ES2264725T3

ES2264725T3 - Uso de una mezcla polifuncional de sustancias activas como antagonista contra sustancias nocivas en el humo de tabaco y como agente protector de la salud al fumar.

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Publication number: ES2264725T3
Application number: ES02717950T
Authority: ES
Inventors: Karl Hecht; Egon Tech; Ronald Dehmlow; Ekkard Arbeit
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2001-02-16
Filing date: 2002-02-15
Publication date: 2007-01-16
Anticipated expiration: 2022-02-15
Also published as: DE10107731A1; EP1361894B1; WO2002066043A3; ATE324117T1; AU2002249073A1; US20050020493A1; EP1361894A2; WO2002066043A2; DE50206562D1

Abstract

Uso de una mezcla polifuncional de sustancias activas con efecto antiinflamatorio, espasmolítico y anti-estrés, para la fabricación de antagonistas de las sustancias nocivas del humo del tabaco, caracterizada porque comprende una fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10 000 Dalton y una fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales, y porque se obtiene de una mezcla multifactorial de inmunomoduladores, mediante - incubación a temperaturas ambientales típicas de la especie original, de 20 a 39 ºC, en un intervalo de tiempo de 2 a 8 días, - seguida de lisis, - cosecha junto con el medio de conservación, y - separación de componentes celulares con una masa molar superior a 10 000 Dalton, mediante ultracentrifugación a lo largo de 24 horas, y - obtención de la fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10 000 Dalton y de la fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales.

Description

Uso de una mezcla polifuncional de sustancias activas como antagonista contra sustancias nocivas en el humo de tabaco y como agente protector de la salud al fumar.

La invención se refiere al uso de una mezcla polifuncional de sustancias activas con efecto antiinflamatorio, espasmolítico y anti-estrés, que comprende una fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10,000 Dalton así como una fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales, obtenida de una mezcla multifactorial de inmunomoduladores, y que actúa como un antagonista frente a las sustancias nocivas del humo de tabaco, ejerciendo una función protectora de la salud.

La mezcla, que se aplica preferentemente por vía inhalatoria (principio de adhesión, atomización), mejora, elimina y previene efectos inducidos por sustancias nocivas del humo del tabaco, como inflamaciones de mucosas, desórdenes regulatorios en los sistemas orgánicos de musculatura lisa (vasos sanguíneos, bronquios, esófago, vejiga, estómago, intestinos, etc.), desórdenes de la función miocárdica así como del sistema nervioso central y periférico. La mezcla polifuncional de sustancias activas se obtiene de una mezcla multifactorial de inmunomoduladores.

Existe una infinidad de trabajos científicos sobre los efectos nocivos del tabaco sobre la salud y sobre los efectos patogénicos del tabaquismo, lo que ha llevado a las administraciones y a la justicia a afrontar una problemática con la que deberán seguir lidiando. A continuación se recogen unos cuantos ejemplos de lo dicho.

1.: David Byrne, Comisario Europeo de Sanidad y Protección de los Consumidores (Focus 11/2000 p. 362/363)

: "Medio millón de ciudadanos europeos mueren anualmente como consecuencia del consumo de tabaco, lo que equivale a un muerto por minuto."

2.: La Organización Mundial de la Salud está negociando una convención contra el tabaco (idéntica fuente).

3.: Las futuras madres fumadores aumentan el estrés prenatal con sustancias carcinogénicas y teratogénicas. (Deutsches Ärzteblatt [Revista Médica Alemana] 97/39 2000 p. C 1873)

4.: En un juicio en los EE.UU. se condenó a la industria tabaquera norteamericana a pagar 145,000 millones de dólares a fumadores enfermos. Esta ha sido la indemnización por responsabilidad civil de mayor cuantía jamás fijada en los EE.UU. (Focus 51/2000 p. 168).

