ES2285125T3 - Inhibidores de nf-kb. - Google Patents
Inhibidores de nf-kb. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2285125T3 ES2285125T3 ES03731435T ES03731435T ES2285125T3 ES 2285125 T3 ES2285125 T3 ES 2285125T3 ES 03731435 T ES03731435 T ES 03731435T ES 03731435 T ES03731435 T ES 03731435T ES 2285125 T3 ES2285125 T3 ES 2285125T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- alkyl
- disease
- inflammatory
- ikk
- heteroaryl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
- C07D333/50—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D333/52—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes
- C07D333/62—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
- C07D333/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Virology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
Abstract
Un compuesto de acuerdo con la formula (I) a continuación en este documento: R1 representa CONH2; R2 representa NR4R5; R3 se selecciona entre el grupo constituido por H, CN, CF3, halógeno, arilo, heteroarilo, alquilo, O-alquilo, y S-alquilo; y puede estar unido a cualquiera de C4, C5, C6 o C7; R4 representa H o alquilo; y R5 se selecciona entre el grupo constituido por H, CO-alquilo, SO2-alquilo, CONH2, CONH-alquilo, CONH-arilo, CONH-heteroarilo, CSNH2, CSNH-alquilo, CSNH-arilo, CSNH-heteroarilo, SO2NH2, SO2NH-alquilo, SO2NH-arilo, y SO2NH-heteroarilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Description
Inhibidores de NF-\kappaB.
Esta invención se refiere en general a un
procedimiento de inhibición de la activación patológica del factor
de transcripción NF-\kappaB (factor
nuclear-\kappaB) usando compuestos de
amino-benzotiofeno. Dichos procedimientos son
particularmente útiles para tratar enfermedades en las que está
implicada la activación del NF-\kappaB. Más
específicamente, estos procedimientos pueden usarse para inhibir la
fosforilación por IKK-\beta (IxB
quinasa-\beta, conocida también como
IKK-2) de I\kappaB (proteína inhibidora
\kappaB)-que evita la posterior degradación y
activación de los dímeros del NF-\kappaB. Dichos
procedimientos son útiles en el tratamiento de diversas
enfermedades asociadas con la activación de
NF-\kappaB incluyendo trastornos inflamatorios y
de reparación de tejido; particularmente artritis reumatoide,
enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad
pulmonar obstructiva crónica), osteoartritis; osteoporosis y
enfermedades fibróticas; dermatosis, incluyendo psoriasis,
dermatitis atópica y lesión cutánea inducida por radiación
ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus
sistémico eritematoso, esclerosis múltiple, artritis psoriática,
espondilitis anquilosante, rechazo de órganos y tejidos, enfermedad
de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes,
glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkins,
caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones
virales, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA),
síndrome de disneico agudo en adultos, ataxia telangiectasia.
Recientes avances en el entendimiento científico
de los mediadores implicados en enfermedades inflamatorias agudas y
crónicas y cáncer han conducido a nuevas estrategias en la búsqueda
de compuestos terapéuticos eficaces. Los enfoques tradicionales
incluyen intervención directa sobre la diana tal como el uso de
anticuerpos específicos, antagonistas del receptor, o inhibidores
enzimáticos. Avances recientes en la aclaramiento de los mecanismos
reguladores implicados en la transcripción y traducción de diversos
mediadores han conducido a un mayor interés en enfoques
terapéuticos dirigidos al nivel de transcripción genética.
El factor nuclear \kappaB
(NF-\kappaB) pertenece a una familia de factores
de transcripción diméricos complejos muy relacionados compuesta por
diversas combinaciones de la familia de polipéptidos
Rel/NF-\kappaB. La familia está compuesta por
cinco productos génicos individuales en mamíferos, RelA (p65),
NF-xBl (p50/p105), NF-xB2
(p49/p100), c-Rel, y RelB, todos los cuales pueden
formar hetero- u homodímeros. Estas proteínas comparten un
"dominio de homología Rel" de 300 aminoácidos altamente
homólogo que contiene los dominios de unión al ADN y de
dimerización. En el extremo C-terminal del dominio
de homología Rel está una secuencia de translocación nuclear
importante en el transporte de NF-\kappaB desde el
citoplasma hasta el núcleo. Además, p65 y cRel poseen potentes
dominios de transactivación en sus extremos
C-terminales.
La actividad del NF-\kappaB
está regulada por su interacción con un miembro de la familia de
proteínas inhibidoras de I\kappaB. Esta interacción bloquea
eficazmente la secuencia de localización nuclear sobre las proteínas
NF-\kappaB, evitando de esta manera la migración
del dímero al núcleo. Una amplia variedad de estímulos activan
NF-\kappaB a través de lo que es probable que sean
rutas de transducción de señales múltiples. Se incluyen productos
bacterianos (LPS), algunos virus (VIH-1,
HTLV-1), citocinas inflamatorias (TNFa,
IL-1), agentes de estrés medioambiental y oxidativo
y de daño al ADN. Aparentemente común a todos los estímulos, sin
embargo, está la fosforilación y posterior degradación de
I\kappaB. I\kappaB se fosforila en dos serinas
N-terminales por las quinasas de I\kappaB
(IKK-\alpha e IKK-\beta)
identificadas recientemente. Los estudios de mutagénesis dirigida
al sitio indican que estas fosforilaciones son críticas para la
activación posterior del NF-\kappaB en que una
vez fosforilada la proteína está marcada para la degradación por al
ruta de ubiquitina-proteasoma. Libres de
I\kappaB, los complejos activos de NF-\kappaB
pueden translocarse al núcleo donde se unen de una manera selectiva
a secuencias potenciadoras de gen específico preferidas. Entre los
genes regulados por NF-\kappaB hay numerosas
citoquinas y quimioquinas, moléculas de adhesión celular, proteínas
de fase aguda, proteínas inmunoreguladoras, enzimas metabolizantes
eicosanoides y genes anti-apoptóticos.
Se sabe bien que el NF-\kappaB
desempeña un papel clave en la expresión regulada de un gran número
de mediadores pro-inflamatorios incluyendo
citoquinas tales como TNF, IL-1\beta,
IL-6 y IL-8, moléculas de adhesión
celular, tales como ICAM y VCAM, y óxido nítrico sintasa inducible
(iNOS). Se sabe que dichos mediadores desempeñan un papel en el
reclutamiento de leucocitos en los sitios de inflamación y en el
caso de iNOS, pueden conducir a la destrucción del órgano en
algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes.
La importancia del NF-\kappaB
en trastornos inflamatorios se refuerza adicionalmente mediante
estudios de inflamación de las vías respiratorias incluyendo asma,
en las que se ha demostrado que el NF-\kappaB está
activado. Esta activación puede sustentar la mayor producción de
citoquina y la infiltración de leucocitos características de estos
trastornos. Además, se sabe que los esteroides inhalados reducen la
hipersensibilidad de las vías respiratorias y reducen la respuesta
inflamatoria en vías respiratorias asmáticas. A la luz de los
recientes hallazgos con respecto a la inhibición con
glucocorticoides de NF-\kappaB, puede especularse
que estos efectos están mediados por una inhibición de
NF-\kappaB.
NF-\kappaB.
\newpage
La evidencia adicional del papel del
NF-\kappaB en trastornos inflamatorios procede de
estudios de sinovio reumatoide. Aunque el
NF-\kappaB normalmente está presente como un
complejo citoplásmico inactivo, recientes estudios
inmunohistoquímicos han indicado que elNF-\kappaB
está presente en los núcleos, y por lo tanto es activo, en las
células que comprenden el sinovio reumatoide. Adicionalmente, se ha
demostrado que NF-\kappaB está activado en
células sinoviales humanas en respuesta a la estimulación con
TNF-\alpha o IL-1\beta. Dicha
distribución puede ser el mecanismo subyacente para la mayor
producción de citoquina y eicosanoide característica de este
tejido. Véase Roshak, A. K., et al., J. Biol. Chem.,
271, 31496-31501 (1996). La expresión de
IKK-\beta se ha demostrado en sinoviocitos de
pacientes con artritis reumatoide y estudios de transferencia
génica han demostrado el papel central de
IKK-\beta en la producción estimulada del mediador
inflamatorio en estas células. Véase Aupperele et al. J.
Immunology 1999, 163:427-433 y Aupperle et
al. J. Immunology 2001; 166:2705-11. Más
recientemente, se demostró que la administración
intra-articular de una construcción adenoviral de
IKK-\beta de tipo silvestre provocaba la hinchazón
de la pata mientras que la administración
intra-articular de IKK-\beta
negativo dominante inhibía la artritis inducida por el adyuvante en
ratas. Véase Tak et al. Arthritis and Rheumatism
2001; 44:1897-1907.
También es probable que las proteínas
NF-\kappaB/Rel e I\kappaB desempeñen un papel
clave en la transformación neoplásica y metástasis. Los miembros de
la familia están asociados con la transformación celular in
vitro e in vivo como resultado de la sobreexpresión,
amplificación génica, recolocaciones o translocaciones génicas.
