ES2294276T3

ES2294276T3 - Inhibidores de nf-kappab.

Info

Publication number: ES2294276T3
Application number: ES03721638T
Authority: ES
Inventors: James F. Callahan; Yue H. Li
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 2002-04-11
Filing date: 2003-04-11
Publication date: 2008-04-01
Anticipated expiration: 2023-04-11
Also published as: US7183311B2; JP2005528386A; WO2003086309A2; AU2003224941A8; EP1499605A4; US20050165086A1; ATE373648T1; DE60316425T2; AU2003224941A1; EP1499605A2; TW200403991A; DE60316425D1; WO2003086309A3; EP1499605B1; AR039280A1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): en la que: R1 representa NR4R5; R2 representa CONH2 o SO2NH2; R3 se selecciona entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-4, NH2, CF3, OCF3, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO2-alquilo, (CH2)qNR7R8, O-(CH2)qNR7R8, (CH2)q-arilo, O-(CH2)q-arilo, (CH2)q-heteroarilo, O-(CH2)q-heteroarilo, (CH2)q-heteroalquilo, O-(CH2)q-heteroalquilo y NO2; R4 representa H o alquilo C1-4; R5 representa H o CONHR6; R6 se selecciona entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo y arilo; R7 representa alquilo C1-4; R8 representa alquilo C1-4; m es 0, 1, 2 ó 3; n es 0, 1, 2 ó 3; p es 1, 2 ó 3; y q es 1, 2, 3 ó 4; en la que: cada alquilo está opcionalmente sustituido con sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por arilo, OH, O-alquilo, CO, halógeno, CF3 y OCF3; cada arilo está opcionalmente sustituido con sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-4, NH2, OCF3, CF3, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO2-alquilo y NO2; y cada heteroarilo está opcionalmente sustituido con sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C1-4, NH2, OCF3, CF3, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO2-alquilo y NO2; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Inhibidores de NF-\kappaB.

Campo de la invención

Esta invención se refiere, en general, a compuestos de aminotiofeno para inhibir la activación patológica del factor de transcripción NF-\kappaB (factor nuclear-\kappaB). Estos compuestos son particularmente útiles para tratar enfermedades en las que está implicada la activación del NF-\kappaB. Más específicamente, estos compuestos pueden usarse para inhibir la fosforilación por IKK-\beta (I\kappaB cinasa-\beta, también conocida como IKK-2) de I\kappaB (proteína inhibidora \kappaB) -que previene la posterior degradación y activación de dímeros del NF-\kappaB. Tales compuestos son útiles en el tratamiento de una variedad de enfermedades asociadas con la activación del NF-\kappaB, incluyendo trastornos inflamatorios y de reparación de tejidos; particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica); osteoartritis; osteoporosis y enfermedades fibróticas; dermatosis, incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones cutáneas inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkin, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos y ataxia telangiectasia.

Antecedentes de la invención

Avances recientes en los conocimientos científicos sobre los mediadores implicados en enfermedades inflamatorias agudas y crónicas y cáncer han dado lugar a nuevas estrategias en la búsqueda de terapias eficaces. Los enfoques tradicionales incluyen la intervención directa del objetivo, como el uso de anticuerpos específicos, antagonistas de receptores o inhibidores de enzimas. La reciente apertura de caminos en la elucidación de mecanismos reguladores implicados en la transcripción y la traducción de una variedad de mediadores ha aumentado el interés en enfoques terapéuticos dirigidos a nivel de la transcripción de genes.

El factor nuclear \kappaB (NF-\kappaB) pertenece a una familia de complejos de factores de transcripción diméricos estrechamente relacionados compuesta por diversas combinaciones de la familia de polipéptidos ReI/NF-\kappaB. La familia consiste en cinco productos génicos individuales en mamíferos, ReIA (p65), NF-\kappaB1 (p50/p105), NF-\kappaB2 (p49/p100), c-ReI y ReIB, todos los cuales pueden formar heterodímeros u homodímeros. Estas proteínas comparten un "dominio de homología ReI" de 300 aminoácidos altamente homólogo, que contiene los dominios de unión al ADN y de dimerización. En el extremo C-terminal del dominio de homología ReI hay una secuencia de translocación nuclear importante en el transporte del NF-\kappaB del citoplasma al núcleo. Además, p65 y cReI poseen potentes dominios de transactivación en sus extremos C-terminales.

La actividad del NF-\kappaB está regulada por su interacción con un miembro de la familia de proteínas inhibidoras I\kappaB. Esta interacción bloquea eficazmente la secuencia de localización nuclear en las proteínas NF-\kappaB, impidiendo de este modo la migración del dímero al núcleo. Una amplia variedad de estímulos activan al NF-\kappaB a través de lo que probablemente son múltiples vías de transducción de señales. Se incluyen productos bacterianos (LPS), algunos virus (VIH-1, HTLV-1), citocinas inflamatorias (TNF\alpha, IL-1), agentes de estrés ambiental y oxidativo y agentes que dañan el ADN. No obstante, la fosforilación y posterior degradación de I\kappaB es, en apariencia, común a todos los estímulos. I\kappaB se fosforila en dos serinas N-terminales por las cinasas I\kappaB identificadas recientemente (IKK-\alpha e IKK-\beta). Los estudios de mutagénesis dirigida indican que estas fosforilaciones son críticas para la posterior activación del NF-\kappaB ya que, una vez fosforilada, la proteína está marcada para la degradación por la vía ubiquitina-proteasoma. Sin I\kappaB, los complejos activos del NF-\kappaB son capaces de translocarse al núcleo, donde se unen de manera selectiva con secuencias potenciadoras específicas de genes preferidas. Se incluyen entre los genes regulados por NF-\kappaB varias citocinas y quimiocinas, moléculas de adhesión celular, proteínas de fase aguda, proteínas inmunoreguladoras, enzimas metabolizadoras de eicosanoides y genes antiapoptóticos.

Se conoce bien que NF-\kappaB desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores pro-inflamatorios, incluyendo citocinas tales como TNF, IL-\beta, IL-6 e IL-8, moléculas de adhesión celular, tales como ICAM y VCAM y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). Se sabe que tales mediadores desempeñan un papel en el reclutamiento de leucocitos en los sitios de inflamación y, en el caso de iNOS, puede conducir a la destrucción de órganos en algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes.

La importancia del NF-\kappaB en los trastornos inflamatorios está adicionalmente reforzada por estudios de inflamación de las vías respiratorias incluyendo asma, en los que se ha demostrado que NF-\kappaB está activado. Esta activación puede subyacer a la producción aumentada de citocinas y a la infiltración de leucocitos características de estos trastornos. Además, se sabe que los esteroides inhalados reducen la hipersensibilidad de las vías respiratorias y suprimen la respuesta inflamatoria en las vías respiratorias asmáticas. A la luz de los recientes descubrimientos con respecto a la inhibición del NF-\kappaB por glucocorticoides, se puede especular que estos efectos están mediados por una inhibición del NF-\kappaB.

\newpage

Pruebas adicionales del papel del NF-\kappaB en trastornos inflamatorios vienen de los estudios del sinovio reumatoide. Aunque NF-\kappaB está normalmente presente como un complejo citoplasmático inactivo, recientes estudios inmunohistoquímicos han indicado que NF-\kappaB está presente en el núcleo y, por lo tanto es activo, en las células que comprenden el sinovio reumatoide. Además, se ha demostrado que NF-\kappaB está activado en células sinoviales humanas en respuesta a la estimulación con TNF-\alpha o IL-1\beta. Tal distribución puede ser el mecanismo subyacente a la producción aumentada de citocinas y eicosanoides característica de este tejido. Véase Roshak, A. K., y col., J. Biol. Chem., 271, 31496-31501 (1996). Se ha demostrado expresión de IKK-\beta en sinoviocitos de pacientes de artritis reumatoide y estudios de transferencia de genes han demostrado el papel central de IKK-\beta en la producción estimulada de mediadores inflamatorios en estas células. Véase Aupperele y col. J. Immunology 1999; 163: 427-433 y Aupperle y col. J. Immunology 2001; 166: 2705-11. Más recientemente, se demostró que la administración por vía intraarticular de una construcción adenoviral de IKK-\beta de tipo silvestre provoca hinchazón de las patas, mientras que la administración por vía intraarticular de IKK-\beta dominante negativo inhibió la artritis inducida por adyuvante en rata. Véase Tak y col. Arthritis and Rheumatism 2001; 44: 1897-1907.

