ES2262650T5 - Utilizacion de cepas acetogenicas hidrogenotroficas para la prevencion o el tratamiento del sindrome del intestino irritable. - Google Patents
Utilizacion de cepas acetogenicas hidrogenotroficas para la prevencion o el tratamiento del sindrome del intestino irritable. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2262650T5 ES2262650T5 ES01934089T ES01934089T ES2262650T5 ES 2262650 T5 ES2262650 T5 ES 2262650T5 ES 01934089 T ES01934089 T ES 01934089T ES 01934089 T ES01934089 T ES 01934089T ES 2262650 T5 ES2262650 T5 ES 2262650T5
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- hydrogenotrophic
- acetogenic
- pathogenic
- hydrogenotrophicus
- use according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Utilización de al menos una cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no patógena para la preparación de una composición destinada al tratamiento o la prevención de los trastornos gastrointestinales en un mamífero.
Description
Utilización de cepas acetogénicas
hidrogenotróficas para la prevención o el tratamiento del síndrome
del intestino irritable.
La presente invención se refiere a la
utilización de cepas bacterianas acetogénicas hidrogenotróficas no
patógenas autólogas para la preparación de una composición
destinada al tratamiento o a la prevención en el ser humano del
síndrome del intestino irritable.
La prevalencia de los trastornos digestivos
funcionales o colopatías funcionales en la población occidental es
muy elevada puesto que se estima que alcanzan aproximadamente 25% a
30% de la población adulta. Además, estos trastornos digestivos
representan uno de los factores principales de consulta en
gastroenterología (aproximadamente 50% de las consultas). Los
síntomas de estos trastornos intestinales son diversos, tales como
la modificación del tránsito intestinal, el meteorismo, los dolores
abdominales, la hinchazón. El origen de estos trastornos
funcionales sigue siendo por el momento mal definido pero se estima
que los gases producidos durante la digestión en el colon tienen un
papel importante en la génesis de algunos síntomas, tal como el
exceso de flatulencias, la distensión abdominal (hinchazón) y los
dolores asociados. Se han propuesto algunos tratamientos tal como
el carbón activo, la simeticona, la esmectita, los antiespasmódicos,
así como algunos complementos alimentarios a base de agentes de
fermentación (Saccharomyces cerevisiae, Bifidobacterium,
Lactobacillus), de plantas o de fibras (oligofructosa, hinojo,
algas, avena, cítricos, etc.) o de estructura mineral (Octalita,
etc.). Sin embargo, estos tratamientos presentan una baja eficacia
sobre los síntomas relacionados con la formación de los gases a
nivel del colon, y no actúan de manera selectiva. La presente
invención propone remediar los inconvenientes de la técnica
anterior, tanto en el plano del tratamiento como en el plano de la
prevención de la molestia digestiva asociada con las producciones
de gases cólicos.
Para ello, la invención se basa al mismo tiempo
tanto en las características fisiológicas de las bacterias
acetogénicas hidrogenotróficas, a saber, su capacidad para reducir
el volumen total de los gases de fermentación digestivos (H_{2} y
CO_{2}), como sobre su diversidad nutricional que les confiere una
ventaja ecológica importante en el ecosistema digestivo, con
relación a los otros microorganismos hidrogenotróficos.
En el ser humano, los glúcidos alimentarios que
escapan a la digestión y a la absorción en el intestino delgado
llegan al colon en el que se fermentan mediante una compleja
microflora. Esta degradación anaeróbica de la materia orgánica
produce metabolitos terminales en forma de ácidos grasos volátiles
que tienen propiedades metabólicas (acetato, propionato) o tróficas
(butirato), así como gases (H_{2}, CO_{2} y, en algunas
personas, CH_{4}).
Entre estos gases de fermentación, H_{2} tiene
un papel importante en el mantenimiento y la eficacia de la
degradación de la materia orgánica en el colon humano. Una parte de
H_{2} se elimina por vías respiratorias y rectales, pero la parte
más importante de este gas se reutiliza in situ por la flora
intestinal. Esta última, llamada flora hidrogenotrófica, está
compuesta de bacterias acetogénicas, de bacterias reductoras de
sulfato y de archaea metanogénicas.
Se encuentran las bacterias reductoras de
sulfato en la microflora digestiva de todas las personas (Pochart
et al. (1992) FEMS Microbiol. Lett. 98 p. 225). Estas
sintetizan H_{2}S que es un producto potencialmente tóxico para
las células eucariotas, y que estaría implicado en algunas
enfermedades del sistema digestivo, en particular las colitis
ulcerosas (Roediger et al. (1993), Gastroenterology, 104, p.
802).
Las archaea metanogénicas producen CH_{4} que
es un gas no tóxico. Esta producción de metano se observa solamente
en una fracción de la población humana (aproximadamente 21% de los
indios adultos, 95% de la población rural de adolescentes del
África negra y en 40% de la población occidental), y su eliminación
se realiza por vía respiratoria y en las flatulencias (Segal et
al. (1988) Gut 29 p. 608; Pochart et al. (1992) FEMS
Microbiol. Lett. 98 p. 225). Estas personas llamadas
metanoexcretoras, albergan una población de archaea metanogénicas
muy importante (>10^{8}/g de extracto fecal seco) (Durand et
al. (1996) en: Mälkki Y and Cummings JH (Ed. Official
Publication of the European Communities, p. 58). En estos sujetos,
la metanogénesis es la vía principal de eliminación del
H_{2}.
Las personas no metanoexcretoras reutilizan el
H_{2} mediante mecanismos alternativos, entre los cuales está la
acetogénesis reductora. Esta vía constituye un proceso metabólico
importante de utilización de H_{2} en los no metanoexcretores. En
efecto, estudios han demostrado que la microflora fecal de los
sujetos no metanoexcretores metaboliza principalmente el H_{2} y
el CO_{2} en acetato, mientras que la de los sujetos
metanoexcretores utilizan el H_{2} y el CO_{2} para formar
metano (Lajoie et al. (1998) Appl. Environ. Microbiol. 54 p.
2733; Bernalier et al. (1996) FEMS Microbiol. Ecol. 19 p.
193). Paralelamente, Doré et al. (1995 FEMS Microbiol. Ecol.
17 p. 279) han mostrado la existencia de una correlación negativa
entre el número de archaea metanogénicas y el de las bacterias
acetogénicas en el colon humano. Las personas no metanoexcretoras
albergan por lo tanto poco o nada de archaea metanogénicas en el
colon, lo que permitiría una expresión máxima de su actividad
acetogénica (Lajoie et al. (1988) Appl. Environ. Microbiol.
54 p. 2733; Bernalier et al. (1996) FEMS Microbiol. Ecol. 19
p. 193).
La flora acetogénica hidrogenotrófica se
caracteriza por una gran diversidad taxonómica. Esta compuesta de
especies bacterianas que pertenecen en particular a los géneros
Clostridium, Ruminococcus y Streptococcus (Bernalier
et al. (1996) Curr. Microbiol. 33 p. 94), así como de algunas
especies del género Eubacterium (Schink (1994) en: Drake HL
(ed) Acetogenesis. Nueva York: Chapman y Hall p. 197).
Mediante la expresión "bacterias acetogénicas
hidrogenotróficas", se entiende las especies bacterianas que
utilizan la vía reductora de síntesis del acetato (o vía
Wood-Ljungdahl) para producir este metabolito
durante su crecimiento autótrofo a partir de H_{2}/CO_{2}, así
como durante su crecimiento heterótrofo, a partir de un sustrato
orgánico. En efecto, estas bacterias acetogénicas hidrogenotróficas
presentan una gran capacidad nutricional, y son capaces, además de
utilizar el H_{2}/CO_{2}, de fermentar un número importante de
sacáridos y de compuestos orgánicos (Bernalier et al (1996),
Curr. Microbiol., 33 p. 94).
Las cepas bacterianas acetogénicas
hidrogenotróficas según la invención producen ácidos grasos de
cadena corta (AGCC), en particular acetato, a partir de los gases
H_{2} y CO_{2}. Esta producción de AGCC presenta una ventaja
fisiológica para el hospedante, tal como la prevención (protección)
o el tratamiento de patologías diversas (véase aquí abajo).
La presencia simultánea de compuestos orgánicos
y de H_{2}/CO_{2} en el medio de cultivo (condiciones
equivalentes a las encontradas en el colon humano) puede dar como
resultado un uso simultáneo de los dos sustratos mediante la cepa
acetogénica hidrogenotrófica (Breznak y Blum (1991), Arch.
Microbiol., 156 p. 105). Este fenómeno, denominado mixotrofía,
permite a la bacteria tener un rendimiento energético más elevado, y
por lo tanto crecer más rápidamente.
Esta aptitud para consumir H_{2}/CO_{2},
asociada con la capacidad de usar un gran número de sustratos
orgánicos, así como la capacidad para crecer mediante mixotrofía,
confiere por lo tanto una ventaja ecológica importante a las
bacterias acetogénicas, con relación a las poblaciones de
metanógenos, que utilizan únicamente un número restringido de
sustratos (H_{2}, formiato), y poblaciones reductoras de sulfato,
que dependen de la presencia de sulfato para su metabolismo de
H_{2}.