Breve resumen de las principales consecuencias patogénicas del tabaquismo

1.: Es sabido que el consumo de tabaco, sobre todo de cigarrillos, tiene efectos nocivos que dan lugar a inflamación crónica de los ojos así como de las mucosas de los sistemas digestivo y respiratorio. Los principales afectados son las mucosas de la boca, la nariz, la garganta, la laringe, los bronquios y los bronquiolos, el esófago, el estómago, el duodeno, el intestino delgado y el intestino grueso. Muchas personas padecen asimismo conjuntivitis crónica derivada del consumo de tabaco. Estas inflamaciones inducidas por las sustancias nocivas del tabaco provocan a menudo ulceraciones en el aparato digestivo, inhibición parcial o completa de la absorción de vitamina C y beta caroteno -vitamina B- (lo que puede dar lugar a enfermedades por deficiencia vitamínica), enfermedades infecciosas de los órganos respiratorios, etc., cuyos costes suponen en conjunto una considerable carga sanitaria (véase litigación en EE.UU.)

2.: Se sabe que las sustancias nocivas del humo del tabaco (de las que se han identificado unas 200) provocan inflamaciones de las membranas, desórdenes de la musculatura lisa en forma de contracciones o espasmos de los vasos sanguíneos, de los bronquios, y del sistema digestivo. Las afecciones más comunes para el fumador, como demuestran las estadísticas pertinentes, son la perfusión deficiente del corazón (infarto de miocardio), la piel, el cerebro, las extremidades (enfermedad arterial oclusiva, etc.), y sobre todo dolencias torácicas del fumador.

3.: Es conocido que las sustancias del humo del tabaco actúan asimismo como factores de estrés, p. ej., incrementando la secreción de la hormona suprarrenal adrenalina, que liberada en la circulación desencadena un distrés generalizado. Ello estimula y refuerza, por una parte, las manifestaciones patológicas recogidas en 1. y 2., y por otra tiene como efecto desórdenes regulatorios, p. ej. del sistema inmunitario o del sistema de transmisores (incluidos péptidos reguladores y neuropéptidos) que como se sabe son algunas de las consecuencias del distrés.

4.: Se ha constatado asimismo que el tabaquismo constituye una adición cuya deshabituación no sólo es difícil en la mayoría de los casos, sino que además está acompañada de numerosos síntomas de abstinencia patológicos. Por este motivo, muchos fumadores prosiguen en su hábito, aun a sabiendas del riesgo que ello supone para su salud.

5.: La conclusión lógica que se extrae de todos estos hallazgos científicos es que fumar perjudica la salud y que por tanto cada cajetilla, o la publicidad correspondiente, debe advertir de tales efectos nocivos.

6.: El fumador es un adicto, y como tal sigue fumado conscientemente, aun sabiendo que su salud se resiente por efecto del tabaco, lo que le crea un conflicto permanente, a menudo a nivel subconsciente.

7.: Hasta la fecha no se ha descubierto ninguna sustancia que proteja de los efectos perjudiciales del tabaquismo para la salud, a pesar de que tal sustancia sería de urgente indicación y de gran utilidad para resolver en primer lugar el conflicto de un fumador ya adicto, y en segundo lugar, para protegerlo de subsiguientes efectos perjudiciales para su salud.

El objeto de la invención consiste en identificar un antagonista frente a las sustancias nocivas del humo de tabaco, con función protectora de la salud, que por su parte no sea adictivo ni presente riesgos para la salud, que no afecte al sabor del producto de tabaco ni merme el placer de fumar, que se pueda utilizar con facilidad y que sirva para aliviar, eliminar y prevenir efectos de las sustancias nocivas del humo del tabaco, como

-: Inflamaciones de las mucosas

-: Desórdenes regulatorios

-: de la función de los sistemas orgánicos de musculatura lisa (vasos sanguíneos, bronquios, esófago, vejiga, estómago, intestinos, etc.)

-: de las funciones cardíacas, así como

-: de las funciones del sistema nervioso central y periférico.

El objeto de la invención se puede lograr mediante una mezcla polifuncional de sustancias activas, que destaca por su efecto antiinflamatorio, espasmolítico y anti-estrés, y que comprende una fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10,000 Dalton y/o una fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales, y que se obtiene de una mezcla multifactorial de inmunomoduladores.