Las proteínas NF-\kappaB/ReI e I\kappaB también desempeñarán probablemente un papel clave en la transformación neoplásica y la metástasis. Los miembros de la familia se asocian con la transformación celular in vitro e in vivo como consecuencia de sobreexpresión, amplificación génica, cambios de posición de genes o translocaciones. Además, el cambio de posición y/o la amplificación de los genes que codifican estas proteínas se observa en 20-25% de ciertos tumores linfoides humanos. Además, NF-\kappaB se activa por ras oncogénico, el defecto más común en tumores humanos, y el bloqueo de la activación del NF-\kappaB inhibe la transformación celular mediada por ras. Además, se ha descrito un papel del NF-\kappaB en la regulación de la apoptosis, reforzando el papel de este factor de transcripción en la regulación de la proliferación celular de tumores. El TNF, la radiación ionizante y los agentes que dañan el ADN han demostrado activar al NF-\kappaB que, a su vez, conduce a la expresión regulada positivamente de diversas proteínas anti-apoptóticas. A la inversa, la inhibición del NF-\kappaB ha demostrado potenciar la muerte por apoptosis mediante estos agentes en diversos tipos celulares tumorales. Ya que esto probablemente representa un mecanismo fundamental de la resistencia de células tumorales a quimioterapia, los inhibidores de la activación del NF-\kappaB pueden ser agentes quimioterápicos útiles como agentes únicos o como terapia auxiliar. Informes recientes han implicado al NF-\kappaB como inhibidor de la diferenciación de células esqueléticas, además de como un regulador de la pérdida de masa muscular inducida por citocinas (Guttridge y col. Science; 2000; 289: 2363-2365) confirmando adicionalmente el potencial de los inhibidores del NF-\kappaB como nuevas terapias para el cáncer.

Se describen diversos inhibidores del NF-\kappaB en C. Wahl, y col. J. Clin. Invest. 101 (5), 1163-1174 (1998), R. W. Sullivan, y col. J. Med. Chem. 41, 413-419 (1998), J. W. Pierce, y col. J. Biol. Chem. 272, 21096-21103 (1997).

Se sabe que el producto marino natural himenialdisina inhibe al NF-\kappaB. Roshak, A., y col., JPET, 283, 955-961 (1997). Breton, J. J y Chabot-Fletcher, M. C., JPET, 282, 459-466 (1997).

Además, se han presentado solicitudes de patente sobre inhibidores aminotiofeno del IKK-2, véanse los documentos Callahan, y col., WO 2002030353; Baxter, y col., WO 2001058890, Faull, y col., WO 2003010158; Griffiths, y col., WO2003010163; Fancelli, y col., WO 200198290; inhibidores imidazol de IKK-2, véase Callahan, y col., WO 200230423; inhibidores anilinofenilpirimidina de IKK-2, véase Kois, y col., WO 2002046171; inhibidores \beta-carbolina de IKK-2, véase Ritzeler, y col., WO 2001068648, Ritzeler, y col., EP 1134221; Nielsch, y col. DE 19807993; Ritzeler, y col., EP 1209158; inhibidores indol de IKK-2, véase Ritzeler, y col., WO 2001030774; inhibidores bencimidazol del IKK-2, véase Ritzeler, y col., DE 19928424; Ritzeler y col, WO 2001000610; inhibidores aminopiridina de IKK-2, véase Lowinger, y col, WO2002024679; Murata, y col, WO 2002024693; Murata, y col., WO2002044153; inhibidores pirazolaquinazolina de IKK-2, véase Beaulieu, y col., WO 2002028860; Burke y col, WO 2002060386, Burke, y col. US 20030022898; inhibidores quinolina de IKK-2, Browner, y col., WO 2002041843, Browner, y col., US 20020161004 e inhibidores piridilcianoguanidina de IKK-2, véase Bjorkling, y col., WO 2002094813, Binderup y col, WO 2002094322 y Madsen, y col., WO 200294265. Se ha demostrado que los productos naturales estaurosporina, quercetina, K252a y K252b son inhibidores de IKK-2, véase Peet, G. W. y Li, J. J. Biol. Chem., 274, 32655-32661 (1999) y Wisniewski, D., y col., Analytical Biochem. 274, 220-228 (1999). También se han descrito inhibidores sintéticos de IKK-2, véase Burke, y col. J. Biol. Chem., 278, 1450-1456 (2003) y Murata, y col., Bioorg. Med. Chem. Lett., 13, 913-198 (2003), que han descrito inhibidores de IKK-2.

La Patente de Estados Unidos Nº 3.963.750 describe la preparación de ciertos aminotiofenos.

Resumen de la invención

La presente invención implica nuevos compuestos y nuevos usos de los presentes compuestos para inhibir la activación del factor de transcripción NF-tcB.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un compuesto para tratar enfermedades que pueden modificarse terapéuticamente alterando la actividad del factor de transcripción NF-\kappaB.

Por consiguiente, en el primer aspecto, esta invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la Fórmula I.

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En otro aspecto, esta invención proporciona el uso de un compuesto según la Fórmula I en la preparación de un medicamento para usar en el tratamiento de enfermedades en las que la patología de la enfermedad puede modificarse terapéuticamente inhibiendo la fosforilación y posterior degradación de I\kappaB por IKK-\beta.

En otro aspecto más, esta invención proporciona el uso de un compuesto según la Fórmula I en la preparación de un medicamento para usar en el tratamiento de enfermedades en las que la patología de la enfermedad puede modificarse terapéuticamente inhibiendo la activación patológica del NF-\kappaB.

En un aspecto particular, esta invención proporciona el uso de un compuesto según la Fórmula I en la preparación de un medicamento para usar en el tratamiento de una variedad de enfermedades asociadas con la activación del NF-\kappaB, incluyendo trastornos inflamatorios y de la reparación de tejidos, particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas, dermatosis, incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones cutáneas inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkin, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos y ataxia telangiectasia.

Descripción detallada de la invención

Los compuestos de la presente invención se seleccionan entre la Fórmula (I) que se muestra a continuación en este documento:

1

en la que:

\quad: R_{1} representa NR_{4}R_{5};

\quad: R_{2} representa CONH_{2} o SO_{2}NH_{2};

\quad: R_{3} se selecciona entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, CF_{3}, OCF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo, (CH_{2})_{q}NR_{7}R_{8}, O-(CH_{2})_{q}NR_{7}R_{8}, (CH_{2})_{q}-arilo, O-(CH_{2})_{q}-arilo, (CH_{2})_{q}-heteroarilo, O-(CH_{2})_{q}-heteroarilo, (CH_{2})_{q}-heteroalquilo, O-(CH_{2})_{q}-heteroalquilo y NO_{2};

\quad: R_{4} representa H o alquilo C_{1-4};

\quad: R_{5} representa H o CONHR_{6};

\quad: R_{6} se selecciona entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo y arilo;

\quad: R_{7} representa alquilo C_{1-4};

\quad: R_{8} representa alquilo C_{1-4};

\quad: m es 0, 1, 2 ó 3;

\quad: n es 0, 1, 2 ó 3;

\quad: p es 1, 2 ó 3; y

\quad: q es 1, 2, 3 ó 4;

\quad: en la que:

\quad: cada alquilo está opcionalmente sustituido con sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por arilo, OH, O-alquilo, CO, halógeno, CF_{3} y OCF_{3};

\quad: cada arilo está opcionalmente sustituido con sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo y NO_{2}; y

\quad: cada heteroarilo está opcionalmente sustituido con sustituyentes seleccionados entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo y NO_{2};

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

Se prefiere:

2

en la que:

\quad: R_{1} representa NR_{4}R_{5};

\quad: R_{2} representa CONH_{2};

\quad: R_{4} representa H;

\quad: R_{5} representa CONHR_{6};

\quad: R_{6} representa H;

\quad: R_{7} representa alquilo C_{1-4};

\quad: R_{8} representa alquilo C_{1-4};

\quad: m es 0;

\quad: n es 1 ó 2;

\quad: p es 1 ó 2; y

\quad: q es 1, 2, 3 ó 4;

\quad: en la que:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

\vskip1.000000\baselineskip

La presente invención incluye todos los hidratos, solvatos y complejos de los compuestos de esta invención. Si un centro quiral u otra forma de un centro isomérico está presente en un compuesto de la presente invención, todas las formas de tal isómero o isómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros, pretenden incluirse en este documento. Los compuestos de la invención que contienen un centro quiral pueden usarse como una mezcla racémica, una mezcla enantioméricamente enriquecida, o la mezcla racémica puede separarse usando técnicas bien conocidas y puede usarse sólo un enantiómero individual. En los casos en los que los compuestos tienen dobles enlaces carbono-carbono insaturados, tanto los isómeros cis (Z) como trans (E) están dentro del alcance de esta invención. En los casos en los que los compuestos pueden existir en formas tautoméricas, tales como tautómeros ceto-enol, cada forma tautomérica se contempla
como incluida dentro de esta invención siempre que esté en equilibrio o de forma predominante en una forma.