Se ha demostrado que el uso de algunas
preparaciones probióticas, que contienen bacterias tales como
bacterias propiónicas, lactobacilos, y/o bifidobacterias, permite
modificar la flora cólica de algunos pacientes (Bougle et
al. (1999) Scand. J. Gastroenterol. 34 p. 144; Venturi et
al. (1999) Aliment. Pharmacol. Ther. 13 p. 1103).
El uso de bacterias acetogénicas como
probióticos como se define por Fuller (1989, J. Appl. Bact., 66 p.
365), en preparaciones que se pueden utilizar como alicamentos o
como suplementos alimentarios, demuestra ser por lo tanto una vía
de interés particularmente innovadora, puesto que su capacidad para
metabolizar el H_{2}/CO_{2} permitiría optimizar las
fermentaciones cólicas disminuyendo el volumen total de los gases de
fermentación y produciendo acetato, una fuente de energía
metabolizable por el hospedante. La reducción de los gases
digestivos sería así un medio eficaz de prevención y/o de
tratamiento de los trastornos digestivos relacionados con la
acumulación de estos gases.
El campo de la presente invención es el uso de
cepas acetogénicas hidrogenotróficas no patógenas, para regular los
susodichos trastornos digestivos y/o modular el equilibrio de la
flora microbiana en un mamífero.
Los mamíferos pueden ser los mamíferos
monogástricos, frente a los mamíferos poligástricos como los
rumiantes. En particular, se entienden los felinos y caninos, en
particular los mamíferos domésticos (gatos y perros), así como el
ser humano.
Mediante la expresión "no patógeno", se
entiende una especie microbiana para la cual no se ha podido
demostrar ninguna patología del hospedante asociada con su
presencia (cepa GRAS = Reconocida generalmente como segura).
Tal uso se puede prever de distintas maneras. La
presente invención se refiere a un uso profiláctico o terapéutico,
con el fin de prevenir y/o tratar ciertos trastornos del aparato
digestivo. Esta prevención y/o tratamiento se puede efectuar
mediante una regulación de los gases producidos en el colon, gracias
a la modulación de la flora microbiana. Un uso de este tipo se
puede prever bajo la dirección de un médico o de un profesional de
la salud. En este caso, el tiempo de tratamiento, así como una
asociación eventual de la cepa acetogénica hidrogenotrófica no
patógena con otros principios activos eficaces para la prevención
y/o el tratamiento de los trastornos digestivos diana, son
decididos por el profesional de la salud. Tal uso puede igualmente
necesitar un seguimiento de la cepa acetogénica hidrogenotrófica no
patógena mediante un procedimiento de análisis, tal como se define
más adelante.
En efecto, los trastornos digestivos diana
mediante la presente invención afectan a la calidad de vida de los
pacientes que los padecen. El grado de molestia digestiva engendrada
y/o la capacidad de cada uno para soportar estos trastornos
explican que las personas afectadas consulten o no un médico.
En particular, la invención se refiere a la
utilización de cepas acetogénicas hidrogenotróficas para la
preparación de una composición para las siguientes
aplicaciones:
- (1)
- la prevención y/o el tratamiento de los trastornos funcionales digestivos,
- (2)
- la modulación del equilibrio de la flora microbiana cólica favoreciendo ventajosamente la actividad de la flora bacteriana acetogénica, en particular en detrimento de las floras bacterianas metanogénicas y sulfatorreductoras.
\newpage
Este último punto tiene como interés:
- (1)
- disminuir la formación del gas CH_{4},
- (2)
- disminuir la producción de H_{2}S, producto tóxico, implicado en la iniciación y/o el desarrollo de patologías digestivas,
- (3)
- favorecer la producción de metabolitos sanos para el hospedante.
\vskip1.000000\baselineskip
En particular, se utiliza una cepa de tipo
Ruminococcus, Clostridium o Streptococcus,
preferentemente Ruminococcus hydrogenotrophicus.
Así, la presente invención se refiere a la
utilización de al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena autóloga para la preparación de una
composición destinada a la prevención y/o al tratamiento del
síndrome del intestino irritable reduciendo la formación de gases
potencialmente tóxicos en el ser humano.
Dicha reducción se efectúa o efectúan mediante
la disminución del porcentaje de hidrógeno gaseoso (H_{2}) y/o de
dióxido de carbono gaseoso (CO_{2}) producidos durante
fermentaciones digestivas.
Dicha reducción se puede efectuar igualmente
mediante aumento de la actividad de la flora cólica acetogénica, en
detrimento de la flora metanogénica y/o sulfatorreductora.
Las flatulencias excesivas, el meteorismo, las
hinchazones, los dolores abdominales, son criterios importantes que
caracterizan el síndrome del intestino irritable.
Se describe asimismo una composición alimentaria
susceptible de ser utilizada en la elaboración de nuevos alimentos
o ingredientes alimentarios tales como se definen en la regla CE nº
258/97, y especialmente en la fabricación de alimentos funcionales.
Un alimento se puede considerar como funcional si se demuestra de
manera satisfactoria que ejerce un efecto beneficioso sobre una o
varias funciones diana del organismo, más allá de los efectos
nutricionales habituales, mejorando el estado de salud y de bien
estar y/o reduciendo el riesgo de enfermedad (Diplock et al.
Scientific concepts of functional foods in Europ: consensus
document, British Journal of Nutrition, 1999, 81,
S1-S27).
La composición así descrita puede, en
particular, constituir un probiótico envasado, por ejemplo en forma
de cápsula o de cápsula de gelatina.
Se puede utilizar de este modo dicha composición
alimentaria que contiene una cepa acetogénica hidrogenotrófica no
patógena, y que aporta al usuario un bienestar mediante la reducción
de la molestia digestiva.
Se describe asimismo una composición
farmacéutica, asociada además con un vehículo farmacéuticamente
aceptable, que puede comprender excipientes. Su modo de
administración se efectúa preferentemente por vía oral o
directamente in situ, en particular mediante coloscopía, o
por vía rectal mediante supositorios.
Dicha composición farmacéutica comprende además
por lo menos otro agente activo contra por lo menos una de las
patologías diana.
Dicha composición farmacéutica o alimentaria se
puede administrar por vía oral, en forma de cápsulas de gelatina,
de cápsulas, de comprimidos, de polvos, de gránulos o de
disoluciones o suspensiones orales. Se puede mezclar al menos una
cepa bacteriana con excipientes clásicos tales como la gelatina,
almidón, lactosa, estearato de magnesio, talco, goma arábiga, y
análogos. Puede ser igualmente ventajoso utilizar excipientes menos
clásicos, que permitirían aumentar la capacidad de al menos una
cepa bacteriana utilizada para ser activa en el colon. Por ejemplo,
se puede añadir celobiosa, maltosa, manosa, salicina, trehalosa,
amigdalina, arabinosa, melobiosa, rhamnosa y/o xilosa. Esta lista
no es exhaustiva, y los sustratos se seleccionan y se adaptan en
función de la cepa considerada. Estos sustratos pueden favorecer el
crecimiento heterótrofo y/o mixótrofo de al menos una cepa
acetogénica presente en la composición.
Así, preferentemente, la composición preparada
en el marco de la invención comprende al menos un aditivo que
favorece la actividad de al menos una cepa en el entorno
digestivo.
En una forma de realización particular de la
invención, al menos una cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica
no patógena, presente en la composición, se administra en una forma
que le permite ser activa en el colon. En particular, es necesario
que al menos una cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no
patógena esté viva, o sea viable en el tubo digestivo, y en
particular en el colon. Se puede igualmente, después de la
producción de al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena, y en función de los procedimientos de
producción, mantener ésta en condiciones de envaso anaeróbico, con
el fin de permitir que siga siendo viable.
En una forma de realización preferida, al menos
una cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no patógena se
envasa en un entorno anaeróbico, es decir, se envasa en una
atmósfera libre de oxígeno.
La por lo menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena presente en la composición es una cepa
autóloga de dicho mamífero, es decir, que se puede aislar del
sistema digestivo, en particular de las heces, de otros mamíferos
que pertenecen al mismo género.
Preferentemente, la por lo menos una cepa
bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no patógena pertenece al
género Ruminococcus, más preferentemente a la especie
Ruminococcus hydrogenotrophicus. Se pueden asimismo usar
otras bacterias acetogénicas hidrogenotróficas, en particular
bacterias del género Streptococcus o Clostridium, en
particular Clostridium coccoides.
Se describe asimismo un procedimiento de
seguimiento específico de la cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena en el tubo digestivo de un mamífero,
tras su uso tal como se ha definido anteriormente, que comprende
las etapas siguientes:
- a.
- definir una secuencia nucleotídica específica (sonda) de la cepa acetogénica hidrogenotrófica no patógena que se desea detectar;
- b.
