ES2263582T3

ES2263582T3 - Utilizacion del factor de crecimiento para prevenir o tratar cardiopatias isquemicas o accidentes cardiovasculares.

Info

Publication number: ES2263582T3
Application number: ES01902406T
Authority: ES
Inventors: Peter Carmeliet; Desire Collen
Original assignee: FLANDERS INTERUNIVERSITY INST; Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB; Desire Collen Research Foundation vzw
Current assignee: FLANDERS INTERUNIVERSITY INST; Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB; Desire Collen Research Foundation vzw
Priority date: 2000-02-04
Filing date: 2001-02-05
Publication date: 2006-12-16
Anticipated expiration: 2021-02-05
Also published as: PT1253935E; WO2001056593A3; WO2001056593A2; EP1253935B1; WO2001057181A2; JP2003521522A; AU2001230243A1; ATE324905T1; DK1253935T3; DE60119285D1; JP4969753B2; AU4643501A; DE60119285T2; EP1253935A2

Abstract

Utilización del factor de crecimiento placentario, un fragmento, un derivado o un homólogo del mismo que presenta por lo menos una identidad en la secuencia de aminoácidos del 50% con el factor de crecimiento placentario como principio activo en una mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable destinada a la realización de una composición farmacéutica para la reducción del tamaño de un infarto durante el tratamiento de una enfermedad isquémica en un mamífero.

Description

Utilización del factor de crecimiento placentario para prevenir o tratar cardiopatías isquémicas o accidentes cardiovasculares.

La presente invención se refiere a la prevención y el tratamiento de los accidentes cardiovasculares y las cardiopatías isquémicas, en particular el infarto cerebral, el infarto de miocardio agudo y la insuficiencia cardíaca crónica, mediante factores de crecimiento específicos. Más particularmente la presente invención se refiere a la utilización del factor de crecimiento métodos en composiciones farmacéuticas y procedimientos destinados a dicha prevención o tratamiento.

Antecedentes de la invención

Los accidentes cardiovasculares, definidos como un despertar súbito o la pérdida de conciencia, sensibilidad y movimientos voluntarios provocada por la ruptura o la obstrucción de una arteria cerebral, constituyen la tercera causa de fallecimientos en los EE.UU. En el mundo entero, los accidentes cardiovasculares constituyen la causa número uno de fallecimientos debido a su incidencia particularmente elevada en Asia. El infarto cerebral constituye la forma más común de accidente cardiovascular, siendo responsable de aproximadamente el 85% de todos los accidentes cardiovasculares, mientras que los derrames cerebrales (por ejemplo, intraparenquimatosos y subaracnoideos) suponen el 15%. Debido al aumento de la edad media de la población, el número de accidentes cardiovasculares se incrementa continuamente. Debido a que el cerebro resulta altamente vulnerable incluso a las isquemias breves y se recupera de un modo poco eficaz, la prevención primaria en la prevención de los accidentes cardiovasculares presenta el mayor potencial en la reducción de la incidencia de dicha enfermedad.

Los infartos cerebrales focales se producen cuando el flujo sanguíneo arterial hacia una región específica del cerebro se ve reducida por debajo de un determinado nivel crítico. La oclusión de una arteria cerebral produce un infarto cerebral agudo y unas regiones circundantes de isquemia incompleta (a las que a menudo se hace referencia como "penumbra") que presentan una disfunción - pero que resultan potencialmente recuperables. Las isquemias del miocardio, como resultado de una perfusión disminuida debido al estrechamiento crónico de los vasos sanguíneos, pueden producir una insuficiencia cardíaca fatal y constituyen una de las principales amenazas para la salud. Los infartos de miocardio agudos, desencadenados por la oclusión de una arteria coronaria, producen la necrosis celular al cabo de un período de unas horas. En ausencia de reflujo o de una perfusión suficiente, las regiones isquémicas cerebrales o miocárdicas sufren un deterioro metabólico progresivo que culmina en el infarto, mientras que el restablecimiento de la perfusión en la zona de penumbra del infarto cerebral o en las regiones de riesgo pero recuperables del miocardio puede mejorar los daños tisulares.

La perfusión aumentada en la que intervienen factores de crecimiento de la zona de penumbra cerebral o de las regiones de riesgo del miocardio de pacientes que padecen episodios isquémicos, tanto incrementando la vasodilatación o la angiogénesis (la formación de vasos endoteliales), puede resultar de gran valor terapéutico según Isner et al. en J. Clin. Invest. (1999) 103(9): 1231-6 pero aún permanecen muchas preguntas sin responder en este sentido, por ejemplo cuál es el factor de crecimiento adecuado o qué combinación de factores de crecimiento se ha de seleccionar y cuál es la vía de administración que resulta eficaz y al mismo tiempo inocua para dicho propósito. Además, una pregunta pendiente consiste en si la formación de nuevos vasos endoteliales (es decir, la angiogénesis) resulta por sí sola suficiente para estimular una perfusión tisular funcional viable. De hecho, el recubrimiento de los vasos endoteliales por parte de células musculares lisas (es decir, la arteriogénesis) proporciona control vasomotor, resistencia e integridad estructural y hace que los nuevos vasos se vuelvan resistentes a la regresión.

