ES2282780T3 - Metodo para el diagnostico de la fibrosis hepatica. - Google Patents

Metodo para el diagnostico de la fibrosis hepatica. Download PDF

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Abstract

Un método para la detección de la presencia y/o gravedad de una hepatopatía en un paciente que comprende a) medición del TIMP-1 (inhibidor tisular de metaloproteinasa I) en una muestra obtenida de un paciente b) medición de A2M (alfa-2-macroglobulina) en dicha muestra c) medición de PLT (número de plaquetas en sangre) en dicha muestra d) medición de PI (índice de protrombina) en dicha muestra e) medición opcional o bien determinación de al menos un parámetro adicional seleccionado del grupo formado por urea y GGT (gama-glutamiltranspeptidasa) en dicha muestra f) medición opcional de al menos un parámetro bioquímico o clínico adicional en dicha muestra g) diagnóstico de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática basado en la presencia de los niveles medidos de TIMP-1, A2M, PLT, PI y de los parámetros medidos según las etapas e) y f).

Description

Método para el diagnóstico de la fibrosis hepática.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a los campos de la hepatología y de la fibrosis hepática. En particular hace referencia a un grupo de marcadores serológicos que se pueden utilizar para diagnosticar la fibrosis hepática, utilizados especialmente para diagnosticar la fibrosis hepática debida a la infección crónica por hepatitis C. Estos marcadores se pueden usar para controlar el tratamiento terapéutico de la fibrosis hepática.
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Fundamento de la invención
La hepatopatía fibrótica se encuentra clasificada como la octava causa más frecuente de mortalidad, a la que se atribuyen 1,3 millones de muertes al año (Murray y Lopez, 1997, Lancet 349, 1269-1276). Los mecanismos celulares de la fibrosis son complejos. Como respuesta a la lesión hepática, por ejemplo, causada por la infección crónica del virus de la hepatitis C (VHC), la infección por el virus de la hepatitis B (VHB), la esteatosis hepática o hepatopatía alcohólica, la hepatopatía farmacógena o medicamentosa o la cirrosis biliar idiopática, células estrelladas hepáticas normalmente quiescentes son activadas dando lugar a miofibroblastos. Estas células producen unas proteínas de matriz extracelular y liberan inhibidores titulares de las metaloproteinasas que se enlazan e inactivan las metaloproteinasas responsables de la degradación cicatricial. Como resultado de todo ello, la fibrosis y la cicatriz se pueden acumular a través de una producción elevada de tejido y de proteínas como el colágeno y una degradación reducida de estos compuestos, de manera que la función del hígado se ve alterada (McHutchinson 2004, CME Newsletter Tx Reporter Gastroenterology, 2-4).
Mientras que la fibrosis hepática es un proceso reversible que da lugar a la acumulación de matriz extracelular, la cirrosis hepática es un proceso irreversible que se caracteriza por unas bandas gruesas de matriz que rodean por completo el parénquima para formar nódulos. Si no se trata, la fibrosis hepática puede llevar a una cirrosis, posiblemente cáncer. Por esta razón, un diagnóstico a tiempo y preciso de la fibrosis hepática es esencial para lograr un tratamiento médico efectivo.
La biopsia hepática habitual todavía se considera como el tratamiento de referencia para la evaluación de la fibrosis y de la inflamación. La biopsia hepática se recomienda para clasificar y estadificar la enfermedad, confirmar el diagnóstico y establecer un valor de referencia para documentar la mejoría o la progresión de la enfermedad, ayudar a determinar el pronóstico y es necesaria para la terapia (McHutchinson, ver antes; para revisión ver Gebo y cols.2002 Hepatology 36, 161-172).
Existen numerosos sistemas de clasificación histológica que se han utilizado para semicuantificar el grado de fibrosis hepática y de inflamación en pacientes con hepatitis C crónica. Uno de los sistemas de clasificación que más se utiliza es el sistema METAVIR (Bedossa y cols., 1994, Hepatology, 20, 15-20). METAVIR clasifica la fibrosis hepática en 5 fases o estadios que oscilan desde el F0 al F4. El F0 equivale a fibrosis nula, F1 corresponde a fibrosis leve (fibrosis portal sin tabiques). La fibrosis moderada a seria se clasifica como F2 a F4 (F2: poco tabique, F3: numerosos tabiques sin cirrosis), estadio F4 corresponde al último estadio de la cirrosis. La fibrosis se considera clínicamente significativa a partir de F>=2.