Además, la recolocación y/o amplificación de los genes que codifican
estas proteínas se observan en el 20-25% de ciertos
tumores linfoides humanos. Además, el NF-\kappaB
es activado por ras oncogénico, el defecto más común en tumores
humanos y el bloqueo de la activación del
NF-\kappaB inhibe la transformación celular
mediada por ras. Además, se ha informado de un papel para el
NF-\kappaB en la regulación de la apoptosis,
reforzando el papel de este factor de transcripción en la regulación
de la proliferación de células tumorales. Se ha demostrado que el
TNF, la radiación ionizante y los agentes que afectan al ADN activan
el NF-\kappaB que a su vez conduce a la
sobreexpresión regulada de diversas proteínas
anti-apoptóticas. A la inversa, se ha demostrado
que la inhibición del NF-\kappaB potencia la
destrucción apoptótica mediante estos agentes en diversos tipos de
células tumorales. Como esto representa probablemente un mecanismo
principal de resistencia de las células tumorales a la
quimioterapia, los inhibidores de la activación del
NF-\kappaB pueden ser agentes quimioterapéuticos
útiles como agentes individuales o como terapia adjunta. Recientes
informes han implicado al NF-\kappaB como
inhibidor de la diferenciación de las células esqueléticas así como
regulador del desgaste muscular inducido por citoquina (Guttridge
et al. Science; 2000; 289: 2363-2365),
que soporta adicionalmente el potencial de los inhibidores de
NF-\kappaB como nuevas terapias para el
cáncer.
Se describen diversos inhibidores del
NF-\kappaB en C. Wahl, et al. J. Clin.
Invest. 101(5), 1163-1174 (1998), R. W.
Sullivan, et al. J. Med Chem. 41,
413-419 (1998), J. W. Pierce, et al. J.
Biol. Chem. 272, 21096-21103 (1997).
Se sabe que el producto marino natural
himenialdisina inhibe NF-_{\kappa}B. Roshak, A.,
et al., JPET, 283, 955-961 (1997).
Breton, J. J y Chabot-Fletcher, M. C., JPET,
282, 459-466 (1997).
Además, se han presentado solicitudes de patente
sobre inhibidores de aminotiofeno de IKK-2, véase
Callahan, et al., documento WO 200203353; Baxter, et
al., documento WO 2001058890, Faull, et al., documento WO
2003010158; Griffiths, et al., documento WO 20030101.63;
Fancelli, et al., documento WO 200198290; inhibidores de
imidazol de IKK-2, véase Callahan, et al.,
documento WO 200230423; inhibidores de anilinofenilpirimidina de
IKK-2, véase Kois, et al., documento WO
2002046171; inhibidores de \beta-carbolina de
IKK-2, véase Ritzeler, et al., documento WO
2001068648, Ritzeler, et al., documento EP 1134221; Nielsch,
et al. documento DE 19807993; Ritzeler, et al.,
documento EP 1209158; inhibidores de indol de IKK-2,
véase Ritzeler, et al., documento WO 2001030774; inhibidores
de bencimidazol de IKK-2, véase Ritzeler, et
al., documento DE 19928424; Ritzeler et al, documento WO
2001000610; inhibidores de aminopiridina de IKK-2,
véase Lowinger, et al, documento WO 2002024679; Murata,
et al, documento WO 2002024693; Murata, et al.,
documento WO 2002044153; inhibidores de pirazolaquinazolina de
IKK-2, véase Beaulieu, et al., documento WO
2002028860; Burke et al, documento WO 2002060386, Burke,
et al. documento US 20030022898; inhibidores de quinolina de
IKK-2, Browner, et al., documento WO
2002041843, Browner, et al., documento US 20020161004 e
inhibidores de piridilcianoguanidina de IKK-2, véase
Bjorkling, et al., documento WO 2002094813, Binderup et
al, documento WO 2002094322 y Madsen, et al., documento
WO 200294265. Se ha demostrado que los productos naturales
estaurosporina, quercetina, K252a y K252b son inhibidores de
IKK-2, véase Peet, G. W. y Li, J. J. Biol.
Chem., 274, 32655-32661 (1999) y Wisniewski, D.,
et al., Analytical Biochem. 274, 220-228
(1999). Se han descrito también inhibidores sintéticos de
IKK-2, véase Burke, et al. J. Biol.
Chem., 278, 1450-1456 (2003) y Murata, et
al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 13,
913-198 (2003) como inhibidores de
IKK-2.
IKK-2.
La Patente de Estados Unidos Nº 3.963.750
describe la preparación de ciertos aminotiofenos. El documento EP
0747 052 describe moduladores del factor de transcripción
NF-\kappaB con un resto benzotiofeno.
La presente invención implica nuevos compuestos
y nuevos procedimientos de inhibición de la activación del factor
de transcripción NF-_{\kappa}B usando los
presentes compuestos.
Un objetivo de la presente invención es
proporcionar un procedimiento para tratar enfermedades que pueden
modificarse terapéuticamente alterando la actividad del factor de
transcripción NF-\kappaB.
Por consiguiente, en el primer aspecto, esta
invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de acuerdo con la Fórmula I.
En otro aspecto, esta invención proporciona un
procedimiento para tratar enfermedades en el que la patología de la
enfermedad puede modificarse terapéuticamente inhibiendo la
fosforilación y posterior degradación de I\kappaB por
IKK-\beta.
En otro aspecto más, esta invención proporciona
un procedimiento para tratar enfermedades en las que la patología
de la enfermedad pueda modificarse terapéuticamente inhibiendo la
activación patológica de NF-\kappaB.
En un aspecto particular, esta invención
proporciona procedimientos para tratar diversas enfermedades
asociadas con la activación de NF-\kappaB
incluyendo trastornos inflamatorios y de reparación de tejido,
particularmente artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del
intestino, asma y COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica)
osteoartritis, osteoporosis y enfermedades fibróticas, dermatosis,
incluyendo psoriasis, dermatitis atópica y lesión cutánea inducida
por radiación ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo
lupus sistémico eritematoso, esclerosis múltiple, artritis
psoriática, espondilitis anquilosante, rechazo de órganos y tejidos,
enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis,
diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de
Hodgkins, caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas
infecciones virales, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia
adquirida (SIDA), síndrome disneico agudo en adultos y ataxia
telangiectasia
Los compuestos de la presente invención se
seleccionan entre la Fórmula (I) a continuación en este
documento:
\vskip1.000000\baselineskip
R_{1} representa CONH_{2};
R_{2} representa NR_{4}R_{5};
R_{3} se selecciona entre el grupo constituido
por H, CN, CF_{3}, halógeno, arilo, heteroarilo, alquilo,
O-alquilo, y S-alquilo; y puede
estar unido a cualquiera de C_{4}, C_{5}, C_{6} o C_{7};
R_{4} representa H o alquilo; y
R_{5} se selecciona entre el grupo constituido
por H, CO-alquilo, SO_{2}-alquilo,
CONH_{2}, CONH-alquilo,
CONH-arilo, CONH-heteroarilo,
CSNH_{2}, CSNH-alquilo,
CSNH-arilo, CSNH-heteroarilo,
SO_{2}NH_{2}, SO_{2}NH-alquilo,
SO_{2}NH-arilo, y
SO_{2}NH-heteroarilo; o una sal farmacéuticamente
aceptable de los mismos.
Los compuestos preferidos útiles en la presente
invención incluyen: amida del ácido
2-amino-6-(4-fluoro-fenil)-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;
y amida del ácido
2-ureido-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico
amida del ácido.
Esta invención proporciona procedimientos para
tratar diversas enfermedades asociadas con la activación de
NF-\kappaB incluyendo trastornos inflamatorios y
de reparación de tejido; particularmente artritis reumatoide,
enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad
pulmonar obstructiva crónica) osteoartritis, osteoporosis y
enfermedades fibróticas; dermatosis, incluyendo psoriasis,
dermatitis atópica y lesión cutánea inducida por radiación
ultravioleta (UV); enfermedades autoinmunes incluyendo lupus
sistémico eritematoso, esclerosis múltiple, artritis psoriática,
espondilitis anquilosante, rechazo de órganos y tejidos, enfermedad
de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes,
glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkins,
caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones
virales, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA),
síndrome disneico agudo en adultos, y ataxia telangiectasia.
La presente invención incluye todos los
hidratos, solvatos, complejos y profármacos de los compuestos de
esta invención. Los profármacos son cualquier compuesto unido
covalentemente, que libera el fármaco precursor activo, de acuerdo
con la Fórmula I in vivo. Si está presente un centro quiral u
otra forma de centro isomérico en un compuesto de la presente
invención, se pretende que todas las formas de dicho isómero o
isómeros, incluyendo enantiómeros y diastereómeros, estén incluidas
en este documento. Los compuestos de la invención que contienen un
centro quiral pueden usarse como una mezcla racémica, una mezcla
enantioméricamente enriquecida, o la mezcla racémica puede
separarse usando técnicas bien conocidas y un enantiómero individual
puede usarse solo. En los casos en los que los compuestos tengan
dobles enlaces carbono-carbono insaturados, ambos
isómeros cis (Z) y trans (E) están dentro del alcance de esta
invención. En los casos en los que pueden existir compuestos en
formas tautoméricas, tales como tautómeros
ceto-enol, cada forma tautomérica se contempla como
incluida dentro de esta invención existiendo en equilibrio o
predominantemente en una forma.
El significado de cualquiera de los
sustituyentes en cualquier aparición en la Fórmula I o cualquier
subfórmula de la misma es independiente de su significado, o del
significado de cualquier otro sustituyente, en cualquier otra
aparición, a menos que se especifique otra cosa.
Como se usa en este documento, "alquilo" se
refiere a un grupo hidrocarburo opcionalmente sustituido unido
mediante enlaces sencillos carbono-carbono y que
tiene 1-6 átomos de carbono unidos juntos. El grupo
hidrocarburo alquilo puede ser lineal, ramificado o cíclico,
saturado o insaturado. Los sustituyentes en el alquilo opcionalmente
sustituido se seleccionan entre el grupo constituido por arilo, OH,
O-alquilo, CO, halógeno, CF_{3}, y
OCF_{3}.
OCF_{3}.