Los capilares sanguíneos están formados por células endoteliales y pericitos, que contienen toda la información genética requerida para formar conductos, ramificaciones y todas las redes capilares completas. Las moléculas angiogénicas específicas pueden iniciar dicho proceso. Se han purificado diversos polipéptidos que estimulan la angiogénesis y se han caracterizado en relación con sus propiedades moleculares, bioquímicas y biológicas, tal como han publicado Klagsbrun et al en Ann. Rev. Physiol. (1991) 53: 217-239 y Folkman et al. en J. Biol. Chem. (1992) 267: 10931-4. Un factor que pueda estimular la angiogénesis y que sea altamente específico como mitógeno con respecto a las células endoteliales, se denomina factor de crecimiento del endotelio vascular (al que de ahora en adelante se hará referencia como VEGF) según Ferrara et al., en J. Cell. Biochem. (1991) 47: 211-217. El VEGF se conoce también como vasculotropina, Connolly et al. describen también en J. Biol. Chem. (1989) 264: 20017-20024, en J. Clin. Invest. (1989) 84: 1470-8 y en J. Cell. Biochem. (1991) 47: 219-223 un factor de permeabilidad vascular que estimula la división in vitro de las células endoteliales vasculares y provoca el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos cuando se administran en la cicatrización de injertos óseos en conejos o en córneas de ratas. El término factor de permeabilidad vascular (abreviando, VPF) se adoptó debido al aumento en las pérdidas de fluidos a partir de los vasos sanguíneos a continuación de una inyección intradérmica y parece ser que designa la misma sustancia que el VEGF. Se ha caracterizado el gen del VEGF murino y se ha analizado su pauta de expresión en la embriogenia. Se observó una expresión persistente del VEGF en las células epiteliales adyacentes al endotelio perforado, por ejemplo en el plexo cloroideo y en los glomérulos renales, que concuerda con su función como regulador multifuncional de la proliferación y la diferenciación de las células endoteliales tal como dan a conocer Breier et al., en Development (1992) 114: 521-531. El VEGF comparte aproximadamente un 22% de identidad de secuencia, comprendiendo la conservación completa de ocho residuos de cisteína, según Leung et al., en Science (1989) 246: 1306-9, con el factor de crecimiento obtenido a partir de trombocitos humanos PDGF, uno de los principales factores de crecimiento del tejido conjuntivo. Alternativamente, se han identificado ARNm de los que se han eliminado los intrones tanto para el VEGF como para el PDGF y dichos productos de los que se han eliminado los intrones difieren en su actividad biológica y en su especificidad de enlace con los receptores. El VEGF está formado por una potente proteína vaso activa que se ha detectado y se ha purificado a partir de medios acondicionados mediante varias estirpes celulares que comprenden células de la pituitaria, tales como células foliculares de la pituitaria bovina (tal como dan a conocer Ferrara et al., en Biochem. Biophys. Res. Comm, (1989) 161: 851-858 y Gospodarowicz et al. en Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1989) 86: 7311-5), células de glioma de rata (tal como dan a conocer Conn et al. en Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87: 1323-1327) y diversas estirpes celulares tumorales. De un modo similar, Levy et al., en Growth Factors (1989) 2: 9-19 han descrito un factor de crecimiento endotelial aislado a partir de la estirpe celular NB41 de neuroblastoma de ratón con una masa molecular sin reducir de 43 a 51 kDa.

El VEGF se caracterizó como un dímero catiónico glucosilado de 46 kDa formado por dos subunidades cada una de las cuales presenta una masa molecular aparente de 23 kDa. Se inactiva con agentes reductores del sulfhidrilo, es resistente a un pH ácido y al calor, y se enlaza con la heparina inmovilizada. El VEGF presenta cuatro formas distintas de 121, 165, 189 y 206 aminoácidos debido a la eliminación alternativa de intrones de ARNm. Los distintos tipos de VEGF se codifican mediante el mismo gen. El análisis de clones genómicos en la supuesta zona de corte y empalme del ARNm presenta también una estructura de intrones y exones coherente con la eliminación alternativa de intrones. El tipo VEGF 165 es la forma molecular que se encuentra de un modo predominante en las células y tejidos normales. Los tipos VEGF 121 y el VEGF 165 están formados por proteínas solubles capaces de provocar la angiogénesis mientras que el tipo VEGF 189 y el tipo VEGF 206 se encuentran en su mayor parte asociados a las células. Todas las isoformas del VEGF resultan biológicamente activas, por ejemplo, cuando se aplica por vía intradérmica cada uno de los tipos puede provocar la extravasación del azul de Evans. Sin embargo, las isoformas del VEGF presentan unas propiedades bioquímicas distintas que pueden modular posiblemente las propiedades de señalización de los factores de crecimiento. Los tipos VEGF 165, VEGF 189 y VEGF 206 comprenden ocho residuos adicionales de cisteína en la región del extremo carboxílico. La secuencia del extremo amínico del VEGF se ve precedida por 26 aminoácidos que corresponden a una secuencia de señal típica. La proteína madura se genera directamente siguiendo la escisión de la secuencia de señal sin que intervenga prosecuencia alguna. Otros polipéptidos de VEGF de la familia de los PDGF de factores de crecimiento se han dado a conocer en la patente US nº 5.840.693. En la patente US nº 6.130.071 se han dado a conocer unas variantes purificadas y aisladas de VEGF-C, con la eliminación de la cisteína, que se unen a un receptor de la VEGF tirosina cinasa.

Del mismo modo que otras citocinas, el VEGF presenta unos efectos diversos que dependen del contexto biológico específico en el que se encuentra. La expresión del VEGF es elevada en tejidos vascularizados (por ejemplo, pulmón, corazón, placenta y tumores sólidos) que se correlaciona con la angiogénesis tanto temporalmente como en el espacio. Se ha demostrado que el VEGF contribuye directamente a la provocación de la angiogénesis in vivo activando la proliferación de las células endoteliales durante el desarrollo embrionario normal sin cicatrización, regeneración tisular y reorganización. Por lo tanto, se ha propuesto el VEGF para utilizar en la activación de las reparaciones tisulares vasculares, tal como se da a conocer en el documento EP-A-0.506.477. El VEGF también se ve implicado en procesos patológicos tales como en la proliferación y la metástasis de tumores sólidos y trastornos retinales provocados por la isquemia tales como los que se dan a conocer en la patente US nº 6.144.320. La expresión del VEGF se desencadena mediante hipoxia de modo que la proliferación de las células endoteliales y la angiogénesis se ven especialmente estimuladas en las zonas isquémicas. Finalmente, la patente US nº 6.040.157 da a conocer unos polipéptidos que se han identificado supuestamente como nuevos factores de crecimiento endotelial basándose en su homología de la secuencia de aminoácidos con el VEGF humano. El anterior documento da conocer el restablecimiento de determinados parámetros del miembro isquémico al utilizar una proteína VEGF2. Sin embargo, Hariawala et al., en J. Surg. Res. (1996) 63(1): 77-82 da a conocer que la administración sistémica de VEGF, en dosis elevadas, durante períodos cortos de tiempo, aumenta el flujo sanguíneo miocárdico pero provoca hipotensión en corazones porcinos.