Pero existen algunos inconvenientes en la aplicación de la biopsia hepática para diagnosticar y estadificar la fibrosis. La fibrosis hepática está sujeta a un error de muestreo de manera que la parte pequeña de la muestra podría no reflejar la situación real en todo el hígado. Debido a ello no es un marcador preciso del proceso dinámico de degradación constante. Además los patólogos a menudo no están de acuerdo en sus lecturas de muestras histológicas donde se produce una variabilidad entre observadores y del propio observador en un 10 hasta un 20% de las biopsias (Cadranel y cols., 2000, Hepatology 32, 477-481).
La biopsia hepática es un procedimiento doloroso y traumático para el paciente. También está asociado a un riesgo de hemorragia y otras complicaciones después del muestreo. Además se trata de un procedimiento caro debido a las complicaciones previstas que siguen a la hospitalización del paciente.
La fibrosis hepática es la complicación principal de la infección crónica por VHC que lleva al desarrollo de una cirrosis y de una enfermedad hepática descompensada. Por lo tanto para el tratamiento eficaz de estos pacientes es esencial realizar una investigación dirigida que examine el desarrollo y la progresión de la fibrosis. La evaluación de la fibrosis progresiva se efectuará de la mejor manera con ensayos no traumáticos capaces de discriminar las fases intermedias de la fibrosis. Se han publicado una serie de marcadores individuales y de algoritmos de un grupo de marcadores, pero en la actualidad no se dispone de un biomarcador individual potente o de unas referencias de biomarcadores que permitan una predicción fiable de una fibrosis (Exactitud del diagnóstico > 80%). En el 2002 se promovieron investigaciones adicionales en el desarrollo de medidas dinámicas no agresivas de la fibrosis hepática por parte de los National Institutes of Health Consensus Development Conference. En particular, los estudios acerca de las alternativas a la biopsia hepática deberían aportar detalles suficientes sobre los métodos de biopsia (tamaño medio de las piezas de biopsia; grupo o cuadro calificativo, bien caracterizado histológicamente) para convencer a los lectores de la exactitud del patrón de referencia. La biopsia hepática depende considerablemente de los criterios de rendimiento optimizados y puede conducir a una clasificación errónea de las fases histológicas debidas a la variabilidad entre observadores y a unos tamaños de muestra demasiado pequeños (<10 mm).
Ha habido una búsqueda amplia de marcadores serológicos o bioquímicos que reflejen los procesos fibróticos en la enfermedad del hígado y que puedan servir como un sustituto de la biopsia hepática. En los últimos años se han investigado un par de marcadores bioquímicos y serológicos no traumáticos o mínimamente agresivos, que ayuden a diagnosticar las enfermedades hepáticas. En particular, se han utilizado combinaciones de marcadores para categorizar pacientes de acuerdo con su fase o grado de fibrosis.
La US 6.631.330 revela el uso de una combinación de al menos 4 marcadores bioquímicos seleccionados del grupo formado por la \alpha-2-macroglobulina, aspartatoaminotransferasa, \gamma-glutamiltranspeptidasa, \gamma-globulina, bilirrubina total, albúmina, \alpha_{1}-globulina, \alpha2-globulina, haptoglobina, \beta-globulina, apoA1, IL-10, TGF-\beta1, apoA2 y ApoB. Los valores obtenidos de 4 de estos marcadores se combinan matemáticamente para determinar la presencia de la fibrosis hepática. Con este grupo de marcadores se pueden obtener una exactitud diagnóstica de un 80%.
La solicitud de patente internacional WO 2003/073822 describe un método para diagnosticar la presencia o gravedad de la fibrosis hepática en un paciente. Este método utiliza la combinación de al menos tres marcadores que son el \alpha-2-macroglobulina, el ácido hialurónico y el inhibidor tisular de la metaloproteinasa 1 (TIMP-1). Con este método se puede obtener una exactitud diagnóstica de un 80% (Mc Hutchinson, 2004, ver antes).
