o para estimular microorganismos seleccionados. Pueden incorporarse agentes de selección en los medios usados en la presente invención. De esta manera, pueden inhibirse o destruirse microorganismos con características no deseables (por ejemplo, contaminantes) antes de o durante la conservación y/o reactivación de los microorganismos de interés. Alternativamente, añadiendo agentes de estimulación, tales agentes estimulan el crecimiento de microorganismos seleccionados de modo que los microorganismos seleccionados tienen una ventaja durante su reactivación.
En una realización preferida, el medio según la invención comprende una peptona vegetal; un componente de levadura (tal como un extracto de levaduras); un hidrato de carbono fermentable derivado de vegetal; y un tampón.
Las peptonas vegetales son mezclas complejas de compuestos orgánicos e inorgánicos que se obtienen mediante la digestión de tejidos de plantas que contienen proteínas tales como, por ejemplo, soja triturada o proteína de soja. Las peptonas contienen principalmente péptidos y aminoácidos individuales. Siendo digestos brutos de materiales complejos, contienen una gran variedad de otros materiales orgánicos e inorgánicos. Las peptonas pueden seleccionarse del grupo que comprende soja, algodón, trigo, malta, maíz, patata, judía, altramuz, sorgo y/o arroz. Preferiblemente, la peptona es una peptona de soja. Los ejemplos adecuados de peptonas vegetales incluyen pero no se limitan a un digesto papaico comercial de proteína de soja (soja triturada), un digesto papaico comercial de harina de trigo, un digesto papaico comercial de proteína de patata, etc...
Pueden usarse procedimientos convencionales bien conocidos por los expertos en la técnica para la preparación de peptonas vegetales. Por ejemplo, pueden prepararse composiciones de proteína derivada de soja mediante digestión enzimática de soja triturada o aislado de soja usando enzimas vegetales convencionales tales como papaína. También pueden obtenerse composiciones de proteína derivada de soja mediante hidrólisis ácida de un aislado de soja. Para resumir, las peptonas vegetales son digestos químicos o enzimáticos de proteínas vegetales y contienen una mezcla de aminoácidos, péptidos pequeños y polipéptidos de diferente tamaño. Preferiblemente, dicha peptona vegetal está presente en el medio en una cantidad de entre el 0,1 y el 10% en peso, y preferiblemente entre el 0,5 y el 5% en peso, y más preferiblemente de aproximadamente el 1% en peso.
En otra realización, el medio comprende un componente de levadura. Tal componente de levadura puede usarse como fuente de aminoácidos, vitaminas, coenzimas y purinas y pirimidinas incluyendo muchas necesitadas como factores de crecimiento por microorganismos. La concentración de componente de levadura en el presente medio está comprendida preferiblemente entre el 0,1 y el 10% en peso, y preferiblemente entre el 0,3 y el 5% en peso, y más preferiblemente es de aproximadamente el 0,5% en peso. Los componentes de levadura pueden prepararse mediante procedimientos convencionales bien conocidos por los expertos en la técnica. Además, los componentes de levadura están disponibles comercialmente. El componente de levadura puede consistir en una levadura autolisada, extracto de levaduras (es decir, un extracto de células de levaduras) o un extracto de levaduras (ultra)filtrado.
En una realización adicional, el presente medio de aislamiento y/o adaptación vegetal comprende un tampón adecuado para mantener el intervalo de pH óptimo del microorganismo en un medio sólido o medio líquido con el fin de prevenir cambios marcados en el pH que resultarían por lo demás de la producción microbiana de ácidos o bases orgánicos. Los ejemplos de tampones adecuados incluyen pero no se limitan a fosfatos de sodio y potasio y carbonato de calcio. Las preparaciones orgánicas brutas tales como peptonas (véase a continuación) también actúan como peptonas. También pueden usarse componentes químicos tales como tricina y MOPS como componentes de tampón. La concentración de tampón en el presente medio está comprendida preferiblemente entre el 0,1 y el 10% en peso; y preferiblemente entre el 0,3 y el 5% en peso, y preferiblemente es de aproximadamente el 0,5% en peso. Preferiblemente, el medio vegetal se tampona hasta un pH de entre 5 y 8, y preferiblemente entre 6 y 6,5.
En un ejemplo, el medio vegetal se tampona hasta un pH de 6,3 en el caso de un medio para Lactococcus lactis o Lactobacillus casei.
Aún en una realización preferida, la presente invención proporciona un medio de aislamiento y/o prevención que comprende un hidrato de carbono fermentable derivado de vegetal. Los hidratos de carbono son compuestos químicos que contienen átomos de oxígeno, hidrógeno y carbono. La expresión "derivado de vegetal" en este contexto se refiere a hidratos de carbono, que es un grupo grande de azúcares, almidones, celulosas y gomas, que se derivan de una fuente vegetal tal como maíz, trigo, achicoria, tapioca, arroz, patata, remolacha azucarera o caña de azúcar y que están sustancialmente libres de componentes animales. Los hidratos de carbono fermentables pueden incluir glucosa, fructosa, sacarosa, galactosa, etc... Esta expresión excluye hidratos de carbono que se derivan de la leche o productos lácteos, tales como por ejemplo lactosa. Preferiblemente, se usa fructosa o glucosa como hidrato de carbono. La concentración de hidrato de carbono fermentable en el presente medio está comprendida preferiblemente entre el 0,5 y el 5% en peso, y preferiblemente es del 1% en peso.
Para preparar un medio sólido, el medio vegetal contiene además agar-agar, preferiblemente en una cantidad de entre el 1 y 2% en peso, y por ejemplo en una cantidad del 1,5% en peso.
Cultivo
La etapa c) del presente método comprende el cultivo de bacterias adaptadas en un medio de cultivo libre de componentes animales adecuado.
Tal medio de cultivo libre de componentes animales puede comprender peptonas vegetales tal como se definen en el presente documento, por ejemplo, soja, trigo, arroz, patata; componentes de levadura tal como se definen en el presente documento; hidratos de carbono fermentables derivados de vegetales tal como se definen en el presente documento; o fuentes de hidratos de carbono complejos tales como líquido de maceración del maíz, melaza, etc...
El cultivo implica la multiplicación de bacterias adaptadas a una escala mayor con el fin de obtener biomasa suficiente que puede usarse en una siguiente etapa para preparar análogos de productos lácteos.