En cuanto a su aplicación, la mezcla polifuncional de sustancias activas se utiliza preferiblemente incorporada en el artículo de tabaco para ser administrada al organismo como agente inhalado (principio de adhesión, atomización a través de las vías respiratorias y órganos respiratorios) a través de un filtro de boquilla del artículo de tabaco (cigarrillo, puro, cigarro, pipa).

Se han descrito también mezclas multifactoriales de sustancias activas con efecto antiinflamatorio. Se ha utilizado una mezcla de moduladores ya descrita esencialmente en DE 195 12 227 C1, pero que difiere de la mezcla de DE 195 12 227 C1 en que presenta una fracción de péptidos específicos con un peso molecular de hasta 10,000 Dalton y/o una fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales. Dicha mezcla se prepara análogamente a DE 195 12 227 C1, es decir, se obtiene de células somáticas, pero a diferencia de DE 195 12 227 C1, la fracción de péptidos específicos con un peso molecular de hasta 10,000 Dalton y/o con aminoácidos esenciales y no esenciales se aísla por ultracentrifugación a lo largo de 24 horas. En otras palabras, la mezcla polifuncional de sustancias activas con efecto antiinflamatorio y espasmolítico, que comprende una fracción de péptidos específicos con una masa molar relativa de hasta 10,000 Dalton y/o aminoácidos esenciales y no esenciales, se obtiene de las células somáticas mediante

-: incubación a temperaturas típicas de la especie original, de 20 a 39ºC, en un intervalo de tiempo de 2 a 8 días,

-: seguida de lisis,

-: cosecha junto con el medio de conservación, y

-: separación de los componentes con una masa molar de más de 10,000 Dalton, recogiendo simultáneamente la fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10,000 Dalton y/o la fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales, mediante ultracentrifugación a lo largo de 24 horas.

Se utiliza preferiblemente una mezcla polifuncional de sustancias activas que comprende una fracción de péptidos específicos con una masa molar relativa entre 200 y 6.000 Dalton. Esta mezcla se obtuvo mediante reconcentración con un factor de 1000 a partir de la fracción obtenida, con proteínas < 10.000 Dalton y utilizando medios físicos. Las sustancias contenidas se analizaron mediante espectroscopia de masas.

Estos péptidos < 10.000 Dalton contenidos en la mezcla son péptidos presentes asimismo en el organismo humano, lo que da lugar a una mezcla de sustancias activas "endógenas" bien toleradas. Se conocen y han descrito numerosos péptidos endógenos. En el sentido de la presente invención, ejemplos de péptidos activos preferidos dentro de la mezcla polifuncional de las citadas sustancias activas, como reguladores de homeostasis o reguladores de estrés con efecto sobre la musculatura lisa y/o como neuropéptidos, incluyen

(Hecht, K., W-E Vogt, E. Wachtel, P.Oehme und M.G. Airapetjanz: Schlafregulierende Peptide. Beiträge zur Wirkstoffforschung. Vol. 37 dito, 1990), (Oehme P., H. Bienert, K. Hecht, J. Bergmann: Substanz P. Beiträge zur Wirkstoffforschung. Vol. 12 dito, 1981), (Marsan, C.A., W.Z. Trazyk (Eds.): Neuropeptides and Neural Transmission. Organización Internacional de Investigaciones sobre el Cerebro (IBRO) Monograph Series: Volumen 7. Raven Press New York) Oehme, P.H. Löwe, E. Göres (Ed.): Peptide und Adaptions-Grundlagenforschung und klinische Aspekte. Beiträge zur Wirkstoffforschung, Vol. 36, Complejo industria-universidad para la investigación farmacéutica, Berlín (1990) Oehme, P.H. Löwe, E. Göres (Ed.): Peptides in the Nervous System, Beiträge zur Wirkstoffforschung, Vol. 24 (1985).

Con esta mezcla polifuncional de sustancias activas se ha descubierto un antagonista contra el humo del tabaco y protector de la salud, que se formula preferiblemente como agente inhalado (principio de adhesión, atomización) a través de un filtro de boquilla del artículo de tabaco (cigarrillo, puro, cigarro, pipa) para su administración al organismo.