Esta invención proporciona el uso de un compuesto según la Fórmula I en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento de una variedad de enfermedades asociadas con la activación de NF-\kappaB incluyendo trastornos inflamatorios y de reparación de tejidos; particularmente, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas; dermatosis, incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones cutáneas inducidas por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkin, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones virales, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos y Ataxia Telangiestasia.

Los compuestos preferidos útiles en la presente invención incluyen: amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-ureido-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-acetilamino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-amino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-acetilamino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-amino-8-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-carboxílico; amida del ácido 8-metoxi-2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-amino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-acetilamino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-amino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; amida del ácido 2-acetilamino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; y amida del ácido 7-bromo-2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

El significado de cualquier sustituyente en cualquier aparición en la Fórmula I o en cualquier subfórmula de la misma es independiente de su significado, o del significado de cualquier otro sustituyente, en cualquier otra aparición, a menos que se especifique otra cosa.

Como se usa en este documento, "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado, opcionalmente sustituido, unido mediante enlaces sencillos carbono-carbono y que tiene 1-6 átomos de carbono unidos juntos. El grupo hidrocarbonado alquilo puede ser lineal, ramificado o cíclico, saturado o insaturado. Los sustituyentes sobre alquilo opcionalmente sustituido se seleccionan entre el grupo constituido por arilo, OH, O-alquilo, CO, halógeno, CF_{3}, y OCF_{3}.

Como se usa en este documento, "arilo" se refiere a un grupo aromático, opcionalmente sustituido, con al menos un anillo que tiene un sistema conjugado de electrones pi, que contiene hasta dos sistemas de anillos conjugados o condensados. Arilo incluye grupos arilo carbocíclico y biarilo, todos ellos opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes se seleccionan entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo y NO_{2}.

Como se usa en este documento, "heteroarilo" se refiere a un grupo aromático, opcionalmente sustituido, con al menos un anillo que tiene un sistema conjugado de electrones pi, que contiene hasta dos sistemas de anillos conjugados o condensados y 1-3 heteroátomos seleccionados entre O, S y N. Heteroarilo incluye grupos heteroarilarilo carbocíclicos, aril-heteroarilo y biheteroarilarilo, pudiendo estar todos ellos opcionalmente sustituidos. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo y naftilo. Los grupos arilo más preferidos incluyen fenilo. Los sustituyentes preferidos se seleccionan entre el grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3}, O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO, SO_{2}-alquilo y NO_{2}. Los ejemplos de anillos heteroarilo incluyen pirrol, furano, tiofeno, indol, isoindol, benzofurano, isobenzofurano, benzotiofeno, piridina, quinolina, isoquinolina, quinolizina, pirazol, imidazol, isoxazol, oxazol, isotiazol, tiazol, piridazina, pirimidina y pirazina.

Como se usa en este documento, "heteroalquilo" se refiere a un anillo opcionalmente sustituido que no tiene un sistema conjugado de electrones pi, que contiene hasta 1-3 heteroátomos seleccionados entre O, S y N. Son ejemplos de anillos heteroalquilo piperidina, piperazina, morfolina, tetrahidrofurano. tetrahidropirano y tetrahidrotiofeno.

Como se usa en este documento "halógeno" se refiere a F, Cl, Br y I.

La preparación general de los análogos de aminotiofeno se muestra en los Esquemas 1 y 2.

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Esquema 1

3

Esquema 2

4

A una solución agitada de cianoacetamida, azufre y cetona cíclica en etanol absoluto se le añade morfolina. La solución resultante se agita a temperatura ambiente o hasta 60ºC durante una noche. Después, el disolvente se retira al vacío y el residuo se recoge en acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra y se concentra al vacío para dar un sólido pardo oscuro. Después, normalmente el producto se purifica por cromatografía para dar el producto deseado.

Esta invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la Fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable, diluyente o excipiente. Por consiguiente, los compuestos de Fórmula I pueden usarse en la preparación de un medicamento. Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de Fórmula I preparados como se ha descrito anteriormente en este documento, pueden formularse como soluciones o como polvos liofilizados para la administración por vía parenteral. Los polvos pueden reconstituirse mediante la adición de un diluyente adecuado o de otro vehículo farmacéuticamente aceptable antes del uso. La formulación líquida puede ser una solución tamponada, isotónica o acuosa. Los ejemplos de diluyentes adecuados son una solución salina isotónica normal, una solución convencional de dextrosa a 5% en agua o una solución tamponada de acetato sódico o amónico. Tal formulación es especialmente adecuada para la administración por vía parenteral, pero también puede usarse para administración por vía oral o contenida en un inhalador o nebulizador de dosis medida para insuflación. Puede ser deseable añadir excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxicelulosa, goma arábiga, polietilenglicol, manitol, cloruro sódico o citrato sódico.

Como alternativa, estos compuestos pueden estar encapsulados, en comprimidos o preparados en una emulsión o jarabe para la administración por vía oral. Pueden añadirse vehículos sólidos o líquidos farmacéuticamente aceptables para potenciar o estabilizar la composición, o para facilitar la preparación de la composición. Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato cálcico dihidrato, terra alba, estearato de magnesio o ácido esteárico, talco, pectina, goma arábiga, agar o gelatina. Los vehículos líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, solución salina y agua. El vehículo puede también incluir un material de liberación sostenida tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de vehículo sólido varía pero, preferiblemente, estará entre aproximadamente 20 mg y aproximadamente 1 g por unidad de dosificación. Las preparaciones farmacéuticas se preparan siguiendo las técnicas farmacéuticas convencionales, que implican moler, mezclar, granular y comprimir, cuando sea necesario, para formas de comprimidos; o moler, mezclar y rellenar para formas de cápsulas de gelatina duras. Cuando se usa un vehículo líquido, la preparación será en forma de un jarabe, elixir, emulsión o de una suspensión acuosa o no acuosa. Tal formulación líquida puede administrarse directamente por vía oral o usarse para rellenar una cápsula de gelatina blanda.

Las composiciones típicas para inhalación están en forma de un polvo seco, solución, suspensión o emulsión. La administración puede ser, por ejemplo, mediante un inhalador de polvo seco (tal como un inhalador de una sola dosis o multi-dosis, por ejemplo, como se describe en la Patente de Estados Unidos 5590645) o por nebulización, o en forma de un aerosol presurizado. Las composiciones de polvo seco emplean típicamente un vehículo tal como lactosa, trehalosa o almidón. Las composiciones para nebulización emplean típicamente agua como vehículo. Los aerosoles presurizados emplean típicamente un propulsor tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano o, más preferiblemente, 1,1,1,2-tetrafluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano o mezclas de los mismos. Las formulaciones de aerosoles presurizados pueden estar en forma de una solución (empleando tal vez un agente solubilizante tal como etanol) o una suspensión que puede ser sin excipientes o emplear excipientes, incluyendo tensioactivos y/o codisolventes (por ejemplo, etanol). En las composiciones de polvo seco y las composiciones de aerosol en suspensión, el ingrediente activo será preferiblemente de un tamaño adecuado para inhalación (teniendo típicamente un diámetro de masa medio (DMM) de menos de 20 micrómetros, por ejemplo de 1 a 10, especialmente de 1 a 5 micrómetros). Puede ser necesaria la reducción del tamaño del ingrediente activo, por ejemplo, por micronización.