- efectuar la detección y/o cuantificación de dicha cepa mediante hibridación de la sonda con el ácido nucleico total extraído de la flora fecal o mediante las bacterias fecales fijadas en un portaobjetos.
Con el fin de realizar dicho procedimiento de
seguimiento, se pueden desarrollar equipos de diagnóstico. Dichos
equipos contienen en particular un "patrón" a fin de poder
evaluar la cantidad de bacterias en las heces.
El experto en la materia sabe definir una
secuencia específica que no se híbrida con el ADN de otras
bacterias. Igualmente, el experto en la materia elegirá la
hibridación sobre membrana o la hibridación in situ en
función de los medios de los cuales dispone, y de la precisión
buscada.
Preferentemente, el ácido nucleico detectado es
el ADN bacteriano total, pero puede igualmente ser una mezcla de
ADN o de ARN, o el ARN bacteriano solo.
Se puede igualmente estudiar la presencia de al
menos una cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no patógena
mediante otros métodos. Una detección de los ácidos nucleicos (ADN
y/o ARN) de al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena en las heces del mamífero, en
particular mediante PCR, RT-PCR o mediante
hibridación con sondas específicas (Transferencia Southern o
transferencia Northern), permitirá detectar la presencia de dicha
cepa, y eventualmente la expresión de algunos genes. Una secuencia
específica ventajosa se puede elegir en la secuencia del gen que
codifica el ARNr 16s, en particular una zona que no está presente
en las demás especies de la flora cólica.
Se describe asimismo un procedimiento de
producción de una cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no
patógena para su utilización tal como se define en la presente
memoria, caracterizado porque comprende las etapas siguientes:
- a.
- efectuar el crecimiento de la cepa sobre un medio adecuado, en condición de anaerobiosis estricta, en presencia de un sustrato carbonado y/o de H_{2}/CO_{2} como fuente de energía;
- b.
- recuperar las células bacterianas;
- c.
- envasar las células bacterianas según la forma galénica elegida.
El crecimiento de la cepa tendrá lugar
preferentemente en un medio de AC21 modificado (descrito en el
ejemplo 1), a 37ºC, en un fermentador. El sustrato carbonado puede
ser glucosa.
Un método preferido de recuperación de las
células bacterianas es la centrifugación, por ejemplo entre 10.000
g y 15.000 g, ventajosamente 12.000 g, durante 15 a 20 minutos. El
experto en la materia sabe optimizar estos parámetros.
Ventajosamente, las bacterias se pueden lavar
entre las etapas b y c, en particular en un tampón de fosfato
anaeróbico, resuspendiendo las células, agitando y una nueva etapa
de centrifugación.
El pelete bacteriano, lavado o no, se envasa en
función de la forma galénica elegida. Un método ventajoso es la
liofilización.
Los ejemplos a continuación permiten ilustrar la
invención, pero no deben ser considerados sin embargo como
limitativos.
Figura 1: Influencia de un tratamiento de 14
días con Ruminococcus hidrógenotrophicus sobre las cantidades
de hidrógeno excretado por ratas con flora humana en situación
nutricional normal.
Figura 2: Influencia de un tratamiento de 14
días con Ruminococcus hidrógenotrophicus sobre las cantidades
de hidrógeno excretado por ratas con flora humana después de
administrar lactulosa.
Se usan muestras fecales humanas que proceden de
voluntarios sanos, no metano-excretores. Los
individuos se consideran como no metano-excretores
cuando el porcentaje de metano expirado no exceda más de 1 ppm el
porcentaje del aire ambiente, que es de 1,8 ppm (Bond et al.
(1970) Gastroenterology 58, p. 1035), y cuando el número de
metanógenos contenido en sus extractos fecales es menor que
10^{7}/g de extracto fecal (Bernalier et al. (1996) Arch
Microbiol. 166 p. 176). El porcentaje de metano se determina con la
ayuda de un cromatógrafo equipado con un detector de ionización por
llama. Las muestras fecales recogidas recientemente se conservan a
4ºC bajo anaerobiosis estricta, durante máximo de 10 horas.
El enriquecimiento, el aislamiento y el cultivo
de los microorganismos se efectúan sobre un medio semisintético, el
medio AC-21 modificado (Breznak et al. (1988)
Arch. Microbiol. 150 p. 282) bajo anaerobiosis estricta (Hungate
(1969) en: Norris JR y Gibbons DW (eds) Methods in microbiology Vol.
3B, Nueva York; Academic Press p. 117). La composición por litro
del medio semisintético es la siguiente:
La disolución de oligoelementos se prepara según
Widdel et al. (1983, Arch. Microbiol., 134, p. 286), y la
disolución de vitaminas se prepara según Greening y Leedle (1989,
Arch. Microbiol., 151, p. 399). La disolución de
volframato-selenio posee la composición siguiente:
0,1 mM de Na_{2}WO_{4} y 0,1 mM de Na_{2}SeO_{3}, en 20 mM
de NaOH.
El medio semisintético se solidifica mediante
adición de un agente gelificante (Agar-Agar al 2%).
Tras la inoculación, el gas del medio de cultivo se sustituye por
H_{2}/CO_{2} o N_{2}/CO_{2}, en función del ensayo
previsto.
El medio de dilución es un medio anaeróbico
totalmente mineral (Doré et al. (1995) FEMS Microbiol. Lett.
130 p. 7). A partir de una muestra fecal, se prepara una suspensión
madre (diluida a la décima parte, p/v). Se efectúa una serie de
diluciones decimales a partir de la suspensión madre. Las diluciones
así preparadas se inoculan en el medio semisintético líquido que
contiene H_{2}/CO_{2} (60:40, v/v, 202 kPa) como única fuente
de energía (Doré et al. (1995) FEMS Microbiol. Lett. 130 p.
7; Bernalier et al. (1996) FEMS Microbiol. Ecol. 19 p. 193;
Bernalier et al. (1996) Curr. Microbiol. 33 p. 94). Después
de incubar a 37ºC durante 20 días, los enriquecimientos se obtienen
a partir de los tubos de dilución más elevada y que presentan un
crecimiento bacteriano, un consumo de gas y una producción
estequiométrica de acetato más elevadas (Bernalier et al
(1996) Curr. Microbiol. 33 p. 94). La disminución de la presión de
gas en los cultivos se determina mediante medida directa de la
presión parcial con un manómetro de tipo Capshuelic (Dwyer,
Instruments, Michigan City, Mich., USA). Después de tres
transferencias de los cultivos enriquecidos, se aíslan colonias
bacterianas mediante el método de los tubos giratorios (Hungate
(1969) en: Norris JR y Gibbons DW (eds) Methods in microbiology
vol. 3B, Nueva York; Academic Press p. 117) que contienen un medio
homólogo agar-agar y H_{2}/CO_{2} como fuente
de energía. Después de 20 días de incubación a 39ºC, las colonias se
transfirieron a medios líquidos. La purificación de los cultivos se
obtiene después de 3 a 5 transferencias sucesivas en tubos
giratorios, al final de las cuales la pureza de los cultivos se
determina mediante microscopía de contraste de fase, tras tinción
Gram.
\global\parskip0.970000\baselineskip
El ADN total de las cepas acetogénicas
hidrogenotróficas aisladas se extrae mediante el método de Lawson
et al. (1989, FEMS Microbiol. Lett. 65 p. 41). Después, el
gen que codifica el ARN ribosómico 16S se amplifica mediante PCR
con la ayuda de los cebadores universales ARI y pH. Los productos de
PCR se purifican y después se secuencian con la ayuda de un kit de
secuencia "Dye-Dideoxy Terminator cycle
Sequence" y de un secuenciador automático Applied Biosystem
modelo 373A. La búsqueda de homología de secuencia ARNr 16S entre
las cepas acetogénicas aisladas y las otras especies se efectúa
gracias al programa FASTA, siendo las bases de datos de secuencia
las del EMBL y del RDP, y utilizando los parámetros de base
sugeridos. Los alineamientos de secuencia se verifican
manualmente.
Mediante este método, se ha podido aislar una
bacteria del género Ruminococcus e identificar a la especie
Ruminococcus hydrogenotrophicus. Esta bacteria se depositó en
la Deutsche Sammlung von Mikroorganismen (Mascheroder Weg 1b, 38124
Braunscheig, Alemania) con el número DSM 10507, e igualmente con el
número DSM 14294, el 10 de mayo de 2001 (Tratado de Budapest).
- 1-
- El tipo de membrana de las bacterias se determina mediante tinción Gram (método convencional) y mediante el ensayo de KOH según Buck (1982 App. Environ. Microbiol. 44, p. 992).
- 2-
- La actividad de catalasa se mide mezclando 1 ml de suspensión bacteriana con algunas gotas de H_{2}O_{2} (30%). La producción de burbujas de gas que se libera de manera más o menos intensa indica la presencia de una catalasa.
- 3-
- La actividad citocromo oxidasa se estudia colocando una colonia bacteriana sobre un disco de papel de filtro saturado con dimetil-p-fenilendiamina. Una coloración rojo púrpura que aparece inmediatamente sobre el disco indica que el ensayo es positivo.
