ES2310382T3 - Virus herpes modificado geneticamente para el tratamiento de tumores. - Google Patents
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Abstract
Virus herpes simple (HSV) modificado en el que dicha modificación comprende una alteración de una única copia de un gen gamma1 34.5, que hace que esa copia del gen sea incapaz de expresar un producto génico activo, para su uso en un método para tratar el cáncer.
Description
Virus herpes modificado genéticamente para el
tratamiento de tumores.
La presente invención se refiere generalmente a
virus Herpes simple modificados para su uso como tratamiento
terapéutico en tumores.
El desarrollo de virus como antineoplásicos ha
sido una estrategia intrigante e incluso difícil de alcanzar. El
objetivo de la terapia vírica antineoplásica es inocular un pequeño
porcentaje de células tumorales con virus capaces de replicarse lo
da como resultado la replicación vírica en las células tumorales
diana seguida de la lisis celular (oncolisis) e infección de las
células tumorales circundantes. Una clave para la oncolisis vírica
es la modificación genética del virus de manera que tal replicación
se dé principalmente en células tumorales y no en el tejido normal
circundante. Muchas estrategias se han centrado en el uso de virus
genéticamente modificados para la oncolisis. Por ejemplo, en un
enfoque, se crearon retrovirus atenuados, modificados para
codificar para la timidín cinasa del virus herpes simple (HSV), para
que seleccionaran como diana células tumorales en división [Culver,
et al., Science 256: 1550-1552 (1992); Ram,
et al. Nat. Med. 3: 1354-1361 (1997)]. En
esta técnica, sin embargo, la infección vírica de células tumorales
fue limitada ya que sólo del 10 al 15% de las células tumorales
estaba progresando de manera activa a través del ciclo celular. En
otro enfoque, se diseñaron adenovirus condicionados capaces de
replicarse (con deleción de E1b) para replicarse sólo en células
tumorales sin p53, sin embargo se estima que sólo el 50% de tumores
contienen p53 no funcional [Bischoff, et al., Science 274:
373-376 (1996); Heise, et al. Nat. Med. 3:
639-645 (1997); Hollstein, et al., Science
253: 49-53 (1991)]. El éxito de estas estrategias,
por tanto, se ha limitado experimentalmente sólo a pequeños
xenoinjertos tumorales.
Recientemente, se han propuesto HSV capaces de
replicarse modificados genéticamente para tratar gliomas malignos
[Martuza, et al., Science 252: 854-856
(1991)]. En la terapia antiglioma, se construyeron mutantes de
HSV-1 para replicarse de manera preferente en
células tumorales que proliferan eliminando así el riesgo de
diseminación generalizada del virus en el sistema nervioso central,
que se observa en casos raros de encefalitis por HSV en seres
humanos. Las primeras estrategias se centraron en la deleción de
genes víricos que codificaban para enzimas requeridas para la
síntesis de ADN vírico (por ejemplo, timidín cinasa, ribonucleótido
reductasa [Martuza, et al., Science 252:
854-856 (1991); Mineta et al., Cancer Res.
54: 3963-3966 (1994)]. Los estudios más recientes
se centraron en el uso de mutantes de HSV que carecían del gen
identificado recientemente \gamma_{1}34.5 implicado en la
neurovirulencia [Chou, et al., Science 250:
1262-1266 (1990); Chou, et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. (EE.UU.) 89: 3266-3270 (1992); Chou,
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (EE.UU.) 92:
10516-10520 (1995); Andreansky, et al.
Cancer Res. 57: 1502-1509 (1997)]. Sin embargo, la
combinación de los resultados anteriores sugirió que un descenso en
el potencial proliferativo vírico necesario para una inoculación
intracraneal de HSV segura se correlacionaba con un descenso en el
potencial oncolítico del virus [Advani, et al. Gene Ther. 5:
160-165 (1998)]. No se han estudiado los efectos
terapéuticos potenciales de un HSV modificado genéticamente, que
tiene una eficacia antitumoral más potente de la que es posible para
una inoculación intracraneal, en modelos de tumores humanos
comunes.