Estará claro que la temperatura y el tiempo requeridos para la etapa de cultivo dependerán del tipo de bacterias del ácido láctico. Además, el cultivo se lleva a cabo a la temperatura óptima de las bacterias adaptadas respectivas, por ejemplo para Lactococcus lactis S a 30ºC mientras que para Lactobacillus casei V a 30º o 37ºC, dependiendo de la cepa. Se realiza un seguimiento del pH y se mantiene constante mediante la adición de compuestos alcalinos como hidróxido de sodio, hidróxido de amonio, hidróxido de calcio,... El pH óptimo depende del cultivo y está comprendido preferiblemente entre 5 y 8. El pH es por ejemplo de aproximadamente 6,3 en el caso de Lactococcus lactis S o Lactobacillus casei V.
Preparación de análogos de productos lácteos
En una siguiente etapa d), se prepara un análogo de producto lácteo añadiendo a dicho análogo de producto lácteo como material de partida una cantidad adecuada de bacterias que se han cultivado (multiplicado) en la etapa c). Una cantidad adecuada puede comprender entre 10^{5} y 10^{10} bacterias por ml, y preferiblemente comprende 10^{7} bacterias/ml. La etapa de preparación d) puede incluir o no una etapa de fermentación: las bacterias de la etapa c) pueden añadirse como ingrediente al análogo de producto lácteo sin fermentación o pueden añadirse como cultivo iniciador que se fermenta posteriormente. Opcionalmente, el producto que va a fermentarse puede pasteurizarse o esterilizarse antes de la fermentación del mismo.
En una realización preferida, la presente invención proporciona un método para preparar un análogo de producto lácteo, en el que se reduce el tiempo de fermentación durante la preparación de dicho análogo de producto lácteo. En una realización preferida, se proporciona un método en el que se reduce el tiempo de fermentación durante la preparación de dicho análogo de producto lácteo en al menos el 10%, preferiblemente en al menos el 15%, más preferiblemente en al menos el 20% e incluso más preferiblemente en al menos el 30%. El tiempo de fermentación puede reducirse por ejemplo en el 15, 18, 20, 22, 25, 27, 30, 35, 40, 45 o incluso el 50%.
Estará claro que la temperatura y el tiempo requeridos para la etapa de fermentación dependerán del tipo de análogo de producto lácteo que va a fermentarse. En un ejemplo preferido, el análogo de producto lácteo es leche de soja, preparada a partir de semillas de soja tal como se describe como Tonyu o preparada a partir de aislados de soja. Además, la fermentación se lleva a cabo a la temperatura óptima de las bacterias adaptadas respectivas, por ejemplo para Lactococcus lactis S a 30ºC mientras que para Lactobacillus casei V a 30º o 37ºC, dependiendo de la cepa. Durante la fermentación, el pH disminuye y las proteínas se coagulan. El ejemplo 3 ilustra cómo el uso de un cultivo de bacterias del ácido láctico que se han aislado, adaptado y cultivado según la invención permite mejorar la preparación de un análogo de producto lácteo, y en particular acelerar su fermentación y por tanto reducir el tiempo de fermentación durante la preparación de tal análogo de producto lácteo.
En una realización preferida, la presente invención puede comprender la(s) etapa(s) adicional(es) de mezclar el producto fermentado con el fin de obtener un producto blando y sin grumos, y/o mezclar uno o más ingredientes adicionales tales como por ejemplo trozos de fruta(s) o fruta(s) molida(s), vegetales, hierbas, especias, azúcar y edulcorantes, aromas, colorantes, estabilizadores y espesantes, sal, conservantes, etc...
Análogos de productos lácteos
Las bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado según las etapas a) y b) del presente método y/o un cultivo de bacterias que comprende tales bacterias del ácido láctico pueden usarse ventajosamente en procesos de preparación de alimentos, y por ejemplo en procesos de fermentación de alimentos, y preferiblemente para preparar preparaciones alimenticias libres de componentes animales tales como un análogo de producto lácteo fermentado.
La expresión "análogo de producto lácteo" tal como se usa en el presente documento pretende referirse a un producto de origen vegetal y puede incluir un producto alimenticio vegetal, un ingrediente alimenticio vegetal o un alimento funcional vegetal. La expresión "de origen vegetal" indica que el producto contiene sólo compuestos derivados de plantas.
La expresión "alimento" o "producto alimenticio" se usa en el presente documento en un sentido amplio y cubre alimentos para seres humanos así como alimentos para animales (es decir, un pienso). En un aspecto preferido, el alimento es para consumo humano. El alimento puede estar en forma de una disolución o como un sólido, dependiendo del uso y/o el modo de aplicación y/o el modo de administración.
Los ejemplos no limitativos de "productos alimenticios vegetales" que pueden obtenerse usando un cultivo de bacterias según la presente invención incluyen por ejemplo yogures y yogures líquidos; queso, salsa de queso, nata (agria), nata líquida para montar, nata montada, helado, sorbetes y postres, productos de confitería, bollos, pasteles y mezclas para pasteles, aperitivos, rellenos de frutas, glaseado de pasteles, relleno pastelero de chocolate, rellenos de pasteles, baño de pasteles y rosquillas, cremas de relleno pastelero instantáneas, relleno para galletas, relleno pastelero listo para usar, relleno reducido en calorías, bebida nutritiva, bebida de soja/zumo acidificada, polvos para bebidas, leche de soja enriquecida con calcio, postres congelados gasificados. En una realización preferida, la presente invención puede usarse preferiblemente en relación con la producción de queso y yogur a base de soja, tal como bebida de yogur de soja
fermentada, yogur de soja, yogur líquido de soja, queso de soja, nata de soja fermentada, postres a base de soja y otros.
La expresión "ingrediente alimenticio vegetal" tal como se usa en el presente documento incluye una formulación que se añade o puede añadirse en la preparación de otros productos alimenticios. El ingrediente alimenticio puede estar en forma de una disolución o como un sólido dependiendo del uso y/o el modo de aplicación y/o el modo de administración. Como ejemplo, puede usarse una nata de soja fermentada como ingrediente para la preparación de comidas preparadas; puede usarse un yogur de soja fermentado como ingrediente para batido de leche de soja o para helado de soja que se basa en yogur de soja.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "alimento funcional vegetal" significa alimento vegetal que puede proporcionar no sólo un efecto nutricional y/o un sabor satisfactorio, sino que también puede suministrar un efecto beneficioso adicional a un consumidor. Por consiguiente, los alimentos funcionales son alimentos ordinarios que tienen componentes o ingredientes (tales como los descritos en el presente documento) incorporados a los mismos que confieren al alimento un beneficio funcional específico, por ejemplo médico o fisiológico, diferente del efecto puramente nutritivo. Algunos alimentos funcionales son nutracéuticos. En el presente documento, el término "nutraceútico" significa un alimento que puede proporcionar no sólo un efecto nutritivo y/o un sabor satisfactorio, sino que también puede suministrar un efecto terapéutico (u otro beneficioso) al consumidor. Los nutracéuticos cruzan las líneas de división tradicionales entre alimentos y medicamentos. Como ejemplo, puede citarse una preparación de Bifidobacterium libre de componentes animales, que se añade a yogur de soja o preparaciones de fruta para la preparación de un alimento funcional vegetal.