El factor de crecimiento placentario (al que de ahora en adelante se hará referencia como PlGF) fue dado a conocer por Maglione et al., en Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991) 88(20): 9667-71 como una proteína relacionada con el factor de permeabilidad vascular. La patente US nº 5.919.899 da a conocer unas secuencias de nucleótidos que codifican una proteína, denominada PlGF, que puede utilizarse en el tratamiento de trastornos inflamatorios y en el tratamiento de heridas o tejidos tras las operaciones quirúrgicas, trasplantes, quemaduras, úlceras, etc. Se han descrito formas solubles que no enlazan con la heparina y formas que enlazan con la heparina, constituidas por 131 y 152 aminoácidos respectivamente, para el PlGF que se expresa en la placenta, en tumores trofoblásticos y en células endoteliales humanas cultivadas, según la patente US nº 5.776.755.

Un problema a resolver por la presente invención se refiere a proporcionar unas composiciones farmacéuticas y unos métodos destinados a mejorar la perfusión de la zona de penumbra cerebral o la perfusión de las zonas de riesgo del miocardio de pacientes que padecen trastornos isquémicos, de los que se demostrará que resultan útiles en la prevención y en el tratamiento de los accidentes cardiovasculares y de las enfermedades isquémicas, en particular el infarto cerebral, el infarto de miocardio agudo y la insuficiencia cardíaca crónica. Otro problema a resolver mediante la presente invención se refiere a proporcionar unas composiciones farmacéuticas y unos métodos destinados a reducir o impedir la expansión del infarto cuando se produce un infarto cerebral, resultando útiles en la prevención y en el tratamiento de dicha enfermedad. Otro problema a resolver mediante la presente invención se refiere a proporcionar unas composiciones farmacéuticas y unos métodos destinados a mejorar la revascularización de los infartos de miocardio agudos, resultando útiles en la prevención y en el tratamiento de dicho trastorno. Otro problema a resolver mediante la presente invención se refiere a proporcionar una vía segura y efectiva de administración de composiciones farmacéuticas que pueda, principalmente con respecto a la zona de penumbra cerebral o miocárdica, de mejorar la perfusión o reducir o impedir la expansión del infarto o bien aumentar la revascularización de los infartos. Otro problema más a resolver mediante la presente invención se refiere a proporcionar unos medios efectivos para prevenir y tratar los accidentes cardiovasculares y las enfermedades isquémicas, en particular el infarto cerebral, el infarto de miocardio agudo y la insuficiencia cardíaca crónica, que carezca de efectos secundarios tales como la hipotensión.

Sumario de la invención

Los objetivos de la presente invención mencionados anteriormente se han alcanzado con éxito e inesperadamente mediante la utilización adecuada del factor de crecimiento placentario o un fragmento, derivado u homólogo del mismo tal como se da a conocer en la presente memoria.

En un aspecto, la presente invención se refiere a la utilización del factor de crecimiento placentario o un fragmento, derivado u homólogo del mismo en el tratamiento de enfermedades tales como los accidentes cardiovasculares (comprendiendo los accidentes cardiovasculares hemorrágicos) y las enfermedades isquémicas en los mamíferos.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a la utilización de una composición que comprende el factor de crecimiento placentario o un fragmento, derivado u homólogo del mismo en la síntesis de un medicamento. Más particularmente, la invención se refiere a la utilización de un factor de crecimiento placentario, un fragmento, un derivado o un homólogo del mismo que presente por lo menos una identidad en la secuencia de aminoácidos del 50% con el factor de crecimiento placentario como principio activo en una mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable destinada a la realización de una composición farmacéutica para la reducción del tamaño del infarto durante el tratamiento de una enfermedad isquémica en un mamífero. Según una forma de realización específica, la composición farmacéutica que comprende el factor de crecimiento placentario es apta para utilizar en el tratamiento de enfermedades isquémicas en un mamífero que presenta riesgo de efectos secundarios adversos, tales como la hipotensión. Otras formas de realización particulares de la invención se refieren a la utilización del factor de crecimiento placentario en la síntesis de una composición farmacéutica destinada a la reducción del tamaño del infarto en el tratamiento de un accidente cardiovascular o un infarto de miocardio agudo. Según otra forma de realización particular la composición farmacéutica no presenta efectos secundarios hemodinámicos sistémicos.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a unas composiciones farmacéuticas destinadas a la prevención o el tratamiento de accidentes cardiovasculares o enfermedades isquémicas en mamíferos, que comprenden el factor de crecimiento placentario, un fragmento, un derivado o un homólogo del mismo como principio activo en una mezcla con por lo menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

La presente invención se refiere además a un método de tratamiento o prevención de un accidente cardiovascular (comprendiendo los accidentes cardiovasculares hemorrágicos) o una enfermedad isquémica en un mamífero, que comprende la administración al mamífero que necesita dicho tratamiento o prevención de una cantidad terapéuticamente eficaz de factor de crecimiento placentario, un fragmento, un derivado o un homólogo del mismo.

Definiciones

En todos los diversos aspectos de la presente invención, los términos "accidente cardiovascular" y "enfermedad isquémica" presentan los significados y definiciones tal como se han proporcionado en la sección Antecedentes de la invención. Los ejemplos de enfermedades isquémicas comprendidas en el campo de la presente invención comprenden, entre otros:

-: el ictus o infarto cerebral focal,

-: el infarto de miocardio agudo o isquemia coronaria,

-: la insuficiencia coronaria isquémica crónica,

-: el trastorno isquémico de un órgano distinto al miocardio o a una región cerebral, por ejemplo un miembro periférico (tal como una isquemia en una extremidad o una enfermedad arterial periférica).

En todos los diversos aspectos de la presente invención, el término "mamífero" se considera en su significado común y comprende principalmente los seres humanos, los equinos, los felinos, los caninos, los porcinos, los bovinos, los ovinos y similares.

El término "homólogo" tal como se utiliza en la presente memoria en relación con los factores de crecimiento de la presente invención se refiere a moléculas que presentan por lo menos el 50%, más preferentemente por lo menos el 70% y más preferentemente todavía por lo menos el 90% de identidad de la secuencia de aminoácidos con el factor de crecimiento pertinente. En referencia al factor de crecimiento del endotelio vascular, incluye tanto el dímero como las subunidades del mismo.