Las composiciones de aerosol presurizado se rellenarán generalmente en recipientes ajustados con una válvula, especialmente una válvula de medición. Los recipientes pueden revestirse opcionalmente con materiales plásticos, por ejemplo, con un polímero de fluorocarbono como se describe en el documento WO96/32150. Los recipientes se encajarán en un accionador adaptado para la administración por vía bucal.

Las composiciones típicas para la administración por vía nasal incluyen las mencionadas anteriormente para inhalación y, adicionalmente, incluyen composiciones no presurizadas en forma de una solución o suspensión en un vehículo inerte tal como agua, opcionalmente junto con excipientes convencionales tales como tampones, antimicrobianos, agentes modificantes de la tonicidad y agentes modificantes de la viscosidad que pueden administrarse por bombeo nasal.

Para la administración por vía rectal, los compuestos de esta invención pueden también combinarse con excipientes tales como manteca de cacao, glicerina, gelatina o polietilenglicoles y moldearse en un supositorio.

La presente invención incluye la administración por vía tópica, inhalatoria e intracolónica de los compuestos de Fórmula I. Por administración por vía tópica se entiende administración no sistémica, incluyendo la aplicación de un compuesto de la invención externamente en la epidermis, en la cavidad bucal y la instilación de tal compuesto en la oreja, el ojo y la nariz, en la que el compuesto no entra significativamente en el torrente sanguíneo. Por administración sistémica se entiende administración por vía oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular. La cantidad de un compuesto de la invención (en adelante denominado el ingrediente activo) requerida para el efecto terapéutico o profiláctico tras la administración por vía tópica variará, por supuesto, según el compuesto elegido, la naturaleza y la gravedad de la dolencia que se trata y del animal sometido a tratamiento, y está, en última instancia, sometida a criterio del médico.

Aunque es posible administrar un ingrediente activo solo como el producto químico puro, es preferible presentarlo como una formulación farmacéutica. El ingrediente activo puede comprender, para la administración por vía tópica, de 0,01 a 5,0% en peso de la formulación.

Las formulaciones tópicas de la presente invención, tanto para uso veterinario como para uso médico en seres humanos, comprenden un ingrediente activo junto con uno o más vehículos aceptables para los mismos y, opcionalmente, cualquier otro ingrediente terapéutico. El vehículo debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no perjudicial para el destinatario de la misma.

Las formulaciones adecuadas para la administración por vía tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas adecuadas para la penetración a través de la piel hasta el sitio en el que se requiere el tratamiento, tales como: linimentos, lociones, cremas, pomadas o pastas, y gotas adecuadas para la administración en el ojo, la oreja o la nariz.

Las gotas según la presente invención pueden comprender soluciones o suspensiones acuosas u oleosas estériles, y pueden prepararse disolviendo el ingrediente activo en una solución acuosa adecuada de un agente bactericida y/o fungicida, y/o cualquier otro conservante adecuado y, preferiblemente, incluyendo un agente tensioactivo. La solución resultante puede después clarificarse por filtración, transferirse a un envase adecuado, que después se cierra herméticamente y se esteriliza en autoclave, o mantenerse a 90-100ºC durante media hora. Como alternativa, la solución puede esterilizarse por filtración y transferirse a un envase mediante una técnica aséptica. Son ejemplos de agentes bactericidas y fungicidas adecuados para su inclusión en las gotas nitrato o acetato de fenilmercurio (0,002%), cloruro de benzalconio (0,01%) y acetato de clorhexidina (0,01%). Los disolventes adecuados para la preparación de una solución oleosa incluyen glicerol, alcohol diluido y propilenglicol.

Las lociones según la presente invención incluyen las adecuadas para su aplicación en la piel o en el ojo. Una loción ocular puede comprender una solución acuosa estéril que contiene opcionalmente un bactericida, y que puede prepararse por procedimientos similares a los de la preparación de gotas. Las lociones o linimentos para aplicación en la piel pueden también incluir un agente para acelerar la deshidratación y para refrescar la piel, tal como un alcohol o acetona, y/o un hidratante tal como glicerol o un aceite tal como aceite de ricino o aceite de cacahuete.

Las cremas, pomadas o pastas según la presente invención son formulaciones semisólidas del ingrediente activo para aplicación externa. Pueden prepararse mezclando el ingrediente activo en forma finamente dividida o de polvo, solo o en solución o suspensión en un fluido acuoso o no acuoso, con la ayuda de maquinaria adecuada, con una base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina dura, blanda o líquida, glicerol, cera de abejas, un jabón metálico, un mucílago, un aceite de origen natural tal como aceite de almendra, de maíz, de cacahuete, de ricino o de oliva, grasa de lana o sus derivados, o un ácido graso tal como ácido esteárico u oleico junto con un alcohol tal como propilenglicol o macrogoles. La formulación puede incorporar cualquier agente tensioactivo adecuado, tal como un agente tensioactivo aniónico, catiónico o no iónico, tal como ésteres de sorbitán o derivados polioxietileno de los mismos. Pueden también incluirse agentes de suspensión tales como gomas naturales, derivados de celulosa o en materiales orgánicos tales como sílices silíceas y otros ingredientes tales como lanolina.

Los compuestos de Fórmula I son útiles como inhibidores de la fosforilación de I\kappaB por la IKK-beta cinasa, y como tales son inhibidores de la activación del NF-\kappaB. La presente invención utiliza composiciones y formulaciones de dichos compuestos, incluyendo composiciones farmacéuticas y formulaciones de dichos compuestos.

La presente invención particularmente proporciona el uso de un compuesto según la Fórmula I en la preparación de un medicamento para usar en el tratamiento de enfermedades asociadas con la activación inapropiada del NF-\kappaB, comprendiendo dicho uso la administración a un animal, particularmente un mamífero, más particularmente un ser humano que lo necesite de uno o más compuestos de Fórmula I. La presente invención particularmente proporciona el uso de un compuesto según la Fórmula I en la preparación de un medicamento para usar en el tratamiento de trastornos inflamatorios y de la reparación de tejidos, particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas; dermatosis, incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones cutáneas inducidas por radiación ultravioleta (UV), enfermedades autoinmunes incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkin, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones víricas, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos y ataxia telangiectasia.

Para terapia aguda, es útil la administración por vía parenteral de uno o más compuestos de Fórmula I. Una infusión intravenosa del compuesto en dextrosa 5% en agua o en solución salina normal, o una formulación similar con excipientes adecuados, es más eficaz, aunque también es útil una inyección intramuscular embolada. Típicamente, la dosis parenteral será de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg; preferiblemente entre 0,1 y 20 mg/kg, de manera que se mantenga la concentración del fármaco en el plasma a una concentración eficaz para inhibir IKK-beta y, por lo tanto, la activación del NF-\kappaB. Los compuestos se administran de una a cuatro veces diariamente a un nivel para alcanzar una dosis diaria total de aproximadamente 0,4 a aproximadamente 80 mg/kg/día. La cantidad exacta de un compuesto usado en la presente invención que es terapéuticamente eficaz, y la vía por la que tal compuesto se administra mejor, se determina fácilmente por un experto en la materia comparando el nivel sanguíneo del agente con la concentración requerida para tener un efecto terapéutico.

Los compuestos de Fórmula I también pueden administrarse por vía oral al paciente, de tal manera que la concentración de fármaco sea suficiente para inhibir IKK-beta y, por lo tanto, la activación del NF-\kappaB, o para conseguir cualquier otra indicación terapéutica como se describe en este documento. Típicamente, una composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra a una dosis oral de entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 50 mg/kg de manera coherente con el estado del paciente. Preferiblemente, la dosis oral será de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 20 mg/kg.

Los compuestos de Fórmula I también pueden administrarse por vía tópica al paciente, de tal manera que la concentración de fármaco sea suficiente para inhibir IKK-beta y, por lo tanto, la activación del NF-\kappaB o para conseguir cualquier otra indicación terapéutica como se describe en este documento. Típicamente, una composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra en una formulación tópica de entre aproximadamente 0,01% y aproximadamente 5% p/p.

No se esperan efectos tóxicos inaceptables cuando se administran los compuestos de la presente invención según la presente invención.

