ES2287322T3 - Procedimiento para la preparacion de extractos de pelargonium sidoides y/o pelargonium reniforme. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la preparación de un extracto de Pelargonium sidoides y/o Pelargonium reniforme, caracterizado porque las raíces de Pelargonium sidoides y/o Pelargonium reniforme o bien a) se someten a una percolación con un disolvente acuoso-etanólico, el residuo de la droga se exprime eventualmente de manera ligera y el extracto en bruto se filtra eventualmente, o b) se someten a una maceración en dos etapas con un disolvente acuoso-etanólico, separándose por filtración después de la primera maceración la solución del extracto, y el residuo de la droga se macera una segunda vez, y las soluciones de los extractos se reúnen después de la separación de sólido / líquido.
Description
Procedimiento para la preparación de extractos
de Pelargonium sidoides y/o Pelargonium
reniforme.
El presente invento se refiere a un
procedimiento para la preparación de extractos de Pelargonium
sidoides y/o Pelargonium reniforme
La Pelargonium sidoides es una planta que
se utiliza tradicionalmente en el África del Sur ya desde hace
mucho tiempo como medicamento en el caso de trastornos
gastrointestinales y en el caso de enfermedades de las vías
respiratorias, inclusive la tuberculosis. El inglés Stevens
descubrió la droga medicamentosa en el año 1897 y se la trajo a
Inglaterra. Allí se obtuvieron realmente ciertos éxitos en
tratamientos que condujeron a que la droga fuese introducida en la
terapia por Sechehaye en Suiza. Ella se utilizó sobre todo en forma
de formulaciones homeopáticas para curas durante varias semanas
destinadas a la prevención de la tuberculosis en los casos de niños
y adultos predispuestos (Kolodziej, H., Kayser, O., Z. Phytother.
19, 141-151, (1998)).
Además, como propiedades farmacológicas de la
Pelargonium sidoides se han de mencionar de manera general
unos efectos antibacterianos contra algunos gérmenes
gram-positivos (Staphylococcus aureus,
Streptococcus pneumoniae, estreptococos
\beta-hemolizantes) y
gram-negativos (E. coli, Klebsiella pneumoniae,
Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus
influenzae) (Kayser, 0., Kolodziej, H., Planta Med. 63,
508-510 (1997)).
La especie Pelargonium sidoides fue
clasificada durante mucho tiempo en lo que se refiere a su
sistemática botánica como una variedad natural de Pelargonium
reniforme. Por lo tanto, en la bibliografía más antigua no se ha
realizado ninguna separación clara entre Pelargonium sidoides
y Pelargonium reniforme (Kolodziej, H., Kayser, 0., Z.
Phytother. 19, 141-151, (1998)). A causa de la gran
similaridad botánica de Pelargonium sidoides con la especie
afín Pelargonium reniforme se ha de partir de la premisa de
que, por regla general, las raíces de Pelargonium sidoides
que proceden de recolecciones silvestres contienen unas proporciones
variables de Pelargonium reniforme.
Las sustancias constituyentes principales de las
raíces de Pelargonium sidoides son las proantocianidinas,
que están constituidas predominantemente por unidades de catecol y
galocatecol (Kayser, 0., Tesis Doctoral, Fachb. Pharm. Freie Univ.
(FU = Universidad Libre de la Especialidad Farmacéutica) Berlin,
páginas 23-24 y 51-55 (1997)).
Además, se presentan cumarinas sencillas, con un grado de
oxigenación por regla general alto en la estructura fundamental de
la cumarina. Ésta parece ser una característica estructural
relativamente típica para las Pelargonium (Kayser, 0.,
Kolodziej, H., Phytochemistry 39, 1.181-1.185
(1995); Latté, K. P., Kayser, 0., Tan, N., Kaloga, M., Kolodziej,
H., Z. Naturforsch. 55c, 528-533 (2000)).
Los extractos procedentes de raíces de
Pelargonium sidoides y/o Pelargonium reniforme se
preparaban hasta ahora usualmente p.ej. mediante una sencilla
maceración mediando utilización de una mezcla de acetona y agua 4/1
(Kayser, 0., Kolodziej, H., Phytochemistry 39,
1.181-1.185 (1995)) o respectivamente de metanol
puro en el procedimiento de Soxhlet (Bladt, S.; Wagner, H. Dtsch.
