ES2309324T3 - Dispositivo de ensayo accesible y metodo de uso. - Google Patents
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Abstract
Un dispositivo para pruebas de ensayo de flujo lateral para la detección de analitos buscados en una muestra, incluyendo dicho dispositivo un elemento receptor de muestras y comprendiendo: un miembro de alojamiento que tiene dos brazos conectados mediante una parte extendida, definiendo con ello generalmente una forma de C y formando un espacio abierto (31) entre dichos dos brazos, teniendo también dicho alojamiento un espacio interior descubierto en un lado de dicho miembro de alojamiento; y un elemento (39) de cubierta de dicho miembro de alojamiento, conformada y configurada para encerrar el espacio interior de dicho miembro de alojamiento; y al menos una tira (10) de ensayo analítico, situada en dicho espacio abierto entre dichos dos brazos de dicho miembro de alojamiento, estando intercalados los extremos de dicha tira de ensayo entre dicho miembro de alojamiento y dicha cubierta en los brazos del mismo, comprendiendo dicha tira de ensayo: un miembro base (24); una membrana analítica (18) que tiene un primer extremo y un segundo extremo; un elemento (11) que contiene conjugados en contacto con dicho primer extremo de dicha membrana analítica; y al menos una región (15) de captura en la membrana analítica, intermedia entre dichos primer y segundo extremos de la misma, estando configurada dicha región de captura para capturar conjugados que se desplazan desde dicho primer extremo de dicha membrana analítica hacia dicho segundo extremo de dicha membrana analítica; estando así conformado y configurado el espacio abierto en dicho alojamiento para proporcionar acceso lateral a dicha tira de ensayo y para permitir la determinación de la presencia de analitos buscados en dicha región de captura de dicha tira de ensayo, mientras dicha tira de ensayo permanece montada en dicho miembro de alojamiento.
Description
Dispositivo de ensayo accesible y método de
uso.
La presente invención está relacionada en
general con ensayos y, más específicamente, con un dispositivo de
ensayo de flujo lateral, con un acceso mejorado para la
detección.
El documento US 5.728.587 muestra un dispositivo
de ensayos por flujos, para la detección de analitos buscados en
una muestra, incluyendo un elemento receptor de muestras y que
comprende
- un miembro de alojamiento que tiene un espacio interior expuesto a un lado de dicho miembro de alojamiento, un elemento de tapa, donde el miembro de alojamiento tiene una forma y está configurado de manera que encierra el espacio interior de dicho miembro de alojamiento, y al menos una tira de ensayo analítico, situada dentro de dicho alojamiento y por debajo del elemento de tapa, de forma que queda intercalada entre el alojamiento y el elemento de tapa, comprendiendo la tira de muestra
- un miembro de base y una membrana analítica que tiene un primer extremo y un segundo extremo, un elemento de almacenamiento de conjugados, y al menos una región de captura en la membrana analítica intermedia a dichos primer y segundo extremos de la misma, estando configurada dicha región de captura para capturar conjugados que se desplazan desde dicho primer extremo de dicha membrana analítica hacia dicho segundo extremo de dicha membrana analítica.
La tapa del respectivo alojamiento comprende
varias aberturas, con el fin de proporcionar acceso a la cara
superior de la tira de ensayos, para proporcionar una muestra y
también para proporcionar la inspección visual de una región de
captura y una región de control.
El alojamiento y la tapa del mismo son de una
forma sustancialmente plana y rectangular.
El documento WO 01/71344 divulga un método para
la detección cuantitativa de analitos buscados en una muestra,
utilizando un inmuno-ensayo de flujo, un método que
comprende una tira de comprobación del inmuno-ensayo
montada sobre un miembro de soporte del ensayo,
aplicar la muestra a una elemento receptor de
muestras en un extremo de dicha tira de comprobación de flujo,
acoplar las partículas conjugadas
superparamagnéticas que residen en la tira de ensayos en dicho
extremo, siendo tratadas las partículas superparamagnéticas para
que se peguen a cualquier analito buscado en la muestra,
capturar los complejos unidos del analito y de
las partículas superparamagnéticas en la región de captura de la
membrana porosa, a medida que los complejos unidos se desplazan a
través de la membrana porosa por acción capilar,
proporcionar un elemento de apoyo despegable en
ambos lados de la tira de ensayos, de manera que la tira de ensayos
pueda ser despegada del miembro de soporte, y
insertar al menos una parte de las tiras de
ensayo a los lados en un dispositivo magnético lector, y leer la
cantidad de analitos etiquetados en la región de captura y
proporcionar una salida representativa de la cantidad de analitos
etiquetados en la región de captura.
Ha habido disponibles diversas técnica
cromatográficas de inmunoensayos durante muchos años. Los ensayos
que pueden ser realizados con tales sistemas cromatográficos son,
entre otros, inmunoensayos, que dependen de la interacción
específica entre un antígeno o hapteno y el correspondiente
anticuerpo. Los inmunoensayos han sido utilizados como medios de
comprobación de la presencia o cantidad, o ambas, de moléculas
clínicamente importantes durante algún tiempo. Los ensayos de
aglutinación de látex basados en la inmunidad, para detectar un
factor asociado con la artritis reumatoide, fueron utilizados
incluso desde 1956 (Singer y otros colaboradores, Am. J. Med. 22:88
- 892 (1956)).
Entre los muchos sistemas analíticos utilizados
para la detección de analitos, particularmente analitos de interés
biológico, son sistemas de ensayos cromatográficos. Entre los
analitos frecuentemente ensayados con tales intereses, están: (1)
hormonas, tales como la gonadotropina corial humana (hCG), que es
ensayada frecuentemente como un marcador del embarazo humano; (2)
antígenos, particularmente antígenos específicos de patógenos
bacteriales, víricos y de protozoos, tales como el estreptococos,
el virus de la hepatitis y giardias; (3) anticuerpos,
particularmente anticuerpos inducidos como resultado de la infección
con patógenos, tales como los anticuerpos de la bacteria
HELICOBACTER pylori y del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH); (4) otras proteínas, tales como la hemoglobina, frecuentemente ensayadas en determinaciones de sangre oculta en las heces, un indicador precoz de los desórdenes gastrointestinales, tales como el cáncer de colon; (5) enzimas, tales como aminotransferasa de ácido aspártico, dehidrogenasa de ácido láctico, fosfatasa alcalina, y dehidrogenasa de glutamato, frecuentemente ensayados como indicadores de la función fisiológica y de tejidos dañados; fármacos, tanto fármacos terapéuticos, como antibióticos, tranquilizantes y anticonvulsivos, y drogas ilegales de abuso, tales como la cocaína, heroína y marihuana; (7) vitaminas; y (8) materiales de ácido nucleico.
HELICOBACTER pylori y del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH); (4) otras proteínas, tales como la hemoglobina, frecuentemente ensayadas en determinaciones de sangre oculta en las heces, un indicador precoz de los desórdenes gastrointestinales, tales como el cáncer de colon; (5) enzimas, tales como aminotransferasa de ácido aspártico, dehidrogenasa de ácido láctico, fosfatasa alcalina, y dehidrogenasa de glutamato, frecuentemente ensayados como indicadores de la función fisiológica y de tejidos dañados; fármacos, tanto fármacos terapéuticos, como antibióticos, tranquilizantes y anticonvulsivos, y drogas ilegales de abuso, tales como la cocaína, heroína y marihuana; (7) vitaminas; y (8) materiales de ácido nucleico.