El HSV ofrece muchas ventajas como agente
oncolítico. El virus se replica bien en una gran variedad de células
cancerígenas y destruye las células en las que se replica. El virus
puede atenuarse introduciendo deleciones específicas y tolera la
inserción y la expresión de genes extraños [Meignier, et al.,
J. Infect. Dis. 158: 602-614 (1988)]. Además, se
conocen las funciones de muchos genes víricos de HSV [Shih, et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. (EE.UU.) 81:
5867-5870 (1984); Roizman, Proc. Natl. Acad. Sci.
(EE.UU.) 93: 11307-11312 (1996)]. Sin embargo, las
propiedades indeseables de HSV, incluyen la neuroinvasividad, la
capacidad para establecer latencia, y la capacidad para reactivarse
desde un estado latente.
Un trabajo anterior ha demostrado los efectos
interactivos de la capacidad citolítica del HSV modificado al que
le faltan ambos genes \gamma_{1}34.5 y la radiación ionizante
sobre xenoinjertos de glioma [Advani, et al. Gene Ther. 5:
160-165 (1998)]. La radiación ionizante combinada
con la inoculación de virus de HSV deficientes en
\gamma_{1}34.5 resultó en una reducción
supra-aditiva en el volumen del xenoinjerto tumoral
y en una mejora en la proliferación vírica y la distribución
intra-tumoral en xenoinjertos de glioma.
En Proc. Natl. Acad. Sci. (EE.UU.) vol. 92,
1411-1415, 1995, se utilizan mutantes de HSV que
tienen o bien una deleción en ambos genes \gamma_{1}34.5, o un
codón de parada en ambos genes \gamma_{1}34.5, en el
tratamiento de un tumor.
La R7020 es una de tales cepas de HSV atenuadas
mediante modificación genética y ensayada en una variedad de
modelos de roedores, conejos y primates no humanos [Meignier, et
al., J. Infect. Dis. 158: 602-614 (1988);
Meignier, et al., J. Infect. Dis. 162:
313-321 (1990)] que han demostrado que la
infectividad vírica se atenúa en todas las especies ensayadas. Una
propiedad clave de interés en esta cepa es la carencia de
neuroinvasividad incluso en las especies más susceptibles ensayadas
hasta la fecha. La R7020 es una cepa de HSV modificada diseñada
como un candidato para la inmunización humana frente a infecciones
por HSV-1 y HSV-2 [Meignier, et
al., Infect. Dis. 158: 602-614 (1988)].
Originalmente producida para ser una vacuna vírica viva atenuada
frente a la infección por HSV, se ha examinado la R7020 para
evaluar su seguridad y estabilidad en estudios con roedores y
primates [Meignier, et al., J. Infect. Dis. 158:
602-614 (1988); Meignier, et al., J. Infect.
Dis. 162: 313-321 (1990)]. La construcción de R7020
se ha descrito previamente [Meignier, et al., J. Infect. Dis.
158: 602-614 (1988); y patente de los EE.UU.
concedida a Roizman, número 4.859.587, incorporada en el presente
documento mediante referencia]. Brevemente, el ADN de HSV de tipo
natural consiste en dos regiones de secuencias de ADN de doble
cadena únicas flanqueadas por repeticiones invertidas [Roizman,
et al., Proc Natl. Acad. Sci. (EE.UU.) 93:
11307-11312 (1996)]. Las regiones de repeticiones
invertidas contienen dos copias de cinco genes designados
\alpha0,\alpha4, \gamma_{1}34.5, ORF P y ORF O. La R7020
contiene un fragmento de ADN de HSV-2 insertado en
lugar de un conjunto de las repeticiones y por tanto carece sólo de
una de las dos copias del gen \gamma_{1}34.5. Un trabajo
anterior ha demostrado que, en ciertas líneas celulares, la R7020 se
replica de manera más eficaz que los virus que carecen de ambas
copias del gen \gamma_{1}34.5. [Advani, et al. Gene
Ther. 5: 160-165 (1998)]. Hasta la fecha, la R7020
se ha sometido a pruebas limitadas en seres humanos.