La capacidad de los compuestos descritos en este documento para inhibir la activación del NF-\kappaB se demuestra claramente en su capacidad para inhibir la fosforilación del fragmento N-terminal de I\kappaB-\alpha por IKK-\beta (véanse los ejemplos de la Tabla 1). Estos compuestos también bloquean la degradación de I\kappaB-\alpha y la translocación nuclear del NF-\kappaB en monocitos humanos y otras células de mamíferos tras la activación de las células con estímulos pro-inflamatorios (por ejemplo, TNF-\alpha, LPS, etc.). Además estos compuestos inhiben la producción de mediadores pro-inflamatorios por monocitos humanos estimulados con LPS y fibroblastos sinoviales humanos primarios estimulados. La utilidad de los presentes inhibidores del NF-\kappaB en la terapia de enfermedades se basa en la importancia de la activación del NF-\kappaB en una variedad de enfermedades.

NF-\kappaB desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores pro-inflamatorios incluyendo citocinas tales como TNF, IL-1\beta, IL-6 e IL-8 (Mukaida y col., 1990; Liberman y Baltimore, 1990; Matsusaka y col., 1993), moléculas de adhesión celular, tales como ICAM y VCAM (Marui y col., 1993; Kawai y col., 1995; Ledebur y Parks, 1995) y óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) (Xie y col., 1994; Adcock y col., 1994). (Las citas bibliográficas completas están al final de esta sección). Se sabe que tales mediadores desempeñan un papel en el reclutamiento de leucocitos en los sitios de inflamación y, en el caso de iNOS, pueden conducir a la destrucción de órganos en algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes (McCartney-Francis y col., 1993; Kleemann y col., 1993).

Se obtienen pruebas de un papel importante del NF-\kappaB en trastornos inflamatorios en estudios de pacientes asmáticos. Biopsias bronquiales tomadas de asmáticos atópicos leves demuestran incrementos significativos en el número de células en la tinción de la submucosa para NF-\kappaB activado, NF-\kappaB total y citocinas reguladas por NF-\kappaB tales como GM-CSF y TNF\alpha, en comparación con biopsias de controles normales no atópicos (Wilson y col., 1998). Además, el porcentaje de vasos que expresan inmunorreactividad del NF-\kappaB está aumentado, así como la inmunorreactividad de IL-8 en el epitelio de las muestras de biopsia (Wilson y col., 1998). Como tal, la inhibición de la producción de IL-8 a través de la inhibición del NF-\kappaB, como se ha demostrado mediante estos compuestos, se esperaría que fuera beneficiosa en la inflamación de las vías respiratorias.

Estudios recientes sugieren que NF-\kappaB puede también desempeñar un papel crítico en la patogénesis de la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD). Se observa NF-\kappaB activado en muestras de biopsia de colon de pacientes con enfermedad de Chron y colitis ulcerosa (Ardite y col., 1998; Rogler y col., 1998; Schreiber y col., 1998). La activación es evidente en la mucosa inflamada pero no lo es en la mucosa no inflamada (Ardite y col., 1998; Rogler y col., 1998) y se asocia con una mayor expresión de ARNm de IL-8 en los mismos sitios (Ardite y col., 1998). Además, el tratamiento con corticoesteroides inhibe claramente la activación intestinal del NF-\kappaB y reduce la inflamación del colon (Ardite y col., 1998; Schreiber y col., 1998). De nuevo, se esperaría que la inhibición de la producción de IL-8 a través de la inhibición del NF-\kappaB, como se ha demostrado mediante estos compuestos, fuera beneficiosa en la enfermedad inflamatoria del intestino.

Los modelos animales de inflamación gastrointestinal proporcionan una confirmación adicional del papel del NF-\kappaB como regulador clave de la inflamación del colon. Se observa una mayor actividad del NF-\kappaB en los macrófagos de la lámina propia en la colitis inducida por ácido 2,4,6,-trinitrobenceno sulfónico (TNBS) en ratones, siendo p65 un componente fundamental de los complejos activados (Neurath y col., 1996; Neurath y Pettersson, 1997). La administración local de ácido nucleico antisentido de p65 anula los síntomas de colitis establecida en los animales tratados, sin signos de toxicidad (Neurath y col., 1996; Neurath y Pettersson, 1997). Así, se esperaría que inhibidores moleculares pequeños del NF-\kappaB fueran útiles en el tratamiento de IBD.

Pruebas adicionales de un papel del NF-\kappaB en trastornos inflamatorios vienen de estudios del sinovio reumatoide. Aunque NF-\kappaB está normalmente presente como un complejo citoplasmático inactivo, estudios inmunohistoquímicos recientes han indicado que NF-\kappaB está presente en el núcleo y, por lo tanto, es activo, en las células que constituyen el sinovio reumatoide humano (Handel y col., 1995; Marok y col., 1996; Sioud y col., 1998) y en modelos animales de la enfermedad (Tsao y col., 1997). La tinción se asocia con sinoviocitos de tipo A y endotelio vascular (Marok y col., 1996). Además, se observa activación constitutiva del NF-\kappaB en sinoviocitos cultivados (Roshak y col., 1996; Miyazawa y col., 1998) y en cultivos de células sinoviales estimulados con IL-1\beta o TNF\alpha (Roshak y col., 1996; Fujisawa y col., 1996; Roshak y col., 1997). Por lo tanto, la activación del NF-\kappaB puede subyacer a la producción aumentada de citocinas y a la infiltración de leucocitos características del sinovio inflamado. Sería de esperar que la capacidad de estos compuestos para inhibir al NF-\kappaB y, por lo tanto, inhibir la producción de mediadores pro-inflamatorios (por ejemplo, citocinas y prostanoides) por estas células, produjera beneficios en la artritis reumatoide.

Ensayos biológicos

Los compuestos de esta invención pueden ensayarse en uno de varios ensayos biológicos para determinar la concentración de compuesto que se requiere para tener un efecto farmacológico dado.

La actividad del NF-\kappaB puede también medirse en un ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA) para evaluar la presencia de la proteína NF-\kappaB en el núcleo. Las células de interés se cultivan hasta una densidad de 1 x 10^{6}/ml. Las células se recogen por centrifugación, se lavan en PBS sin Ca^{2+} ni Mg^{2+} y se resuspenden en PBS con Ca^{2+} y con Mg^{2+} a 1 x 10^{7} células/ml. Para examinar el efecto del compuesto sobre la activación del NF-\kappaB, las suspensiones celulares se tratan con diversas concentraciones de fármaco o de vehículo (DMSO, 0,1%) durante 30 min a 37ºC antes de la estimulación con TNF-\alpha (5,0 ng/ml) durante 15 min más. Los extractos celulares y nucleares se preparan como sigue. En resumen, al final del periodo de incubación, las células (1 x 10^{7} células) se lavan dos veces en PBS sin Ca^{2+} ni Mg^{2+}. Los sedimentos celulares resultantes se resuspenden en 20 \mul de Tampón A (Hepes 10 mM (pH 7,9), KCl 10 mM, MgCI_{2} 1,5 mM, ditiotreitol (DTT) 0,5 mM y NP-40 a 0,1%) y se incuban en hielo durante 10 min. Los núcleos se sedimentan por microcentrifugación a 3500 rpm durante 10 min a 4ºC. El sobrenadante resultante se recogió mientras que el extracto celular y el sedimento nuclear se resuspendieron en 15 \mul de Tampón C (Hepes 20 mM (pH 7,9), NaCl 0,42 M, MgCI_{2} 1,5 mM, glicerol a 25%, EDTA 0,2 mM, DTT 0,5 mM y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) 0,5 mM). Las suspensiones se mezclan suavemente durante 20 min a 4ºC y después se microcentrifugan a 14.000 rpm durante 10 min a 4ºC. El sobrenadante se recoge y se diluye hasta 60 \mul con Tampón D (Hepes 20 mM (pH 7,9), KCI 50 mM, glicerol a 20%, EDTA 0,2 mM, DTT 0,5 mM y PMSF 0,5 mM). Todas las muestras se almacenan a -80ºC hasta que se analizan. La concentración de proteína de los extractos se determina según el procedimiento de Bradford (Bradford, 1976) con reactivos de BioRad.