Tales sistemas cromatográficos se utilizan
frecuentemente por los médicos y ATS para una rápida diagnosis
administrativa, denominados comúnmente como dispositivos de
"puntos de cuidados" (POC), y para la supervisión terapéutica
de una variedad de condiciones y desórdenes. También se utilizan
cada vez más por: los propios pacientes para la supervisión en casa
de tales condiciones y desórdenes; científicos para uso en ensayos
de campo para las cosechas transgénicas y contaminantes
ambientales; soldados en las condiciones del campo de batalla para
la detección de armas biológicas ofensivas; y por los veterinarios y
practicantes de emergencia para una comprobación rápida, entre
otras.
Incluido en las técnicas cromatográficas,
utilizadas conjuntamente con los inmunoensayos, hay un procedimiento
conocido como inmunocromatografía. En general, está técnica utiliza
un reactivo o partícula etiquetada que ha sido enlazada con un
anticuerpo para el ensayo de la molécula, para formar un conjugado.
Este conjugado es mezclado después con un espécimen y, si la
molécula a ensayar está presente en el espécimen, los anticuerpos
enlazados con el reactivo etiquetado se unen a la molécula a
ensayar, dando así una indicación de que la molécula a ensayar está
presente. El reactivo o partícula etiquetados pueden ser
identificables por el color, las propiedades magnéticas, la
radioactividad, la reactividad específica con otra molécula, u otra
propiedad física o química. Las reacciones específicas que se
emplean pueden variar con la naturaleza de la molécula que se está
ensayando y con la muestra a tratar.
Los ensayos inmunocromatográficos caen dentro de
dos categorías principales: "sándwich" y "competitivos",
de acuerdo con la naturaleza del complejo
antígeno-anticuerpo a detectar, y con la secuencia
de reacciones requeridas para producir tal complejo. En el caso de
detección de antígeno, los procedimientos inmunocromatográficos
sándwich tratan de mezclar la muestra que puede contener el analito
a ensayar, con los anticuerpos del analito. Estos anticuerpos son
móviles y, típicamente, están ligados a una etiqueta o a un
reactivo, tal como el látex tintado, un sol de metal coloidal, o un
radioisótopo. La mezcla se aplica después a un medio cromatográfico
que contiene una tira o zona de captura. Esta tira o zona de captura
contiene anticuerpos inmovilizados para el analito de interés. El
medio cromatográfico puede ser también en forma de una tira que se
asemeje a una varilla indicadora. Cuando el complejo de la molécula
a ensayar y el anticuerpo etiquetado alcanzan la zona de los
anticuerpos inmovilizados en el medio cromatográfico, tiene lugar la
unión, y los anticuerpos etiquetados unidos están localizados en la
zona. Esto indica la presencia de la molécula a ensayar. Esta
técnica se puede utilizar para obtener resultados cualitativos.
Ejemplos de inmunoensayos sándwich realizados en las tiras de
ensayos, se describen en las patentes de Estados Unidos 4.168.146,
de Grubb y otros colaboradores, 4.366.241, de Tom y otros
colaboradores, 6.017.767 y 5.998.220 de Chandler, y 4.305.924 de
Piasio y otros colaboradores.
En los inmunoensayos competitivos o indirectos,
el componente inmovilizado está presente en cantidades controladas,
y el componente móvil está presente en cantidades desconocidas. La
cantidad desconocida del componente móvil está complementada con
una cantidad conocida del mismo componente que ha sido etiquetado
por adición de un constituyente medible que no interfiere con sus
propiedades reactivas inmunoquímicas. La etiqueta puede consistir
en un radioisótopo, un cromóforo, una partícula, un fluoróforo o una
enzima. La cantidad de material etiquetado unido
inmuno-químicamente con la fase sólida, dependerá de
la cantidad de componente no etiquetado en la solución, compitiendo
por los mismos lugares de unión. Cuantos más componentes
desconocidos hay presentes, menor será la cantidad de componente
etiquetado unido.
Se utilizan ensayos cromatográficos basados en
enzimas, además de los ensayos inmunocromatográficos. Estas
técnicas son aproximadamente análogas a los ensayos
inmunocromatográficos, pero usan una reacción catalizada
enzimáticamente en lugar de una reacción de
antígeno-anticuerpo. La reacción catalizada
enzimáticamente genera frecuentemente un producto detectable. Se
conocen también otros ensayos cromatográficos análogos. Aunque
útiles, las técnicas cromatográficas actualmente conocidas que
utilizan tiras de ensayo, tienen diversos inconvenientes. Muchas
muestras, tales como las muestras fecales, contienen materia en
partículas que pueden colorear los poros del medio cromatográfico,
dificultando considerablemente la detección de los reactivos de
etiquetar. Otras muestras, tales como la sangre, contienen células
y componentes coloreados que hacen difícil leer el ensayo. El medio
cromatográfico húmedo es también difícil de leer, debido a la
reflexión especular del medio cromatográfico.
La preparación de muestras y la generación de
desechos son los responsables de otros problemas de los dispositivos
y técnicas actualmente disponibles para la inmunocromatografía. El
incremento del predominio de enfermedades transmitidas por sangre
infectada y muestras de sangre, tales como el SIDA y la hepatitis,
ha agravado estos problemas. Las formas disponibles de dispositivos
de flujo lateral tienen una gran parte de sus componentes que se
utilizan solamente para el soporte mecánico de la membrana
cromatográfica, y no están cerrados herméticamente, haciendo por
tanto difícil, costoso y posiblemente peligroso, el procedimiento
para deshacerse de ellos, debido a los peligros biológicos que se
les supone. Han de tomarse precauciones para que los operarios, o la
gente que se pone en contacto involuntariamente con el desecho, no
queden contaminados.
Un aspecto común de los dispositivos conocidos,
particularmente en la tecnología de flujo lateral, es que el ensayo
se lee visualmente, es decir, por medio de uno o más líneas
ópticamente legibles en una tira de ensayo sobre un portador, lo
cual puede tener diversas configuraciones. Hay varias limitaciones o
desventajas en los ensayos conocidos que se detectan ópticamente.
Debido a que son ópticos, solamente se pueden detectar los cambios
superficiales (típicamente el color). Los analitos buscados pueden
estar en la solución de muestra, pero en una concentración tan baja
que solamente se captan unos pocos en la zona de captura de la
membrana porosa del ensayo. Esto puede proporcionar un
desvanecimiento o incluso una línea no detectable ópticamente, y
puede dar como resultado una lectura negativa falsa. Típicamente, un
extremo de la tira de ensayos está expuesto a la muestra,
normalmente un fluido de algún tipo, que es probado para ver los
analitos que son el objetivo particular, que son de interés. El
fluido emigra a través del medio cromatográfico, por lo que el
analito con su etiqueta se captura y se inmoviliza, mientras que el
fluido restante es absorbido en un medio en el extremo distal de la
tira de ensayo.