A tal efecto, la mezcla polifuncional de sustancias activas se incorpora a la boquilla (filtro) del artículo de tabaco (cigarrillo, puro, cigarro, pipa, etc.) durante el proceso de fabricación en forma de un substrato atomizable que, en base al principio de adhesión, se atomiza al fumar, mezclándose con el humo del tabaco para ser introducido así en el organismo.

El uso concomitante con el artículo de tabaco no supone ninguna merma de sabor para el fumador. Además, la mezcla polifuncional de sustancias activas no posee ningún efecto tóxico relevante. La mezcla tiene un efecto significativo para la salud a concentraciones muy bajas (10^{-6} hasta 10^{-9} g/kg de peso corporal), substancialmente a través de una función desencadenante bioactiva.

La mezcla polifuncional de sustancias activas posee propiedades activas específicas entre las que cabe citar efecto antiinflamatorio, estimulación de la circulación, estimulación de la resorción y la permeabilidad, efecto espasmolítico, efecto inmunomodulador, reducción del distrés, estimulación del estrés, y regulación de la homeostasis.

La relación dosis-efecto sigue preferiblemente el principio de una curva hipérbola. La mezcla se metaboliza rápidamente en el cuerpo tras completar con éxito su función de activación, de manera que no es posible una sobredosis aun para fumadores compulsivos. No se ha demostrado ningún desarrollo de resistencia en lo que respecta a agentes patógenos.

La mezcla contribuye a mejorar, eliminar y prevenir los efectos inducidos por las sustancias nocivas del humo del tabaco, como inflamaciones de mucosas, desórdenes regulatorios en los sistemas orgánicos de musculatura lisa (vasos sanguíneos, bronquios, esófago, vejiga, estómago, intestinos, etc.), desórdenes de la función miocárdica así como del sistema nervioso central y periférico La invención se explica a continuación con más detalle mediante ejemplos.

Modos de realización 1. Fabricación de la mezcla Ejemplo 1

Una línea celular diploide de epitelio renal bovino MDBK (ATCC-No. CCL 22) se añadió, en función de su tasa de proliferación 1:4, a DMEM con suero de ternera fetal (8%), y se incubó a 38ºC en frascos para cultivo. Cantidades superiores se cultivan mejor, una vez adaptadas las células, en frascos de cultivo tipo spinner o en fermentadores. El cultivo completa su crecimiento de forma óptima a los 3 - 4 días. El medio de cultivo se descarta y se sustituye por MEM o suero. Los cultivos celulares se incuban durante otros 5 - 7 días. Cuanto más prolongado es el tiempo de incubación, más disminuyen los nutrientes esenciales en el pool intracelular al tiempo que más se enriquece el MEM en mediadores y metabolitos finales de bajo peso molecular. La acumulación del metabolitos y la deficiencia intracelular de nutrientes esenciales supone eventualmente un factor de estrés para el cultivo celular, cada vez más viejo. El cultivo celular reacciona frente a esta situación sintetizando diversas "proteínas de estrés", que se van concentrando en la célula. Durante la fase de concentración los cultivos celulares son examinados al microscopio con regularidad. Una vez transcurrida la fase de concentración no deben observarse cambios citopáticos. La fase de concentración concluye basificando el MEM con NaOH hasta pH 10 y elevando la temperatura a 50ºC durante 60 minutos.

Como alternativa al cambio de pH también se ha demostrado efectivo el congelamiento de las células. Las células se congelan favorablemente a -20ºC. Una vez transcurrido dicho tiempo, las células muertas se pueden eliminar fácilmente de la superficie del cultivo sacudiendo los frascos.

El aumento de la temperatura y el cambio de pH no afectan la actividad biológica de la mezcla de moduladores.

Los detritos celulares y los componentes en forma de partículas se eliminan a continuación mediante filtración por etapas (<9 nm) del medio de conservación con los moduladores extracelulares e intracelulares. El filtrado obtenido contiene una mezcla de moduladores, libre en su mayor parte de componentes de membrana. El filtrado se puede conservar, sin pérdida de actividad, durante varias semanas a 4ºC, o durante al menos un año mediante congelación (a -20ºC o menos).