Un alimento funcional vegetal de este tipo podría ser un nutracéutico porque contribuye a una mejor salud del intestino, disminuye el colesterol, estimula la inmunidad, etc.
La invención se refiere a un análogo de producto lácteo obtenible mediante el presente método. El presente análogo de producto lácteo puede caracterizarse tal como sigue.
En una realización, se proporciona un análogo de producto lácteo que tiene una cantidad reducida de ácido fítico. Se proporciona un análogo de producto lácteo en el que se ha degradado más ácido fítico durante la fermentación que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. La invención proporciona así un análogo de producto lácteo en el que la degradación de ácido fítico es superior, y preferiblemente al menos el 10%, más preferiblemente al menos el 25% e incluso más preferiblemente al menos el 50% superior, que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. En una realización preferida, se proporciona un análogo de producto lácteo en el que se degrada al menos el 10%, preferiblemente al menos el 15%, más preferiblemente al menos el 20% e incluso más preferiblemente al menos el 25% más de ácido fítico que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. En un ejemplo, se proporciona un análogo de producto lácteo en el que la degradación de ácido fítico es al menos 1,5 veces, y preferiblemente al menos 2 veces, o incluso al menos 3 veces superior a la degradación de ácido fítico en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención.
En otra realización, se proporciona un análogo de producto lácteo que tiene una cantidad reducida de rafinosa. Se proporciona un análogo de producto lácteo en el que se ha degradado más rafinosa durante la fermentación que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. La invención proporciona así un análogo de producto lácteo en el que la degradación de rafinosa es superior, y preferiblemente al menos el 10%, más preferiblemente al menos el 25% e incluso más preferiblemente al menos el 50% superior que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. En una realización preferida, se proporciona un análogo de producto lácteo en el que se degrada al menos el 25%, preferiblemente al menos el 50%, más preferiblemente al menos el 75% e incluso más preferiblemente al menos el 100% más de rafinosa que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. En un ejemplo, se proporciona un análogo de producto lácteo en el que la degradación de rafinosa es al menos 3 veces, y preferiblemente al menos 5 veces, o incluso al menos 7 veces superior a la degradación de rafinosa en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención.
Aún en otra realización, se proporciona un análogo de producto lácteo que tiene una cantidad aumentada de formas agluconas de isoflavonas. Se proporciona un análogo de producto lácteo en el que se han transformado más forma(s) glucósido(s) de isoflavonas durante la fermentación en forma(s) aglucona(s) de isoflavonas que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. La invención proporciona así un análogo de producto lácteo en el que la transformación de forma(s) glucósido(s) de isoflavonas en forma(s) aglucona(s) de isoflavonas es superior, y preferiblemente al menos el 10%, más preferiblemente al menos el 25% e incluso más preferiblemente al menos el 50% superior, que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. En una realización preferida, se proporciona un análogo de producto lácteo en el que se ha producido al menos el 5%, preferiblemente al menos el 10%, más preferiblemente al menos el 20% e incluso más preferiblemente al menos el 25% más de transformación de forma(s) glucósido(s) de isoflavonas en forma(s) aglucona(s) de isoflavonas que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención. En un ejemplo, se proporciona un análogo de producto lácteo en el que la transformación de una forma glucósido en una forma aglucona de isoflavonas es al menos 1,1 veces, y preferiblemente al menos 1,2 veces, o incluso al menos 1,3 veces superior que en un análogo de producto lácteo no obtenido mediante un método según la invención.
Bacterias del ácido láctico
En otra realización, la invención se refiere a bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado haciéndolas crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal, respectivamente.
En una realización preferida, la invención proporciona bacterias del ácido láctico tal como se dan a conocer en el presente documento que muestran un aumento en la actividad de una o más enzimas en comparación con bacterias del ácido láctico que no se han hecho crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal. Preferiblemente, dicha(s) enzima(s) se selecciona(n) del grupo que comprende fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina, \alpha-quimotripsina, \alpha-galactosidasa y \beta-glucosidasa.
En una realización preferida, la invención proporciona bacterias del ácido láctico tal como se dan a conocer en el presente documento que muestran un aumento en la actividad de al menos el 5%, preferiblemente al menos el 10%, preferiblemente de al menos el 15%, preferiblemente de al menos el 20% y más preferiblemente de al menos el 30% de una o más de las enzimas facilitadas anteriormente. La actividad enzimática puede aumentarse por ejemplo en el 15, 18, 20, 22, 25, 27, 30, 35, 40, 45 o incluso el 50%.
En una realización preferida, la invención proporciona bacterias del ácido láctico tal como se dan a conocer en el presente documento, que pueden aumentar la degradación de ácido fítico en un análogo de producto lácteo durante la fermentación del mismo. La invención proporciona así bacterias del ácido láctico que muestran un aumento en la actividad fosfatasa, por ejemplo de la actividad fosfatasa ácida y/o fosfatasa alcalina, de al menos el 5%, preferiblemente de al menos el 10%, preferiblemente de al menos el 20% y más preferiblemente de al menos el 30%. Por ejemplo, se proporcionan bacterias del ácido láctico que pueden degradar al menos 1,5 veces, y preferiblemente al menos 2 veces, o incluso al menos 3 veces más ácido fítico que bacterias del ácido láctico que no se han hecho crecer un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal según la presente invención.
En otra realización preferida, la invención proporciona bacterias del ácido láctico tal como se dan a conocer en el presente documento, que pueden aumentar la degradación de rafinosa en un análogo de producto lácteo durante la fermentación del mismo. La invención proporciona así bacterias del ácido láctico que muestran un aumento en la actividad \alpha-galactosidasa de al menos el 5%, preferiblemente de al menos el 10%, preferiblemente de al menos el 20% y más preferiblemente de al menos el 30%. Por ejemplo, se proporcionan bacterias del ácido láctico que pueden degradar al menos 3 veces, y preferiblemente al menos 5 veces, o incluso al menos 7 veces más rafinosa que bacterias del ácido láctico que no se han hecho crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal según la presente invención.