Apoth.-Ztg. 128, 292-296 (1988)). Para la
aplicación terapéutica, se utilizaron también extractos puramente
acuosos (Kolodziej, H., Kayser, 0., Z. Phytother. 19,
141-151 (1998)). En el comercio es obtenible un
extracto etanólico, diluido con glicerol, de Pelargonium
reniforme/sidoides (Lista Roja (Rote Liste) 2001).
Las desventajas de los procedimientos actuales
de extracción se sitúan en unos rendimientos relativamente bajos, o
respectivamente en una fuerte carga térmica (Soxhlet).
El presente invento está basado en la misión de
poner a disposición un procedimiento moderado mejorado para la
preparación de extractos de Pelargonium sidoides y
Pelargonium reniforme, con el que se obtengan unos extractos
en unos rendimientos más altos, debiéndose de mejorar, sin embargo,
simultáneamente el efecto de los extractos.
A fin de solucionar los problemas planteados por
estas misiones, en el presente invento se describe un procedimiento
para la preparación de un extracto de Pelargonium sidoides
y/o Pelargonium reniforme, caracterizado porque las raíces
de Pelargonium sidoides y/o Pelargonium reniforme son
sometidas o bien a una percolación o a una maceración en dos
etapas. La percolación, y respectivamente la maceración doble, se
llevan a cabo preferiblemente con disolventes acuosos etanólicos.
Un disolvente preferido es un etanol al 10-92% en
peso y en particular un etanol al 10-60% en peso.
La percolación se puede efectuar también macerando las raíces con
el disolvente, pudiéndose efectuar la maceración y la subsiguiente
percolación propiamente dicha respectivamente con un etanol acuoso
de concentración igual o distinta. En el último caso la maceración
se efectúa preferiblemente con un etanol acuoso en una
concentración relativamente más alta, tal como un etanol al 35% en
peso y la subsiguiente percolación se efectúa con un etanol acuoso
relativamente menos concentrado, tal como un etanol al 5% en peso,
p.ej. en la relación de 2:8, para que la concentración media del
etanol utilizado se sitúe en los intervalos indicados
(10-92% en peso, preferiblemente
10-60% en peso). En el ejemplo precedente, resulta
una concentración media ponderada de 11% en peso de etanol ([35 x 2
+ 5 x 8] / 10% en peso). Los extractos obtenidos conforme al
invento tienen, después de la desecación, un contenido de fenoles
totales de por lo menos 15%, preferiblemente de por lo menos 18%.
Los extractos de este tipo se adecuan especialmente bien para el
tratamiento de enfermedades inflamatorias e infecciones agudas y
crónicas.
\newpage
Los rendimientos de los extractos secos en el
caso de la percolación conforme al invento (Ejemplos 1 hasta 4) y en
el caso de la maceración en dos etapas conforme al invento con un
etanol al 11 hasta 60% en peso (Ejemplos 5 hasta 8) son
aproximadamente el doble de altos que en el caso de una maceración
sencilla de modo correspondiente a la prescripción de la DAB
[Farmacopea Alemana] (Ejemplo de comparación 1).
En el caso de los ensayos de extracción de
raíces secadas de Pelargonium sidoides con mezclas de agua y
etanol se comprobó de modo sorprendente que, con un contenido
creciente de etanol en el agente de extracción, el contenido de
fenoles totales en el extracto resultante aumenta de una manera
constante y no, como hubiera sido de esperar, se pasa por un punto
máximo en el caso de unas concentraciones intermedias de etanol.
Tanto en el caso de la percolación (Ejemplos 1 hasta 4) como
también en el caso de la maceración en dos etapas (Ejemplos 5 hasta
9), los contenidos de fenoles totales han aumentado frente a la
maceración sencilla (Ejemplo de comparación 1), pudiéndose alcanzar
el factor 3, según sea el disolvente para extracción.
Paralelamente a los contenidos de fenoles
totales aumenta también el potencial antioxidante de los extractos.
En este caso, los extractos conformes al invento son superiores a
los extractos comparativos según los Ejemplos de comparación 1 y 2.
Puesto que los contenidos de cumarinas totales en los extractos
permanecen prácticamente constantes, independientemente del
procedimiento y del disolvente, se ha de partir del hecho de que las
cumarinas sólo prestan una contribución no esencial para el efecto
antioxidante.