Ejemplos de métodos y aparatos de ensayo de
flujo lateral, en los que la lectura se efectúa normalmente de
manera óptica, están ilustrados en las patentes de Estados Unidos
5.591.645; 5.798.273; 5.622.871; 5.602.040; 5.714.389; 5.879.951;
4.632.901 y 5.958.790.
Una limitación más de los dispositivos
cromatográficos disponibles actualmente para uso por el especialista
clínico o el técnico es su incapacidad para realizar ensayos
cuantitativos. El sándwich etiquetado en la zona de captura, o la
disminución de la etiqueta en la zona de captura de un ensayo
competitivo, pueden ser leídos solamente desde la superficie de la
membrana, de manera que solamente se lee una parte relativamente
pequeña de la etiqueta. Las evaluaciones cuantitativas son
realmente sólo una estimación basada en la intensidad del color de
la línea de detección. Debido que los ensayos de la técnica anterior
se leen ópticamente, están sometidos a la contaminación por su
exposición y a la degradación originada por la luz. Los ensayos
ópticos tienen también una vida de almacenaje limitada.
Otro aparato para detectar moléculas buscadas en
una fase líquida está ilustrado en la patente de Estados Unidos
5.981.297, donde se emplean partículas magnetizables y la salida de
los sensores del campo magnético indica la presencia y
concentración de moléculas buscadas en la muestra que se está
ensayando. Otros ejemplos para la detección magnética, utilizando
fuerzas físicas, se han divulgado en las patentes de Estados Unidos
5.445.970; 5.981.297 y 5.925.573. Sin embargo, en estos
dispositivos, el imán requiere una potencia relativamente alta
debido a que el hueco en el que se coloca el ensayo debe ser
suficientemente ancho para acomodar el dispositivo de ensayo que es
relativamente grueso.
Aunque la patente de Estados Unidos 5.728.587
proporciona un soporte rígido y robusto para la tira de ensayo, no
es muy adecuado para mediciones magnéticas precisas, porque esta
última requiere una distancia lo más pequeña posible entre los
analitos buscados etiquetados con partículas conjugadas
superparamagnéticas y la cabeza de un lector magnético, lo cual se
impide por las dimensiones del correspondiente alojamiento. Por otra
parte, la tira de ensayo del documento WO 0171344, que solamente
comprende elementos de apoyo despegables, permite una distancia
corta entre los analitos buscados etiquetados con partículas
conjugadas superparamagnéticas y la cabeza de un lector magnético,
insertando la tira en el correspondiente hueco; sin embargo, el
manejo de una tira de ensayo despegada de un miembro de soporte es
delicado, lo cual puede conducir nuevamente a mediciones de menor
precisión y puede no ser posible con cualquier tira de ensayo.
Consecuentemente, es el objeto de la presente
invención proporcionar un ensayo inmune de la clase mencionada
anteriormente, y un método de detección cuantitativa de analitos
buscados en una muestra, utilizando un ensayo inmune tal que
permita un manejo fácil y seguro de la tira de ensayo, y también una
estrecha distancia entre la tira de ensayo y la cabeza de un lector
magnético, para mediciones de precisión cuantitativas de la cantidad
de partículas superparamagnéticas sobre dicha tira de ensayos.
El objeto antes mencionado se consigue con un
dispositivo de ensayos de análisis por flujo lateral, de acuerdo
con la reivindicación 1, y un método para la detección cuantitativa
de analitos buscados, como se define en la reivindicación 23.
En términos amplios, la invención está
relacionada con una tecnología analítica de flujo lateral. En un
modo de realización preferido, emplea partículas
superparamagnéticas como etiquetas para los analitos a detectar. Un
dispositivo construido de acuerdo con los principios de la
invención, incluye al menos una membrana analítica y un alojamiento
que permiten la detección o la medida de la etiqueta desde el lado
de la membrana. En un modo de realización, los complejos unidos de
partículas etiquetadas y analitos, son capturados en zonas o
regiones predeterminadas sobre la tira de ensayos y la presencia y
la cantidad de analitos etiquetados son legibles entonces por
medios magnéticos. En modos de realización adicionales, la detección
del analito se puede conseguir por medios visuales, ya que los
complejos aparecen también visualmente.
Más específicamente, en modos de realización
preferidos, la invención es un dispositivo de ensayo analítico por
flujo lateral, para la detección cuantitativa de analitos buscados
en una muestra. En un modo de realización, el dispositivo tiene un
miembro de alojamiento conformado y configurado para tener dos
brazos conectados por una parte extensible, formando con ello
generalmente una forma de C. El alojamiento tiene también un espacio
interior descubierto por un lado del alojamiento. Hay un elemento
de tapa conformado y configurado de manera que encierra un espacio
interior del miembro de alojamiento. Suspendido entre los dos
brazos, hay al menos una tira de ensayo analítico. Los extremos de
dicha tira están también intercalados entre el miembro de
alojamiento y la tapa. La tira está constituida por un miembro
base, una membrana analítica que tiene un primer extremo y un
segundo extremo, un elemento que contiene conjugados en contacto con
el primer extremo de la membrana analítica, y al menos una región
de captura en la membrana analítica, en algún lugar intermedio entre
el primer y el segundo extremos de la misma, estando configurada la
región analítica de manera que captura los analitos etiquetados que
se desplazan desde el primer extremo de la membrana analítica hasta
el segundo extremo de la membrana analítica. Otros modos de
realización adicionales tienen un elemento receptor de muestras en
el primer extremo de la membrana analítica. El miembro de
alojamiento en forma de C permite, por ejemplo, que un dispositivo
lector magnético determine la presencia y cantidad de analitos
buscados, etiquetados por partículas magnéticas de conjugados, para
leer la tira de ensayo desde un lateral, sin retirar la tira de
ensayo del alojamiento.
Se construye un dispositivo de acuerdo con
diversos modos de realización de la invención, de manera que permite
al detector acceder a la tira de ensayo desde el lateral de la tira
de ensayo, en lugar de hacerlo a lo largo del eje longitudinal. La
tira de ensayo no tiene que ser retirada del casete o alojamiento
para efectuar el paso de detección. La tira de ensayo puede ser
leída por medio de un dispositivo de detección magnética apropiado,
y puede archivarse y releerse en cualquier momento.
En un modo de realización, la tira de ensayo de
la invención tiene una tapa de cubrición para crear un ensayo
hermético. La parte central de la tira de ensayo tiene una capa base
de película de poliéster, preferiblemente Mylar®, y una capa
adhesiva sobre la capa de la base. Sobre la capa adhesiva hay una
capa de soporte de nitrocelulosa. Sobre la parte superior de la
nitrocelulosa hay otra capa adhesiva, y después una capa de cubierta
superior.
La capa de nitrocelulosa tiene preferiblemente
al menos dos secciones con rayas: una línea de captura y un índice
magnético o línea de calibración. Forman preferiblemente ángulos
rectos con el eje longitudinal de la tira. Las rayas son
preferiblemente permeables a la capa de nitrocelulosa y tienen una
anchura de aproximadamente 0,02'' (0,508 mm). En un modo de
realización, la línea de calibración se coloca sobre la capa
superior de cubierta, en lugar de hacerlo sobre la nitrocelulosa.