Una de las causas del fallo en la terapia frente
al cáncer es la resistencia de las células tumorales frente a los
tratamientos citotóxicos y/u hormonales convencionales que surge de
la inestabilidad genética producida por estos agentes y la
inestabilidad inherente de las células tumorales. Por ejemplo, la
deleción o mutación del gen p53 puede reducir la susceptibilidad de
la célula tumoral a la apoptosis inducida mediante quimioterapia y/o
radiación [Houldsworth, et al., Oncogene 16:
2345-2349 (1998); Aas. et al. Nat. Med. 2:
811-814 (1998); Lowe, et al., Science 266:
807-810 (1994); Dalta, et al., Cell Growth
Differ. 6: 363-370 (1995)] y las mutaciones en el
receptor de andrógenos conducen a la resistencia hormonal en el
cáncer de próstata. Además, las mutaciones de "aumento de la
función", tales como la activación de la familia
bc1-2 de genes, mejoran la resistencia frente a una
variedad de terapias citotóxicas. Además de la inestabilidad
genética intrínseca de las células tumorales, las terapias
antineoplásicas empleadas comúnmente que se basan en el daño al ADN
de células tumorales son mutagénicas y una consecuencia del
tratamiento antineoplásico es la selección y el desarrollo de una
resistencia frente a agentes que dañan el ADN. Un beneficio de
utilizar la lisis vírica como estrategia antitumoral es que la
lisis vírica tiene el potencial de superar la resistencia tumoral
frente a los agentes convencionales. Como la infección de células
tumorales con herpes con componente de replicación da como resultado
la lisis celular y no es mutagénica en sí, es menos probable que
ocurra un desarrollo selectivo de las células tumorales para evadir
al herpes dentro de la población de células tumorales.
Por tanto, existe una necesidad en la técnica de
identificar y desarrollar agentes terapéuticos víricos para
retrasar y/o reducir el crecimiento tumoral en pacientes con
necesidad de los mismos.
La presente invención describe métodos para
tratar el cáncer que comprende las etapas de administrar a un
individuo con necesidad de los mismos una cantidad eficaz de un
virus Herpes simple (HSV) que comprende un genoma de HSV
modificado. Específicamente, la presente invención proporciona un
virus herpes simple (HSV) modificado, en el que dicha modificación
comprende una alteración de una única copia de un gen
\gamma_{1}34.5 que hace que esa copia del gen sea incapaz de
expresar un producto génico activo, para su uso en un método para
tratar el cáncer. La invención incluye el uso de cepas de HSV en las
que la modificación de la región de repetición invertida del genoma
comprende una alteración de una copia de un gen \gamma_{1}34.5
que hace que esa copia del gen sea incapaz de expresar un producto
génico activo. En una realización preferida, la invención comprende
el uso de una cepa de HSV en la que la alteración del gen
\gamma_{1}34.5 comprende (i) una inserción de una secuencia de
ADN que comprende uno o más nucleótidos en la región codificante o
la región reguladora del gen o (ii) una deleción de toda o parte de
la región codificante o la región reguladora del gen. La invención
también incluye el uso de cepas de HSV en las que el genoma de HSV
modificado comprende además una alteración en una región única del
genoma de HSV.
La invención incluye composiciones para el
tratamiento de cáncer del sistema nervioso no central así como de
cáncer del sistema nervioso central.
La presente invención proporciona composiciones
para tratar una variedad de tumores que incluyen tumores del
sistema nervioso no central y tumores con origen en el sistema
nervioso central. El tratamiento implica infectar tumores diana con
virus herpes simple modificado genéticamente tal como se hizo
alusión anteriormente en el presente documento en "sumario de la
invención". En una realización preferida, la modificación del
genoma del virus herpes simple comprende la deleción de una copia
de la secuencia de repetición interna del gen vírico cuya región
comprende una copia de cada uno de los genes \alpha0, \alpha4,
ORFO, ORFP y \gamma_{1}34.5. Los virus herpes simple útiles en
la práctica de la invención se atenúan con respecto a los virus
herpes simple de tipo natural pero son más capaces de replicarse
que los virus que tienen ambas copias de la región de repetición
invertida modificadas (para hacer que la región sea incapaz de
expresar un producto génico real de uno cualquiera de los diversos
genes) o delecionadas. Los virus útiles en la práctica de la
presente invención pueden tener alteraciones adicionales en su
genoma que pueden incluir la inserción de secuencias expresables
codificantes de una proteína no natural bajo el control de
promotores del virus herpes simple que a su vez permite que la
secuencia se regule como una clase a, \beta o \gamma de genes de
virus herpes simple que se conocen bien en la técnica. [Véase, por
ejemplo, Fundamental Virology, segunda edición, Field et al.