Aún en otra realización, la invención proporciona bacterias del ácido láctico tal como se dan a conocer en el presente documento, que pueden aumentar la transformación de forma(s) glucósido(s) (inactiva(s)) en forma(s) aglucona(s)
(activa(s)) de isoflavonas en un análogo de producto lácteo durante la fermentación del mismo. La invención proporciona así bacterias del ácido láctico que muestran un aumento en la actividad \beta-glucosidasa, de al menos el 5%, preferiblemente de al menos el 10%, preferiblemente de al menos el 20% y más preferiblemente de al menos el 30%. Por ejemplo, se proporcionan bacterias del ácido láctico que pueden transformar al menos 1,1 veces, y preferiblemente al menos 1,2 veces, o incluso al menos 1,3 veces más forma(s) glucósido(s) en forma(s) aglucona(s) de isoflavonas que bacterias del ácido láctico que no se han hecho crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal según la presente invención.
En otra realización, la invención se refiere además a un cultivo de bacterias que comprende una o más bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado haciéndolas crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal, respectivamente, y preferiblemente un medio de aislamiento y adaptación tal como se define en el presente documento. La invención se refiere además preferiblemente a un cultivo de bacterias que comprende una o más bacterias del ácido láctico tal como se definieron anteriormente.
Un cultivo de bacterias o bacterias del ácido láctico tal como se definen en el presente documento son particularmente adecuados para usarse para mejorar la preparación de análogo de producto lácteo. La preparación puede mejorarse en el sentido de que pueden obtenerse análogos de productos lácteos que tienen propiedades de calidad, nutricionales y organolépticas mejoradas, tales como por ejemplo, estabilidad del sabor y/o aroma potenciada, digestibilidad potenciada, valor nutritivo mejorado, disponibilidad potenciada de minerales tales como Ca, Fe, Mg, etc... La invención se refiere por ejemplo al uso de un cultivo de bacterias o bacterias del ácido láctico tal como se definen en el presente documento para preparar un análogo de producto lácteo que tiene una cantidad reducida de ácido fítico y/o rafinosa, y/o para preparar un análogo de producto lácteo que tiene una cantidad aumentada de forma(s) aglucona(s) de isoflavonas.
Además, también puede mejorarse el procedimiento de preparación del análogo de producto lácteo como tal. En particular, la invención también se refiere al uso de un cultivo de bacterias o bacterias del ácido láctico tal como se definen en el presente documento para reducir el tiempo de fermentación durante la preparación de un análogo de producto lácteo. Preferiblemente, se usa un cultivo de bacterias o bacterias del ácido láctico según la invención para reducir el tiempo de fermentación durante la preparación de un análogo de producto lácteo en al menos el 10%, preferiblemente en al menos el 15%, preferiblemente en al menos el 20% y más preferiblemente en al menos el 30%. El tiempo de fermentación puede reducirse por ejemplo en el 15, 18, 20, 22, 25, 27, 30, 35, 40, 45 o incluso el 50%.
La invención se refiere además al uso de bacterias del ácido láctico o un cultivo de las mismas tal como se dan a conocer en el presente documento para aumentar la degradación de ácido fítico en un análogo de producto lácteo durante la fermentación del mismo, y/o para aumentar la degradación de rafinosa en un análogo de producto lácteo durante la fermentación del mismo y/o para aumentar la transformación de forma(s) glucósido(s) en forma(s) aglucona(s)
de isoflavonas en un análogo de producto lácteo durante la fermentación del mismo.
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Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar realizaciones particulares de la invención y no limitan el alcance de la invención.
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Ejemplos Ejemplo 1 Medio de adaptación 100% vegetal según la presente invención
El presente ejemplo ilustra un medio 100% vegetal según la presente invención. El medio consiste en: 10 g de peptona S (= digesto papaico comercial de soja triturada de Acumedia), 5 g de extracto de levaduras, ultrafiltrado (autolisado ultrafiltrado de levadura de panadería) de Acumedia, 10 g de fructosa, 5 g de un tampón fosfato pH=7,2 (de Acumedia) 15 g de agar-agar (bacteriológico) y agua desmineralizada hasta 1 litro.
Para preparar el caldo, puede usarse el medio mencionado anteriormente en el que se omite el agar-agar.
Ejemplo 2 Caracterización de cultivos de bacterias según la presente invención
Las bacterias del ácido láctico que se usaron en los siguientes ejemplos como material de partida se aislaron o bien de fuentes naturales (por ejemplo, productos alimenticios) o bien se obtuvieron de una colección de cultivos (BCCM - Gante, Bélgica).
2.1 Patrón de inducción enzimática *Lactobacillus casei V (LMG P-23504)
En un primer experimento, se hizo crecer Lactobacillus casei V (LMG P-23504) y se mantuvo de los siguientes modos: 1) se hizo crecer y se mantuvo en un medio S (VS); 2) se hizo crecer y se mantuvo en un medio MRS (VM); 3) se hizo crecer y se mantuvo en un medio S y se volvió a sembrar en placa una vez en un medio MRS (VSM); y 4) y se hizo crecer y se mantuvo en un medio MRS y se volvió a sembrar en placa una vez en un medio S
(VMS).
El medio S es un medio sustancialmente vegetal según la invención que comprende peptona de soja, extracto de levaduras, un tampón fosfato y una fuente de azúcar. El medio MRS corresponde a medio que comprende una peptona de carne. Las BAL se volvieron a sembrar en placa dos veces por semana en los medios MRS o S mediante lo cual se realizó una selección de las colonias bacterianas más grandes (= mejora genética).
Se analizaron los patrones de inducción enzimática de las bacterias que se hicieron crecer en los medios establecidos anteriormente de un modo semicuantitativo. Usando un kit comercial (Biomérieux), se determinó la actividad enzimática por medio de un código de color (de 0: sin actividad enzimática a 5: la actividad enzimática más fuerte). Se midieron las actividades enzimáticas tras la incubación a 37ºC durante 4 horas.
Los resultados de este experimento indicaron que mediante la adaptación de Lactobacillus casei V (LMG P-23504) a un medio sustancialmente vegetal (medio S) según la invención, ciertas enzimas se indujeron o aumentaron significativamente, por ejemplo fosfatasa alcalina, fosfatasa ácida, \beta-glucosidasa y \alpha-fucosidasa. Estas enzimas no se inducían prácticamente cuando las bacterias se adaptaban a un medio MRS. Sin embargo, cuando las bacterias, adaptadas a un medio sustancialmente vegetal se volvieron a adaptar a un medio MRS, hubo una transición en el patrón enzimático: se invirtió el patrón de inducción enzimática.