En modos de realización adicionales, puede haber una línea
adicional de control del proceso, alineada con las líneas de captura
y del índice magnético. En un modo de realización preferido, la
distancia mínima entre dos líneas contiguas es alrededor de 5 mm.
Esta distancia asegura que el detector lee solamente las líneas de
una en una. Por tanto, se contempla que la distancia entre dos
líneas contiguas está determinada por la limitación de que el
detector lee las líneas solamente de una en una.
En un modo de realización preferido de la
invención, el alojamiento o casete tiene generalmente forma de C,
con la tira de ensayo abarcando los dos brazos de la forma de C. La
forma de C permite el acceso completo para medir la membrana o
membranas por medio de un instrumento de medida apropiado, como se
describe en la patente de Estados Unidos 6.046.585. Una ventaja de
la forma de C es proporcionar el acceso lateral a la cinta de
ensayo, de manera que la forma particular del casete o del
alojamiento no es crítica, solamente que la tira de ensayo sea
accesible desde un lado. Sin embargo, en modos de realización
adicionales, el casete puede ser construido de manera que contenga
más de una cinta de ensayo. En estos modos de realización, las tiras
de ensayo pueden ser paralelas, pueden estar dispuestas en
superficies diferentes del casete, o una combinación de ambas
cosas. Por ejemplo, en un modo de realización, el casete puede ser
de forma generalmente cuadrada, con una o más tiras de prueba en la
superficie exterior de cada uno de los cuatro lados. Se contemplan
también aquí otras formas del casete, tal como octágonos,
pentágonos y similares. En la presente invención se contempla, por
tanto, que la forma y configuración del casete puede ser cualquiera
que acomode al menos una tira de ensayo, al tiempo que permita el
acceso del detector desde un lado.
La tira de ensayo tiene también,
preferiblemente, cavidades en cada extremo en los que la tira de
ensayo está anclada o tensada. Estas cavidades encierran la muestra
y los acolchados de la mecha, respectivamente. Las cavidades pueden
tener también postes de montaje en cada extremo para ajustar la tira
de ensayo en el casete. Los extremos de la tira de ensayo tienen,
preferiblemente, una parte del adhesivo sobre la película de
poliéster que está descubierta. Esto permite sostener la tira hacia
abajo alrededor de los postes. Además, se puede colocar un
sellador, tal como la silicona, sobre el marco del casete, antes de
colocar la tira, en la unión del casete con la capa de cubierta de
la tira de ensayo. El sellado final del casete se puede efectuar con
una placa de cubierta (que tiene adhesivo por un lado) que sella y
sostiene la parte posterior de la tira de ensayo en su lugar sobre
las cavidades. Se puede colocar un desecante dentro del diseño del
entramado o marco del casete, si se desea.
En modos de realización adicionales preferidos,
el casete ya completado puede tener etiquetas unidas a la
superficie superior. Una etiqueta proporciona un medio para sellar
el puerto de entrada de la muestra. Otra etiqueta contiene
información específica del ensayo tanto para el operador humano como
para la máquina. La etiqueta legible por el operador contiene el
tipo de ensayo y la fecha de expiración. El componente legible por
la máquina tiene la curva de calibración para el lote fabricado
específico de reactivos y las posiciones de las líneas de captura y
de índice magnético de la tira.
La configuración física de la presente invención
permite también que un laminado delgado compuesto por una membrana
analítica comúnmente utilizada en la técnica, un soporte inferior y
una cubierta superior, pueda ser medido en el campo magnético del
instrumento y en estrecha relación con los detectores de tal
instrumento. La tira de ensayo es, preferiblemente, suficientemente
delgada para que quepa dentro de un hueco razonable del sensor, al
tiempo que es suficientemente robusta para resistir la manipulación
del operador y de la máquina. En un modo de realización preferido,
la tira de ensayo será suficientemente delgada para caber dentro de
un hueco del núcleo de alrededor de 0,5 mm. Además, como está
sellada y encapsulada, se impide que los fluidos de la muestra y
los posibles patógenos/analitos contaminen el instrumento, el
operador, y el entorno, mientras se miden y se desechan. La tira de
ensayo está también, preferiblemente, pretensada para permitir que
pase a través del detector sin interferencias. También permite
minimizar el hueco del detector, mejorando así la sensibilidad.
En modos de realización alternativos, la
almohadilla de la muestra y la almohadilla de los conjugados alojada
en la cavidad en un extremo del casete, son ensambladas con puntos
de presión variable, para asegurar el contacto reproducible con las
diversas membranas analíticas. El extremo distal del casete contiene
los materiales de la mecha que actúan como región de almacenamiento
para los fluidos, después de haber efectuado el ensayo. El casete
se caracteriza por tener el mismo mecanismo de puntos de contacto
que en el extremo de introducción de la muestra. En estos modos de
realización, las características de estos puntos de presión pueden
variar. En un modo de realización preferido, los puntos de presión
se hacen con un material flexible, por ejemplo caucho de
silicona.
Otros modos de realización adicionales de la
invención proporcionan una tapa extraíble para proteger la membrana
analítica durante el almacenamiento y transporte antes del uso. Esta
tapa no hace realmente contacto con la membrana, sino que en lugar
de eso es complementaria con el alojamiento en forma de C y cabe en
él.
La invención está dirigida también a un método
para efectuar un ensayo inmune por flujo lateral, con detección
cuantitativa de analitos buscados en una muestra. El método implica
la aplicación de la muestra en un extremo de la membrana porosa de
un tira de ensayo de flujo lateral, el acoplamiento de partículas de
conjugados superparamagnéticas que residen en la tira de ensayo en
un extremo, siendo tratadas las partículas superparamagnéticas de
manera que se peguen con cualquier analito buscado de la muestra,
capturando los complejos pegados de analito y de partículas
superparamagnéticas en la región de captura de la membrana porosa a
medida que la muestra y los complejos pegados se desplazan a través
de la membrana porosa por la acción capilar, insertando al menos una
parte de la tira de ensayo por los lados en un dispositivo lector
magnético, leyendo la cantidad de analitos etiquetados en la región
de captura y proporcionando una salida representativa de la cantidad
de analitos etiquetados en la región de captura.
Los objetos, características y ventajas de la
invención se percibirán con mayor claridad a partir de la siguiente
descripción detallada, cuando se lee conjuntamente con los dibujos
que se acompañan, en los que:
La figura 1A muestra una vista despiezada de los
componentes de un modo de realización de una tira de ensayo,
formada de acuerdo con la invención;
La figura 1B muestra una vista en sección
transversal longitudinal montada de los componentes de la tira de
ensayo de la figura 1A;
La figura 2 es una vista inferior despiezada de
una tira de ensayo y un casete, de acuerdo con un modo de
realización de la invención;
La figura 3 es una vista inferior despiezada de
un modo de realización alternativo de la invención, con una sola
capa de cubierta;
La figura 4 muestra una vista montada del casete
de ensayo de la figura 2 o 3.
La figura 5 muestra una vista montada de un modo
de realización alternativo de la invención, con múltiples tiras de
prueba en él y una tapa protectora, y
La figura 6 muestra cómo la tira de ensayo de un
modo de realización de la invención puede estar situada en un
dispositivo lector magnético.