(eds.) capítulos 33-34, Raven Press Ltd., Nueva
York (1991) incorporado en el presente documento mediante
referencia]. Los virus que carecen de una repetición interna pueden
atenuarse adicionalmente, si fuera necesario, mediante la deleción
de uno o más de los otros 46 genes (distintos de aquéllos a los que
se ha hecho alusión anteriormente en el presente documento, es
decir, \alpha0, \alpha4, ORFO, ORFP, y \gamma_{1}34.5) que
se ha encontrado que son prescindibles para la replicación vírica
en cultivo [Roizman, Proc. Natl. Acad. Sci. (EE.UU.) Vol. 93,
páginas 11307-11312 (1996)]. Entre los genes
adecuados para la deleción para disminuir adicionalmente la
virulencia se encuentran los genes U_{L}16, U_{L}40, U_{L}41,
U_{L}55, U_{L}56, \alpha22, U_{S}4, U_{S}8, y U_{S}11.
La deleción de prácticamente cualquiera de los genes
"prescindibles" reducirá la virulencia mediante un factor que
oscila desde la duplicación hasta diversos valores logarítmicos.
Además, pueden alterarse adicionalmente virus candidatos que
carecen de repeticiones invertidas internas mediante la adición de
citocinas, así como enzimas que activan profármacos.
Los herpes virus útiles en la práctica de la
invención pueden prepararse utilizando métodos bien conocidos en la
técnica tales como los métodos descritos en la patente de los EE.UU.
nº 4.859.587 y en la patente de los EE.UU. nº 5.288.641.
Los ejemplos expuestos a continuación describen
el uso de la cepa de virus herpes simple de tipo
HSV-1 R7020 para reducir el tamaño tumoral en
ratones. El uso de ratones como modelos para el tratamiento de
enfermedades que generan tumores es bien conocido y está
ampliamente aceptado en la técnica. El ejemplo 1 describe la
estructura de la cepa de HSV-1 R7020 cepa de virus
que es ilustrativa de los tipos de virus genéticamente modificados
que son útiles en la práctica de la presente invención. El ejemplo 2
describe el uso de un HSV-1 modificado para reducir
el volumen tumoral de una línea celular de un carcinoma epidérmico
injertado en ratones.
El ejemplo 3 describe la cinética de la
replicación vírica en los xenoinjertos de carcinoma epidérmico
descritos en el ejemplo 1. Los experimentos descritos en el ejemplo
4 establecen que el carcinoma epidérmico que surge de las células
tumorales residuales mantiene su susceptibilidad a la infección
mediante la R7020 de HSV-1.
Los siguientes ejemplos se presentan a modo
ilustrativo y no pretenden limitar el alcance de la invención tal
como se describe en las reivindicaciones adjuntas.
Ejemplo
1
La estructura de R7020 (nº de registro de la
A.T.C.C.: VR2123, depositado el 10 de diciembre de 1985) tal como
se describe anteriormente [Meigner, et al., J. Infect. Dis.
158: 602-614 (1988)] incluye una inserción que
comprende un fragmento de HindIII de ADN de HSV-2
que engloba las secuencias génicas que codifican para diversas
glucoproteínas insertadas en la región de unión del genoma de HSV
parental. Un análisis detallado de la estructura de R7020 reveló
diferencias de las notificadas por Meignier, et al. tal como
se describe a continuación.
En primer lugar, la inserción de la secuencia de
HSV-2 deja intacto el gen U_{L}55 de
HSV-1 parental, mientras que informes previos
mostraron que se delecionaba parte del gen U_{L}55. Sin embargo,
el gen U_{L}55 no tiene una función conocida y probablemente no
afecta a la seguridad del virus. Además la región de U_{L}55 va
precedida de 300 pb de "secuencia desconocida" en la región de
unión. Tal como se notificó anteriormente, la región de U_{L}56
que se ha implicado en la patogénesis [Kehm, et al., Virus
Res 40: 17-40 (1996)] no se encontró en la
secuencia correcta.
En segundo lugar, las secuencias de U_{L}56
están duplicadas en la región de unión, lo que probablemente
conduce al surgimiento de genomas defectuosos de manera predecible y
reproducible. Se sabe que los genomas defectuosos surgen de manera
espontánea en las reservas de HSV-1 con pases a
multiplicidad elevada y los genomas defectuosos en R7020 surgen de
una manera más reproducible y frecuente. Sin embargo, el pase a baja
multiplicidad de infección, como es habitual, minimiza la
acumulación de genomas defectuosos.