El término "fragmento" tal como se utiliza en la presente memoria en relación con los factores de crecimiento de la presente invención se refiere a moléculas que comprenden una zona activa del factor de crecimiento, es decir, la parte que resulta que pueda mejorar funcionalmente la perfusión o de reducir o impedir la expansión del infarto o bien mejorar la revascularización de los infartos, y que puede haber perdido un cierto número de propiedades no esenciales (en relación con la angiogénesis y/o la arteriogénesis) del factor de crecimiento original. Preferentemente el fragmento utilizado en la presente invención está formado por un fragmento por el fragmento angiogénico y/o arteriogénico del factor de crecimiento original.

El término "derivado" tal como se utiliza en la presente memoria en relación con los factores de crecimiento de la presente invención se refiere a moléculas que comprenden por lo menos la zona activa del factor de crecimiento (tal como se ha definido anteriormente en la presente memoria) y una zona complementaria que difiere de la presente en el factor de crecimiento natural, por ejemplo mediante manipulaciones posteriores tales como la introducción de mutaciones.

El término "factor de crecimiento del endotelio vascular" tal como se utiliza en la presente memoria, tanto si presenta un origen humano como animal, se refiere a todas las isoformas del mismo tal como se han dado a conocer en la sección Antecedentes de la invención. Sin embargo, se prefiere la isoforma de 165 aminoácidos. El término "factor de crecimiento placentario" tal como se utiliza en la presente memoria, tanto si presenta un origen humano como animal, se refiere a todas las isoformas del mismo, principalmente las formas de 131 y 152 aminoácidos dadas a conocer anteriormente.

Descripción detallada de la invención

En los métodos de tratamiento o de prevención que constituyen los diversos aspectos de la presente invención, la administración del/de los principio(s) activo(s) puede ser prolongada o intermitente, en función de la situación médica y de las necesidades del mamífero. El/Los principio(s) activo(s) pueden proporcionarse al paciente mediante la administración oral, intranasal, subcutánea, intramuscular, intradérmica, intravenosa, intraarterial o parenteral o mediante cateterismo, preferentemente subcutáneo. Sin embargo, el modo más preferido de administración es la administración subcutánea constante prolongada tal como se realiza mediante una bomba osmótica. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" tal como se utiliza en la presente memoria significa una cantidad que pueda mejorar la perfusión o reducir o impedir la expansión del infarto o bien mejorar la revascularización de los infartos, y más preferentemente una cantidad comprendida entre aproximadamente 2 y 2.000 \mug por kg de peso corporal del mamífero a tratar y por semana para cada principio activo.

En las composiciones farmacéuticas que constituyen los diversos aspectos de la presente invención, el término "excipiente farmacéuticamente aceptable" significa cualquier material o sustancia en la que el/los principio(s) activo(s) se formulan a fin de facilitar su aplicación o diseminación, por ejemplo disolviendo, dispersando o difundiendo dicho ingrediente, y/o para facilitar su almacenamiento, transporte o manipulación sin perjudicar su eficacia. El excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser un sólido o un líquido o un gas que se ha comprimido para formar un líquido, es decir, las composiciones de la presente invención pueden utilizarse adecuadamente como concentrados, emulsiones, disoluciones, granulados, polvos, pulverizaciones, aerosoles, o microgránulos. Sin embargo, resulta mucho más preferida una fórmula apta para su utilización subcutánea.

Los excipientes farmacéuticamente adecuados para utilizar en las presentes composiciones resultan bien conocidos por los expertos en la materia y no existe restricción particular alguna en su selección en la invención. Pueden también comprender aditivos tales como agentes humectantes, agentes dispersantes, películas adherentes, adhesivos, emulgentes, disolventes, agentes de recubrimiento, agentes antibióticos y agentes antifúngicos (por ejemplo el fenol, el ácido sórbico, el clorobutanol), agentes isotónicos (tales como los glúcidos o el cloruro sódico) y similares, siempre que los mismos sean compatibles con la práctica farmacéutica, es decir, excipientes y aditivos que no ocasionen un daño permanente en los mamíferos. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden prepararse de cualquier modo conocido, por ejemplo mediante la mezcla homogénea, el recubrimiento y/o trituración de los principios activos, mediante un procedimiento de una única etapa o de múltiples etapas, con el material excipiente seleccionado y, cuando resulte adecuado, los otros aditivos tales como agentes tensoactivos, pueden prepararse también por micronización, por ejemplo, a fin de obtenerlos en la forma de microsferas que normalmente presentan un diámetro comprendido aproximadamente entre 1 y 10 \mum, principalmente en la síntesis de microcápsulas destinadas a la liberación controlada o sostenida de los principios activos.

Los agentes tensoactivos aptos para utilizar en las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden los materiales no iónicos, catiónicos y/o aniónicos que presenten unas buenas propiedades emulsionantes, dispersantes y/o humectantes. Los agentes tensoactivos aniónicos aptos comprenden tanto jabones hidrosolubles como agentes tensoactivos sintéticos hidrosolubles. Los jabones aptos comprenden las sales metálicas alcalinas o alcalinotérreas, las sales amónicas sin sustituir o sustituidas de ácidos grasos de peso molecular elevado (C_{10} - C_{22}), por ejemplo las sales sódicas o potásicas del ácido oleico o del esteárico, o de mezclas de ácidos grasos naturales que se pueden obtener a partir del aceite de coco o del aceite de sebo. Los agentes tensoactivos sintéticos comprenden las sales sódicas o cálcicas de ácidos poliacrílicos; los sulfonatos y sulfatos grasos; los derivados del bencimidazol sulfonado y los alquilarilsulfonatos. Los sulfonatos o sulfatos grasos se encuentran normalmente en la forma de sales alcalinas o alcalinotérreas, las sales amónicas sin sustituir o las sales amónicas sustituidas con un radical alquilo o acilo que presente un número de átomos de carbono comprendido entre 8 y 22, por ejemplo la sal sódica o cálcica del ácido lignosulfónico o del ácido dodecilsulfónico o una mezcla de sulfatos alcohólicos grasos obtenidos a partir de ácidos grasos naturales, sales metálicas alcalinas o alcalinotérreas de ésteres del ácido sulfúrico o el ácido sulfónico (tales como el laurilsulfato de sodio) y ácidos sulfónicos de aductos de alcohol graso y óxido de etileno. Los derivados del bencimidazol sulfonado aptos preferentemente presentan un número de átomos de carbono comprendido entre 8 y 22. Los ejemplos de alquilarilsulfonatos comprenden las sales sódicas, cálcicas o alcanolamínicas del ácido sulfónico o del ácido dibutilnaftalenosulfónico o un producto de condensación entre el ácido naftalenosulfónico y formaldehído. También resultan aptos los fosfatos correspondientes, por ejemplo, las sales del éster del ácido fosfórico y un aducto de p-nonilfenol con óxido de etileno y/o propileno, o fosfolípidos. Los fosfolípidos aptos para dicho propósito comprenden los fosfolípidos naturales (que se originan a partir de células animales o vegetales) o sintéticos del tipo de la cefalina o de la lecitina tal como por ejemplo la fosfatidiletanolamina, la fosfatidilserina, la fosfatidilglicerina, la lisolecitina, la cardiolipina, la dioctanilfosfatidilcolina, la dipalmitoilfosfatidilcolina y mezclas de los mismos.