Una ventaja particular de la invención es la
sensibilidad considerablemente mejorada del dispositivo, con
respecto a técnicas conocidas de flujo lateral. También proporciona
una medición muy rápida de la región analítica en la tira de
ensayo. Además, al proporcionar un detector con acceso a la tira de
ensayo desde el lateral de la tira, en lugar de hacerlo desde el
extremo de la tira, el hueco entre los elementos del detector puede
ser relativamente pequeño. Esto es debido a que el espacio entre los
elementos del detector no tiene que ser suficientemente grande para
acomodar la relativamente gruesa almohadilla de la muestra o la
almohadilla de la mecha, lo que por otra parte sería el caso de si
la tira de ensayo se insertase en el detector en sentido
longitudinal. Consecuentemente, en la presente invención, el
electroimán requiere menos potencia que el detector que se carga
por un extremo.
También existen muchas ventajas al utilizar
partículas magnéticas con respecto a los indicadores ópticos
conocidos de partículas coloreadas u otros indicadores ópticos de
la técnica anterior. La linealidad es una ventaja porque la
detección magnética es lineal con respecto a la cantidad de material
magnético presente en una amplia gama, por al menos cuatro órdenes
de magnitud. La estabilidad en el tiempo también es significativa,
porque las partículas magnéticas son estables. El ensayo ya
desarrollado está disponible para su archivo y para volverlo a
ensayar según sea necesario. Además, las partículas magnéticas son
generalmente inertes para los sistemas biológicos y el entorno, de
manera que no solamente permanecen estables, sino que son ambiental
y biológicamente seguras. Además, las partículas magnéticas son ya
de un uso muy extendido por toda la industria del diagnóstico con
otras tecnologías, por lo que están disponibles fácilmente.
Otros beneficios de la detección magnética son
que las partículas son superparamagnéticas, es decir, son magnéticas
solamente cuando están en un campo magnético. Esto les permite ser
manipuladas libremente en una solución sin aglomerarse. También se
contempla en esta memoria que la detección de analitos pueda
conseguirse por medios visuales. Los analitos buscados etiquetados
con conjugados magnéticos puede proporcionar también una indicación
visual en la tira de ensayo. Esta es una indicación cualitativa. Si
se desea una indicación cuantitativa se emplea el dispositivo
lector magnético.
Otra ventaja significativa sobre los
dispositivos ópticos de flujo lateral de la técnica anterior es que,
con esta invención, la cantidad total de analitos en la región de
captura de la tira de ensayo se mide como una masa simple en una
medición volumétrica por medios magnéticos. La permeabilidad de los
campos magnéticos es tal que se detecte cualquier etiqueta
magnética contenida dentro de la región activa del detector. Esto
contrasta con las técnicas de detección óptica en las que, con las
técnicas de detección óptica, solamente se pueden detectar las
interacciones de informador/analito que están sobre o muy cerca de
la superficie. En esta invención, la potencia de la señal magnética
aumenta directamente con la masa involucrada del material
detectable magnéticamente, típicamente magnetita (Fe_{3}O_{4}).
Esta linealidad inherente de la detección magnética contribuye a la
sensibilidad, precisión y gama dinámica. Finalmente, las partículas
superparamagnéticas son físicamente similares al oro coloidal en
tamaño, y pueden ser fácilmente adaptadas a una amplia gama de
ensayos de flujo lateral. Debe observarse que el oro coloidal, así
como las partículas fluorescentes de látex, se emplean típicamente
en las técnicas de ensayos inmunológicos detectados ópticamente de
la técnica anterior.
En la tecnología de flujo lateral, en un extremo
de la membrana porosa (la parte activa de la tira de ensayo) está
la zona de introducción de la muestra, que comprende
convencionalmente una almohadilla de la muestra y una almohadilla
de conjugados. En los dispositivos de la técnica anterior, la
almohadilla de conjugados era la fuente de partículas coloreadas
que se mueven libremente, típicamente soles de oro a partir de oro
coloidal, o partículas fluorescentes de látex. En la presente
invención, las partículas móviles son las partículas
superparamagnéticas que etiquetan los analitos buscados a partir de
la muestra que se introduce a través de la almohadilla de la
muestra. La muestra, junto con las etiquetas de partículas
magnéticas pegadas y los analitos buscados, se desplaza por la
acción capilar a lo largo de la membrana porosa y son capturados en
un lugar predeterminado denominado región de captura o zona de
captura. Puede haber más de una zona de captura para permitir la
multiplexación, que es el ensayo de más de un tipo de analito en la
misma tira de ensayo. Los analitos que están en exceso y el líquido
de transporte continúan desplazándose por la zona de captura hacia
el extremo opuesto de la membrana porosa, formando algunas veces una
línea de control o zona separada de la zona de captura. Si se
detecta una señal en la zona de control, el operador se asegura de
que el analito ha pasado por la zona de captura y que el ensayo
está funcionando.
Típicamente, se monta una almohadilla de mecha
sobre el extremo lejano de la membrana porosa para recibir el
exceso de líquido. La acción capilar desplaza el flujo desde el
extremo de introducción en un extremo de la membrana porosa, a
través de toda la longitud de la membrana. En la presente
invención, la almohadilla de la mecha está en contacto con un
extremo de la membrana cromatográfica.
Diversos modos de realización de la presente
invención tienen una tira de ensayo que emplea partículas
superparamagnéticas como etiquetas para los analitos a detectar,
donde, como característica adicional, la tira analítica está
alojada en un casete que está construido de manera que permite al
detector acceder a la tira de ensayo desde un lateral, en lugar de
hacerlo en sentido del eje longitudinal de la tira de ensayo. La
tira de ensayo está también, preferiblemente, sellada y es
desechable junto con el casete. La única limitación de la forma o
geometría del casete es que debe ser construido de manera que
permita al detector acceder a la tira de ensayo desde un lateral,
en lugar de hacerlo desde el eje longitudinal de la tira de ensayo.
En un modo de realización preferido, como se ilustra en los dibujos
que se acompañan, el casete tiene generalmente forma de C, con una
o más tiras de ensayo abarcando los dos extremos de la forma de C.
Sin embargo, se contempla en esta memoria cualquier forma o
configuración, siempre que se mantenga el acceso lateral.
Los beneficios del modo de realización en forma
de C, aparte del acceso mejorado a la membrana analítica, están
relacionados con la comodidad y simplicidad de la zona de
introducción de la muestra, la variabilidad de los volúmenes de
introducción de la muestra, y los medios para hacinar o tomar todo
el volumen de muestras tras la ejecución del ensayo. Estas
características se consiguen por medio de los brazos o extremos del
casete, que contienen los materiales convencionales de la
tecnología de flujo lateral. La introducción de muestras es también
hermética tras la aplicación de la muestra, por medio de una
membrana recubierta de adhesivo.
Con referencia ahora a los dibujos, y más en
particular a la figura 1A, se ilustra una vista despiezada de un
modo de realización de la tira de ensayo de la presente invención.