A partir de la comparación de los Ejemplos 1
(maceración con un etanol al 35% en peso y percolación con un
etanol al 5% en peso), 2 (maceración con un etanol al 11% en peso y
percolación con un etanol al 11% en peso) y 4 (percolación con un
etanol al 11% en peso sin ninguna precedente maceración), para el
extracto de acuerdo con el Ejemplo 1 resulta el rendimiento más
alto y para el extracto de acuerdo con el Ejemplo 4 resulta el
contenido más alto de fenoles totales. El potencial antioxidante se
sitúa para los extractos de acuerdo con los Ejemplos 1 y 4 un poco
por encima del que presenta el extracto de acuerdo con el Ejemplo 2.
También los valores de CI_{50} (concentración inhibidora del 50%)
para la inhibición de la elastasa coinciden casi en el caso de los
extractos de acuerdo con los Ejemplos 1 y 4, mientras que el valor
de CI_{50} para el extracto de acuerdo con el Ejemplo 2 está
situado en un valor comparativamente alto, con 8,4 \mug/ml. Por
consiguiente, los procedimientos de acuerdo con los Ejemplos 1 y 4
se prefieren con respecto al procedimiento de acuerdo con el
Ejemplo 2. Es decir, que la percolación sin ninguna maceración y la
percolación con una maceración mediante un etanol más concentrado y
la percolación con un etanol menos concentrado, se prefieren frente
a un procedimiento, en el que la maceración y la percolación se
efectúan con un etanol de la misma concentración.
El preparado que se encuentra en el comercio a
base de Pelargonium reniforme/sidoides se emplea sobre todo
para el tratamiento de infecciones agudas y crónicas, especialmente
de las vías respiratorias y de la zona del cuello, la nariz y los
oídos. Como efectos farmacológicos esenciales del producto se
consideran los efectos antimicrobianos y/o la estimulación de la
defensa inmunitaria inespecífica. Los granulocitos neutrófilos se
encuentran en el frente más avanzado de la defensa inmunitaria
frente a agentes patógenos de enfermedades y en particular frente a
bacterias. La estimulación de estos leucocitos, p.ej. en el
transcurso de la fagocitosis de microorganismos, va acompañada de
un consumo aumentado de oxígeno y de la formación de compuestos
oxigenados altamente reactivos (p.ej. un superóxido, peróxido de
hidrógeno), con cuya ayuda estas células aniquilan a los agentes
patógenos de infecciones. En el caso de una reacción defensiva
excesiva y en el transcurso de infecciones crónicas, las especies
oxigenadas reactivas liberadas por células fagocitantes pueden
producir, no obstante, también daños a los tejidos. Ciertas
sustancias con unas propiedades antioxidantes pueden impedir estos
efectos secundarios indeseados y con esto pueden mejorar y acelerar
el proceso de curación (Cuzzocrea y colaboradores, Pharmacol. Rev.
53, 135 (2001)). Puesto que las propiedades antioxidantes son
dependientes del contenido de fenoles totales, para los extractos
conformes al invento resulta, por consiguiente, una superioridad
inequívoca frente a los extractos de comparación.
Junto a las especies oxigenadas reactivas, las
células fagocitantes aprovechan también enzimas proteolíticas, a
fin de aniquilar a las bacterias. Entre las proteasas más
importantes y más potentes, producidas y liberadas por los
leucocitos, se cuenta la elastasa. Esta enzima tiene una importancia
patofisiológica debido a su influencia destructora sobre el tejido
anfitrión, y los agentes inhibidores de la elastasa tienen, por lo
tanto, unas amplias aplicaciones terapéuticas en el caso de
enfermedades inflamatorias agudas y crónicas, tal como p.ej. en los
casos de una bronquitis crónica y de otras enfermedades de las vías
respiratorias, de un enfisema pulmonar, de una fibrosis cística, de
una artritis reumatoide, de una miocarditis, etc. (Fujie y
colaboradores, Eur. J. Pharmacol., 374, 117 (1999)).
Se ha encontrado ahora, con sorpresa, que los
extractos de Pelargonium sidoides y/o reniforme
disponen de unas potentes actividades inhibitorias frente a la
elastasa de leucocitos humanos (HLE) y que este efecto se
correlaciona asimismo con el contenido de fenoles totales de los
extractos. El mecanismo doble de acción a base de las propiedades
antioxidantes y de la inhibición de la HLE se considera como
particularmente ventajoso, puesto que influye de un modo causal
sobre los dos factores patogenéticos más importantes, que
contribuyen al daño para un tejido propio del cuerpo en el caso de
procesos inflamatorios crónicos (Portevin y colaboradores, J. Med.