Las fracciones con una masa molar relativa de aprox. 10.000 [Dalton] en adelante se retienen mediante ultrafiltración con un dispositivo de filtrado habitual con membranas de tamaño de poro capaz de retener moléculas globulares. La fracción retenida contiene todas las sustancias extracelulares e intracelulares con una masa molar relativa, para proteínas globulares, de más de 10.000 [Dalton] así como partículas con diámetro inferior a 9 nm.

La mezcla polifuncional de sustancias activas de la invención, constituida por la fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10,000 Dalton así como por aminoácidos esenciales y no esenciales, se obtuvo a partir de la mezcla de proteínas mediante ultracentrifugación a lo largo de 24 horas (análogamente a DE 195 12 227 C1 con fecha 31.10.1996). Las fracciones con sustancias de peso molar hasta 10,000 Dalton se reconcentraron con un factor de 1000, y las sustancias contenidas se analizaron a continuación mediante espectroscopia de masas. El espectro obtenido evidenció un nivel particularmente alto en sustancias con pesos molares entre 200 y 6000 Dalton.

La mezcla polifuncional de sustancias activas así concentrada se puede conservar en condiciones estériles, sin pérdida de actividad, durante varias semanas a 4ºC, o durante al menos un año mediante congelación (a -20ºC o menos). La mezcla se puede liofilizar mediante procedimientos convencionales. La pureza, inocuidad y eficacia de la mezcla de moduladores según la invención se verifican mediante las correspondientes pruebas de control. Las verificaciones de pureza e inocuidad se realizan de acuerdo con los métodos establecidos en la Farmacopea Europea y/o la Farmacopea Alemana (10a Edición). La determinación de las proteínas se efectúa siguiendo protocolos estándar de electroforesis en gel de poliacrilamida ampliamente aceptados.

Pureza

1.: Prueba de esterilidad según Farmacopea Europea /Alemana

2.: Determinación del contenido en proteínas según el método de Lowry

3.: Separación y cuantificación de las principales proteínas mediante electroforesis de gel de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes.

Inocuidad

1.: Prueba de ausencia de pirógenos según Farmacopea Europea /Alemana

2.: Prueba de toxicidad aguda según Farmacopea Europea /Alemana

3.: Prueba de teratogenicidad según Farmacopea Europea /Alemana

La preparación típica es estéril, sin pirógenos, no tóxica y no teratogénica, y contiene unos 2-3 mg de proteína por ml.

Ejemplo 2

Fibroblastos de pollo, obtenidos mediante aislamiento convencional de células de embriones de pollo, se cultivaron en frascos de cultivo de la misma manera que en el Ejemplo 1. La concentración, cosecha, tratamiento y pruebas de identificación, inocuidad y eficacia se llevaron a cabo según el Ejemplo 1.

Se obtuvieron resultados substancialmente idénticos a los del Ejemplo 1.

Ejemplo 3

Una línea celular diploide de epitelio tubular porcino, de crecimiento limitado (Latzke, 1993) se cultivó de forma estacionaria de acuerdo con el Ejemplo 1. La concentración, cosecha, tratamiento y pruebas de identificación, inocuidad y eficacia se llevaron a cabo según el Ejemplo 1.

2. Ejemplos de aplicación Ejemplo 4

En una consulta privada de medicina alternativa se administró de forma voluntaria una única inhalación de la citada mezcla polifuncional de sustancias activas a 22 pacientes con infección aguda de las vías respiratorias. Los síntomas dejaron de detectarse al cabo de 24 horas. Por el contrario, el curso de la enfermad se prolongó durante 3-7 días para los pacientes (n=28) que presentaban idéntica sintomatología en el mismo momento pero que fueron tratados con agentes terapéuticos convencionales.

Ejemplo 5 Casos individuales

5.1: Bronconeumonía: Una paciente de 48 años que padecía desde hacía una semana una bronquitis y una bronconeumonía no diagnosticada fue tratada voluntariamente con dos inhalaciones por día de la mezcla polifuncional de sustancias activas. Las molestias disminuyeron tras las 2 primeras inhalaciones. Al cabo de una semana los síntomas habían desparecido casi por completo.