Los agentes tensoactivos aptos comprenden derivados polietoxilados y polipropoxilados de alquilfenoles, alcoholes grasos, ácidos grasos, aminas alifáticas o amidas que comprenden por lo menos 12 átomos de carbono en la molécula, alquilarenosulfonatos y dialquilsulfusuccinatos tal como derivados del éter poliglicólico de alcoholes alifáticos o cicloalifáticos, ácidos grasos saturados o insaturados y alquilfenoles, comprendiendo dichos derivados preferentemente entre 3 y 10 grupos éter glicólico y entre 8 y 20 átomos de carbono en la parte hidrocarbonada (alifática) y entre 6 y 18 átomos de carbono en la parte alquilo del alquilfenol. Otros agentes tensoactivos no iónicos aptos comprenden aductos hidrosolubles de óxido de polietileno con polipropilenglicol, etilenodiamino-polipropilenglicol que comprende entre 1 y 10 átomos de carbono en la cadena alquilo, comprendiendo los aductos entre 20 y 250 grupos éter de etilenglicol y/o entre 10 y 100 grupos éter de propilenglicol. Dichos compuestos normalmente comprenden entre 1 y 5 unidades de etilenglicol por unidad de propilenglicol. Unos ejemplos representativos de agentes tensoactivos no iónicos los constituyen el nonilfenolpolietoxietanol, los ésteres poliglicólicos del aceite de ricino, los aductos de óxido de polipropileno y de polietileno, el tributilfeno-xipolietoxietanol, el polietilénglicol (macrogol) y el octilfenoxipo-lietoxietanol. Los ésteres de ácidos grasos del polietilensorbitán (tal como el trioleato de polioxietilensorbitán), la glicerina, el sorbitán, la sacarosa y pentaeritrita son también agentes tensoactivos no iónicos aptos.

Los agentes tensoactivos catiónicos aptos comprenden las sales amónicas cuaternarias, preferentemente los haluros que presentan cuatro radicales hidrocarburo opcionalmente sustituidos con halo, fenilo, fenilo o hidroxi sustituidos; por ejemplo las sales amónicas cuaternarias que contienen como sustituyente del N por lo menos un radical alquilo C_{8} - C_{22} (por ejemplo cetilo, laurilo, palmitilo, miristilo, oleílo y similares) y, como sustituyentes adicionales, radicales alquilo de bajo peso molecular sin sustituir o halogenados, bencilos y/o hidroxialquilos de bajo peso molecular.

Puede encontrarse una descripción más detallada de agentes tensoactivos para el presente propósito por ejemplo en "McCutcheon's Detergents and Emulsifiers Annual" (MC Publishing Crop, Ridgewood, New Jersey, 1981), "Tensid-Taschenbuch", 2a ed. (Hanser Verlag, Viena, 1981) y "Encyclopaedia of Surfactants" (Chemical Publishing Co., New York, 1981).

Pueden añadirse ingredientes adicionales a fin de controlar la duración de la acción del principio activo de la composición farmacéutica de la invención. Las composiciones de liberación controlada pueden realizarse por lo tanto seleccionando excipientes poliméricos aptos tales como por ejemplo poliésteres, poliaminoácidos, polivinil pirrolidona (povidona), copolímeros de etileno-acetato de vinilo, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, sulfato de protamina y similares. El índice de liberación del fármaco y la duración de su acción también puede controlarse incorporando el principio activo en partículas, por ejemplo, microcápsulas de una sustancia polimérica tal como los hidrogeles, el ácido poliláctico, la hidroximetilcelulosa, el polimetacrilato de metilo y otros de los polímeros descritos anteriormente. Dichos métodos comprenden los sistemas de administración de fármacos coloidales tales como los liposomas, las microsferas, las microemulsiones, las nanopartículas, las nanocápsulas, etc. En función de la vía de administración, la composición farmacéutica puede requerir también un recubrimiento protector.

Las formas farmacéuticas aptas para utilizar como inyectables comprenden las disoluciones acuosas estériles o dispersiones y polvos estériles destinados a la preparación improvisada de las mismas. Los excipientes habituales para dicho propósito comprenden por lo tanto soluciones amortiguadoras del pH biocompatibles, etanol, glicerina, propilenglicol, macrogol y similares y mezclas de los mismos.

Sin limitarse a la teoría, se cree, basándose en las siguientes pruebas experimentales, que a pesar de que la ausencia de ambos alelos PlGF no provoca defectos vasculares detectables, sin embargo se requiere el factor de crecimiento placentario (PlGF) para intervenir en el efecto del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) sobre la proliferación, migración y supervivencia de las células endoteliales y musculares lisas. Además, parece ser que la ausencia de PlGF disminuye significativamente la angiogénesis y la arteriogénesis en las que interviene el VEGF durante diversos trastornos patológicos in vivo. Por lo tanto, el PlGF resulta ser un agente terapéutico alternativo atractivo para el VEGF, que únicamente estimula el crecimiento vascular en las zonas angiogénicas con una expresión aumentada del VEGF, sin ocasionar efectos sistémicos tales como la hipotensión o un edema generalizado.