- 4-
- Las características morfológicas de los cultivos se estudian mediante microscopía de contraste de fase y mediante microscopía electrónica tras tinción negativa con acetato de uranilo al 2%. Las células se prefijan en glutaraldehído al 2% (15 h a 4ºC), y después se fijan con el OsO_{4} al 2% (4ºC, durante 15 horas máximo). Después, las células se embeben en EPPON-812, y los bloques se cortan muy finamente. Estos cortes se contrastan con acetato de uranilo, se bañan en sal de acetato y se observan con la ayuda de un microscopio electrónico de transmisión (Philips 400).
- 5-
- El tipo respiratorio de las bacterias se estudia mediante determinación del crecimiento en presencia o ausencia de O_{2}.
- 6-
- El efecto de las variaciones de pH sobre el crecimiento bacteriano se estudia modificando la relación CO_{2}/NaHCO_{3} del medio semisintético (Costilow (1981) American society for Microbiology, Washington DC p. 66). Las medidas del crecimiento bacteriano (DO600) se realizan tras 24 ó 48 horas de incubación a 37ºC. La búsqueda de la temperatura óptima de crecimiento se efectúa sobre un medio semisintético que contiene glucosa, y el crecimiento se observa a temperaturas que varían de 20 a 45ºC. Cada experimento se realiza por triplicado. El crecimiento bacteriano se monitorizó con la ayuda de un espectrómetro Spectronic 20D (Bioblock Scientific, IIIkirch, Francia).
Se encontró que Ruminococcus
hydrogenotrophicus DSM 10507 es un cocobacilo Gram positivo, no
esporulado y estrictamente anaeróbico. La tinción negativa revela
la ausencia de cilios. Las células bacterianas están aisladas o en
pares. La cepa no tiene catalasa ni citocromo oxidasa. La
temperatura y el pH de crecimiento óptimos son respectivamente
35-37ºC y 6,6. Las colonias son translúcidas, de
color blanco hacía ligeramente marrón, con bordes regulares,
circulares y de diámetro que varían de 1 a 2 mm.
Se estudió la capacidad de distintas cepas
bacterianas para metabolizar H_{2}/CO_{2} y para formar acetato.
Las cepas de Ruminococcus hydrogenotrophicus DSM 10507, así
como también las taxonómicamente relacionadas Ruminococcus
productus DSM 3507, Ruminococcus productus DSM 2950,
Ruminococcus hansenii DSM 20583 y Clostridum
coccoides DSM 935 (los números DSM corresponden a los números de
los organismos depositados en la Deutsche Sammlung von
Mikroorganismen), se incuban sobre el medio AC-21
modificado en presencia de H_{2}/CO_{2} (60:40, v/v, 202 kPa)
como fuente de energía. Se incuban cultivos testigos en
N_{2}/CO_{2} (60:40, v/v, 150 kPa). Se preparan 3 cultivos (1
testigo y 2 ensayos) para cada cepa bacteriana. El crecimiento
autótrofo se determina mediante incubación durante 96 horas en
presencia de H_{2}/CO_{2} (60:40, v/v, 202 kPa). La producción
de acetato se determina mediante un ensayo enzimático (Boehringer
Mannheim, Meylan, Francia), después de 6 días de incubación a
37ºC.
El consumo de H_{2}/CO_{2} se mide
- 1)
- mediante determinación del volumen gaseoso consumido
- 2)
- mediante análisis cromatográfico (CPG) de la composición de la fase gaseosa.
\global\parskip1.000000\baselineskip
El crecimiento heterótrofo de las cepas
acetogénicas (DO_{600}) se estudió mediante la incubación de las
bacterias durante 20 horas con glucosa (2 g/l) o con fructosa (2
g/l) como única fuente de energía.
La fermentación de la glucosa se estudió
mediante la incubación de las células a 37ºC durante 20 horas en el
medio semisintético que contiene 2 g/l de glucosa y una atmósfera
compuesta al 100% de CO_{2}. Al final de la incubación, los
ácidos grasos volátiles del sobrenadante se determinan mediante
cromatografía, tras la conversión en derivados terciarios de
butildimetilo (Richardson et al. (1989) Lett. Appl.
Microbiol. 9 p. 5).
Se observó que el tiempo de duplicación de R.
hydrogenotrophicus a 37ºC en medio AC-21
modificado, en presencia de H_{2}/CO_{2} (60:40, v/v, 202 kPa)
como sustrato, es de 26,4 horas. Los tiempos de duplicación de
R. hydrogenotrophicus a 37ºC, con glucosa o fructosa como
fuente de energía, son de aproximadamente 2 ó 3 horas.
Se observó que la cepa bacteriana estudiada es
acetogénica: ésta presenta un crecimiento autótrofo en presencia de
H_{2}/CO_{2} y produce acetato como metabolito principal (Tabla
I). Entre las especies taxonómicamente próximas, se encuentra
actividad acetogénica (es decir, consumo de H_{2}/CO_{2} y
producción de acetato) en C. Coccoides y mucho más
débilmente en R. hansenii y R. productus.
R. hydrogenotrophicus DM 10507 consume
aproximadamente 120 mM de H_{2} tras 96 horas de cultivo a 37ºC
(1,25 mM de H_{2} consumido por hora). La producción total de
acetato es entonces igual a 30 mM (Estequiometría: 4 H_{2}
consumidos por acetato formado).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La incorporación de ^{13}CO_{2} en acetato
se mide mediante RMN, a partir de suspensiones celulares de R.
hydrogenotrophicus incubadas en presencia de H_{2}. Las
bacterias se cultivaron en un matraz de 1l que contiene 250 ml de
medio AC21 tal como se describe en el ejemplo 1, y H_{2}/CO_{2}
como única fuente de energía. Tras el crecimiento a 37ºC, las
células bacterianas se recuperaron mediante centrifugación (12.000 g
durante 20 minutos) y se resuspenden en un tampón de fosfato que
contiene 20 mM de NaH^{13}CO_{3} (Leclerc et al. (1997),
Anaerobe, 3, p. 307). Las suspensiones se incubaron durante 20 horas
a 37ºC en atmósfera compuesta de 100% de N_{2} (testigo) o de
H_{2}/N_{2} (80/20, v/v), a 10,233 MPa (101 atm). Al final de
la incubación, las suspensiones se centrifugaron nuevamente a 12.000
g durante 20 minutos, y se recuperaron los sobrenadantes. La
producción total de acetato se midió mediante un método enzimático
(kit Boehringer-Mannheim). Los metabolitos marcados
con ^{13}C se analizaron mediante RMN (Bernalier et al.,
(1996), FEMS Microbiol. Ecol., 19, p. 193).
Cuando la bacteria se incubó en presencia de
H_{2}, el acetato es el único metabolito detectado mediante RMN
^{13}C. El ^{13}C-acetato se marcó de manera
equivalente sobre sus grupos metilo y carboxilo. El acetato
doblemente marcado representa 72% del acetato marcado total. Esto
confirma que la síntesis de acetato a partir de H_{2} y CO_{2}
por R. hydrogenotrophicus se efectúa según la vía reductora
de la acetogénesis.
Se evaluó el metabolismo de otros sustratos
orgánicos mediante las bacterias acetogénicas, utilizando un medio
AC-21 modificado que contiene 5 ó 10 mM de sustrato,
en una atmósfera compuesta de CO_{2} al 100%. El ensayo se
considera como positivo cuando la bacteria mantiene su crecimiento
después de tres transferencias sucesivas en un medio que contiene
el mismo sustrato, y si la DO_{600} del cultivo es al menos igual
al doble de la observada con un medio semisintético basal (libre de
sustrato orgánico), después de 24 horas de incubación a 37ºC.
Se observó que numerosos sustratos orgánicos
permiten el crecimiento heterótrofo de las bacterias especificadas
(Tabla II).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Por otra parte, el crecimiento de distintas
cepas acetogénicas hidrogenotróficas aisladas de deposiciones
humanas, en presencia de diversos compuestos aromáticos tal como el
vanillato, caffeato o siringato, se estima mediante la densidad
óptica a 600 nm con la ayuda de un espectrómetro Spectronic 20D (se
estudia igualmente el efecto de la adición de H_{2} a la fase
gaseosa de estos cultivos). La cantidad de sustrato degradado se
determina mediante HPLC, así como la naturaleza de los metabolitos
formados.
La capacidad para metabolizar los distintos
sustratos aromáticos ensayados depende de la cepa acetogénica
hidrogenotrófica especificada. Las especies Clostridium son
capaces de crecer y de degradar 20% hasta 30% del caffeato y del
siringato, alcanzando esta degradación el 100% cuando se añade
H_{2} al cultivo. Una de las cepas de Clostridium degrada
vanillato solamente en presencia de H_{2} en la fase gaseosa. En
una primera etapa, esta cepa desmetila el vanillato a
protocatecuato, y después, gracias a H_{2}, descarboxila este
compuesto a catecol. La cepa de R. hydrogenotrophicus
presenta sólo una baja actividad frente a vanillato, este
metabolismo no parece influido por la presencia de H_{2}.