Chem. 40, 1906 (1997)).
Los extractos obtenidos pueden ser elaborados en
común con las sustancias coadyuvantes farmacéuticas usuales para
dar unas formulaciones farmacéuticas sólidas, tales como cápsulas,
tabletas, tabletas revestidas o tabletas para mascar. Como
sustancias coadyuvantes farmacéuticas se utilizan usuales agentes de
carga y relleno, aglutinantes, disgregantes, lubricantes, así como
sustancias odorantes y saboreantes y agentes de revestimiento para
tabletas revestidas. Como sustancias coadyuvantes farmacéuticas
para la preparación de cápsulas de gelatina blanda se utilizan
aceites y grasas usuales como masas de relleno para cápsulas de
gelatina blanda. Los extractos obtenidos se pueden elaborar en
común con sustancias coadyuvantes farmacéuticamente usuales para dar
formulaciones farmacéuticas líquidas tales como soluciones,
rociadas (sprays) y suspensiones. Como sustancias coadyuvantes
farmacéuticas se utilizan usuales agentes disolventes,
solubilizantes, estabilizadores así como sustancias odorantes y
saboreantes.
El invento se explica con ayuda de los
siguientes Ejemplos no limitativos. Con el fin de obtener unos datos
analíticos y farmacológicos comparables, en todos los Ejemplos se
secó para dar un extracto seco. Los extractos secos representan, no
obstante, a las soluciones de los extractos que se presentan como
fundamento, las cuales son asimismo un objeto del invento.
Ejemplos 1 hasta
4
1 kg de raíces secadas de Pelargonium
sidoides se hincharon previamente durante 24 h con 2 kg de EtOH
al 35% en peso y luego se transfirieron a una columna de vidrio. A
continuación, se percoló durante 10 h con 8 kg de un EtOH al 5% en
peso, seguidamente se exprimió ligeramente el residuo de la droga,
el extracto en bruto se filtró a través de un filtro Seitz Supra
1500 y se concentró por evaporación hasta sequedad.
Ejemplos 2 y
3
40 g de raíces secadas de Pelargonium
sidoides se hincharon previamente durante 22 h con 80 g de un
disolvente para extracción (un etanol al 11% en peso o
respectivamente al 35% en peso) y luego se transfirieron a una
columna de vidrio. A continuación, se percoló durante 3 a 4 h con
320 g del anterior disolvente para extracción, seguidamente se
exprimió ligeramente el residuo de la droga y el extracto en bruto
transparente se concentró por evaporación hasta sequedad.
40 g de raíces secadas de Pelargonium
sidoides se cargaron en una columna de vidrio y se percolaron
durante 8 h con 400 g de etanol al 11% en peso. Seguidamente se
exprimió ligeramente el residuo de la droga, el extracto en bruto
se filtró a través de un filtro Seitz Supra 1500 y se concentró
hasta sequedad.
Ejemplo de comparación
1
20 g de raíces secadas de Pelargonium
sidoides se extrajeron de modo correspondiente a la prescripción
de maceración para extractos según la DAB 10 con 140 ml de un
etanol al 11% en peso a la temperatura ambiente durante 5 días,
mediando un sacudimiento esporádico y un almacenamiento subsiguiente
durante 5 días a una temperatura fresca. A continuación, se filtró
y la solución del extracto se secó.
Ejemplos 5 hasta 9 y Ejemplo de
comparación
2
20 g de raíces secadas de Pelargonium
sidoides se maceraron con 140 g del disolvente para extracción
(una mezcla de etanol y agua en la composición indicada más abajo o
respectivamente agua (Ejemplo de comparación 2)) a 50ºC durante 30
minutos. A continuación, la solución del extracto se separó por
filtración y el residuo de la droga se maceró una segunda vez de
igual manera. Después de la separación de la modalidad de
sólido/líquido (filtración), las soluciones de los extractos se
reunieron y se secaron.