5.2: Bronquitis viral: Un paciente de 76 años padecía una bronquitis viral resistente a la terapia desde hacía unas 2 semanas, con ataques nocturnos severos de tos irritativa. La tos irritativa nocturna empezó a ceder tras la primera inhalación de la citada mezcla polifuncional n de sustancias activas; la bronquitis desapareció por completo tras dos inhalaciones.

5.3: Un paciente de 76 años había venido padeciendo durante años frecuentes hemorragias nasales (aparentemente de naturaleza alérgica). Las hemorragias nasales dejaron de aparecer tras ocho inhalaciones, dos veces al día, de la citada mezcla polifuncional n de sustancias activas. En la actualidad, el periodo de seguimiento es de 6 meses.

Ejemplo 6 Hiperfunción, tabaquismo, inhalación de sustancias activas

La eficacia de la citada mezcla polifuncional de sustancias activas se contrastó en 12 voluntarios mientras fumaban, por medio de un sistema de alarma de la función cardiaca de alta sensibilidad, basado en ECG (Yumatov Moscú). Los voluntarios fumaron un cigarrillo con la mezcla polifuncional de sustancias activas y un cigarrillo sin la misma. Al fumar un cigarrillo sin inhalación de la sustancia activa, el sistema de alarma de la función cardiaca emitió una señal de riesgo, señal que no se produjo al inhalarse conjuntamente el humo del cigarrillo con la sustancia activa atomizada.

Claims

1. Uso de una mezcla polifuncional de sustancias activas con efecto antiinflamatorio, espasmolítico y anti-estrés, para la fabricación de antagonistas de las sustancias nocivas del humo del tabaco, caracterizada porque comprende una fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10 000 Dalton y una fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales, y porque se obtiene de una mezcla multifactorial de inmunomoduladores, mediante

-: incubación a temperaturas ambientales típicas de la especie original, de 20 a 39ºC, en un intervalo de tiempo de 2 a 8 días,

-: seguida de lisis,

-: cosecha junto con el medio de conservación, y

-: separación de componentes celulares con una masa molar superior a 10 000 Dalton, mediante ultracentrifugación a lo largo de 24 horas, y

-: obtención de la fracción de péptidos específicos con pesos molares de hasta 10 000 Dalton y de la fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales.

2. Uso según la reivindicación 1, caracterizado porque se utiliza una fracción de péptidos específicos con pesos molares entre 200 y 6000 Dalton y/o una fracción con aminoácidos esenciales y no esenciales.

3. Uso según la reivindicación 1, caracterizado porque la mezcla usada contiene mezclas de péptidos reguladores de la homeostasis, con efecto sobre la musculatura lisa y reguladores del estrés, así como neuropéptidos.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la mezcla se utiliza en concentraciones reducidas, preferiblemente de 10^{-6} a 10^{-9} g/kg de peso corporal, y porque la mezcla surte su efecto principalmente en forma de una función desencadenante bioactiva.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la relación dosis-efecto sigue el principio de una curva hipérbola, lo que descarta una sobredosis.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la mezcla se utiliza en un filtro específico (boquilla específica) de artículo de tabaco (cigarrillo, puro, cigarro, pipa, etc.), y porque es incorporada en el artículo de tabaco durante la fabricación del mismo, siendo inhalada al fumar.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el uso en sí mismo no es adictivo ni presenta riesgos para la salud, ni merma el placer de fumar.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la mezcla polifuncional de sustancias activas se utiliza para aliviar, eliminar y prevenir los efectos de las sustancias nocivas del humo del tabaco, como

-: Inflamaciones de las mucosas

-: Desórdenes regulatorios

-: de las funciones cardíacas, así como

-: de las funciones del sistema nervioso central y periférico.

9. Filtros específicos para artículos de tabaco, caracterizados porque comprenden una mezcla polifuncional de sustancias activas según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con función protectora de la salud al fumar tabaco.