Como se usa en este documento, "arilo" se
refiere a un grupo aromático opcionalmente sustituido con al menos
un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugado, que
contiene hasta dos sistemas de anillo conjugados o condensados.
Arilo incluye grupos arilo carbocíclico, y biarilo, todos los cuales
pueden estar opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes se
seleccionan entre el grupo constituido por halógeno, alquilo
C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3},
O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO,
SO_{2}-alquilo y NO_{2}.
Como se usa en este documento,
"heteroarilo" se refiere a un grupo aromático opcionalmente
sustituido con al menos un anillo que tiene un sistema de
electrones pi conjugado, que contiene hasta dos sistemas de anillo
conjugados o condensados y 1-3 heteroátomos
seleccionados entre O, S y N. Heteroarilo incluye grupos
heteroarilarilo carbocíclico, aril-heteroarilo y
biheteroarilarilo, todos los cuales pueden estar opcionalmente
sustituidos. Los arilos preferidos incluyen fenilo y naftilo. Los
arilos más preferidos incluyen fenilo. Los sustituyentes preferidos
se seleccionan entre el grupo constituido por halógeno, alquilo
C_{1-4}, NH_{2}, OCF_{3}, CF_{3},
O-alquilo, S-alquilo, CN, CHO,
SO_{2}-alquilo y NO_{2}. Los ejemplos de anillos
de heteroarilo incluyen pirrol, furano, tiofeno, indol, isoindol,
benzofurano, iso-benzofurano, benzotiofeno,
piridina, quinolina, isoquinolina, quinolizina, pirazol, imidazol,
isoxazol, oxazol, isotiazol, tiazol, piridazina, pirimidina, y
pirazina.
Como se usa en este documento "halógeno"
incluye F, Cl, Br, y I.
Los siguientes procedimientos y ejemplos
pretenden ser ilustrativos de la presente invención pero no en un
sentido limitante.
La preparación general de análogos de amida del
ácido
2-aminobenzotiofeno-3-carboxílico
se muestra en el Esquema I.
La síntesis comienza con
2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofeno-3-carboxilato
de etilo (1) disponible en el mercado. La protección del grupo
amino con cloruro de acetilo (AcCl) y la oxidación con
2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona
(DDQ) proporcionan benzotiofeno 3. La desprotección de la acetamida
seguido de bromación con N bromosuccinimida (NBS) producen
2-aminobenzotiofeno 5. El acoplamiento cruzado de
Suzuki mediado por paladio (0) con ácido/éster bordnico dio después
6. La reprotección del grupo amino con dicarbonato de
di-terc-butilo [(Boc)_{2}O)
y la hidrólisis del grupo éster produce el ácido 8. El ácido
resultante se activa con 1,1'-carbonildiimidazol
(CDI), seguido de reacción con hidranión de amonio y tratamiento con
ácido trifluoroacético (TFA) produjo después amida del ácido
2-amino-benzotiofeno-3-carboxílico
10. El compuesto 10 puede transformarse fácilmente en urea primaria
11 por reacción con isocianato de clorosulfonilo o en urea
sustituida 12 mediante isocianatos
(Esquema II).
(Esquema II).
\newpage
Esquema
I
Esquema
II
La urea 15 se sintetiza a partir de
2-amino-benzo[b]tiofeno-3-carbonitrilo
(13, Esquema III) empleando un procedimiento de dos etapas;
hidrólisis de nitrilo seguido de urea formación.
Esquema
III
Los siguientes ejemplos pretenden ser
ilustrativos de la presente invención pero no limitantes de ninguna
forma.
Los espectros de resonancia magnética nuclear se
registraron a 250, 300 o 400 MHz usando, respectivamente, un
espectrómetro Bruker AM 250, Bruker ARX 300 o Bruker AC 400.
CDCl_{3} es deuteriocloroformo, DMSO-d_{6} es
hexadeuteriodimetilsulfóxido, y CD_{3}OD es tetradeuteriometanol.
Los desplazamientos químicos se presentan en partes por millón (d)
campo abajo respecto al patrón interno de tetrametilsilano. Las
abreviaturas para los datos de RMN data son de la siguiente manera:
s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, m =
multiplete, dd = doblete de dobletes, dt = doblete de tripletes, ap
= aparente, a = ancho. J indica la constante de acoplamiento de RMN
medida en Hertz. Los espectros de infrarrojo (IR) de onda continua
se registraron en un espectrómetro de infrarrojo
Perkin-Elmer 683, y los espectros de infrarrojo de
transformada de Fourier (FTIR) se registraron en un espectrómetro
de infrarrojo Nicolet Impact 400 D. Los espectros IR y FTIR se
registraron en modo transmisión, y las posiciones de banda se
presentan en números de onda a la inversa (cm^{-1}). Los
espectros de masas se tomaron en un instrumento VG 70 FE, PE Syx API
III, o VG ZAB HF, usando técnicas de ionización por bombardeo con
átomos rápidos (FAB) o electronebulización (ES). Los análisis
elementales se obtuvieron usando un analizador elemental
Perkin-Elmer 240C. Los puntos de fusión se tomaron
en un aparato de punto de fusión Thomas-Hoover y
están sin corregir. Todas las temperaturas se presentan en grados
Celsius.
Se usaron placas de capa fina Analtech Silica
Gel GF y E. Merck Silica Gel 60 F-254 para
cromatografía en capa fina. Se realizaron cromatografía
ultrarrápida y por gravedad en gel de sílice E. Merck Kieselgel 60
(malla 230-400).
Cuando se indica, ciertos materiales se
adquirieron en Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, TCI
America, Portland, OR.
A una solución de
2-amino-4, 5, 6,
7-tetrahidrobenzotiofeno-3-carboxilato
de etilo (16 g, 71,1 mmol) en THF (100 ml) se le añadió
4-(dimetilamino)piridina (434 mg, 3,55 mmol) y cloruro de
acetilo (6,1 ml, 85,3 mmol). Después de agitar durante 2 h a
temperatura ambiente, la solución se diluyó con solución de salmuera
(500 ml) y se extrajo con acetato de etilo (500 ml, 3 x). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y
se concentraron proporcionando el compuesto del título (18,3 g, 96%)
en forma de un sólido amarillo claro: EM (EN) m/z 268
(M+H)^{+}.
(M+H)^{+}.
Una solución de 1a (3,0 g, 11,24 mmol) en
benceno (100 ml) se mezcló con
2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzo-quinona
(3,8 g, 16,85 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo
durante 2 h, se diluyó con solución saturada de NaHCO_{3} (300
ml) y se extrajo con acetato de etilo (300 ml, 3 x). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y
concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de
etilo, 8:1) proporcionó después el compuesto del título (1,06 g,
35%) en forma de un sólido amarillo: EM (EN) m/z 264
(M+H)^{+};
A una solución de 1b (1,06 g, 4,03 mmol) en
tolueno (100 ml) se le añadió pirrolidina (5 ml). La mezcla
resultante se calentó a 100ºC durante 8 h, se diluyó con salmuera
solución (200 ml) y se extrajo con éter etílico (300 ml, 3 x). Las
fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron, y se concentraron. La cromatografía ultrarrápida
(hexanos/acetato de etilo, 4:1) dio después el compuesto del título
(0,76 g, 85%) en forma de un sólido amarillo: EM (EN) m/z 222
(M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,14
(d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,53 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 7,28 (m, 1 H), 7,04
(m, 1 H), 6,51 (s a, 2 H), 4,45 (c, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,50 (t, J =
7,2 Hz, 3 H).
A una solución de 1c (760 mg, 3,44 mmol) en
CHCl_{3} (10 ml) se le añadió N-bromosuccinimida
(673 mg, 3,78 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 h,
después se mezcló con solución saturada de NaHCO_{3} (100 ml), y
se extrajo con cloruro de metileno (100 ml, 3 x). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y
se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de
etilo, 4:1) proporcionó después el compuesto del título (930 mg,
90%) en forma de un sólido amarillo: EM (EN) m/z 300
(M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,96
(d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,63 (s, 1 H), 7,42 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,52
(s a, 2 H), 4,42 (c, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,48 (t, J = 7,2 Hz, 3
H).
A una solución de 1d (200 mg, 0,67 mmol) en
1,4-dioxano/agua (40 ml, 3:1) se le añadió ácido
4-fluorofenilbórico (209 mg, 1,34 mmol),
NaHCO_{3} (225 mg, 2,68 mmol) y Pd(PPh_{3})_{4}
(Pd al 9%, 79 mg, 0,067 mmol). La mezcla resultante se calentó a
110ºC durante 1 h, se diluyó con solución de salmuera (50 ml) y se
extrajo con acetato de etilo (50 ml, 3 x). Las fases orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se
concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de
etilo, 4:1) proporcionó después el compuesto del título (190 mg,
90%) en forma de un aceite rosa pegajoso: EM (EN) m/z 316
(M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,16
(d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,69 (s, 1H), 7,62 (m, 2 H), 7,50 (d, J = 8,4
Hz, 1 H), 7,15 (m, 2 H), 6,5 8 (s a, 2 H), 4,46 (c, J = 7,2 Hz, 2
H), 1,50 (t, J = 7,2 Hz, 3 H).
A una solución de 1e (190 mg, 0,603 mmol) en THF
(10 ml) se le añadió 4-(dimetilamino)piridina (7,4 mg, 0,06
mmol) y dicarbonato de
di-terc-butilo (158 mg, 0,724 mmol).
La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h,
se diluyó con salmuera solución (50 ml), y se extrajo con acetato de
etilo (50 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron, y se concentraron. La cromatografía
ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 4:1) proporcionó después el
compuesto del título (200 mg, 80%) en forma de un sólido amarillo:
EM (EN) m/z 416-(M+H)^{+}.