El siguiente ejemplo ilustra el aumento de la actividad fosfatasa de la L. casei V (LMG P-23504) cuando se hizo crecer y se mantuvo en medio S, en comparación con L. casei V (LMG P-23504) que se hizo crecer y se mantuvo en medio MRS. Se inoculó leche de soja + 2% de glucosa añadida con 1X10^{7}/ ml de L. casei V que se mantuvo en medio S o que se mantuvo en medio MRS y se fermentó la leche de soja inoculada a 30ºC hasta un pH de 4,5.
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Se midió el contenido de ácido fítico en la leche de soja antes y tras la fermentación. Los resultados se representan en la tabla 1.
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TABLA 1
1
La tabla 1 demuestra que la L. casei V (LMG P-23504) que se mantuvo en medio S induce una descomposición superior del factor antinutricional ácido fítico. Esto es una ventaja nutricional para el consumidor. La cantidad de ácido fítico en el análogo de producto lácteo se redujo en más del 67% usando L. casei V que se había mantenido en medio S en comparación con una reducción del 40% cuando se usa L. casei V que se había mantenido en medio MRS. Este ejemplo indica además que hay más del 27% más de ácido fítico degradado en el análogo de producto lácteo preparado con L. casei V que se mantuvo en medio S que en un análogo de producto lácteo preparado con L. casei V que se mantuvo en medio MRS. L. casei V que se mantuvo en medio S puede aumentar la degradación de ácido fítico en un análogo de producto lácteo en un factor de al menos 1,675.
*Lactococcus lactis LMG 8522
En otro experimento, se adaptó una Lactococcus lactis LMG 8522 durante varios meses o bien en un medio S o bien en un medio MRS. Tras varios meses de cultivo, se determinó la actividad enzimática usando el kit tal como se definió anteriormente.
Los resultados del mismo indicaron que adaptando Lactococcus lactis en un medio sustancialmente vegetal según la invención, se indujeron ciertas enzimas, por ejemplo fosfatasa alcalina y \alpha-quimotripsina. Estas enzimas no se indujeron cuando se adaptó la bacteria del ácido láctico en un medio MRS.
*Lactococcus lactis S (LMG P-23669)
Aún en otro experimento, se adaptó una Lactococcus lactis S (LMG P-23669) durante varios meses o bien en medio S o bien en medio MRS. Tras varios meses de cultivo, se determino la actividad enzimática usando el kit tal como se definió anteriormente.
Los resultados del mismo indicaron que adaptando Lactococcus lactis S (LMG P-23669) en un medio sustancialmente vegetal según la invención, se indujeron o aumentaron ciertas enzimas, por ejemplo fosfatasa alcalina y \alpha-quimiotripsina. Estas enzimas no se indujeron cuando se adaptó la bacteria del ácido láctico en un medio MRS.
El siguiente ejemplo ilustra el aumento de la actividad fosfatasa alcalina de Lactococcus lactis S (LMG P-23669) cuando se mantuvo en medio S, en comparación con Lactococcus lactis S (LMG P-23669) mantenida en medio MRS. Se inoculó leche ce soja + el 2% de glucosa añadida con 1X10^{7}/ml de Lactococcus lactis S que se mantuvo en medio S o que se mantuvo en medio MRS y se fermentó la leche de soja inoculada a 30º hasta un pH de 4,5.
\newpage
Se midió el contenido de ácido fítico en la leche de soja antes y tras la fermentación. Los resultados se presentan en la tabla 2.
TABLA 2
2
La tabla 2 demuestra que la L. lactis S (LMG P-23669) que se mantuvo en medio S induce una descomposición superior del factor antinutricional ácido fítico. La cantidad de ácido fítico en el análogo de producto lácteo se redujo en un 27% cuando se usó L. lactis S que se había mantenido en medio S en comparación con una reducción del 7% cuando se usó L. lactis S que se había mantenido en medio MRS. Este ejemplo indica además que hay aproximadamente un 20% más de ácido fítico degradado en el análogo de producto lácteo preparado con L. lactis S que se mantuvo en medio S que en un análogo de producto lácteo preparado con L. lactis S que se mantuvo en medio MRS. L. lactis S que se mantuvo en medio S puede aumentar la degradación de ácido fítico en un análogo de producto lácteo en un factor de al menos 3,86.
*Bifidobacterium infantis (LMG P-24096)
Aún en otro experimento, se adaptó Bifidobacterium infantis LMG P-24096 durante varios meses o bien en un medio S o bien en un medio MRS en condiciones anaerobias. Tras varios meses de cultivo, se determinó la actividad enzimática usando el kit tal como se definió anteriormente.
Los resultados del mismo indicaron que adaptando Bifidobacterium infantis (LMG P-24096) en un medio sustancialmente vegetal según la invención, se indujeron o aumentaron ciertas enzimas, por ejemplo \alpha-galactosidasa y \beta-glucosidasa. Estas enzimas no se indujeron cuando se adaptó la bacteria del ácido láctico en medio MRS.
El siguiente ejemplo ilustra por ejemplo el aumento de la actividad \alpha-galactosidasa y \beta-glucosidasa de Bifidobacterium infantis (LMG P-24096) cuando se mantuvo en medio S, en comparación con Bifidobacterium infantis (LMG P-24096) mantenida en un medio MRS.
Se inoculó leche de soja + 2,5% de rafinosa con 1X10^{7}/ml de B. infantis que se mantuvo en medio S o que se mantuvo en medio MRS y se fermentó la leche de soja inoculada a 37ºC en condiciones anaerobias.
Durante la fermentación, se midió el contenido en rafinosa antes y tras 6 horas de fermentación mediante B. infantis que se mantuvo en medio S o que se mantuvo en medio MRS. El cultivo de B. infantis adaptado al medio S mostró una descomposición superior de rafinosa debida al aumento de la actividad \alpha-galactosidasa: 6 horas tras el comienzo de la fermentación, B. infantis que se mantuvo en medio S había descompuesto el 6% de la rafinosa en comparación con la B. infantis que se mantuvo en medio MRS y que había descompuesto el 0,8% de la rafinosa. Este ejemplo indica que hay aproximadamente un 5,2% más de rafinosa degradada en el análogo de producto lácteo preparado con B. infantis que se mantuvo en medio S que en un análogo de producto lácteo preparado con B. infantis que se mantuvo en medio MRS. Este ejemplo indica además que B. infantis que se mantuvo en medio S puede aumentar la degradación de rafinosa en un análogo de producto lácteo en un factor de al menos 7,5.