En otra diferencia, en R7020 sólo se hallaron
5.229 pb de las 9.629 pb predichas originalmente de la secuencia de
HSV-2.
Ejemplo
2
En una primera serie de experimentos, se
inyectaron células SQ-206, una línea celular de
carcinoma epidérmico resistente a la quimioterapia/radiación que
expresa un p53 no funcional, o células PC-3, una
línea celular de adenocarcinoma de próstata p53^{+}
hormonoindependiente en las patas traseras de ratones desnudos.
SQ-20b es una línea celular de cáncer epidérmico
aislada de una patente tras radioterapia tal como se describe en
otra parte [Hallahan, et al. Nat. Med. 1:
786-791 (1995)]. Se obtuvo la línea celular
PC-3 de la Colección Americana de Cultivos Tipo
(A.T.T.C. nº CRL 1435, Manassas, VA). Se emplearon grandes
xenoinjertos tumorales para aproximarse a la masa relativa de
cánceres humanos clínicamente evidentes y localmente avanzados. A
diferencia de estudios iniciales llevados a cabo con una masa
tumoral de aproximadamente 100 mm^{3}, los experimentos en esta
serie se llevaron a cabo con tumores que tenían un volumen inicial
medio de 630 mm^{3} que corresponden aproximadamente al 3% del
peso del ratón [Ram, et al. Nat. Med.
3:1354-1361 (1997)].
Brevemente, se suspendieron las células
tumorales SQ-20b en cantidades de 5 x 10^{5}
células por ratón en 100 \mul de solución salina tamponada con
fosfato (PBS) estéril, se inyectaron en la pata trasera derecha de
ratones nu/nu atímicos de 5 o 6 semanas de edad, y crecieron hasta
un tamaño tumoral de 200 a 1.000 mm^{3}. El modelo en pata
trasera de ratón se ha descrito con detalle en otra parte [Advani,
S.J. et al. Gene Ther. 5, 160-165 (1998)].
Tal como se notificó anteriormente, su mayor ventaja es que permite
la medición de los efectos sobre agentes oncolíticos sin recurrir a
procedimientos invasivos. El modelo previamente descrito se
modificó para aumentar el tamaño medio del xenoinjerto de 100 a 600
mm^{3} en el momento en que comenzó el tratamiento con inyección
de virus, para aumentar la proporción de células con respecto a
virus y aproximarse más al tamaño del tumor en situaciones
clínicamente relevantes.
Se dividió a los ratones en dos grupos de
tratamiento de manera aleatoria: (a) controles a los que se
administró 10 \mul de una solución tampón y (b) ratones a los que
se administró 2 x 10^{6} unidades formadoras de placa (ufp) de
R7020 en 10 \mul de tampón con una jeringuilla Hamilton. El virus
R7020 genéticamente modificado se deriva de
HSV-1(F) que es el virus
HSV-1 prototipo [Meignier, et al.,
supra]. La R7020 carece de U_{L}24, U_{L}56, y un
conjunto de repeticiones invertidas que codifican para una copia de
los genes \alpha0, \alpha4, \gamma_{1}34.5, ORFP y ORFO. La
región delecionada de la repetición invertida interna de
HSV-1(F) se reemplazó por un fragmento de
ADN que codifica para glucoproteínas G, J, D e I de
HSV-2 [Meignier, et al., J. Infect. Dis.
158: 602-614 (1988)]. Se tituló el virus en células
Vero (Colección Americana de Cultivos Tipo, Manassas, VA) tal como
se describe en otra parte [Chou, et al., Science 250:
1262-1266 (1990)]. La masa tumoral se midió
bisemanalmente o hasta que el volumen tumoral alcanzó los 2.000
mm^{3}. Se calcularon los volúmenes tumorales utilizando la
fórmula (largo x ancho x alto)/2 que se deriva de la fórmula de un
elipsoide (\deltad^{3})/6. Se llevaron a cabo estudios en
animales según un protocolo aprobado por el Centro de Recursos
Animales (Animal Resource Center) de la Universidad de Chicago. Se
definió la fracción de volumen tumoral como el volumen tumoral en
un punto específico de tiempo dividido por el volumen inicial
(V/V_{0}). Se sacrificaron los animales cuando el volumen tumoral
superaba los 2.000 mm^{3}. Se llevaron a cabo experimentos
similares con PC-3, con la única excepción de que
se inyectaron 2 x 10^{7} células en 100 \mul de PBS por
xenoinjerto.