Una solución de 1f (80 mg, 0,193 mmol) en
etanol/agua (1:1, 10 ml) se mezcló con KOH (21,6 mg, 0,39 mmol). La
mezcla resultante se calentó a 60ºC durante 1 h, se diluyó con HCl
(30 ml, IN), y se extrajo con acetato de etilo (30 ml, 3 x). Las
fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron, y se concentraron dando el compuesto del título (62 mg,
84%) en forma de un sólido blanco: EM (EN) m/z 388
(M+H)^{+}.
A una solución de 1g (150 mg, 0,38 mmol) en DMF
(3 ml) se le añadió 1,1'-carbonildiimidazol (125 mg,
0,78 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente
durante 1 h y se mezcló con hidranión de amonio (37%, 5 ml). La
mezcla se diluyó con solución de salmuera (10 ml) y se extrajo con
acetato de etilo (20 ml, 3 x). Las fases orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y se concentraron. La
cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de etilo, 1:1)
proporcionó después el compuesto del título (48 mg, 32%) en forma
de un sólido blanco: EM (EN) m/z 387 (M+H)^{+}; ^{1}H RMN
(400 MHz, CDCl_{3}) \delta 11,14 (s, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 7,85
(d, J = 4,4 Hz, 1 H), 7,61 (m, 3 H), 7,18 (m, 2 H), 5,87 (s a, 2 H),
1,59 (s, 9H).
Una solución de 1h (20 mg, 0,051 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (5 ml) se mezcló con ácido trifluoroacético (0,5
ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante
1 h, después se mezcló con solución saturada de NaHCO_{3} (30
ml), y se extrajo con acetato de etilo (30 ml, 3 x). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y
se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de
etilo, 1:1) proporcionó el compuesto del título (8 mg, 55%) en forma
de un sólido blanco: EM (EN) m/z 287 (M+H)^{+}; ^{1}H
RMN (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,73 (s, 1 H),
7,63-7,50 (m, 3 H), 7,42 (m, 1 H), 7,08 (m, 2
H).
Una solución de
2-amino-benzo[b]tiofeno-3-carbonitrilo
(50 mg, 0,29 mmol) en H_{2}SO_{4} concentrado (1,5 ml) se
calentó a 60ºC durante 2 h. La solución se vertió en agua enfriada
con hielo (5 ml), se mezcló con solución saturada NaHCO_{3} (30
ml), y se extrajo con acetato de etilo (30 ml, 3 x). Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron, y
se concentraron. La cromatografía ultrarrápida (hexanos/acetato de
etilo, 1:1) proporcionó después el compuesto del título (23 mg, 41%)
en forma de un sólido blanco: EM (EN) m/z 193
(M+H)^{+}.
A la mezcla de 2a (20 mg, 0,104 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (10 ml) se le añadió isocianato de clorosulfonilo
(15 \mul, 0,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura
ambiente durante 1 h y se mezcló con agua (0,5 ml). La separación
mediante una HPLC de fase inversa proporcionó el compuesto del
título (10 mg, 40%) en forma de un sólido blanco: EM (EN) m/z 236
(M+H)^{+}; ^{1}H RMN (400 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 10,77 (s, 1 H), 7,84 (m, 2
H), 7,56 (s a, 3 H), 7,20 (m, 1 H), 7,08 (m, 1 H), 6,98 (s a,
1H).
Esta invención proporciona una composición
farmacéutica, que comprende un compuesto de acuerdo con la Formula
I y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Por consiguiente, los compuestos de Fórmula I pueden usarse para
fabricar un medicamento. Las composiciones farmacéuticas de los
compuestos de Fórmula I preparadas como se ha descrito
anteriormente en este documento pueden formularse como soluciones o
polvos liofilizados para administración parenteral. Los polvos
pueden reconstituirse mediante la adición de un diluyente adecuado
u otro vehículo farmacéuticamente aceptable antes de su uso. La
formulación líquida puede ser una solución acuosa tamponada,
isotónica. Los ejemplos de diluyentes adecuados son solución salina
isotónica normal, patrón de dextrosa al 5% en agua o solución
tamponada de acetato sódico o de amonio. Dicha formulación es
especialmente adecuada para administración parenteral, aunque puede
usarse también para administración oral o contenida en un inhalador
o nebulizador de dosis medida para insuflación. Puede ser deseable
añadir excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina,
hidroxi celulosa, goma arábiga, polietilenglicol, manitol, cloruro
sódico o citrato sódico.
Como alternativa, estos compuestos pueden
encapsularse, comprimirse o prepararse en una emulsión o jarabe
para administración oral. Pueden añadirse vehículos sólidos o
líquidos farmacéuticamente aceptables para potenciar o estabilizar
la composición, o para facilitar la preparación de la composición.
Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato cálcico
dihidrato, terra alba, magnesio estearato o ácido esteárico, talco,
pectina, goma arábiga, agar o gelatina. Los vehículos líquidos
incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, solución
salina y agua. El vehículo puede incluir también un material de
liberación sostenida tal como monoestearato de glicerilo o
diestearato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de
vehículo sólido varía aunque, preferiblemente, estará entre
aproximadamente 20 mg a aproximadamente 1 g por unidad de
dosificación. Las preparaciones farmacéuticas se preparan siguiente
técnicas farmacéuticas convencionales que implican molienda,
mezcla, granulación, y compresión, cuando sea necesario, para formas
de comprimido; o molienda, mezcla y llenado para formas de cápsula
de gelatina duras. Cuando se usa un vehículo líquido, la preparación
estará en forma de un jarabe, elixir, emulsión o una suspensión
acuosa o no acuosa. Dicha formulación líquida puede administrarse
directamente p.o. o llenarse en una cápsula de gelatina blanda.
Las composiciones típicas para inhalación están
en forma de un polvo seco, solución, suspensión o emulsión. La
administración puede ser, por ejemplo, mediante un inhalador de
polvo seco (tal como un inhalador de dosis única o de múltiples
dosis, por ejemplo como se describe en la Patente de Estados Unidos
5590645 o por nebulización o en forma de un aerosol a presión. Las
composiciones de polvo seco típicamente emplean un vehículo tal como
lactosa, trehalosa o almidón. Las composiciones para nebulización
típicamente emplean agua como vehículo. Los aerosoles a presión
típicamente emplean un propulsor tal como diclorodifluorometano,
triclorofluorometano o, más preferiblemente,
1,1,1,2-tetrafluoroetano,
1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano
o mezclas de los mismos. Las formulaciones de aerosol a presión
pueden estar en forma de una solución (empleando quizás un agente de
solubilización tal como etanol) o una suspensión que puede estar
libre de excipiente o que emplea excipientes incluyendo
tensioactivos y/o co-disolventes (por ejemplo,
etanol). En las composiciones de polvo seco y composiciones de
aerosol en suspensión el ingrediente activo preferiblemente será de
un tamaño adecuado para inhalación (que típicamente tiene un
diámetro másico medio (MMD) menor de 20 micrómetros por ejemplo
1-10 especialmente 1-5
micrómetros). La reducción de tamaño del ingrediente activo puede
ser necesaria, por ejemplo, por micronización.
Las composiciones de aerosol a presión
generalmente se llenarán en bombonas equipadas con una válvula,
especialmente una válvula de medida. Las bombonas pueden recubrirse
opcionalmente con un material plástico, por ejemplo un polímero de
fluorocarbono como se describe en el documento WO 96/32150. Las
bombonas se ajustarán en un accionador adaptado para suministro
bucal.
Las composiciones típicas para suministro nasal
incluyen aquellas mencionadas anteriormente para inhalación y que
incluyen adicionalmente composiciones no presurizadas en forma de
una solución o suspensión en un vehículo inerte tal como agua
opcionalmente junto con excipientes convencional tales como
tampones, anti-microbianos, agentes modificadores
de la tonicidad y agentes modificadores de la viscosidad que pueden
administrarse mediante una bomba nasal.
Para administración rectal, los compuestos de
esta invención pueden combinarse también con excipientes tales como
manteca de cacao, glicerina, gelatina o polietilenglicoles y
moldearse en un supositorio.
Los procedimientos de la presente invención
incluyen administración tópica, inhalada e intracolónica de los
compuestos de Fórmula I. Por administración tópica se entiende
administración no sistémica, incluyendo la aplicación de un
compuesto de la invención externamente a la epidermis, a la cavidad
bucal e instilación de dicho compuesto en el oído, el ojo y la
nariz, en el que el compuesto no entra significativamente en el
torrente sanguíneo. Por administración sistémica se entiende
administración oral, intravenosa, intraperitoneal e intramuscular.
La cantidad de un compuesto de la invención (denominado
posteriormente en este documento ingrediente activo) necesaria para
el efecto terapéutico o profiláctico tras la administración tópica
variará, por supuesto, con el compuesto elegido, la naturaleza y
gravedad del estado a tratar y el animal que experimenta el
tratamiento, y finalmente está a discreción del médico.
Aunque es posible administrar un ingrediente
activo solo como el compuesto químico bruto, es preferible
presentarlo como una formulación farmacéutica. El ingrediente
activo puede comprender, para administración tópica, del 0,01 al
5,0% en peso de la formulación.
Las formulaciones tópicas de la presente
invención, tanto para uso veterinario y para medicina humana,
comprenden un ingrediente activo junto con uno o más vehículos
aceptables para las mismas y opcionalmente cualquier otro
ingrediente terapéutico. El vehículo debe ser "aceptable" en el
sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la
formulación y no perjudicial para el destinatario de la misma.