Durante la fermentación, también se midió el contenido en isoflavonas antes y tras 6 horas de fermentación mediante B. infantis que se mantuvo en medio S o que se mantuvo en medio MRS. El cultivo de B. infantis adaptado al medio S mostró una transformación superior de la forma glucósido biológicamente inactiva de las isoflavonas con respecto a la forma aglucona biológicamente activa debido al aumento de la actividad \beta-glucosidasa: 6 horas tras el comienzo de la fermentación, B. infantis que se mantuvo en medio S había transformado el 98% de los glucósidos daidzina y genistina en las agluconas daidzeína y geisteína mientras que B. infantis que se mantuvo en medio MRS había transformado sólo el 89%. Este ejemplo indica que hay aproximadamente un 9% más de formas glucósidos de las isoflavonas que se transformaron en el análogo de producto lácteo preparado con B. infantis que se mantuvo en medio S que en un análogo de producto lácteo preparado con B. infantis que se mantuvo en medio MRS. Este ejemplo indica además que B. infantis que se mantuvo en medio S puede aumentar la transformación de forma(s) glucósido(s) (inactiva(s)) en forma(s) aglucona(s) (activa(s)) de isoflavonas en un factor de al menos 1,1.
Las actividades de las enzimas inducidas pueden correlacionarse con mejoras con respecto a las propiedades de calidad y organolépticas de análogos de productos lácteos producidos con las BAL.
Por ejemplo, las enzimas fosfatasa alcalina y fosfatasa ácida pueden desempeñar un papel en la degradación del ácido fítico, que es un factor antinutricional presente por ejemplo en la soja. El ácido fítico se une a minerales tales como Ca, Fe y Mg y por tanto reduce su biodisponibilidad. La degradación del ácido fítico aumenta por tanto la disponibilidad de tales minerales.
Otro ejemplo es el de la \beta-glucosidasa. Esta enzima transforma glucósidos en una unidad de glucosa y una aglucona. En una matriz de soja, la \beta-glucosidasa transformará la forma glucósido biológicamente inactiva de isoflavonas en un resto aglucona biológicamente activo. Un aumento de la actividad \beta-glucosidasa aumenta la biodisponibilidad de isoflavonas que están presentes en la soja en la forma glucósido.
Aún otro ejemplo es el de la \alpha-galactosidasa. Esta enzima puede descomponer rafinosa y estaquiosa. Éstos son azúcares no digeribles que están presentes normalmente en la leche de soja y que no pueden digerirse por seres humanos. Esto puede provocar una formación de gas no deseada en el tracto gastrointestinal. Un aumento de la descomposición de estos azúcares flatulentos en la leche de soja aumenta la digestibilidad por los consumidores.
Todavía otro ejemplo es la \alpha-quimotripsina. Esta enzima proteolítica tiene una función en la predigestión, formación de péptidos bioactivos, formación de aroma, formación de la estructura.
*Conclusión
En resumen, estos resultados indican que las bacterias del ácido láctico que se adaptan a un medio sustancialmente vegetal experimentan cambios metabólicos significativos. Sin embargo, estos cambios metabólicos de la cepa se invierten cuando la cepa se vuelve a adaptar a un medio que contiene compuestos de origen animal. Las enzimas inducidas desempeñan un papel en las mejoras de calidad, nutricionales y organolépticas de análogos de productos lácteos producidos con las presentes BAL.
2.2 Huellas genéticas de ADN usando análisis RAPD
Se realizó un análisis RAPD usando ADN de L. casei T (LMG P-23506) adaptada a un medio S y de L. casei T adaptada a un medio MRS. Para una definición de los medios S y MRS, véase el punto 2.1 anterior.
Los resultados de este análisis revelaron que los cultivos bacterianos no mostraron diferencias en su huella genética de ADN para los cebadores seleccionados. Los resultados indicaron además que la adaptación de las bacterias a un medio S en comparación con un medio MRS no indujo ninguna diferencia en un nivel de ADN (mutaciones) para los cebadores seleccionados, pero tal como se muestra adicionalmente en el punto 2.1 anterior, dio como resultado diferencias en los patrones de inducción y actividad enzimática y por tanto en la adaptación.
2.3 Patrones de proteínas usando SDS-page
Se realizó un análisis de SDS-PAGE unidimensional en Lactobacillus casei LMG 6904 y L. casei T (LMG P-23506) adaptadas a un medio S y en L. casei T adaptada a un medio MRS.
El patrón de proteínas de la L. casei T (LMG P-23506) adaptada al medio S era diferente del patrón de proteínas de los otros dos cultivos bacterianos, apuntando a una diferencia en la actividad enzimática entre los cultivos bacterianos estudiados debido a adaptación.
La figura 2 ilustra las diferencias en la expresión de proteínas. Las flechas apuntan a diferencias en la expresión de proteínas específicas. Tal como se muestra mediante la comparación de la figura 2A que muestra el perfil de SDS PAGE de L. casei T en medio S y la figura 2B que muestra el perfil de SDS PAGE de L. casei T en medio MRS, las diferencias en las expresiones de proteínas específicas se producen mediante adaptación al medio de adaptación respectivo. Tal como se muestra mediante la comparación de la figura 2A que muestra el perfil de SDS PAGE de L. casei T en medio S y la figura 2C que muestra el perfil de SDS PAGE de L. casei 6904, la cepa adaptada L. casei T se ha vuelto diferente de la cepa progenitora L. casei 6904 que se obtuvo de la colección de cultivos
BCCM.
En otro ejemplo, se realizó un análisis de SDS page bidimensional en el que se separaron proteínas según su tamaño y punto isoeléctrico (isoelectroenfoque). La figura 4 ilustra los resultados de tal análisis. Los resultados de este análisis de 2D para L. casei V (LMG-23504) que se hizo crecer en medio S (figura 4A) o medio MRS (figura 4B) demuestran la diferencia en la expresión de proteínas entre las dos muestras. En la figura 4, las flechas indican las diferencias entre ambos geles.
\newpage
2.4 Análisis del contenido celular total (FTIR-UATR) (Perkin Elmer)
Usando espectroscopía de infrarrojos, se estudió el contenido celular total de cuatro cultivos bacterianos. El contenido celular se considera como una característica para una cierta cepa en condiciones de crecimiento. Usando bases de datos, es posible identificar bacterias usando los espectros de IR.