Existe la necesidad de desarrollar un método no traumático o mínimamente agresivo para conseguir una exactitud superior en el diagnóstico a la hora de determinar la fibrosis hepática y clasificar y discriminar entre las diferentes fases de fibrosis de un modo más fidedigno que el que se conoce en la actualidad, de manera que sea posible el control del avance de la fibrosis y su respuesta al tratamiento. Además dicho método debería ser adecuado para pruebas en serie en analizadores automáticos.
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Descripción de la invención
El problema se resuelve mediante un método conforme a la presente invención. El método para la detección de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática en un paciente comprende las etapas siguientes:
a)
medición del TIMP-1 (inhibidor tisular de metaloproteinasa I) en una muestra obtenida de un paciente
b)
medición de A2M (alfa-2-macroglobulina) en dicha muestra
c)
medición de PLT (número de plaquetas en sangre) en dicha muestra
d)
medición de PI (índice de protrombina) en dicha muestra
e)
medición opcional o bien determinación de al menos un parámetro adicional seleccionado del grupo formado por urea y GGT (gama-glutamiltranspeptidasa) en dicha muestra
f)
medición opcional de al menos un parámetro bioquímico o clínico adicional en dicha muestra
g)
diagnóstico de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática basado en la presencia de los niveles medidos de TIMP-1, A2M, PLT, PI y de los parámetros medidos según las etapas e) y f).
La presente invención permite una diferenciación segura entre la fibrosis F0/F1 y las fases F2/F3/F4. Además se puede llevar a cabo un control terapéutico como un control del tratamiento médico de las enfermedades hepáticas siguiendo el método de la invención.
El método de la presente invención está altamente correlacionado con las fases Metavir bien caracterizadas de la fibrosis hepática. Una ventaja especial del método de la presente invención en comparación con los métodos convencionales es el uso de un grupo calificador para minimizar errores de mala clasificación de observación patológica y de los modelos estadísticos.
El método de la invención comprende un método no agresivo íntimamente correlacionado con la gravedad de la fibrosis tal como ésta viene determinada por varios métodos: biopsia del hígado y métodos adicionales como la determinación del área de fibrosis.
El método de la presente invención se basa en un grupo estadísticamente relevante de muestras de pacientes con una fibrosis hepática bien caracterizada que abarca todo el campo de fases Metavir y de muestras de individuos sin fibrosis hepática debida a hallazgos histológicos (puntuación Metavir:0).Los criterios de selección iniciales de las muestras es la puntuación Metavir. Esta referencia viene confirmada en una doble evaluación y de forma optimizada ya que utiliza muestras con tamaños superiores a 15 mm.
El método de la invención actual permite una predicción segura de la fibrosis con una exactitud en el diagnóstico (ED) de al menos un 85%, preferiblemente de al menos un 87%. Puesto que incluso el estándar de referencia no es un patrón o una referencia de la fibrosis hepática con respecto a la clasificación errónea opcional de fases de fibrosis y conduce además a dolor y a riesgos en la salud del paciente, el método de la presente invención representa una alternativa a la biopsia.
El método permite la investigación del desarrollo y del avance de la fibrosis permitiendo un tratamiento eficaz de los pacientes con VHC crónico. El control de la enfermedad de los pacientes con VHC crónico puede ser realizado en un breve intervalo de tiempo en comparación con la biopsia. El método permite controlar el éxito de la terapia antifibrótica.
El método permite también la investigación del desarrollo y del avance de la fibrosis en los individuos con una lesión hepática crónica. Este es un trastorno relativamente frecuente con unos síntomas mínimos, incluso con un riesgo a largo plazo de morbididad y mortalidad significativas, que se define patológicamente por una necrosis hepática que avanza y una inflamación en el hígado, a menudo acompañada por una fibrosis. El VHC es la forma más frecuente de lesión hepática crónica. El método se puede aplicar a otras formas de lesión hepática crónica: esteatohepatitis alcohólica (EHA), enfermedad del hígado graso alcohólico (EHGA), esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) o bien enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA). Los métodos de la invención se pueden utilizar para controlar la gravedad de la EHNA y la EHGNA. Se pueden utilizar para diagnosticar la fibrosis hepática en un individuo con hepatitis vírica como el virus de la hepatitis A, B, C o D o bien el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), hepatitis crónica persistente o crónica activa, enfermedad hepática autoinmunitaria, como la hepatitis autoinmunitaria y la enfermedad hepática inducida por fármacos; la cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, atresia biliar, enfermedad del hígado resultante del tratamiento médico o de una enfermedad del hígado congénita. La invención puede ser utilizada para controlar el tratamiento con un fármaco con el riesgo de una enfermedad
hepática.