La capacidad de R.
hydrogenotrophicus para utilizar dos sustratos orgánicos no
digestibles por las enzimas del hospedante, los
fructo-oligosacáridos (FOS) y lactulosa, se
determina igualmente según el protocolo descrito en este ejemplo
[medición del crecimiento bacteriano (densidad óptica a 600 nm)
observado en presencia de 2 g/l de cada uno de los sustratos
indigestibles, y mantenimiento de éste tras 3 transferencias
sucesivas sobre el mismo sustrato]. R.
hydrogenotrophicus se encuentra incapaz de metabolizar estos
dos sustratos.
Con el fin de determinar si R.
hydrogenotrophicus es capaz de crecer por mixotrofía (uso
simultáneo de un sustrato orgánico y de un sustrato inorgánico), la
cepa se cultivó en presencia de dos fuentes de energía, una
orgánica, la glucosa, y otra inorgánica, H_{2}/CO_{2}. El medio
de cultivo (medio AC21 modificado tal como se describe en el
Ejemplo 1) contiene 1,4 mM de glucosa, y se sustituyó la fase
gaseosa, tras inoculación, por una mezcla de H_{2}/CO_{2}
(60/40 a 156 kPa). Los cultivos se inocularon con 0,3 ml de un
precultivo de R. hydrogenotrophicus obtenido con la
glucosa o bien con el H_{2}/CO_{2} como única fuente de
energía. Durante la incubación a 37ºC, el consumo de gas por la cepa
se siguió con la ayuda de sensores de presión fijados a los tapones
de los cultivos (Leclerc et al. (1997), Anaerobe 3 p. 307).
El crecimiento bacteriano se estimó midiendo la densidad óptica de
los cultivos a 600 nm con la ayuda de un espectrofotómetro
Spectronic 20D. Se recogieron muestras de sobrenadantes de cultivos
cada 2 horas con el fin de estimar el consumo de glucosa
(determinación de la glucosa que queda mediante el método enzimático
de Boehringer) y la producción de metabolitos que fermentan,
mediante determinación cromatográfica (tal como se describe en el
Ejemplo 3).
Se encuentra que R.
hydrogenotrophicus es capaz de co-utilizar
los dos sustratos ensayados. Se observa una sola fase exponencial
de crecimiento de la bacteria en presencia de los dos sustratos.
Durante esta fase exponencial, se observa un consumo simultáneo de
glucosa y de H_{2}/CO_{2}. Esto muestra el carácter mixotrófico
de R. hydrogenotrophicus frente a estos dos sustratos
(Leclerc y Bernalier, sometido a publicación). Al final de la fase
exponencial, la glucosa está totalmente consumida por la bacteria,
ésta mantiene entonces su metabolismo en fase estacionaria de
crecimiento, mediante el uso de H_{2}/CO_{2} restante.
Se estudió igualmente la capacidad de R.
hydrogenotrophicus para co-metabolizar un
edulcorante, la fructosa, y el H_{2}/CO_{2}. La cepa se cultivó
en medio AC21, tal como se describe en el ejemplo 1, en presencia
de estas dos fuentes de energía. Se ensayaron distintas
concentraciones de fructosa (2, 1, 0,5 y 0,25 g/l), siendo aún la
fase gaseosa H_{2}/CO_{2} (60/40, v/v, 202 kPa). El protocolo
experimental utilizado después es el mismo que el descrito más
arriba.
R. hydrogenotrophicus demuestra
ser capaz de co-metabolizar la fructosa y
H_{2}/CO_{2}, siendo el crecimiento de la bacteria
caracterizado por una sola fase exponencial de crecimiento en
presencia de los dos sustratos. Este crecimiento mixótrofo se
observa independientemente de la concentración de fructosa presente
en el medio de cultivo, e independientemente del origen del inóculo
bacteriano (precultivo realizado sobre fructosa o H_{2}/CO_{2}
o fructosa + H_{2}/CO_{2}). En fase estacionaria de crecimiento,
la bacteria metaboliza H_{2}/CO_{2} únicamente, siendo
consumida la totalidad de la fructosa.
Con el fin de determinar si la conservación de
R. hydrogenotrophicus en forma liofilizada puede
alterar su capacidad para utilizar H_{2}/CO_{2}, se ensayaron
distintas condiciones de cultivo, de conservación de los
liofilizados, y de la resuspensión de la bacteria.
Se prepararon cultivos de R.
hydrogenotrophicus en matraces de 1l que contienen 250 ml de
medio AC21, tal como se describe en el Ejemplo 1, con fructosa (2
g/l), H_{2}/CO_{2} (60/40, v/v, 100 kPa), o los dos sustratos,
como fuente de energía. Estos cultivos se incubaron a 37ºC durante
24 horas, 48 horas o 72 horas según el(los)
sustrato(s) utilizado(s). Entonces, se obtienen
peletes bacterianos de los cultivos mediante centrifugación (15.300
x g, 30 min., 4ºC), y se recogieron en 10 ml de tampón anaeróbico.
Las suspensiones así obtenidas se alicuotaron mediante 2 ml, y
después se centrifugaron 5 min. a 14.000 x g. Entonces, los peletes
bacterianos se congelaron a -80ºC antes de ser liofilizados durante
la noche. Los liofilizados se conservaron a 4ºC en una atmósfera
aeróbica o anaeróbica (100% de CO_{2}). Después de 15 a 30 días de
conservación, los liofilizados de R.
hydrogenotrophicus se recogieron en 5 ml de tampón de
dilución anaeróbico. Entonces, estas suspensiones bacterianas se
mantuvieron en un medio AC21 que contiene H_{2}/CO_{2} (60/40,
v/v, 200 kPa) como única fuente de energía, bien directamente o bien
después del enriquecimiento durante 48 horas a 37ºC en un medio de
cultivo complejo que contiene diversas fuentes de carbono. Después
de 72 horas de incubación a 37ºC en presencia de H_{2}/CO_{2},
se determinó el consumo de H_{2} y la cantidad de acetato
producido para cada cultivo.
La liofilización de R.
hydrogenotrophicus no parece afectar su potencial
hidrogenótrofo. En efecto, cualquiera que sea el sustrato utilizado
para precultivar la cepa (fructosa, H_{2}/CO_{2} o los dos
sustratos simultáneamente), la actividad hidrogenotrófica de
R. hydrogenotrophicus se restituye durante el cultivo
de los liofilizados. Igualmente, el modo de conservación aeróbico o
anaeróbico del liofilizado influye poco sobre la expresión del
potencial hidrogenotrófico de la bacteria. Sin embrago, se observa
una actividad hidrogenotrófica máxima cuando R.
hydrogenotrophicus se precultiva en presencia de fructosa y
cuando el liofilizado se conserva en una atmósfera anaeróbica.
Igualmente, el cultivo previo de las bacterias liofilizadas en un
medio rico en sustratos orgánicos aumenta sensiblemente la expresión
de su potencial hidrogenotrófico, cualquiera que sea el sustrato
utilizado para precultivar la cepa, y cualquiera sea el modo de
conservación del liofilizado. Este efecto se explica probablemente
por el aumento de la densidad bacteriana generada por el
enriquecimiento de los cultivos liofilizados en medio complejo.
El conjunto de los resultados obtenidos muestran
que la cepa de R. hydrogenotrophicus se puede cultivar
en presencia de un sustrato orgánico y después conservar a 4ºC en
forma liofilizada en una atmósfera aeróbica o anaeróbica, sin que
afecte sensiblemente la expresión posterior de su potencial
hidrogenotrófico.
Se estudió in vitro la capacidad de
R. hydrogenotrophicus para utilizar el H_{2}
producido por especies bacterianas fibrolíticas, en
co-cultivos, asociando la cepa acetogénica con una
bacteria celulolítica. Las dos especies celulolíticas estudiadas se
aislaron en el laboratorio a partir de heces humanos. Los
co-cultivos se prepararon en un medio
semisintético, realizado en el laboratorio, que contiene una cinta
de celulosa de papel de filtro Whatman nº 1 como única fuente de
carbono y de energía. Cada una de las especies celulolíticas se
sembró a razón de 0,5 ml de inóculo por tubo de cultivo. Después de
48 horas de incubación a 37ºC, se añaden 0,5 ml de inóculo de
R. hydrogenotrophicus a cada uno de estos cultivos de
bacterias celulolíticas. Paralelamente, se prepararon monocultivos
testigo de cada especie celulolítica.
Se realizó una cinética mediante incubación de
los cultivos a 37ºC durante 12 días. Después de la incubación, se
analizó mediante cromatografía la cantidad de H_{2} en la fase
gaseosa, la cantidad de celulosa degradada se estimó midiendo la
materia seca restante, y los productos finales de fermentación de la
celulosa se determinaron mediante cromatografía de fase gaseosa y/o
mediante vías enzimáticas (kit Roche).