Las formulaciones adecuadas para administración
tópica incluyen preparaciones líquidas o
semi-líquidas adecuadas para penetración a través
de la piel al sitio donde se necesita el tratamiento tales como:
linimentos, lociones, cremas, pomadas o pastas, y gotas adecuadas
para administración al ojo, oído o nariz.
Las gotas de acuerdo con la presente invención
pueden comprender soluciones o suspensiones acuosas u oleosas
estériles y pueden prepararse disolviendo el ingrediente activo en
una solución acuosa adecuada de un agente bactericida y/o fungicida
y/o cualquier otro conservante adecuado, e incluyendo
preferiblemente un agente tensioactivo. La solución resultante
puede aclararse después por filtración, transferirse a un recipiente
adecuado, que se sella después y esteriliza en un autoclave, o
manteniéndolo a 90-100ºC durante media hora. Como
alternativa, la solución puede esterilizarse por filtración y
transferirse al recipiente mediante una técnica aséptica. Los
ejemplos de agentes bactericidas y fungicidas adecuados para
inclusión en las gotas son nitrato o acetato fenilmercúrico
(0,002%), cloruro de benzalconio (0,01%) y acetato de clorhexidina
(0,01%). Los disolventes adecuados para la preparación de una
solución oleosa incluyen glicerol, alcohol diluido y
propilenglicol.
Las lociones de acuerdo con la presente
invención incluyen aquellas adecuadas para aplicación a la piel o
al ojo. Una loción para el ojo puede comprender una solución acuosa
estéril que opcionalmente contiene un bactericida y puede
prepararse mediante procedimientos similares a los de la preparación
de gotas. Las lociones o linimentos para aplicación a la piel
pueden incluir también un agente para acelerar el secado y
refrigerar la piel, tal como un alcohol o acetona, y/o un
humectante tal como glicerol o un aceite tal como aceite de ricino
o aceite de cacahuete.
Las cremas, pomadas o pastas de acuerdo con la
presente invención son formulaciones semi-sólidas
del ingrediente activo para aplicación externa. Pueden prepararse
mezclando el ingrediente activo en forma finamente dividida o de
polvo, solas o en solución o suspensión en un fluido acuoso o no
acuoso, con ayuda de la maquinaria adecuada, con una base grasa o
no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tales como parafina
dura, blanda o líquida, glicerol, cera de abejas, un jabón
metálico, un mucílago, un aceite de origen natural tal como aceite
de almendra, maíz, cacahuete, ricino o de oliva, lanolina o sus
derivados, o un ácido graso tal como ácido esteárico u oleico junto
con un alcohol tal como propilenglicol o macrogoles. La formulación
puede incorporar cualquier agente tensioactivo adecuado tal como un
agente tensioactivo aniónico, catiónico o no iónico tal como ésteres
de sorbitán o derivados polioxietileno de los mismos. Pueden
incluirse también agentes de suspensión tales como gomas naturales,
derivados de celulosa o materiales orgánicos tales como sílices
silíceas, y otros ingredientes tales como lanolina.
Los compuestos de Fórmula I son útiles como
inhibidores de la fosforilación por IKK-beta quinasa
de I\kappaB y, como tales, son inhibidores de la activación de
NF-\kappaB. El presente procedimiento utiliza
composiciones y formulaciones de dichos compuestos, incluyendo
composiciones farmacéuticas y formulaciones de dichos
compuestos.
La presente invención proporciona
particularmente procedimientos de tratamiento de enfermedades
asociadas con la activación inapropiada de
NF-\kappaB, comprendiendo dichos procedimientos
administrar a un animal, particularmente un mamífero, más
particularmente un ser humano en necesidad del mismo uno o más
compuestos de Fórmula I. La presente invención proporciona
particularmente procedimientos para tratar trastornos inflamatorios
y de reparación de tejido, particularmente artritis reumatoide,
enfermedad inflamatoria del intestino, asma y COPD (enfermedad
pulmonar obstructiva crónica) osteoartritis, osteoporosis y
enfermedades fibróticas; dermatosis, incluyendo psoriasis,
dermatitis atópica y lesión cutánea inducida por radiación
ultravioleta (UV), enfermedades autoinmunes incluyendo lupus
sistémico eritematoso, esclerosis múltiple, artritis psoriática,
espondilitis anquilosante, rechazo de órganos y tejidos, enfermedad
de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis, reestenosis, diabetes,
glomerulonefritis, cáncer, incluyendo enfermedad de Hodgkins,
caquexia, inflamación asociada con infección y ciertas infecciones
virales, incluyendo síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA),
síndrome de disneico agudo en adultos y ataxia
telangiectasia.
telangiectasia.
Para terapia aguda, es útil la administración
parenteral de uno o más compuestos de Fórmula I. Una infusión
intravenosa del compuesto en dextrosa al 5% en agua o solución
salina normal, o una formulación similar con los excipientes
adecuados, es más eficaz, aunque una inyección en embolada
intramuscular también es útil. Típicamente, la dosis parenteral
será de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg;
preferiblemente entre 0,1 y 20 mg/kg, de una manera para mantener
la concentración de fármaco en el plasma a una concentración eficaz
para inhibir IKK-beta y por lo tanto la activación
de NF-\kappaB. Los compuestos se administran de
una a cuatro veces al día a una dosis total de aproximadamente 0,4 a
aproximadamente 80 mg/kg/día. La cantidad precisa de un compuesto
usada en el presente procedimiento que es terapéuticamente eficaz, y
la vía mediante la que se administra dicho compuesto, la determina
fácilmente un especialista en la técnica comparando el nivel en
sangre del agente respecto a la concentración requerida para que
tenga un efecto terapéutico.
Los compuestos de Fórmula I pueden administrarse
también por vía oral al paciente, de una manera tal que la
concentración de fármaco es suficiente para inhibir
IKK-beta y por la tanto la activación de
NF-\kappaB o para conseguir cualquier otra
indicación terapéutica como se describe en este documento.
Típicamente, una composición farmacéutica que contiene el compuesto
se administra a una dosis oral de entre aproximadamente 0,1 a
aproximadamente 50 mg/kg de una manera consistente con el estado del
paciente. Preferiblemente la dosis oral sería de aproximadamente
0,5 a aproximadamente 20 mg/kg.
Los compuestos de Fórmula I pueden administrarse
también por vía tópica al paciente, de una manera tal que la
concentración de fármaco sea suficiente para inhibir
IKK-beta y por lo tanto la activación de
NF-\kappaB o conseguir cualquier otra indicación
terapéutica como se describe en este documento. Típicamente, una
composición farmacéutica que contiene el compuesto se administra en
una formulación tópica de entre aproximadamente 0,01% a
aproximadamente 5% p/p.
No se esperan efectos toxicológicos inaceptables
cuando los compuestos de la presente invención se administran de
acuerdo con la presente invención.
La capacidad de los compuestos descritos en este
documento para inhibir la activación del
NF-\kappaB se pone claramente de manifiesto en su
capacidad para inhibir la fosforilación del fragmento
N-terminal de I\kappaB-\alpha
mediante IKK-\beta (véase la Tabla 1 para
ejemplos). Estos compuestos bloquean también la degradación de
I\kappaB-\alpha y la translocación nuclear del
NF-\kappaB en monocitos humanos y otras células de
mamífero tras la activación de las células con estímulos
pro-inflamatorios (por ejemplo,
TNF-a, LPS, etc.). Además estos compuestos inhiben
la producción del mediador pro-inflamatorio a partir
de monocitos humanos estimulados con LPS y fibroblastos sinoviales
primarios humanos estimulados. La utilidad de los presentes
inhibidores de NF-\kappaB en la terapia de
enfermedades se basa en la importancia de la activación del
NF-\kappaB en diversas enfermedades.
El NF-\kappaB desempeña un
papel clave en la expresión regulada de un gran número de mediadores
pro-inflamatorios incluyendo citoquinas tales como
TNF, IL-1\beta, IL-6 y
IL-8 (Mukaida et al., 1990; Liberman y
Baltimore, 1990; Matsusaka et al., 1993), moléculas de
adhesión celular, tales como ICAM y VCAM (Marui et al., 1993;
Kawai et al., 1995; Ledebur y Parks, 1995), y óxido nítrico
sintasa inducible (iNOS) (Xie et al., 1994; Adcock et
al., 1994). (Las referencias citadas completas se dan al final
de esta sección). Se sabe que dichos mediadores desempeñan un papel
en el reclutamiento de leucocitos en los sitios de inflamación y en
el caso de iNOS, pueden conducir a la destrucción del órgano en
algunas enfermedades inflamatorias y autoinmunes
(McCartney-Francis et al., 1993; Kleemann
et al., 1993).
La evidencia de un papel importante del
NF-\kappaB en trastornos inflamatorios se obtiene
en estudios de pacientes asmáticos. Las biopsias bronquiales
tomadas de asmáticos atópicos muestran aumentos significativos en el
número de células en la submucosa teñidas para
NF-\kappaB activado, NF-\kappaB
total, y citocinas reguladas por NF-\kappaB tales
como GM-CSF y TNF\alpha comparadas con biopsias de
controles no atópicos normales (Wilson et al., 1998).
Adicionalmente, el porcentaje de vasos que expresan
inmunoreactividad a NF-\kappaB aumenta al igual
que la inmunoreactividad a IL-8 en el epitelio de
las muestras de la biopsia (Wilson et al., 1998). Como tal,
la inhibición de la producción de IL-8 mediante la
inhibición de NF-\kappaB, como han demostrado
estos compuestos, se predice que será beneficiosa en la inflamación
de las vías respiratorias.