De acuerdo con la presente invención las combinaciones preferidas de los parámetros son TIMP-1, A2M, PLT, PI también llamada SNIFF 4c, siendo SNIFF la abreviación francesa de store non-invasif de fibrose du foie; en inglés: nivel no agresivo de fibrosis hepática) con una exactitud del diagnóstico del 84%; TIMP-1, A2M, PLT, PI, urea (SNIFF 5a ) con una exactitud del diagnóstico del 84%; y TIMP-1, A2M, PLT, PI, urea, GGT (SNIFF 6b) con una exactitud del diagnóstico del 87,4%. Estas combinaciones preferidas se pueden ver también en la tabla 3.
En el sentido de la presente invención, los términos específicos y las expresiones se deberían entender del modo siguiente:
Exactitud del diagnóstico (ED) es la exactitud de la prueba en sí. Esto significa el porcentaje de todas las pruebas que son realmente positivas o realmente negativas. Cuanto mayor es la exactitud del diagnóstico más seguros son los resultados de la prueba. La ED se calcula como la suma de los verdaderos positivos y de los verdaderos negativos dividida por el número total de resultados de las muestras y este valor viene influido por la prevalencia de fibrosis en la población analizada.
El valor de corte es la concentración aritmética calculada de un biomarcador individual o de una combinación de varios biomarcadores para la discriminación de un estado sano o enfermo. En lo que se refiere al valor de corte de la invención se trata de un valor de 0,5. Si este valor es superior o igual a 0,5 (>=0,5) esto significa que se alcanza la fase Metavir F2 para distinguir entre fibrosis leve o nula (fases Metavir F0 o F1) y la fibrosis clínicamente significativa FCS (fases Metavir F2, F3, F4).
El valor predictivo positivo (VPP) es el porcentaje de pruebas positivas que son verdaderos positivos.
El valor predictivo negativo (VPN) equivale al porcentaje de pruebas negativas que son verdaderos negativos.
La puntuación o el valor equivalen a una combinación aritmética de varios biomarcadores asociados a la fibrosis. En particular, el valor que aquí se utiliza tiene un intervalo entre 0 (fibrosis mínima) y 1 (FCS: fibrosis clínicamente significativa).
AUROC equivale al área bajo la curva de características del operador receptor. En estas curvas, la sensibilidad se representa gráficamente frente al recíproco de la especificidad. Un área bajo la curva ROC de 1.00 indicaría un ideal de la sensibilidad del 100% y una especificidad del 100%. Cuanto mayor la pendiente al comienzo de la curva mejor es la relación entre sensibilidad y especificidad de una prueba.
La sensibilidad es la probabilidad de un resultado positivo de la prueba en un paciente con una enfermedad o con un factor de riesgo o en otro estado de salud.
La especificidad es la probabilidad de un resultado de la prueba negativo en un paciente que no tiene la enfermedad.
TIMP-1 (inhibidor tisular de la metaloproteinasa I) es una sialoglucoproteína del aminoácido 184 con un peso molecular de 28,5 kDA (ver por ejemplo, Murphy y cols., Biochem J. 1981, 195, 167-170) que inhibe las metaloproteinasas como la colagenasa intersticial MMP-1 o la estromelisina o gelatinasa B. En la comprensión de la presente invención, el término TIMP-1 abarca una proteína con una homología estructural significativa respecto al TIMP-1 humano, que inhibe la actividad proteolítica de las metaloproteinasas. La presencia de TIMP-1 humano se puede detectar usando anticuerpos que detecten específicamente epítopos de TIMP-1. El TIMP-1 puede determinarse también por detección de ácidos nucleicos afines como el mARN correspondiente.