La tira 10 de ensayo tiene un miembro base 24, un adhesivo 22, un
miembro 20 de soporte, una membrana porosa 18, y una capa 16 de
cubierta. En un modo de realización preferido, el miembro base es
una película de poliéster, tal como el Mylar®, y la membrana porosa
es una nitrocelulosa. La almohadilla 11 de conjugados y la
almohadilla 12 de la muestra están en contacto con un extremo de la
tira. Las almohadillas de conjugados y de la muestra actúan como la
fuente y el método de distribución de la muestra por la membrana
porosa. La almohadilla 14 de la muestra se ilustra con respecto al
otro extremo de la tira.
Dentro de la almohadilla de conjugados, o al
inicio de la membrana porosa, como en otro modo de realización en
el que la almohadilla de conjugados no está presente, hay unas
perlas o partículas superparamagnéticas que están acopladas a los
anticuerpos. La combinación de una partícula o perla con un
anticuerpo se denomina conjugado, siendo una pluralidad de ellas la
etiqueta del analito. Estos conjugados se configuran de manera que
se combinan con los analitos buscados en la solución de la muestra,
de una manera conocida, para crear un ensayo tipo sándwich, muy
conocido en la técnica, dentro de la zona 15 de captura analítica y
de la zona 17 de captura de control. Los orificios 26 están en un
extremo de la tira y proporcionan medios para colocar la tira en el
casete.
La figura 1B muestra la parte central de la tira
de ensayo en una vista ya montada. El miembro base 24 tiene el
adhesivo 22 y el miembro 20 de soporte, en la parte superior del
mismo. Por encima está situada la membrana porosa 18, que está
cubierta por la capa 16 de cubrición.
Aunque se ha descrito anteriormente un ensayo
tipo sándwich, se contempla en esta memoria que se puedan emplear
técnicas de ensayo competitivo. La zona de captura está formada
configurando franjas con antígenos o anticuerpos, por ejemplo, como
es bien conocido. El fluido de la muestra viaja desde la derecha a
la izquierda en las figuras 1A y 1B, dentro de la membrana
analítica, debido a la acción capilar, primero en la membrana porosa
18 y después en la almohadilla 14 de la mecha. La almohadilla de la
mecha refuerza el flujo capilar "tirando" del fluido o
"conduciendo" el mismo, y permite que la mecha absorba la
totalidad de la muestra. Este volumen de líquido requerido para el
ensayo es conocido como el volumen total del lecho de la membrana
analítica.
La capa 16 de cubierta del dispositivo de ensayo
puede ser, por ejemplo, plástico, vidrio, papel, o cualquier
combinación práctica de los mismos. La línea impresa estándar 43 o
de calibración puede estar situada sobre la capa 16 de la cubierta
y proporcionar información utilizada por el ensayo después de haber
conseguido la prueba. Se contempla que estas líneas sean magnéticas
u ópticamente reflectantes, o una combinación de ambas. Estas
líneas estándar o de calibración contienen información que necesita
el lector del ensayo, por ejemplo curvas de calibración,
procedimientos de identificación y analíticos.
La mecha en contacto con el extremo de la región
analítica de la membrana porosa almacena el exceso de líquido de la
muestra. Los materiales de mecha convencionales contienen el volumen
del lecho de la membrana dentro del dispositivo de ensayo. Esta
manera de contener la muestra en un dispositivo hermético permite
desechar todo el dispositivo y que éste no contamine, un aspecto
que no se encuentra típicamente en otros dispositivos de
ensayo.
En el extremo de la derecha, según se observa en
la figura 1, hay una almohadilla 12 de la muestra, a través de la
cual se administra a la membrana porosa una solución que contiene el
analito. La almohadilla de la muestra puede incluir también una
almohadilla 11 de conjugados en comunicación con la membrana
porosa.
Aunque la acción capilar y la existencia de una
zona de captura y una zona de control son muy conocidas y
convencionales, la manera en la cual los modos de realización
descritos de la invención detectan la presencia y la cantidad de
analitos buscados difiere considerablemente de dispositivos
anteriores. La membrana analítica está contenida en una lámina
delgada y hermética y, también, el fluido de la muestra está
dirigido para que fluya a través de la membrana porosa hacia la
mecha. Una significativa característica de este modo de realización
es que el dispositivo de detección magnética no mide etiquetas o
partículas magnéticas que no estén específicamente pegadas, ya que
han pasado por las zonas de captura/control a un lugar fuera de la
zona de lectura del dispositivo magnético de detección. En un modo
de realización, la zona de lectura del dispositivo es de alrededor
de 2 mm de anchura. La capacidad de la almohadilla acolchada es
conocida, de manera que la capacidad del volumen del lecho es bien
absorbida y la tira analítica es el único componente del ensayo que
mide el dispositivo de detección magnética.
Como se ha afirmado previamente, los ensayos de
flujo lateral de la técnica anterior dependen del color o
fluorescencia para proporcionar una indicación visual u óptica de la
presencia de analitos buscados en la zona de captura, y la
capacidad de las técnicas ópticas para detectar la presencia de
analitos buscados es limitada. Una concentración relativamente baja
de analitos buscados en la muestra puede dar como resultado tan
pocos analitos capturados que son ópticamente indetectables sobre la
superficie de la membrana porosa en la zona de captura. Además, la
intensidad óptica de la zona de captura con los analitos capturados
es solamente una función aproximada de la cantidad de analitos
capturados. Sin embargo, no hay manera de medir con precisión la
cantidad total de analitos capturados dentro de la zona de captura,
porque solamente la superficie es legible ópticamente. El presente
modo de realización proporciona una sensibilidad y una precisión
cuantitativa considerablemente mejoradas, porque los analitos con
etiqueta magnética en la zona de captura son detectables por medio
de un detector magnético adecuado en toda la extensión de los
analitos buscados dentro de todo el volumen de la zona de
captura.
Se pueden añadir características adicionales,
incluyendo zonas de captura adicionales (en todas las figuras se
muestran dos) y líneas de calibración adicionales. Podría haber
varias zonas de captura y líneas de calibración equivalentes.
Haciendo referencia ahora a la figura 2, se
ilustra el casete 30 con forma general de C, en una vista inferior
despiezada. La tira 10 de ensayo está colocada a través del espacio
abierto entre los extremos del casete, con las almohadillas 12 y 14
de la muestra y de la mecha, respectivamente, llenando las cavidades
36 y 46. El orificio 26 de ajuste encaja con el vástago 38 para
asegurar una alineación correcta. Las almohadillas 35 de presión
ajustable, que están situadas justamente dentro de las cavidades de
los brazos del casete, proporcionan una cantidad de presión
específica a la tira de ensayo, de manera que se comporta como se
desea. Cuando las capas 32 y 34 de cubierta están colocadas sobre
los extremos de la tira de ensayo, para asegurar que el dispositivo
está herméticamente cerrado, se forma una presión sobe la tira de
ensayo. La cantidad de presión es un factor que afecta a la
velocidad del flujo de fluido a través de la tira. En el modo de
realización ilustrado en la figura 3, las capas 32 y 34 de cubierta
se combinan como una sola capa 39 de cubierta, que cubre también
prácticamente la superficie inferior completa del casete. En este
modo de realización, se puede colocar un desecante (no ilustrado)
dentro del diseño del entramado, bajo la capa 39 de cubierta,
mejorando así la capacidad de almacenamiento del dispositivo de
ensayo.