Estudios recientes sugieren que el
NF-\kappaB puede desempeñar también un papel
crítico en la patogénesis de la enfermedad inflamatoria del
intestino (IBD). El NF-\kappaB activado se observa
en muestras de biopsia de colon de pacientes con enfermedad de
Chron y colitis ulcerosa (Ardite et al., 1998; Rogler et
al., 1998; Schreiber et al., 1998). La activación es
evidente en la mucosa inflamada pero no en la mucosa no inflamada
(Ardite et al., 1998; Rogler et al., 1998) y está
asociada con el aumento de la expresión de ARNm de
IL-8 en los mismos sitios (Ardite et al.,
1998). Adicionalmente, el tratamiento con corticoesteroides inhibe
en gran medida la activación intestinal del
NF-\kappaB y reduce la inflamación del colon
(Ardite et al., 1998; Schreiber et al., 1998). De
nuevo, la inhibición de la producción de IL-8
mediante la inhibición de NF-\kappaB, como han
demostrado estos compuestos, se predice que será beneficiosa en la
enfermedad inflamatoria del intestino.
Los modelos animales de inflamación
gastrointestinal proporcionan soporte adicional para el
NF-\kappaB como regulador clave de la inflamación
del colon. Se observa un aumento de la actividad del
NF-\kappaB en la lámina propia de macrófagos en
colitis inducida por ácido 2,4,6,-trinitrobencenosulfónico (TNBS) en
ratones, siendo p65 el componente principal de los complejos
activados (Neurath et al., 1996; Neurath y Pettersson, 1997).
La administración local de p65 antisentido abroga las señales de
colitis establecidas en los animales tratados sin indicios de
toxicidad (Neurath et al., 1996; Neurath y Pettersson, 1997).
Como tal, podría predecirse que los inhibidores de molécula pequeña
de NF-\kappaB serán útiles en el tratamiento de
IBD.
La evidencia adicional del papel del
NF-\kappaB en trastornos inflamatorios procede de
estudios de sinovio reumatoide. Aunque el
NF-\kappaB normalmente está presente en forma de
un complejo citoplásmico inactivo, recientes estudios
inmunohistoquímicos han indicado que el NF-\kappaB
está presente en los núcleos y, por lo tanto, activo, en las
células que comprenden el sinovio reumatoide humano (Handel et
al., 1995; Marok et al., 1996; Sioud et al.,
1998) y en modelos animales de la enfermedad (Tsao et al.,
1997). La tinción está asociada con sinoviocitos de tipo A y
endotelio vascular (Marok et al., 1996). Adicionalmente, se
observa la activación constitutiva del NF-\kappaB
en sinoviocitos cultivados (Roshak et al., 1996; Miyazawa
et al., 1998) y en cultivos de células sinoviales
estimuladas con IL-1\beta o TNF\alpha (Roshak
et al., 1996; Fujisawa et al., 1996; Roshak et
al., 1997). De esta manera, la activación del
NF-\kappaB puede sustentar el aumento de la
producción de citoquinas e infiltración de leucocitos
características del sinovio inflamado. La capacidad de estos
compuestos para inhibir el NF-\kappaB y, por lo
tanto, para inhibir la producción de mediadores
pro-inflamatorios (por ejemplo, citocinas y
prostanoides) mediante estas células se predeciría para producir
beneficios en artritis reumatoide.
Los compuestos de esta invención pueden
ensayarse en uno de los diversos ensayos biológicos para determinar
la concentración de compuesto, que es necesaria para tener un efecto
farmacológico dado.
La actividad del NF-\kappaB
puede medirse también en un ensayo de desplazamiento de movilidad
electroforética (EMSA) para evaluar la presencia de proteínas
NF-\kappaB en el núcleo. Las células de interés se
cultivan a una densidad de 1x10^{6}/ml Las células se recuperan
por centrifugación, se lavan en PBS sin Ca^{2+} y Mg^{2+} y se
resuspenden en PBS con Ca^{2+} y Mg^{2+} a 1x10^{7}
células/ml. Para examinar el efecto del compuesto sobre la
activación de NF-\kappaB, las suspensiones
celulares se tratan con diversas concentraciones de fármaco o
vehículo (DMSO, 0,1%) durante 30 min. a 37ºC antes de la
estimulación con TNF-\alpha (5,0 ng/ml) durante
15 min. más. Los extractos celulares y nucleares se preparan de la
siguiente manera. Brevemente, al final del periodo de incubación
las células (1x10^{7} células) se lavan 2x en PBS sin Ca^{2+} y
Mg^{2+}_{.} Los sedimentos celulares resultantes se resuspenden
en 20 \mul de Tampón A (Hepes 10 mM (pH 7,9), KCl 10 mM,
MgCl_{2} 1,5 mM, ditiotreitol 0,5 mM (DTT) y NP-40
al 0,1%) y se incubaron en hielo durante 10 min. Los núcleos
sedimentan por microcentrifugación a 3500 rpm durante 10 min a 4ºC.
El sobrenadante resultante se recogió como el extracto celular y el
sedimento nuclear se resuspendió en 15 \mul de Tampón C (Hepes 20
mM (pH 7,9), NaCl 0,42 M, MgCl_{2} 1,5 mM, glicerol al 25%, EDTA
0,2 mM, DTT 0,5 mM, y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,5 mM
(PMSF)). Las suspensiones se mezclan suavemente durante 20 min a 4ºC
y después se microcentrifugan a 14.000 rpm durante 10 min a 4ºC. El
sobrenadante se recoge y se diluye a 60 \mul con Tampón D (Hepes
20 mM (pH 7,9), KCl 50 mM, glicerol al 20%, EDTA 0,2 mM, DTT 0,5
mM, y PMSF 0,5 mM). Todas las muestras se almacenan a -80ºC hasta
que se analizan. La concentración de proteínas de los extractos se
determina de acuerdo con el procedimiento de Bradford (Bradford,
1976) con reactivos BioRad.
El efecto de los compuestos sobre la activación
del factor de transcripción se evalúa en un ensayo de desplazamiento
de movilidad electroforética (EMSA) usando extractos nucleares a
partir de células tratadas como se ha descrito anteriormente. Los
oligonucleótidos consenso de doble hebra de
NF-\kappaB
(5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3') se
marcan con polinucleótido quinasa T_{4} y
[g-^{32}P]ATP. La mezcla de unión (25
\mul) contiene Hepes 10 mM-NaOH (pH 7,9),
Tris-HCl 4 mM (pH 7,9), KCl 60 mM, EDTA 1 mM,
ditiotreitol 1 mM, glicerol al 10%, 0,3 mg/ml de albúmina de suero
bovino, y 1 \mug de poli(dl-dC) \cdot
poli(dl-dC). Las mezclas de unión (10 \mug
de proteínas de extracto nuclear) se incuban durante 20 min a
temperatura ambiente con 0,5 ng de oligonucleótido marcado con
^{32}P (50.000-100.000 cpm) en presencia o
ausencia de competidor no marcado después de cargar la mezcla en un
gel de poliacrilamida al 4% preparado en 1X Tris borato/EDTA y se
somete a electroforesis a 200 V durante 2 h. Después de la
electroforesis los geles se secan y se exponen a película para
detectar la reacción de unión.
El efecto de los compuestos sobre la
fosforilación de I_{\kappa}B puede controlarse en una
transferencia de Western. Los extractos celulares se someten a
electroforesis en dodecil sulfato sódico-gel de
poliacrilamida (SDS-PAGE) sobre geles al 10%
(BioRad, Hercules, CA) y las proteínas se transfirieron a hojas de
nitrocelulosa (Hybondtm-ECL, Amersham Corp.,
Arlington Heights, IL). Los ensayos de inmunotransferencia se
realizan usando un anticuerpo de conejo policlonal dirigido contra
I\kappaB\alpha o I\kappaB\beta seguido de un anticuerpo
secundario anti-conejo de mono conjugado con
peroxidasa (Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Las bandas
inmunoreactivas se detectan usando el sistema de ensayo de
Quimioluminiscencia Potenciada (ECL) (Amersham Corp., Arlington
Heights, IL).
Los ensayos para quinasas I\kappaB se
realizaron de la siguiente manera: IKK-\alpha se
expresó como una proteína marcada con
hexa-histidina en células de insecto infectadas con
baculovirus y se purificó en una columna de afinidad de
Ni-NTA. La actividad quinasa se ensayó usando 50 ng
de proteínas purificadas en tampón de ensayo (Hepes 20 mM, pH 7,7,
MgCl_{2} 2 mM, MnCl_{2} 1 mM,
\beta-glicerofosfato 10 mM, NaF 10 mM, PNPP 10
mM, Na_{3}VO_{4} 0,3 mM, benzamidina 1 mM, PMSF 2 \muM, 10
\mug/ml de aprotinina, 1 \mug/ml de leupeptina, 1 \mug/ml DE
pepstatinA, DTT 1 mM) que contiene diversas concentraciones de
compuesto o vehículo DMSO y ATP según se indica (Pharmacia Biotech
Inc., Piscataway, NJ). La reacción comenzó mediante la adición de
200 ng de I\kappaB-GST (Santa Cruz Biotechnology,
Inc., Santa Cruz, CA), en un volumen total de 50 \mul. Se
permitió que la reacción transcurriera durante 1 h. a 30ºC después
de que la reacción terminara mediante la adición de EDTA a una
concentración final de 20 mM. La actividad quinasa se determinó
mediante inmunoensayo de fluorescencia de lantánido potenciado por
disociación (Wallac Oy, Turku, Finland) usando un anticuerpo
phos-pho-I\kappaB-\alpha
(Ser32) (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA) y una IgG
anti-conejo marcada con Eu^{3+} (Wallac Oy,
Turku, Finland). Las placas se leyeron en un Contador VICTOR 1420
Multilabel (Wallac), usando un protocolo convencional con europio
(excitación a 340 nm, emisión a 615 nm; fluorescencia medida
durante 400 \mus después de un retraso de 400 Ms). Los datos se
expresan como unidades de fluorescencia (cps).