La A2M (\alpha-2-macroglobulina) es una proteína conservada, altamente abundante en plasma que sirve como una proteína de enlace de la proteasa para purificar las proteasas activas de los fluidos tisulares. La A2M no inactiva la actividad catalítica de una proteasa pero actúa mediante la compresión física de la proteasa de referencia doblándose alrededor de la proteasa. Una proteasa comprimida por la A2M se encuentra impedida estéricamente para escindirse en proteínas sustrato. En el sentido de la invención, la A2M puede ser detectada mediante una valoración inmunológica utilizando anticuerpos específicos según los formatos de prueba conocidos por un experto en la materia. La A2M puede ser determinada también mediante la detección de ácidos nucleicos afines como el mARN correspondiente.
El PLT (número de plaquetas en sangre) es el número de plaquetas en sangre y se determina mediante el recuento de plaquetas usando un contador disponible en el comercio.
El PI (índice de protrombina) es útil para detectar las interferencias en el sistema de coagulación y se puede determinar añadiendo tromboplastina a la muestra de plasma y midiendo el tiempo de coagulación en segundos (llamado Quick-time). Este valor se correlaciona con un cociente normalizado internacional que contiene un factor de corrección que tiene en cuenta la sensibilidad de la tromboplastina usada.
De acuerdo con la invención, se pueden determinar parámetros bioquímicos o clínicos adicionales. El parámetro bioquímico adicional puede ser cualquier parámetro asociado directa o indirectamente con el metabolismo o la estructura del hígado como, por ejemplo, la ferritina, hialuronato, AST (aspartato-aminotransferasa), MMP-2 (matriz metaloproteinasa-2), ALT (alanita-aminotransferasa), PIIINP (propéptido N-terminal del procolágeno tipo III), bilirrubina, haptoglobina, ApoA1. Se pueden determinar también la hepcidina o la adiponectina.
La hepcidina es una proteína hepática, identificada originalmente como un péptido antimicrobiano circulante. Se trata del jugador central en la comunicación de los almacenes de hierro del cuerpo con respecto a las células de absorción intestinal. La adiponectina es secretada por los adipocitas y circula en unas concentraciones sistémicas relativamente elevadas para influir en la función metabólica. Los niveles reducidos de adiponectina sérica indican un riesgo elevado de enfermedades, por ejemplo, gravedad de la enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD) o esteatohepatitis no alcohólica (NASH).
Se pueden determinar parámetros clínicos adicionales como la edad, el sexo, el peso, los hábitos nutricionales del paciente.
La urea, GGT (gama-glutamiltransferasa), ferritina, hialuronato, AST (aspartato-aminotransferasa) y ALT (alanino-aminotransferasa), ferritina, MMP-2, PIIINP bilirrubina, heptoglobina, ApoA1, hepcidina y adiponectina son determinadas mediante estuches de prueba disponibles en el comercio por medio de métodos inmunológicos o fotométricos conocidos por el experto en el tema. En caso de que sea posible se usarán técnicas de hibridación para la detección de ácidos nucleicos que sean específicos para un análito o parámetro (como el mARN correspondiente) para la determinación de un parámetro.
La invención utiliza la determinación de una pluralidad de parámetros. Por lo tanto la detección de esos parámetros bioquímicos y serológicos de la invención que puede ser llevada a cabo en formatos de prueba usando una fase sólida se lleva a cabo preferiblemente en sistemas de prueba miniaturizados a base de matrices tal como se describe en US 2003/0017616 o bien WO 99/67643. Estos sistemas de prueba tiene múltiples áreas de prueba definidas en el espacio y cada una de ellas se puede utilizar para detectar un análito o parámetro específico único. Por consiguiente, en un única serie analítica se pueden detectar una pluralidad de análitos.
El término "áreas o zonas de prueba definidas" sobre una fase sólida equivale a decir que las áreas de prueba comprenden unas regiones definidas de la fase sólida que se encuentran preferiblemente separadas en el espacio de otras áreas de prueba por unas regiones inertes. Las áreas de prueba definidas tienen preferiblemente un diámetro de 10 \mum a 1 cm y en particular de 10 \mum a 5 mm. Las áreas de prueba miniaturizadas con un diámetro de 10 \mum a 2 mm son las más preferidas. Se prefieren las fases sólidas con varias áreas de prueba a las que se conoce también por sistemas matriciales. Dichos sistemas matriciales se han descrito, por ejemplo, en Ekins y Chu (Clin. Chem. 37, 1995, 1955-1967) y en las patentes americanas números 5.432.099, 5.516.635 y 5.126.276. Tal como se ha mencionado antes, una ventaja de los sistemas matriciales es que se pueden realizar varias determinaciones de análito y de control simultáneamente en una muestra. El uso de áreas de control para detectar el enlace no específico y/o muestras que interfieren puede mejorar considerablemente la veracidad de los resultados especialmente con sistemas matriciales miniaturizados.