El efecto de compuestos sobre la activación del factor de transcripción se evalúa en un ensayo de cambio de movilidad electroforética (EMSA) usando extractos nucleares de células tratadas como se ha descrito anteriormente. Los oligonucleótidos de secuencia consenso de NF-\kappaB de doble cadena (5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3') se marcan con polinucleótido cinasa de T_{4} y con [g-^{32}P]ATP. La mezcla de unión (25 \mul) contiene Hepes-NaOH 10 mM (pH 7,9), Tris-HCI 4 mM (pH 7,9), KCI 60 mM, EDTA 1 mM, ditiotreitol 1 mM, glicerol a 10%, albúmina de suero bovino 0,3 mg/ml y poli(dI-dC)\cdotpoli(dI-dC) 1 \mug. Las mezclas de unión (10 \mug de extracto de proteína nuclear) se incuban durante 20 min a temperatura ambiente con 0,5 ng de oligonucleótido marcado con ^{32}P (50.000-100.000 cpm) en presencia o ausencia de competidor no marcado, después de lo cual, la mezcla se carga en un gel de poliacrilamida a 4% preparado en Tris borato/EDTA 1x y se realiza la electroforesis a 200 V durante 2 h. Después de la electroforesis, los geles se secan y se exponen en una película para la detección de la reacción de unión.

El efecto de compuestos sobre la reacción de fosforilación de I\kappaB puede controlarse en una inmunotransferencia de Western. Los extractos celulares se someten a electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) en geles a 10% (BioRad, Hercules, CA) y las proteínas se transfieren a membranas de nitrocelulosa (Hybond^{tm}-ECL, Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Los ensayos de inmunotransferencia se realizan usando a un anticuerpo policlonal de conejo dirigido contra I\kappaB\alpha o I\kappaB\beta seguido de un anticuerpo secundario anti-conejo de burro conjugado con peroxidasa (Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Las bandas inmunorreactivas se detectan usando el sistema de ensayo de Quimioluminiscencia Intensificada (ECL) (Amersham Corp., Arlington Heights, IL).

Se realizaron ensayos de cinasas de I\kappaB como sigue: Se expresó IKK-\alpha como una proteína marcada con hexahistidina en células de insecto infectadas con baculovirus y se purificó por una columna de afinidad de Ni-NTA. Se evaluó la actividad cinasa usando 50 ng de proteína purificada en tampón de ensayo (Hepes 20 mM, pH 7,7, MgCI_{2} 2 mM, MnCl_{2} 1 mM, 1-glicerofosfato 10 mM, NaF 10 mM, PNPP 10 mM, Na_{3}VO_{4} 0,3 mM, benzamidina 1 mM, PMSF 2 \muM, aprotinina 10 \mug/ml, leupeptina 1 \mug/ml, pepstatina 1 \mug/ml, DTT 1 mM) que contenía diversas concentraciones de compuesto o de vehículo de DMSO y ATP como se indica (Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, NJ). La reacción se inició mediante la adición de 200 ng de I\kappaB-GST (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA), en un volumen total de 50 \mul. Se dejó transcurrir la reacción durante 1 h a 30ºC, después de la cual se detuvo la reacción mediante la adición de EDTA hasta una concentración final de 20 mM. Se determinó la actividad cinasa por inmunoensayo de fluorescencia de lantánido potenciada por disociación (Wallac Oy, Turku, Finlandia) usando un anticuerpo fosfo-I\kappaB-\alpha (Ser32) (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA) y una IgG anti-conejo marcada con Eu^{3+} (Wallac Oy, Turku, Finlandia). Las placas se leyeron en un VICTOR 1420 Multilabel Counter (Wallac), usando un protocolo convencional de europio (excitación a 340 nm, emisión a 615 nm; fluorescencia medida durante 400 \mus después de un retraso de 400 \mus). Los datos se expresan como unidades de fluorescencia (cps).

IKK-\beta se expresó como una proteína marcada con GST y se evaluó su actividad en un ensayo de centelleo por proximidad en placa de 96 pocillos (SPA). En resumen, IKK-\beta se diluyó tampón de ensayo como se ha descrito anteriormente (20 nM finales), con diversas concentraciones de compuesto o de vehículo de DMSO, ATP 240 nM y [\gamma-^{33}P]-ATP 200 nCi (10 mCi/ml, 2000 Ci/mmol; NEN Life Science Products, Boston, MA). La reacción se inició con la adición de un péptido biotinilado que comprendía los aminoácidos 15-46 de I\kappaB-\alpha (American Peptide) hasta una concentración final de 2,4 \muM, en un volumen total de 50 \mul. Se incubó la muestra durante una hora a 30ºC, seguido de la adición de 150 \mul de tampón de parada (PBS sin Ca^{2+}, Mg^{2+}, Triton X-100 a 0,1% (v/v), EDTA 10 mM) que contenía 0,2 mg de perlas de SPA PVT revestidas con estreptavidina (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). La muestra se mezcló, se incubó durante 10 min a temperatura ambiente, se centrifugó (1000 x g, 2 minutos) y se midió en un Hewlett-Packard TopCount.

Además, la actividad de IKK-\beta o IKK-\alpha se mide por fosforilación de GST-IkappaBalfa recombinante usando transferencia de energía por resonancia de fluorescencia en tiempo real (TR-FRET) en placas de microtitulación de 384 pocillos. En resumen, IKK-\beta o IKK-\alpha se diluye en tampón de ensayo (HEPES 50 mM a pH 7,4 que contiene cloruro de magnesio 10 mM, CHAPS 1 mM, DTT 1 mM y BSA a 0,01% p/v) hasta una concentración final de 5 nM. Éste se añade a diversas concentraciones de compuesto o de vehículo de DMSO, y la reacción se inicia mediante la adición de GST-IkappaBalfa 25 nM y de ATP 1 \muM en tampón de ensayo hasta un volumen de 30 \mul. Después de la incubación durante 30 min a temperatura ambiente, la reacción se detuvo mediante la adición de EDTA 50 mM a pH 7,4 (15 \mul). Se consiguió la detección de producto fosforilado mediante la adición de un anticuerpo monoclonal anti-fosfoserina específico marcado con quelato de europio LANCE a una concentración final de 0,5 nM (Cell Signalling Technology por Perkin Elmer) y de anticuerpo anti-GST marcado con aloficocianina a una concentración final de 10 nM (Prozyme) para dar un volumen final de 60 \mul. Después de una incubación más a temperatura ambiente de al menos 30 min, la señal se leyó en un fluorímetro Perkin Elmer Discovery.

El efecto de inhibidores de IKK-\beta sobre la producción primaria de mediadores de fibroblastos sinoviales se evaluó como sigue: Se obtuvieron cultivos primarios de RSF humanas por digestión enzimática de sinovio procedente de pacientes adultos con artritis reumatoide como se ha descrito anteriormente (Roshak y col., 1996b). Se cultivaron células en Medio Esencial Mínimo de Earle (EMEM) que contenía suero bovino fetal (SBF) a 10%, penicilina 100 unidades/ml y estreptomicina 100 \mug/ml (GIBCO, Grand Island, NY), a 37ºC y CO_{2} a 5%, Se usaron cultivos a pases 4 hasta 9 a fin de obtener una población de fibroblastos de tipo B más uniforme. Para algunos estudios, los fibroblastos se sembraron a 5 x 10^{4} células/ml en placas de 24 pocillos de 16 mm (diámetro) (Costar, Cambridge, MA). Se expusieron células (a 70-80% de confluencia) a IL-1\beta (1 ng/ml) (Genzyme, Cambridge, MA) durante el tiempo indicado. Se añadieron fármacos en vehículo de DMSO (1%) a los cultivos celulares 15 minutos antes de la adición de IL-1. Los estudios se realizaron 3-4 veces usando células sinoviales de donantes diferentes. Se prepararon extractos celulares de RSF a partir de células tratadas como se ha descrito anteriormente. En resumen, se retiraron RSF humanas mediante tripsina/EDTA, se lavaron y se recogieron por centrifugación. Se prepararon extractos celulares como se ha descrito anteriormente (Dignam y col., 1983; Osborn, y col., 1989). En resumen, al final del periodo de incubación, las células (1 x 10^{7} células) se lavaron dos veces en PBS sin Ca^{2+} ni Mg^{2+}. Los sedimentos celulares resultantes se resuspendieron en 20 \mul de Tampón A (Hepes 10 mM (pH 7,9), KCI 10 mM, MgCI_{2} 1,5 mM, 0,5 mM)