La determinación de los fenoles totales se
efectúa, de una manera análoga al método de la Farmacopea para
sustancias curtientes (DAB 2000), fotométricamente después de haber
hecho reaccionar con un reactivo de molibdato y wolframato. Para
esto, el extracto se disuelve en etanol acuoso, se alcaliniza con
una solución de carbonato de sodio y se mezcla con un reactivo de
molibdato y wolframato. Después de una centrifugación, se mide la
extinción de la solución sobrenadante a 720 nm frente a agua. El
cálculo se efectúa referido a epicatecol.
La determinación de las cumarinas totales se
efectúa por medio de una HPLC (cromatografía en fase líquida de
alto rendimiento) a través de una columna de RP-18.
Como fase móvil se utiliza un gradiente de mezclas de acetonitrilo,
agua y ácido fosfórico (10:990:4 \ding{234} 205:795:4). Se detecta
en los UV (ultravioletas) a 330 nm. El cálculo de los picos
individuales de cumarina se efectúa como escopoletina.
El procedimiento utilizado de Shi, H. y Niki, E.
(Lipids 33, 365 (1998)) está basado en la medición fotométrica de
la modificación de la extinción que va acompañada por la reducción
de un radical estable (galvinoxilo).
Para esto, se disuelven 2,69 mg de galvinoxilo
en 500 ml de etanol (12,75 \mumol/l). De éstos se mezclan 8 ml
con 200 \mul de una muestra o respectivamente de una solución de
calibración (véase más abajo) y se incuba durante 20 min a la
temperatura ambiente en la oscuridad. Después de esto, se mide en un
fotómetro a 428 nm.
Solución de calibración: 0,954 mg de Trolox
(ácido
6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromano-2-carboxílico)
se disuelven en 25 ml de una mezcla de etanol y agua 1/1. A partir
de esta solución original se preparan unas diluciones a 1/25, 1/20,
1/10, 1/5 así como a 1/2 en una mezcla de etanol y agua 1/1, y se
mide la absorción a 428 nm.
La influencia de ciertos extractos sobre la
actividad peptidolítica de la HLE (E.C. 3.4.21.37; de Sigma) se
determinó a la temperatura ambiente en Tris-HCl 50
mM (de pH 8) con NaCl 50 mM y Brij 35 al 0,01%. La HLE (50 \mul,
200 mU/ml) se incubó durante 15 minutos con 50 \mul de los
extractos en una placa de microtitulación. La reacción enzimática
se inició a continuación mediante la adición de 50 \mul del
substrato
(metoxisuccinil-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilida;
1 mM, de Sigma) y se midió a lo largo de un período de tiempo de 10
minutos en un fotómetro para microplacas a 405 nm (Thermomax, de
Molecular Devices). La inhibición de la actividad enzimática se
calculó en comparación con un testigo con disolvente idéntico (DMSO
= dimetilsulfóxido).
Claims (8)
1. Procedimiento para la preparación de un
extracto de Pelargonium sidoides y/o Pelargonium
reniforme, caracterizado porque las raíces de
Pelargonium sidoides y/o Pelargonium reniforme o
bien
- a)
- se someten a una percolación con un disolvente acuoso-etanólico, el residuo de la droga se exprime eventualmente de manera ligera y el extracto en bruto se filtra eventualmente, o
- b)
- se someten a una maceración en dos etapas con un disolvente acuoso-etanólico, separándose por filtración después de la primera maceración la solución del extracto, y el residuo de la droga se macera una segunda vez, y las soluciones de los extractos se reúnen después de la separación de sólido / líquido.
2. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1, en el que se seca el extracto líquido obtenido en
la etapa a) o b), a fin de obtener un extracto seco.
3. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1 ó 2, en el que al realizar la percolación, antes de
la percolación propiamente dicha, se efectúa una maceración con un
disolvente acuoso-alcohólico.
4. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 3, en el que la maceración y la percolación se
efectúan respectivamente con un etanol acuoso de diferente
concentración.
5. Procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que el disolvente
acuoso-etanólico es un etanol al
10-92% en peso.
6. Procedimiento de acuerdo con una de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que el disolvente
acuoso-etanólico es un etanol al
10-60% en peso.
7. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 4, en el que la concentración media ponderada del
etanol acuoso utilizado en la maceración y en la percolación está
situada en el intervalo de 10-92% en peso,
preferiblemente de 10-60% en peso.
8. Procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 4, en el que se utiliza para la maceración un etanol
al 35% en peso y para la percolación un etanol al 5% en peso en la
relación de 2:8.
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