En este experimento, se hicieron crecer Lactobacillus casei V (LMG P-23504), L. casei T (LMG P-23506), Lactococcus lactis S (LMG P-23669) y Lactococcus lactis LMG 9452 y se mantuvieron de varios modos incluyendo: 1) adaptadas a medio S; 2) adaptadas a medio MRS; 3) adaptadas a medio S y adaptadas de nuevo a medio MRS; y 4) adaptadas a medio MRS y adaptadas de nuevo a medio S.
Los resultados de este experimento mostraron diferencias significativas entre bacterias que se adaptaron a medio S y bacterias que se adaptaron a medio MRS. Los resultados se expresan en % de similitud (con una desviación estándar de \leq1%). La diferencia entre Lactobacillus casei V (LMG-23504) adaptada a medio S y adaptada a MRS fue del 3,5%. Cuando la L. casei V adaptada a S (VS) se volvió a adaptar a MRS (VSM) la diferencia era del 1,4%. Cuando la L. casei V adaptada a MRS (VM) se volvió a adaptar a medio S (VMS), la diferencia era del 3%. La figura 3 muestra una transición gradual en el espectro de IR típico cuando se comparan VS, VSM, VMS y VM.
La diferencia entre L. casei T (LMG P-23506) adaptada a medio S y adaptada a MRS era del 3,3%.
La diferencia entre Lactococcus lactis S (LMG P-23669) adaptada a medio S y adaptada a MRS era del 4,3%.
La diferencia entre Lactococcus lactis LMG 9452 adaptada a medio S y adaptada a MRS era del 3,1%.
Ejemplo 3 Estudios de fermentación
Los siguientes ejemplos ilustran que el uso de un cultivo de bacterias del ácido láctico que se han aislado, adaptado y cultivado según la presente invención permite mejorar la preparación del análogo de producto lácteo, y en particular mejorar (acelerar) su fermentación y por tanto reducir el tiempo de fermentación durante la preparación de un análogo de producto lácteo.
*Lactococcus lactis S (LMG P-23669)
Se prepararon cultivos de bacterias de Lactococcus lactis S (LMG P-23669) según la presente invención cultivando dicha cepa en un medio S o en un medio MRS, tal como se definió en el ejemplo 2. Entonces se usaron cantidades de inoculación similares, comparables a la escala de McFarland nº 5, de estos cultivos de bacterias para la fermentación de una composición a base de soja que consistía en un 85% en peso de leche de soja, un 2% en peso de fructosa y un 13% en peso de agua. Se determinó el tiempo necesario para obtener un valor de pH de 4,6. Tal valor de pH se considera como un valor "seguro" para suprimir el desarrollo de patógenos. Tal como se ilustra en la figura 1, el tiempo requerido para alcanzar este valor de pH usando un cultivo de bacterias de Lactococcus lactis S cultivadas en medio S fue aproximadamente 60 minutos más corto que cuando se usó un cultivo de bacterias de Lactococcus lactis S cultivadas en un medio MRS. Los resultados de este experimento indicaron por tanto que el uso de BAL que se hicieron crecer en un medio sustancialmente vegetal según la invención permite reducir los tiempos requeridos para la preparación (fermentación) de análogos de productos lácteos. En este ejemplo, el tiempo requerido para alcanzar un valor de pH que se considera como "seguro" para suprimir el desarrollo de patógenos se alcanza aproximadamente 1,2 veces más rápido cuando se usa una cepa de Lactococcus que se ha aislado, adaptado y cultivado en un medio 100% vegetal. Este ejemplo demuestra la ventaja tecnológica de la adaptación de la cepa de bacterias al medio S. El tiempo de fermentación durante la preparación de dicho análogo de producto lácteo puede reducirse en aproximadamente un 20%.
*Lactococcus lactis S (LMG P-23669)
Se prepararon cultivos de bacterias de Lactococcus lactis S (LMG P-23669) según la presente invención cultivando dicha cepa en un medio S o en un medio MRS, tal como se definió en el ejemplo 2.
Se inoculó leche de soja con un 2% de fructosa con 1X10^{7}/ml de Lactococcus lactis adaptada a medio S o MRS y se fermentó a 30º hasta que se alcanzó el pH crítico de 4,6. La figura 5 muestra que L. lactis S adaptada a medio S alcanzó el pH de 4,6 una hora más pronto que las bacterias de MRS que se hicieron crecer de manera tradicional. En este ejemplo, el tiempo requerido para alcanzar un valor de pH que se considera como "seguro" para suprimir el desarrollo de patógenos se alcanza aproximadamente 1,2 veces más rápido cuando se usa una cepa de Lactococcus que se ha aislado, adaptado y cultivado en un medio 100% vegetal. El tiempo de fermentación durante la preparación de dicho análogo de producto lácteo puede reducirse en aproximadamente un 20%. Este ejemplo demuestra la ventaja tecnológica de la adaptación de la cepa de bacterias al medio S.
*Lactobacillus casei V (LMG P-23504)
Se prepararon cultivos de bacterias de Lactobacillus casei V (LMG P-23504) según la presente invención cultivando dicha cepa en un medio S o en un medio MRS, tal como se definió en el ejemplo 2.
Se inoculó leche de soja con un 2% de glucosa añadida con 5X10^{7}/ml de L. casei V que se hizo crecer en medio S o MRS. Se realizó la fermentación a 37º hasta que se alcanzó el límite de pH seguro de 4,6. La figura 6 muestra que la L. casei V que se adaptó al medio S alcanzó ya el pH deseado de 4,6 tras 2,5 horas de fermentación, mientras que la L. casei V que se hizo crecer en MRS alcanzó este pH tras 6,5 horas de fermentación. El tiempo requerido para alcanzar este valor de pH usando un cultivo de bacterias de Lactobacillus casei V cultivadas en medio S fue aproximadamente 4 horas más corto que cuando se usó un cultivo de bacterias de Lactobacillus casei V cultivadas en un medio MRS. Por tanto, el tiempo requerido para alcanzar un valor de pH que se considera como "seguro" para suprimir el desarrollo de patógenos se alcanza más de 2 veces más rápido, y en este ejemplo 2,6 veces más rápido cuando se usó una cepa de Lactobacillus que se ha aislado, adaptado y cultivado en un medio 100% vegetal. El tiempo de fermentación durante la preparación de dicho análogo de producto lácteo puede reducirse en más del 100%. Este ejemplo demuestra la ventaja tecnológica de la adaptación de la cepa de bacterias al medio S.