Se evaluó el efecto de la inhibición de IKK-\beta sobre la producción de eicosanoides y citocinas estimulada por monocitos humanos como sigue: Se aislaron monocitos a partir de sangre completa heparinizada por centrifugación de doble gradiente como se ha descrito anteriormente. Después, se adhirieron PBMC aisladas enriquecidas con monocitos a placas de cultivo de 24 pocillos a 2 x 10^{6} células/ml en RPMI 1640 SBF a 10% (Hyclone, Logan, Utah) durante 2 h para enriquecer más la población de monocitos. Después, los medios se retiraron, las células se lavaron una vez con RPMI 1640 y se añadió 1 ml de RPMI 1640 SBF a 10% a los pocillos. Se añadieron compuestos de ensayo a los pocillos con una concentración final de vehículo de DMSO de 0,05%. Se activaron los monocitos mediante la adición de endotoxina 200 ng/ml (LPS; E. coli serotipo 026: B6) (Sigma, St. Louis, MO.) y se incubaron durante 24 h. Se analizaron sobrenadantes sin células por ELISA para TNF-\alpha (EIA desarrollado por SB), PGE_{2} (Cayman Chemical, Ann Arbor, Ml), IL-8 e IL-6 (Biosource International, Camarillo, CA). Se determinó la viabilidad de las células por exclusión de azul tripán.

Se evaluó el efecto de inhibidores de IKK-\beta sobre la inflamación inducida por éster de forbol como sigue: La respuesta inflamatoria inducida por la aplicación cutánea de éster de forbol (PMA) en el pabellón auricular externo de ratones Balb/c ha demostrado ser un modelo útil para examinar la infiltración celular inflamatoria multifactorial y la alteración inflamatoria de la epidermis. La intensa lesión inflamatoria está dominada por infiltración de neutrófilos, que puede cuantificarse fácilmente por medición de la concentración de mieloperoxidasa en tejidos y de enzima granular azurófila presente en neutrófilos. Además, puede medirse la intensidad total de la respuesta inflamatoria mediante la determinación del grosor de la oreja. Se administró tratamiento de fármaco o de vehículo a ratones Balb/c (n = 6/grupo) seguido de PMA (4 \mug/oreja). Se sacrificaron los ratones 4 h después, se determinó el grosor de la oreja y se controló la activación del NF-\kappaB por inmunotransferencia de Western de I\kappaB\alpha o por análisis EMSA.

Se evaluó el efecto de inhibidores de IKK-\beta sobre el edema de patas inducido por carragenina en patas de ratas como sigue: Se alojaron ratas Lewis macho (Charles River- Raleigh, NC), se les permitió libre acceso a comida y agua, y pesaban entre 200-275 g para cada experimento. Se administró compuesto o vehículo (tragacanto a 0,5% (p.o.) o DMSO a 10%, DMA a 5%, Cremophor a 30% (i.p.)) de 30 minutos a 1 hora antes de la inyección de carragenina. Se indujo el edema por inyección de carragenina a 1% en H_{2}Od estéril (0,05 ml/pata) en la superficie plantar de la pata trasera derecha. Se midió el grosor de la pata antes de la administración del compuesto o vehículo, y de nuevo a las 3 horas, para determinar cambios en el volumen de la pata. Se eutanasiaron las ratas por inhalación de CO_{2} y se retiró la pata trasera derecha, se congeló inmediatamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80C para su análisis.

Para determinar los efectos de un inhibidor de IKK-2 en el modelo de artritis inducida por colágeno (CIA) en ratón, se inmunizaron 12 ratones DBA/1 machos (20-22 gramos) por grupo de tratamiento a día 0 con un total de 100 \mul de adyuvante completo de Freund (CFA) que contenía 200 \mug de colágeno bovino de tipo II. A día 21, los ratones se estimularon con 100 \mul de solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía 200 \mug de colágeno bovino de tipo II (los 100 \mul de colágeno/CFA o de colágeno/PBS se inyecta por vía subcutánea en la cola). El inhibidor de IKK-2 en vehículo, o el vehículo solo, se administraron por vía intraperitoneal, dos veces diarias, desde el día 1 hasta el 40 (los síntomas de enfermedad comienzan a ser evidentes en los días 25-28). Dos grupos de tratamiento adicionales incluían el control positivo etanorcept (Enbrel) (4 mg/kg, por vía intraperitoneal, cada dos días) y el vehículo de etanorcept (PBS). Los ratones se puntuaron diariamente, hasta el día 50, para síntomas clínicos (véase más adelante) y se midió el grosor de las patas. Además de los 12 ratones por grupo de tratamiento que se puntuaron a lo largo del experimento, a diferentes tiempos durante el curso de la enfermedad, se utilizaron ratones satélite (3-5 por grupo de tratamiento) tratados como se ha descrito anteriormente para medir los niveles de citocinas/quimiocinas y los niveles de p65 en la pata, la respuesta de reclutamiento contra antígenos ex vivo drenando las células de ganglios linfáticos/esplenocitos y los cambios histológicos en la articulación.

Inducción de artritis. Se induce AIA mediante una sola inyección de 0,75 mg de Mycobacterium buyiricum (Difco, Detroit, Ml) suspendido en aceite de parafina en la base de la cola de ratas Lewis macho de 6-8 semanas de edad (160-180 g). Se miden los volúmenes de las patas traseras por un procedimiento de desplazamiento de agua a día 16 y/o a día 20. Los compuestos de ensayo se homogenizaron en un vehículo adecuado y se administraron por una vía adecuada. A los animales de control se les administraron los vehículos solos. Se usan generalmente dos protocolos de dosificación: dosificación profiláctica, que se inicia el día de la inyección del adyuvante, y administración terapéutica, que se inicia el día 10, una vez que se ha establecido la inflamación.

Puntuación clínica

A cada pata se le asignó una puntuación que variaba en el intervalo de 0 a 4, según los siguientes criterios:

0 = sin inflamación

1 = un sólo dedo hinchado

2 = varios dedos hinchados, hinchazón ligera de la pata

3 = varios dedos hinchados, hinchazón moderada de la pata

4 = todos los dedos hinchados, hinchazón grave de la pata.

Ejemplos y Experimentos General

Los espectros de resonancia magnética nuclear se registraron a 250, 300 ó 400 MHz usando, respectivamente, un espectrómetro Bruker AM 250, Bruker ARX300 o Bruker AC400. CDCl_{3} es deuteriocloroformo, DMSO-d_{6} es dimetilsulfóxido hexadeuterado y CD_{3}OD es tetradeuteriometanol. Los desplazamientos químicos se indican en partes por millón (\delta) campo abajo del patrón interno tetrametilsilano. Las abreviaturas para los datos de RMN son las siguientes: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, m = multiplete, dd = doblete de dobletes, dt = doblete de tripletes, ap. = aparente, a = ancho. J indica la constante de acoplamiento de RMN medida en Hertzios. Los espectros de infrarrojos de onda continua (IR) se registraron en un espectrómetro de infrarrojos Perkin-Elmer 683 y los espectros de infrarrojos de la transformada de Fourier (FTIR) se registraron en un espectrómetro de infrarrojos Nicolet Impact 400 D. Los espectros de IR y FTIR se registraron en modo de transición, y las posiciones de las bandas se indican en números de onda inversa (cm^{-1}). Los espectros de masas se recogieron en instrumentos VG 70 FE, PE Syx API III o VG ZAB HF, usando técnicas de ionización por bombardeo rápido de átomos (FAB) o electronebulización (ES). Los análisis elementales se obtuvieron usando un analizador elemental Perkin-Elmer 240C. Los puntos de fusión se recogieron en un aparato de punto de fusión Thomas-Hoover y están sin corregir. Todas las temperaturas se indican en grados centígrados.

Se usaron placas de capa fina Analtech Silica Gel GF y E. Merck Silica Gel 60 F-254 para la cromatografía de capa fina. Tanto la cromatografía ultrarrápida como la gravitatoria se realizaron sobre gel de sílice E. Merck Kieselgel 60 (malla 230-400).

Cuando se indica, algunos de los materiales se adquirieron de Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, TCI America, Portland, OR.