En la invención actual, la detección de TIMP-1 y A2M y posiblemente de otros parámetros bioquímicos idóneos para los métodos de detección que aplican una fase sólida podría realizarse, por ejemplo, simultáneamente usando dicho sistema matricial.
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De acuerdo con la invención, la fase sólida es cualquier soporte convencional para los métodos de detección, preferiblemente un soporte no poroso, por ejemplo, un soporte con una superficie de plástico, vidrio, metal o bien óxido metálico. Los soportes porosos como las tiras de ensayo son también adecuados. Las regiones separadas en el espacio (zonas de prueba) están situadas sobre este soporte. Los receptores de fase sólida inmovilizados se aplican a estas zonas de prueba. Los receptores de fase sólida son inmovilizados por los métodos conocidos, por ejemplo, por un enlace de adsorción directo, por un enlace covalente o por un acoplamiento a través de pares de enlace de elevada afinidad, por ejemplo, estreptavidina (o avidina)/biotina, antígeno/anticuerpo o azúcar/lectina. La presencia o/y la cantidad de análito en una muestra puede ser determinada por el enlace específico de componentes del medio de detección, por ejemplo, del análito que se va a determinar o de un análito análogo al receptor de la fase
sólida.
La detección de parámetros sujetos a ensayos de fase sólida puede ser realizada naturalmente en sistemas convencionales, no miniaturizados como los pocillos, tubos o microesferas.
La detección del análito y en caso de necesidad la detección de la presencia de reacciones de interferencia se consigue en el método conforme a la invención de forma conocida usando los grupos de marcadores adecuados, por ejemplo, los grupos de marcadores fluorescentes. Alternativamente a las fases sólidas adecuadas es posible detectar también la interacción de componentes del medio de detección con las áreas de prueba y de control opcionales determinando el grosor de capa de cada una de las áreas, por ejemplo, mediante una espectroscopia de resonancia de plasmón.
Con sistemas matriciales en los cuales se detectan varios análitos de una muestra al mismo tiempo, es preferible utilizar un grupo de marcadores universal que permita una detección simultánea de varios analitos diferentes respecto a diferentes áreas de prueba. Un ejemplo de dichos grupos de marcadores universales son los grupos de marcadores que llevar un receptor que puede interaccionar de forma específica con un receptor complementario en un reactivo de prueba, por ejemplo, un receptor soluble para un análito que va a ser determinado o bien para un análito análogo (como anticuerpo/antígeno o estreptavidina/biotina etc.).
El término muestra equivale a una muestra biológica que contiene o bien presumiblemente contiene al menos uno de los marcadores conforme a la invención. Por ejemplo, se puede utilizar como muestra sangre, suero, plasma, orina, saliva, líquido sinovial o tejido hepático. Las muestras líquidas pueden diluirse antes del análisis si es preciso.
Para obtener un resultado que ayude a diagnosticar la enfermedad se utilizan algoritmos matemáticos conocidos por el experto. Los datos obtenidos se combinarán y evaluarán mediante métodos estadísticos como la regresión binaria logística, dando lugar a unas puntuaciones.
La figura 1 muestra datos brutos como los medidos en 120 pacientes que padecen de una infección por hepatitis C.
La figura 2 muestra la distribución de una de las puntuaciones preferidas (SNIFF 6b) y una combinación actual por Fibrotest en función del grado de Metavir F. Puede observarse que el método de la presente invención tiene menos pacientes mal clasificados en las fases Metavir F3 y F4 en comparación con el método Fibrotest. En particular, la SNIFF 6b clasifica erróneamente sólo una muestra de fase F3 como negativa (por debajo de la puntuación 0,5) mientras que el Fibrotest clasifica erróneamente varias muestras.