La IKK-\beta se expresó como
una proteína marcada con GST, y su actividad se evaluó en un ensayo
de centelleo por proximidad (SPA) de 96 pocillos. Brevemente, se
diluyó IKK-\beta en tampón de ensayo como se ha
descrito anteriormente (20 nM final), con diversas concentraciones
de compuesto o vehículo DMSO, ATP 240 nM y 200 nCi
[g-^{33}P]-ATP (10 mCi/ml, 2000
Ci/mmol; NEN Life Science Products, Boston, MA). La reacción se
inició con la adición de un péptido biotinilado compuesto por los
aminoácidos 15 - 46 de I\kappaB-\alpha (American
Peptide) a una concentración final de 2,4 \muM, en un volumen
total de 50 \mul. La muestra se incubó durante una hora a 30ºC,
seguido de la adición de 150 \mul de tampón de parada (PBS sin
Ca^{2+}, Mg^{2+}, Triton X-100 al 0,1% (v/v),
EDTA 10 mM) que contiene 0,2 mg de perlas de SPA PVT recubiertas con
estreptavidina (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). La
muestra se mezcló, se incubó durante 10 min. a temperatura ambiente,
se centrifugó (1000 xg, 2 minutos), y se midió en un contador
Hewlett-Packard TopCount.
Además, la actividad de
IKK-\beta o IKK-\alpha se mide
mediante la fosforilación de GST-IkappaBalfa
recombinante usando transferencia de energía de resonancia por
fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET) en
placas de microtitulación de 384 pocillos. Brevemente,
IKK-\beta o IKK-\alpha se
diluyen en tampón de ensayo (HEPES 50 mM, pH 7,4 que contiene
cloruro de magnesio 10 mM, CHAPS 1 mM, DTT 1 mM y BSA al 0,01% p/v)
a una concentración final de 5 nM. Esto se añade a diversas
concentraciones de compuesto o vehículo DMSO y la reacción se
inicia mediante la adición de GST-IkappaBalfa 25 nM
y ATP 1 \muM en tampón de ensayo hasta un volumen de 30 \mul.
Después de la incubación durante 30 min a temperatura ambiente la
reacción se detuvo mediante la adición de EDTA 50 mM pH 7,4 (15
\mul). La detección del producto fosforilado se consiguió mediante
la adición de un anticuerpo monoclonal
anti-fosfoserina específico marcado con quelato de
europio LANCE a una concentración final de 0,5 nM (Tecnología de
señalización celular mediante Perkin Elmer) y anticuerpo
anti-GST marcado con aloficocianina a una
concentración final de 10 nM (Prozyme) dando un volumen final de 60
\mul. Después de una incubación adicional a temperatura ambiente
de al menos 30 min la señal se leyó en un fluorímetro Perkin Elmer
Discovery.
El efecto de los inhibidores de
IKK-\beta sobre la producción del mediador de
fibroblasto sinovial primario se evaluó de la siguiente manera: se
obtuvieron cultivos primarios de RSF humano por digestión enzimática
de sinovio obtenido de pacientes adultos con artritis reumatoide
como se ha descrito anteriormente (Roshak et al., 1996). Las
células se cultivaron en Medio Esencial Mínimo de Earl (EMEM) que
contenía suero bovino fetal (FBS) al 10%, 100 unidades/ml de
penicilina y 100 \mug/ ml de estreptomicina (GIBCO, Grand Island,
NY), a 37ºC y CO_{2} al 5%. Los cultivos se usaron en los pasos 4
a 9 para obtener una población de fibroblasto de tipo B más
uniforme. Para algunos estudios, los fibroblastos se pusieron a 5 x
10^{4} células/ml en placas de 24 pocillos de 16 mm (diámetro)
(Costar, Cambridge, MA). Las células (confluencia del
70-80%) se expusieron a IL-1\beta
(1 ng/ml) (Genzima, Cambridge, MA) durante el tiempo indicado. Los
fármacos en vehículo DMSO (1%) se añadieron a los cultivos
celulares 15 minutos antes de la adición de IL-1. Se
realizaron estudios 3-4 veces usando células
sinoviales de diferentes donantes. Se prepararon extractos celulares
de RSF a partir de células tratadas como se ha descrito
anteriormente. Brevemente, se retiraron RSF humanos mediante
tripsina/EDTA, se lavaron, y recogieron por centrifugación. Se
prepararon extractos celulares como se ha descrito anteriormente
(Dignam et al., 1983; Osborn, et al., 1989).
Brevemente, al final del periodo de incubación de las células
(1x10^{7} células) se lavaron 2x en PBS sin Ca^{2+} y Mg^{2+}.
Los sedimentos celulares resultantes se resuspendieron en 20 \mul
de Tampón A (Hepes 10 mM (pH 7,9), KCl 10 mM, MgCl_{2} 1,5 mM, 0,5
mM.
El efecto de la inhibición de
IKK-\beta sobre la producción de eicosanoide y
citocina estimulada por monocito humano se evaluó de la siguiente
manera: se aislaron monocitos a partir de sangre entera heparinizada
mediante centrifugación de doble gradiente como se ha descrito
anteriormente. Los PBMC enriquecidos con monocito aislados se
adhirieron a placas de cultivo de 24 pocillos a 2 x 10^{6}
células/ml en RPMI 1640 FBS al 10% (Hyclone, Logan, Utah) durante 2
h. para enriquecer adicionalmente la población de monocito. Después
se retiraron los medios, las células se lavaron una vez con RPMI
1640, y se añadió 1 ml de RPMI 1640 FBS al 10% a los pocillos. Los
compuestos de ensayo se añaden a los pocillos con una concentración
final de vehículo de DMSO al 0,05%. Los monocitos se activaron
mediante la adición de 200 ng/ml de endotoxina (LPS; serotipo de
E. coli 026:B6) (Sigma, St. Louis, MO.) y se incubaron
durante 24 h. Los sobrenadantes sin células se analizaron por ELISA
para TNF-\alpha (EIA desarrollado a SB), PGE_{2}
(Cayman Chemical, Ann Arbor, MI), e IL-8 e
IL-6 Biofuente International, Camarillo, CA). La
viabilidad de las células se terminó mediante exclusión con azul de
triptano.
El efecto de los inhibidores de
IKK-\beta sobre la inflamación inducida por éster
de forbol se evaluó de la siguiente manera: la respuesta
inflamatoria inducida por la aplicación cutánea de éster de forbol
(PMA) al pabellón auricular externo de ratones Balb/c ha resultado
ser un modelo útil para examinar la infiltración celular
inflamatoria multifactorial y la alteración inflamatoria de la
epidermis. La lesión inflamatoria intensa está dominada por la
infiltración de neutrófilos, que puede cuantificarse fácilmente
midiendo la concentración en tejido de mieloperoxidasa, una enzima
granular azurifílica presente en neutrófilos. Además, la intensidad
global de la respuesta inflamatoria puede medirse determinando el
espesor de la oreja. A ratones Balb/c (n = 6/grupo) se les
administró tratamiento con fármaco o vehículo seguido de PMA (4
\mug/oreja). Los ratones se sacrificaron 4 h. después, se
determinó el espesor de la oreja y la activación de
NF-\kappaB se controló por transferencia de
western de I\kappaBa o análisis EMSA.
El efecto de los inhibidores de
IKK-\beta sobre el edema de pata inducido por
carragenano en rata se evaluó de la siguiente manera: ratas Lewis
macho (Charles River-Raleigh, NC) se alojaron y se
les permitió acceso libre a alimento y agua, y que pesaban entre
200-275 g para cada experimento. El compuesto o
vehículo (tragacanto al 0,5% (p.o.) o DMSO al 10%, DMA al 5%,
Cremophor al 30% (i.p.)) se administró de 30 minutos a 1 hora antes
de la inyección de carragenano. El edema se indujo por inyección de
carragenano al 1% en dH2O estéril (0,05 ml/pata) en la superficie
plantar de la pata trasera derecha. El espesor de la pata se midió
antes de la administración de compuesto o vehículo, y de nuevo a
las 3 horas, para determinar el cambio en el volumen de la pata. Las
ratas se sacrificaron por inhalación de CO_{2} y se retiró el pie
trasero derecho, se congeló inmediatamente en nitrógeno líquido y
se almacenó a -80ºC para su análisis.
Para determinar los efectos de un inhibidor de
IKK-2 en el modelo de artritis inducida por colágeno
en ratón (CIA), 12 ratones DBA/1 macho (20-22
gramos) por grupo de tratamiento se inmunizaron en el día 0 con un
total de 100 \mul de adyuvante de Freund completo (CFA) que
contenía 200 \mug de colágeno de tipo II bovino. En el día 21 los
ratones se estimularon con 100 \mul de solución salina tamponada
con fosfato (PBS) que contenía 200 \mug de colágeno de tipo II
bovino (los 100 \mul de colágeno/CFA o colágeno/PBS se inyectaron
por vía subcutánea en la cola). El inhibidor de
IKK-2 en el vehículo, o vehículo solo, se administró
por vía intraperitoneal, dos veces al día, de los 1 a 40 (los
síntomas de enfermedad son evidentes empezando en los días
25-28). Dos grupos de tratamiento adicionales
incluían el control positivo etanorcept (Enbrel) (4 mg/kg, por vía
intraperitoneal, un día sí y otro no), y el vehículo etanorcept
(PBS). Los ratones se valoraron diariamente, en el día 50, para los
síntomas clínicos (véase a continuación), y se midieron los
espesores de pata. Además de los 12 ratones por grupo de
tratamiento que se valoraron durante el experimento, en diversos
puntos temporales durante el transcurso de la enfermedad ratones
satélite (3-5 por grupo de tratamiento) tratados
como se ha descrito anteriormente se utilizaron para medir los
niveles de citoquina/quimioquina y los niveles de p65 en la pata,
la respuesta de recuerdo de antígeno ex vivo drenando el
nódulo linfático.