Los siguientes datos experimentarles demostrarán que el tamaño del infarto cerebral provocado por la oclusión de la arteria cerebral media (a la que de ahora en adelante se hará referencia como MCA) en ratones se reduce notablemente mediante la administración subcutánea constante de PlGF (que puede obtenerse en distintas fuentes tales como R&D, Abingdon, Reino Unido; Pharma Biothecnologie, Hannover, Alemania; ICN, Costa Mesa, California; y Geymonat SpA, Anagni, Italia), VEGF (por ejemplo rVEGF_{165} puede obtenerse -entre otros- en R&D, Abingdon, RU; Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, California; Pharma Biothecnologie, Hannover, Alemania; ICN, Costa Mesa, California; Endogen, Wobum, Massachussets; Harlan Sera Laboratories, Leicester Shire, Reino Unido; Peprotech, Rocky Hill, Nueva Jersey), o preferentemente ambos en combinación mediante una minibomba osmótica. Además, la revascularización del miocardio isquémico tras la oclusión de la arteria coronaria izquierda(a la que de ahora en adelante se hará referencia como LCA) se ve también aumentada significativamente mediante la administración subcutánea constante de PlGF, VEGF (rVEGF_{185}) o ambos, mediante una minibomba osmótica. Se descubrió que la administración prolongada de pequeñas cantidades de PlGF resultaba por lo menos tan efectiva como el VEGF en la reducción del tamaño de la zona del infarto. Además, la coadministración del VEGF con el PlGF resultó más eficaz de lo que se esperaba para cada factor de crecimiento por separado. Dichos datos demuestran que el VEGF, preferentemente el PlGF o ambos en combinación, pueden utilizarse satisfactoriamente en el tratamiento y la prevención de los accidentes cardiovasculares y las enfermedades isquémicas, en particular, el infarto cerebral y el infarto de miocardio agudo, sin someter el paciente a riesgo alguno de efectos secundarios adversos.

Algunos de los siguientes ejemplos se presentan únicamente con carácter de referencia y no caen dentro del alcance de las reivindicaciones.

Ejemplo 1 Protección contra la expansión del infarto cerebral mediante la administración prolongada de VEGF, PlGF o una combinación de ambos

Los experimentos en animales se realizaron según los principios generales de la American Physiological Society ("Sociedad Estadounidense de Fisiología") y el International Committee on Thrombosis and Halmostasis ("Comité Internacional sobre la Trombosis y la Hemostasis") tal como publicó A. Giles en Thromb. Haemost. (1987) 58: 1078-1084. La isquemia cerebral focal se produjo mediante la oclusión continua de la MCA según Welsh et al., en J. Neurochem. (1987) 49: 846-51. Brevemente, los ratones de cada sexo con un peso comprendido entre 20 y 30 g, con un contexto genético de un 50% de tipo suizo/50% 129 se anestesiaron mediante una inyección intraperitoneal de cetamina (75 mg/ml, disponible en Apharmo, Amhem, Holanda) y xilazina (5 mg/ml, disponible en Bayer, Leverkusen, Alemania). Se administró atropina (1 mg/día, disponible en Federa, Bruselas, Bélgica) por vía intramuscular y se mantuvo la temperatura corporal conservando los animales en una almohadilla calefactora. Se realizó una incisión en forma de "U" entre la oreja izquierda y el ojo izquierdo. Se procedió a la transección de los segmentos superior y posterior del músculo temporal y se dejó al descubierto el cráneo mediante la retracción del músculo temporal. Se realizó un pequeño orificio (de un diámetro comprendido entre 1 y 2 mm) en la zona por encima de la MCA con un trépano manual, con superfusión de disolución salina para evitar daños producidos por el calor. Se extrajeron las meninges con un fórceps y se procedió a la oclusión de la MCA mediante la ligación con hilo de nailon 10-0 (disponible en Ethylon, Neuilly, Francia) y se realizó la transección distal con respecto al punto de ligación. Finalmente, se suturaron de nuevo el músculo y la piel en su lugar. Se dejó que se recuperaran los animales y se los devolvió a sus jaulas, tratándose los ratones infartados con disolución salina (como control), PlGF (715 ng/día), VEGF (425 ng/día) o la combinación de ambos, utilizando una minibomba osmótica (Alzet tipo 2001, Broekman Institute, Someren, Holanda), implantándose por vía subcutánea en la espalda, de modo que los factores de crecimiento se administraron constantemente durante un período de 7 días. Después de dicho período, se sacrificaron los animales mediante una sobredosis de Nembutal (500 mg/kg, disponible en Abbott Laboratories, North Chicago, Illinois), se realizó la perfusión fija vía el ventrículo izquierdo con formalina al 4% en una solución salina amortiguadora de fosfato, y se decapitaron. Se extrajo el cerebro, se preparó histológicamente tal como describen P. Carmeliet et al., en Nature (1996) 380: 435-439, Nature (1996) 383: 73-75 y Nature (1998) 394: 485-490 y se realizó la inmunotinción para la proteína-2 asociada a microtúbulos (a 1 que de ahora en adelante se hará referencia como MAP-2), una proteína estructural que desaparece rápidamente cuando se produce una situación irreversible de muerte por isquemia. Se realizó el recuento morfométrico de las zonas infartadas MAP-2 negativas a lo largo del cerebro a unas distancias de 420 \mum utilizando un sistema dedicado de análisis de imágenes (Quantimed 6000, disponible en Leica). El volumen infartado se definió como la suma de las zonas sin teñir de las secciones multiplicadas por su espesor. Los datos de dichos experimentos, presentados en la tabla 1 a continuación, comprenden el valor de la media \pm el valor del error estándar de la media (SEM) del tamaño del infarto expresadas en mm^{3} y se utilizan como sistema para analizar el infarto cerebral, comprendiendo el número de observaciones indicadas entre paréntesis y en las que un asterisco significa p = 0,001 con respecto al control. El nivel de significación de las diferencias se determinó mediante la prueba t de Student para datos
independientes.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 1

Grupo de tratamiento	Tamaño del infarto
Control	12 \pm 1,7 ( 7)
PlGF + VEGF	4,6 \pm 1,3 (8)
PlGF	8,0 \pm 2,9 (4)
VEGF	7,6 \pm 2,5 (3)

No se observaron hemorragias cerebrales en ninguno de los ratones. Tomados en conjunto, dichos datos indican que el VEGF y el PlGF y, todavía más su combinación, resultan eficaces en la supresión de la expansión de la zona de penumbra en un infarto.