La adición de R.
hydrogenotrophicus a una u otra de las especies celulolíticas
productoras de H_{2} se traduce en una fuerte disminución de este
gas en los co-cultivos mientras que se acumula en la
fase gaseosa de los monocultivos.
Por lo tanto, R.
hydrogenotrophicus es capaz de reutilizar eficazmente el
H_{2} producido in vitro por una especie fibrolítica
durante la fermentación de la celulosa. Esta transferencia de
H_{2} entre R. hydrogenotrophicus y las especies
celulolíticas conlleva poca o ninguna modificación de la actividad
celulolítica de las especies fibrolíticas estudiadas. Por lo
contrario, la celulosa es mayoritariamente fermentada en acetato en
los co-cultivos mientras que es más bien de tipo
ácido-mixto en los monocultivos (producciones de
acetato, de succinato o de etanol y de lactato).
Con el fin de determinar si R.
hydrogenotrophicus es capaz de reducir el volumen de los
gases en el colon en presencia de una flora digestiva compleja,
R. hydrogenotrophicus se administró por vía oral a
ratas con flora humana, y se siguió la evolución del volumen de gas
cólico midiendo el hidrógeno excretado por las vías respiratoria y
rectal.
El efecto de R. hydrogenotrophicus
se estudió en situación nutricional normal y tras la administración
de un sustrato fermentable (lactulosa) que provoca un aumento brutal
del volumen de gas en el colon.
Los animales utilizados son ratas de Fisher 344
machos, que tienen 3 meses al comienzo del experimento. Nacidos sin
gérmenes, se inoculan per os con 1 ml de una suspensión
centesimal de materias fecales humanas frescas que proceden de un
donante adulto, no metanogénico y que tiene una dieta alimentaria de
tipo occidental. La inoculación se realizó 2 semanas antes de
empezar el experimento. Las ratas se enjaularon en unos aisladores
y recibieron una alimentación semisintética "de tipo humana"
(proteínas y grasas de orígenes animal y vegetal; glúcidos simples
y complejos crudos y cocinados), esterilizada mediante irradiación
\gamma al 45 kGy. El alimento y el agua de bebida se
distribuyeron ad limitum.
El experimento se realizó con 16 ratas con flora
humana divididas en 2 grupos de 8, un grupo testigo y un grupo
tratado. Las ratas del grupo tratado recibieron cada mañana durante
28 días, mediante incubación gástrica, una dosis de 10^{8} a
10^{9} bacterias en forma de 1 ml de un cultivo de R.
hydrogenotrophicus, cultivado durante 18 horas en medio AC21
(tal como se describe en el Ejemplo 1), glucosilado (2 g/l). El
grupo testigo recibió, en las mismas condiciones, 1 ml de medio
AC21 glucosilado estéril.
Después de 1, 14 y 28 días de tratamiento, las
ratas de los 2 grupos se colocaron durante 12 horas en cámaras
respiratorias individuales que permiten medir el hidrógeno excretado
por vías respiratoria y rectal (véase la descripción de las cámaras
respiratorias a continuación). Se recogieron muestras de aire por
duplicado de las cámaras respiratorias entre 0 hora y 12 horas. La
concentración de hidrógeno se determinó inmediatamente mediante
cromatografía de fase gaseosa. Los resultados de los grupos testigo
y tratado se compararon con la ayuda de un ANOVA para medidas
repetidas.
Cualquiera que sea el tiempo de duración del
tratamiento, la administración de R.
hydrogenotrophicus disminuye significativamente la cantidad
máxima de hidrógeno excretado (-50% hasta -80%) y la velocidad de
excreción (-60% hasta -80%), con relación al grupo testigo
(P<0,01). El tratamiento demuestra igual de eficaz después de 1,
14 ó 28 días (figura 1).
La flora acetogénica hidrogenotrófica se contó
(Doré et al, 1995) en las heces de las ratas de los dos
grupos, a distintos tiempos durante el experimento. En el grupo
testigo que no recibe R. hydrogenotrophicus, el nivel
de población acetogénica es estable a lo largo del tiempo y
comparable al del donante, o sea, aproximadamente log 6.8
acetógenos por g de heces.
El tratamiento con R.
hydrogenotrophicus lleva a un aumento del nivel de la flora
acetogénica, que llega entonces a log 7,5/g de heces a partir de 24
h de tratamiento. Este nivel se mantiene hasta el final del
experimento. El aumento de la flora acetogénica en las ratas
tratadas coincide por lo tanto con la disminución de las cantidades
de H_{2} excretadas por estos animales.
Al final del experimento, las ratas se
eutanasiaron y se autopsiaron. La administración de R.
hydrogenotrophicus no tiene efecto significativo ni sobre el
peso corporal, ni sobre el peso del hígado, de los riñones y del
intestino ciego, ni sobre el pH cecal (P>0,05). Igualmente, el
aspecto macroscópico del hígado y de los riñones de las ratas
tratadas con R. hydrogenotrophicus es normal e
idéntico al de las ratas testigo.
Este experimento se realiza según el mismo
protocolo que anteriormente. La lactulosa
(4-O-\beta-D-galactopiranosil-D-fructosa),
cuya fermentación en el colon lleva a un aumento brutal del volumen
de gas, se administró por intubación gástrica, a razón de 500 mg
por rata, justo antes de su colocación en la cámara respiratoria. El
efecto de R. hydrogenotrophicus sobre este aumento se
examinó después de 1 y 14 días de tratamiento con la cepa
acetogénica.
En estas condiciones de producción excesiva de
gases cólicos, la administración de R.
hydrogenotrophicus disminuye significativamente la cantidad
máxima de hidrógeno excretado (-40% hasta -50%) y la velocidad de
excreción (-40% hasta -50%) con relación al grupo testigo
(P>0,05). El tratamiento sigue siendo eficaz después de 1 ó 14
días (figura 2).
En los dos experimentos, las ratas tratadas con
R. hydrogenotrophicus no han manifestado ninguna
anomalía de comportamiento, y el aspecto y la consistencia de las
heces eran idénticas a las de las ratas testigo.
Las cámaras respiratorias utilizadas son
recintos autónomos impermeables de polivinilo rígido transparente,
de un volumen de 30 litros, que permiten contener una jaula que
contiene un animal de pequeño tamaño. Están provistas de una doble
puerta de transferencia impermeable (DPTE) que permiten conectarles
con los aisladores experimentales.
Con el fin de preservar el estatuto bacteriano
de los animales, se esterilizan antes de la conexión. Después de
una transferencia del animal del aislador hacia la cámara
respiratoria, ésta se separa del aislador y se conecta a un
circuito cerrado en el que se empuja aire con la ayuda de una bomba
peristáltica a través de los filtros antibacterianos, y sistemas de
eliminación del CO_{2} (absorbedores que contienen una disolución
de hidróxido de potasio al 40%) y vapor de agua (absorbedor que
contiene cristales de gel de sílice). El contenido de O_{2} del
aire se mide mediante una sonda, y se mantiene constante a 21% con
la ayuda de un electrodo amperométrico, un regulador y una
electroválvula.
Este dispositivo permite la acumulación de los
gases específicos de las fermentaciones cólicas (hidrógeno y,
llegado el caso, metano), excretados por vías respiratoria y
rectal.
Claims (10)
1. Utilización de al menos una cepa bacteriana
acetogénica hidrogenotrófica no patógena autóloga para la
preparación de una composición destinada al tratamiento o la
prevención de en el ser humano del síndrome del intestino
irritable.
2. Utilización según la reivindicación 1,
caracterizada porque al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena es viable en el tubo digestivo.
3. Utilización según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizada porque al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena pertenece al género
Ruminococcus, Clostridium, o Streptococcus.
4. Utilización según la reivindicación 3,
caracterizada porque al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena pertenece a la especie Ruminococcus
hydrogenotrophicus.
5. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque al menos una
cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no patógena se
administra en una forma que le permite ser activa en el colon.
6. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque dicha
composición que comprende al menos una cepa bacteriana acetogénica
hidrogenotrófica no patógena está destinada a ser administrada por
vía oral o rectal.
7. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque al menos una
cepa bacteriana acetogénica hidrogenotrófica no patógena se envasa
en un entorno anaeróbico.
8. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque la composición
comprende al menos un aditivo que favorece la actividad de al menos
una cepa en el entorno digestivo.
9. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque la composición
comprende además al menos un agente activo contra al menos una la
patología diana.
10. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque la composición
comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0006009A FR2808689B1 (fr) | 2000-05-11 | 2000-05-11 | Utilisation de souches acetogenes hydrogenotrophes pour la prevention ou le traitement de troubles digestifs |
FR0006009 | 2000-05-11 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2262650T3 ES2262650T3 (es) | 2006-12-01 |
ES2262650T5 true ES2262650T5 (es) | 2010-06-28 |
Family
ID=8850107
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES01934089T Expired - Lifetime ES2262650T5 (es) | 2000-05-11 | 2001-05-11 | Utilizacion de cepas acetogenicas hidrogenotroficas para la prevencion o el tratamiento del sindrome del intestino irritable. |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7749494B2 (es) |
EP (1) | EP1280541B2 (es) |
JP (1) | JP5183848B2 (es) |
AT (1) | ATE322902T1 (es) |
AU (2) | AU2001260400B2 (es) |
CA (1) | CA2411563C (es) |
CY (1) | CY1107467T1 (es) |
DE (1) | DE60118723T3 (es) |
DK (1) | DK1280541T4 (es) |
ES (1) | ES2262650T5 (es) |
FR (1) | FR2808689B1 (es) |
PT (1) | PT1280541E (es) |
WO (1) | WO2001085187A1 (es) |
Families Citing this family (77)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AUPQ899700A0 (en) | 2000-07-25 | 2000-08-17 | Borody, Thomas Julius | Probiotic recolonisation therapy |
JP4618970B2 (ja) * | 2002-08-02 | 2011-01-26 | マルホ株式会社 | 肛門圧低下外用剤 |
US7935334B2 (en) * | 2005-07-07 | 2011-05-03 | Imagilin Technologies, LLC | Probiotics as alternative medicines against infectious diseases |
US20060008511A1 (en) * | 2004-07-08 | 2006-01-12 | Jhy-Jhu Lin | Probiotic products for pet applications |
DE102006062250A1 (de) * | 2006-12-22 | 2008-06-26 | Roland Saur-Brosch | Verwendung einer Zusammensetzung aus Mineralstoffen und/oder Vitaminen und gegebenenfalls acetogenen und/oder butyrogenen Bakterien zur oralen oder rektalen Verabreichung für die Behandlung und Vorbeugung von abdominalen Beschwerden |
ES2395838T3 (es) | 2007-12-21 | 2013-02-15 | Compagnie Gervais Danone | Método para disminuir el contorno abdominal administrando una bacteria del tipo Bifidobacterium |
EP2130543A1 (en) | 2008-06-05 | 2009-12-09 | Compagnie Gervais Danone | Method for decreasing borborygmi by administering a bifidobacterium bacteria |
PL3564357T3 (pl) | 2010-02-01 | 2022-08-08 | Rebiotix, Inc. | Bakterioterapia zapalenia jelita grubego z clostridium difficile |
WO2011151941A1 (ja) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | 国立大学法人東京大学 | 制御性t細胞の増殖または集積を誘導する作用を有する組成物 |
CA2807242C (en) | 2010-08-04 | 2017-05-02 | Thomas Julius Borody | Compositions for fecal floral transplantation and methods for making and using them and devices for delivering them |
HK1253538A1 (zh) * | 2010-08-04 | 2019-06-21 | Borody Thomas J | 用於糞便菌群植入的組合物及其製備和使用方法 |
KR101805873B1 (ko) * | 2011-08-03 | 2018-01-10 | 한화케미칼 주식회사 | 단당류 인산 또는 그 유도체로 표면이 개질된 친수성 나노입자, 그의 콜로이드 용액 및 그 용도 |
EP3610881A1 (en) | 2011-03-09 | 2020-02-19 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for transplantation of colon microbiota |
GB201112091D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Gt Biolog Ltd | Bacterial strains isolated from pigs |
GB201117313D0 (en) | 2011-10-07 | 2011-11-16 | Gt Biolog Ltd | Bacterium for use in medicine |
CN108676774B (zh) | 2011-12-01 | 2023-05-09 | 国立大学法人东京大学 | 诱导调节性t细胞的增殖或积累的人源细菌 |
EP3461477B1 (en) | 2012-03-29 | 2021-06-30 | Therabiome, Llc | Gastrointestinal site-specific oral vaccination formulations active on the ileum and appendix |
US9719144B2 (en) | 2012-05-25 | 2017-08-01 | Arizona Board Of Regents | Microbiome markers and therapies for autism spectrum disorders |
AU2014239883B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-01-17 | Therabiome, Llc | Targeted gastrointestinal tract delivery of probiotic organisms and/or therapeutic agents |
GB201306536D0 (en) | 2013-04-10 | 2013-05-22 | Gt Biolog Ltd | Polypeptide and immune modulation |
US9511100B2 (en) | 2013-06-05 | 2016-12-06 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture |
US9511099B2 (en) | 2013-06-05 | 2016-12-06 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture |
US10383901B2 (en) | 2013-06-05 | 2019-08-20 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture |
US9694039B2 (en) | 2013-06-05 | 2017-07-04 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture |
HUE040211T2 (hu) | 2013-06-05 | 2019-02-28 | Rebiotix Inc | Mikrobióta-helyreállítási terápia (MRT), készítmények és elõállítási eljárások |
US9782445B2 (en) | 2013-06-05 | 2017-10-10 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture |
MA41020A (fr) * | 2014-11-25 | 2017-10-03 | Evelo Biosciences Inc | Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome |
EP3400953A1 (en) | 2014-12-23 | 2018-11-14 | 4D Pharma Research Limited | Pirin polypeptide and immune modulation |
PL3065748T3 (pl) | 2014-12-23 | 2018-07-31 | 4D Pharma Research Limited | Szczep Bacteroides thetaiotaomicron i jego zastosowanie w zmniejszaniu zapalenia |
EP3273782B9 (en) * | 2015-02-27 | 2022-07-13 | White Dog Labs, Inc. | Mixotrophic fermentation method for making acetone, isopropanol, and other bioproducts, and mixtures thereof |
CA2985729C (en) | 2015-05-11 | 2023-05-09 | Mybiotics Pharma Ltd | Systems and methods for growing a biofilm of probiotic bacteria on solid particles for colonization of bacteria in the gut |
EP3294307A4 (en) | 2015-05-14 | 2019-01-23 | Crestovo Holdings Llc | COMPOSITIONS FOR TRANSPLANTATION OF FECAL FLORA AND METHODS OF PREPARATION AND USE THEREOF, AND DEVICES FOR THEIR ADMINISTRATION |
ES2909456T3 (es) | 2015-05-22 | 2022-05-06 | Univ Arizona State | Métodos para tratar el trastorno del espectro autista y síntomas asociados |
US10799539B2 (en) | 2015-06-09 | 2020-10-13 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT) compositions and methods of manufacture |
US10828340B2 (en) | 2015-06-09 | 2020-11-10 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT) compositions and methods of manufacture |
EP3307289B1 (en) | 2015-06-09 | 2021-08-04 | Rebiotix, Inc. | Methods of manufacture of microbiota restoration therapy (mrt) compositions |
US10905726B2 (en) | 2015-06-09 | 2021-02-02 | Rebiotix, Inc. | Microbiota restoration therapy (MRT) compositions and methods of manufacture |
MA41060B1 (fr) | 2015-06-15 | 2019-11-29 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
EP3307288B1 (en) | 2015-06-15 | 2019-07-24 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
MD3240554T2 (ro) | 2015-06-15 | 2020-01-31 | 4D Pharma Res Ltd | Blautia stercosis și wexlerae pentru utilizare în tratarea bolilor inflamatorii și autoimune |
MA41010B1 (fr) | 2015-06-15 | 2020-01-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
PT3206700T (pt) | 2015-06-15 | 2019-08-21 | 4D Pharma Res Ltd | Composições compreendendo estirpes bacterianas |
GB201520497D0 (en) | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
TWI797067B (zh) | 2015-11-20 | 2023-04-01 | 英商4D製藥研究有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
GB201520631D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
GB201520638D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
KR102010207B1 (ko) * | 2016-03-04 | 2019-08-12 | 4디 파마 피엘씨 | 세균 균주를 포함하는 조성물 |
GB201612191D0 (en) | 2016-07-13 | 2016-08-24 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
IL294171A (en) | 2016-05-25 | 2022-08-01 | Mybiotics Pharma Ltd | Compounds and methods for microbiotic therapy |
US20170360848A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Methods for treating autism spectrum disorder and associated symptoms |
US10849936B2 (en) | 2016-07-01 | 2020-12-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for C. difficile treatment |
GB201703548D0 (en) * | 2017-03-06 | 2017-04-19 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
GB201703552D0 (en) * | 2017-03-06 | 2017-04-19 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
TW201821093A (zh) * | 2016-07-13 | 2018-06-16 | 英商4D製藥有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
US20180036352A1 (en) | 2016-08-03 | 2018-02-08 | Crestovo Holdings Llc | Methods for treating ulcerative colitis |