Inducción de artritis AIA se induce
mediante una única inyección de 0,75 mg de Mycobacterium
butiricum (Difco, Detroit, MI) suspendida en aceite de parafina
en la base de la cola de ratas Lewis macho de 6-8
semanas de edad (160-180 g). Los volúmenes de pata
trasera se miden mediante un procedimiento de desplazamiento de agua
en el día 16 y/o el día 20. Los compuestos de ensayo se
homogeneizaron en un vehículo adecuado y se administraron mediante
una vía adecuada. A los animales de control se les administró
vehículo solo. En general se usan dos protocolos de dosificación:
dosificación profiláctica, que se inicia en el día de la inyección
de adyuvante y administración terapéutica, que se inicia en el día
10 una vez establecida la inflamación.
A cada pata se le asignó una valoración que
variaba de 0-4, basándose en los siguientes
criterios:
0 = no hay inflamación
1 = un único dedo hinchado
2 = varios dedos hinchados, ligera hinchazón de
la pata
3 = varios dedos hinchados, moderada hinchazón
de la pata
4 = todos los dedos hinchados, grave hinchazón
de la pata
La descripción anterior describe completamente
la invención incluyendo las realizaciones preferidas de la misma.
Las modificaciones y mejoras de las realizaciones descritas
específicamente en este documento están dentro del alcance de las
siguientes reivindicaciones. Sin elaboración adicional, se cree que
un especialista en el área puede, usando la descripción anterior,
utilizar la presente invención en toda su extensión. Por lo tanto
los Ejemplos de este documento deben entenderse como simplemente
ilustrativos y no como una limitación del alcance de la presente
invención de ninguna manera. Las realizaciones de la invención en
las que se reivindica una propiedad o privilegio exclusivo se
definen de la siguiente manera.
Claims (7)
1. Un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) a
continuación en este documento:
R_{1} representa CONH_{2};
R_{2} representa NR_{4}R_{5};
R_{3} se selecciona entre el grupo constituido
por H, CN, CF_{3}, halógeno, arilo, heteroarilo, alquilo,
O-alquilo, y S-alquilo; y puede
estar unido a cualquiera de C_{4}, C_{5}, C_{6} o C_{7};
R_{4} representa H o alquilo; y
R_{5} se selecciona entre el grupo constituido
por H, CO-alquilo, SO_{2}-alquilo,
CONH_{2}, CONH-alquilo,
CONH-arilo, CONH-heteroarilo,
CSNH_{2}, CSNH-alquilo,
CSNH-arilo, CSNH-heteroarilo,
SO_{2}NH_{2}, SO_{2}NH-alquilo,
SO_{2}NH-arilo, y
SO_{2}NH-heteroarilo; o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 en el que el compuesto se selecciona entre el grupo constituido
por:
amida del ácido
2-amino-6-(4-fluoro-fenil)-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;
y
amida del ácido
2-ureido-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico.
3. El uso de un compuesto de acuerdo con la
reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para usar en
el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la
activación patológica de NF-\kappaB.
4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3 en
el que la enfermedad es un trastorno inflamatorio o de reparación
de tejido.
5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4 en
el que la enfermedad se selecciona entre el grupo constituido por
trastornos inflamatorios y de reparación de tejido, particularmente
artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, asma y
COPD (enfermedad pulmonar obstructiva crónica) osteoartritis,
osteoporosis y enfermedades fibróticas, dermatosis, incluyendo
psoriasis, dermatitis atópica y lesión cutánea inducida por
radiación ultravioleta (UV), enfermedades autoinmunes incluyendo
lupus sistémico eritematoso, esclerosis múltiple, artritis
psoriática, espondilitis anquilosante, rechazo de órganos y
tejidos, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, aterosclerosis,
reestenosis, diabetes, glomerulonefritis, cáncer, incluyendo
enfermedad de Hodgkins, caquexia, inflamación asociada con
infección y ciertas infecciones virales, incluyendo síndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA), síndrome disneico agudo en
adultos, y ataxia telangiectasia.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1 para usar en terapia.
7. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 y un vehículo,
diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US38655702P | 2002-06-06 | 2002-06-06 | |
| US386557P | 2002-06-06 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2285125T3 true ES2285125T3 (es) | 2007-11-16 |
Family
ID=29736178
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03731435T Expired - Lifetime ES2285125T3 (es) | 2002-06-06 | 2003-05-29 | Inhibidores de nf-kb. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7300952B2 (es) |
| EP (1) | EP1532135B1 (es) |
| JP (1) | JP2005532359A (es) |
| AT (1) | ATE358673T1 (es) |
| AU (1) | AU2003240935A1 (es) |
| DE (1) | DE60312997T2 (es) |
| ES (1) | ES2285125T3 (es) |
| WO (1) | WO2003104219A1 (es) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2502429A1 (en) | 2002-10-31 | 2004-05-21 | Amgen Inc. | Antiinflammation agents |
| US7696244B2 (en) | 2003-05-16 | 2010-04-13 | The Regents Of The University Of California | Compounds having activity in increasing ion transport by mutant-CFTR and uses thereof |
| JP2007536303A (ja) * | 2004-05-04 | 2007-12-13 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | Ｉｋｋ阻害剤としてのチエノピリジン |
| CA2563990A1 (en) * | 2004-05-04 | 2005-11-10 | Sharada Shenvi Labadie | Thienopyridazines as ikk inhibitors |
| JP2009526855A (ja) | 2006-02-16 | 2009-07-23 | ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | アルファカルボリンおよびその使用 |
| WO2008069102A1 (ja) * | 2006-12-06 | 2008-06-12 | Calpis Co., Ltd. | 炎症性腸疾患予防治療剤 |
| WO2010038465A1 (ja) | 2008-10-02 | 2010-04-08 | 旭化成ファーマ株式会社 | ８位置換イソキノリン誘導体及びその用途 |
| US10954222B2 (en) * | 2012-02-09 | 2021-03-23 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental University | Benzothiophene compound, alternative autophagy-inducing agent and anticancer agent including the compound as active ingredient, and method for screening for compound having anticancer activity |
| US20170240522A1 (en) * | 2014-09-15 | 2017-08-24 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Benzothiophene, benzyloxybenzylidene and indoline derivatives useful for the treatment of tuberculosis |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4782080A (en) * | 1985-09-16 | 1988-11-01 | Merck & Co., Inc. | N-alkenyl-2-hydroxybenzo(b)thiophene-3-carboxamide derivatives as dual cyclooxygenase and lipoxygenase inhibitors |
| US6545027B1 (en) * | 1995-06-07 | 2003-04-08 | Eli Lilly And Company | Methods of modulating NF-kB transcription factor |
| JP2001523253A (ja) * | 1997-04-30 | 2001-11-20 | イーライ・リリー・アンド・カンパニー | ベンゾ［ｂ］チオフェン類の製造のための中間体および方法 |
| AU2002211663A1 (en) * | 2000-10-12 | 2002-04-22 | Smith Kline Beecham Corporation | Nf-$g(k)b inhibitors |
-
2003
- 2003-05-29 EP EP03731435A patent/EP1532135B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-29 WO PCT/US2003/016876 patent/WO2003104219A1/en active IP Right Grant
- 2003-05-29 AU AU2003240935A patent/AU2003240935A1/en not_active Abandoned
- 2003-05-29 DE DE60312997T patent/DE60312997T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2003-05-29 ES ES03731435T patent/ES2285125T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-29 US US10/517,111 patent/US7300952B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-05-29 JP JP2004511289A patent/JP2005532359A/ja not_active Withdrawn
- 2003-05-29 AT AT03731435T patent/ATE358673T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20060058371A1 (en) | 2006-03-16 |
| AU2003240935A1 (en) | 2003-12-22 |
| DE60312997D1 (de) | 2007-05-16 |
| ATE358673T1 (de) | 2007-04-15 |
| WO2003104219A1 (en) | 2003-12-18 |
| DE60312997T2 (de) | 2007-12-13 |
| JP2005532359A (ja) | 2005-10-27 |
| EP1532135B1 (en) | 2007-04-04 |
| EP1532135A4 (en) | 2005-11-09 |
| EP1532135A1 (en) | 2005-05-25 |
| US7300952B2 (en) | 2007-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2315430T3 (es) | Inhibidores de nf-kb. | |
| US20060116419A1 (en) | Nf-kb inhibitors | |
| ES2299251T3 (es) | Inhibidores del factor de transcripcion nf-kappa b. | |
| US7375131B2 (en) | NF-κB inhibitors | |
| EP1324759A2 (en) | Nf-g(k)b inhibitors | |
| EP1328272A1 (en) | Nf-kappa-b inhibitors | |
| ES2285125T3 (es) | Inhibidores de nf-kb. | |
| ES2294276T3 (es) | Inhibidores de nf-kappab. | |
| US20060030596A1 (en) | NF-kappaB inhibitors | |
| AU4699699A (en) | Inhibitors of transcription factor NF-KappaB | |
| KR20110021799A (ko) | Ｉｋｋ-베타 세린-트레오닌 단백질 키나아제의 억제제 | |
| US20040006118A1 (en) | Nf-kb inhibitors | |
| MXPA00012498A (es) | Inhibidores del factor transcripcion nf-kb |