Con más detalle la puntuación del Fibrotest combina A2M, haptoglobina, ApoA1, bilirrubina, GGT, edad y sexo de un paciente. Estos siete parámetros de Fibrotest alcanzan una exactitud de diagnóstico de aproximadamente un 80% mientras que la puntuación del SNIFF 6b alcanza una exactitud superior al 87% (ver también la tabla 3).
La figura 3 muestra unas curvas ROC para grupos de fibrosis significativos desde un punto de vista clínico de acuerdo con el método de la invención (SNIFF 6b) en comparación con el método de US 6.631.330 (Fibrotest 7). La curva ROC para la invención da lugar a una mayor pendiente y un valor AUROC superior al del método actual: AUROC 0,920 \pm 0,036 (SNIFF 6b) frente a 0,857\pm0,026 (Fibrotest 7).
La invención se ilustra además en el ejemplo siguiente:
Ejemplo
Se utilizaban estuches de prueba disponibles en el comercio y todas las pruebas se realizaban de acuerdo con las instrucciones dadas por los fabricantes que se indican a continuación.
TABLA 1
1
La figura 1 muestra los datos brutos tal como se han medido en muestras de 120 pacientes que padecen de una infección por hepatitis C. Para obtener los datos se utilizaban los estuches de prueba indicados.
En la tabla 2, se mencionan la exactitud diagnóstica y los valores AUROC. Puede verse que cada marcador individual tiene una exactitud inferior al 80%.
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TABLA 2
2
La tabla 3 muestra una comparación de ED/AUROC con los métodos actuales. Se observaba que los métodos de la presente invención tenían una exactitud de diagnóstico (ED) superior de la fibrosis significativa desde un punto de vista clínico por regresión logística binaria en comparación con los métodos de US 6.631.330 y WO2003/073822.
TABLA 3
3
n var es el número de variables analizadas de los parámetros, nPts equivale al número de pacientes analizados.

Claims (3)

1. Un método para la detección de la presencia y/o gravedad de una hepatopatía en un paciente que comprende
a)
medición del TIMP-1 (inhibidor tisular de metaloproteinasa I) en una muestra obtenida de un paciente
b)
medición de A2M (alfa-2-macroglobulina) en dicha muestra
c)
medición de PLT (número de plaquetas en sangre) en dicha muestra
d)
medición de PI (índice de protrombina) en dicha muestra
e)
medición opcional o bien determinación de al menos un parámetro adicional seleccionado del grupo formado por urea y GGT (gama-glutamiltranspeptidasa) en dicha muestra
f)
medición opcional de al menos un parámetro bioquímico o clínico adicional en dicha muestra
g)
diagnóstico de la presencia y/o gravedad de una enfermedad hepática basado en la presencia de los niveles medidos de TIMP-1, A2M, PLT, PI y de los parámetros medidos según las etapas e) y f).
2. Método conforme a la reivindicación 1 utilizado par controlar el tratamiento terapéutico de la fibrosis hepática
3. Método conforme a la reivindicación 1 para clasificar la fibrosis hepática.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014177747A1 (es) * 2013-04-30 2014-11-06 Fundación Pública Andaluza Progreso Y Salud Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial de la fibrosis hepática
WO2015047071A1 (es) * 2013-09-24 2015-04-02 Universidad Nacional Autónoma de México Prueba in vitro para diagnóstico temprano y estadificación de fibrosis hepática
WO2015047072A1 (es) * 2013-09-24 2015-04-02 Universidad Nacional Autónoma de México Arreglo múltiple de anticuerpos específicos para el pronóstico, detección y vigilancia del proceso fibrogénico

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100999720B1 (ko) 2008-11-13 2010-12-08 아주대학교산학협력단 간 경변 진단을 위한 분석방법