Además, como se ilustra en las figuras
2-5, la cavidad 36 tiene un puerto 37 para la
muestra dispuesto dentro de ella. El puerto de la muestra está
construido de manera que se pone en contacto con la almohadilla 12
de la muestra cuando se montan. El puerto de la muestra tiene una
estructura de embudo que se extiende hacia abajo dentro de la
cavidad y en contacto con la almohadilla de la muestra. Este
contacto asegura que cuando se añade material de muestra, la
almohadilla de la muestra no queda inundada. En lugar de eso, la
muestra es absorbida por la almohadilla de la muestra de manera más
consistente, contribuyendo con ello aún más a un frente uniforme
del fluido sobre la tira.
El casete puede estar formado por cualquier
material rígido adecuado, tal como el plástico o similar. En un
modo de realización preferido, como se ilustra en la figura 2, se
proporciona una resistencia adicional al casete mediante el diseño
33 del entramado. Se pueden emplear otras formas estructurales.
Además, aunque se ilustra una extensión en forma de C, indicada con
la referencia numérica 31, se contempla en esta memoria que
cualquier otra forma cae dentro del alcance de la invención, siempre
que esa forma permita el acceso del detector a la tira de ensayo
sin tener que pasar por el casete, la almohadilla de la muestra o la
almohadilla de la mecha.
En el extremo de la derecha, como se ilustra en
la figura 4, está el puerto 37 de entrada a través del cual se
administra la solución de la muestra que contiene el analito, a la
membrana porosa a través de las almohadillas de la muestra y del
conjugado. La etiqueta 40 contiene información legible tanto por el
usuario como por el detector. Puede contener información de
calibración para el detector, así como información del ensayo y de
la fecha para el usuario. El puerto 37 de entrada puede cerrarse
herméticamente plegando la solapa 42 de hermeticidad. El orificio
41 de ajuste está configurado para encajar con el mecanismo de
transporte del lector magnético, que se describe a continuación, y
está ilustrado en la figura 6.
Haciendo referencia ahora a la figura 5, se
ilustra otro modo de realización de la invención en el cual hay
situadas más de una tira de ensayo en el casete. En este modo de
realización, hay dos tiras 10 de ensayo que abarcan paralelamente
la abertura en C. Además, se ilustra la cubierta 49 ajustando sobre
la abertura en C, protegiendo con ello a las tiras de ensayo.
Un aspecto significativo de un modo de
realización de la invención son los medios y manera en que se hace
la lectura magnética en el ensayo. En la figura 6 se ilustra un
lector magnético del tipo contemplado. Este emplea la tecnología
divulgada en la publicación PCT con el número WO 99/27369, para
determinar la presencia de analitos buscados y su cantidad. Como se
ilustra en la figura 6, el lector 45 (cuya cubierta exterior no
está ilustrada), es preferiblemente portátil, es decir,
aproximadamente del tamaño de bolsillo, de manera que se puede
emplear fácilmente en el campo. Otros modos de realización pueden
tener huellas mayores, para uso en laboratorio. El dispositivo con
tamaño de bolsillo proporcionará lecturas precisas del ensayo,
incluso bajo condiciones difíciles y con poca luz. El aparato de la
figura 6 tiene una bobina 48 con forma de "C", un hueco 50
entre las cabezas lectoras 46 y el mecanismo 47 de transporte, que
está ilustrado como un mecanismo roscado. Sin embargo, también se
contemplan en esta memoria otros mecanismos de transporte adecuados,
conocidos por los expertos en la técnica. La cantidad precisa de
analitos puede estar ilustrada en una ventana de presentación, que
podría ser una pantalla de LED o de LCD, por ejemplo, (no
ilustrada).
En los modos de realización descritos en esta
memoria, la tira de ensayo se coloca dentro del hueco 50.
Consecuentemente, las bobinas del sensor se sitúan en ambos lados
de la tira de ensayo cuando se introduce la tira de ensayo. Una
ventaja de esta configuración es que la medición magnética es menos
sensible a la posición vertical de la tira de ensayo dentro del
hueco en la bobina.
La tira de ensayo se hace preferiblemente
delgada, de manera que el lector de la figura 6 pueda leer los
analitos en las zonas de captura. También es preferible que esté
firmemente fijada y relativamente rígida, con el volumen del lecho
del ensayo y cualquier exceso de líquido encerrados dentro del
miembro hermético de la mecha del dispositivo de ensayo desechable.
Como se ilustra en la figura 6, el detector 46 es capaz de acceder a
la tira de ensayo desde el lado de la tira, en lugar de hacerlo
desde el eje longitudinal de la tira de ensayo. Consecuentemente,
el imán 48 no requiere un hueco relativamente grande para acomodar
las almohadillas de la muestra y de la mecha, porque esas
almohadillas no pasan a través del detector.
Se contempla que la tira de ensayo, que consiste
principalmente en una membrana porosa, una barrera hidrófoba y
cubiertas o laminados superior e inferior, sean fabricadas
suficientemente rígidas para que necesiten un soporte mínimo desde
los extremos del casete. Tal configuración haría que el dispositivo
de ensayo sea fácil de manejar y de archivar. La figura 1A muestra
cómo se monta el casete de ensayo, comprendido por la cubierta, la
membrana porosa, la barrera hidrófoba y la tapa inferior o membrana.
Esta región completa de ensayo puede ser típicamente de alrededor
de 15 mm de ancho, y solamente de alrededor de 150 hasta alrededor
de 500 \mum de espesor. Esta tira es fácilmente alimentada en el
lector para una lectura digital, que puede ser mostrada en la
pantalla o impresa en papel en cualquier forma que desee el usuario.
El transporte 47 desplaza el casete, situando con ello las partes
deseadas de la tira bajo el lector 46. La membrana analítica
descubierta es estable y puede ser archivada antes o después de
haber sido leída. Como las perlas superparamagnéticas están
magnetizadas solamente durante el proceso de lectura, la tira de
ensayo descubierta no está sometida a la degradación. Los analitos
contenidos en la zona de captura permanecen en ella, etiquetados con
la combinación conjugada.
Al contrario que en los ensayos de flujo lateral
de la técnica anterior, donde las líneas apenas visibles pueden ser
fácilmente malinterpretadas en el campo, especialmente en
situaciones difíciles o de bajas condiciones de luz, no hay
posibilidad de malinterpretar los resultados del ensayo con esta
invención. Los ensayos leídos ópticamente, especialmente los que se
leen visualmente, están sometidos también a errores o a propensión
del operador, o ambas cosas. En la presente invención, el lector
mide con precisión el número total de analitos etiquetados en la
zona de captura, sin fuentes inherentes de error como se ha
mencionado anteriormente.
Como la tira de ensayo puede tocar realmente al
detector, como se ilustra en la figura 4, sin la superficie de
cubierta protectora la membrana porosa de nitrocelulosa podría ser
dañada al rozar con el detector, produciendo así posiblemente
lecturas incorrectas o no fiables, o ambas cosas. Aunque es muy
delgada, en la gama de alrededor de 0,025 mm hasta alrededor de 0,1
mm, la cubierta protege contra los daños físicos y la contaminación
ambiental, así como proporciona una colocación correcta para las
lecturas electromagnéticas precisas.