WO2018071537A1 (en) | 2016-10-11 | 2018-04-19 | Crestovo Holdings Llc | Compositions and methods for treating multiple sclerosis and related disorders |
US10092601B2 (en) | 2016-10-11 | 2018-10-09 | Crestovo Holdings Llc | Compositions and methods for treating multiple sclerosis and related disorders |
WO2018071536A1 (en) | 2016-10-11 | 2018-04-19 | Crestovo Holdings Llc | Compositions and methods for treating primary sclerosing cholangitis and related disorders |
GB201621123D0 (en) | 2016-12-12 | 2017-01-25 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
US11040073B2 (en) | 2017-04-05 | 2021-06-22 | Finch Therapeutics Holdings Llc | Compositions and methods for treating diverticulitis and related disorders |
EP3606541A1 (en) | 2017-04-05 | 2020-02-12 | Crestovo Holdings LLC | Compositions and methods for treating parkinson's disease (pd) and related disorders |
EP3630136B1 (en) | 2017-05-22 | 2021-04-21 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
EP3630942B1 (en) | 2017-05-24 | 2022-11-30 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strain |
CA3064773A1 (en) | 2017-05-26 | 2018-11-29 | Crestovo Holdings Llc | Lyophilized compositions comprising fecal microbe-based therapeutic agents and methods for making and using same |
BR112019026477A2 (pt) | 2017-06-14 | 2020-07-14 | 4D Pharma Research Limited | composições compreendendo cepas bacterianas |
WO2018229236A2 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
MD3638271T2 (ro) | 2017-06-14 | 2021-03-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compoziții cuprizând tulpini bacteriene |
KR20200038506A (ko) | 2017-08-07 | 2020-04-13 | 핀치 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 건강한 장 장벽을 유지 및 회복시키기 위한 조성물 및 방법 |
BR112020025123A2 (pt) | 2018-06-19 | 2021-03-23 | 4D Pharma Research Ltd | forma de dosagem compreendendo um produto bioterapêutico vivo |
US11166990B2 (en) | 2018-07-13 | 2021-11-09 | Finch Therapeutics Holdings Llc | Methods and compositions for treating ulcerative colitis |
MA53155A (fr) | 2018-07-16 | 2021-05-26 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
AU2019351017A1 (en) | 2018-09-27 | 2021-04-29 | Finch Therapeutics Holdings Llc. | Compositions and methods for treating epilepsy and related disorders |
EP3917550B1 (en) | 2019-05-10 | 2024-01-24 | CJ Bioscience, Inc. | Compositions comprising blautia hydrogenotrophica in the treatemnt of fibromyalgia |
WO2021044376A1 (en) * | 2019-09-05 | 2021-03-11 | White Dog Labs, Inc. | Mixotrophic probiotic compositions and uses thereof in the treatment of bloating |
EP3839039A1 (en) | 2019-12-16 | 2021-06-23 | 4D Pharma Research Limited | Providing bacterial biomass with improved storage stability |
TW202220639A (zh) | 2020-08-06 | 2022-06-01 | 英商4D製藥有限公司 | 凍乾方法 |
WO2022112526A1 (en) | 2020-11-26 | 2022-06-02 | 4D Pharma Leon, S.L.U. | Process |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5443826A (en) * | 1988-08-02 | 1995-08-22 | Borody; Thomas J. | Treatment of gastro-intestinal disorders with a fecal composition or a composition of bacteroides and E. Coli |
AUPM823094A0 (en) | 1994-09-16 | 1994-10-13 | Goodman Fielder Limited | Probiotic compositions |
AUPM864894A0 (en) * | 1994-10-07 | 1994-11-03 | Borody, Thomas Julius | Treatment of bowel-dependent neurological disorders |
AUPN698495A0 (en) | 1995-12-06 | 1996-01-04 | Pharma Pacific Pty Ltd | Improved therapeutic formulation and method |
WO1997034591A1 (en) * | 1996-03-20 | 1997-09-25 | The University Of New South Wales | Alteration of microbial populations in the gastrointestinal tract |
SE511524C2 (sv) | 1997-06-02 | 1999-10-11 | Essum Ab | Lactobacillus casei rhamnosus-stam samt farmaceutisk beredning för bekämpning av patogena tarmbakterier |
DE19826928A1 (de) | 1998-06-17 | 1999-12-23 | Novartis Consumer Health Gmbh | Arzneimittel, lebensfähige anaerobe Bakterien enthaltend, die die Sulfatreduktion sulfatreduzierender Bakterien hemmen |
AU5301399A (en) * | 1998-08-20 | 2000-03-14 | Miyarisan Pharmaceutical Co.,Ltd. | Rugs comprising butyric acid-producing bacterium combined with bile acid component |
-
2000
- 2000-05-11 FR FR0006009A patent/FR2808689B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-05-11 DK DK01934089.2T patent/DK1280541T4/da active
- 2001-05-11 DE DE60118723T patent/DE60118723T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-11 EP EP01934089A patent/EP1280541B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-11 AT AT01934089T patent/ATE322902T1/de active
- 2001-05-11 ES ES01934089T patent/ES2262650T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-11 AU AU2001260400A patent/AU2001260400B2/en not_active Expired
- 2001-05-11 WO PCT/FR2001/001426 patent/WO2001085187A1/fr active IP Right Grant
- 2001-05-11 PT PT01934089T patent/PT1280541E/pt unknown
- 2001-05-11 CA CA2411563A patent/CA2411563C/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-11 JP JP2001581840A patent/JP5183848B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-11 US US10/275,706 patent/US7749494B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-11 AU AU6040001A patent/AU6040001A/xx active Pending
-
2006
- 2006-06-19 CY CY20061100815T patent/CY1107467T1/el unknown
-
2010
- 2010-04-15 US US12/760,926 patent/US20100316617A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2001260400B2 (en) | 2006-10-26 |
FR2808689A1 (fr) | 2001-11-16 |
ES2262650T3 (es) | 2006-12-01 |
EP1280541B1 (fr) | 2006-04-12 |
EP1280541B2 (fr) | 2010-03-17 |
DK1280541T4 (da) | 2010-07-05 |
ATE322902T1 (de) | 2006-04-15 |
FR2808689B1 (fr) | 2004-09-03 |
US20030147858A1 (en) | 2003-08-07 |
US7749494B2 (en) | 2010-07-06 |
AU6040001A (en) | 2001-11-20 |
EP1280541A1 (fr) | 2003-02-05 |
DE60118723D1 (de) | 2006-05-24 |
DK1280541T3 (da) | 2006-07-17 |
JP5183848B2 (ja) | 2013-04-17 |
PT1280541E (pt) | 2006-06-30 |
CA2411563C (fr) | 2012-12-11 |
WO2001085187A1 (fr) | 2001-11-15 |
JP2004501095A (ja) | 2004-01-15 |
CA2411563A1 (fr) | 2001-11-15 |
DE60118723T3 (de) | 2010-09-30 |
CY1107467T1 (el) | 2012-12-19 |
DE60118723T2 (de) | 2006-12-28 |
US20100316617A1 (en) | 2010-12-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2262650T5 (es) | Utilizacion de cepas acetogenicas hidrogenotroficas para la prevencion o el tratamiento del sindrome del intestino irritable. | |
CN107893044B (zh) | 一株长双歧杆菌及其应用 | |
JP3186202B2 (ja) | 親生物 | |
de Macario et al. | Methanogenic archaea in health and disease: a novel paradigm of microbial pathogenesis | |
Bernalier et al. | Acetogenesis from H2 and CO2 by methane-and non-methane-producing human colonic bacterial communities | |
Miller et al. | Characteristics of methanogens isolated from bovine rumen | |
US20120020942A1 (en) | Novel Lactobacillus Strains And Their Use Against Helicobacter Pylori | |
Macdonald et al. | Fecal hydroxysteroid dehydrogenase activities in vegetarian Seventh-Day Adventists, control subjects, and bowel cancer patients | |
CN109789170A (zh) | 包含细菌菌株的组合物 | |
Kolenbrander | The genus Veillonella | |
JPS60149527A (ja) | 生体内脱臭剤 | |
Doré et al. | Enumeration of H2-utilizing methanogenic archaea, acetogenic and sulfate-reducing bacteria from human feces | |
JP4193269B2 (ja) | 新規な生体浄化活性型乳酸菌製剤 | |
CN115181710A (zh) | 一株唾液乳杆菌b12wu及其应用 | |
Maczulak et al. | Increase in colonic methanogens and total anaerobes in aging rats | |
MXPA04004252A (es) | Del genero bifidobacterium y alimentos fermentados que utilizan la misma. | |
CN117264839A (zh) | 唾液联合乳杆菌mb1在制备美白和缓解痛风食品药品中的应用 | |
KR100884681B1 (ko) | 미감수를 발효시킨 유산균용액의 제조 방법 | |
Sen et al. | Molecular characterization and in vitro analyses of a sporogenous bacterium with potential probiotic properties | |
CA2934871A1 (en) | New strains of the genus lactobacillus and use thereof | |
Dermoumi et al. | Isolation and antimicrobial susceptibility testing of fecal strains of the archaeon Methanobrevibacter smithii | |
KR20180073641A (ko) | 적응 방법 | |
KR19990003300A (ko) | 비피더스균의 고농도 배양을 위한 배지 조성물 | |
CN118178481A (zh) | 微生物制剂及其制备方法 | |
HOSONO et al. | Superoxide dismutase activity in the crude cell extract from Streptococcus salivarius subsp. thermophilus 3535 |