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2 Modelo de infarto de miocardio agudo murino

Se provocó el infarto de miocardio mediante la ligación permanente de la arteria coronaria izquierda (LCA) tal como describen Lutgens et al., en Cardiovasc. Res. (1999) 41: 586-59. Brevemente, se anestesiaron los animales mediante la inyección intraperitoneal de 60 mg/kg de pentobarbital. Los animales se dispusieron en decúbito supino, se intubaron con una aguja 21 Gauge y se dispusieron en respiración y presión positivas con un volumen corriente de 1,0 ml con una frecuencia respiratoria de 100/min, utilizando un Rodent Ventilator ("respirador para roedores"), modelo 683 (disponible en Harvard Apparatus Inc. Holliston, Massachussets). Se realizó una incisión transversal en la piel por encima del tercer espacio intercostal y una toracotomía izquierda entre las costillas tercera y cuarta, y se realizó un nudo de hilo 6.0 alrededor de LCA aproximadamente a 1 mm de distancia de la punta de la aurícula izquierda. Se hizo girar ligeramente el animal hacia la derecha y se orientó el corazón para una exposición mejor del ventrículo izquierdo. Tras cerrar la cavidad torácica y realizarse la re-expansión de los pulmones utilizando una presión positiva al final de la fase espiratoria, se dejó que los ratones se recuperasen en una almohadilla
calefactora.

Inmediatamente después de producir el infarto de miocardio, se implantó por vía subcutánea una minibomba osmótica (Alzet tipo 2001, Broekman Institute, Someren, Holanda) en la espalda de los ratones, administrando VEGF, PlGF o ambos, durante 7 días. Las heridas quirúrgicas cicatrizaron sin infecciones aparentes. La mortalidad perioperatoria resultó del 10%.

Transcurridos 7 días tras la intervención quirúrgica, los ratones infartados se anestesiaron tal como se ha descrito anteriormente, se realizó la perfusión con disolución salina al 0,9% y se fijó la perfusión fija con paraformaldehído al 1% en una disolución salina amortiguadora de fosfato 0,1 M (pH 7,0) vía la aorta abdominal a presión fisiológica. Antes de la fijación de la perfusión, se inyectaron los corazones con 100 \mul de cloruro de cadmio 0,1 M a fin de detener el corazón en posición de reposo. Los corazones fijados se disecaron y se prepararon histológicamente tal como describieron Heymans et al., en Nat. Med. (1999) 5(10):1135-1142.

Se utilizaron cortes con un espesor de 6 \mum que se tiñeron con hematoxilina-eosina. Las células endoteliales se tiñeron para la trombomodulina (anticuerpos de trombomodulina obtenidos en la Universidad de Harvard, Boston, Massachussets), mientras que las células musculares lisas se tiñeron para la \alpha-actina del músculo liso (Sigma), tal como describieron Heymans et al. (citado anteriormente). Se realizó el recuento morfométrico del número de vasos por infarto utilizando un sistema de análisis de imágenes Quantimet Q600 (disponible en Leica, Bruselas,
Bélgica).

Ejemplo 3 Revascularización mejorada de infartos de miocardio agudos mediante la administración prolongada de VEGF, PlGF o una combinación de ambos en ratones

Se analizó el efecto terapéutico del VEGF y del PlGF administrando dichos factores de crecimiento constantemente durante 7 días mediante el método descrito en el ejemplo 2. Los resultados de dichos análisis se presentan en las tablas 2 y 3 a continuación, en las que:

-: la tabla 2 proporciona el número de vasos (valor de la media + el valor del error estándar de la media), identificado mediante la tinción para la trombomodulina de las células endoteliales como medida de la angiogénesis, a lo largo de toda la zona del infarto en grupos de 8 a 10 ratones cada uno. Un asterisco significa p < 0,05 con respecto al control.

-: la tabla 3 proporciona el número de vasos (valor de la media + el valor del error estándar de la media), identificado mediante la tinción para la \alpha-actina del músculo liso de las células endoteliales como medida de la arteriogénesis, a lo largo de toda la zona del infarto en grupos de 8 a 10 ratones cada uno. Un asterisco significa p < 0,05 con respecto al control.

TABLA 2

Factor de crecimiento	Vasos por infarto
	Vasos pequeños	Vasos medios	Vasos grandes
Control	225 \pm 20	50 \pm 4	33 \pm 3
PIGF (715 ng/día)	500 \pm 45*	81 \pm 7*	47 \pm 4*
PIGF (3,5 \mug/día)	410 \pm 50*	115 \pm 19*	61 \pm 6*
VEGF (450 ng/día)	370 \pm 40*	85 \pm 7*	42 \pm 2 *
PIGF (715 ng/día) + VEGF (450 ng/día)	470 \pm 100*	110 \pm 8*	67 \pm 3*

Demuestran que el tratamiento de los ratones infartados con 715 ng/día del dímero del PlGF estimuló la formación de nuevos vasos endoteliales (angiogénesis) y la maduración de dichos vasos coronarios mediante el recubrimiento con células musculares lisas vasculares (arteriogénesis) resulta mejor en el miocardio isquémico, en todos los tipos de vasos, que el tratamiento de los ratones infartados con 430 ng/día del dímero VEGF. Una dosis superior (3,5 \mug/día) del dímero PlGF también mejoró la angiogénesis y la arteriogénesis en la zona del infarto.

TABLA 3

Factor de crecimiento	Vasos por infarto
	Vasos pequeños	Vasos medios	Vasos grandes
Control	88 \pm 4	17 \pm 2	11 \pm 2
PIGF(715 ng/día)	140 \pm 36*	30 \pm 7*	14 \pm 3
PIGF (3,5 \mug/día)	120 \pm 18*	44 \pm 10*	19 \pm 3*
VEGF (450 ng/día)	104 \pm 19*	26 \pm 5*	11 \pm 2*
PIGF (715 ng/día) + VEGF (450 ng/día)	111 \pm 7*	38 \pm 4*	22 \pm 2*

Ejemplo 4 Revascularización mejorada de infartos de miocardio agudos mediante la administración prolongada de VEGF, PlGF o una combinación de ambos en ratones que carecen del activador del plasminógeno del tipo urocinasa

Se analizó la sinergia entre el PlGF y el VEGF en la estimulación de la angiogénesis y la arteriogénesis en el miocardio isquémico en ratones infartados que carecían del activador del plasminógeno del tipo urocinasa (u-PA^{-/-}) ya que dichos ratones resultan resistentes a la angiogénesis terapéutica mediante el VEGF solo. El tratamiento de 1 los ratones u-PA^{-/-} con una combinación de VEGF (450 ng/día) y PlGF (3,5 \mug/día) resultó más eficaz que el VEGF (450 ng/día) o el PlGF (3,5 \mug/día) por separado en el aumento de la angiogénesis y la arteriogénesis miocárdica, tal como ilustran las tablas 4 y 5 que proporcionan los resultados del mismo modo que las tablas 2 y 3 respectivamente.