La descripción anterior describe completamente la invención, incluyendo las realizaciones preferidas de la misma. Las modificaciones y mejoras de las realizaciones descritas específicamente en este documento están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones. Sin elaboración adicional, se cree que un experto en la materia puede, usando la descripción anterior, utilizar la presente invención en toda su extensión. Por lo tanto, los Ejemplos de este documento deben interpretarse como meramente ilustrativos y de ninguna manera como una limitación del alcance de la presente invención. Las realizaciones de la invención en las que se reivindica una propiedad o privilegio exclusivo se definen como se indica a continuación.

Ejemplo 1 Trifluoroacetato de amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

Se añadió gota a gota morfolina (1 ml) a una solución agitada de cianoacetamida (0,84 g, 0,01 mol), azufre (0,36, 0,012 mol) y 2-indanona (1,32 g, 0,01 mmol) en etanol absoluto (5 ml). La solución resultante se agitó a 60ºC durante una noche. Después, el disolvente se retiró al vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo (10 ml), se lavó con agua (2 x 10 ml) y salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar un sólido pardo oscuro. Después, el producto se purificó por HPLC preparativa Gilson (columna de HPLC YMC de 50 x 20 mm de D.I., s-5 \mum, 120 \ring{A}; gradiente de elución, TFA al 0,1% en acetonitrilo:TFA acuoso al 0,1%, de 10:90 a 90:10, 10 min) para dar el compuesto del título en forma de un sólido pardo (100 mg, 0,435 mmol, rendimiento del 4,3%). ESMS m/z: 231 [M+H]^{+}.

Ejemplo 2 Amida del ácido 2-ureido-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

Se añadió gota a gota isocianato de clorosulfonilo (0,025 g, 0,17 ml) a una solución agitada de trifluoroacetato de amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico (0,040 g, 0,17 mmol) en diclorometano seco (2 ml). La mezcla de reacción resultante se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 30 min. Después, a la mezcla de reacción se le añadió agua (0,5 ml) y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 10 minutos más antes de que el disolvente se retirara al vacío. Después, el residuo se purificó por HPLC preparativa Gilson (columna de HPLC YMC 50 x 20 mm de D.I., s-5 \mum, 120 \ring{A}; gradiente de elución, TFA al 0,1% en acetonitrilo:TFA acuoso al 0,1%, de 10:90 a 90:10, 10 min) para dar el compuesto del título en forma de un sólido pardo (0,020 g, 0,435 mmol, rendimiento del 43,5%). ESMS m/z: 274 [M+H]^{+}.

Ejemplo 3 Amida del ácido 2-acetilamino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

Se añadió gota a gota cloruro de acetilo (0,039 g, 0,5 mmol) a una solución agitada de amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico (0,115 g, 0,5 mmol) en piridina seca (3 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción resultante se agitó en atmósfera de nitrógeno durante 2 h. Después, a la mezcla de reacción se le añadió éter etílico (20 ml). La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 10 minutos más. Después, la mezcla de reacción se filtró, se lavó con un exceso de éter etílico y se secó al aire para dar el compuesto del título en forma de un sólido pardo claro (0,082 g, 0,435 mmol, rendimiento del 60,3%). ESMS m/z: 273 [M+H]^{+}.

Ejemplo 4 Amida del ácido 2-amino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 1 con la excepción de que se reemplazó 2-indanona por beta-tetralona para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido pardo. ESMS m/z: 245 [M+H]^{+}.

Ejemplo 5 Amida del ácido 2-acetilamino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 3 con la excepción de que se reemplazó amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico por amida del ácido 2-amino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido pardo. ESMS m/z: 287 [M+H]^{+}.

Ejemplo 6 Amida del ácido 2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 con la excepción de que se reemplazó amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico por amida del ácido 2-amino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido pardo. ESMS m/z: 288 [M+H]^{+}.

Ejemplo 7 Trifluoroacetato de amida del ácido 2-amino-B-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 1 con la excepción de que se reemplazó 2-indanona por 7-metoxi-2-tetralona para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido gris claro. ESMS m/z: 275 [M+H]^{+}.

Ejemplo 8 Amida del ácido 8-metoxi-2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 con la excepción de que se reemplazó amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico por trifluoroacetato de amida del ácido 2-amino-8-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido pardo. ESMS m/z: 318 [M+H]^{+}.

Ejemplo 9 Amida del ácido 2-Amino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

Se añadió gota a gota morfolina (0,57 ml) a una solución agitada de cianoacetamida (0,48 g, 5,7 mmol), azufre (0,20, 6,24 mmol) y 6-metoxi-2-tetralona (1,00 g, 5,7 mmol) en etanol absoluto (3 ml). La solución resultante se agitó a 70ºC durante una noche. Después, el disolvente se retiró al vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo (10 ml), se lavó con agua (2 x 10 ml) y salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar un aceite pardo oscuro. El aceite residual se purificó por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 75%/hexano) para dar el compuesto del título en forma de un sólido gris claro (0,12 g, 0,437 mmol, rendimiento del 7,6%). ESMS m/z: 275 [M+H]^{+}.

Ejemplo 10 Amida del ácido 2-acetilamino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 3 con la excepción de que se reemplazó amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico por amida del ácido 2-amino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido gris claro. ESMS m/z: 317 [M+H]^{+}.

Ejemplo 11 Amida del ácido 2-amino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 9 con la excepción de que se reemplazó 6-metoxi-2-tetralona por 6-bromo-2-tetralona para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido gris claro. ESMS m/z: 324 [M+H]^{+}.

Ejemplo 12 Amida del ácido 2-acetilamino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 3 con la excepción de que se reemplazó amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico por amida del ácido 2-amino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido gris claro. ESMS m/z: 366 [M+H]^{+}.

Ejemplo 13 Amida del ácido 7-bromo-2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-fa]tiofeno-3-carboxílico

El compuesto del título se preparó por el mismo procedimiento que el Ejemplo 2 con la excepción de que se reemplazó amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico por trifluoroacetato de amida del ácido 2-amino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico para dar el compuesto del título anterior en forma de un sólido pardo. ESMS m/z: 367 [M+H]^{+}.

Claims

1. Un compuesto de fórmula (I):

5

en la que:

\quad: R_{1} representa NR_{4}R_{5};

\quad: R_{2} representa CONH_{2} o SO_{2}NH_{2};

\quad: R_{4} representa H o alquilo C_{1-4};

\quad: R_{5} representa H o CONHR_{6};

\quad: R_{7} representa alquilo C_{1-4};

\quad: R_{8} representa alquilo C_{1-4};

\quad: m es 0, 1, 2 ó 3;

\quad: n es 0, 1, 2 ó 3;

\quad: p es 1, 2 ó 3; y

\quad: q es 1, 2, 3 ó 4;

\quad: en la que:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto de fórmula (Ia):

6

en la que:

\quad: R_{1} representa NR_{4}R_{5};

\quad: R_{2} representa CONH_{2};

\quad: R_{4} representa H;

\quad: R_{5} representa CONHR_{6};

\quad: R_{6} representa H;

\quad: R_{7} representa alquilo C_{1-4};

\quad: R_{8} representa alquilo C_{1-4};

\quad: m es 0;

\quad: n es 1 ó 2;

\quad: p es 1 ó 2; y

\quad: q es 1, 2, 3 ó 4;

\quad: en la que:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionándose el compuesto entre el grupo constituido por:

Amida del ácido 2-amino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-ureido-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-acetilamino-4H-indeno[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-amino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-acetilamino-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-amino-8-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 8-metoxi-2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-amino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-acetilamino-7-metoxi-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-amino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico;

Amida del ácido 2-acetilamino-7-bromo-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; y

Amida del ácido 7-bromo-2-ureido-4,5-dihidro-nafto[1,2-b]tiofeno-3-carboxílico; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

4. El uso de un compuesto según la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la activación patológica de NF-\kappaB.

5. El uso según la reivindicación 4, en el que la enfermedad es un trastorno inflamatorio o de reparación de tejidos.

6. El uso según la reivindicación 4, en el que la enfermedad se selecciona entre el grupo constituido por artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas, dermatosis, incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesiones cutáneas inducidas por radiación ultravioleta (UV), enfermedades autoinmunes, incluyendo lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, rechazo de tejidos y órganos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkin, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones virales, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos y Ataxia Telangiestasia.

7. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en terapia.

8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.