JP5676275B2 (ja) * 2008-12-24 2015-02-25 学校法人慶應義塾 酸化ストレス検出用マーカー、肝臓疾患マーカー及び医薬品の検定方法
KR101018960B1 (ko) 2009-02-23 2011-03-02 아주대학교산학협력단 유의성있는 간섬유화 진단을 위한 분석 방법
JP5887141B2 (ja) * 2009-02-26 2016-03-16 ユニバーシティ ダンガース 肝線維症または肝硬変の向上した診断方法
WO2010106140A1 (en) * 2009-03-19 2010-09-23 Universite D'angers Non-invasive method for assessing liver fibrosis progression
KR20120041175A (ko) * 2009-05-14 2012-04-30 더 챈슬러 마스터즈 앤드 스칼라스 오브 더 유니버시티 오브 옥스포드 미량 존재하는 인간 혈장 단백질 바이오마커의 신규 패널을 이용한 간성 섬유증의 임상적 진단
EP2327988A1 (en) 2009-11-28 2011-06-01 Assistance Publique Hôpitaux De Paris Method for diagnosis of fibrotic diseases
NZ606236A (en) * 2010-07-08 2014-09-26 Univ Louisiana State Adenovirus ad36 e4orf1 protein for prevention and treatment of non-alcoholic fatty liver disease
CN102302358B (zh) * 2011-06-29 2014-04-09 内蒙古福瑞医疗科技股份有限公司 肝纤维化检测系统
BR112013033595A2 (pt) * 2011-06-29 2017-01-24 Inner Mongolia Furui Medical Science Co Ltd aparelhagem e sistema de detecção de fibrose hepática
CN102636642B (zh) * 2012-04-06 2014-04-30 中国人民解放军第三0二医院 一种肝纤维化诊断的快速定量试纸条的制备方法
EP3027115B1 (en) * 2013-08-02 2023-09-06 Echosens Non-invasive system for calculating a human or animal, reliable, standardized and complete score
EP3491388B1 (en) 2016-08-01 2021-09-01 Centre Hospitalier Universitaire d'Angers Multi-targeted fibrosis tests
US20210022715A1 (en) * 2018-03-26 2021-01-28 The General Hospital Corporation Method for objective, noninvasive staging of diffuse liver disease from ultrasound shear-wave elastography
CN110070942A (zh) * 2019-04-22 2019-07-30 深圳市绘云生物科技有限公司 一种基于梯度提升树模型的慢性肝病风险评估系统
CN114550942B (zh) * 2022-02-16 2023-06-30 四川大学华西医院 一种肝脏显著纤维化预测模型及构建方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0823558B2 (ja) * 1984-11-27 1996-03-06 オ−ジエニクス リミテツド 検定装置
GB8803000D0 (en) * 1988-02-10 1988-03-09 Ekins Roger Philip Determination of ambient concentrations of several analytes
JP3097866B2 (ja) * 1991-10-15 2000-10-10 マルティライト リミティド 標識試薬を使用した結合検定法
EP1015890B1 (en) * 1997-04-23 2005-11-30 INSTRUMENTATION LABORATORY S.p.A. Recombinant rabbit tissue factor based prothrombin time reagent
DE19731465A1 (de) * 1997-07-22 1999-01-28 Boehringer Mannheim Gmbh Verwendung von Kontrollflächen zur Detektion von Störproben in einem Nachweisverfahren
EP1150123B1 (en) * 2000-04-28 2006-07-12 Bayer Aktiengesellschaft Diagnosis of liver fibrosis with serum marker algorithms
AU6738001A (en) * 2000-04-28 2001-11-20 Bayer Aktiengesellschaft Assessment of liver fibrosis scoring with serum marker algorithms
AU7812800A (en) * 2000-08-21 2002-03-04 Epigene Diagnosis method of fibrotic disease using biochemical markers
US6631330B1 (en) * 2000-08-21 2003-10-07 Assistance Publique-Hopitaux De Paris (Ap-Hp) Diagnosis method of inflammatory, fibrotic or cancerous disease using biochemical markers
US6986995B2 (en) * 2002-02-28 2006-01-17 Prometheus Laboratories, Inc. Methods of diagnosing liver fibrosis

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014177747A1 (es) * 2013-04-30 2014-11-06 Fundación Pública Andaluza Progreso Y Salud Método de obtención de datos útiles para el diagnóstico diferencial de la fibrosis hepática
WO2015047071A1 (es) * 2013-09-24 2015-04-02 Universidad Nacional Autónoma de México Prueba in vitro para diagnóstico temprano y estadificación de fibrosis hepática
WO2015047072A1 (es) * 2013-09-24 2015-04-02 Universidad Nacional Autónoma de México Arreglo múltiple de anticuerpos específicos para el pronóstico, detección y vigilancia del proceso fibrogénico

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