TABLA 4

Factor de crecimiento	Vasos por infarto
	Vasos pequeños	Vasos medios	Vasos grandes
Control	220 \pm 15	48 \pm 4	34 \pm 3
PIGF (3,5 \mug/día)	260 \pm 17	55 \pm 8	37 \pm 4
VEGF (450 ng/día)	170 \pm 20	64 \pm 9	44 \pm 4
PIGF (715 ng/24 h) + VEGF (450 ng/24 h)	320 \pm 39*	100 \pm 13*	65 \pm 8 *

TABLA 5

Factor de crecimiento	Vasos por infarto
	Vasos pequeños	Vasos medios	Vasos grandes
Control	88 \pm 5	21 \pm 2	11 \pm 2
PIGF (3,5 \mug/día)	72 \pm 11	22 \pm 2	20 \pm 3*
VEGF (450 ng/día)	82 \pm 6	20 \pm 2	8 \pm 1
PIGF (715 ng/día) + VEGF (450 ng/día)	115 \pm 8*	32 \pm 4*	23 \pm 8*

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5 Efectos secundarios de la administración del PlGF comparado con el VEGF

La tensión arterial media (MAP), determinada utilizando micromanómetros de alta fidelidad para la tensión (Miller Instruments, Houston, Tejas) resultó de 93 \pm 5 mm Hg en los ratones de control. La inyección intravenosa rápida de 3 \mug del dímero del VEGF activo provocó una hipotensión significativa (68 \pm 3 mm Hg; p < 0,05). La inyección intravenosa rápida de 5 \mug del dímero del VEGF activo no provocó una disminución de la tensión arterial (91 \pm 11 mm Hg). Los datos indican que con el tratamiento breve con cantidades de 3 \mug, el PlGF no presenta efectos secundarios hemodinámicos sistémicos, mientras que el VEGF disminuye la tensión arterial.

Ejemplo 6 Utilización de heterodímeros PlGF-VEGF

El VEGF y el PlGF se han de enlazar como dímeros para sus receptores afines. La actividad de los homodímeros de VEGF/VEGF y de los homodímeros PlGF/PlGF se ha descrito anteriormente. Sin embargo, el VEGF y el PlGF pueden también formar heterodímeros y se ha podido comprobar in vivo (Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., y Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor ("La actividad angiogénica in vivo y la provocación hipoxémica de heterodímeros del factor de crecimiento placentario/factor de crecimiento del endotelio vascular") J. Clin. Invest. 98, 2507-11, 1996; DiSalvo, J. et al., Purification and characterization of a naturally occurring vascular endothelial growth factor placenta growth factor heterodimer ("Purificación y caracterización del heterodímero del factor de crecimiento del endotelio vascular y del factor de crecimiento placentario") J. Biol. Chem. 270, 7717-23, 1995). Su función en la angiogénesis y la arteriogénesis in vivo permanece controvertida, y no existe información disponible sobre si los heterodímeros VEGF/PIGF pueden utilizarse en aplicaciones terapéuticas.

Utilizando el mismo modelo de revascularización de un infarto ilustrado en la Tabla 2 y en la Tabla 3, el heterodímero VEGF/PIGF (obtenido en R&D, Abbingdon, RU) se administró mediante una minibomba osmótica durante una semana a una dosis de 10 microgramos del heterodímero VEGF/PIGF en ratones silvestres. Los datos experimentales se describen en las tablas 6 y 7 en vasos/mm^{2} en vez de en vasos/infarto. Sin embargo, las tablas pueden interpretarse cualitativamente del mismo modo de las tablas previas.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 6 Vasos recubiertos por endoteliales (angiogénesis)

Factor de crecimiento	Vasos por mm^{2}
	Vasos pequeños	Vasos medios	Vasos grandes
Control	78 \pm 2	25 \pm 4	21 \pm 3
Heterodímero VEGF/PIGF	170 \pm 25	51 \pm 7	37 \pm 4

TABLA 7 Vasos recubiertos por musculatura lisa (arteriogénesis)

Factor de crecimiento	Vasos por mm^{2}
	Vasos pequeños	Vasos medios	Vasos grandes
Control	25 \pm 3	9 \pm 1	5 \pm 1
Heterodímero VEGF/PIGF	38 \pm 3	19 \pm 2	9 \pm 1

Todos los valores resultan estadísticamente significativos (p < 0,05; tratamiento comparado con el control).

Claims

1. Utilización del factor de crecimiento placentario, un fragmento, un derivado o un homólogo del mismo que presenta por lo menos una identidad en la secuencia de aminoácidos del 50% con el factor de crecimiento placentario como principio activo en una mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable destinada a la realización de una composición farmacéutica para la reducción del tamaño de un infarto durante el tratamiento de una enfermedad isquémica en un mamífero.

2. Utilización según la reivindicación 1 para la realización de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de una enfermedad isquémica en un mamífero que presenta riesgo de efectos secundarios adversos.

3. Utilización según la reivindicación 2, en la que dicho efecto secundario es la hipotensión.

4. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la enfermedad isquémica es un accidente cardiovascular.

5. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la enfermedad isquémica es un accidente cardiovascular.

6. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la composición farmacéutica no presenta efectos secundarios hemodinámicos sistémicos.

7. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que dicha composición farmacéutica se utiliza en la administración mediante inyección intravenosa rápida de una dosis terapéuticamente eficaz.

8. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en la que dicha utilización comprende el uso después de un accidente cerebral con el que la indicación médica comprende un accidente cerebral tanto isquémico como hemorrágico.

9. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicha composición farmacéutica se administra de modo prolongado.

10. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicha composición farmacéutica se administra de modo intermitente.

11. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicha composición farmacéutica se administra mediante administración oral, intranasal, subcutánea, intramuscular, intradérmica, intravenosa, intraarterial o parenteral, o mediante cateterismo.

12. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la que una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición farmacéutica es una cantidad comprendida entre 2 y 2.000 \mug por kg de peso corporal de dicho mamífero y por semana.