La invención ha sido ilustrada y descrita por
medio de modos de realización específicos. Debe entenderse que se
pueden hacer numerosos cambios y modificaciones sin apartarse del
alcance de la invención.
Claims (23)
1. Un dispositivo para pruebas de ensayo de
flujo lateral para la detección de analitos buscados en una muestra,
incluyendo dicho dispositivo un elemento receptor de muestras y
comprendiendo:
- un miembro de alojamiento que tiene dos brazos conectados mediante una parte extendida, definiendo con ello generalmente una forma de C y formando un espacio abierto (31) entre dichos dos brazos, teniendo también dicho alojamiento un espacio interior descubierto en un lado de dicho miembro de alojamiento; y
- un elemento (39) de cubierta de dicho miembro de alojamiento, conformada y configurada para encerrar el espacio interior de dicho miembro de alojamiento; y
- al menos una tira (10) de ensayo analítico, situada en dicho espacio abierto entre dichos dos brazos de dicho miembro de alojamiento, estando intercalados los extremos de dicha tira de ensayo entre dicho miembro de alojamiento y dicha cubierta en los brazos del mismo, comprendiendo dicha tira de ensayo:
- un miembro base (24);
- una membrana analítica (18) que tiene un primer extremo y un segundo extremo; un elemento (11) que contiene conjugados en contacto con dicho primer extremo de dicha membrana analítica; y
- al menos una región (15) de captura en la membrana analítica, intermedia entre dichos primer y segundo extremos de la misma, estando configurada dicha región de captura para capturar conjugados que se desplazan desde dicho primer extremo de dicha membrana analítica hacia dicho segundo extremo de dicha membrana analítica;
- estando así conformado y configurado el espacio abierto en dicho alojamiento para proporcionar acceso lateral a dicha tira de ensayo y para permitir la determinación de la presencia de analitos buscados en dicha región de captura de dicha tira de ensayo, mientras dicha tira de ensayo permanece montada en dicho miembro de alojamiento.
2. El dispositivo de la reivindicación 1, y que
comprende además al menos una región (17) de control en la membrana
analítica, intermedia entre el primer y segundo extremos de la
misma, estando configurada dicha al menos una región de control de
manera que recoge los conjugados mas los analitos buscados que han
pasado la región de captura, para mostrar que la tira de ensayo ha
sido utilizada.
3. El dispositivo de la reivindicación 1, y que
comprende además un elemento (14) de mecha en el segundo extremo de
dicha membrana analítica.
4. El dispositivo de la reivindicación 1, en el
que se colocan paralelas múltiples tiras de ensayo analítico entre
dichos dos brazos de dicho miembro de alojamiento.
5. El dispositivo de la reivindicación 1 o 3, en
el que el elemento (12) receptor de la muestra está situado en el
primer extremo de dicha membrana analítica.
6. El dispositivo de la reivindicación 1, que
comprende además analitos buscados etiquetados con un conjugado de
partículas magnéticas que forman inmuno-complejos,
siendo detectadas dichas partículas por medios visuales.
7. El dispositivo de la reivindicación 1, en el
que el acceso lateral a la tira de ensayo permite a un dispositivo
detector magnético determinar la presencia y cantidad de analitos
etiquetados con un conjugado de partículas magnéticas que forman
inmuno-complejos en la región de captura de dicha
tira de ensayo, mientras que la tira de ensayo permanece montada en
el alojamiento.
8. El dispositivo de la reivindicación 1, en el
que dicho miembro de alojamiento es generalmente de forma
rectangular, y hay situada una tira de ensayo en al menos un lado
del mismo.
9. El dispositivo de la reivindicación 5, en el
que dicho alojamiento tiene cavidades formadas y configuradas para
acomodar dicho elemento receptor de muestras y dicho elemento de
mecha.
10. El dispositivo de la reivindicación 1, que
comprende además una membrana protectora (16) que cubre dicha
membrana analítica en el lado opuesto a un miembro de soporte,
siendo dicha membrana protectora también ópticamente no
transparente.
11. El dispositivo de la reivindicación 10, en
el que dicha membrana protectora está formada de manera integrada
con dicha membrana analítica.
12. El dispositivo de la reivindicación 10, y
que comprende además al menos una línea de calibración magnética
impresa sobre dicha membrana protectora.
13. El dispositivo de la reivindicación 10, en
el que dicha membrana protectora está formada por un material
seleccionado entre el grupo consistente en plástico, vidrio y
papel.
14. El dispositivo de la reivindicación 7, en el
que dicho conjugado está dispuesto en un elemento que contiene
conjugados magnéticos, que está en contacto de flujo del fluido con
el primer extremo de dicha membrana analítica.
15. El dispositivo de la reivindicación 7, en el
que dicho conjugado comprende además partículas de conjugados
superparamagnéticas, estando configuradas dichas partículas para
adherirse a los analitos buscados en la muestra.
16. El dispositivo de la reivindicación 1, y que
comprende además elementos puntuales (35) de presión variable
situados en la unión de dicho miembro de alojamiento con dicha
membrana protectora.
17. El dispositivo de la reivindicación 1, y que
comprende además un desecante colocado dentro del espacio interior
de dicho miembro de alojamiento.
18. El dispositivo de la reivindicación 1, y que
comprende además una etiqueta (40) sobre la superficie superior de
dicho alojamiento.
19. El dispositivo de la reivindicación 7, en el
que dicha tira (10) de ensayo es suficientemente delgada para
ubicarse dentro de un hueco de aproximadamente 0,5 mm, en el
dispositivo lector magnético.
20. El dispositivo de la reivindicación 19, en
el que dicha tira (10) de ensayo está tensada a lo largo de su eje
longitudinal.
21. El dispositivo de la reivindicación 1, y que
comprende además una cubierta (49) rígida extraíble, colocada sobre
la al menos una tira de ensayo, que protege dicha tira de ensayo
durante el almacenamiento y el transporte.
22. El dispositivo de la reivindicación 1 o bien
de la reivindicación 7, en el que dicha tira de ensayo es
externamente accesible desde al menos los lados de la parte superior
e inferior de la misma.
23. Un método para la detección cuantitativa de
analitos buscados en una muestra, utilizando un
inmuno-ensayo de flujo lateral, comprendiendo el
método:
- -
- montar una tira de ensayo en un alojamiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22;
- -
- aplicar la muestra a un elemento receptor de muestras en un extremo de una membrana porosa de una tira (10) de ensayo de flujo lateral;
- -
- acoplar las partículas superparamagnéticas de conjugados que residen en la tira de ensayo en dicho extremo, siendo tratadas las partículas superparamagnéticas para que se unan con cualquier analito buscado en la muestra;
- -
- capturar los complejos adheridos de analito y partículas superparamagnéticas en la región (15) de captura de la membrana porosa, a medida que la muestra y los complejos unidos se desplazan a través de la membrana porosa por la acción capilar;
- -
- insertar al menos una parte de la tira de ensayo por los lados en un dispositivo lector magnético, con dicha tira de ensayo montada en dicho alojamiento; leer la cantidad de analitos etiquetados en la región de captura; y
- -
- proporcionar una salida representativa de la cantidad de analitos etiquetados en la región de captura.
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