Los resultados indicaron que los xenoinjertos de
SQ-20b tratados con R7020 empezaron a experimentar
una regresión a los 13 días de la infección y alcanzaron el punto
más bajo (nadir) a los 41 días postinfección, momento en el cual la
reducción del volumen tumoral media era de hasta un quinto del
volumen tumoral inicial. El setenta y dos por ciento (8 de 11) de
los xenoinjertos tumorales experimentó una regresión inferior al 10%
del volumen tumoral inicial al día 41, y 7 de estos 8 mantuvieron
el tamaño reducido durante más de 80 días.
La R7020 también fue eficaz en la regresión del
volumen tumoral de xenoinjertos de adenocarcinoma de próstata de
PC-3. El volumen tumoral fraccional llegó al punto
más bajo aproximadamente a los 20 a 30 días después de la
infección. La R7020 también fue eficaz para producir la regresión de
un xenoinjerto tumoral de
adenocarcinoma-hepatoma.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Con el fin de valorar la cinética de la
replicación vírica en los xenoinjertos de SQ-208, se
llevaron a cabo los siguientes procedimientos. Se inyectaron
xenoinjertos de SQ20 con 2 x 10^{6} ufp de R7020 o con solución
salina tamponada. Los ratones inyectados con el virus se dividieron
en dos grupos. Un grupo se sacrificó en momentos específicos. Los
tumores se recogieron de manera aséptica en puntos de tiempo
específicos tras la infección, se congelaron rápidamente en
nitrógeno líquido, y se almacenaron a -70ºC. Se homogeneizaron los
tumores en 1 ml de 199V y 1 ml de leche desnatada estéril durante 20
segundos sobre hielo utilizando un homogeneizador de tejidos
Polytron (Kinematics, Suiza). Se sometió a sonicación el
homogeneizado tres veces durante 15 segundos cada vez y se tituló
el virus en células Vero.
Se analizaron los volúmenes tumorales en ratones
inyectados con solución salina y los del segundo grupo de ratones
tratados de manera idéntica inyectados con virus para determinar el
volumen tumoral. Como en el experimento descrito en el ejemplo 2,
los tumores inyectados con solución salina tamponada crecieron
exponencialmente mientras que los tumores inyectados con virus
experimentaron una regresión. Los títulos víricos alcanzaron un
pico a los siete días de la infección con 124 x 10^{5} ufp/tumor,
es decir, un aumento de virus de 62 veces con respecto a la
cantidad inyectada en los tumores. Se recuperaron cantidades
significativas de virus (superiores a 10^{5} ufp) aún a los 30
días tras la infección.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Con el fin de valorar la capacidad de las
células tumorales SQ-20b para hacerse resistentes a
los efectos oncolíticos de R7020, se llevaron a cabo los siguientes
experimentos.
Los tumores crecieron tal como se describió
anteriormente. Cuando los tumores eran de más de 200 mm^{3}, se
inyectaron con 2 x 10^{6} ufp de R7020 en 10 \mul de tampón en
el día 0. Los tumores se midieron bisemanalmente. A medida que los
tumores volvían a crecer hasta su volumen tumoral inicial (volumen
en el día 0), se dividieron aleatoriamente y se volvieron a
inyectar o bien con 10 \mul de tampón, 2 x 10^{6} ufp de R7020,
o bien con 2 x 10^{6} ufp de HSV-1(F) en
el mismo volumen de tampón. Los animales con volúmenes tumorales
superiores a 200 mm^{3} se sacrificaron siguiendo directrices
institucionales.