*Bifidobacterium infantis (LMG P-24096)
Se prepararon cultivos de bacterias de Bifidobacterium infantis (LMG P-24096) según la presente invención cultivando dicha cepa en un medio S o en un medio MRS, tal como se definió en el ejemplo 2.
Se inoculó leche de soja con un 2,5% de rafinosa con 1X10^{7}/ml de B. infantis adaptada a medio S o MRS y se fermentó a 37º en condiciones anaerobias. La figura 7 muestra que B. infantis adaptada al medio S crece más rápido que el cultivo en MRS. Tras 6 horas, se detuvo la fermentación porque la B. infantis se inhibe a sí misma debido a un pH en descenso.
Durante la fermentación, B. infantis se inhibe a sí misma debido a un pH en descenso y a la formación de ácido láctico y acético. Para examinar la capacidad de formación de ácido sin un efecto inhibidor del pH en descenso, se repitió la prueba de fermentación descrita anteriormente pero se mantuvo el pH constante a 5,9 mediante la adición de NaOH 1 M.
La figura 8 demuestra que B. infantis que se adaptó al medio S alcanzó un pH de 5,9 aproximadamente 3,5 horas más pronto que B. infantis que se adaptó a medio MRS y que se consumió más NaOH durante la fermentación. Esto demuestra la velocidad de crecimiento superior y la capacidad de formación de ácido superior de B. infantis, cuando se adaptó a medio S. Por tanto, el tiempo requerido para alcanzar un valor de pH de 5,9 se alcanza más de 2 veces más rápido, y en este ejemplo 2,2 veces más rápido cuando se usa una cepa de B. infantis que se ha aislado, adaptado y cultivado en un medio 100% vegetal. Este ejemplo demuestra la ventaja tecnológica de la adaptación de la cepa de bacterias al medio S.

Claims (25)

1. Método para preparar un análogo de producto lácteo que comprende las etapas de:
a) aislar una o más bacterias del ácido láctico de su entorno natural o de una colección de cultivos en un medio de aislamiento libre de componentes animales adecuado;
b) adaptar dichas bacterias aisladas haciendo crecer dichas bacterias en un medio de adaptación libre de componentes animales adecuado;
c) cultivar dichas bacterias adaptadas en un medio de cultivo libre de componentes animales adecuado y
d) preparar un análogo de producto lácteo añadiendo a dicho análogo de producto lácteo como material de partida una cantidad adecuada de bacterias obtenidas en la etapa c);
en el que las etapas a) a d) se llevan a cabo en condiciones libres de componentes animales.
2. Método según la reivindicación 1, en el que la etapa d) comprende fermentar un análogo de producto lácteo añadiendo a dicho análogo de producto lácteo como material de partida una cantidad adecuada de bacterias obtenidas en la etapa c).
3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho medio de aislamiento, adaptación y cultivo libre de componentes animales son medios 100% vegetales.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dichos medios de aislamiento, adaptación y cultivo comprenden entre el 0,1 y el 10% en peso de una peptona vegetal, preferiblemente un digesto papaico de proteína de soja.
5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dichos medios comprenden además entre el 0,1 y el 10% en peso de un componente de levadura, preferiblemente un extracto de células de levadura.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dichos medios comprenden además entre el 0,1 y el 10% en peso de un agente tamponante, preferiblemente un tampón fosfato, que mantiene dicho medio a un pH de entre 5 y 8.
7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dichos medios comprenden además entre el 0,1 y el 10% en peso de un hidrato de carbono fermentable derivado de vegetal.
8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dichas bacterias del ácido láctico se seleccionan de los géneros Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium y Streptococcus.
9. Método según la reivindicación 8, en el que dichas bacterias del ácido láctico se seleccionan del grupo que comprende Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, o Lactococcus lactis, o Streptococcus salivarius spp. thermophilus.
10. Método según la reivindicación 8 ó 9, en el que dichas bacterias del ácido láctico comprenden Lactobacillus casei V (LMG P-23504), Lactobacillus casei W (LMG P-23505), Lactobacillus casei T (LMG P-23506), Lactococcus lactis S (LMG P-23669) Bifidobacterium infantis S (LMG P-24096) y/o Streptococcus salivarius ssp. thermophilus (LMG P-24095).
11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que dicho análogo de producto lácteo es un producto alimenticio vegetal, un ingrediente alimenticio vegetal o un alimento funcional vegetal.
12. Método según la reivindicación 11, en el que dicho análogo de producto lácteo se deriva de la soja.
13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 12, en el que se reduce el tiempo de fermentación durante la preparación de dicho análogo de producto lácteo.
14. Análogo de producto lácteo obtenible mediante el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13.
15. Análogo de producto lácteo según la reivindicación 14, que tiene una cantidad reducida de ácido fítico.
16. Análogo de producto lácteo según la reivindicación 14 o 15, que tiene una cantidad reducida de rafinosa.
17. Análogo de producto lácteo según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, que tiene una cantidad aumentada de formas agluconas de isoflavonas.
18. Cultivo de bacterias que comprende una o más bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado haciéndolas crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal, respectivamente.
19. Bacterias del ácido láctico que se han aislado y adaptado haciéndolas crecer en un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal, respectivamente.
20. Bacterias del ácido láctico según la reivindicación 19, que muestran un aumento en la actividad de una o más enzimas en comparación con bacterias del ácido láctico que no se han hecho crecer sobre un medio de aislamiento y adaptación 100% vegetal.
21. Bacterias del ácido láctico según la reivindicación 20, en las que dichas enzima(s) se selecciona(n) del grupo que comprende fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina, \alpha-quimotripsina, \alpha-galactosidasa y \beta-glucosidasa.
22. Cultivo de bacterias según la reivindicación 18 o bacterias del ácido láctico según cualquiera de las reivindicaciones 19-21, siendo dicho medio vegetal tal como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 3-7.
23. Cultivo de bacterias según la reivindicación 18 o bacterias del ácido láctico según cualquiera de las reivindicaciones 19-21, siendo dichas bacterias del ácido láctico tal como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones 8-10.
24. Uso de un cultivo de bacterias según cualquiera de las reivindicaciones 18, 22 ó 23 o bacterias del ácido láctico según cualquiera de las reivindicaciones 19-21 para mejorar la preparación de análogo de producto lácteo.
25. Uso de un cultivo de bacterias según cualquiera de las reivindicaciones 18, 22 ó 23 o bacterias del ácido láctico según cualquiera de las reivindicaciones 19-21 para reducir el tiempo de fermentación durante la preparación de un análogo de producto lácteo.
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