Los resultados indicaron que los tres tumores
reinyectados con tampón siguieron aumentando de tamaño. El volumen
tumoral fraccional disminuyó tras la segunda inyección vírica o bien
de R7020 o bien de HSV-1(F). Los tumores
siguieron mostrando sensibilidad frente a la oncolisis vírica
durante dos ciclos de inyección de R7020 y no experimentaron
recurrencia durante al menos 120 días desde el inicio del
experimento. Los ratones reinyectados con
HSV-1(F) murieron a las cuatro a seis semanas
tras la inyección de virus de tipo natural, mientras que los
ratones reinyectados con R7020 prosperaron. Por tanto, los tumores
de SQ-20b que surgen de células residuales en
tumores previamente tratados con R7020 mantienen su susceptibilidad
a la infección.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Estudios iniciales en xenoinjertos de glioma han
demostrado que la combinación de irradiación y administración de un
HSV atenuado da como resultado una destrucción de células tumorales
mejorada, así como una replicación vírica mejorada [Advani, et
al. Gene Ther. 5:160-165 (1998)]. Para
determinar si la irradiación de las líneas celulares de
SQ-206 resistentes a la radiación aumentaba el
efecto oncolítico de la R7020, se infectaron xenoinjertos tal como
se describió anteriormente y se sometieron a un protocolo de
irradiación fraccionada tal como se describe a continuación.
La irradiación de xenoinjertos se llevó a cabo
tal como se describe en otra parte [Advani et al. Gene Ther.
5:160-165 (1998)]. Brevemente, se expusieron patas
traseras con tumores a radiación ionizante utilizando un generador
maxitron GE 250 kv (191 cGy/min., 150 kVp). Se administró
irradiación empezando a las seis horas tras la infección con R7020
en fracciones de 400 cGy los lunes, martes, jueves y viernes durante
dos semanas hasta una dosis máxima de 3.200 cGy. La irradiación
fraccionada se administró en dosis empleadas de manera rutinaria en
protocolos clínicamente relevantes.
Los resultados indican que la irradiación sola
dio como resultado un modesto retraso en el crecimiento del
xenoinjerto en comparación con tumores control confirmando la
resistencia a la radiación de la línea celular de
SQ-206. Mientras que la reducción del volumen
tumoral no se produjo hasta 13 días después de la infección con
R7020 de los xenoinjertos, tal como se describe en el ejemplo 2, la
combinación de la irradiación con R7020 dio como resultado una
regresión del volumen tumoral una semana antes que los tumores
tratados con R7020 sola. Además, el punto más bajo en el volumen
tumoral se produjo significativamente antes en xenoinjertos que
recibieron tanto irradiación como R7020 en comparación con
xenoinjertos que recibieron R7020 sola (día 20 frente a día
30).
Estos resultados demuestran por primera vez la
eficacia antitumoral espectacular de R7020 en el tratamiento de
tumores humanos experimentales con frecuencia resistentes a los
tratamiento de cáncer comunes y sugieren que, mientras que la R7020
es un agente antitumoral eficaz de por sí, la combinación de la
irradiación con R7020 también proporciona una destrucción de
células tumorales más rápida y completa. La combinación de la
irradiación con HSV atenuado como terapia antineoplásica puede
resultar ser especialmente beneficiosa en situaciones clínicas en
las que la carga tumoral pueda ser demasiado grande para una terapia
de agente único.
Claims (7)
1. Virus herpes simple (HSV) modificado en el
que dicha modificación comprende una alteración de una única copia
de un gen \gamma_{1}34.5, que hace que esa copia del gen sea
incapaz de expresar un producto génico activo, para su uso en un
método para tratar el cáncer.
2. HSV según la reivindicación 1, en el que
dicho método comprende las etapas de administrar a un individuo que
necesita del mismo una cantidad eficaz de dicho HSV.
3. HSV según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, en el que la alteración del gen
\gamma_{1}34.5 comprende una inserción de una secuencia de ADN
que comprende uno o más nucleótidos en la región codificante o la
región reguladora del gen.
4. HSV según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 ó 2, en el que la alteración del gen
\gamma_{1}34.5 comprende una deleción de toda o parte de la
región codificante o la región reguladora del gen.
5. HSV según las reivindicaciones 1, 2, 3 ó 4,
en el que el genoma de HSV modificado comprende además una
alteración en una región única del genoma de HSV.
6. HSV según las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó
5, en el que el cáncer es un cáncer del sistema nervioso no
central.
7. HSV según la reivindicación 1, 2, 3, 4 ó 5,
en el que el cáncer es un cáncer del sistema nervioso central.
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